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1

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Introduo
bioqumica

1
Introduo Bioqumica

Objetivos
1

Relacionar a importncia da gua a suas propriedades fsicas e qumicas.

Definir pH, pK, tampo e seu significado biolgico.

Descrever as propriedades biologicamente importantes do carbono.

Descrever a estrutura tridimensional das molculas biolgicas.

Descrever as macromolculas como polmeros de pequenas molculas.

Descrever as molculas hbridas como conjugados de diferentes classes de


molculas biolgicas.

Diferenciar as clulas procariticas das clulas eucariticas

A bioqumica estuda as estruturas moleculares, os mecanismos e


os processos qumicos responsveis pela vida. Os organismos vivos
continuamente efetuam atividades que permitem a sua sobrevivncia,
crescimento e reproduo. Para realizar as suas funes, os seres
vivos dependem da capacidade de obter, transformar, armazenar e
utilizar energia. Sem energia ocorre a perda da vitalidade e a morte
celular. A maioria dos constituintes moleculares apresenta formas
tridimensionais que executam inmeras reaes qumicas entre si
para manter e perpetuar a vida. Em bioqumica, a estrutura, a
organizao e as atividades potenciais dessas molculas so
examinadas na tentativa de elucidar que aspectos promovem as
indispensveis contribuies manuteno da vida.
Os organismos vivos so estruturalmente complexos e
diversificados. Todavia, muitas caractersticas so comuns a todos
eles. Todos fazem uso das mesmas espcies de molculas e extraem a
energia do meio ambiente para as suas funes. Quando as molculas
que compem os seres vivos so isoladas, esto sujeitas a todas as
leis da qumica e da fsica que regem o universo no vivo.
Apesar da grande diversidade dos processos bioqumicos que
envolvem a integrao funcional de milhes de molculas para
manter e perpetuar a vida, a ordem biolgica conservada por vrios
processos: (1) sntese de biomolculas, (2) transporte de ons e
molculas atravs das membranas biolgicas, (3) produo de energia
e movimento e (4) remoo de produtos metablicos de excreo e
substncias txicas.

Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

A quase totalidade das reaes qumicas que ocorre nos seres


vivos so catalisadas por enzimas protenas com funes catalticas.
As reaes celulares, conhecidas coletivamente como metabolismo,
resultam de atividades altamente coordenadas. Os tipos mais comuns
de reaes encontradas nos processos bioqumicos so: (1)
substituio nuclefila, (2) eliminao, (3) adio, (4) isomerizao e
(5) oxidao e reduo.
Os seres vivos so formados por uma grande variedade de
molculas, tais como: carboidratos, lipdeos, protenas, cidos
nuclicos e compostos relacionados. Alm dessas, outras substncias
esto presentes em pequenas quantidades: vitaminas, sais minerais,
hormnios, etc. Muitos desses compostos se caracterizam por um ou
mais grupos cidos ou bsicos em suas molculas e ocorrem em
soluo aquosa como espcies ionizadas. A ionizao tem lugar em
gua, sendo este um pr-requisito para muitas reaes bioqumicas. O
grau de dissociao ou a extenso da ionizao de um grupo qumico
em particular e, portanto, a reatividade bioqumica da molcula,
amplamente influenciada pela concentrao do on hidrognio da
soluo. Isto aplicvel tanto para as vias metablicas, como
tambm para os catalisadores biolgicos (enzimas), que controlam as
reaes celulares.

1.2 gua: o meio da vida


A gua compe a maior parte da massa corporal do ser humano.
o solvente biolgico ideal. A capacidade solvente inclui ons (ex.:
Na + , K + e Cl ), acares e muitos aminocidos. Sua incapacidade
para dissolver algumas substncias como lipdeos e alguns
aminocidos, permite a formao de estruturas supramoleculares (ex.:
membranas) e numerosos processos bioqumicos (ex.: dobramento
protico). Nela esto dissolvidas ou suspensas as molculas e
partculas necessrias para o bom funcionamento celular. Reagentes e
produtos de reaes metablicas, nutrientes, assim como produtos de
excreo, dependem da gua para o transporte no interior das clulas
e entre as clulas.
As interaes fracas so os meios pelos quais as molculas
interagem entre si enzimas com seus substratos, hormnios com
seus receptores, anticorpos com seus antgenos. A fora e a
especificidade das interaes fracas so grandemente dependentes do
meio onde ocorrem, sendo que a maioria das interaes biolgicas
tem lugar na gua. Duas propriedades da gua so especialmente
importantes para a existncia dos seres vivos:

A gua uma molcula polar. A molcula de gua no-linear


com distribuio da carga de forma assimtrica.

A gua altamente coesiva. As molculas de gua interagem


entre si por meio de pontes de hidrognio. A natureza altamente
coesiva da gua afeta as interaes entre as molculas em soluo
aquosa.

A. Estrutura da gua
A gua uma molcula dipolar formada por dois tomos de
hidrognio ligados a um tomo de oxignio. Cada tomo de

1 Introduo Bioqumica

hidrognio possui uma carga eltrica parcial positiva (+ ) e o tomo


de oxignio, carga eltrica parcial negativa ( ). Assim, o
compartilhamento dos eltrons entre H e O desigual, o que acarreta
o surgimento de dois diplos eltricos na molcula de gua; um para
cada ligao HO. O ngulo de ligao entre os hidrognios e o
oxignio (HOH) 104,3 , tornando a molcula eletricamente
assimtrica e produzindo diplos eltricos (Figura 1.1). Ao se
aproximarem, as molculas de gua interagem, pois a carga eltrica
parcial positiva do hidrognio de uma molcula atrai a carga eltrica
parcial negativa do oxignio de outra molcula de gua adjacente,
resultando em uma atrao eletrosttica denominada ponte de
hidrognio. Quatro molculas de gua podem interagir produzindo
uma estrutura quase tetradrica estabilizada por pontes de hidrognio
(Figura 1.1).
+

H
O

104.3
H

O
H

H
O
H

O
H

B. Interaes no-covalentes
As interaes no-covalentes so geralmente eletrostticas; elas
ocorrem entre o ncleo positivo de um tomo e a nuvem eletrnica de
outro tomo adjacente. De modo diferente das ligaes covalentes, as
interaes no-covalentes so individualmente fracas e facilmente
rompidas (Tabela 1.1). No entanto, coletivamente elas influenciam de
modo significativo as propriedades qumicas e fsicas da gua e as
estruturas, propriedades e funes das biomolculas (protenas,
polissacardeos, cidos nuclicos e lipdeos) pelo efeito cumulativo
de muitas interaes. O grande nmero de interaes nocovalentes
estabiliza macromolculas e estruturas supramoleculares, de tal modo
que essas ligaes sejam rapidamente formadas ou rompidas
permitindo a flexibilidade necessria para manter os processos
dinmicos da vida. Nos organismos vivos, as interaes no-

Figura 1.1
Estrutura da molcula de gua.
O ngulo de ligao H-O-H
0
104,3 e tanto os hidrognios
como o oxignio possuem cargas
eltricas parciais criando um
dipolo eltrico. A parte inferior da
figura mostra quatro molculas de
gua interagindo para formar uma
estrutura estabilizada por pontes
de hidrognio.

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covalentes mais importantes so: pontes de hidrognio, interaes


inicas, interaes hidrofbicas e interaes de van der Waals.
Tabela 1.1 Energia de dissociao de ligao (energia necessria para
romper a ligao) de ligaes encontradas nos seres vivos
Energia de dissociao de
1
ligao (kJmol )

Tipo de ligao
Ligaes covalentes

>210

Ligaes nocovalentes
Interaes eletrostticas (ligaes inicas)

480

Pontes de hidrognio

1230

Interaes hidrofbicas

312

Foras de Van der Waals

0,39

C. Propriedades solventes da gua


A natureza polar e a capacidade de formar pontes de hidrognio,
torna a gua uma molcula com grande poder de interao. A gua
solvata facilmente as molculas polares ou inicas pelo
enfraquecimento das interaes eletrostticas e das pontes de
hidrognio entre as molculas competindo com elas por suas atraes
(efeito hidroflico, do grego que gosta de gua).
H

+
H

O
H
H
O

H
H
+

Figura 1.2
Solvatao de ons. A carga do on orienta os dipolos das molculas
da gua.

A gua dissolve sais como o NaCl por hidratao e estabilizao


dos ons Na + e Cl , enfraquecendo as interaes eletrostticas, e
assim impedindo a associao para formar uma rede cristalina.

1 Introduo Bioqumica

Cl
Na

Na

Cl

Cl

Na

Na

Na

Cl

Na

Cl

Cl

Na

Cl

Na

Cl

Na

Cl

Na

Cl

Na

Cl

Na

Cl

Na+

Cl

Figura 1.3
Dissoluo de sais cristalinos. A gua dissolve o NaCl (e outros sais

+
cristalinos) por meio da hidratao dos ons Na e Cl . medida que as

molculas de gua se agrupam ao redor dos ons Cl e Na a atrao


eletrosttica necessria para a formao da rede cristalina de NaCl
rompida.

A gua dissolve biomolculas com grupos ionizveis e muitas


com grupos funcionais polares, porm nocarregadas, por formar
pontes de hidrognio com os solutos. Essas associaes so formadas
entre a gua e os grupos carbonila, aldedico, cetnico e hidroxila dos
lcoois.
As biomolculas ou grupamentos no-polares so insolveis em
gua, pois as interaes entre as molculas de gua so mais fortes
que as interaes da gua com compostos nopolares. Os compostos
nopolares tendem a se aglomerar em gua (efeito hidrofbico, do
grego que teme a gua). As interaes hidrofbicas so as
principais foras propulsoras no enovelamento de macromolculas
(exemplo, protenas).
D. Molculas anfiflicas
Um grande nmero de biomolculas, denominadas anfiflicas (ou
anfipticas), contm tanto grupos polares como grupos no-polares.
Essa propriedade afeta significativamente o meio aquoso. Por
exemplo, os cidos graxos ionizados so molculas anfipticas
porque contm grupos carboxilatos hidroflicos e grupos
hidrocarbonetos hidrofbicos. Quando misturados com a gua, as
molculas anfiflicas se agregam formando estruturas estveis
chamadas micelas. Nas micelas, as regies carregadas (grupos
carboxilatos), denominadas cabeas polares, so orientadas para a
gua com a qual interage. A cauda hidrocarboneto no-polar tende a
evitar o contato com a gua e orienta-se para o interior hidrofbico.
A tendncia das biomolculas anfipticas espontaneamente se
rearranjar em gua e uma caracterstica importante de numerosos
componentes celulares. Por exemplo, a formao de bicamadas por
molculas de fosfolipdeos a estrutura bsica das membranas
biolgicas (Figura 1.4).

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Aquoso
Hidroflico

Hidrofbico

Hidroflico
Aquoso
Figura 1.4
Bicamada lipdica. Formada na gua por molculas anfiflicas
(fosfolipdeos) com cabeas polares e caudas sinuosas.

E. Presso osmtica
Osmose o processo espontneo no qual as molculas solventes
atravessam uma membrana semipermevel de uma soluo de menor
concentrao de soluto para uma soluo de maior concentrao de
soluto. Poros na membrana so suficientemente amplos para permitir
que as molculas solventes atravessem nas duas direes mas muito
estreitos para a passagem de grandes molculas de soluto ou ons. A
presso osmtica a presso necessria para interromper o fluxo
lquido de gua por meio da membrana. A presso osmtica depende
da concentrao do soluto.
Membrana
permevel
seletiva

Membrana
permevel
seletiva

Membrana
permevel
seletiva

gua
Soluto
Figura 1.5
Presso osmtica. A gua difunde do lado A (mais diludo) para o lado B
(mais concentrado). O equilbrio entre as solues nos dois lados da
membrana semipermevel atingido quando no houver mais movimento de
molculas de gua do lado A para o lado B. A presso osmtica interrompe o
fluxo de gua por meio da membrana.

A presso osmtica cria alguns problemas crticos para os


organismos vivos. As clulas contm altas concentraes de alguns
solutos, que so pequenas molculas orgnicas e sais inicos, tambm
como, macromolculas em baixas concentraes. Conseqentemente,
as clulas podem ganhar ou perder gua devido a concentrao de

1 Introduo Bioqumica

soluto em relao ao seu meio. Se as clulas esto em soluo


isotnica (a concentrao de soluto e gua a mesma nos dois lados
da membrana plasmtica seletivamente permevel) e a clula nem
ganha nem perde gua. Por exemplo, os eritrcitos so isotnicos em
soluo de NaCl a 0,9%. Quando as clulas so colocadas em uma
soluo com concentrao baixa de soluto (soluo hipotnica) a
gua se move para o interior das clulas. Os eritrcitos, por exemplo,
se distendem e se rompem em processo chamado hemlise quando
eles so imersos em gua pura. Nas solues hipertnicas, aquelas
com maior concentraes de soluto, as clulas murcham medida que
a gua flui para a soluo. Por exemplo, em soluo hipertnica de
NaCl a 3%, os eritrcitos murcham e tornem-se crenados.
Um aumento da osmolaridade no plasma, desencadeia
rapidamente a sede, exigindo a ingesto de gua para diluir o Na + e
reajustar a osmolaridade para baixo.
F. Ionizao da gua
Pequena proporo de molculas de gua se dissociam para
formar ons hidrognio (H + ) e hidroxila (OH ):
H 2 O ' H + + OH
Para cada mol de H + , um mol de OH produzido. Devido a
elevada reatividade do on hidrognio (ou prton) e o momento
dipolar da molcula de gua, o H + no existe como tal em soluo
aquosa, mas reage com uma segunda molcula de H 2 O para formar o
on hidrnio (H 3 O + ). O grau de ionizao
quantitativamente pela constante de dissociao (K):
K=

descrito

[H ][OH ]
+

[H 2 O]

O valor da K para a gua 1,8 x 10 16 a 25C. A concentrao da


gua no dissociada pode ser considerada como uma constante (1000
g/18 g/mol = 55,5 M; ou seja, o nmero de gramas de gua em 1000
mL dividido pela molcula-grama da gua). Portanto, a quantidade
ionizada de gua insignificante em relao a no ionizada.
Substituindo os valores na equao anterior, tem-se:
K=

[H ][OH ] = 1,8 10
+

16

55,5

Desse modo, uma nova constante para a dissociao da gua pode


ser definida, K w , a constante do produto inico da gua:
K w = K eq 55,5 = [H + ][OH ]
K w = (1,8 10 16 )(55,5) = 1,0 10 14
Assim, a 25 C o valor de K w dado por:
K w = [H + ][OH ] = (10 7 )(10 7 ) = 10 14
Portanto, o valor numrico do produto [H + ][OH ] em solues
aquosas a 25C sempre 1,0 x 10 14 . Em gua pura [H + ] = [OH ]

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tem o valor 1,0 x 10 7 M. Sempre existe equilbrio entre H 2 O, H + e


OH - em solues diludas, independentemente da presena de
substncias dissolvidas. Ao adicionar qualquer substncia, como
ocorre na adio de um cido ou uma base, alteraes concomitantes
devem ocorrer nas concentraes do H + ou OH , para satisfazer
relao de equilbrio. Conhecendo-se a concentrao de um deles,
facilmente calculado o teor do outro.
G. Escala de pH
Para evitar o uso de exponenciais para expressar as concentraes
dos ons hidrognio em solues emprega-se a escala de pH, um
modo conveniente para expressar a concentrao real de ons
hidrognio de uma soluo. O pH de uma soluo definido como o
logaritmo negativo base 10 da concentrao de ons hidrognio:
pH = log[H + ]
Em uma soluo aquosa neutra a 25C, a concentrao do on
hidrognio (como tambm a [OH ]) 1,0 x 10 7 M ou pH = 7,0:
[H + ] = 0,000.000.1 M = 1,0 x 10 7 M
log [H + ] = 7
pH = log[H + ] = 7
Solues com pH menor do que 7 so cidas, enquanto aquelas
com pH>7 so bsicas. A Tabela 1.2 mostra a relao entre a [H + ],
[OH ], pH e pOH.

1 Introduo Bioqumica

Tabela 1.2 Relao entre [H + ], [OH - ], pH e pOH.


[H + ] (M)

pH

[OH ] (M)

pOH

1,0

1 x 10 14

14

13

1 x 10

13

1 x 10

12

12

1 x 10 3

1 x 10 11

11

10

10

9
8

0,1(1 x 10 )
1 x 10

1 x 10

1 x 10

1 x 10

1 x 10

1x

10 6

1x

10 8

1x

10 7

1x

10 7

1 x 10 8

1 x 10 6

1 x 10

1 x 10

1 x 10

1 x 10

10

1 x 10

11

11

1 x 10

1 x 10 12

12

1 x 10 2

1 x 10 13

13

0,1(1 x 10 1 )

10 14

14

1,0

1x

10

importante frisar que o pH varia na razo inversa da


concentrao de H + . Desse modo, o aumento de [H + ] reduz o pH
enquanto a diminuio, o eleva. Notar tambm, que o pH uma
funo logartmica, portanto, quando o pH de uma soluo aumenta
de 3 para 4, a concentrao de H + diminui 10 vezes de 10 3 M a 10 4
M.
Exerccio 1.1
Como a gua pura tem [H ] = 10 M, calcular o pH das seguintes solues:
+

1.

HCl 10 M
4

NaOH 10 M
A auto-ionizao da gua apresenta uma contribuio negligencivel
para as concentraes de ons hidrnio e ons hidrxido.
5

2.

Soluo:
1.
2.

Para o HCl 10 : [H 3 O ] = 10 M; portanto pH = 4.


4

Para o NaOH 10 : [OH ] = 10 M. Como [OH ][H 3 O ] = 1 x 10 ,


5

ento, [H 3 O ] =

9
10

14

M; assim, pH = 9

Os pH de diferentes lquidos biolgicos so mostrados na


Tabela 1.3. Em pH 7 o on H + est na concentrao 0,000.000.1 M (1
x 10 7 ), enquanto a concentrao de outros catons esto entre 0,001
e 0,10 M. Um aumento no teor de on H + de somente 0,000.001 (1 x
10 6 ) tem um grande efeito deletrio sobre as atividades celulares.

10

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Tabela 1.3 Valores de pH de alguns lquidos biolgicos.


Lquido

pH

Plasma sangneo
Lquido intersticial
Lquido intracelular (citosol heptico)
Suco gstrico
Suco pancretico
Leite humano
Saliva
Urina

7,4
7,4
6,9
1,53,0
7,88,0
7,4
6,47,0
4,58,0

1.3 cidos e bases


A concentrao do on hidrognio, [H + ], afeta a maioria dos
processos nos sistemas biolgicos. As definies de cidos e bases
propostas por Bronsted e Lowry so as mais convenientes no estudo
das reaes dos seres vivos:

cidos so substncias que podem doar prtons.

Bases so substncias que podem aceitar prtons.

Por exemplo, a adio de cido clordrico (HCl) a uma amostra


de gua aumenta a concentrao de on hidrognio ([H + ] ou [H 3 O + ])
pois o HCl doa um prton para a gua:
HCl + H 2 O H 3 O + + Cl
A H 2 O atua como uma base que aceita um prton do cido
adicionado.
Do mesmo modo, a adio da base hidrxido de sdio (NaOH)
aumenta o pH (reduo da [H + ]) pela introduo de ons hidrxido
que combinam com os ons hidrognios existentes:
NaOH + H 3 O + Na + + 2H 2 O
Na reao, o H 3 O + o cido que doa um prton para a base
adicionada. O pH final da soluo depende o quanto de H + (por
exemplo, do HCl) foi adicionado ou quanto de H + foi removido da
soluo por sua reao com uma base (por exemplo, on OH - do
NaOH).

1 Introduo Bioqumica

Quadro 1.1 Fora de cidos

A fora de um cido ou base refere-se a


eficincia com que o cido doa prtons ou a base
aceita prtons. Com respeito a fora, existem duas
classes de cidos e bases: fortes e fracos. cidos e
bases fortes so aqueles que se dissociam quase
completamente em meio aquoso diludo (Ex.: HCl ou
NaOH). cidos e bases fracos so os que dissociam
parcialmente em solues aquosas diludas (Ex.:
CH 3 -COOH ou NH 3 ).
A tendncia de um cido fraco no-dissociado
(HA) para perder um prton e formar a sua base
conjugada (A ) dada pela equao:
HA ' H + A
+

Esta reao no ocorre at o final, mas, atinge


um ponto de equilbrio entre 0 e 100% da reao.

No equilbrio, a velocidade lquida zero pois as


velocidades absolutas em ambas as direes so
exatamente iguais. Tal posio descrita pela
equao:

H + A

K=
[HA ]
em que K a constante de equilbrio da reao
reversvel e tem um valor fixo para cada
temperatura. As K para as reaes de ionizao so
denominadas constantes de dissociao ou de
ionizao.
Para os cidos usada a designao K a . Os
cidos fortes tem valor de K a elevado, pois
apresentam maior nmero de prtons liberados por
mol de cido em soluo.

A. Pares cido-base conjugados


Quando um cido fraco, como o cido actico, dissolvido em
gua, obtm-se uma dissociao parcial, estabelecendo um equilbrio
entre o cido, o acetato e o on hidrognio (prton):
CH 3 COOH + H 2 O ' CH 3 COO + H 3 O +
cido
conjugado

Base
conjugada

Base
conjugada

cido
conjugado

O cido actico um cido conjugado (doador de prtons). A


forma ionizada do cido actico, o on acetato (CH 3 COO )
denominada base conjugada (aceptora de prtons) ou sal. Em
reaes deste tipo, tpicas de todos os equilbrios cido-base, o cido
fraco (CH COOH) e a base formada na sua dissociao (CH COO )
3

constituem um par cido-base conjugado.


Tabela 1.4 Alguns pares cido-base conjugados de importncia nos
sistemas biolgicos.
Doador de prtons

Aceptor de prtons

CH 3 CHOHCOOH

'

H + + CH 3 CHOHCOO

CH 3 COCOOH

'

H + + CH 3 COCOO

HOOCCH 2 CH 2 COOH

'

2H + + - OOCCH 2 CH 2 COO

+ NH CH COOH
3
2

'

H + + + NH 3 CH 2 COO

A constante de equilbrio para a dissociao do cido actico :


K=

[CH

][

COO H 3 O +
[CH 3 COOH] [H 2 O]
3

11

12

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Como a concentrao da gua (55,5 M) pouco alterada pela


constante de dissociao cida, K a :

[CH

][ ]

COO H +
[CH 3 COOH]

Ka =

O valor de K a para o cido actico 1,74 x 10 5 .


A tendncia de um cido conjugado em dissociar especificada
pelo valor de K a ; em valores baixos, a tendncia em liberar prtons
pequena (menos cido se dissocia), em valores elevados maior a
tendncia em liberar prtons (mais cido se dissocia). As constantes
de dissociao so mais facilmente expressas em termos de pK a , que
definido como:
pK a = log K a
ou seja, o pK a de um cido o logaritmo negativo da constante de
dissociao do mesmo. Para o cido actico,
pK a = log (1,74 x 10 5 ) = 4,76
A relao entre pK a e K a inversa; o menor valor de K a fornece o
maior pK a . Os valores de K a e pK a de alguns cidos so mostrados na
Tabela 1.4. A gua considerada um cido muito fraco com pK a = 14
a 25C.
Tabela 1.5 Constantes de dissociao e pK a de alguns cidos fracos
importantes em bioqumica (a 25 C).
Ka, M

pK a

cido actico (CH 3 COOH)

1,74 x 10 5

4,76

cido lctico (CH 3 CHOH COOH)

1,38 x 10 4

3,86

cido pirvico (CH 3 CO COOH)

3,16 x 10 3

2,50

Glicose 6 PO 3 H

7,76 x 10 7

6,11

cido fosfrico (H 3 PO 4 )

1,1 x 10 2

2,0

2,0 x 10 7

6,8

3,4 x 10 13

12,5

1,70 x 10 4

3,77

5,62 x 10 10

9,25

cido

on diidrogenofosfato H 2 PO -4

on hidrogenofosfato HPO 24

cido carbnico ( H 2 CO 3 )

on amnio NH +4

B. Equao de Henderson-Hasselbalch
O pH de uma soluo contendo uma mistura de cido fraco com
sua base conjugada pode ser calculado pela equao de HendersonHasselbach. Para a dissociao do cido fraco (HA ' H + + A ) a
equao pode ser derivada tomando-se o logaritmo negativo dos dois
lados da equao K a :

Ka =

[H ][A ]
+

[HA]

1 Introduo Bioqumica

Por rearranjo

]
[H ] = K [[HA
H ]
+

Pode-se expressar [H + ] como log[H + ] e K a como log K a e obter-se

[ ]

log H + = log K a + log

[A ]

[HA]

e empregando as definies de pH e pK a
pH = pK a + log

[A ]

[HA]

ou escrita de forma genrica:


pH = pK 'a + log10

[Base conjugada ]

[cido conjugado]

Esta equao apresenta um modo conveniente para o estudo do


inter-relacionamento do pH de uma soluo, o p K a do cido fraco e as
quantidades relativas de cido conjugado e base conjugada presentes.
Nos casos onde a concentrao molar de cido conjugado igual a da
base conjugada ([HA] = [A ]), a relao [A ]/[HA] igual 1. Como
o logaritmo de 1 zero o pH da soluo igual ao valor do p K a do
cido fraco.

Exerccio 1.2
Calcular a quantidade relativa de cido actico e de on acetato presente
quando 1 mol de cido actico titulado com 0,3 mol de hidrxido de sdio.
Calcular tambm o valor do pH da soluo final.
Soluo:
Ao adicionar 0,3 mol de NaOH, 0,3 mol de cido actico reage para formar
0,3 mol de on acetato, deixando 0,7 mol de cido actico. A composio
70% de cido actico e 30% de on acetato.

pH = pK a + log

[Acetato]

[cido actico]

pH = 4,75 + log

0,3
= 4,39
0,7

1.4 Tampes e tamponamento


A regulao do pH nos lquidos biolgicos atividade essencial
dos organismos vivos. Mesmo pequenas mudanas na concentrao
do on hidrognio podem afetar grandemente as estruturas e as
funes das biomolculas. A concentrao do H + mantida
relativamente constante por meio de solues-tampes que resistem a

13

Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

alteraes

bruscas

de

pH

quando

adicionadas quantidades
relativamente pequenas de cido (H ) ou base (OH ). So formados
por cidos fracos e suas bases conjugadas.
Quando um cido forte como o HCl adicionado a gua pura,
todo o cido adicionado contribui diretamente para a reduo do pH.
No entanto, quando o HCl adicionado a uma soluo contendo um
cido fraco em equilbrio com sua base conjugada (A ), o pH no
altera to dramaticamente, pois parte dos prtons adicionados
combinam com a base conjugada para amenizar o aumento da [H + ]
(Figura 1.6).
+

HCl H + + Cl

grande aumento da [H + ]

HCl + A HA + Cl

pequeno aumento da [H + ]

Quando uma base forte (como o NaOH) adicionada a gua pura


ocorre grande reduo da [H + ]. Se a base for adicionada a uma cido
fraco em equilbrio com sua base conjugada (A ), parte dos ons
hidrxidos aceitam prtons do cido para formar H 2 O e, portanto, no
contribuem para a reduo do [H + ].
NaOH Na + + OH

grande reduo da [H + ]

NaOH + HA Na + + A + H 2 O

pequena reduo da [H + ]

O sistema cido fraco/base conjugada (HA/A ) atua como tampo


para evitar mudanas bruscas do pH quando so adicionados cidos
ou bases a soluo.
Ao tampo

9
4

8
4

OH

H2O

7
4

pH

14

[HA] = [A ]

pH = pK

HA

3
4

HA
H+
Equivalentes de OH

Figura 1.6
Capacidade tamponante do par cido fraco (HA) e sua base conjugada
+
(A ). O sistema capaz de absorver tanto H como OH por meio da
reversibilidade da dissociao do cido. O doador de prtons (cido fraco),
+
contm uma reserva de H ligado que pode ser liberada para neutralizar a

adio de OH ao sistema resultando na formao de gua. De forma


+
semelhante, a base conjugada (A - ), pode reagir com os ons H adicionados
ao sistema. Assim, o par cidobase conjugado resiste s variaes de pH
quando quantidades relativamente pequenas de cido ou base so
adicionadas soluo.

A resistncia a mudanas no pH de um tampo depende de dois


fatores: (a) a concentrao molar do cido fraco e sua base conjugada
e (b) a relao entre suas concentraes.

1 Introduo Bioqumica

Exerccio 1.3
Calcular o valor do pH obtido quando 1,0 mL de HCl 0,1 M adicionado a 99
mL de gua pura. Calcular tambm o pH aps a adio de 1,0 mL de NaOH
0,1 M a 99 mL de gua pura. (Levar em conta a diluio tanto do cido como
da base ao volume final de 100 mL)
Soluo:

Sobre a diluio, tem-se 100 mL de HCl 0,001 M e 100 mL de NaOH


0,001 M.
+

-3

cido adicionado, [H 3 O ] = 10 , portanto, pH = 3.


Base adicionada,
-

[0H ] = 10

-3
-

M.
+

Como [OH ][H 3 O ] = 1 x 10

-14

, [H 3 O ] = 10

-11

M; portanto, pH = 11

A capacidade tamponante mxima de um cido quando o pH =


p K a do cido fraco, ou seja, quando a as concentraes molares do
cido fraco (HA) e sua base conjugada (H ) so iguais. Na realidade,
a capacidade tamponante considervel mesmo dentro de uma faixa
de 1,0 unidade de pH do valor de seu p K a . Fora destes limites a ao
tamponante mnima. Esse fato est representado na curva de
titulao do cido actico (Figura 1.7). Para o par cido
actico/acetato (p K a = 4,76) o tamponamento efetivo situa-se entre
pH 3,76 e 5,76.
9
8

pH

7
6

pH = pK + 1

5
4

pH = 4,76 = pK

pH = pK - 1

3
2
Equivalentes de OHFigura 1.7

Curva de titulao do cido actico por uma base (OH ). No ponto inicial
(antes da adio da base), o cido est presente na forma CH 3 COOH. A
adio de base dissocia prtons at atingir o ponto mdio da titulao onde o
pH = p K , as concentraes do cido (CH 3 COOH) e de sua base conjugada

(CH 3 -COO ) so iguais. A adio de mais base dissocia mais prtons at que
-

todo o cido atinja a forma CH 3 COO


(ponto final). Na regio de
tamponamento efetivo (P K 1), adies de cidos ou bases no alteram
grandemente o pH da soluo.

A. cidos fracos com mais de um grupo ionizvel


Algumas molculas contm mais de um grupo ionizvel. O cido
fosfrico (H 3 PO 4 ) um cido fraco poliprtico pode doar trs ons

15

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hidrognio. Durante a titulao com NaOH as ionizaes ocorrem em


etapas com a liberao de um prton por vez:
pK =12,38

pK1 = 2,15
pK 2 = 6,82
3
H 3 PO 4
H + + H 2 PO 4

H + + HPO 24

H + + PO 33

Os valores de pK 1 , pK 2 e pK 3 representam os pK a de cada grupo


ionizado (Figura 1.8).

