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Bioqumica

Enzimas

Atividade supervisionada sobre enzimas questo 8


Amilase

A determinao da amilase em amostras de sangue, urina e outros


lquidos biolgicos so testes teis no diagnstico da pancreatite aguda
e suas complicaes.

Amostra
A amostra incubada com um substrato de amido e a diminuio da cor
azul, aps a adio de iodo, comparada com um controle, sendo
proporcional atividade da amilase na amostra.
Usar soro ou plasma (colhido em heparina), urina (colhida em intervalo
de 2 a 24 horas) e lquidos (asctico, duodenal ou pleural). Amostras
com citrato, EDTA ou oxalato no devem ser usadas porque estes
anticoagulantes reduzem a atividade da amilase, produzindo resultados
falsamente diminudos.
Interferentes

Valores de Bilirrubina acima de 5 mg/dL, Hemoglobina acima de 30


mg/dL e Triglicrides acima de 250 mg/dL produzem resultados
falsamente diminudos.
Medicamentos colinrgicos, narcticos (morfina) e analgsicos
anlogos, lcool e diurticos tiazdicos produzem resultados
falsamente elevados da amilase srica. A presena de macroamilase
na amostra de soro, que resultante da complexao da amilase com
protenas de elevado peso molecular, tais como imunoglobulinas,
pode produzir resultados falsamente elevados na ausncia de
pancreatite.

Mtodo de dosagem
Caraway modificado (amido-iodo).

Reao enzima/substrato/produto

AMILASE SALIVAR

Depois de ser triturado pelos dentes e lngua, o alimento misturado a


saliva das glndulas salivares, onde encontramos a enzima ptialina
(amilase salivar). Esta enzima em presena dos ons cloreto ataca a
macromolcula de amido, a qual composta de molculas de glicose
polimerizada em cadeias ramificadas. Se esse processo se completasse,
a amilase quebraria o amido em maltose dissacardeo, mas a ao da
amilase salivar interrompida pelo cido do estmago, j que seu pH
timo em torno de 4,0.
AMILASE PANCRETICA

A amilase pancretica (alfa-amilase) ataca as ligaes alfa-1,4glicosdico de amidos, quebrando-os em dissacardeo maltose, e d
sequncia, no intestino delgado, digesto dos polissacardeos iniciada
na cavidade bucal. A faixa de pH de atuao da alfa-amilase pancretica
muito ampla, vai desde 4,5 at 11,0, com seu timo de atividade
entre pH 6,9 e 7,1. A amilase pancretica muito resistente ao
proteoltica das enzimas pancreticas e secretada j sob a forma ativa
pelas clulas acinosas.

Valor de referencia
Para todas as idades:
Soro: 60 a 160 U/dL
Urina: 50 a 140 U/hora
Definio de Unidade: uma unidade igual quantidade de enzima que
hidrolisa totalmente 10 mg de amido em 30 minutos a 37 C.
Valores de referncia no so aplicveis aos outros lquidos biolgicos,
uma vez que a presena de atividade da amilase, em qualquer
quantidade, considerada anormal.

Valores crticos
Valores maiores que 3 vezes o limite superior de referncia indicam
aumento considervel da atividade da amilase srica. Incluir o
procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico.

Doenas
A elevao da amilase srica no um achado especfico da pancreatite
e causas no pancreticas de hiperamilasemia podem dificultar a
interpretao dos resultados em alguns casos. Estes incluem leses
inflamatrias envolvendo as glndulas salivares, tais como a parotidite
epidmica, lcera pptica perfurada, envolvendo ou no o pncreas,
infarto ou obstruo intestinal, colelitase, peritonite, apendicite aguda,
cetoacidose diabtica, carcinoma extrapancretico (especialmente de
esfago, pulmo e ovrio), gravidez ectpica rota, insuficincia renal e
macro-amilasemia. Nesta ltima condio, a amilase no se encontra
elevada na urina.

Lpase

Amostra

- Jejum de 4 horas
Usar soro ou plasma (heparina). Amostras com EDTA, citrato ou fluoreto
produzem resultados diminudos por inibio da atividade da lipase.
Interferentes
Concentraes de bilirrubina total at 60 mg/dL, hemoglobina at 500
mg/dL e triglicrides at 2000 mg/dL no interferem significativamente
na reao.
Amostras com bilirrubina, hemoglobina e triglicrides em concentraes
maiores que as acima referidas devem ser diludas em NaCl 150 mmol/L
(0,85%) antes de se realizar os ensaios. Multiplicar o resultado obtido
pelo fator de diluio..