14
5

pH = 12,38 = pK3

13

12

HPO42-

11

10

H3PO4

H2PO4-

pH

16

PO33-

8
7

pH = 6,82 = pK2

5
4

3
4

2
4

pH = 2,15 = pK1

Quantidade de base (equivalentes)


Figura 1.8
Curva de titulao do cido fosfrico (poliprtico). O cido fosfrico
possui pK mltiplos, um para cada etapa da titulao.

B. Tampes fisiolgicos
Os trs tampes mais importantes no corpo humano so: tampo
bicarbonato, o tampo fosfato e o tampo protico. Cada um est
adaptado para solucionar problemas fisiolgicos especficos do
organismo.

1. Tampo bicarbonato. Um caso especial de sistema tampo de


grande importncia nos mamferos o bicarbonato/cido carbnico.
O dixido de carbono reage com a gua para formar cido carbnico:
CO 2 + H 2 O ' H 2 CO 3
O cido carbnico rapidamente se dissocia para formar ons H + e
HCO + :
H 2 CO 3 ' H + + HCO 3
Como a concentrao do H 2 CO 3 muito baixa no sangue, as
equaes acima podem ser simplificadas a:
CO 2 + H 2 O ' H + + HCO 3

1 Introduo Bioqumica

O H 2 CO 3 um cido relativamente fraco (p K a = 6,37) e,


consequentemente, um tampo ineficaz no sangue. A relao do
HCO 3 /CO 2 necessria para manter o pH = 7,4 (normal no sangue)
aproximadamente 11 para 1. Em outras palavras, o tampo
bicarbonato atua no sangue quase no limite de seu poder tamponante.
Alm disso, as concentraes de CO 2 e HCO 3 no so
excepcionalmente altas. Apesar dessas dificuldades, o sistema
tamponante do bicarbonato importante, pois os dois compontes
podem ser regulados. O dixido de carbono ajustado por alteraes
na velocidade da respirao. Enquanto, o teor de bicarbonato
regulado pelos rins.
O dixido de carbono fisicamente dissolvido est em constante
equilbrio com o cido carbnico e tambm com o CO 2 alveolar.
Alteraes em qualquer dos componentes na fase aquosa, provocam
modificaes no equilbrio; por exemplo, o aumento do CO 2 eleva o
H 2 CO 3 , que desvia o equilbrio da reao de dissociao aumentando
o H + . Assim, o CO considerado parte do cido conjugado e
2

participa do componente cido da equao:


Ka =

[H ][HCO ]
+

[H 2 CO 3 ][CO 2 ]

Com a incluso do CO 2 o valor de p K a 6,1. A quantidade de


H 2 CO 3 no-dissociado menor que 1/700 do contedo de CO 2 e,
normalmente, desprezada. uma prtica comum referir-se ao CO 2
dissolvido como o cido conjugado. Existe uma relao direta entre o
pH do sangue e a presso do gs dixido de carbono nos pulmes.
Embora o p K a para o sistema HCO 3 /CO 2 seja 1,3 unidades de pH
menor do que o pH extracelular normal de 7,40, este sistema tampona
extremamente bem, porque o CO 2 pode ser regulado por alteraes da
ventilao alveolar.

2. Tampo fosfato. Consiste de um cido fraco/base conjugada


H 2 PO 4 /HPO 4 2 (diidrogeno fosfato/hidrogeno fosfato):
H 2 PO 4 ' H + + HPO 4 2
Com p K a 7,2, poderia parecer que o tampo fosfato uma escolha
excelente para o tamponamento sangneo. No entanto, as
concentraes do H 2 PO 4 e HPO 4 2 no sangue so muito baixas para
exercer atividade significante. Por outro lado, o sistema fosfato
fundamental para o tamponamento dos lquidos intracelulares onde
suas concentraes so de, aproximadamente, 75 mEq/L. Os nveis de
fosfato nos lquidos extracelulares como o sangue est ao redor de 4
mEq/L. Como o pH normal dos lquidos extracelulares cerca de 7,2
(o intervalo de 6,9 a 7,4) uma mistura equimolecular de H 2 PO 4 e
HPO 4 2 est presente. Apesar das clulas conterem outros cidos, eles
so de pouca importncia pois seus valores de p K a so baixos para o
pH intracelular. Por exemplo, o cido lctico tem um p K a de 3,86.

3. Tampo de protenas. As protenas apresentam uma grande


capacidade tamponante. Composta de aminocidos ligados entre si
por ligaes peptdicas, as protenas contm vrios grupos ionizveis
nas cadeias laterais que podem doar ou aceitar prtons. Como as
molculas de protenas esto presentes em significantes

17

18

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concentraes nos organismos vivos, elas so tampes poderosos. Por


exemplo, a hemoglobina a mais abundante biomolcula nas clulas
sangneas e exerce um importante papel na manuteno do pH no
sangue. Tambm presentes em altas concentraes e auxiliares na
manuteno do pH so a albumina e outras protenas sricas.

1.5 Biomolculas
Os organismos vivos so compostos por milhares de molculas
inorgnicas e orgnicas diferentes. Contm cerca de 27 elementos
qumicos. O nmero real depende do tipo de clula e a espcie de
organismo. Acima de 99% da massa da maioria das clulas, so
compostas por oito elementos denominados elementos principais . Os
outros constituintes so elementos secundrios (Quadro 1.1). A
grande maioria dos constituintes moleculares dos sistemas vivos
contm carbonos ligados covalentemente a outros carbonos e a
tomos de hidrognio, oxignio e nitrognio .

A. Carbono
O carbono (nmero atmico 6, peso atmico 12) um tomo
pequeno que tem quatro eltrons em seu orbital eletrnico externo
que permite participar no compartilhamento com outros quatro
tomos. Os eltrons externos do carbono esto arranjados ao redor do
ncleo como um tetraedro, uma pirmide com faces triangulares.
Uma das mais importantes propriedades do tomo de carbono
sua capacidade para formar ligaes covalentes com outros tomos de
carbono e com tomos de hidrognio, oxignio, nitrognio e enxofre
para formar cadeias ou anis das macromolculas. As propriedades de
ligao do carbono permitem a produo de inmeras molculas. As
ligaes necessitam energia, exemplo: a ligao C-H requer 414
kJmol 1 ; a ligao C-C 343 kJmol 1 ; a ligao C-O 351 kJmol 1 ; a
ligao C=C 615 kJmol 1 e a ligao C=O 686 kJmol 1 .
As ligaes simples carbono-carbono podem girar livremente a
menos que estejam restritos por grupos muito grandes ou cargas
eltricas. A rotao permite a uma molcula orgnica assumir
diferentes formas chamadas conformaes. As ligaes duplas
carbono-carbono:

So mais curtas que as ligaes simples.

Apresentam rotao limitada.

So mais
molculas).

Variam o ngulo entre dois eltrons, afetando a conformao da


molcula. Isto tem um grande impacto sobre a atividade biolgica
da molcula, que muitas vezes envolve uma interao que
depende da conformao de outras molculas.

rgidas,

(propriedade

importante

em

grandes

As cadeias e anis podem apresentar diferentes arranjos em suas


ligaes que se alternam dando origem a um sistema de ligao
conjugada. Os eltrons da ligao movem-se no interior da molcula
aumentando a estabilidade da estrutura. Esse fenmeno chamado
estabilizao por ressonncia.

1 Introduo Bioqumica

Quadro 1.2 Talidomida

Durante o perodo entre 1957 e 1961,


aproximadamente 10.000 pessoas em todo o mundo
nasceram com membros deformados ou inexistentes
aps as mes terem ingerido a droga talidomida, um
sedativo para tratar enjos e nuseas durante a
gravidez.
A talidomida pode existir em duas formas
enanciomricas.
Animais
tratados
com
a
R (+)talidomida
produziam
neonatos
normais
enquanto aquelas que recebiam o enancimero S ()
produziam nascituros deformados.

A talidomida prescrita para humanos era


formada por uma mistura racmica (mistura que
contm quantidades iguais de cada enancimero).
Somente em 1995 foi comprovada que em
humanos h uma rpida interconverso entre os dois
enancimeros. O equilbrio estabelecido entre as
duas formas no sangue, independente de qual
enancimero foi empregado inicialmente. Isso sugere
que, mesmo utilizando a forma pura r(+)talidomida,
os defeitos de nascimento em seres humanos seriam
os mesmos.

De modo simplificado, consideram-se as molculas biolgicas


como esqueletos de tomos de carbono ligados covalentemente entre
si para formar cadeias longas, lineares ou ramificadas ou, ainda,
estruturas cclicas. Os tomos de hidrognio que esto ligados aos
tomos de carbono podem ser substitudos por N, O e S para formar
uma grande variedade de grupos funcionais, tais como: aminas,
aldedos, lcoois e sulfidrilas. Isso confere uma grande variedade de
propriedades qumicas especficas encontradas nas molculas e que
determinam as suas funes biolgicas especficas. As molculas
biolgicas muitas vezes contm mais que um grupo funcional e so
denominadas polifuncionais . Por exemplo, os aminocidos contm
grupos aminos e grupos carboxlicos.
Tabela 1.6 Elementos encontrados nas clulas
Elementos principais
Elemento

Carbono
Hidrognio
Nitrognio
Oxignio
Fsforo
Enxofre
Clcio
Potssio

Smbolo

C
H
N
O
P
S
Ca
K

Oligoelementos
Elemento

Smbolo

Arsnico
Boro
Cloro
Cromo
Fluor
Iodo
Ferro
Magnsio
Mangans
Molibdnio
Nquel
Selnio
Silicnio
Sdio
Estanho
Vandio

As
B
Cl
Cr
F
I
Fe
Mg
Mn
Mo
Ni
Se
Si
Na
Sn
V

Zinco

Zn

19

20

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B. Estrutura tridimensional
Os compostos de carbono cujas composies so idnticas, mas
as relaes espaciais entre os tomos so diferentes, so denominados
estereoismeros. O tomo de carbono ligado a quatro substituintes
diferentes chamado assimtrico. Carbonos assimtricos so centros
quirais indicando que os estereoismeros podem ocorrer em formas
orientadas direita ou esquerda. Os estereoismeros so imagens
especulares um do outro e nosuperponveis e so chamados
molculas quirais. Alguns estereoismeros so enancimeros e
apresentam atividade ptica, ou seja, giram a luz plano-polarizada
para a direita (dextrgiro) ou para a esquerda (levgiro). Uma
mistura equimolar de dois enancimeros opticamente inativa
(mistura racmica).
As posies dos tomos ou grupos ao redor de um tomo de
carbono quiral no esto relacionados com a direo do desvio da luz
plano-polarizada de uma maneira simples. Emil Fisher em 1891,
arbitrria e corretamente, designou uma das estruturas do
gliceraldedo e chamou de D -gliceraldedo. O ismero levorrotatrio
foi chamado L -gliceraldedo. Atualmente, o gliceraldedo permanece
como base da configurao estereoqumica das molculas biolgicas.
Estereoismeros de todas as molculas quirais tem configuraes
estruturais relacionadas com um dos gliceraldedos e so designadas
D ou L independente de sua atividade ptica. A atividade ptica
indicada por (+) para dextrorrotatrio e () para levrrotatrio.
Os centros quirais so de grande importncia biolgica pois
muitas molculas so seletivas quanto a quiralidade, por exemplo,
virtualmente todas as protenas e polissacardios dos organismos
superiores so compostos por L aminocidos e D monossacardeos,
respectivamente. Essa seletividade promove estabilidade adicional s
molculas polimricas.

C. Macromolculas
As macromolculas so construdas pela unio qumica de
precursores relativamente simples (subunidades monomricas) para
formar polmeros de unidades repetidas. Todos os organismos vivos
tm os mesmos tipos de subunidades monomricas que alm da
formao de macromolculas exercem, tambm, vrias funes
biolgicas. As ligaes especficas para cada tipo de macromolcula,
so formadas por reaes de condensao com perda de gua , em
processos que requerem o fornecimento de energia.

1 Introduo Bioqumica

Unidades monomricas
Reao de
condensao

-(n-1)H 2O

Onde n = nmero de
unidades monomricas

Ligaes covalentes
Polmero
Figura 1.9
As macromolculas so formadas a partir unidades monomricas. As
macromolculas intracelulares so polmeros de elevada massa molecular
formadas com precursores relativamente simples.

O tamanho de uma molcula dado em termos de massa


molecular. A unidade de massa empregada o dalton (D) (1000 D = 1
kilodalton = kD) onde 1 D definido como 1/12 da massa do tomo
de 12 C.
As quatro principais classes de molculas biolgicas so:

1. Protenas ou polipeptdeos. So longos polmeros formados


por vinte diferentes aminocidos. Apresentam elevada massa
molecular que variam de centenas a milhes de daltons. Atuam como
elementos
estruturais,
catalisadores
(enzimas),
anticorpos,
transportadores, hormnios, reguladores gnicos, toxinas, etc.
2. Carboidratos. So polmeros de acares simples, como a
glicose, com elevadas massas moleculares. Liberam e armazenam
energia e tambm so elementos estruturais extracelulares.
3. Lipdeos. So formados por molculas relativamente pequenas
(ao redor de 300-1.500 D) que podem se associar para constituir
grandes molculas que servem, principalmente, como componentes
estruturais das membranas, como forma de armazenamento de energia
e outras funes (hormnios esterides, vitaminas, proteo, material
isolante).

21

22

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Quadro 1.3 Sistema RS

O sistema RS de nomenclatura para a


configurao estereoqumica foi desenvolvido em
1956 para superar o principal problema associado
com a nomenclatura DL , que pode ser ambiga para
compostos com mltiplos centros quirais. O sistema
RS compara os quatro tomos ou grupos ligados ao
tomo de carbono tetradrico (centro quiral). Cada
grupo ligado ao centro quiral tem uma prioridade. As
prioridades so: SH > OH > NH 2 > COOH > CHO >
CH 2 OH > CH 3 > H. A configurao do centro quiral
visualizada com o grupo de menor prioridade
orientado para longe do observador, exemplo, o H
no gliceraldedo.

Se a ordem dos outros trs grupos diminui na


direo horria, a configurao ser considerada R
(do latim, rectus, direita). Se a ordem for no sentido
anti-horrio, a configurao ser considerada S (do
latim, sinistrus, esquerda). Desse modo, o
R gliceraldedo sinnimo de D gliceraldedo. O
sistema
RS
descreve
sem
ambigidades
a
configurao
estereoqumica
de
compostos
contendo vrios centros quirais, exemplo, (2 S , 3 R )
treonina.

4. cidos nuclicos (DNA e RNA). So polmeros formados por


nucleotdeos. Armazenam, transmitem e transcrevem a informao
gentica. So componentes das organelas celulares.
Na Quadro 1.2 esto destacadas algumas caractersticas da
construo das macromolculas. Como exemplo, os carboidratos
polimricos so constitudos por monossacardeos unidos por
ligaes glicosdicas para formar oligossacardeos (2 a 10 unidades)
ou polissacardeos (mais de 10 unidades). Os oligossacardeos so
descritos como dissacardeos, trissacardeos ou tetrassacardeos e
assim por diante, de acordo com o nmero de unidades monomricas.
Nomenclatura similar empregada para as protenas e cidos
nuclicos. A maioria das macromolculas contm uma ou poucas
unidades monomricas diferentes, por exemplo, o glicognio
formado por uma nica unidade monomrica, denominada glicose; o
cido desoxirribonuclico (DNA) contm somente quatro diferentes
nucleotdios.
A forma precisa de uma estrutura polimrica conferida pela
natureza das ligaes covalentes e das ligaes no-covalentes. As
trs ligaes no-covalentes fundamentais so: pontes de hidrognio,
interaes eletrostticas e foras de van der Waals . Elas diferem
quanto geometria, fora e especificidade. Alm disso, essas
ligaes so grandemente afetadas pela presena da gua. As ligaes
no-covalentes podem ocorrer entre tomos ou grupos funcionais na
mesma cadeia ou entre cadeias adjacentes. A estrutura polimrica
pode ser degradada em suas unidades monomricas por hidrlise pela
adio de gua aos grupos que esto envolvidos nas ligaes
covalentes. Nos sistemas biolgicos isto conseguido pela ao
catalisadora de enzimas.
As classes de macromolculas biolgicas no so mutuamente
exclusivas e podem interagir para produzir molculas hbridas ou
conjugadas. Por exemplo, as protenas e os carboidratos formam
proteoglicanos
ou
glicoprotenas.
Os
proteoglicanos
so
fundamentalmente constitudos por polissacardios (95% da massa da
macromolcula) unidos entre si por ligaes covalentes e nocovalentes s protenas. As glicoprotenas contm pequenas
quantidades de carboidratos ligados s cadeias polipeptdicas por
ligaes covalentes.
Molculas hbridas como os glicolipdeos, lipoprotenas e
nucleoprotenas tambm esto presentes nos organismos vivos.

1 Introduo Bioqumica

Quadro 1.2 Comparao das classes de macromolculas


Caractersticas

Carboidratos

Protenas

cidos nuclicos

Unidades monomricas

Monossacardeos

Aminocidos

Nucleotdeos

Ligao covalente formada por reao de


condensao

Glicosdica

Peptdica

Fosfodister

Nomenclatura de unidades mltiplas:


2-10 unidades

Oligossacardeos

Olipeptdeos

Oligonucleotdeos

>10 unidades

Polissacardeos

Polipetdeos

Polinucleotdeos

Ocorrncia de pontes de hidrognio

Intra e intermolecular

Intra e intermolecular

Intra e intermolecular

Enzima hidroltica

Glicosidases

Peptidases

Nucleases

Finalmente, deve-se notar que a atividade biolgica no est


confinada a unidades monomricas, ou grandes cadeias polimricas
ou ainda, a molculas conjugadas. Existem muitos exemplos de
oligmeros biologicamente ativos, como por exemplo, o glutationa
(um tripeptdeo) que atua na manuteno da integridade das
membranas.

1.1 Clulas: a unidade bsica da vida


As clulas so as unidades estruturais e funcionais de todos os
organismos vivos. Elas diferem amplamente em suas estruturas e
funes, mas todas so circundadas por uma membrana que controla a
troca de substncias para o interior e para o exterior da clula.
As clulas so classificadas de acordo com seu tamanho e
complexidade em uma das duas categorias:

Procariticas (do grego pro, antes), nas quais, o material


gentico no est delimitado em um envelope nuclear. No
possuem ncleo ou estruturas internas delimitadas por membrana.
A sua estrutura mantida pela parede celular. So organismos
unicelulares que podem existir em associao, formando colnias
de clulas independentes.

Eucariticas (do grego eu , verdadeiro, e karyon, ncleo),


contm o material gentico organizado em cromossomos dentro
de um envelope nuclear. So organismos complexos e podem ser
unicelulares ou multicelulares. As clulas eucariticas possuem
vrias organelas limitadas por membranas no seu citoplasma, tais
como, lisossomos, peroxissomos,
mitocndrias, retculo
endoplasmtico e aparelho de Golgi (Quadro 1.1).

23

24

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Quadro 1.4 Clula

A palavra clula foi introduzida na biologia em


1665 por Robert Hooke em sua coleo de desenhos
microscpicos, chamados Micrographia, que inclui
uma fina fatia de cortia. Ele registrou a estrutura de
favos
vazios
da
cortia
e
denominou
os
compartimentos de clulas em analogia a cela de
uma priso ou mosteiro. O termo, atualmente, no
empregado para descrever o compartimento vazio
mas o contedo vivo existente entre estas paredes
celulares. Hoje, a clula pode ser definida como a
mais simples unidade integrada nos sistemas vivos
capazes de sobreviver independentemente.

No incio do sculo 19, as clulas foram


reconhecidas
como
formas
vivas
e
como
pertencentes a organismos multicelulares mais
complexos. Em 1839, Theodor Schwann, um
zoologista,
publicou
o
Mikroskopische
Untersuchungen, que contm figuras desenhadas por
Mathias Schleiden, um botnico, que registrou
semelhanas entre as clulas vegetais e animais.
Vinte anos aps, Rudolf Virchow anunciou omnis
cellula et cellula, i.e. todas as clulas so
provenientes de outras clulas.

O metabolismo celular compartimentalizado para organizar as


diferentes vias metablicas como a sntese e degradao, em diversos
compartimentos, para que operem independentemente. Algumas
funes em diferentes organelas so mostradas no Quadro 1.3.
Quadro 1.3 Resumo das funes das organelas
Organela

Funo

Ncleo

Envolvido com uma membrana nuclear.


Localizao do DNA e protenas (histonas);
stio da sntese da maior parte do DNA e do
RNA.

Mitocndria

Corpos separados constitudos por membranas


altamente convolutas. Stio de reaes de
oxidao produtoras de energia; possui o seu
prprio DNA. Parte do sistema sinttico:
biossntese e metabolismo energtico.

Retculo endoplasmtico

Membrana citoplasmtica contnua com as


membranas nuclear e plasmtica; parte rugosa
apresenta com ribossomos ligados

Complexo de Golgi

Srie de membranas achatadas; envolvido na


secreo de protenas pela clula e em reaes
que ligam acares e outros componentes
celulares.

Lisossomos

Vesculas envolvidas por membranas contendo


vrios tipos de enzimas hidrolticas. Parte do
sistema sinttico (digestivo); hidrlise do
material estranho, lise de clulas mortas.

Peroxissomos

Vesculas que contm enzimas envolvidas no


metabolismo do perxido de hidrognio.

Ribossomos

Compostos de partculas nucleoproticas (RNA


e protenas). Stios da sntese protica.

Membrana plasmtica

uma camada semipermevel contnua ao


redor do citoplasma que separa o seu contedo
da circunvizinhana. Contm transportadores e
receptores. Regula a troca com o meio.

1 Introduo Bioqumica

Com base na comparao de molculas de RNA, Carl Woese


agrupou todos os organismos em trs grupos fundamentais chamados
domnios:
Eukarya
(eucariontes),
Bacteria
(anteriormente
Eubacteria) e Archaea (anteriormente Archaebacteria). A Eukaria
compreende todos os organismos macroscpicos, incluindo os seres
humanos tambm como muitos organismos microscpicos
unicelulares como os fungos. Os dois domnios, Bacteria e Archaea ,
consistem de procariontes.

Halobacterium

Archaeoglobus

Methanocuccus

Archaea

Zea

Homo

Bacillus

Salmonella

Escherichia

Saccharomyces

Eukarya

Bacteria

Ancestral
comum
Figura 1.10
rvore filogentica de classificao dos trs domnios. O domnio
Eukaria consiste de eucariotos. Os dois domnios, Bacteria e Eukarya ,
consistem de procariotos. Na evoluo, os trs domnios possuem um
ancestral comum.

Resumo
1. A bioqumica o estudo das estruturas moleculares, dos mecanismos e
dos processos qumicos responsveis pela vida. Os organismos vivos so
mantidos por sua capacidade de obter, transformar, armazenar e utilizar
energia.
2. A gua contribui com 50 90% do peso de uma clula. As molculas de
gua so constitudas por dois tomos de hidrognio e um de oxignio.
Cada tomo de hidrognio est ligado ao tomo de hidrognio por uma
ligao covalente simples. As ligaes oxignio-hidrognio so polares e
as molculas de gua so dipolos. As molculas de gua podem formar
pontes de hidrognio entre o oxignio de uma molcula e o hidrognio
de outra molcula.
3. As ligaes no-covalentes so relativamente fracas e facilmente
rompidas. Exercem papel fundamental na determinao das propriedades
fsicas e qumicas da gua e de biomolculas. Interaes inicas ocorrem
entre tomos e grupos carregados. O grande nmero de pontes de
hidrognio exerce considervel efeito nas molculas envolvidas.
4. Os pontos de ebulio e fuso da gua so excepcionalmente elevados
quando comparados com compostos de estrutura e peso molecular
semelhante. As pontes de hidrognio so responsveis por esse
comportamento anmalo.

25

26

Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

5. A estrutura dipolar da gua e sua capacidade de formar pontes de


hidrognio permite a dissoluo de muitas substncias inicas e polares.
6. As molculas de gua lquida apresentam capacidade limitada de ionizarse para formar H + e OH. Quando uma soluo contm quantidades iguais
dos ons H + e OH , considerada neutra. Solues com excesso de H +

so cidas, enquanto aquelas com grande nmero de OH so bsicas.


Como os cidos orgnicos no se dissociam completamente em gua, so
chamados de cidos fracos. A constante de dissociao de um cido, K a ,
expressa a fora de um cido fraco. Em geral, o K a expresso como pK a
( log K a ).
7. A concentrao do on hidrognio expressa na forma de pH definido
como o logaritmo negativo da concentrao do on hidrognio ( log
[H + ]).
8. Os cidos so definidos como doadores de prtons, a as bases como
aceptores de prtons. A tendncia de um cido HA doar prtons
expressa pela sua constante de dissociao (K a =[H + ][A ]/[HA]).
9. A regulao do pH essencial para a atividade dos seres vivos. A
concentrao do on hidrognio mantida dentro de estreitos limites. As
solues tamponadas (par cido base conjugado) resistem a mudanas
de pH. A capacidade mxima de tamponamento est situada uma unidade
de pH acima ou abaixo do seu pK a .
10. Vrias propriedades fsicas da gua modificam as molculas de soluto
dissolvidas. Uma importante modificao a presso osmtica, a presso
que evita o fluxo de gua atravs das membranas celulares.
11. Todos os seres vivos so constitudos de clulas procariticas ou clulas
eucariticas. As procariticas o material gentico no est delimitado em
um envelope nuclear. As eucariticas apresentam o material gentico
dentro de um envelope nuclear. Essas clulas contm ncleo e estruturas
complexas que no so observadas nas procariticas.

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 1-19.
CAMPBELL, M. K. Bioquimica. 3 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2000. p. 64-87.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed.
So Paulo: Sarvier, 2002. p. 3-85.

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Aminocidos e
protenas

2
Aminocidos e Protenas

Objetivos
1.

Descrever as propriedades dos aminocidos encontrados nas protenas.

2.

Identificar os seguintes grupamentos qumicos nas cadeias laterais dos


aminocidos: hidrofbicos, alcolicos, tilicos, cidos, bsicos e amidas.

3.

Descrever a dissociao dos aminocidos em funo da variao do pH.

4.

Interpretar a curva de dissociao de um aminocido neutro, de um


aminocido cido e de um aminocido bsico.

5.

Calcular o pI de um aminocido, dados os seus pKs

6.

Representar uma ligao peptdica entre dois aminocidos.

7.

Identificar numa cadeia polipeptdica: o aminoterminal, o carbxiterminal,


os resduos de aminocidos, os radicais e a ligao peptdica.

8.

Caracterizar os diferentes nveis estruturais das protenas e descrever as


foras responsveis pelos mesmos.

9.

Caracterizar a desnaturao protica como uma modificao das propriedades


fsicas, qumicas e biolgicas das protenas.

10. Descrever a estrutura, as propriedades e as funes das protenas globulares


e fibrosas.

As protenas so as biomolculas mais abundantes nos seres


vivos e exercem funes fundamentais em todos os processos
biolgicos. So polmeros formados por unidades monomricas
chamadas -aminocidos, unidos entre si por ligaes peptdicas. As
protenas so constitudas de 20 aminocidos-padro diferentes
reunidos em combinaes praticamente infinitas, possibilitando a
formao de milhes de estruturas diversas.

2.1 Aminocidos
Os -aminocidos possuem um tomo de carbono central ()
onde esto ligados covalentemente um grupo amino primrio ( NH 2 ),
um grupo carboxlico ( COOH), um tomo de hidrognio e uma
cadeia lateral (R) diferente para cada aminocido (Figura 2.1).
Existem duas excees, a prolina e hidroxiprolina, que so iminocidos.

29

30

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

H
H3N

COO

R
Figura 2.1
Estrutura de um -aminocido
na forma de on dipolar
(zwitterions).

Os aminocidos com um nico grupo amino e um nico grupo


carboxila, ocorrem em pH neutro na forma de ons dipolares
(zwitterions) eletricamente neutros. O grupo amino est
protonado (on amnio, NH 3+ ) e o grupo carboxlico est
dissociado (on carboxilato, COO ).
Os aminocidos apresentam as seguintes propriedades gerais:

Com exceo da glicina, todos os aminocidos so opticamente


ativos desviam o plano da luz polarizada pois o tomo de
carbono de tais molculas um centro quiral. So tomos de
carbono ligados a quatro substituintes diferentes arranjados numa
configurao tetradrica e assimtrica. Os aminocidos com
tomos quirais podem existir como estereoismeros molculas
que diferem somente no arranjo espacial dos tomos.

Os aminocidos que constituem as protenas tm a


configurao estereoqumica L . Por conveno, na forma L , o
grupo NH 3+ est projetado para a esquerda, enquanto na forma
D , est direcionado para a direita. Os D -aminocidos so
encontrados em alguns antibiticos: valinomicina e actinomicina
D ; e em paredes de algumas bactrias: peptidoglicano. A
designao L ou D de um aminocido no indica a sua capacidade
para desviar o plano da luz polarizada.

A cadeia lateral (R) determina as propriedades de cada


aminocido.

Os -aminocidos so classificados em classes, com base na


natureza das cadeias laterais (grupo R). Os 20 tipos de cadeias
laterais dos aminocidos variam em tamanho, forma, carga,
capacidade de formao de pontes de hidrognio, caractersticas
hidrofbicas e reatividade qumica. Os 20 aminocidos-padro so
classificados pelos seus grupos R (cadeias laterais):
Aminocidos com cadeias laterais no-polares e alifticas
H
H3N

H
COO

H3N

COO

CH3

COO

CH CH3
CH3

Alanina

Glicina

H3N

Valina

H
H3N

COO

H3N

CH2

CH CH3

CH CH3

CH2

CH3

CH3

Leucina

COO

COO

Isoleucina

+
H2N
Prolina

2 Aminocidos e protenas

Aminocidos com cadeias laterais aromticas

H3N

H3N

CH COO

CH COO

H3N

CH COO

CH2

CH2

CH2

HN

OH
Tirosina

Fenilalanina

Triptofano

Aminocidos com cadeias laterais polares no-carregadas


H3N

CH COO

H3N

CH COO

CH2

CH OH

CH2

OH

CH3

SH

Serina
H3N

H3N

CH COO

Cistena

Treonina

CH COO

H3N

H3N

CH COO

CH COO

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

OH

CH3

C
OH

Asparagina

Metionina

Aminocidos
(cidos)
H3N

Glutamina

com

cadeias

CH COO

laterais

carregadas

H3N

CH COO

CH2

CH2

COO

CH2

Aspartato

COO
Glutamato

negativamente

31

32

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Aminocidos
(bsicos)
H3N

com

cadeias

H3N

CH COO

laterais

CH COO

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

NH

CH2

carregadas

H3N

NH2

CH COO
CH2

N
NH
Histidina

NH3

NH2

positivamente

Lisina

Arginina

A. Aminocidos incomuns em protenas


Vrias protenas contm aminocidos incomuns formados por
modificao de resduos de aminocidos existentes na cadeia
polipeptdica aps a sua sntese. Entre eles est o cido
carboxiglutmico, um aminocido ligado ao clcio e encontrado na
protrombina, uma protena da cascata de coagulao sangnea. A
hidroxiprolina e a hidroxilisina produtos de hidroxilao da prolina e
lisina, respectivamente, so importantes componentes estruturais do
colgeno (ver adiante). A fosforilao dos aminocidos contendo
grupos hidroxila, tais como a serina, a treonina e a tirosina
empregada para regular a atividade das protenas.
NH2
CH2
CHOH
CH2
CH2

OH
H2C

CH COOH

CHNH2
COOH

CH2

HC

Hidroxiprolina

Hidroxilisina

B. Aminocidos biologicamente ativos


Alm da funo primria como componentes das protenas, os
aminocidos tm vrios outros papis biolgicos.

Vrios -aminocidos ou seus derivados atuam como


mensageiros qumicos entre as clulas. Por exemplo, glicina,
cido aminobutrico (GABA, um derivado do glutamato),
serotonina e melatonina (derivados do triptofano) so
neurotransmissores, substncias liberadas de uma clula nervosa
e que influenciam outras clulas vizinhas (nervosas ou
musculares). A tiroxina (um derivado da tirosina produzida pela
glndula tireide) e cido indolactico (um derivado do
triptofano e encontrado nas plantas) so exemplos de hormnios.

2 Aminocidos e protenas

Os aminocidos so precursores de vrias molculas complexas


contendo nitrognio. Exemplos incluem as bases nitrogenadas
componentes dos nucleotdeos e cidos nuclicos, o heme (grupo
orgnico contendo ferro) e clorofila (pigmento de importncia
crtica na fotossntese).

Vrios aminocidos-padro e aminocidos no padro atuam


como intermedirios metablicos. Por exemplo, arginina,
citrulina e ornitina so aminocidos no padro componentes do
ciclo da uria (Captulo 10). A sntese da uria uma molcula
formada no fgado o principal mecanismo de excreo do
excesso de nitrognio proveniente do catabolismo dos
aminocidos.

C. Titulao dos aminocidos


Como os -aminocidos possuem grupos ionizveis na molcula,
a forma inica predominante dessas molculas em soluo depende
do pH. A titulao dos aminocidos ilustra o efeito do pH sobre sua
estrutura. A titulao tambm til para determinar a reatividade das
cadeias laterais dos aminocidos.
As cadeias laterais R diferenciam um aminocido de outro. O
significado funcional da cadeia lateral enfatizado nas protenas
onde o grupo carboxlico e o grupo amino formam ligaes
peptdicas e, portanto, no exercem suas propriedades cidobsicas.
Quando o grupo R neutro, a sua composio tem pequeno efeito
sobre as propriedades de dissociao dos grupos carboxlicos e
grupos aminos do carbono . Os aminocidos com cadeias laterais
ionizveis apresentam trs grupos cidobsicos. Na Tabela 2.1 esto
relacionados os valores de pK e pI dos grupos amino,
carboxlico alm de grupos ionizveis das cadeias laterais dos
aminocidos.

33

34

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.


Tabela 2.1 Valores de pK e pI para os aminocidos.
Abreviaes
Aminocido
Alanina
Arginina
cido asprtico
Asparagina
cido glutmico
Glutamina
Cistena
Cistina
Fenilalanina
Glicina
Histidina
Hidroxilisina
Hidroxiprolina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Prolina
Serina
Tirosina
Treonina
Triptofano
Valina

pK

Comum

Letra

COOH

NH 3

Outro (R)

pI

Ala
Arg
Asp
Asn
Glu
Gln
Cys
-

A
R
D
N
E
Q
C
-

2,34
2,17
2,09
2,02
2,19
2,17
1,96
1,65; 2,26

12,48 (guanidino)
3,86 (carboxil)
4,25 (carboxil)
8,18 (sulfidril)
-

6,02
10,76
2,97
5,41
3,22
5,65
5,07
5,06

Phe
Gly
His
Hyl
Hyp
Ile
Leu
Lys
Met
Pro
Ser
Tyr
Thr
Trp
Val

F
G
H
I
L
K
M
P
S
Y
T
W
V

1,83
2,34
1,82
2,13
1,92
2,36
2,36
2,18
2,28
1,99
2,21
2,20
2,63
2,38
2,32

9,69
9,04
9,82
8,80
9,67
9,13
10,28
7,85;
9,85
9,13
9,60
9,17
8,62
9,73
9,68
9,60
8,95
9,21
10,.60
9,15
9,11
10,43
9,39
9,62

6,0 (imidazol)
9,67 (-amino)
10,53 (-amino)
10,07 (fenol)
-

5,48
5,97
7,59
9,15
5,83
6,02
5,98
9,74
5,75
6,30
5,68
5,66
6,53
5,66
5,.97

Ao considerar a alanina em soluo fortemente cida (pH 0), temse os grupos cido e bsico da molcula totalmente protonados. Com
a adio de uma base forte tal como NaOH, ocorre inicialmente a
perda de prton do grupo COOH e, posteriormente, a perda do
prton do grupo NH 3+ .
CH3
HC

+
NH3

COOH

CH3
HC

CH3

+
NH3

COO

HC NH2
COO

A curva de titulao da alanina mostrada na Figura 2.2.

2 Aminocidos e protenas

11
10

pH = 9,69 = pK2

7
6

pH

pI = 6

4
4

3
4

pH = 2,34 = pK1

Quantidade de base (equivalentes)


Figura 2.2
Curva de titulao da alanina

O valor de pH no qual o aminocido fica eletricamente neutro


(igual nmero de cargas positivas e negativas) corresponde ao ponto
isoeltrico (pI). O valor do pI uma constante de um composto em
particular em condies especficas de fora inica e temperatura.
Para o aminocido monoamino e monocarboxlico, o ponto isoeltrico
calculado:
pI =

pK 1 + pK 2
2

em que K so as constantes de dissociao dos grupos cido e bsico.


Para a alanina tem-se:
pI =

2 ,34 + 9 ,69
= 6 ,02
2

Um exemplo mais complexo da relao entre a carga eltrica da


molcula e o pH, a titulao dos aminocidos monoamino e
dicarboxlicos cujos representantes so o cido glutmico e o cido
asprtico. Os dois aminocidos possuem em suas cadeias laterais um
segundo grupo carboxlico. Para o cido asprtico tem-se:
COOH
CH2
CHNH3
COOH

COOH
+

CH2
CHNH3
COO

COO
+

CH2
CHNH3
COO

COO
+

CH2
CHNH2
COO

A curva de titulao do cido asprtico mostrada na Figura 2.3.

35

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

11
10

pH = 9,82 = pK3

7
6
4

pH

36

4
4

pH = 3,86 = p K2

3
4

pI = 2,97
pH = 2,09 = pK1

2
4

Quantidade de base (equivalentes)


Figura 2.3
Curva de titulao do cido asprtico

Para o cido asprtico o pK do COOH 2,09, o pK do grupo


COOH 3,86 e o pK do NH 3+ 9,82. O ponto isoeltrico (pI)
calculado pela frmula:
2 ,09 + 3,86
= 2 ,97
2

pI =

A lisina um exemplo de aminocido com dois grupos bsicos na


molcula. O grupo NH 2 da molcula confere basicidade.
+

NH3

NH3

NH3

NH2

(CH2 )4

(CH2 )4

(CH2 )4

(CH2 )4

CHNH3
COOH

CHNH3
COO

CHNH2

CHNH2

COO

COO

No caso da lisina o pK do COOH 2,18 o pK da NH 3+ e o


pK do NH 3+ 10,53. O ponto isoeltrico calculado:
pI =

8,95 + 10,53
= 9 ,74
2

A curva de titulao da lisina mostrada na Figura 2.4.

2 Aminocidos e protenas

pH = 10,53 = pK3

11
10
4

pI =9,74
pH = 8,95 = pK2

7
6

pH

4
4

3
4

2
4

pH = 2,18 = pK1

Quantidade de base (equivalentes)


Figura 2.4
Curva de titulao da lisina

Tabela 2.2. Grupos ionizveis de aminocidos


Onde o grupo
encontrado

Forma cida

Forma bsica
+

Resduo NH 2 -terminal

R NH3

Amnio

R COOH

Resduo COOH-terminal

Arginina

NH

NH

SH

H2

Tiolato
N

CH
+

NH

CH

CH

CH

Imidazol

CH
C

C
CH

CH

Fenol

CH
OH

Imidazlio
CH

N
R

NH

Guanidino

Tiol

Tirosina

C
NH2

Histidina

Carboxilato

Guanidnio
R

R COO

NH2

Cistena

Amina

cido carboxlico
+
NH2

R NH2

CH
C

C
CH

CH

Fenolato

37

38

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

2.3 Reaes dos aminocidos


Os aminocidos com seus grupos carboxlicos, grupos amino
primrios e os grupos presentes nas cadeias laterais podem sofrer
diferentes reaes qumicas. Duas reaes ligao peptdica e a
oxidao da cistena (formao de pontes dissulfeto) so de
especial interesse por afetar a estrutura das protenas.

1. Formao de ligao peptdica. Os polipeptdeos so


polmeros lineares compostos de aminocidos ligados covalentemente
entre si por ligaes amida do grupo COOH de um aminocido
com o grupo NH 2 de outro, com a remoo da gua (reao de
condensao) para formar ligaes peptdicas.
H O
H2N C

H O

H O

C OH

H2N

R1

H2N

C OH

H O

C N C

C OH

H R2

R1

R2

Aps incorporao a peptdeos, os aminocidos individuais so


denominados resduos de aminocidos.
A estrutura que contm dois resduos de aminocidos chamada
dipeptdeo; com trs aminocidos tripeptdeo, etc. Quando um grande
nmero de aminocidos esto unidos dessa forma, o produto
denominado polipeptdeo. As protenas podem conter centenas ou
milhares de resduos de aminocidos.
Os polipeptdeos so geralmente representados com o grupo
amino livre chamado aminoterminal ou N terminal esquerda e o
grupo carboxlico livre denominado carbxi terminal ou C terminal
direita.
R1
N-terminal

H3 N

R2

CH C

N CH

H
Residuo 2

Residuo 1

R3

CH

H
Residuo 3

R4
N

CH C

C-terminal

H
Residuo 4

A nomenclatura dos peptdeos pequenos dada pela seqncia


dos nomes de resduos de aminocidos que os formam e inicia a
partir da esquerda com o resduo que possui o grupo amino terminal
livre, substituindo se o sufixo ina pelo sufixo il. Assim, so
relacionados todos os aminocidos que formam o polipeptdeo, com
exceo do que contm o grupo carboxila livre que permanece com o
nome original. Exemplo:
H O H H O H
H2N C

C N C

CH2

HC

C
HC

CH

HC

C N CHCOOH
CH3

CH3

CHOH
CH3

CH
CH

Tirosilvaliltreonina

As principais caractersticas das ligaes peptdicas so:

2 Aminocidos e protenas

Os seis tomos que formam a ligao CCONHC, esto no


mesmo plano (C o carbono alfa de aminocidos adjacentes).

O C=O e NH da ligao so trans um em relao ao outro.

A ligao CN apresenta algumas caractersticas de dupla ligao


parcial no podendo girar livremente.

A livre rotao possvel para as ligaes carbonocarbono e


nitrogniocarbono (nocarbonila), permitindo variaes na
conformao.

2. Oxidao da cistena. O grupo sulfidrlico da cistena


reversivelmente oxidado. A oxidao de duas molculas de cistena
produz a cistina uma molcula que contm uma ponte dissulfeto. A
sntese da cistina realizada aps a incorporao da cistena s
protenas e exerce importante papel na estabilizao da conformao
protica. A ligao covalente pode ocorrer entre cistenas de uma
nica cadeia polipeptdica formando um anel ou entre cadeias
separadas para formar pontes intermoleculares.

SH

CH2

CH2

CH2

CHNH2

CHNH2

CHNH2

COOH

COOH

COOH

Cistena

Cistina

2.4 Peptdeos
Apesar de apresentarem estruturas menos complexas que as
molculas de protenas, os peptdeos exercem atividades biolgicas
significantes.
O tripeptdeo glutationa (GSH, L glutamil- L cisteinilglicina)
contm uma ligao incomum amida ( o grupo carboxlico e no
o grupo carboxlico do cido glutmico que participa da ligao
peptdica). Encontrada em quase todos os organismos, a glutationa
est envolvida em diferentes processos, tais como, sntese de
protenas e DNA, transporte de aminocidos e metabolismo de
frmacos e substncias txicas. A glutationa tambm atua como
agente redutor e protege as clulas dos efeitos destrutivos da
oxidao por reao com substncias como o perxido (R O O R),
que so metablitos reativos do O 2 . Nos eritrcitos, o perxido de
hidrognio (H 2 O 2 ) oxida o ferro da hemoglobina para a forma frrica
(Fe 3+ ). A metaemoglobina, o produto da reao, incapaz de ligar o
O 2 . A glutationa protege contra a formao de metaemoglobina pela
em
reao
catalisada
pela
enzima
reduo
do
H2O2
glutationaperoxidase. No produto oxidado GSSG duas molculas de
GSH esto unidas por uma ponte dissulfeto entre seus grupos
sulfidrla.
2 GSH + H 2 O 2 GSSG + H 2 O
A enzima glutamil-transpeptidase participa do metabolismo da
glutationa e empregada como marcador para algumas hepatopatias,
como carcinoma hepatocelular e hepatopatias por alcoolismo.

39

40

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Quadro 2.1 Cromatografia de troca inica

A cromatografia de troca inica utiliza colunas


cromatogrficas que separam as molculas com
base na sua carga lquida. So usados compostos
com
grupamentos
funcionais
positiva
ou
negativamente carregados, tais como, dietilaminoetil
ou carboximetila, covalentemente ligados a uma
matriz slida porosa (ex.: resinas base de acrlico,
agarose, slica ou estireno divinilbenzeno) para
formar trocadores de ctions ou nions.

Quando uma soluo contendo protenas com


cargas positivas e negativas aplicada coluna
contendo um trocador de cargas de sinal contrrio,
as molculas carregadas ligam-se por meio de
interaes inicas a trocadores de ctions e nions.
Molculas neutras ou carregadas com as mesmas
cargas, movem-se atravs da coluna sem serem
captadas. A separao das molculas carregadas
usualmente realizada em soluo-tampo com
concentraes de ons salinos e pH apropriados
(determinam os estados de ionizao da molcula)
que progressivamente, vo enfraquecendo as
ligaes inicas.

Alguns peptdeos atuam como molculas de sinalizao usadas


para coordenar o imenso nmero de processos bioqumicos em
organismos multicelulares. Os exemplos incluem o apetite, presso
sangnea e a percepo da dor. O papel de alguns desses peptdeos
so descritos brevemente.
Os estudos de regulao da ingesto de alimentos e do peso
corporal tem revelado vrias molculas de sinalizao no crebro.
Entre elas, esto os peptdeos estimulantes do apetite como o
neuropeptdeo Y (NPY) e a galanina, e peptdeos inibidores do
apetite como colecistocinina e hormnio estimulador melancito
( MSH). Evidncias recentes sugerem que a leptina, um
polipeptdeo produzido primariamente pelos adipcitos, exerce seus
efeitos sobre o peso corporal e atua sobre o neuropeptdeo Y, a
galanina e vrias outras molculas sinalizadoras para reduzir a
ingesto de alimentos e aumentar o gasto calrico.
A presso sangnea a fora exercida pelo sangue contra as
paredes dos vasos influenciada pelo volume sangneo e pela
viscosidade. Dois peptdeos afetam o volume sangneo: a
vasopressina e o fator natriurtico atrial. A vasopressina, tambm
chamada hormnio antidiurtico (ADH), sintetizada no hipotlamo
e contm nove resduos de aminocidos. O ADH estimula os rins a
reter gua. A estrutura do ADH bastante similar a outro peptdeo
produzido pelo hipotlamo chamado oxitocina, uma molcula de
sinalizao que estimula a liberao do leite pelas glndulas
mamrias e influencia o comportamento sexual, maternal e social. A
oxitocina produzida no tero estimula a contrao uterina durante o
parto. O fator natriurtico atrial (FNA) um peptdeo produzido por
clulas atriais cardacas em resposta a distenso estimula a
formao de urina diluda, um efeito oposto ao da vasopressina. O
FNA exerce seus efeitos, em parte, pelo aumento da excreo de Na +
pela urina, um processo que causa o aumento da excreo da gua e a
inibio da secreo de renina pelo rim.

2 Aminocidos e protenas

+H3N Cys Tyr Phe Glu Asp Cys Pro Arg Gly C
1

NH2

8-Arginina vasopressina (Hormnio antidiurtico)

A met encefalina e a leu encefalina pertencem a um grupo de


encontrados
peptdeos
chamados
peptdeos opiceos,
predominantemente nas clulas do tecido nervoso. Os peptdeos
opiceos so molculas que atenuam a dor e produzem sensaes
agradveis. Os pentapeptdeos leu encefalina e met encefalina
diferem entre si somente pelos resduos de aminocidos dos
Cterminais. A substncia P e a bradiquinina estimulam a percepo
de dor e apresentam efeitos opostos aos peptdeos opiceos.
Um importante dipeptdeo comercial sinttico o adoante
artificial aspartame (ster metlico de L aspartil L fenilalanina).

2.5 Protenas
As protenas so componentes essenciais matria viva. Atuam
como catalizadores (enzimas), transportadores (oxignio, vitaminas,
frmacos, lipdeos, ferro, cobre, etc.), armazenamento (casena do
leite), proteo imune (anticorpos), reguladores (insulina, glucagon),
movimento (actina e miosina), estruturais (colgeno), transmisso
dos impulsos nervosos (neurotransmissores) e o controle do
crescimento e diferenciao celular (fatores de crescimento)
Alm das resumidas acima, citam-se algumas funes de grande
importncia fisiolgica das protenas: manuteno da distribuio de
gua entre o compartimento intersticial e o sistema vascular do
organismo; participao da homeostase e coagulao sangnea;
nutrio de tecidos; formao de tampes para a manuteno do pH,
etc.
Baseado na sua composio, as protenas so divididas em
simples, que consistem somente de cadeias polipeptdicas, e
conjugadas que, alm das cadeias polipeptdicas tambm possuem
componentes orgnicos e inorgnicos. A poro no-peptdica das
protenas conjugadas denominada grupo prosttico. As mais
importantes protenas conjugadas so: nucleoprotenas, lipoprotenas,
fosfoprotenas, metaloprotenas, glicoprotenas, hemoprotenas e
flavoprotenas.
As protenas variam amplamente em suas massas moleculares.
Algumas atingem valores acima de um milho de daltons. O limite
mnimo mais difcil de definir mas, em geral, considera-se que uma
protena quando existir pelo menos 40 resduos de aminocidos. Isso
representa o ponto de demarcao no tamanho entre um polipeptdeo
e uma protena, entretanto deve-se enfatizar que essa uma definio
de convenincia, pois no existem diferenas marcantes nas
propriedades dos polipeptdeos grandes e protenas pequenas.
As propriedades fundamentais das protenas permitem que elas
participem de ampla variedade de funes:

As protenas so polmeros constitudos


monomricas chamadas aminocidos.

por

unidades

41

42

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Quadro 2.2 Cromatografia de filtrao em gel

A cromatografia de filtrao em gel separa as


molculas de acordo com seu tamanho e forma.
Utiliza esferas porosas de um polmero insolvel mas
muito hidratado, como a agarose, dextrana ou
poliacrilamida. As esferas so contm poros de
diferentes tamanhos. A separao acontece quando
as molculas de diferentes tamanhos so passadas
atravs da coluna contendo as esferas porosas. As
molculas pequenas se distribuem dentro dos poros,
enquanto as molculas grandes no entram nos
poros e passam rapidamente atravs da coluna.

Assim,
molculas
de
diferentes
massas
moleculares podem ser separadas quando passam
pela coluna (peneira molecular). A resoluo
depende do tamanho da partcula, tamanho do poro,
velocidade do fluxo, comprimento e dimetro da
coluna e o volume da amostra.
A tcnica aplicada no fracionamento de
protenas e polissacardeos, determinao da massa
molecular de protenas e a purificao de cidos
nuclicos.

As protenas contm vrios grupos funcionais.

As protenas podem interagir entre si ou com


macromolculas para formar associaes complexas.

outras

Algumas protenas so bastante


apresentam flexibilidade limitada.

outras

rgidas,

enquanto

2.6 Estrutura das protenas


A estrutura das protenas extraordinariamente complexa e seu
estudo requer o conhecimento dos vrios nveis de organizao. A
distino dos nveis de organizao realizada em termos de natureza
das interaes necessrias para a sua manuteno. Destingem-se
quatro nveis de organizao existentes nas protenas. Os conceitos a
seguir destinam-se fundamentalmente a melhor compreenso das
estruturas proticas, pois existem casos de sobreposio entre os
diferentes nveis de organizao. As quatro estruturas so:

1. Primria: nmero, espcie e a seqncia dos aminocidos


unidos por ligaes peptdicas e pontes dissulfeto. especificada por
informao gentica.
2. Secundria: arranjos regulares e recorrentes da cadeia
polipeptdica (hlice e folha pregueada).
3. Terciria: pregueamento no peridico da cadeia
polipeptdica, formando uma estrutura tridimensional estvel.
4. Quaternria: arranjo espacial de duas ou mais cadeias
polipeptdicas (ou subunidades proticas) com a formao de
complexos tridimensionais.
A. Estrutura primria
Cada cadeia polipeptdica tem uma seqncia especfica de
aminocidos determinada por informao gentica. A estrutura
primria descreve o nmero de aminocidos, a espcie, a seqncia
(ordem) e a localizao das pontes dissulfeto (cistina) de uma cadeia
polipeptdica. A estrutura estabilizada pelas ligaes peptdicas e
pontes dissulfeto. Polipeptdeos com funes e seqncias de
aminocidos similares so denominados homlogos.

2 Aminocidos e protenas

O conhecimento das seqncias de aminocidos em protenas


importante por vrias razes:

Compreender como as protenas realizam suas aes moleculares.

Compreender os efeitos das mutaes resultantes da substituio


ou delees de um ou mais aminocidos nas protenas.

Verificar como protenas similares em diferentes organismos


podem contribuir com informaes acerca das vias evolutivas.

Comparar seqncias especficas de protenas com funes


similares em espcies diferentes.

Identificar a presena de repeties de seqncias em diferentes


protenas para agrup-las em famlias.

Estudar da constituio de protenas desconhecidas.

Atualmente so conhecidas as estruturas primrias de numerosas


protenas. A primeira a ser determinada foi a insulina (Sanger, 1953)
que possui duas cadeias polipeptdicas: cadeia A (21 aminocidos) e
B (30 aminocidos) que esto unidas entre si por duas pontes
dissulfeto (CysSSCys):

A Gly

B Phe

Cys Cys

Cys

Cys Asn

Cys

Cys Ala

B. Estrutura secundria
As protenas apresentam arranjos tridimensionais com
dobramentos regulares denominados estruturas secundrias das
protenas. Esta estrutura estabilizada por pontes de hidrognio entre
o oxignio carbonil de uma ligao peptdica e o hidrognio amida de
uma outra ligao peptdica prxima ( NHO=C ) . A presena de
numerosas pontes de hidrognio entre as ligaes peptdicas tem
grande significado na estabilizao da estrutura secundria. Existem
dois tipos de estruturas secundrias: hlice e folha pregueada.

Hlice
Na estrutura -hlice, a molcula polipeptdica se apresenta
como uma hlice orientada para a direita como se estivesse em torno
de um cilindro, mantida por pontes de hidrognio arranjadas entre os
grupos C=O e o H N das ligaes peptdicas. Cada volta da hlice
corresponde a 3,6 resduos de aminocidos (Figura 2.5). A distncia
que a hlice aumenta ao longo do eixo por volta de 54 nm. As
cadeias laterais R dos aminocidos projetam-se para fora da hlice.

43

44

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Quadro 2.3 Resina trocadora de ons

Diferentes trocadores de ons esto disponveis


para suprir necessidades especficas. A seleo do
trocador
de
on
apropriado
depende
das
propriedades das molculas de interesse. Com
molculas anfotricas, a estratgia de separao
est baseada no pI e na estabilidade da molcula em
diferentes valores de pH. Em pHs maiores que o pI,
a molcula estar negativamente carregada; em pHs
abaixo do pI estar positivamente carregada.
Assim, se a molcula estvel acima de seu
valor de pI, um trocador de nion usado ou, ao
contrrio, se estvel abaixo do seu valor de pI, um
trocador de ction empregado.

A cromatografia de troca inica usada em


vrias separaes e purificaes de molculas
biolgicas, ex.: protenas, peptdeos, aminocidos,
nucleotdeos e isoenzimas. tambm utilizada na
deionizao da gua ou em solues de substncias
no-inicas e na ultra-purificao de tampes,
reagentes inicos etc.

A presena dos aminocidos prolina e hidroxiprolina, cujas


estruturas cclicas relativamente rgidas no se encaixam hlice,
foram a cadeia a dobrar-se rompendo a estrutura secundria regular.
Esses dois aminocidos, tambm como a glicina, favorecem a
formao de conformao folha pregueada (ver adiante).
Seqncias polipeptdicas com grande nmero de aminocidos com
carga (ex.: cido asprtico, cido glutmico) e grupos R volumosos
(ex.: triptofano) so incompatveis com a estrutura helicoidal pelos
efeitos provocados por suas cadeias laterais.

N
C

C
N

C
N
C
C

N
C
N

C
N
C
0,54 nm de passo
(3,6 resduos)

C
C

N
C C

0,15 nm

Figura 2.6
Estrutura helicoidal de um segmento polipeptdeo mostrando os locais das
pontes de hidrognio intracadeia (C=O---H N).

2 Aminocidos e protenas

45

Quadro 2.4 Cromatografia de afinidade

A cromatografia de afinidade envolve a


propriedade de algumas protenas de se ligarem por
interaes no-covalentes. Um ligante se liga
covalentemente a uma matriz inerte, exemplo,
agarose (uma matriz de resina slida) que
colocada em uma coluna. Uma mistura de
biomolculas passada atravs da coluna.

As substncias sem afinidade pelo ligante


passam pela coluna e so lavadas por um tampo. A
protena desejada liga-se ao ligante de forma
especfica de modo no-covalente. A protena ligada
pode ser eluda por soluo de ligantes livres ou
aplicando solventes orgnicos ou, ainda, por
solues de pH ou fora inica diferente.

Folha pregueada
A estrutura de folha pregueada resulta da formao de pontes
de hidrognio entre duas ou mais cadeias polipeptdicas adjacentes.
As pontes de hidrognio ocorrem entre os grupos C=O e NH de
ligaes peptdicas pertencentes a cadeias polipeptdicas vizinhas em
vez de no interior da cadeia (Figura 2.7). Cada segmento
polipeptdico individual denominado folha . Diferentemente da
hlice compacta, as cadeias polipeptdicas da folha esto quase
inteiramente estendidas.
Os segmentos polipeptdicos na folha pregueada so alinhados
no sentido paralelo ou antiparalelo em relao s cadeias vizinhas:

Estrutura folhas paralelas formada por cadeias polipeptdicas


com os Nterminais alinhados na mesma direo.

Estrutura folhas antiparalelas, os Nterminais de cada cadeia


polipeptdica esto alinhados em direes opostas.

Ocasionalmente, misturas de cadeias paralelas e antiparalelas so


observadas.

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MOTTA

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N
C

O
N

O
N

C
N

C
N
C

Paralela

N
C

C
H

C
C

N
C

C
C

C
C

C
C

C
H

C
C

C
C

C
C

C
C

C
C

H
C

C
H

C
N

C
C

O
N

C
C

C
C

O
N

N
C

C
H

N
C

N
Anti-paralela

C
C

Figura 2.7
Estrutura de folha pregueada entre cadeias polipeptdicas.

A representao esquemtica das ligaes intermoleculares e das


cadeias paralelas dispostas em estrutura de folha pregueada so
mostradas na Figura 2.7. Nessas estruturas as cadeias laterais (R) so
projetadas para cima e para baixo aos planos formados pelas pontes
de hidrognio entre as cadeias polipeptdicas.

Estrutura secundria irregular


As hlices e as folhas pregueadas so classificadas como
estruturas secundrias regulares, pois seus componentes exibem
conformaes estruturais peridicas. Dependendo da natureza das
cadeias laterais dos aminocidos presentes, as hlices e as folhas
pregueadas podem se apresentar levemente distorcidas em sua
conformao especfica.
Muitas protenas apresentam combinaes de estruturas hlice
e de estruturas folha pregueada em propores variadas. As
combinaes produzem vrios arranjos denominados de estruturas
supersecundrias ou motivos cujas variaes so:

Motivo , em que duas folhas pregueadas paralelas esto


conectadas a uma hlice.

Motivo meandro, onde duas folhas pregueadas antiparalelas


esto conectadas por aminocidos polares e glicina que efetuam
uma mudana brusca de direo da cadeia polipeptdica.

Motivo , onde duas hlices antiparalelas consecutivas esto


separadas por uma ala ou segmento no-helicoidal.

Barris , so formados quando vrias folhas pregueadas


enrolam-se sobre si mesmas.

2 Aminocidos e protenas

(a) Unidade

(b) Grampo

(d) Chave grega

(c)

(e)

Meandro

Sanduche

Figura 2.8
Algumas estruturas supersecundrias (motivos-protena). As setas
indicam as direes das cadeias polipeptdicas. (a) Motivo , (b)
motivo grampo, (c) motivo meandro, (d) motivo chave grega e (e)
sanduche.

As estruturas secundrias e supersecundrias de grandes


protenas, geralmente, so organizadas como domnios regies
compactas semiindependentes ligadas entre si por uma cadeia
polipeptdica.

C. Estrutura terciria
A estrutura terciria descreve a conformao especfica da cadeia
polipeptdica secundria que resulta numa estrutura mais compacta
onde os tomos ocupam posies especficas. O dobramento protico
um processo no qual uma molcula no organizada, nascente
(recentemente sintetizada) adquire uma estrutura altamente
organizada como conseqncia de interaes entre as cadeias laterais
presentes na sua estrutura primria. A estrutura terciria apresenta
vrias caractersticas importantes:

Muitos polipeptdeos dobram de modo que os resduos de


aminocidos que esto distantes um do outro na estrutura
primria podem estar prximos na estrutura terciria.

Devido ao empacotamento eficiente pelo dobramento da cadeia


polipeptdica, as protenas globulares so compactas. Durante o
processo, a maioria das molculas de gua so excludas do
interior da protena tornando possvel interaes entre grupos
polares e nopolares.