Mtodo de dosagem
Enzimtica Colorimtrica

Reao enzima/substrato/produto

O substrato cromognico 1-2-o-dilauril-rac-glicero-3-cido glutrico(6metilresorufina)-ester clivado em meio alcalino por ao cataltica da


lipase e forma o 1-2-o-dilauril-rac-glicerol e o intermedirio instvel
cido glutrico-(6-metilresorufina) ester que se decompe
espontaneamente no meio alcalino para formar cido glutrico e
metilresorufina (cor vermelha).

Valor de referencia
Idade
< 1 ano
1 a 12 anos
13 a 18 anos
> 18 anos

Intervalo de referencia (U/L)


0 29
10 37
11 46
13 - 60

Doenas
A lipase pancretica uma enzima digestiva produzida principalmente
pelas clulas acinares do pncreas excrino. Tem o papel fisiolgico de
hidrolisar triglicrides com cidos graxos de cadeias longas no intestino
delgado (liplise).
Sua avaliao essencial no diagnstico das patologias pancreticas.
Ela se eleva nas primeiras 8 horas aps o incio da agresso
pancretica, atingindo valores mais altos em 24 horas e mantendo-se
elevada em torno de 7 a 14 dias. Seus nveis geralmente no
permanecem elevados por mais de 2 semanas. Quando isso acontece,
sugere complicaes como abscessos e pseudocistos. Normalmente
seus nveis elevam-se quase que paralelamente aos da amilase, um
pouco mais tarde, mantendo-se elevados por um perodo mais longo.
Seu aumento no necessariamente se correlaciona com a gravidade da
doena.

TGP/ ALT
Amostra
Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas.
Usar soro ou plasma (EDTA, heparina). A atividade enzimtica
permanece estvel durante 4 dias entre 2 8 C e 2 semas a 10 C
negativos.

Interferentes
- Valores

de Bilirrubina at 19 mg/dL, hemoglobina at 180 mg/dL e


Triglicrides at 650 mg/dL no produzem interferncias significativas.
- Amostras fortemente lipmicas e ictricas possuem absorbncia
elevada em 340 nm. Quando a atividade enzimtica nestas amostras
estiver muito aumentada, pode ocorrer consumo bastante rpido do
substrato sem haver diminuio significativa na absorbncia. Portanto,
na ocorrncia de valores baixos de atividade enzimtica nessas
amostras deve-se repetir a determinao utilizando amostra diluda com
NaCl 0,85%.
- A hemlise prejudica o teste devido a elevada concentrao de ALT
nas hemcias, fornecendo valores falsamente elevados.

Mtodo de dosagem
Cintica UV - IFCC

Reao enzima/substrato/produto
A ALT catalisa especificamente a transferncia do grupo amina da
alanina para o cetoglutarato, com formao de glutamato e piruvato. O
piruvato reduzido lactato por ao da lactato desidrogenase (LDH)
enquanto que a coenzima NADH oxidada a NAD.
ALT
L-Alanina + Cetoglutarato

Piruvato + L-Glutamato

LDH
Piruvato + NADH

Valor de referencia
Idade
1 30 dias
1 6 meses
7 12 meses
1 3 anos
4 11 anos
12 15 anos
Adultos

L-Lactato + NAD

Doenas

Masculino (U/L)
20
26
26
19
24
24
11

54
55
59
59
49
59
45

Feminino (U/L)
21 - 54
26 61
26 55
24 59
24 49
19 44
10 37

A transaminase glutmico-pirvica (TGP) uma enzima encontrada


predominantemente no fgado, em concentrao moderada nos rins e
em menores quantidades no corao e nos msculos esquelticos.
Qualquer leso (injria) tissular ou doena afetando o parnquima
heptico liberar uma maior quantidade da enzima para a corrente
sangunea, elevando os nveis sricos da TGP. Em geral, as causas mais
comuns de elevao dos valores de TGP no sangue ocorrem por
disfuno heptica. Desta maneira, a TGP alm de ser sensvel
tambm bastante especfica para o diagnstico de doena
hepatocelular. Convm ressaltar que uma leso tecidual nos rins,
corao e nos msculos esquelticos tambm provoca uma maior
liberao de TGP para a corrente sangunea, elevando seus nveis
sricos. Assim, diante de um quadro clnico de miosite ou de uma
rabdomilise grave, os valores de TGP podem elevar-se tanto quanto na
hepatite virtica aguda.

TGO/ AST

Amostra
Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas.
Usar soro ou plasma (EDTA). A atividade enzimtica permanece estvel
durante 4 dias entre 2 8 C e 2 semanas a 10 C negativos.
Interferentes
Valores de Bilirrubina at 19 mg/dL, Hemoglobina at 45 mg/dL,
Triglicrides at 650 mg/dL e Piruvato at 0,2 mmol/L no produzem
interferncias significativas. Como a enzima AST est presente nos
eritrcitos, a presena de hemoglobina no soro em quantidades
superiores a 45 mg/dL produz interferncia positiva significativa.
Amostras fortemente lipmicas e ictricas aumentam acentuadamente
a absorbncia em 340 nm. Quando a atividade enzimtica destas
amostras estiver muito aumentada, ocorre consumo bastante rpido do
substrato sem haver diminuio significativa na absorbncia. Nestes
casos, quando a diferena de absorbncia por minuto for muito
pequena, deve-se repetir a determinao utilizando a amostra diluda
1:2 com NaCl 0,85%, multiplicando o resultado por 2.

Mtodo de dosagem
Cintica UV - IFCC

Reao enzima/substrato/produto
A AST catalisa especificamente a transferncia do grupo amina do cido
asprtico para o cetoglutarato com formao de glutamato e
oxalacetato. O oxalacetato reduzido malato por ao da malato
desidrogenase (MDH), enquanto que a coenzima NADH oxidada em
NAD.
AST
L-Aspartato + Cetoglutarato

Oxalacetato + L-Glutamato

MDH
Oxalacetato + NADH

Valor de referencia
Idade
1 7 dias
8 30 dias
1 6 meses
7 12 meses
1 3 anos
4 6 anos
7 15 anos
Adultos

L-Malato + NAD

Masculino (U/L)
26
16
16
16
16
10
10
11

98
67
62
52
57
47
41
39

Feminino (U/L)
20 93
20 69
16 61
16 60
16 57
10 47
5 36
10 37

Doenas
Elevaes das transaminases ocorrem nas hepatites (viral e txica), na
mononucleose, cirrose, colestase, carcinoma heptico primrio ou
metasttico, pancreatite, traumatismo extenso e no choque prolongado.
Nas hepatopatias agudas geralmente o valor da transaminase pirvica
(ALT) excede o da oxalactica (AST).
A AST est quase sempre elevada aps o infarto agudo do miocrdio.
Esta comea a se elevar 6 a 12 horas aps a dor precordial, alcanando
o pico mximo entre 24 a 48 horas, retornando aos valores de
referncia aps o 5 ou 6 dia. Deve-se ressaltar que a sensibilidade e
especificidade da dosagem de AST no diagnstico do infarto agudo do
miocrdio so baixas, tornando a determinao desta enzima a menos
indicada para este diagnstico.

Fosfatase alcalina
Amostra
A amostra de sangue deve ser obtida aps jejum de no mnimo 8 horas.
Usar soro ou plasma (heparina). A amostra estvel 7 dias entre 2 8
C. Quando a amostra armazenada na temperatura ambiente obtmse resultados falsamente elevados.
Interferentes
A fosfatase alcalina produzida por muitos tecidos, principalmente
pelos ossos, fgado, intestinos e placenta e excretada pela bile. A
dosagem srica desta enzima particularmente til na investigao das
doenas hepatobiliares e sseas.
Nveis elevados de fosfatase alcalina ocorrem em pacientes com
doenas sseas caracterizadas por aumento da atividade osteoblstica
como a ostete deformante, raquitismo, osteomalcia,
hiperparatireoidismo, metstase ssea, sarcoma osteognico e doena
de Paget.
Nveis elevados de fosfatase alcalina ocorrem tambm em pacientes
com doenas obstrutivas das vias biliares, metstases hepticas,
doenas granulomatosas e na cirrose heptica.