Algumas cadeias polipeptdicas dobram-se em duas ou mais


regies compactas conectadas por um segmento flexvel de cadeia
polipeptdica. Essas unidades globulares compactas, chamadas
domnios, so formadas por 30 a 400 resduos de aminocidos.
Dominios so segmentos estruturalmente independentes que tm

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48

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

funes especficas. Por exemplo, o receptor protico CD4, que


permite a ligao do vrus da imunodeficincia humana (HIV)
com a clula do hospedeiro, formado por quatro domnios
similares de aproximadamente 100 aminocidos cada. As
pequenas protenas possuem, geralmente, apenas um domnio.
A estrutura terciria tridimensional das protenas estabilizada
por interaes entre as cadeias laterais:

1. Interaes hidrofbicas. So as foras no-covalentes mais


importantes para a estabilidade da estrutura enovelada. As interaes
so resultantes da tendncia das cadeias laterais hidrofbicas
presentes na alanina, isoleucina, leucina, fenilalanina e valina de
serem atradas umas pelas outras para agruparem-se em reas
especficas e definidas para minimizar seus contatos com a gua.
Quando circundados por molculas de gua, os grupos hidrofbicos
so induzidos a juntarem-se para ocupar o menor volume possvel.
Assim, as molculas de gua altamente ordenadas so liberadas do
interior, aumentando a desordem do sistema (entropia). O aumento da
entropia termodinamicamente favorvel e dirige o dobramento
protico.
2 Interaes eletrostticas (ligaes inicas). Grupos
carregados positivamente como os grupos -amino, ( NH 3+ ), nas
cadeias laterais de resduos de lisina podem interagir com grupos
carregados negativamente, como o grupo carboxila (COO ) do cido
glutmico ou cido asprtico. Cerca de dois teros dos resduos de
aminocidos com cargas nas protenas formam pares inicos (ou
pontes salinas: associao de dois grupos inicos de cargas opostas).
3. Ligaes covalentes. O nico tipo de ligao covalente
presente na manuteno da estrutura terciria a ponte dissulfeto
formada de dois grupos sulfidrila de cadeias laterais de duas cistenas
(CysSSCys) para produzir uma cistina. As pontes dissulfeto
separadas uma da outra na estrutura primria (intracadeia) ou entre
duas cadeias polipeptdicas (intercadeias) formam-se medida que a
protena se dobra para adquirir a sua conformao nativa. No meio
extracelular, essas ligaes protegem parcialmente a estrutura das
protenas de modificaes adversas de pH e das concentraes de
sais. As protenas intracelulares raramente contm pontes dissulfeto
devido s altas concentraes citoplasmticas de agentes redutores.
4. Pontes de hidrognio. Grande nmero de pontes hidrognio
so formadas no interior e na superfcie das protenas (so pontes
diferentes daquelas envolvidas na manuteno de hlice ou folha
pregueada). Alm de formar pontes de hidrognio entre si, os grupos
polares das cadeias laterais dos aminocidos podem interagir com a
gua ou com o esqueleto polipeptdico. As pontes de hidrognio
contribuem moderadamente para direcionar o enovelamento.
5. Foras de van der Waals. uma fora de atrao inespecfica
que ocorre quando dois tomos quaisquer esto prximos. Podem
existir entre unidades de fenilalanina e tirosina prximas umas das
outras ou entre resduos vizinhos de serina. As foras de van der
Waals so tambm proeminentes entre as cadeias laterais envolvidas
nas interaes hidrofbicas. Apesar dessas foras serem
comparativamente fracas (Tabela 2.3), o efeito acumulativo de

2 Aminocidos e protenas

numerosos stios de interao tem substancial influncia para a


estabilidade da estrutura enovelada.
Cys

Ile

Val

Trp

CH

CH2
CH3

CH2

Tyr

Ser

CH2

CH3

CH
S

CH3

CH2

CH3

CH3 CH3

Cys
Ligao
covalente

CH3
Ala

CH2
Phe

Interaes
hidrofbicas

CH2
Leu

CH2

O
H

CH2
C

CH2

C
OH

CH2
Asp

Pontes de
hidrgnio

NH2

H2 N

N O
C

His

CH
CH2

CH2

O
H
N

Glu

NH
(CH2 ) 3
Arg

Ligaes
eletroestticas

Figura 2.9
Ligaes ou interaes que estabilizam a estrutura terciria das protenas.

Os ons metlicos tambm podem formar ligaes cruzadas


internas nas protenas. Exemplo, os domnios contendo ligaes
cruzadas chamadas dedos de zinco so comuns em protenas ligadoras
de DNA. Essas estruturas consistem de 20-60 resduos com um ou
dois ons Zn 2+ . Os ons Zn 2+ so coordenados em um tetraedro pelas
cadeias laterais de Cys e/ou His e, algumas vezes, Asp ou Glu. Os
domnios so muito pequenos para assumir uma estrutura terciria
estvel na ausncia de Zn 2+ . O zinco um on ideal para estabilizar
protenas; ele pode interagir com vrios ligantes (S, N ou O)
provenientes de vrios aminocidos.

D. Estrutura quaternria
Muitas protenas so multimricas, ou seja, so compostas por
por duas ou mais cadeias poliptdicas. As cadeias individuais de
polipeptdeos chamadas protmeros ou subunidades esto
associadas por interaes no covalentes: efeitos hidrofbicos,
pontes de hidrognio e interaes eletrostticas. O arranjo espacial
das subunidades conhecido como estrutura quaternria das
protenas. As protenas multimricas em que algumas ou todas as
subunidades so idnticas, denominam-se oligmeros. Os oligmeros
so compostos de protmeros, que podem consistir de uma ou mais
subunidades. Grande quantidade de protenas oligomricas contm
duas ou quatro subunidades protomricas, e so chamadas de
dimricas ou tetramricas, respectivamente.
Existem vrias razes para a existncia de protenas
multissubunidades:

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MOTTA

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A sntese isolada de subunidades mais eficiente que aumentos


de tamanho da cadeia polipeptdica nica.

Em complexos supramoleculares como as fibrilas do colgeno, a


reposio de pequenos componentes defeituosos um processo
mais eficiente.

As interaes complexas de mltiplas subunidades ajudam a


regular as funes proticas.

Um exemplo de estrutura quaternria a hemoglobina formada


por quatro subunidades, ligadas entre si numa configurao
especfica (oligmero). Cada uma das subunidades caracterizada
por sua prpria estrutura secundria e terciria. As interaes dos
polipeptdeos ocorrem entre os grupos desprotegidos que no
participam do enovelamento da cadeia (estrutura terciria) (ver
Protenas globulares). Por outro lado, a enzima quimotripsina no
possui estrutura quaternria apesar de ser formada por trs cadeias
polipeptdicas, j que essas subunidades esto unidas entre si por
ligaes covalentes.

E. Protenas chaperones
uma famlia de protenas que previnem a agregao de
protenas recm-sintetizadas antes que elas assumam sua forma ativa,
sem alterar o resultado final do processo de enovelamento. As
protenas de choque trmico (hsp, heat shock protein) cuja sntese
aumentada em temperaturas elevadas, um exemplo de chaperones
que se liga a polipeptdeos medida que so sintetizadas nos
ribossomos. Existem duas classes principais de chaperones: a famlia
hsp70, de protenas de peso moleculares 70 kD, e as chaperoninas.

F. Dinmica protica
Apesar da importncia das foras que estabilizam as estruturas,
deve-se reconhecer que as funes das protenas exigem um certo
grau de flexibilidade. O significado da flexibilidade conformacional
(flutuaes contnuas e rpidas na orientao dos tomos na protena)
foi demonstrado nas interaes protenas-ligantes. A funo protica
muitas vezes envolve a rpida abertura e fechamento de cavidades na
superfcie da molcula. A velocidade com que as enzimas catalisam
reaes est limitada em parte pela rapidez com que o produto
liberado do stio ativo. A transferncia de informaes entre
biomolculas acompanhada por modificaes na estrutura
tridimensional. Por exemplo, a conformao das subunidades das
molculas de hemoglobina sofre modificaes estruturais especficas
com a ligao e liberao do oxignio da molcula.

2.7 Desnaturao e renaturao


A desnaturao ocorre pela alterao da conformao
tridimensional nativa das protenas (estrutura secundria, terciria e
quaternria) sem romper as ligaes peptdicas (estrutura primria).
Como a estrutura tridimensional especfica das protenas
fundamental para o exerccio de suas funes, alteraes estruturais

2 Aminocidos e protenas

provocadas pela desnaturao ocasionam a perda parcial ou completa


das suas funes biolgicas.
Muitas vezes, em condies fisiolgicas, as protenas recuperam
a conformao nativa e restauram atividade biolgica quando o
agente desnaturante removido em processo denominado
renaturao.
A desnaturao ocorre nas seguintes condies:

1. cidos e bases fortes. Modificaes no pH resultam em


alteraes no estado inico de cadeias laterais das protenas, que
modificam as pontes de hidrognio e as pontes salinas (associao de
grupos inicos de protenas de carga oposta). Muitas protenas
tornam-se insolveis e precipitam na soluo.
2. Solventes orgnicos. Solventes orgnicos solveis em gua
como o etanol, interferem com as interaes hidrofbicas por sua
interao com os grupos R nopolares e forma pontes de hidrognio
com a gua e grupos proticos polares. Os solventes no-polares
tambm rompem interaes hidrofbicas.
3. Detergentes. As molculas anfipticas interferem com as
interaes hidrofbicas e podem desenrolar as cadeias polipeptdicas.
4. Agentes redutores. Em presena de reagentes como a uria e
mercaptoetanol ocorre a converso das pontes dissulfeto em grupos
sulfidrlicos. A uria rompe pontes de hidrognio e interaes
hidrofbicas.
5. Concentrao de sais. A ligao de ons salinos a grupos
ionizveis das protenas enfraquecem as interaes entre grupos de
cargas opostas da molcula protica. As molculas de gua solvatam
os grupos proticos. Com a adio de grandes quantidades de sal s
protenas em soluo, formam-se precipitados. As molculas de gua
competem pelo sal adicionado tornando a quantidade de solvente
muito pequena e, com isso, promovendo a agregao de molculas
proticas e a sua precipitao. Esse efeito chamado salting out.
6. ons de metais pesados. Metais pesados como o mercrio
(Hg 2+ ) e chumbo (Pb 2+ ) afetam a estrutura protica de vrias formas.
Podem romper as pontes salinas pela formao de ligaes inicas
com grupos carregados negativamente. Os metais pesados tambm se
ligam com grupos sulfidrlicos, um processo que pode resultar em
profundas alteraes das estruturas e funes proticas. Por exemplo,
o chumbo liga-se aos grupos sulfidrlicos de duas enzimas da via
sinttica da hemoglobina causando anemia severa (na anemia o
nmero de eritrcitos ou da concentrao de hemoglobina no sangue
esto abaixo dos valores de referncia).
7. Alteraes na temperatura. Com o aumento da temperatura, a
velocidade de vibrao molecular aumenta. Eventualmente,
interaes fracas como as pontes de hidrognio so rompidas
promovendo alteraes na conformao das protenas.
8. Estresse mecnico. Agitao e triturao rompem o delicado
equilbrio de foras que mantm a estrutura protica. Por exemplo, a
espuma formada quando a clara do ovo batida vigorosamente
contm protena desnaturada.

51

52

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Nativa

Desnaturada

Figura 2.10
Desnaturao de protenas

2.8 Protenas fibrosas


As protenas fibrosas tipicamente contm altas propores de
estruturas secundrias regulares, como hlices ou folha
pregueadas. Compem os materiais estruturais de rgos e tecidos,
dando a eles elasticidade e/ou resistncia. Em geral, so pouco
solveis em gua pela presena de teores elevados de aminocidos
hidrfobos tanto no interior como no exterior das cadeias
polipeptdicas helicoidais reunidas em feixes. So exemplos
caractersticos da relao entre a estrutura protica e a funo
biolgica. As principais protenas fibrosas so: o colgeno, as
queratinas e a fibrona da seda.

A. Colgeno
O colgeno a protena mais abundante em vertebrados sendo
componente essencial do tecido conjuntivo que, numa variedade de
formas geneticamente distintas, se distribui pela matriz ssea, pele,
tendes, cartilagens, crnea, vasos sangneos, dentes e outros
tecidos. sintetizado pelas clulas do tecido conjuntivo e secretada
para o espao extracelular para fazer parte de uma rede complexa de
macromolculas localizadas na matriz extracelular.

2 Aminocidos e protenas

53

Quadro 2.5 Osteogenesis imperfecta

A osteogenesis imperfecta, tambm conhecida


como doena dos ossos quebradios, um grupo de
pelo menos quatro doenas clnica, gentica e
bioquimicamente distintas com prevalncia de
1:10.000. A gravidade da doena varia de moderada
a letal e depende da natureza e da posio da
mutao. Nas formas mais severas, mais de 100
fraturas in tero foram relatadas com o resultante
parto de natimorto.
O defeito fundamental so mutaes nos genes
do procolgeno Tipo I. Na maioria das mutaes
ocorre a substituio de uma nica base no cdon
para a glicina, resultando na distoro da hlice
trplice do colgeno.

A estabilidade da estrutura do colgeno


reduzida pelo rompimento da ponte de hidrognio N
H do esqueleto de cada alanina (normalmente
glicina) ao grupo carbonila da prolina adjacente da
cadeia vizinha.
A posio da aberrao est relacionada com a
gravidade da doena. Mutaes prximas do Cterminal so mais severas que as mais prximas do
N-terminal. Isso porque a formao da hlice trplice
inicia a partir do C-terminal e progride em direo ao
N-terminal. A gravidade da doena tambm esta
relacionada com as propriedades do aminocido que
substitui a glicina.

O colgeno uma protena extracelular pouco solvel em gua e


organizada em fibras de grande resistncia. Cada molcula de
colgeno constituda de trs cadeias polipeptdicas (uma tripla
hlice) enroladas uma em torno da outra e orientadas para a direita
com cerca de 1.000 resduos de aminocidos cada uma.
A estrutura primria das cadeias polipeptdicas do colgeno (com
exceo de 15 a 25 aminocidos nos terminais NH 2 e COOH)
constituda de glicina (~33% do total), de prolina (~10%) e
4 hidroxiprolina (~10%), constituindo tripletes da seqncia repetida
(Gly X Y) n , em que X e Y so freqentemente prolina e
hidroxiprolina. A 5 hidroxilisina e a 3 hidroxiprolina tambm esto
presentes em pequenas quantidades. Alguns resduos de hidroxilisina
do colgeno esto ligados a carboidratos simples por meio de sua
hidroxila formando glicoprotenas. Os componentes carboidratos do
colgeno so necessrios para a fibrilognese, associao de fibras de
colgeno em suas localizaes extracelulares, como os tendes e
ossos.
As trs cadeias polipeptdicas entrelaam-se para formar uma
trplice hlice direita estabilizada por pontes de hidrognio
formadas entre as cadeias polipeptdicas individuais (entre o NH da
glicina de uma cadeia e a C=O da prolina ou de outro aminocido em
outra cadeia) constituindo o mdulo estrutural bsico do colgeno,
chamado tropocolgeno.
A sntese do colgeno ocorre inicialmente no retculo
endoplasmtico, depois no aparelho de Golgi e, finalmente, no espao
extracelular.
A
cadeia
nascente
polipeptdica,
chamada
pr procolgeno, sofre modificao ps transducional fornecendo o
procolgeno. Modificaes ps-translacionais adicionais envolvem a
hidroxilao, a oxidao, a condensao aldlica, reduo e
glicolisao. Pela ao de hidrolases (prolil hidroxilase e
lisil hidroxilase) so adicionados grupos hidroxila aos resduos de
prolina e lisina da cadeia em reaes que requerem cido ascrbico
(vitamina C).
Na deficincia de vitamina C, o tropocolgeno no forma as
ligaes cruzadas covalentes. O resultado o escorbuto, uma doena
nutricional cujos sintomas so: descoloraes da pele, fragilidade dos
vasos sangneos, hemorragia gengival e, em casos extremos, a
morte.

54

MOTTA

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Quadro 2.6 Pron protena

A encefalopatia espongiforme bovina (doena


da vaca louca), scrapie em ovelhas, a sndrome de
CreutzfeldtJacob e a kuru em humanos so
doenas causadas por uma protena conhecida como
pronprotena celular (PrPC). A pronprotena
(agentes infecciosos proteinceos) componente
das clulas cerebrais normais onde se encontra
fundamentalmente na conformao hlice. Em
tecidos doentes, a forma infecciosa da protena pron
apresenta-se como uma mistura de hlice e folhas
pregueadas (PrPSc), produzindo agregados
fibrosos que danificam as clulas cerebrais. As
doenas por prons derivados de PrPSc podem ser
de origem gentica ou infecciosa.

A protena encontrada principalmente na


superfcie externa de neurnios, mas sua funo
ainda desconhecida.
Mutaes nos genes humanos PrPc parecem ser
responsveis
por
doenas
inerentes
da
pronprotena,
por
exemplo,
a
doena
de
GerstmannStrusslerScheinker e insnia familiar
fatal. Mais de 18 diferentes mutaes j foram
identificadas.
O pron foi descoberto pelo Dr. Stanley B.
Prusiner, o qual recebeu o Prmio Nobel de
Fisiologia em 1997.

Figura 2.11
Representao do modelo de colgeno

As ligaes cruzadas covalentes formadas dentro e entre as


hlices do tropocolgeno, aumentam a resistncia tensional dessas
estruturas. As ligaes cruzadas so obtidas a partir da lisina em duas
fases:

Fibras de colgeno

O grupo amino da lisina ou da hidroxilisina oxidado pela


lisil-oxidase para formar alisina um aminocido contendo o
grupo R aldedo.

O grupo aldedo da alisina reage com o grupo -amino de outro


resduo de lisina de um filamento adjacente para produzir uma
ligao cruzada estvel. Alternativamente, dois resduos de
alisina reagem por condensao aldlica para formar outra
ligao cruzada.

A biossntese das cadeias de tropocolgeno e sua associao em


microfibrilas do colgeno ocorre a partir de molculas precursoras
chamadas pr-colgenos que so processadas pela remoo dos
aminoterminais e carboxi-terminal por meio de protelise seletiva.
As trs cadeias polipeptdicas que compem o colgeno so
denominadas cadeias . Essas cadeias combinadas em uma estrutura
em tripla hlice formam os vrios tipos de colgeno presentes nos
tecidos. O colgeno tipo I, o mais abundante (90% do colgeno total),
formado por duas cadeias polipeptdicas 1 e uma cadeia 2 que
formam uma hlice trplice. Alguns tipos de colgeno so mostrados
na Tabela 2.3.

2 Aminocidos e protenas

Tabela 2.3 Alguns tipos de colgeno mais abundantes


Tipo

I
II
III
IV
V

Composio

Distribuio nos tecidos

(1)2 2
(1)3
(1)3
(1)2 2
(1)2 2

Tendes, pele, ossos, crnea, vasos sangneos


Cartilagem, disco intervertebral, humor vtreo
Pele fetal, vasos sangneos, rgos internos
Membrana basal
Pele, placenta, vrios tecidos

B. -Queratinas
As queratinas so protenas constitudas quase exclusivamente
de hlices compostas de trs cadeias polipeptdicas enroladas em
forma de corda helicoidal resistente ao estiramento. So ricas em
resduos de cistena que formam pontes covalentes de dissulfeto que
estabilizam as cadeias polipeptdicas adjacentes. Apresentam tambm
teores importantes de resduos de aminocidos hidrofbicos alanina,
valina, isoleucina, fenilalanina e metionina.
As queratinas formam a protena da pele, cabelo, unhas,
chifres, penas e l. O cabelo constitudo de clulas mortas.

C. Fibrona da seda
Muitos insetos e aranhas produzem seda, uma estrutura que
consiste da protena fibrosa fibrona embebida em uma matriz
amorfa. Na fibrona, considerada uma queratina, as cadeias
polipeptdicas so arranjadas na conformao de folhas
antiparalela. As folhas so formadas porque a fibrona tem
elevado contedo de aminocidos com grupos R relativamente
pequenos como a glicina, alanina ou serina. A seda uma fibra
resistente por estar quase completamente distendida. Para estic-la
mais, seria necessrio romper as ligaes covalentes de suas cadeias
polipeptdicas. No entanto, a flexibilidade da seda ocasionada pelo
deslizamento das folhas adjacentes que esto associados por foras
de van der Waals.

2.9 Protenas globulares


As protenas globulares possuem cadeias polipeptdicas
enoveladas firmemente em estruturas tridimensionais compactas com
forma esfrica ou elipside. Suas massas moleculares so variveis
enquanto a solubilidade em gua relativamente elevada pois as
cadeias laterais hidrofbicas (insolveis em gua) dos aminocidos
(fenilalanina, leucina, isoleucina, metionina e valina) esto
orientados para o interior das estruturas, enquanto os grupos polares
hidrfilos (arginina, histidina, lisina, cido asprtico e cido
glutmico) esto situados na rea externa. Os aminocidos com
grupos polares no carregados (serina, treonina, asparagina,
glutamina e tirosina) esto tanto na superfcie externa da protena,
como no interior da molcula. As protenas globulares exercem
diferentes tipos de atividades biolgicas, tais como: enzimas,

55

56

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

transportadores e moduladores fisiolgicos e genticos. Os exemplos


tpicos so: a mioglobina, a hemoglobina e os anticorpos.

Protena globular com estrutura -hlice e folha pregueada.

A. Mioglobina
A mioglobina presente no citosol das clulas musculares, uma
protena transportadora e armazenadora de oxignio nos msculos
esquelticos e cardacos dos vertebrados. A mioglobina liga o
oxignio liberado pela hemoglobina nos capilares e posteriormente
difundido atravs das membranas celulares. Formada por uma nica
cadeia polipeptdica de 153 resduos de aminocidos e um grupo
prosttico heme (anel heterocclico porfirnico contendo quatro anis
pirrlicos e um tomo de Fe 2+ ). No possui resduos de cistena e,
portanto, no apresenta ligaes dissulfeto. As caractersticas
fundamentais da estrutura da mioglobina so:

uma protena globular com dimenses aproximadas de 4,5 x 3,5


x 2,5 nm.

A superfcie da molcula polar e seu interior apolar. Os


aminocidos polares da cadeia polipeptdica contribuem para a
alta solubilidade da molcula.

O interior da molcula compacto e consiste quase inteiramente


de resduos de aminocidos no-polares (leucina, valina,
metionina e fenilalanina) e desprovido de resduos de
aminocidos com carga, tais como, aspartato, glutamato, lisina e
arginina. Os nicos resduos polares no interior so dois resduos
de histidina, que atuam na ligao do ferro e oxignio.

Resduos de aminocidos polares e no-polares (ex.: treonina e


tirosina) esto orientados com sua poro no-polar para o
interior da molcula.

Composta por oito regies -hlice conectadas por dobras


formadas por aminocidos desestabilizadores designados AH ,
que constituem 75% da cadeia. Cada aminocido da cadeia

2 Aminocidos e protenas

codificado, ex.: His F8 refere-se ao oitavo resduo da hlice F


(Figura 2.12).

A cadeia contm um total de sete segmentos no-helicoidais:


cinco deles no interior das regies helicoidais e designados de
acordo com as hlices que eles interrompem.

A ocorrncia de prolina interrompe as hlice. Existem quatro


resduos de prolina na mioglobina.

Figura 2.12
Estrutura da molcula de mioglobina. O esqueleto peptdico
constitudo por oito -hlices marcadas por letras, de A a H.

B. Hemoglobina
A hemoglobina uma protena tetramrica presente nas hemceas
cuja principal funo o transporte do oxignio dos pulmes aos
tecidos perifricos. A hemoglobina tambm transporta CO 2 e prtons,
dos tecidos perifricos aos pulmes, para subseqente excreo.
A hemoglobina normal de adulto, a HbA consiste de quatro
cadeias polipeptdicas: duas (cada uma com 141 resduos de
aminocidos) e duas (cada uma com 146 resduos de aminocidos)
representada por 2 2 e estabilizadas por pontes de hidrognio e
interaes eletrostticas. Outra forma encontrada em baixos teores (1
a 3,5% do total) no adulto a HbA 2 composta por cadeias 2 2 . A
HbF formada por 2 2 predomina no feto, em 60 a 90% no recmnascido e <1% aps um ano. A hemoglobina H formada por quatro
cadeias , produzida quando faltam cadeias para a sntese de HbA.
A hemoglobina de Bart constituda de tetrmero de , formada
quando faltam cadeias para a sntese de HbF no feto; apresenta-se
em <2% no recm-nascido normal.
Cada uma das cadeias de hemoglobina contm um grupo
prosttico, o heme (molcula de protoporfirina IX contendo um
tomo de Fe 2+ ). Nas cadeias , o heme est encaixado entre a His 58

57

58

MOTTA

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e a His 87, enquanto nas cadeias , o encaixe ocorre entre a His63 e


His92.
Com respeito estrutura secundria, cada cadeia de
hemoglobina consiste de vrias regies hlice separadas umas das
outras por segmentos no helicoidais. A estrutura terciria envolve
vrias voltas e espirais, tendo cada cadeia uma forma esferide.
Apesar das estruturas primrias das cadeias e da hemoglobina
diferirem significativamente daquela da mioglobina, as conformaes
secundria e terciria so bastante semelhantes.
As principais caractersticas da molcula de hemoglobina so:

No existem ligaes covalentes entre as quatro cadeias


polipeptdicas, apesar da existncia de dois resduos de cistena
em cada subunidade e um resduo por subunidade .

Entre as subunidades idnticas ( ou ), existem poucas


interaes eletrostticas e algumas pontes de hidrognio.

Entre as subunidades e existem extensas regies de


interaes eletrostticas que produzem dois dmeros idnticos,
1 1 e 2 2 , que se movimentam juntos.
O
O
H2 C

CH

CH3

H3 C

B
N

CH2

CH

Fe(II)
N
H3 C
OOC

CH2

CH2

CH2

CH3
CH 2

COO

N
HN
CH2
N
H

C
H

O
C

Figura 2.13
Grupo heme. O grupo heme est presente na mioglobina, hemoglobina e
em hemoprotenas.

Entre os dmeros esto presentes uma rede de interaes


eletrostticas e pontes de hidrognio que se rompem e so
substitudas pela formao de novas ligaes no decorrer da
oxigenao reversvel da hemoglobina. Na oxigenao no
ocorrem alteraes na estrutura terciria de cada subunidade, mas
as cadeias e sofrem alteraes rotacional e posicional de

2 Aminocidos e protenas

diferentes magnitudes causando um novo empacotamento das


subunidades.

Figura 2.13
Estrutura da hemoglobina.

Em presena de oxignio, os tomos de ferro da


desoxihemoglobina se dirigem ao plano do anel heme. Esse
movimento transmitido histidina proximal (F8), que se move em
direo ao plano do anel e aos resduos ligados. (Figura 2.14).
Hlice F

C
HC

N
CH
N

Fe

Plano da
porfirina

+O2
Hlice F

HC

N
N

CH

Fe

O
O

59

60

MOTTA

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Figura 2.14
O tomo de ferro se dirige para o plano do heme oxigenado. A histidina
F8 atrada junto com o tomo de ferro.

Enquanto a mioglobina apresenta grande afinidade pelo oxignio,


a hemoglobina demonstra uma afinidade inicial lenta que se torna
progressivamente mais rpida. Esse fenmeno conhecido como
interao cooperativa, uma vez que a ligao do primeiro O 2
desoxihemoglobina facilita a ligao de O 2 s outras subunidades na
molcula. De modo inverso, a dissociao do primeiro O 2 da
hemoglobina completamente oxigenada, Hb(O 2 ) 4 , tornar mais fcil a
dissociao de O 2 das outras subunidades da molcula. A oxigenao
da hemoglobina acompanhada por mudanas conformacionais nas
proximidades do grupo heme. A estrutura quaternria da hemoglobina
desoxigenada (desoxiHb) descrita como estado conformacional T
(tenso) e aquela da hemoglobina oxigenada (oxiHb) como estado
conformacional R (relaxada). A afinidade do O 2 mais baixa no
estado T e mais alta no estado R.
Em funo da cooperatividade em associao e dissociao do
oxignio, a curva de saturao de oxignio para a hemoglobina difere
da observada para a mioglobina (Figura 2.15)

100 Mioglobina
Hemoglobina

80

60

40

20

Presso
venosa

20

40
60
80
Presso parcial de oxignio (mm Hg)

Presso
arterial

100

120

Figura 2.15
Curva de ligao da mioglobina e hemoglobina pelo oxignio. A forma
hiperblica da curva de ligao da mioglobina representa a ligao simples
de uma molcula pequena a uma protena. A ligao do oxignio
hemoglobina segue uma curva sigmide caracterstica de uma interao
cooperativa entre os stios de ligao.

Alm das modificaes estruturais de protenas causadas pela


oxigenao/desoxigenao, a ligao do O 2 hemoglobina afetada
por substncias chamadas efetores alostricos (ver Captulo 3:
Enzimas): CO 2 , H + e 2,3 bifosfoglicerato (2,3 BPG).

1. Efeito do 2,3 bifosfoglicerato (2,3 BPG). O 2,3 BPG,


sintetizado a partir de um intermedirio da via glicoltica (o
1,3 bifosfoglicerato), um importante modulador da ligao do

2 Aminocidos e protenas

oxignio hemoglobina. Nos tecidos perifricos, a deficincia de


oxignio determina acmulo de 2,3 DPG. Nos eritrcitos, o 2,3 BPG
liga-se fortemente a desoxiemoglobina e fracamente a oxiemoglobina
atuando como um efetor alostrico negativo. Assim, o BPG reduz a
afinidade da hemoglobina pelo oxignio atravs da ligao com a
desoxiemoglobina, mas no oxiemoglobina.
O

2-

OPO3

OH
2-

CH2 OPO3

2,3-Bifosfoglicerato

A concentrao do 2,3 BPG nos eritrcitos sensvel a vrias


condies fisiolgicas e patolgicas. Os nveis de 2,3 BPG esto
elevadas na privao crnica de O 2 nos tecidos como acontece em
algumas anemias, insuficincias cardacas e na adaptao a altitudes
elevadas. Desse modo, ocorre a maior estabilizao do estado T
desoxigenado, provocando a liberao de mais oxignio para os
tecidos hipxicos. (Figura 2.16).
1.0

0.8

Sem
BPG

0.6
0.4

Com BPG

0.2

20

40
Pa O2 (torr)

60

Figura 2.16
Efeito do BPG sobre a ligao do oxignio hemoglobina. A
hemoglobina sem BPG tem maior afinidade pelo O 2 do que a hemoglobina
com BPG.

2. Efeito de Bohr. A combinao da hemoglobina com O 2


tambm depende do pH, um fenmeno conhecido como efeito de
Bohr. Teores elevados de on hidrognio (pH reduzido) favorecem a
liberao de O 2 ; o inverso tambm verdadeiro. O efeito de Bohr
possui considervel importncia fisiolgica no transporte de O 2 dos
pulmes para os tecidos e no transporte do CO 2 dos tecidos
perifricos para os pulmes. medida que o sangue atinge os
tecidos, o CO 2 difunde-se para os eritrcitos, reduzindo o pH e a
afinidade da hemoglobina pelo O 2 , realizando a reao H + + HbO 2
O 2 + HHb + . Nos pulmes, a perda de CO 2 eleva o pH e aumenta a
afinidade da hemoglobina pelo O 2 .

61

62

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Exalado
2CO2 +2H2 O
Anidrase
carbnica

2H2 CO3
Tecidos
perifricos
2HCO3 +2H +

Hb 4O2
4O2
2H + + 2HCO3

4O2

Hb 2H +
(Tampo)

Pulmes

2H2 CO3
Anidrase
carbnica

2CO2 +2H2 O
Gerado pelo
ciclo de Krebs
Figura 2.17
Efeito de Bohr. O CO 2 produzido nos tecidos perifricos se combina com a
gua com a formao de cido carbnico que se dissocia nos ons
bicarbonato e hidrognio. A hemoglobina desoxigenada funciona como
tampo se ligando a prtons e os liberando nos pulmes. Nos pulmes, o
oxignio ligado hemoglobina provoca a sada dos prtons da hemoglobina.
Os prtons se combinam com o on bicarbonato produzindo cido carbnico
que, em presena de anidrase carbnica, produz o dixido de carbono,
posteriormente exalado pelos pulmes. A afinidade da hemoglobina pelo
oxignio aumenta com o aumento do pH.

3. Efeito do CO 2 . Clulas metabolicamente ativas produzem


elevados teores de CO 2 . Concentraes elevadas de CO 2 reduzem a
afinidade da hemoglobina pelo O 2 . O CO 2 reage transitoriamente com
grupos amino N terminais das cadeias polipeptdicas da
hemoglobina para formar carbaminohemoglobina que transporta o
CO 2 para os pulmes para a sua eliminao.
Hemoglobinopatias
Mais de 600 variantes genticas da seqncia dos aminocidos da
hemoglobina de adultos normais (HbA) foram relatadas. Essas
molculas, em cerca de 95% dos casos, so resultado da substituio
de um nico aminocido nas cadeias ou durante o processo de
sntese protica. Outras variantes podem ser devidas a insero ou
deleo de um ou mais nucleotdeos que modificam a matriz de
leitura dos cdons durante a sntese protica. Algumas hemoglobinas
variantes causam doenas debilitantes dependendo da natureza e
posio da substituio. Vrias mutaes desestabilizam as estruturas
tercirias e quaternrias modificando a afinidade da hemoglobina
pelo O 2 .

2 Aminocidos e protenas

63

Quadro 2.7 Anemia falciforme

A anemia falciforme uma sndrome falcmica


caracterizada pela presena de hemoglobina S nos
eritrcitos. Na hemoglobina S (de Silckle), uma forma
variante da hemoglobina adulta normal (HbA 1 ) em que
ocorre a substituio do glutamato, na posio 6 da
cadeia de HbA 1 pela valina. Ou seja, o glutamato de
cadeia lateral polar substitudo pela valina apolar. O
novo arranjo permite a interao hidrofbica com a
85
88
fenilalanina
e leucina
de uma desoxi HbS
adjacente. As molculas se agregam com a formao de
polmeros com outras molculas de conformao desoxi
da HbS, produzindo longos precipitados fibrosos (280
milhes em cada eritrcito) que, por sua vez, deformam
os eritrcitos (forma de foice), resultando em alta
velocidade
de
hemlise.
Apenas
indivduos
homozigticos para HbS apresentam a doena. Em
indivduos com duas cpias do gene mutante
(homozigticos), os drepancitos interagem para formar
agregados que podem obstruir os vasos capilares
reduzindo o fluxo normal de sangue. O bloqueio da
microcirculao ocorre em qualquer parte do organismo;
nos glomrulos, causam glomerulite focal e hematria. A
remoo aumentada de eritrcitos falciformes promove
anemia. A expectativa de vida de um homozigtico
menor que 30 anos.

A mutao, entretanto, confere maior resistncia dos


eritrcitos
com
HbS
ao
Plasmodium
falciparum
(protozorio transmitido por mosquito e responsvel pela
malria) que necessita dos eritrcitos do hospedeiro
durante parte do seu ciclo de vida. Clulas falciformes,
devido a sua fragilidade, so removidas da circulao
sangnea mais rapidamente que as hemcias normais e
o parasito no completa esse estgio do seu
desenvolvimento. Parasitas existentes nessas clulas
so tambm destrudos pela atividade esplnica.

As anormalidades da sntese da hemoglobina so as doenas


genticas mais comuns em todo o mundo e so divididas em trs
grupos:

Hemoglobinopatias estruturais. So defeitos genticos em que h


troca de aminocidos na seqncia das cadeias globnicas da
hemoglobina. Ex.: hemoglobina S (caracteriza a anemia de
clulas falciformes), microdrepanocitose, hemoglobinopatia SC,
hemoglobinopatia C, hemoglobinopatia D, hemoglobinopatia E
hemoglobinas instveis.

Talassemias. Defeitos genticos em que h reduo da sntese de


uma ou mais cadeias globnicas. Ex.: talassemias,
talassemias, talassemia do recm-nascido e talassemia.

Persistncia hereditria da hemoglobina fetal. Sntese de


hemoglobina fetal durante a idade adulta. H formas
homozigticas e heterozigticas. Os homozigticos tm 100% de
HbF, pois no sintetizam cadeias e .

C. Anticorpos
Os anticorpos ou imunoglobulinas compem uma famlia de
glicoprotenas produzidas pelos linfcitos B em resposta presena
de molculas estranhas conhecidas como antgenos (resposta
imunitria humoral). As caractersticas estruturais fundamentais das
imunoglobulinas so:

As molculas de anticorpo so glicoprotenas com quatro cadeias


polipeptdicas. Cada molcula tem estrutura em Y contendo duas
unidades idnticas chamadas cadeias pesadas (H) e duas

64

MOTTA

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unidades idnticas entre si,


denominadas cadeias leves (L).

porm

de

menor

tamanho,

A estrutura primria das cadeias pesadas, denominadas cadeias ,


, , e , a base da classificao das imunoglobulinas em
cinco classes: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. A IgG
humana pode ser subdividida em quatro subclasses: IgG 1 , IgG 2 ,
IgG 3 e IgG 4 , enquanto a IgA em duas classes.

As cadeias leves de cada molcula de imunoglobulina so


formadas por apenas dois tipos e .

As quatro cadeias so covalentemente interconectados por pontes


dissulfeto. No interior de cada cadeia da molcula, ligaes
dissulfeto intercadeias dobram a molcula em uma estrutura mais
compacta.

Cada cadeia polipeptdica consiste de duas regies regio


varivel (V) e regio constante (C) quanto seqncia de
aminocidos, (estrutura primria). A regio varivel da cadeia
leve (V L ) , aproximadamente, 50% do comprimento da cadeia
enquanto a regio varivel da cadeia pesada (V H )
aproximadamente 25% do comprimento da cadeia.

A digesto pela papana fornece dois fragmentos principais


chamados fragmento F ab , que retm a capacidade de ligar o antgeno
da molcula intacta, e o fragmento F c , que cristalizvel.

2.10 Protenas como eletrlitos


As protenas apresentam caractersticas cidobase semelhantes
aquelas dos aminocidos. Com exceo dos aminocidos Nterminal
e Cterminal, os grupos amino e carboxlicos esto
comprometidos nas ligaes peptdicas. Os polipeptdeos possuem
cargas eltricas devido principalmente aos grupos ionizveis das
cadeias laterais (R) dos resduos de aminocidos. Os valores de pK
desses grupos nas protenas diferem daqueles apresentados para os
aminocidos livres, pois so influenciados pela natureza dos outros
resduos presentes na vizinhana.
O pK dos grupos ionizveis dos resduos de aminocidos numa
cadeia polipeptdica so mostrados na Figura 2.18.

2 Aminocidos e protenas

65

Quadro 2.8 Eletroforese das protenas

As protenas nos lquidos biolgicos so


molculas anfteras que podem ser separadas em
fraes quando aplicadas sobre um suporte poroso e
submetidas a um campo eltrico em processo
denominado eletroforese. A migrao ocorre de
acordo com o grau de ionizao, tamanho e forma da
molcula protica, tambm como das caractersticas
da soluo tampo onde se realiza o processo; da
fora do campo eltrico; da porosidade, viscosidade
e temperatura do suporte.
As fraes nas quais predominam as cargas
negativas, a protena se dirige para o nodo (plo
positivo) e as positivas, migram para o ctodo (plo
negativo). Como a carga da protena depende da
concentrao do on hidrognio da soluo, o pH
deve ser especificado e mantido constante durante o
procedimento.

A eletroforese empregada em laboratrio


clnico para a separao das fraes proticas do
soro sangneo (ou urina, lquido cefalorraquidiano
ou outros lquidos biolgicos). O soro aplicado num
suporte (papel de filtro, acetato de celulose,
poliacrilamida,
gel
de
agarose,
etc)
cujas
extremidades esto mergulhadas numa soluo
tampo com pH 8,6 (neste pH predominam cargas
negativas nas protenas) que esto sob diferena de
potencial eltrico. As protenas migram e so
separadas em fraes.
Aps a migrao o suporte corado e tornam-se
visveis seis fraes: a albumina e as globulinas 1 ,
2 , 1 , 2 , e .
O suporte corado submetido leitura
densitomtrica e representada na forma de grfico.

HN

CH

CH

NH
COO
COO
H2N
CH2

CH2

CH2

N
H

CH2

CH2

N
H

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

NH

NH3

H
N

CH3

COO

C
H2N

NH2

Figura 2.18
Cadeia polipeptdica hipottica contendo alguns grupos que contribuem com
cargas eltricas nas protenas.

A carga lquida de uma protena depende do nmero de cadeias


ionizveis, o valor do pK e o pH do meio. O pH onde a soma cargas
negativas igual a das cargas positivas denominado ponto
isoeltrico (pI) da protena. Quando submetida a um campo eltrico
como na eletroforese, uma protena em seu pI no migra em qualquer
direo. O pI varia de uma protena para outra e depende dos valores
individuais de pK de todos os grupos ionizveis presentes nas cadeias
laterais dos aminocidos e dos extremos das cadeias polipeptdicas.
Os pI das protenas esto, geralmente, entre 4 e 7 apesar de algumas
apresentarem valores fora desses limites como no caso da pepsina (pI
= 1) e histona (pI = 10). Os valores de pI de algumas protenas so
mostrados na Tabela 2.4.

66

MOTTA

Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Tabela 2.4
Valores de pI de algumas protenas
Protena

Pepsina
Haptoglobina
Lipoprotena 1
Globulina 1
Fibrinognio
Hemoglobina
Citocromo c

pI

1,0
4,1
5,5
5,8
5,8
7,2
10,0

Em pH maior do que o pI a protena tem carga negativa efetiva.


Em pH menor do que o pI a protena tem carga positiva efetiva. A
magnitude da carga eltrica efetiva de uma protena e funo da
distncia entre o pH e o pI. A albumina plasmtica humana contm
585 resduos de aminocidos e tem pI de 4,9 (pH onde a carga lquida
zero). Em pH 8,6 vrios grupos esto titulados em sua forma bsica
com carga lquida de 20. Por outro lado, em pH 3 a carga eltrica
lquida da molcula de albumina em soluo +60.

Resumo
1. As protenas apresentam uma elevada gama de funes nos seres vivos.
Alm de servir como material estrutural, as protenas esto envolvidas na
regulao metablica, transporte, defesa e catlise. Os polipeptdeos so
polmeros de aminocidos. As protenas consistem de uma ou mais
cadeias polipeptdicas.
2. Cada aminocido contm um tomo de carbono central (o carbono ) no
qual esto ligados um grupo amino, um grupo carboxlico, um tomo de
hidrognio e um grupo R. Alm de formar protenas, os aminocidos tem
outros papis biolgicos. De acordo com sua capacidade de interagir com
a gua, os aminocidos so separados em quatro classes: (1) no polar
ou neutra, (2) polar e neutra, (3) cida e (4) bsica.
3. A titulao de aminocidos e peptdeos ilustra o efeito do pH sobre suas
estruturas. O pH em que a molcula no apresenta carga eltrica lquida
chamado ponto isoeltrico.
4. Os aminocidos sofrem duas reaes de particular importncia: a
formao da ligao peptdica e a oxidao da cistena.
5. As protenas tambm so classificadas de acordo com sua conformao e
composio. As protenas fibrosas (exemplo, o colgeno) so longas,
molculas enoveladas insolveis em gua e fisicamente rgidas. As
protenas globulares (exemplo, a hemoglobina) so molculas compactas
e esfricas quase sempre solveis em gua.
6. Existem quatro nveis estruturais das protenas. A estrutura primria a
seqncia de aminocidos determinada por informao gentica. Os
arranjos regulares e recorrentes da cadeia polipeptdica constituem a
estrutura secundria das protenas. O pregueamento no peridico da
cadeia polipeptdica forma a estrutura tridimensional das protenas. As
protenas que consistem de dois ou mais polipeptdeos formam
complexos tridimensionais denominados estruturas quaternrias. Vrias
condies fsicas e qumicas podem romper a estrutura das protenas.
Agentes desnaturantes incluem cidos ou bases fortes, agentes redutores,
metais pesados, mudanas da temperatura e estresse mecnico.

2 Aminocidos e protenas

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 47-75.
CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3 ed. Porto Alegfre: ArtMed, 2000. p. 94-155.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed.
So Paulo: Sarvier, 2002. p. 87-188.
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed.
New York: McGraw-Hill, 2003. p. 108-160.
MOTTA, V. T. Bioqumica clnica para o laboratrio: princpios e
interpretaes. 4 ed. Porto Alegre: Editora Mdica Missau, 2003. p. 75-103.

67

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Enzimas

3
Enzimas

Objetivos
1.

Compreender a sistematizao da nomenclatura enzimtica.

2.

Descrever as classes enzimticas: hidrolase, transferase, isomerase, liase,


ligase e oxirredutase.

3.

Descrever a funo de coenzimas e co-fatores na biocatlise.

4.

Conceituar energia livre de ativao e correlacionar com a atividade


enzimtica.

5.

Conceituar stio ativo de uma enzima e correlacionar com atividade enzimtica.

6.

Conceituar nmero de renovao (turnover) e reconhecer sua significao


biolgica.

7.

Conceituar especificidade enzimtica e reconhecer sua significao biolgica.

8.

Descrever o efeito da temperatura e pH sobre a velocidade da reao


enzimtica.

9.

Descrever o efeito da variao da concentrao do substrato na velocidade da


reao enzimtica e indicar o significado do Km.

10. Descrever as semelhanas e diferenas entre inibio enzimtica competitiva,


no-competitiva e incompetitiva ao nvel de stio ativo.
11. Descrever a regulao alostrica e seus efeitos.
12. Reconhecer que o carter sigmoidal da curva de substrato de uma protena
alostrica, depende da interao entre as subunidades e modificado pela
interao da protena com o efetor.

A vida depende de uma bem orquestrada srie de reaes


qumicas. Muitas delas, entretanto, ocorrem muito lentamente para
manter os processos vitais. Para resolver esse problema, a natureza
planejou um modo de acelerar a velocidade das reaes qumicas por
meio da catlise. As aes catalticas so executadas por enzimas que
facilitam os processos vitais em todas as suas formas, desde os vrus
at os mamferos superiores.

69

70

MOTTA Bioqumica

Quadro 3.1 Natureza qumica das enzimas

A palavra enzima foi introduzida por Kuhne em


1878 para designar a ocorrncia no levedo de algo
responsvel
pela
sua
atividade
fermentativa.
Berzelius, 50 anos antes, tinha reconhecido a
presena de fermentos de ocorrncia natural que
promoviam reaes qumicas e antecipou o conceito
de catalisadores biolgicos. Berzelius classificou os
fermentos em organizados e no-organizados com
base na presena ou ausncia de microorganismos
intactos. Kuhne aplicou a palavra enzima aos
fermentos derivados de extratos de levedos, i.e.
fermentos no-organizados.
Em 1897, Bchner preparou um filtrado de
extratos de levedo que foi o primeiro extrato
enzimtico removido de clulas vivas que pode
catalisar a fermentao.

A natureza qumica das enzimas permaneceu


controversa. Em 1926, Sumner cristalizou a urease a
partir de extratos de feijo, no entanto, a preparao
tinha
pequena
atividade
cataltica
e
outros
investigadores atriburam o efeito cataltico a
contaminantes e no protena. Willsttter, por outro
lado,
prurificou
a
peroxidase
com
elevada
capacidade cataltica e ausncia de outras protenas.
No incio dos anos 30, Northrop e cols. cristalizaram
a pepsina e a tripsina demonstrando definitivamente
que as enzimas eram protenas.

As enzimas so protenas com a funo especfica de acelerar


reaes qumicas que ocorrem sob condies termodinmicas
nofavorveis. Elas aceleram consideravelmente a velocidade das
reaes qumicas qumicas em sistemas biolgicos quando
comparadas com as reaes correspondentes nocatalisadas. Para ser
classificada como enzima, uma protena deve:

Apresentar extraordinria eficincia cataltica.

Demonstrar alto grau de especificidade em relao a seus


substratos (reagentes) e aos seus produtos.

Acelerar a velocidade das reaes em 10 6 a 10 12 vezes mais do


que as reaes correspondentes no-catalisadas.

No ser consumida ou alterada ao participar da catlise.

No alterar o equilbrio qumico das reaes.

Ter sua atividade regulada geneticamente ou pelas condies


metablicas.

Tabela 3.1 Velocidade de reaes nocatalisadas e catalisadas por


enzimas
Enzima
Anidrase carbnica

Nocatalisada
1
(s )

Catalisada
1
(s )

Aumento
da
velocidade

1,3 x 10 1

1.000.000

7,7 x 10 6

370

2,1 x 10 12

10

Adenosinadeaminase

1,8 x 10

Nuclease estafiloccica

1,7 x 10 13

95

5,6 x 10 14

Triosefosfatoisomerase

4,3 x 10 6

4.300

1,0 x 10 9

190

1,7 x 10 11

39

1,4 x 10 17

Quimiotripsina

1,0 x 10

Orotidinadescarboxilase

2,8 x 10 16

3 Enzimas

71

s -1 = unidade da constante de velocidade de reao de primeira ordem

Quadro 3.2 Uso industrial das enzimas

A indstria biotecnolgica produz vrias enzimas


para diferentes usos.
O uso de proteases em detergentes melhora a
remoo de manchas de origem biolgica, como o
sangue e molhos. O termo biolgico empregado nas
embalagens de sabo em p reflete a presena de
proteases. As proteases so tambm utilizadas em
restaurantes para amaciar a carne, por cervejeiros
para eliminar a turvao nas cervejas, por padeiros
para melhorar a textura do po e em indstrias de
luvas para amaciar o couro.

Outras enzimas tambm apresentam uso


industrial. Por exemplo, a lipase adiconada a
lquidos detergentes para degradar graxas (lipdeos)
e em alguns queijos para desenvolver aroma. A
pectinase usada na indstria de gelias para
promover a mxima extrao de lquido das frutas.
As amilases so empregadas para degradar o amido
em certos removedores de papel de parede para
facilitar a sua retirada.definitivamente que as
enzimas eram protenas.

As protenas no so nicas substncias com propriedades


catalticas nos sistemas biolgicos. Alguns RNA, denominados
ribozimas, tambm executam essa funo.
A reao catalisada por enzima pode ser esquematizada como
segue:
Enzima (E)
Substrato (S)

Produto (P)

A molcula sobre a qual a enzima atua o substrato (S) que se


transforma em produto (P) da reao. Na ausncia de enzima pouco
produto (ou nenhum) formado, mas em presena da mesma, a reao
se processa em alta velocidade. Como a maioria das reaes
reversvel, os produtos da reao numa direo tornam-se substratos
para a reao inversa.
As enzimas so os catalisadores mais especficos que se conhece,
tanto para o substrato como para o tipo de reao efetuada sobre o
substrato. A especificidade inerente da enzima, reside em uma
cavidade ou fenda de ligao do substrato, que est situada na
superfcie da protena enzimtica. A cavidade, denominada stio
ativo, um arranjo de grupos presentes em cadeias laterais de certos
aminocidos que ligam o substrato por ligaes no-covalentes .
Muitas vezes, os resduos de aminocidos que formam o stio ativo
ficam em regies distantes, na seqncia primria, mas prximos no
stio ativo, pelo enovelamento de cadeia polipeptdica (estrutura
terciria).
Algumas enzimas tm outra regio na molcula, o stio
alostrico, afastada do stio ativo. No stio alostrico molculas
pequenas especficas se ligam e causam alteraes na conformao
protica que afetam o stio ativo, aumentando ou reduzindo a
atividade enzimtica.
A maioria das enzimas necessitam de molculas orgnicas ou
inorgnicas pequenas, essenciais sua atividade e denominadas
coenzimas e co-fatores.

72

MOTTA Bioqumica

3.1 Classificao das enzimas


Com a descoberta de grande nmero de enzimas, houve a
necessidade de sistematizao da nomenclatura. A Unio
Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular (IUBMB) adotou
um sistema racional e prtico de nomenclatura identificando as
enzimas em seis classes, de acordo com a natureza da reao qumica
que catalisam. Para cada enzima, so atribudos dois nomes e um
nmero de classificao de quatro dgitos que identificam as classes,
as subclasses e as sub-subclasses.
Na classificao internacional sistemtica, as enzimas so
divididas em seis grupos de acordo com o tipo de reao catalisada
(Tabela 3.1).
Tabela 3.1 Classificao das enzimas
Classe da enzima

Tipo de reao catalisada

Oxidorredutases

Reaes de oxidaoreduo

Transferases

Transferncia de grupos funcionais

Hidrolases

Reaes de hidrlise

Liases

Remoo de grupos para formar ligaes duplas

Isomerases

Isomerizao

Ligases

Formao de ligaes entre duas molculas

Por exemplo, a enzima glicose6fosfatase (nome trivial), tem


como nome sistemtico D -Glicose 6 fosfato fosfohidrolase e nmero
de classificao EC 3.1.3.9. Os nmeros representam a classe (3,
hidrolase), subclasse (1, atua sobre ligaes ster), subsubclasse (3,
fosforil monoster hidrolase) e seu nmero de srie dentro da subsubclasse (9). A sigla EC a abreviatura de Enzyme Comission ).
Muitas enzimas de uso rotineiro so designadas pelo nome
alternativo ou trivial. Por exemplo, algumas so denominadas pela
incorporao do sufixo ase ao nome do substrato sobre os quais elas
atuam; por exemplo, a enzima que hidrolisa a uria denominada
ure ase ; o amido, a amil ase ; steres do fosfato, as fosfat ase s. Outras
so designadas pelo tipo de ao cataltica que realizam, tais como,
anidrase carbnica; Damino oxidase ; lactato desidrogenase .
Algumas levam nomes vulgares como a tripsina, pepsina, emulsina,
etc.

3 Enzimas

73

Quadro 3.3 Enzimas usadas como agentes teraputicos

Algumas enzimas so empregadas como agentes


teraputicos no tratamento de diferentes doenas. As
proteases, amilases e lpases so usadas para
auxiliar a digesto.
A asparaginase usada no tratamento da
leucemia linfoctica aguda. As clulas normais so
capazes de sintetizar asparagina enquanto certas
clulas tumorais, inclusive as leucmicas, no
produzem o derivado do aminocido. A administrao
intravenosa
de
asparaginase
reduz
o
nvel
plasmtico de asparagina e, assim, diminui o
desenvolvimento de clulas leucmicas.

A desoxiribonuclease (DNase) til no


tratamento
da
fibrose
cstica.
A
principal
caracterstica da fibrose cstica so as infees
respiratrias recorrentes, particularmente devido a
Pseudomonas aeroginosa, o que resulta em grandes
quantidades de DNA proveniente das bactrias
destrudas e morte das clulas fagocticas do sistema
imune. O DNA contribui para a viscosidade do muco
que provoca sintomas aflitivos. A DNase usada
para degradar o DNA e diluir o muco.
A estreptocinase empregada na remoo de
cogulos sangneos no infarto do miocrdio e nas
extremidades dos membros inferiores. Ativa a
transformao
da
proenzima
fibrinoltica
plasminognio plasmina, uma enzima que quebra a
fibrina insolvel do cogulo sangneo.

3.2 Co-fatores metlicos e coenzimas


Algumas enzimas so protenas simples consistindo inteiramente
de cadeias polipeptdicas, como as enzimas hidrolticas pepsina,
tripsina, lisozima e ribonuclease. Entretanto, a maioria das enzimas
somente exercem sua atividade cataltica em associao com
co fatores metlicos e coenzimas .

1. Co-fatores metlicos. Os metais importantes nos organismos


vivos so classificados em dois grupos: metais de transio
(exemplo, Fe 2+ , Zn 2+ e Cu 2+ ) e metais alcalinos e alcalinos terrosos
(exemplo, Na + , K + , Mg 2+ e Ca 2+ ). Devido a sua estrutura eletrnica,
os metais de transio esto freqentemente envolvidos na catlise.
Vrias propriedades dos metais de transio os tornam essenciais
para a catlise. Os ons metlicos apresentam um grande nmero de
cargas positivas especialmente teis na ligao de pequenas
molculas. Os metais de transio atuam como cidos de Lewis
(aceptores de pares eletrnicos), e so eletrfilos efetivos. Como suas
valncias permitem interagirem com dois ou mais ligantes, os ons
metlicos participam na orientao apropriada do substrato para a
reao. Como conseqncia, o complexo substrato-on metlico
polariza o substrato e promove a catlise. Exemplo, quando o Zn 2+ ,
cofator da anidrase carbnica, polariza uma molcula de gua,
forma-se um grupo OH ligado ao Zn 2+ (funo de cido de Lewis do
zinco). O grupo OH ataca nucleofilicamente o CO 2 , convertendo-o em
HCO 3 - .
Finalmente, como os metais de transio tm dois ou mais estados
de oxidao, eles podem mediar reaes de oxidaoreduo. Por
exemplo, a oxidao reversvel do Fe 2+ para formar Fe 3+ importante
na funo do citocromo P 450 , uma enzima microssomal que processa
substncias txicas.

74

MOTTA Bioqumica

Quadro 3.1 Algumas coenzimas, as reaes que promovem e as vitaminas precursoras


Coenzima

Reao

Fonte vitamnica

Biocitina

Carboxilao

Biotina

Coenzima A

Transferncia de grupos acila

cido pantotnico

Cobalamina

Alquilao

Cobalamina (B 12 )
Riboflavina (B 2 )

Flavina

Oxidaoreduo

cido lipico

Transferncia de grupo acila

Nicotinamida

Oxidao reduo

Nicotinamida (niacina)

Fosfato de piridoxal

Transferncia de grupo amino

Piridoxina (B 6 )

Tetraidrofolato

Transferncia de grupos de
1carbono

cido flico

Pirofosfato de tiamina

Transferncia de grupo aldedo

Tiamina (B 1 )

Retinal

Viso, crescimento e reproduo

Vitamina A

1, 25-diidroxicolecalciferol

Metabolismo do clcio e fsforo

Vitamina D

2.
Coenzimas.
So
molculas
orgnicas
pequenas,
frequentemente derivadas de vitaminas. Existem tambm certos
nutrientes anlogos s vitaminas (exemplo, cido lipico e cido
p aminobenzico) que so sintetizados em pequenas quantidades e
que facilitam os processos catalisados por enzimas. Na Tabela 3.1 so
listadas as coenzimas, as reaes que elas participam e as fontes
vitamnicas que do origem as coenzimas.
A enzima cataliticamente ativa quando forma um complexo
denominado holoenzima . O componente protico do complexo
designado de apoenzima .
Holoenzima (ativa) ' cofator + apoenzima (inativa)

Quadro 3.2 Coenzimas/co-fatores metlicos e enzimas


Coenzimas e co-fatores

Enzima

Coenzima
Pirofosfato de tiamina (TTP)

Piruvato desidrogenase

Flavina adenina dinucleotdeo (FAD)

Monoaminooxidase

Nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD)

Lactato desidrogenase

Piridoxal fosfato

Glicognio fosforilase

Coenzima A (CoA)

Acetil CoA carboxilase

Biotina

Piruvato carboxilase

Tetraidrofolato

Timidilate sintase

Co-fator metlico
Zn 2+
Zn

2+

Mg 2+

Anidrasecarbnica
Carboxipeptidase
Hexocinase

3 Enzimas

Ni 2+

Urase

Mo

Nitrato redutase

Se

Glutationa peroxidase

Mn 2 +

Superxido dismutase

K+

Propionil CoA carboxilase

3.3 Reaes catalisadas por enzimas


Para reagir, as molculas presentes em uma soluo devem colidir
com orientao apropriada e com a quantidade de energia que lhes
permitam formar o complexo ativado, denominado estado de
transio que representa os reagentes em seu estado ativado . Para
atingir o estado de transio, necessita-se de uma quantidade de
energia definida como energia de ativao ( E a ) ou mais comum em
bioqumica energia livre de ativao, G (o smbolo ( ) indica o
processo de ativao) . Sob condies fisiolgicas, a velocidade das
reaes pode ser aumentada pela reduo da energia livre de ativao
conseguida pela ao de enzimas.
A comparao do perfil energtico das reaes catalisadas e nocatalisadas mostrada na Figura 3.1 para a reao:
A+B'C+D
No grfico, o estado de transio corresponde ao ponto de mais
alta energia da reao no-catalisada e a medida da energia livre de
ativao, G . Ou ainda, G a energia livre do estado de transio
subtrada da energia livre dos reagentes. No complexo ativado (estado
de transio do sistema), os reagentes esto em forma intermediria
de alta energia e no podem ser identificados nem como reagentes
nem como produtos. O complexo do estado de transio pode ser
decomposto em produtos ou voltar aos reagentes.

75

MOTTA Bioqumica

Estado de transio
=

AG Em ausncia
de enzima

No-catalisada

Energia do sistema

76

AG
Catalisada
Reagentes A, B
(Estado inicial)

AG

Produtos C, D
(Estado final)
Progresso da reao
Figura 3.1
Diagrama energtico de reao catalisada e de reao no-catalisada.

0
G = energia livre de ativao, G = variao de energia livre. A diferena
entre os valores da energia de ativao de uma reao catalisada e de uma
reao no-catalisada, indica a eficincia do catalisador.

A velocidade de uma reao inversamente proporcional ao valor


de sua energia livre de ativao. Quanto maior o valor de G , menor
ser a velocidade da reao. Os catalisadores aumentam a velocidade
da reao reduzindo a energia livre de ativao. A velocidade de
uma reao pode aumentar na ordem de 10 6 a 10 12 vezes mais do que
a reao correspondente no-catalisada.
Trs propriedades distintas das enzimas permitem que elas
exeram papel central na promoo e regulao dos processos
celulares, caracterizando-as como componentes vitais aos sistemas
vivos:

Elevada especificidade da reao . Como regra geral, cada reao


sob condies apropriadas catalisada por uma enzima
especfica. Diante de vrias rotas potencialmente possveis, a
enzima escolhe a com menor energia livre de ativao.

Condies reacionais mais brandas. A atividade de cada enzima


dependente do pH, da temperatura, da presena de vrios cofatores e das concentraes de substratos e produtos.

Capacidade de regulao da concentrao e da atividade.


Permite o ajuste fino do metabolismo em diferentes condies
fisiolgicas.