Mtodo de dosagem
Colorimtrica (Bowers e Mc Comb modificado)

Reao enzima/substrato/produto
A fosfatase alcalina (FALC) do soro, em pH alcalino, hidrolisa o pnitrofenilfosfato, liberando p-nitrofenol e fosfato inorgnico de acordo
com a seguinte reao:
FALC
p-nitrofenilfosfato + H2O

p-nitrofenol + fosfato

Valor de referencia
Idade

(U/L)

Adultos
Crianas

27 100
75 390

Doenas
A fosfatase alcalina produzida por muitos tecidos, principalmente
pelos ossos, fgado, intestinos e placenta e excretada pela bile. A
dosagem srica desta enzima particularmente til na investigao das
doenas hepatobiliares e sseas.
Nveis elevados de fosfatase alcalina ocorrem em pacientes com
doenas sseas caracterizadas por aumento da atividade osteoblstica
como a ostete deformante, raquitismo, osteomalcia,
hiperparatireoidismo, metstase ssea, sarcoma osteognico e doena
de Paget.
Nveis elevados de fosfatase alcalina ocorrem tambm em pacientes
com doenas obstrutivas das vias biliares, metstases hepticas,
doenas granulomatosas e na cirrose heptica. Nas doenas
hepatocelulares como a hepatite aguda viral, em geral ocorre um ligeiro
aumento da enzima.
Nveis diminudos da fosfatase alcalina so encontrados na desnutrio
crnica, na hipofosfatasemia e, ocasionalmente, no hipotireoidismo e
anemia perniciosa.

Gama GT
Amostra
Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas.
Usar soro ou plasma (EDTA). A atividade enzimtica estvel por 7 dias
entre 2 8 C e 2 meses a 20 C negativos
Interferentes
- Heparina produz resultados falsamente diminudos.
- Anticoagulantes contendo citrato, fluoreto ou oxalato inibem a atividade da GGT.
- Valores de Bilirrubina at 38 mg/dL, Hemoglobina at 180 mg/dL e Triglicrides at 1000 mg/dL
no produzem interferncias significativas.
- A GGT est elevada em pacientes que fazem uso prolongado de drogas que induzem o sistema
microssomal heptico como o fenobarbital e fenitona, entre outras.
- O alcoolismo crnico produz aumento da atividade da Gama GT no soro.

Mtodo de dosagem
Reao enzima/substrato/produto

A -Glutamil Transferase catalisa a transferncia do grupamento


Glutamil da L- Glutamil-p-nitroanilide para a glicilglicina, formando-
Glutamilglicilglicina e p-nitroanilina segundo a reao seguinte:

GGT
L--Glutamil-p-nitroanilide + Glicilglicina
p-nitroanilina.

Glutamilglicilglicina

Valor de referencia
Idade

Mulheres
(U/L)

Homens
(U/L)

0 6 meses
6 12 meses
1 12 anos
12 18 anos

15 132
1 39
4 22
4 24

12 122
1 39
3 22
2 42

Doenas
A GGT tem aplicao principal no estudo das doenas hepatobiliares e
est distribuda em quase todo o tecido humano. O rim contm a mais
elevada concentrao, seguido pelo pncreas e fgado.
A GGT um sensvel indicador de doenas inflamatrias e leso
heptica e est significativamente elevada nas doenas obstrutivas das
vias biliares. A GGT tem maior especificidade que a fosfatase alcalina
(ALP) e a transaminase oxalactica para avaliar doena heptica. Ela
no est elevada na doena ssea e durante a gravidez como a
fosfatase alcalina, nem nas doenas do msculo esqueltico como a
transaminase oxalactica. A GGT auxilia diferenciar colestases mecnica
e viral das induzidas por drogas. Nas duas primeiras, a GGT e ALP esto
igualmente elevadas. Nas colestases induzidas por drogas a GGT est
muito mais elevada.
Valores elevados de GGT em pacientes anictricos com cncer so um
seguro indicador de metstases hepticas.

Est demonstrado que no alcoolismo crnico os nveis sricos da GGT


diminuem com a retirada do lcool e se elevam com a exposio ao
mesmo.

CK

Amostra
Interferentes

Mtodo de dosagem
Reao enzima/substrato/produto

Valor de referencia
Doenas

CK MB

Amostra
Interferentes

Mtodo de dosagem
Reao enzima/substrato/produto

Valor de referencia
Doenas

LDH

Amostra
Interferentes

Mtodo de dosagem
Reao enzima/substrato/produto

Valor de referencia
Doenas

Fosfatase cida/ PSA

Amostra
Interferentes

Mtodo de dosagem
Reao enzima/substrato/produto

Valor de referencia
Doenas