3 Enzimas

3.4 Stio ativo cataltico


Stio ativo a regio na superfcie da enzima onde ocorre a
catlise. O substrato liga-se ao stio ativo por ligaes
nocovalentes (interaes eletrostticas, pontes de hidrognio,
interaes de van der Waals e interaes hidrofbicas). Os grupos que
participam das ligaes so: a carboxila do cido glutmico ou do
cido asprtico, o grupo -amino da lisina, o imidazol da histidina, a
hidroxila da serina, etc.
Somente uma pequena poro do substrato onde ocorre
transformao est ligada enzima. Isso no implica, entretanto, que
os aminocidos no stio ativo estejam um ao lado do outro na
estrutura primria da protena. Em conseqncia das dobras e
enovelamento da enzima (estrutura secundria e terciria), certos
resduos de aminocidos podem estar distantes um do outro na
seqncia primria, ainda que juntos no stio ativo da protena
completa.
A especificidade da ligao enzima-substrato depende do arranjo
precisamente definido de tomos no stio ativo. Uma das explicaes
para a elevada especificidade das enzimas que suas estruturas
tridimensionais permitem um perfeito encaixe com o substrato. Dois
modelos foram propostos para explicar a especificidade enzimtica, o
modelo chave-fechadura e o modelo do encaixe induzido.

1. Modelo chave fechadura. Muitas enzimas contm fendas com


dimenses fixas que permitem a insero somente de compostos com
uma dada configurao. O substrato se ajusta a esse stio de ligao
como uma chave se ajusta sua fechadura. Substncias que no se
encaixam na fenda para formar o complexo enzimasubstrato (ES),
no reagem, mesmo possuindo grupos funcionais idnticos ao do
modelo
substrato
verdadeiro.
Esse
conceito

chamado
chave fechadura proposto por Fisher em 1890.

+
E+S

ES

(ES - EP)

E+P

Figura 3.2
Modelo chave-fechadura. A interao entre a enzima (com estrutura rgida)
e seu substrato.

2. Modelo do encaixe induzido. Um modelo mais flexvel de


interao enzima-substrato o encaixe induzido (inducedfit)
proposto por Koshland em 1958. Os stios ativos dessas enzimas no
esto completamente pr-formados e a interao inicial do substrato
com a enzima induz uma alterao conformacional na enzima. Isso
promove o reposicionamento dos aminocidos catalticos para formar

77

78

MOTTA Bioqumica

o stio ativo e a estrutura correta para interagir com os grupos


funcionais do substrato (Figura 3.3).

E+S

ES

Figura 3.3
Modelo do encaixe induzido. A ligao inicial do substrato enzima induz
uma mudana conformacional na enzima produzindo um melhor encaixe.

3.5 Mecanismos catalticos


As reaes qumicas envolvidas na transformao dos substratos
variam com os mecanismos de ao das enzimas. Os principais tipos
de mecanismos catalticos que as enzimas utilizam so: (1) efeitos de
proximidade e orientao, (2) catlise eletrosttica, (3) catlise cidobsica e (4) catlise covalente.

1. Efeitos de proximidade e orientao. Os substratos se


aproximam dos grupos funcionais catalticos da enzima em uma
orientao espacial apropriada para que a reao possa ocorrer. Aps
o correto posicionamento do substrato, uma modificao na
conformao da enzima resulta em um complexo enzimasubstrato
orientado. Essa orientao leva o complexo enzimasubstrato ao
estado de transio.
2. Catlise por ons metlicos. A fora das interaes
eletrostticas est relacionada com a capacidade das molculas
solventes vizinhas em reduzir os efeitos de atrao entre os grupos
qumicos. Como a gua excluda do stio ativo quando o substrato
se liga, a constante dieltrica local muitas vezes baixa. A
distribuio de cargas nos stios ativos das enzimas pode influenciar a
reatividade qumica do substrato. Uma ligao mais eficiente do
substrato reduz a energia livre do estado de transio, que acelera a
reao.
3. Catlise cido-bsica geral. Os grupos qumicos podem se
tornar mais reativos pela adio ou remoo de prtons. Os stios
ativos das enzimas contm cadeias laterais que podem atuar como
doadores ou receptores de prtons. Esses grupos so denominados
cidos gerais ou bases gerais. Por exemplo, a cadeia lateral da
histidina (grupo imidazol) muitas vezes atua como catalisador cido
e/ou bsico em concerto porque tem p K a na faixa de pH fisiolgico.
4. Catlise covalente. Acelera a velocidade da reao pela
formao de uma ligao covalente transitria entre a enzima e o
substrato. Um grupo nucleoflico da cadeia lateral do catalisador

3 Enzimas

forma uma ligao covalente instvel com um grupo eletroflico do


substrato. O complexo enzimasubstrato ento forma o produto.

A. Mecanismo de ao da lisozima
O mecanismo de ao da lisozima emprega tanto a distoro da
cadeia polissacardica como a catlise cido-bsica geral. A lisozima
uma enzima com cadeia polipeptdica nica com 129 resduos de
aminocidos. A lisozima, uma glicosidase, destri as paredes das
clulas bacterianas ao hidrolisar a ligao glicosdica entre o
N acetilmuramato e N acetilglicosamina. A molcula da lisozima tem
uma fenda, qual os substratos se ligam por ligaes pontes de
hidrognio e foras de van der Waals. O mecanismo cataltico da
lisozima envolve o cido glutmico 35, na sua forma no-carregada,
que atua como catalisador cido para clivar o substrato
polissacardico pela doao de um H + ao oxignio da ponte entre os
anis D e E. O C 1 do anel D fica, ento, com carga positiva O on
axnio
resultante
carregado
positivamente
e
planar,

eletrostaticamente estabilizado pelo aspartato 52 na sua forma de


carboxilato. A reao facilitada pela distoro do resduo D na
conformao planar de meia-cadeira, o que permite que a carga
positiva seja compartilhada entre o C-1 e o tomo de oxignio do
anel.

Figura 3.4
Estrutura da lisozima.

79

80

MOTTA Bioqumica

B. Mecanismo de ao das serino proteases


As enzimas serinoproteases empregam a catlise cido bsica
geral e a catlise covalente para a sua ao. As serino proteases so
um grupo de enzimas proteolticas que incluem a quimotripsina,
tripsina, elastase, trombina, plasmina , e so assim chamadas por
utilizar um nico resduo serina ativada no stio ativo. As
serinoproteases utilizam o grupo CH 2 OH da serina como um
nucleoflico para hidrolisar cataliticamente ligaes peptdicas.
Formam um intermedirio covalente acil enzima, no qual o grupo
carboxila do substrato esterificado com a hidroxila da serina 195
(catlise covalente). O carter nuclefilo da OH bastante
acentuado pela histidina 57, que recebe um prton da serina (catlise
cido-bsica geral). A histidina resultante com carga positiva
estabilizada pela interao eletrosttica com a carga negativa do
aspartato 102. A segunda etapa, o intermedirio acil enzima
deacilado pelo reverso das etapas anteriores.
Outras serino-proteases existem na forma precursora inativa,
denominadas zimognios , que so ativadas por clivagem cataltica de
uma ligao poliptdica especfica por outras serino-proteases.
A atividade das proteases limitada por inibidores sintetizados
pelo pncreas e fgado. Por exemplo, se enzimas pancreticas forem
prematuramente ativadas ou liberadas do pncreas aps um trauma,
elas so rapidamente inativadas por inibidores da protease. Os
inibidores passam por substratos da protease, mas no so
completamente hidrolizados. O desequilbrio entre a atividade das
proteases e a atividade de inibidores da protease pode provocar
doenas, por exemplo, enfisema.

3.6 Fatores que influenciam a atividade


enzimtica
Vrios fatores influenciam a atividade enzimtica, incluindo a
temperatura, pH, concentrao do substrato, tempo e produto da
reao.

A. Temperatura
As reaes qumicas so afetadas pela temperatura. Quanto maior
a temperatura, maior a velocidade da reao. A velocidade aumenta
porque mais molculas adquirem energia suficiente para atingir o
estado de transio. Em reaes catalisadas por enzimas, a velocidade
acelerada pelo aumento da temperatura at atingir uma temperatura
tima na qual a enzima opera com a mxima eficincia. Como as
enzimas so protenas, os valores de temperatura tima situam-se
entre 40 e 45 C e dependem do pH e da fora inica. Acima dessa
temperatura, a atividade das enzimas declina adruptamente por
desnaturao protica. Sob condies de hipotermia, a atividade
enzimtica deprimida. As relaes acima descritas so mostradas na
Figura 3.5.

Velocidade

3 Enzimas

Temperatura em C
Figura 3.5
Efeito da temperatura sobre a velocidade de uma reao catalisada por
enzima.

B. pH
A concentrao de ons hidrognio afeta as enzimas de vrios
modos. Primeiro, a atividade cataltica das enzimas est relacionada
ionizao de aminocidos no do stio ativo.. Por exemplo, a atividade
cataltica de certas enzimas necessita a forma protonada da cadeia
lateral do grupo amino. Se o pH torna-se suficientemente alcalino de
tal modo que o grupo perde seu prton, a atividade da enzima pode
ser reduzida. Alm disso, os substratos podem tambm serem
afetados. Se um substrato contm um grupo ionizvel, as mudanas
no pH afetam a capacidade de ligao ao stio ativo. Segundo,
alteraes nos grupos ionizveis podem modificar a estrutura terciria
das enzimas. Mudanas drsticas no pH promovem a desnaturao de
muitas enzimas.
Apesar de algumas enzimas tolerar grandes mudanas no pH, a
maioria delas so ativas somente em intervalos muitos estreitos. Por
essa razo, os organismos vivos empregam tampes que regulam o
pH. O valor do pH no qual a atividade da enzima mxima
chamado pH timo. O pH timo das enzimas varia consideravelmente.
Por exemplo, o pH timo da pepsina, enzima proteoltica produzida
no estmago , aproximadamente, 2. Para a quimotripsina, que digere
as protenas no intestino delgado, o pH timo , aproximadamente, 8.
O efeito do pH sobre a atividade das enzimas esquematizado na
Figura 3.6.

81

Velocidade

MOTTA Bioqumica

pH
Figura 3.6
Atividade enzimtica
constantes)

versus

pH

(considerando-se

os

outros

fatores

C. Concentrao da enzima
A velocidade mxima da reao uma funo da quantidade de
enzima disponvel, aquela aumenta proporcionalmente pela
introduo de mais enzima ao sistema. Assim, a velocidade inicial da
reao enzimtica diretamente proporcional concentrao de
enzima (existindo substrato em excesso) (Figura 3.7).

Velocidade inicial 0

82

Concentrao de enzima
Figura 3.7
Efeito da concentrao da enzima sobre a velocidade inicial (v 0 ). A
concentrao do substrato est acima da necessria para atingir a velocidade
mxima.

D. Concentrao do substrato
Para atender as necessidades do organismo, as reaes
bioqumicas devem ocorrer em velocidade compatvel. A velocidade
de uma reao bioqumica expressa em termos de formao de
produto ou pelo consumo do reagente por unidade de tempo. Ao
considerar uma reao unimolecular (que envolve um nico
reagente):
AP

3 Enzimas

O progresso da reao descrita pela equao da velocidade na


qual a velocidade expressa em termos da constante de velocidade
( k ) e a concentrao do reagente [A]:
Velocidade = =

[A ]
= k [A ]
t

onde [A] = concentrao do substrato, t = tempo e k = constante de


proporcionalidade designada constante de velocidade (sua unidade
o recproco do tempo, s 1 ) que depende das condies da reao
(temperatura, pH e fora inica). O sinal negativo para as variaes
da [A] indica que A est sendo consumido na reao. A equao
mostra que a velocidade da reao diretamente proporcional a
concentrao do reagente A. O processo exibe c intica de primeira
ordem (Figura 3.8).
Quando a adio de mais reagente no aumenta a velocidade, a
reao exibe cintica de ordem zero (Figura 3.8). A expresso da
velocidade para a reao A P
Velocidade = k [A] 0 = k

Velocidade inicial 0

A velocidade constante porque no depende da concentrao


dos reagentes, mas de outros fatores. A quantidade de reagente o
suficiente grande para saturar todos os stios catalticos das molculas
enzimticas. Assim, o reagente s existe na forma de complexos
enzimasubstrato (ES). Como a curva velocidade-substrato
hiperblica, a fase de ordem zero atinge uma velocidade mxima,
V max .

Cintica de ordem zero

Cintica de primeira ordem

Concentrao de substrato [S]


Figura 3.8
Efeito da concentrao do substrato sobre a velocidade inicial ( 0 ) em
reaes catalisadas por enzimas.

Uma reao bimolecular ou de segunda ordem pode ser escrita:


A+BC
Sua equao de velocidade

83

84

MOTTA Bioqumica

Velocidade =

[A ]
[B]
=
= k[A ][B]
t
t

O k a constante de velocidade de segunda ordem e tem como


unidade M 1 s 1 . A velocidade de uma reao de segunda ordem
proporcional ao produto da concentrao dos dois reagentes ([A][B]).

3.7 Cintica enzimtica


O estudo da velocidade das reaes enzimticas ou cintica
enzimtica, envolve informaes indiretas sobre o mecanismo de ao
cataltica, especificidade das enzimas, alguns fatores que afetam a
velocidade das reaes e a determinao quantitativa de seus efeitos.
Apesar de catalisarem uma grande variedade de reaes por
diferentes mecanismos, as enzimas podem ser analisadas quanto as
suas velocidades para quantificar as suas eficincias.
Quando o substrato S liga o stio ativo de uma enzima E, um
complexo enzima substrato (ES) formado em processo rpido e
reversvel antes da formao do produto. Aps um breve tempo, o
produto se dissocia da enzima conforme a equao:
E + S ' ES P
onde
k 1 = constante de velocidade para a formao do complexo ES
k 2 = constante de velocidade para a dissociao de ES em P
k 3 = constante de velocidade para a formao de produto e liberao
do stio ativo.
A relao quantitativa entre a velocidade de reao enzimtica e a
concentrao do substrato definida pela equao de
Michaelis Menten (Leonor Michaelis e Maud Menten em 1913). No
desenvolvimento da equao deve-se supor que (1) o k 2
negligencivel quando comparado com k 1 e (2) a velocidade de
formao de ES igual a velocidade de sua degradao no sofrendo
alteraes durante a medida da velocidade ( postulado do estado
estacionrio ):
Velocidade =

P
= k 3[ES]
t

Para ter utilidade, a velocidade de uma reao deve ser definida


em termos de [S] e [E]. A velocidade de formao de ES igual a
k 1 [E][S], enquanto a velocidade de dissociao de ES igual a ( k 2 +
k 3 )[ES]. O postulado do estado estacionrio iguala as duas
velocidades:

K 1 [E][S] = ( k 2 + k 3 )[ES]

[ES] =

[E] [S]
(k 2 + k 3 ) k1

Michaelis e Menten introduziram uma nova constante, K m

3 Enzimas

Km =

k 2 + k3
k1

assim, a expresso de velocidade pode ser obtida aps manipulao


algbrica adequada:
o =

Vmax [S]
K m + [S]

Essa a equao de MichalisMenten que relaciona a velocidade


inicial ( o , mudana na concentrao de reagente ou produto durante
os primeiros poucos segundos da reao) de uma reao catalisada
por enzima com a concentrao do substrato. As duas constantes
nessa equao, a velocidade mxima (V max, velocidade atingida sob
condies de saturao da enzima em condies especficas de
temperatura, pH e fora inica) e K m so especficas para cada
enzima sob condies especficadas de pH e temperatura. Para
aquelas, onde k 3 <<k 2 , a K m torna-se a recproca da constante de
ligao enzima-substrato:
Km =

1
Ka

e a V max reflete a fase cataltica do mecanismo enzimtico conforme


sugere a equao 3.1. Em outras palavras, nesse modelo simples da
atividade da enzima distingue-se duas fases: inicialmente a ligao do
substrato seguida pela modificao qumica do mesmo.
Se for permitido velocidade inicial de reao, 0 , ser igual a
metade da velocidade mxima (v 0 = V max ) na equao 3.3, o K m ser
igual a [S]:
V [S]
1 V
= max
2 max K + [S]
m

Dividindo por V max , obtm-se

[S]
1
=
2 K m + [S]
Reorganizando a equao:
K m + [S] = 2[S]
K m = [S]
O valor do K m (constante de Michaelis) numericamente igual
concentrao do substrato (mol/L) na qual a velocidade inicial da
reao corresponde metade da velocidade mxima. Ou seja, na
concentrao de substrato em que [S] = K m , a equao de
MichaelisMenten torna-se 0 = V max /2. A concentrao da enzima
no afeta o K m .

85

MOTTA Bioqumica

Velocidade inicial 0

86

Concentrao de substrato [S]


Figura 3.9
Determinao do K m
pelo grfico de velocidade inicial (v 0 ) versus
concentrao do substrato, [S]. O K m a concentrao do substrato (mol
por litro) na qual a velocidade inicial da reao metade da velocidade
mxima.

Valores pequenos de K m refletem afinidade elevada da enzima


pelo substrato e, portanto, atingir a mxima eficincia cataltica em
baixas concentraes de substrato. Valores grandes de K m refletem
baixa afinidade da enzima pelo substrato.
Tabela 3.2 Valores do K m para algumas enzimas
Enzima

Substrato

Anidrasecarbnica

CO 2

ArgininatRNAsintetase

Arginina

K m (M)
8.000
3

tRNA

0,4

ATP

300

Galactotidase

Lactose

Lisozima

HexaNacetilglicosamina

Penicilase

Benzilpenicilina

Piruvatocarboxilase

Piruvato
HCO 3 ATP

4.000
6
50
400
1.000
60

Quimiotripsina

Acetil1triptofanamida

5.000

Treoninadesaminase

Treonina

5.000

A. Constante cataltica (k cat )


As enzimas nas clulas e fludos do corpo normalmente no
atuam em concentraes saturadas de substrato. Para avaliar a
eficincia cataltica de uma enzima, define-se a constante cataltica,
k cat tambm conhecida como nmero de reciclagem (turnover
number):

3 Enzimas

k cat =

V max
[E]total

k cat representa o nmero de molculas de substrato convertidos em


produto por segundo por molcula de enzima (ou por mol de stio
ativo nas enzimas oligomricas) sob condies de saturao. Em
outras palavras, o K cat indica o nmero mximo de molculas
convertidas em produto por segundo por cada stio ativo. [E] total =
concentrao total da enzima.
Tabela 3.3 Constantes catalticas de algumas enzimas
Enzima
Nuclease estafiliccica
Citidina deaminase
Triose fosfato isomerase

K c at (s )
95
299
4.300

Ciclofilina

13.000

Cetoesteride isomerase

66.000

Anidrase carbnica

1.000.000

B. Constante de especificidade (k cat /K m )


A relao k cat /K m chamada constante de especificidade e
relaciona a eficincia cataltica da enzima com a sua afinidade pelo
substrato. A velocidade da reao varia diretamente com a freqncia
de colises entre as molculas de enzima e as de substrato na soluo.
A decomposio do complexo ES em E + P no pode ocorrer mais
velozmente que o encontro de E e S para formar ES.
A relao k cat /K m , em geral, o melhor parmetro cintico para
comparaes de eficincia cataltica entre diferentes enzimas. Valores
baixos da relao indicam pouca afinidade da enzima pelo substrato.
Por exemplo, a acetilcolinoestarase tem valor de k cat /K m de 1,5 x 10 8
5
1
1
s M mostrando alta eficincia, enquanto a urease o valor 4 x 10
1
1
s M descreve uma menor eficincia.
Tabela 3.4 Constante de especificidade, k c at /K m , de algumas enzimas
Enzima
Acetilcolinesterase
Anidrase carbnica
Catalase
Crotonase
Fumarase
Triose phosphate isomerase

k ca t /K M (s M )
1

1.6 10 8
8.3 10 7
4
2.8
1.6
2.4

10 7
10 8
10 8
10 8

Lactamase

1 10 8

Superoxide dismutase

7 10 9

87

88

MOTTA Bioqumica

C. Grfico de Lineweaver-Burk
Os valores do K m e da V max de uma enzima so determinados pela
medida das velocidades iniciais para vrias concentraes de
substrato. Pela construo do grfico mostrado na Figura 3.6 s
possvel calcular valores aproximados de K m e da V max . A
determinao mais acurada desses valores possvel pela
modificao algbrica da equao de MichaelisMenten:
o =

Vmax [S]
K m + [S]

utilizando o inverso da equao:


1
v0

Km
Vmax

[ S]

1
Vmax

A representao grfica da recproca de velocidade inicial, 1/ 0 ,


versus a recproca da concentrao do substrato, 1/[S], fornece uma
linha reta com inclinao K m /V max em um grfico duplo-recproco ou
LineweaverBurk. O ponto onde essa linha intercepta a ordenada
igual a 1/V max , e o ponto de interseco na abscissa igual a-1/K m
(Figura 3.10). A utilizao do grfico permite calcular com preciso
V max e K m pela medida da inclinao e do intercepto.

1/0

Inclinao = Km/Vmax

1/Vmax
-1/Km

1/[S]

Figura 3.10
Determinao da V m ax e K m a partir do grfico duplo-recproco de
Lineweaver-Burk. O grfico 1/ 0 versus 1/[S] derivado de medidas das
velocidades iniciais em vrias concentraes diferentes de substratos. A linha
reta obtida pela ligao de pontos individuais ampliada para interceptar a
ordenada e abscissa. Os valores de K m e V m a x so determinados pela medida
das inclinaes e interseces.

D. Reaes com multissubstratos


Mais da metade das reaes bioqumicas envolvem dois
substratos, em lugar de reaes simples com um nico substrato e que

3 Enzimas

obedecem o modelo de Michaelis Menten. As reaes


multissubstratos podem proceder por diferentes mecanismos:

com

1. Mecanismo ordenado. Os substratos, S 1 e S 2 , devem associar-se


enzima com uma ordem obrigatria antes que a reao possa
ocorrer. A ligao do primeiro substrato necessria para que a
enzima forme o stio de ligao para o segundo substrato. Muitas
desidrogenases nas quais o segundo substrato uma coenzima
(NAD + , FAD etc.) so exemplos desse mecanismo.
2. Mecanismo aleatrio. Os dois substratos, S 1 e S 2 , podem se ligar
enzima em qualquer ordem. A hexocinase transfere um grupo
fosfato do ATP para a glicose por esse mecanismo, apesar da
glicose tender ligar inicialmente a molcula de ATP.
3. Reaes de dupla troca (pingue pongue). Um ou mais produtos
so liberados antes que os outros substratos se liguem enzima
modificada. As reaes catalisadas pela UDP glicose 1 fosfato
uridiltransferase, piruvatocarboxilase e acetilCoAcarboxilase
so exemplos desse mecanismo.

3.8 Inibio enzimtica


Inibidores so substncias que reduzem a atividade das enzimas e
incluem frmacos, antibiticos, preservativos de alimentos e venenos.
So importantes por vrias razes: (1) Os inibidores enzimticos
atuam como reguladores das vias metablicas. (2) Muitas terapias por
frmacos so baseadas na inibio enzimtica. Por exemplo, muitos
antibiticos e frmacos reduzem ou eliminam a atividades de certas
enzimas. O tratamento da AIDS inclui inibidores das proteases,
molculas que inativam a enzima necessria para produzir novos
vrus. (3) Desenvolvimento de tcnicas para demonstrar a estrutura
fsica e qumica, e as propriedades funcionais das enzimas.
Distinguem-se dois tipos de inibio: reversvel e irreversvel,
segundo a estabilidade da ligao entre o inibidor e a molcula de
enzima. Na inibio reversvel ocorre interaes no-covalentes entre
o inibidor e a enzima, enquanto na inibio irreversvel envolve
modificaes qumicas da molcula enzimtica, levando a uma
inativao definitiva. Na inibio reversvel, a enzima retoma sua
atividade aps dissociao do inibidor. Trs classes de inibidores
reversveis
so
descritos:
competitivo,
nocompetitivo
e
incompetitivo.

89

90

MOTTA Bioqumica

Quadro 3.4 Inibidores de enzimas do HIV

O vrus da imunodeficincia humana (HIV) leva


sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS)
infectando as clulas do sistema imune. Nas
primeiras etapas da infeco, o HIV fixa-se clulaalvo e injeta o seu material gentico (RNA em vez de
DNA) na clula hospedeira. O RNA viral transcrito
em DNA por uma enzima viral conhecida como
transcriptase reversa. A seguir, o DNA integrado no
genoma do hospedeiro, e a clula pode produzir mais
RNA viral e protenas para empacot-los em novas
partculas virais.

Vrios inibidores da transcriptase reversa foram


desenvolvidos. O arqutipo o AZT (3-azido-3desoxitimidina; Zidovudina), o qual absorvido pelas
clulas, fosforilado e incorporado nas cadeias de
DNA sintetizadas pela transcriptidase reversa a partir
do molde do HIV. Uma vez que o AZT no possui o
grupo 3-OH, ele funciona como um terminador de
cadeia,
da
mesma
maneira
que
os
didesoxinucleotdeos utilizados no sequenciamento
do DNA. A maioria das DNA-polimerases celulares
tem baixa afinidade pela AZT fosforilado, mas a
transcriptidase reversa tem uma alta afinidade por
essa droga, o que torna o AZT efetivo contra a
replicao.

A. Inibio competitiva
Inibidores competitivos so substncias que competem
diretamente com o substrato normal pelo stio ativo das enzimas. So
molculas estruturalmente semelhantes ao substrato. O inibidor (I)
competitivo reage reversivelmente com a enzima para formar um
complexo
enzima inibidor
(EI)
anlogo
ao
complexo
enzima substrato, mas cataliticamente inativo:
E + I ' EI + S No h reao
A atividade da enzima declina por no ocorrer a formao do
complexo enzimasubstrato durante a existncia do complexo EI. A
ao do inibidor pode ser revertida aumentando-se a quantidade de
substrato. Em altas [S], todos os stios ativos esto preenchidos com
substrato e a velocidade da reao atinge o mesmo valor que o
observado sem o inibidor.
Como o substrato e o inibidor competem pelo mesmo stio de
ligao na enzima, o K m para o substrato mostra um aumento aparente
em presena do inibidor. Ou seja, mais substrato necessrio para
atingir a metade da V max . No h alterao na V max quando a
concentrao do substrato suficientemente elevada.
Um exemplo clssico de inibio competitiva envolve a enzima
succinato desidrogenase uma enzima do ciclo do cido ctrico que
converte o succinato a fumarato pela remoo de dois tomos de
hidrognio:

COOH

COOH

CH2

CH

CH2

CH

COOH

COOH

H2

O malonato anlogo em sua estrutura ao succinato e liga-se ao


stio ativo da enzima mas no convertido a produto.

3 Enzimas

COOH
CH2

Produto

COOH
O mecanismo da inibio competitiva mostrado na Figura 3.11.
S

+ Substrato
I
Enzima

Inibidor
Inibida

+ Inibidor
competitivo

1
0

Sem inibidor

No inibida

(-Inibido)

(+Inibido)

[S]

1/[S]

Figura 3.11
Inibio competitiva. Grficos de v o versus concentrao de substrato para
uma reao de MichaelisMenten na presena de um inibidor competitivo. A
segunda figura mostra o mesmo tipo de inibio em um grfico de
LineweaverBurk.

B. Inibio no-competitiva
O inibidor no-competitivo se liga tanto enzima como ao
complexo ES em um stio diferente do stio de ligao do substrato. A
ligao do inibidor no bloqueia a ligao do substrato, mas provoca
uma modificao da conformao da enzima que evita a formao de
produto:
E + I ' EI + S ' EIS No h reao
E + S ' ES + I ' EIS No h reao
A inibio no reverte pelo aumento na concentrao do
substrato. O inibidor reduz a concentrao da enzima ativa e, assim,
diminui a V max aparente. Nesses casos, o inibidor no afeta o K m para
o substrato. O inibidor no-competitivo no apresenta semelhana
estrutural com o substrato. Os metais pesados, Hg 2+ e Pb 2+ , que
ligam-se aos grupos sulfidrlicos e modulam a conformao da
enzima, so exemplos de inibidores no-competitivos

91

MOTTA Bioqumica

S
+

I
I

Inibida

1
0

Sem inibidor

+ Inibidor nocompetitivo

No inibida
1/[S]

(S)

Figura 3.12
Inibio no-competitiva. A. Efeito da concentrao do substrato sobre a
velocidade inicial na presena de um inibidor no-competitivo. B. Grfico de
Lineweaver-Burk para a reao mostrada em A.

C. Inibio incompetitiva
O inibidor incompetitivo liga-se apenas ao complexo ES da
enzima originando um complexo inativo, ESI. O inibidor no se
combina com a enzima livre.
E + S ' ES + I ' EIS No h reao
A inibio no revertida pelo aumento na concentrao do
substrato. O resultado a modificao aparente do K m e V max . (Figura
3.14).
Sem inibidor

Inibida

+ Inibidor
competitivo

1
0

92

No inibida
(-Inibido)

(+Inibido)

[S]

1/[S]

Figura 3.13
Grfico de Lineweaver-Burk para um inibidor incompetitivo.

D. Inibio irreversvel
A inibio irreversvel envolve modificao covalente e
permanente do grupo funcional necessrio para a catlise, tornando a
enzima inativa. classificado como um inativador. Alguns pesticidas
inibem o stio ativo da acetilcolinaesterase, o que impede a hidrlise

3 Enzimas

da acetilcolina na sinapse, resultando, no homem, paralisia dos


msculos respiratrios e edema pulmonar.

E. Frmacos que atuam como inibidores enzimticos


Muitos frmacos modernos atuam como inibidores da atividade
enzimtica. Esse mecanismo encontrado com antivirais,
antitumorais e antibacterianos. Os compostos com diferentes
estruturas em relao ao substrato natural que atuam como inibidores
so conhecidos como antimetablitos. Entre os quais citam-se, as
sulfas (a sulfanilamida compete com o cido paminobenzico
necessrio para o crescimento bacteriano), o metotrexato (compete
com o diidrofolato e usado no tratamento da leucemia infantil),
substratos suicidas (geram uma espcie altamente reativa que reage
de forma irreversvel com o stio ativo, exemplo, o Omeprazol usado
no tratamento de excessiva acidez estomacal), fluorouracil (inibidor
irreversvel da timidilatosintetase) e 6 mercaptopurina (compete
com a adenina e guanina e efetiva no tratamento de leucemias
infantis).

3.9 Regulao da atividade enzimtica


Alm da influncia exercida sobre a atividade enzimtica de
diversos fatores, tais como: concentrao do substrato e enzima, pH,
temperatura e presena de cofatores, tem-se tambm, a integrao
das enzimas nas vias metablicas e a interrelao dos produtos de
uma via com a atividade de outras vias. As vias metablicas no
operam em capacidade mxima o tempo todo. De fato, muitos
processos podem ser interrompidos, inibidos ou ativados, durante
certas fases no ciclo de vida da clula. Se assim no fosse, a clula
teria um crescimento descontrolado e antieconmico.
A regulao das vias metablicas ocorre por meio da modulao
da atividade de uma ou mais enzimas-chave do processo. A etapa de
maior energia de ativao denominada etapa de comprometimento
(geralmente uma reao irreversvel). Comumente, enzima-chave que
catalisa a etapa comprometida serve como vlvula de controle do
fluxo de molculas no percurso metablico.

93

94

MOTTA Bioqumica

Quadro 3.5 Inibidores irreversveis

Inibidores
enzimticos
irreversveis
so
geralmente
substncias
txicas.
Podem
ser
substncias naturais ou sintticas.
Os
compostos
organofosforados
como
o
diisopropilfosfofluoridato (DIFP), formam ligaes
covalentes com o grupo OH de resduos de serina
195 da acetilcolinesterase (enzima que catalisa a
hidrlise
da
acetilcolina),
inativando-a.
A
iodoacetamida, reage com o grupo SH de resduos de
cistena. Esses inibidores so bastante txicos para
os organismos, no s pela irreversibilidade de sua
ligao s enzimas, mas tambm devido sua
inespecificidade.

Outro exemplo de inibidor irreversvel a


aspirina
(cido
acetil-saliclico),
porm
com
propriedades
farmacolgicas
(antiinflamatrio,
antipirtico e analgsico). A aspirina transfere
irreversivelmente seu grupo acetil para o grupo OH
de um resduo de serina da molcula de
cicloxigenase,
inativando-a.
Essa
enzima

responsvel pela catlise da primeira reao da


sntese de prostaglandinas (substncias reguladoras
de muitos processos fisiolgicos).
A penicilina liga-se especificamente s enzimas
da via de sntese da parede bacteriana, inibindo-as
irreversivelmente.

A regulao das vias bioqumicas envolve mecanismos


sofisticados e complexos. conseguida principalmente pelo ajuste
das concentraes e atividades de certas enzimas. O controle
atingido por: (1) controle gentico, (2) modificao covalente, (3)
regulao alostrica e (4) compartimentalizao.

A. Controle gentico
A quantidade das enzimas disponveis nas clulas depende da
velocidade de sua sntese e da velocidade de sua degradao. A
sntese de enzimas em resposta s mudanas das necessidades
metablicas um processo conhecido como induo enzimtica, que
permite a resposta celular de maneira ordenada s alteraes no meio.
A sntese de certas enzimas pode ser especificamente inibida por
represso. O produto final de uma via bioqumica pode inibir a
sntese de uma enzima-chave da mesma via.

B. Regulao por modificao covalente


A atividade de algumas enzimas que modulam o fluxo das vias
metablicas, regulada por modificaes covalentes reversveis, em
reaes catalisadas por outras enzimas. Isso resulta na ativao ou
inibio da atividade enzimtica. Freqentemente, a modificao
envolve a fosforilao e defosforilao da enzima por adio ou
remoo de grupos fosfato ou, por modificaes covalentes de outro
tipo. As fosforilao e defosforilao so catalisadas por
protenascinases e protenasfosfatases, respectivamente. Como
exemplo do processo regulador, tem-se a enzima glicognio
fosforilase que catalisa o desdobramento do glicognio. A enzima se
apresenta na forma fosforilada (ativa) e desfosforilada (inativa) em
processo de interconverso cclica entre as duas formas. O
mecanismo geral de regulao por modificao covalente est
intimamente associado ao hormonal.

3 Enzimas

Outros exemplos de modificaes covalentes reversveis incluem


acetilao desacetilao,
adenilao desadenilao,
uridinilao desuridililao e metilao desmetilao.

C. Regulao alostrica
As enzimas reguladas por moduladores ligados a stio(s)
adicional(is) e que sofrem mudanas conformacionais no-covalentes
so denominadas alostricas. A afinidade da ligao enzima-substrato
das enzimas alostricas modificada por ligantes denominados
efetores ou moduladores alostricos, unidos reversvel e
no covalentemente a locais especficos da estrutura tridimensional
protica e nominados stios alostricos, que so diferentes e distantes
dos stios ativos especficos para os substratos. Os efetores so
pequenas molculas orgnicas, por exemplo, o ATP (trifosfato de
adenosina), protenas de baixo peso molecular, substratos ou produtos
da reao. A maioria das enzimas sujeitas a esses efeitos so
decisivas na regulao do metabolismo intermedirio.
Os efetores podem ser:

Efetor alostrico positivo aumenta a afinidade da enzima pelo


substrato e, assim, eleva a velocidade da reao.

Efetor alostrico negativo reduz a afinidade da enzima pelo


substrato e, assim, diminui a velocidade da reao.

A maioria das enzimas alostricas oligomrica; ou seja, so


compostas de vrias subunidades polipeptdicas, cada uma com um
stio ativo. Em algumas enzimas, o stio alostrico e o stio ativo
esto localizados na mesma subunidade (ex.: piruvatocarboxilase);
em outras, esto localizados em subunidades diferentes (ex.:
aspartatocarbamoiltransferase). Em conseqncia da natureza
oligomrica das enzimas alostricas, a ligao do substrato a uma
subunidade pode afetar a ligao de outras molculas de substrato aos
outros stios ativos. Cooperatividade a influncia que a unio de um
ligante a uma protmero tem sobre a unio de ligante a outro
protmero numa protena oligomrica. A interao estabelecida entre
os stios ativos evidenciada pela cintica da catlise: o grfico de o
versus a concentrao de substrato [S] uma curva sigmide, em
lugar da curva hiperblica de MichaelisMenten (Figura 3.14).
Quanto a cooperatividade as reaes podem ser:

Positivamente cooperativa onde a ligao do primeiro substrato


aumenta a afinidade de substratos adicionais por outros stios
ativos.

Negativamente cooperativa em que a ligao do primeiro


substrato reduz a afinidade por substratos adicionais.

95

MOTTA Bioqumica

96

[S]
Figura 3.14
Velocidade inicial da reao versus a concentrao de substrato (S)
para enzimas alostricas comparadas com enzimas noalostricas.

As enzimas alostricas podem exercer diferentes efeitos:

Interaes homotrpicas. A unio do ligante a um protmero


pode afetar a unio de ligantes aos outros protmeros do
oligmero.

Interaes heterotrpicas. o efeito de um ligante sobre a


ligao de um ligante diferente; o efeito pode ser tanto positivo
como negativo.

Algumas enzimas alostricas tm dois ou mais efetores e podem


ser reguladas por efetores positivos e negativos que podero estar
presentes em diferentes concentraes.

(a)

(b)

Figura 3.15
Modelos de sistemas de enzimas alostricas. (a) Modelo de uma enzima
monomrica. A ligao de um efetor alostrico positivo (A) ao stio ativador, j,
induz a uma nova conformao da enzima, com maior afinidade pelo substrato. A
ligao de um efetor alostrico negativo ao stio inibidor, i, resulta numa
conformao da enzima com afinidade diminuda pelo substrato (S). (b) Modelo
de uma enzima alostrica polimrica. A ligao de um efetor alostrico positivo
(A) no stio j, causa uma mudana alostrica na conformao do protmero ao
qual o efetor se liga que transmitida a um segundo protmero por meio de
interaes cooperativas protmero protmero. A afinidade pelo substrato

3 Enzimas

aumenta nos dois protmeros. Um efetor negativo diminui a afinidade pelo


substrato nos dois protmeros.

Dois modelos explicam o comportamento de enzimas alostricas


com curvas sigmoidais v 0 versus [S] que refletem as interaes
cooperativas entre as subunidades oligomricas:

1. Modelo concertado (ou de simetria) . Proposto por Monod,


Wyman e Changeux, onde as subunidades esto todas na forma
inativa (T, tenso) ou todas na forma ativa (R, relaxado). Os estados T
e R esto em equilbrio. Ativadores e substratos favorecem o estado
R. Inibidores favorecem o estado T. Uma mudana conformacional
num protmero causa uma mudana correspondente em todos os
protmeros.
2. Modelo seqencial. Proposto por Koshland, Nmethy e Filmer
as subunidades podem sofrer a mudana conformacional
individualmente. A ligao do substrato aumenta a probabilidade da
mudana conformacional. A mudana em uma subunidade faz ocorrer
uma mudana similar na subunidade adjacente, vizinho do protmero
contendo o ligante unido, assim como torna mais provvel a ligao
de uma segunda molcula de substrato.
Modelo concertado
+

Modelo seqencial
+

Estado T

Estado R

Substrato

Figura 3.16
Comportamento das enzimas alostricas. No modelo concertado, todas as unidades so
convertidas do estado T (baixa afinidade) para o estado R (alta afinidade) simultaneamente. No
modelo seqencial, as subunidades sofrem mudanas conformacionais progressivamente com
as ligaes do substrato.

D. Zimognios
Muitas enzimas so sintetizadas como precursores inativos e,
subsequentemente, ativadas pela clivagem de uma ou mais ligaes
peptdicas especficas. O precursor inativo chamado zimognio (ou
proenzima). No necessria uma fonte de energia (ATP) para a
clivagem.

97

98

MOTTA Bioqumica

As formas zimognios so geralmente designadas pelo sufixo


ognio depois do nome da enzima; a forma zimognio da
quimotripsina denominada quimotripsinognio. Algumas vezes, a
forma zimognio referida pr-enzima; a forma zimognio do
colgeno o procolgeno.
A protelise especfica um meio comum de ativao de enzimas
e outras protenas nos sistemas biolgicos. Exemplos:

As enzimas digestivas que hidrolisam protenas so sintetizadas


como zimognios no estmago e pncreas (Quadro 3.3).

A coagulao sangnea mediada por uma cascata de ativadores


proteolticos que asseguram uma rpida e amplificada resposta a
leso celular. Os zimognios so sintetizados nas clulas do
fgado e so secretados no sangue para subseqente ativao por
serino-proteases.

Alguns hormnios proticos so sintetizados como precursores


inativos. Por exemplo: a insulina derivada da prinsulina pela
remoo proteoltica de um peptdeo.

A protena fibrosa colgeno, o maior constituinte da pele e ossos,


derivado do procolgeno, um precursor solvel.

Muitos processos de desenvolvimento so controlados pela


ativao de zimognios. Por exemplo, parte do colgeno
desdobrado no tero dos mamferos aps o parto. A converso da
prcolagenases em colagenases, a protease ativa, realizado no
momento apropriado dentro do processo.

A apoptose ou a morte celular programada mediada por


enzimas proteolticas denominadas captases e sintetizadas na
forma de precursor prcaspases. Quando ativadas por vrios
sinais, as caspases atuam na morte celular. A apoptose promove
um meio de esculpir as formas de parte do corpo no curso do
desenvolvimento e um meio de eliminar clulas produtoras de
auto-anticorpos ou infectadas com patgenos tambm como,
clulas contendo uma grande quantidade de DNA lesado.

Quadro 3.3 Zimognios gstricos e pancreticos


Local de sntese

Zimognio

Enzima ativa

Estmago

Pepsinognio

Pepsina

Pncreas

Quimiotripsinognio

Quiniotripsina

Pncreas

Tripsinognio

Tripsina

Pncreas

Prcarboxipeptidase

Carboxipeptidase

Pncreas

Proelastase

Elastase

E. Isoenzimas
Outro fenmeno de regulao metablica e que depende da
estrutura quaternria das protenas enzimticas so as isoenzimas. As
isoenzimas ou isozimas so formas moleculares mltiplas de uma

3 Enzimas

enzima, que realizam a mesma ao cataltica e ocorrem na mesma


espcie animal. O exemplo clssico a lactatodesidrogenase (LDH)
um tetrmero formado por duas espcies diferentes de cadeias
polipeptdicas, denominadas M (msculo) e H (corao). Essas
subunidades so codificadas por genes diferentes. A combinao das
duas cadeias produz cinco isoenzimas que podem ser separadas
eletroforeticamente (Quadro 3.4).
Quadro 3.4 Composio das subunidades da lactato-desidrogenase e
suas principais localizaes
Tipo

Composio

Localizao

LDH1

HHHH

Miocrdio e eritrcitos

LDH2

HHHM

Miocrdio e eritrcitos

LDH3

HHMM

Crebro e fgado

LDH4

HMMM

LDH5

MMMM

Msculo esqueltico e fgado

A lactato desidrogenase catalisa a reduo reversvel do piruvato


a lactato. Desse modo, no msculo esqueltico a isoenzima LDH 5
apresenta V max elevada para o piruvato e, portanto, converte
rapidamente o piruvato a lactato. No caso da LDH 1, encontrada no
corao a V max relativamente baixa para o piruvato, no favorecendo
a formao do lactato. O excesso de piruvato inibe a isoenzima
LDH 1. O msculo cardaco, um tecido essencialmente aerbico,
metaboliza a glicose a piruvato e, a seguir, a CO 2 e H 2 O, produzindo
pouco lactato. Entretanto, em situaes de dficit de oxignio, o
piruvato pode ser convertido a lactato como medida de emergncia.
Assim, as caractersticas cinticas distintas das duas enzimas
determinam o tipo de metabolismo em cada tecido.
Foram estudadas isoenzimas de vrias enzimas diferentes, sendo
as mais importantes, do ponto de vista clnico, alm da lactato
desidrogenase, a creatina cinase e a fosfatase alcalina.

3.10 Aplicaes clnicas das enzimas


Muitas
das
enzimas
presentes
no
plasma,
lquido
cefalorraquidiano,
urina
e
exudatos,
so
provenientes,
principalmente, do processo normal de destruio e reposio celular.
Entretanto, certas enzimas se apresentam, nesses lquidos, em teores
elevados aps leso tecidual provocadas por processos patolgicos
com o aumento na permeabilidade celular ou morte prematura da
clula. Nos casos de alterao da permeabilidade, as enzimas de
menor massa molecular aparecem no plasma. Quanto maior o
gradiente de concentrao entre os nveis intra e extracelular, mais
rapidamente a enzima difunde para fora. As enzimas citoplasmticas
surgem no plasma antes daquelas presentes nas organelas
subcelulares. Quanto maior a extenso do tecido lesado, maior o
aumento no nvel plasmtico. As enzimas no especficas do plasma

99

100

MOTTA Bioqumica

so clarificadas em vrias velocidades, que dependem da estabilidade


da enzima e sua susceptibilidade ao sistema reticuloendotelial.
Algumas enzimas tem sua atividade no prprio plasma; por
exemplo, as enzimas associadas a coagulao sangnea (trombina),
dissoluo de fibrina (plasmina) e clareamento de quilomicrons
(lipase lipoprotica). As enzimas mais ensaiadas no laboratrio
clnico so mostradas na Quadro 3.5.
Quadro 3.5 Enzimas rotineiramente ensaiadas no laboratrio clnico
Enzimas

rgo ou tecido afetado

Aldolase

Msculo, corao

Amilase

Pncreas

Creatina cinase (CK ou CPK)

Corao, msculo, crebro

Fosfatase cida

Prstata (carcinoma)

Fosfatase alcalina

Fgados, ossos

Lactato desidrogenase (DHL)

Fgado, corao, eritrcitos

Lipase

Pncreas

-Glutamil transpeptidase

Fgado

Glicose 6 P desidrogenase

Eritrcitos (doena gentica)

Transaminase oxalactica (OT)

Fgado, corao

Transaminase pirvica (PT)

Fgado, corao

Resumo
1. As enzimas so catalisadores biolgicos. Elas aumentam a velocidade da
reao pois seguem uma via alternativa que necessita menos energia que
a reao no-catalisada. As enzimas so especficas para o ripo de reao
que catalisam. Cada tipo de enzima possui um local especfico em sua
superfcie denominado stio ativo, que uma pequena fenda onde se liga
o substrato. No modelo chave e fechadura, a fenda do stio ativo e o
substrato so complementares. No modelo do encaixe-induzido
protena mais flexvel e se adapta ao substrato.
2. Cada enzima classificada de acordo com o tipo de reao que catalisa.
Existem seis tipos de categorias enzimticas: oxidorredutases,
transferases, hidrolases, liases, isomerases e ligases.
3. A cintica enzimtica o estudo quantitativo da catlise por enzimas. De
acordo com o modelo de Michaelis Menten, quando o substrato S liga-se
ao stio ativo de uma enzima E, um complexo de estado de transio
formado. Durante o estado de transio, o substrato convertido em
produto. Aps algum tempo, o produto se dissocia da enzima.
4. O nmero de renovao (K cat ) a medida do nmero de molculas de
substrato convertidos em produto por unidade por uma enzima quando
ela est saturada de substrato. O termo K cat/ K m descreve a eficincia da
enzima.
5. A inibio enzimtica pode ser reversvel ou irreversvel. Os inibidores
irreversveis geralmente ligam-se covalentemente s enzimas. Na
inibio reversvel, o inibidor pode dissociar-se da enzima. Os tipos mais

3 Enzimas

comuns de inibio reversvel so a competitiva, no competitiva e a


incompetitiva.
6. As propriedades cinticas das enzimas alostricas no so explicadas
pelo modelo de Michaelis Menten. A maioria das enzimas alostricas so
protenas multi-subunidades. A ligao do substrato ou efetor a uma
subunidade afeta as propriedades de ligao dos outros protmeros.
7. As enzimas empregam os mesmos mecanismos dos catalizadores noenzimticos. Vrios fatores contribuem para a catlise enzimtica:
efeitos de proximidade e orientao, efeitos eletrostticos, catlise
cido base e catlise covalente. A combinao desses fatores afetam os
mecanismos enzimticos.
8. As cadeias laterais de aminocidos presentes nos stios ativos so os
principais responsveis pela transferncia de prtons e substituies
nuclefilas. Co-fatores no proticos (metais e coenzimas) so usados
pelas enzimas para catalisar vrios tipos de reaes.
9. As enzimas so sensveis aos fatores ambientais como a temperatura e
pH. Cada enzima tem uma temperatura tima e um pH timo.
10. As reaes qumicas nas clulas vivas so organizadas em uma srie de
vias bioqumicas. As vias so controladas principalmente pelo ajuste das
concentraes e atividades das enzimas por meio do controle gentico,
modificao covalente, regulao alostrica e compartimentalizao.

101

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Introduo ao
Metabolismo

4
Introduo ao Metabolismo

Objetivos
1.

Aplicar as leis da termodinmica s reaes bioqumicas.

2.

Conceituar entalpia, entropia e energia livre.

3.

Identificar o sentido de uma reao enzimtica em funo do valor da energia


livre padro ou da constante de equilbrio qumico.

4.

Descrever as reaes acopladas.

5.

Conceituar os compostos ricos em energia.

6.

Descrever as propriedades do ATP e seu papel no metabolismo.

7.

Interrelacionar o anabolismo e catabolismo.

8.

Discutir as estratgias intracelulares de regulao do metabolismo.

9.

Discutir o controle extracelular do metabolismo em relao a influncia


hormonal sobre o metabolismo celular.

10. Discutir a produo e o papel dos segundos mensageiros na transduo de


sinal.
11. Discutir o mecanismo de ao dos hormnios hidrofbicos.

Os processos fsicos e qumicos realizados pelas clulas vivas


envolvem a extrao, a canalizao e o consumo de energia. Os
mamferos empregam energia qumica extrada das molculas de
nutrientes (carboidratos, protenas e lipdeos no-esterides) para
realizar suas funes. Os processos qumicos celulares so
organizados em forma de uma rede de reaes enzimticas
interligadas, nas quais, as biomolculas so quebradas e sintetizadas
com a gerao e gasto de energia, respectivamente. Esto
relacionadas com:

A energia liberada nos processos de quebra de molculas


nutrientes orgnicos conservada na forma de ATP (trifosfato de
adenosina) e NADPH (nicotinamida adenina dinucleotdeo
fosfato).

103

104

MOTTA Bioqumica

Quadro 4.1 Fotossntese


Os processos fotossintticos utilizam a energia
luminosa captada por molculas de clorofila para
sintetizar carboidratos a partir do dixido de carbono
e gua. A clorofila e outros pigmentos das plantas
absorvem ftons de limitados comprimentos de onda.
Quando um fton absorvido pela clorofila, os
eltrons passam por uma srie de transportadores
que promovem a sua excitao. A energia dos
eltrons excitados transformada em energia
qumica armazenada nas molculas de ATP e
NADPH formados nas reaes de luz da fotossntese.
O ATP e o NADH reduzem ento o CO 2 e o
convertem a 3-fosfoglicerato por uma srie de
reaes no escuro (ciclo de Calvin). Formam-se
hexoses a partir do 3-fosfoglicerato. As hexoses so
armazenadas nos vegetais em duas formas
principais: amido e sacarose (acar de mesa).

A relao matemtica entre o comprimento de


onda (), freqncia da radiao () e energia dos
ftons, E,
E = hc/ = h
- 34

onde h a constante de Planck (6,63 x 10


Js)
8
e c a velocidade da luz no vcuo (2,998 x 10 ms
1
). As plantas utilizam a energia do sol para
transformar o dixido de carbono e gua em glicose
(C 6 H 1 2 O 6 ), oxignio e calor. A energia qumica
armazenada na forma de ligaes, por exemplo, as
ligaes glicosdicas (1 4) entre os monmeros de
glicose na celulose e nas ligaes entre os tomos
da prpria glicose.

Biossntese de macromolculas a partir de precursores mais


simples (unidades monomricas). cidos nuclicos, protenas,
lipdeos e polissacardeos so sintetizados a partir de
nucleotdios, aminocidos, cidos graxos e monossacardios,
respectivamente.

Transporte ativo de molculas e ons atravs das membranas em


direo contrria a gradientes de concentraes.

Movimento de clulas ou de suas partes componentes.

A demanda por energia e a formao de biomolculas variam


conforme a natureza do organismo, do tipo de clula, do interior da
clula, de seu estado nutricional e de seu estgio de desenvolvimento.
A atividade metablica celular regulada de tal modo que as
concentraes dos compostoschave so mantidas dentro de estreitos
limites. Em clulas saudveis, a biossntese restaura, em velocidade
apropriada, os compostos consumidos. O balano atingido pela
sntese de enzimas necessrias para a via ou, de modo mais imediato,
pela regulao da atividade das enzimas j existentes.

4.1 Ciclo do carbono


A fonte primria de energia empregada pelos seres vivos a fuso
termonuclear dos tomos de hidrognio para formar hlio que ocorre
na superfcie solar de acordo com a equao: 4H 1He + 2 positrons
+ energia. (Um positron uma partcula com a mesma massa de um
eltron, mas com carga positiva). A energia radiante da luz solar
(radiao eletromagntica) transportada para a Terra e convertida
em energia qumica por organismos fotoautotrficos (plantas verdes e
certos microorganismos) atravs da fotossntese. A energia qumica
armazenada na forma de compostos ricos em energia como
carboidratos que so sintetizados pela transferncia de eltrons da
molcula de gua para o CO 2 . Durante o processo, a maioria dos
organismos fotossintticos libera O 2 na atmosfera.
Os organismos heterotrficos, grupo que inclui os animais,
diretamente ou indiretamente, obtm todo o material estrutural e a

4 Introduo ao metabolismo

energia a partir de compostos orgnicos produzidos pelos


fotoautotrficos. Os produtos da fotossntese so vitais para os
organismos aerbicos que no contm o aparato molecular para a
transformao de energia da luz solar. Esses organismos obtm
energia por meio da oxidao de compostos orgnicos (carboidratos,
lipdeos e protenas) e produzem, entre outros compostos, o CO 2 que
retorna atmosfera para ser, subseqentemente, utilizado na
fotossntese. Esse ciclo de eventos denominado ciclo do carbono.

4.2 Vias metablicas


As caractersticas dos organismos vivos sua organizao
complexa e sua capacidade de crescimento e reproduo so
resultantes de processos bioqumicos coordenados. O metabolismo a
soma de todas as transformaes qumicas que ocorrem nos
organismos vivos. So milhares de reaes bioqumicas catalisadas
por enzimas. As funes bsicas do metabolismo celular so: (1)
obteno e utilizao de energia, (2) sntese de molculas estruturais
e funcionais, (3) crescimento e desenvolvimento celular e (4)
remoo de produtos de excreo.
Conforme os princpios termodinmicos, o metabolismo
dividido em duas partes:
1. Anabolismo. So os processos biossintticos a partir de
molculas precursoras simples e pequenas. As vias anablicas so
processos endergnicos e redutivos que necessitam de fornecimento
de energia.
2. Catabolismo. So os processos de degradao das molculas
orgnicas nutrientes e dos constituintes celulares que so convertidos
em produtos mais simples com a liberao de energia. As vias
catablicas so processos exergnicos e oxidativos.
Nutriente

ADP + Pi

Catabolismo

Produto de excreo

Produto

Anabolismo

ATP

Precursor

O catabolismo ocorre em trs estgios:

Primeiro estgio: as molculas nutrientes complexas (protenas,


carboidratos e lipdeos noesterides) so quebradas em
unidades menores: aminocidos, monossacardeos e cidos graxos
mais glicerol, respectivamente.

Segundo estgio: os produtos do primeiro estgio so


transformados em unidades simples como a acetilCoA (acetil
coenzima A) que exerce papel central no metabolismo.

Terceiro estgio: a acetilCoA oxidada no ciclo do cido ctrico


a CO 2 enquanto as coenzimas NAD + e FAD so reduzidas por

105

106

MOTTA Bioqumica

quatro pares de eltrons para formar trs NADH e um FADH 2 . As


coenzimas reduzidas transferem seus eltrons para o O 2 atravs
da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons, produzindo
H 2 O e ATP em um processo denominado fosforilao oxidativa.
Protenas

Carboidratos

Lipdios

Aminocidos

Hexoses

cidos Graxos

-Cetocidos

Piruvato

NH3
Acetil-CoA

Uria

Oxaloacetato

Citrato
Ciclo do
cido ctrico

Excreo

-Cetoglutarato
CO2 + H2 O

Excreo
Figura 4.1
Viso geral do catabolismo. Aminocidos, hexoses e cidos graxos so formados
pela hidrlise enzimtica de seus respectivos polmeros (protenas, carboidratos e
lipdeos). Os monmeros so desdobrados em intermedirios de dois e trs
carbonos, como o acetil CoA e o piruvato que, por sua vez, tambm so
precursores de outros compostos biolgicos. A completa degradao dessas
molculas produzem NH 3 , CO 2 , e H 2 O.

A energia livre liberada nas reaes catablicas (exergnicas)


utilizada para realizar processos anablicos (endergnicos). O
catabolismo e o anabolismo esto freqentemente acoplados por meio
do ATP (trifosfato de adenosina) e NADPH (nicotinamida adenina
dinucleotdeo fosfato, forma reduzida). O ATP o doador de energia
livre para os processos endergnicos. O NADPH o principal doador
de eltrons nas biossnteses redutoras.

4 Introduo ao metabolismo

ATP

Utilizao de energia

Produo de energia
Catabolismo

Carboidratos
Lipdios
Protenas

ADP + Pi
NADP+
Figura 4.2
Relao entre a produo de energia e a utilizao de energia. ATP
(trifosfato de adenosina), NADPH (nicotinamida adenina dinucleotdeo
fosfato, forma reduzida).

A capacidade dos organismos vivos em regular os processos


metablicos, apesar da variabilidade do meio interno e externo
chamada homeostase.

4.3 Termodinmica e metabolismo


O estudo dos efeitos da energia que acompanham as mudanas
fsicas e qumicas sobre a matria conhecido como termodinmica.
As leis da termodinmica so usadas para avaliar o fluxo e o
intercambio de matria e energia. A bioenergtica, um ramo da
termodinmica, o estudo de como as reaes metablicas produzem
e utilizam energia nos seres vivos e especialmente til na
determinao da direo e da extenso de cada reao bioqumica. As
reaes so afetadas por trs fatores. Dois deles, a entalpia (contedo
em calor total) e a entropia (medida da desordem), esto relacionados
com a primeira e segunda lei da termodinmica, respectivamente. O
terceiro fator, chamado energia livre (energia capaz de realizar
trabalho til), derivada da relao matemtica entre entalpia e
entropia.
As clulas dos organismos vivos operam como sistemas
isotrmicos (funcionam temperatura constante) que trocam energia
e matria com o ambiente. Em termodinmica, um sistema tudo que
est dentro de uma regio definida no espao (exemplo, um
organismo). A matria no restante do universo chamada de meio
circundante, circunvizinhana ou ambiente. Os organismos vivos so
sistemas abertos que jamais esto em equilbrio com o meio ambiente.

107

108

MOTTA Bioqumica

Quadro 4.2 Sistema e meio circundante


Os princpios de termodinmica esto baseados no
conceito de um sistema e seu meio circundante. O sistema
pode ser uma reao qumica, uma clula ou um organismo
para os quais os meios circundantes so o solvente da
reao, o lquido extracelular (ou matriz) ou o meio ambiente
no qual o organismo sobrevive, respectivamente. Trocas de
energia e/ou matria entre o sistema e o meio circundante
depende se o sistema fechado, isolado ou aberto. Em um
sistema fechado, no h troca de matria ou energia entre o
sistema e o meio circundante.

No sistema isolado, somente energia pode ser trocada


entre o sistema e o meio circundante. No sistema aberto,
ocorre troca de matria e energia com o meio circundante e
mas nunca est em equilbrio com o mesmo.
Os organismos vivos trocam matria (ex.: dixido de
carbono e oxignio) e energia (derivada do metabolismo na
forma de calor) com seu meio circundante. As clulas vivas
e os organismos so exemplos de sistemas abertos.

As leis da termodinmica descrevem as transformaes de


energia. As duas primeiras so especialmente teis na investigao
das mudanas nos sistemas vivos.
1. Primeira lei da termodinmica. Em qualquer mudana fsica
ou qumica, a quantidade de energia total do sistema e seu meio
circundante permanece constante. Esta lei estipula que a energia
pode ser convertida de uma forma para outra, mas no pode ser criada
nem destruda. As clulas so capazes de interconverter energia
qumica, eletromagntica, mecnica e osmtica com grande
eficincia. Por exemplo, no msculo esqueltico, a energia qumica
do ATP convertida em energia mecnica durante o processo de
contrao muscular. importante reconhecer que a troca de energia
de um sistema depende somente dos estado inicial e final e no do
mecanismo da equao.
2. Segunda lei da termodinmica. Para formular a segunda lei
necessrio definir o termo entropia (do grego, en, dentro de + trope,
curva). A entropia (S) a medida ou indicador do grau de desordem
ou casualidade de um sistema, ou a energia de um sistema que no
pode ser utilizada para realizar trabalho til.
A entropia definida em termos de nmero de arranjos possveis nas
molculas. A equao para a entropia
S = k B ln W
Em que k B a constante de Boltzmann (1,381 10 23 mol 1 ), ln
o logaritmo natural e W o nmero de arranjos na molcula. A S
(entropia) dada em JK 1 .
De acordo com a segunda lei, as reaes espontneas tendem a
progredir em direo ao equilbrio. Ao atingir o equilbrio, a
desordem (entropia) a mxima possvel sob as condies existentes.
A menos que o processo receba energia adicional de uma fonte
externa ao sistema, no ocorrer nenhuma outra mudana
espontaneamente.

A. Energia livre
Os organismos vivos necessitam de continuo aporte de energia
livre para trs processos principais: (1) realizao de trabalho
mecnico na contrao muscular e outros movimentos celulares, (2)
transporte ativo de molculas e ons e (3) sntese de macromolculas
e outras biomolculas a partir de precursores simples.

4 Introduo ao metabolismo

A energia livre de Gibbs (G) de um sistema a parte da energia


total do sistema que est disponvel para realizar trabalho til, sob
temperatura e presso constantes. A variao de energia livre de
Gibbs (G) nas condies existentes nos sistemas biolgicos
descrita quantitativamente pela equao:
G = H TS
onde G a variao de energia livre de Gibbs que ocorre enquanto o
sistema se desloca de seu estado inicial para o equilbrio, sob
temperatura e presso constantes, H a variao de entalpia ou do
contedo em calor do sistema reagente, T a temperatura absoluta e S
a variao de entropia do sistema reagente. As unidades de G e H
so joulesmol 1 ou calorias mol 1 (uma caloria igual a 4,184 J). As
variaes da energia livre so acompanhadas pelas concomitantes
modificaes da entalpia e entropia.
Para a maioria dos casos, o valor de G obtido medindo-se a
variao de energia livre dos estados inicial e final do processo:
G = G (produtos) G (reagentes)
O mecanismo de reao no afeta a G, ou seja, a variao de
energia independe da via pela qual ocorre a transformao. A
velocidade de uma reao depende do mecanismo da reao e est
relacionada com a energia livre de ativao (G ) e no com a
variao de energia livre (G). Ou seja, a G no fornece
informaes sobre a velocidade da reao.
A variao de energia livre (G) de um processo pode ser
positiva, negativa ou zero e indica a direo ou espontaneidade da
reao:

Reaes de equilbrio. Os processos que apresentam G igual 0,


(G = 0, K eq = 1,0), no h fluxo em nenhuma direo de reao
(as reaes nos dois sentidos so iguais).

Reaes exergnicas. So os processos que apresentam G


negativo (G < 0, K eq > 1,0) indicando que so energeticamente
favorveis e procedero espontaneamente at que o equilbrio
seja alcanado.

Reaes endergnicas. So os processos que apresentam G


positivo (G > 0, K eq < 1,0) o que significa que h absoro de
energia e so no-espontneos (energeticamente no-favorveis).
O processo ocorrer espontaneamente na direo inversa
escrita.

B. Relao da G com a constante de equilbrio


Para uma reao em equilbrio qumico, o processo atinge um
ponto no qual, o sistema contm tanto produtos como reagentes.
Assim, para a reao:
aA + bB ' cC + dD
onde a, b, c e d so os nmeros de molculas de A, B, C e D que
participam da reao. O composto A reage com B at que as
quantidades especficas de C e D sejam formadas. Assim, as
concentraes de A, B, C e D no mais se modificam, pois as

109

110

MOTTA Bioqumica

velocidades das reaes em um ou outro sentido so exatamente


iguais. As concentraes dos reagentes e produtos no equilbrio nas
reaes reversveis esto relacionadas pela constante de equilbrio,
K eq :
K eq =

[C ] c [D] d
[A] a [B]b

onde [A], [B], [C] e [D] so as concentraes molares dos


componentes da reao no ponto de equilbrio. A K eq varia com a
temperatura.
A variao na energia livre real, G, de uma reao qumica em
temperatura e presso constantes est relacionada com a constante de
equilbrio dessa reao e, portanto, dependem das concentraes de
reagentes e produtos:
G = G o + RT ln

[C]c [D]d
[A]a [B]b

G a variao de energia livre padro, quando todos os


reagentes e produtos da reao esto no estado-padro: concentrao
inicial de 1,0 M, temperatura de 25 C e presso de 1,0 atm. O R a
constante dos gases (8,315 Jmol 1 K 1 ), T a temperatura absoluta
em graus Kelvin ( C + 273) e 1n o logaritmo natural. G uma
constante com valor caracterstico e invarivel para cada reao.
Como o valor de G zero, no existe variao lquida de
energia e a expresso reduzida
0 = G o + RT ln

[C] c [D] d
[A] a [B] b

A equao pode ser reescrita


G = RT ln K eq
O 1n pode ser convertido em log na base 10, pela multiplicao
por 2,3. Ento
G = 2,3 RT log K eq
Como a maioria das reaes bioqumicas ocorre in vivo em pH ao
redor de 7,0, a variao de energia livre padro designada G com
a incluso de apstrofo e nomeada linha. A relao quantitativa
entre G e a constante de equilbrio a 25 C apresentada na Tabela
4.1.

4 Introduo ao metabolismo

Tabela 4.1 Relao quantitativa entre os valores da constante de

equilbrio (K e q ) e as variaes de energia livre padro (G ) em pH 7,0 e


0
25 C

K eq

G (kJmol )

Direo da reao

1000

Ocorre de forma direta

10

17,1
11,4
5,7

1
0,1
0,01
0,001

0
+5,7
+11,4
+17,1

Equilbrio
Ocorre de forma inversa

100

Quando os reagentes e produtos esto presentes em concentraes


iniciais de 1,0 M cada um e temperatura de 37 C, o clculo da energia
livre padro dado por

G o' = 8,315 310 2,3 log K ,eq


G o' = 5.925 log K ,eq
A variao de energia livre real, G , observada para uma dada
reao qumica, uma funo das concentraes e da temperatura
existentes durante a reao. A 37 C tem-se:

G = G o' + 5.925 log

[produtos]
[reagentes]

Os [produtos] e [reagentes] referem-se s concentraes iniciais


reais e no devem ser confundidas com as encontradas no equilbrio
ou em condies padro.
Sob condies apropriadas, a reao pode ser espontnea ( G <0)
mesmo quando a variao de energia livre padro ( G ) positiva.
Por exemplo, se K para a reao S ' P for 0,1, ento G a 37 C
ser +5.925 kJ mol 1 . Entretanto, a reao ter uma G negativa se as
concentraes iniciais de S e P forem 0,1 M e 0,001 M,
respectivamente:
G = +5.925 + 2,3RT log

0,001
0,1

G = +5.925 + (5.925) ( 2) = 5.925 kJ mol1

Portanto, o critrio de espontaneidade para uma reao G , e


no a G .

4.4 Compostos de alta energia


As clulas obtm a energia necessria para a sua manuteno e
crescimento pela degradao de vrios nutrientes, tais como, glicose
(carboidrato), aminocidos (protenas) e cidos graxos (lipdeos no
esterides). Por exemplo, a energia livre padro liberada durante a
oxidao da glicose at CO 2 e H 2 O :

111

112

MOTTA Bioqumica

C 6 H 12 O 6 + 60 2 6CO 2 + 6H 2 O

G = 2870 kJmol 1

Em condies aerbicas, a energia liberada na reao acima


utilizada na sntese de, aproximadamente, 32 molculas de ATP
(trifosfato de adenosina) para cada molcula de glicose. O ATP um
carreador ou transportador de energia livre. Outros compostos
fosforilados e tiosteres tambm tm grandes energias livre de
hidrlise e, juntamente com o ATP, so denominados de compostos de
alta energia (ou ricos em energia) (Tabela 4.1). Basicamente, a
energia livre liberada pela degradao de nutrientes convertida em
compostos de alta energia cuja hidrlise liberam energia livre
utilizadas pelas clulas para exercer suas funes.
Tabela 4.2 Valores da energia livre padro (G ) de hidrlise de alguns
compostos de alta energia.
Composto
Fosfoenolpiruvato

G (kJmol

Carbamoilfosfato

-61,9
-51,4

1,3Difosfoglicerato

-49,3

Creatinafosfato

-43,1

Acetilfosfato

-42,2

AcetilCoA

-31,4

ATP (ADP + P i )

-30,5

ATP (AMP + PP i )

-32,2

Glicose1fosfato

-20,9

Glicose6fosfato

-13,8

-1

Os valores negativos de G da hidrlise dos compostos


apresentados na Tabela 4.2 so denominados de potencial de
transferncia de grupos fosfato e so medidas da tendncia dos
grupos fosforilados em transferir seus grupos fosfato para a gua. Por
exemplo, o ATP tem um potencial de transferncia de 30,5
comparados com 13,8 para a glicose6fosfato. Isso significa que a
tendncia do ATP em transferir um grupo fosfato maior que o da
glicose 6-fosfato.
Alguns autores representam as ligaes de alta energia pelo til
(~). Deve-se salientar, no entanto, que a energia no reside na ligao
especfica hidrolisada mas resulta dos produtos de reao que tm
menor contedo de energia livre que aquele dos reagentes.

A. Trifosfato de adenosina (ATP)


A energia livre liberada pelas reaes de degradao de molculas
combustveis em processos exergnicos, conservada na forma de
intermedirios de alta energia. O intermedirio central de alta
energia a trifosfato de adenosina (ATP) cuja hidrlise exergnica
impulsiona processos endergnicos.
O ATP um nucleotdio formado por uma unidade de adenina,
uma de ribose e trs grupos fosfato seqencialmente ligados por meio
de uma ligao fosfoster seguida de duas ligaes fosfoanidrido . As
formas ativas do ATP e ADP esto complexadas com o Mg 2+ ou outros
ons. Estrutura de ATP:

4 Introduo ao metabolismo

NH2

Ligao
fosfoster

O
O

O
O

Ligaes
fosfoanidrido

CH2

O
H

OH

HO
Adenosina
AMP
ADP
ATP

As ligaes fosfoanidrido (fosfatooxignio) do ATP tem alta


energia livre de hidrlise. Ocorrem dois tipos de clivagem do ATP: a
ortofosfato (ATP ADP + P i ):
NH2
N

N
-

O
-

P
O

O
O

O
O

CH2

H2 O

O
OH

OH

Trifosfato de adenosina (ATP)


NH2
N

N
-

O
-

P
O

CH2

OH

OH

O
OH

OH

Difosfato de adenosina (ADP)

e a pirofosfato (ATP AMP + PP i ):

Fosfato inorgnico (P i )

113

114

MOTTA Bioqumica
NH2
N

N
-

O
-

O
O

P
O

O
O

CH2

H2 O

O
OH

OH

Trifosfato de adenosina (ATP)


NH2
N

N
-

O
-

CH2

O
HO

P
O

O
O

OH

O
OH

OH

Adenosina monofosfato (AMP)

Pirofosfato (PP i )

O elevado potencial de transferncia de grupos fosfato do ATP


explicada por vrias razes:

Repulses eletrostticas mtuas. Na faixa de pH fisiolgico, o


ATP tem 4 cargas negativas (o ADP tem 3) que se repelem
vigorosamente. Por hidrlise, o ATP produz ADP e P i que mais
estvel pela reduo da repulso eletrosttica em relao ao ATP.
Os ons Mg 2+ neutralizam parcialmente as cargas negativas do
ATP tornando a sua hidrlise menos exergnica.

Estabilizao por ressonncia. Os produtos de hidrlise do ATP


o ADP ou o AMP so mais estveis que o ATP pela capacidade
de rapidamente oscilar entre diferentes estruturas. O ADP tem
maior estabilidade por ressonncia da ligao fosfoanidro que o
ATP.

Energia de solvatao do anidrido fosfrico. A menor energia de


solvatao do anidrido fosfrico quando comparada aos seus
produtos de hidrlise, fornece a fora termodinmica que
impulsiona a sua hidrlise.

A variao de energia livre ( G ) de hidrlise do ATP a ADP e


fosfato 30,5 kJmol 1 em condies padro (1,0 M para o ATP,
ADP e P i ). Entretanto, intracelularmente, no so encontradas
concentraes padro e sim quantidades reais. Nessas condies, a
variao de energia livre de hidrlise do ATP depende em parte da
concentrao dos reagentes e produtos na clula como tambm do pH
e da fora inica. No entanto, para simplificar os clculos, ser
empregado o valor 30,5 kJmol 1 para a hidrlise do ATP, mesmo
reconhecendo, que este um valor mnimo.

4 Introduo ao metabolismo

115

Quadro 4.3 Creatinafosfato

Metabolismo
aerbico

ATP

Creatina-fosfato

Metabolismo
anaerbico

Energia

A creatinafosfato tem energia livre padro de hidrlise


-1
43,1 kJmol , portanto, mais negativa que o ATP. O
msculo esqueltico dos vertebrados emprega a
creatinafosfato como um veculo para o transporte de
energia da mitocndria para as miofibrilas. Quando a
concentrao mitocondrial de ATP est elevada (clula em
repouso), a enzima creatinocinase cataliza a fosforilao
reversvel da creatina pelo ATP. A creatinafosfato
resultante difunde da mitocndria para as miofibrilas onde a
enzima
creatinocinase
opera
na
direo
termodinamicamente favorvel para gerar ATP. Durante o
exerccio muscular, quando o teor de ATP baixo, ocorre a
sntese de ATP a partir de creatinafosfato e de ADP.

Segundos

Minutos

Horas

Creatina-fosfato + ADP + H ' ATP + creatina


O msculo esqueltico em repouso possui
creatinafosfato suficiente para suprir as necessidades de
energia por alguns minutos. No entanto, sob condies de
mximo esforo, esse perodo reduzido para apenas
alguns segundos.

Fontes de ATP durante o exerccio. Nos segundos


iniciais, o exerccio mantido pelos compostos fosforilados
de
alta
energia
(ATP
e
creatinafosfato).
Subsequentemente, o ATP regenerado pelas vias
metablicas.

O ATP pode ser regenerado por dois mecanismos:

Fosforilao ao nvel do substrato. a transferncia direta do


grupo fosfato (P i ) para o ADP (ou outro nucleosdeo 5difosfato)
para formar ATP, empregando a energia livre proveniente de
processos exergnicos.

Fosforilao oxidativa. O processo no qual os eltrons liberados


durante a oxidao de substratos (reaes de degradao) so
transferidos para a cadeia mitocondrial transportadora de
eltrons atravs de coenzimas reduzidas (NADH e FADH 2 ) para o
oxignio molecular. A energia livre liberada promove a sntese de
ATP a partir de ADP e P i . ( Ver Captulo 8).

B. Outros nucleotdeos 5-trifosfatos


Outros nucleotdeos 5trifosfatos (NTPs) apresentam energia
livre de hidrlise equivalente ao ATP. Suas concentraes
intracelulares so baixas o que restringe a sua funo. Vrios
processos biossintticos, como a sntese de glicognio, protenas e
cidos nuclicos necessitam de outros trifosfatos de nucleosdeos. A
enzima inespecfica nucleosdeo difosfato cinase catalisa a sntese
(fosforilao) de NTPs (CTP, GTP, TTP, UTP) a partir do ATP e dos
NDPs (nucleosdeos difosfatos) correspondentes:
ATP + NDP ' ADP + NTP
A energia livre padro liberada -218 kJmol 1 na transferncia
de um par de eltrons do NADH at o oxignio molecular na cadeia
respiratria mitocondrial. A energia liberada suficiente para
sintetizar trs ATP a partir de 3ADP e 3P i (3 x 30,5 = 91,5 kJmol 1 ).

116

MOTTA Bioqumica

4.5 Reaes acopladas


Reaes termodinamicamente desfavorveis so impulsionadas
por reaes exergnicas qual esto acopladas. As reaes
exergnicas fornecem energia que dirigem as reaes endergnicas. A
interconexo entre reaes endergnicas e exergnicas chamada
acoplamento.
Podem ocorrer duas formas de acoplamento:
1. Atravs de um intermedirio comum. A energia gerada por
uma reao biolgica ou processo muitas vezes impulsiona uma
segunda reao que no ocorre espontaneamente. O acoplamento
pode ocorrer atravs de um intermedirio comum (BX):

AX + B A + BX
BX + C B + CX
A soma das variaes de energia livre deve ser negativa para o
desenvolvimento das reaes. O fluxo de energia no metabolismo de
muitas reaes est acoplado com o ATP que atua como intermedirio
carreador de energia:
AP i + ADP A + ATP
ATP + C ADP + CP i

(espontnea)
(no espontnea)

Assim,
uma
reao
termodinamicamente
desfavorvel
(endergnica) torna-se altamente favorvel pelo acoplamento
hidrlise de molculas de ATP.
2. Atravs da transferncia de grupos qumicos. Os carreadores
mais importantes so: (a) o ATP (e outros nucleosdeos 5trifosfatos)
na transferncia de grupos fosfato; (b) tiosteres como a coenzima A
(CoASH) que carreiam o grupo acetil na forma de acetil-CoA
produto comum do catabolismo de carboidratos, de cidos graxos e de
aminocidos e de outros grupos acila; (c) o NAD(P)H que
transporta ons hidrognio e eltrons provenientes das reaes de
oxidao (catablicas).
Resumo
1. Todos os organismos vivos necessitam de energia. Atravs da
bioenergtica estudo das transformaes de energia a direo e a
extenso pela qual as reaes bioqumicas so realizadas podem ser
determinadas. A entalpia (uma medida do contedo calrico) e a entropia
(uma medida de desordem) esto relacionadas com a primeira e a
segunda lei da termodinmica, respectivamente. A energia livre (a frao
da energia total disponvel para a realizao de trabalho) est
relacionada matematicamente com a entalpia e a entropia.
2. As transformaes de energia e calor ocorrem em um universo
composto de um sistema e de seu meio circundante. Em um sistema
aberto, matria e energia so intercambiveis entre o sistema e seu meio
circundante. O sistema denominado fechado quando a energia mas no
a matria trocada com o meio circundante. Os organismos vivos so
sistemas abertos.
3. A energia livre representa o mximo de trabalho til obtido em um
processo. Processos exergnicos, onde a energia livre diminui ( G < 0)
so espontneos. Se a variao de enrgia livre positiva ( G < 0), o

4 Introduo ao metabolismo

processo chamado endergnico. Um sistema est em equilbrio quando


a variao de energia livre zero. A energia livre padro ( G )
definida para reaes a 25 C, presso de 1 atm e concentraes de 1 M.
O pH padro na bioenergtica 7. A variao de energia livre padro
G em pH 7 normalmente empregada nos textos bioqumicos.
4. A hidrlise do ATP fornece a maioria da energia livre necessria para os
processos da vida.

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 164-91.
LEHNINGER, A. L. Princpios de bioqumica. 2 ed. So Paulo: Sarvier, 1995.
p. 269-96.
STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 1996. p.
419-36.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre: Artmed, 2000. p. 353-81.

117

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Carboidratos

5
Carboidratos

Objetivos
1.

Classificar um monossacardeo por meio do nmero de carbonos de sua


molcula.

2.

Identificar se um monossacardeo pertence srie D ou L pela sua estrutura


acclica.

3.

Identificar os ismeros e na estrutura cclica dos monossacardeos.

4.

Compreender a estrutura da glicose na sua forma monomrica e polimrica.

5.

Identificar os tipos de ligaes existentes entre os monossacardeos nos


oligossacardeos e polissacardeos.

6.

Identificar as estruturas da maltose, sacarose e lactose, indicando-lhes a


nomenclatura.

Os carboidratos (glicdeos ou sacardeos) so as principais fontes


alimentares para produo de energia alm de exercerem inmeras
funes estruturais e metablicas nos organismos vivos. So
substncias que contm carbono, hidrognio e oxignio de acordo
com a frmula geral [CH 2 O] n onde n 3 e ocorrem como compostos
simples e complexos. So poliidroxialdedos ou poliidroxicetonas, ou
ainda, substncias que por hidrlise formam aqueles compostos. So
classificados
como:
monossacardeos,
dissacardeos,
oligossacardeos e polissacardeos de acordo com o nmero de
unidades de acares simples que contm. Os carboidratos ligados
covalentemente a protenas e lipdeos so denominados
glicoconjugados e esto distribudos em todos os seres vivos, mais
notadamente entre os eucariontes. Alguns carboidratos (ribose e
desoxirribose) fazem parte da estrutura dos nucleotdeos e dos cidos
nuclicos.

119

120

Motta Bioqumica

Os carboidratos tambm participam de vrios processos


biolgicos como a transduo de sinal, interaes clulaclula e
endocitose que envolvem tanto os glicoconjugados como as
glicoprotenas, os glicolipdeos ou as molculas de carboidratos
livres.

5.1 Monossacardeos
Os monossacardeos (oses ou acares simples) so as unidades
bsicas dos carboidratos. So constitudos por uma unidade de
poliidroxialdedo ou de poliidroxicetona contendo trs a nove tomos
de carbono, sendo o principal combustvel para a maioria dos seres
vivos. Os monossacardeos mais simples so as trioses (trs tomos
de carbono): gliceraldedo e diidroxiacetona.
H

1C

2C

OH

3 CH OH
2

Gliceraldedo

1 CH OH
2
2C O
3 CH OH
2

Diidroxiacetona

Os monossacardeos so classificados de acordo com a natureza


qumica do grupo carbonila e pelo nmero de seus tomos de
carbono. Os que tm grupos aldedicos so aldoses e os que tm
grupos cetnicos, formam as cetoses. Os monossacardeos com quatro
tomos de carbono so denominados tetroses; com cinco, pentoses;
com seis hexoses etc. Por exemplo, o gliceraldedo uma aldotriose e
a diidroxiacetona, uma cetotriose. De modo geral, diferenciam-se os
nomes prprios das cetoses pela insero de ul aos nomes das aldoses
correspondentes, como, por exemplo, tetrulose, pentulose, hexulose
etc.
A. Configurao dos monossacardeos
Com exceo da diidroxiacetona, todos os monossacardeos
possuem tomos de carbono assimtricos (quirais). Para o
gliceraldedo, o C2 o centro assimtrico que origina dois
estereoismeros: o D gliceraldedo e L gliceraldedo. So
enatimeros (imagens especulares) um do outro:
CHO
H C

OH

CH2 OH
D -Gliceraldedo

CHO
HO C

CH2 OH
L -Gliceraldedo

As outras aldoses so srie D e L com respeito ao D gliceraldedo


e o L -gliceraldedo. Isto significa que todos os acares com a mesma
configurao do D gliceraldedo e, portanto, com a mesma
configurao no centro assimtrico mais afastado do grupo carbonila,
so da srie D . As aldoses que representam a configurao do L gliceraldedo so da srie L . O mesmo ocorre com as cetoses com
mais de quatro tomos de carbonos. Em geral, as molculas com n
centros assimtricos podem ter 2 n estereoismeros. As aldoses com

5 Carboidratos

seis carbonos tm quatro centros de assimetria e assim h 2 4 = 16


estereoismeros possveis (oito na srie D e oito na srie L ). As
Figuras 5.1 e 5.2 mostram as relaes estereoqumicas das D -aldoses
e D cetoses conhecidas como projees de Fisher. Nessas estruturas,
o esqueleto dos carboidratos est orientado verticalmente com o
carbono mais oxidado geralmente no topo.
As aldoses e cetoses da srie L so imagens especulares de seus
correspondentes da srie D :

CHO
H C OH
HO C

CHO
HO C

H C OH

H C OH

HO C

H C OH

HO C

CH2 OH
D -Glicose

CH2 OH
L -Glicose

As propriedades pticas dos monossacardeos so designadas


pelos sinais (+), dextrorrotatria e (), levorrotatria.
Estereoismeros que no so enantimeros so chamados
diastereoismeros. Os acares D ribose e D arabinose so
diastereoismeros por serem ismeros mas no imagens especulares.
Os diastereoismeros que diferem na configurao ao redor de um
nico C so denominados epmeros. A D glicose e a D galactose so
epmeros porque diferem somente na configurao do grupo OH no
C4. A D manose e a D galactose no so epmeros pois suas
configuraes diferem em mais de um carbono.

121

122

Motta Bioqumica

OH

CH2 OH
D Gliceraldedo

OH

HO

OH

OH

CH2 OH

CH2 OH

D Eritrose

D Treose

OH

HO

OH

HO

OH

OH

HO

HO

OH

OH

OH

OH

CH2 OH

CH2 OH

D Ribose

H
H

D Arabinose

OH

HO

OH

OH

OH

OH

OH

OH

CH2 OH
D -Alose

CH2 OH

CH2 OH
D Altrose

HO

C
C
C

D Xilose

OH

HO

HO

OH
OH

CH2 OH
D Glicose

CH2 OH

OH

HO

OH

OH

CH2 OH
D Manose

D Lixose

OH

HO

OH

OH

HO

OH

CH2 OH
D Gulose

CH2 OH
D Idose

HO

OH

HO

HO

HO

HO

OH

OH

CH2 OH
D Galactose

CH2 OH
D Talose

Figura 5.1
Relaes estereoqumicas das D -aldoses com trs a seis tomos de carbono. As D -aldoses contm
grupamentos aldedo no C1 e tm a configurao do D gliceraldedo no seu centro assimtrico mais afastado do
grupo carbonila. A configurao em torno do C2 distingue os membros de cada par.

5 Carboidratos

CH2 OH
O

CH2 OH

Diidroxiacetona

CH2 OH
H

OH

CH2 OH
D Eritrulose

CH2 OH

CH2 OH

OH

HO

OH

OH

CH2 OH

CH2 OH

D Ribulose

CH2 OH

D Xilulose

CH2 OH

OH

HO

OH

OH

CH2 OH
D Psicose

CH2 OH

CH2 OH

OH

HO

OH

HO

HO

OH

OH

OH

CH2 OH
D Frutose

CH2 OH
D Sorbose

CH2 OH
D Tagatose

Figura 5.2
Relaes estereoqumicas das D -cetoses com trs a seis tomos de
carbono. As D cetoses contm grupamentos cetnicos no C2 e tm a
configurao do D gliceraldedo no seu centro assimtrico mais afastado do
grupo carbonila. A configurao em torno do C3 distingue os membros de
cada par.

B. Ciclizao de monossacardeos
Em soluo aquosa menos de 1% das aldoses e cetoses se
apresentam como estruturas de cadeia aberta (acclica) mostradas nas
Figuras 5.1 e 5.2. Os monossacardeos com cinco ou mais tomos de
carbono ciclizam-se, formando anis pela reao de grupos alcolicos
com os grupos carbonila dos aldedos e das cetonas para formar
hemiacetais e hemicetais, respectivamente. A reao de ciclizao
intramolecular torna os monossacardeos espcies mais estveis
Por ciclizao, os monossacardeos com mais de cinco tomos de
carbono no apresentam o grupo carbonila livre, mas ligado

123

124

Motta Bioqumica

covalentemente com uma das hidroxilas presentes ao longo da sua


cadeia. O aldedo em C1 na forma em cadeia aberta da glicose reage
com a hidroxila em C5, produzindo um anel com seis tomos (5
carbonos e 1 oxignio), denominado de piranose devido sua
analogia ao pirano. As aldopentoses (ribose) e cetohexoses (frutose)
formam anis pentagonais (4 carbonos e 1 oxignio) chamados de
furanose em analogia com o furano (Figura 5.3 e 5.4).
As estruturas piranose e furanose so hexgonos e pentgonos
regulares conhecidas como frmulas em perspectiva de Haworth. O
anel heterocclico representado perpendicular ao plano do papel,
enquanto os grupos presentes nas frmulas lineares direita esto
projetados abaixo do plano do anel e os que esto esquerda ficam
acima. Ocorrem excees, como a observada com o H do C5 que
est abaixo do plano do anel devido toro necessria para fech-lo.

5 Carboidratos

O
C
1

H
HO
H
H

OH

C
5

CH2 OH
H

OH

4C

OH

OH

OH

HO

CH2 OH

OH

D-Glicose

(Projeo de Fisher)

CH2 OH
5

H
O

C
H

ou

4C

OH

HO

H+

OH

CH2 OH
H
4

HO

H
1C

CH2 OH
O

H
1

OH

OH

OH

-D-Glicopiranose
(Projeo de Haworth)

ou

HO

OH
1

OH

OH

-D-Glicopiranose
(Projeo de Haworth)

Figura 5.3
Ciclizao da D -glicose com formao de duas estruturas cclicas de
glicopiranose. A projeo de Fisher (no alto esquerda) rearranjada em uma
representao tridimensional (no alto direita). A rotao da ligao entre C4 e C5
aproxima o grupo hidroxila em C5 do grupo aldedo em C1 para formar uma ligao
hemiacetal, produzindo dois estereoismeros, os anmeros e que diferem na
posio da hidroxila do C1 (no anmero o grupo OH representado para baixo e
no anmero o grupo OH representado para cima). As formas glicopiranosdicas
so mostradas como projeo de Haworth, nas quais as ligaes mais escuras do
anel so projetadas frente do plano do papel e as ligaes mais claras do anel
so projetadas para trs.

O carbono carbonila (C1 das aldoses ou o C2 das cetoses) do


monossacardeo cclico designado carbono anomrico e constitui

125

126

Motta Bioqumica

um centro de assimetria adicional com duas configuraes possveis.


No caso da glicose, as duas formas resultantes so D glicose e
D glicose (Figura 5.3). No anmero , o grupo OH ligado ao
carbono anomrico (C1) est abaixo do plano do anel; no anmero
est projetado acima do plano do anel. As formas e so
anmeras.
Quando em soluo aquosa, a D glicose e D glicose se
interconvertem livremente para atingir uma mistura de equilbrio que
contm 63,6% do anmero , 36,4% do anmero e 1% da forma
aberta linear. A interconverso detectada por alteraes na rotao
ptica e chamada mutarrotao. Esse fenmeno tambm
observado em outras pentoses e hexoses.
Nas estruturas cclicas dos monossacardeos os tomos de
carbono anomricos (C1 nas aldoses e C2 nas cetoses) so
susceptveis de oxidao por vrios agentes oxidantes contendo ons
cpricos (Cu 2+ ), como as solues de Fehling ou Benedict. Assim, os
monossacardeos com tomos de carbonos anomricos livres, so
designados acares redutores; os envolvidos por ligaes
glicosdicas, so chamados acares noredutores.
Os monossacardeos como a frutose e a ribose ciclizam-se para
formar estruturas furanscas.
1 CH OH
2
2C O

6 CH

HO

3C

4C

OH

5C

OH

2 OH

C H

1 CH

CH2 OH O

C H

C OH

H C

2 OH

HO C

4
H C

OH

OH
HO C
C CH2 OH

OH

6 CH OH
2

D Frutose

1C

2C

OH

3C

OH

4C

OH

5 CH OH
2

D Ribose

D Frutose
2 OH

5 CH
4

C H
3
H C

OH

CH2 OH O

OH

H C

C H

H C

C OH

H C

C H

OH

D Ribofuranose

Figura 5.4
Ciclizao da frutose e da ribose

D Frutose

OH

OH

D Ribofuranose

5 Carboidratos

Tanto as hexoses como as pentoses podem assumir as formas de


piranose ou de furanose nas frmulas em perpectiva de Haworth. No
entanto, o anel da piranose pode assumir uma corformao de cadeira
ou de barco:
6

CH2 OH
5

HO

HO

OH

CH2 OH

OH
3

HO

OH

HO

OH

OH

Conformao de cadeira

Os acares simples podem ser convertidos em compostos


qumicos derivados. Muitos deles so componentes metablicos e
estruturais dos seres vivos.
1. cidos urnicos. Os cidos urnicos so formados quando o
grupo terminal CH 2 OH dos monossacardeos so oxidados. Dois
cidos urnicos so importantes nos mamferos: o cido
dglicurnico e seu epmero, o cido L idurnico. Nos hepatcitos, o
cido glicurnico combina-se com molculas de esterides, certos
frmacos e bilirrubina (um produto de degradao da hemoglobina)
para aumentar a solubilidade em gua. O processo permite a remoo
de produtos do corpo. Tanto o cido glicurnico como o cido L
idurnico so carboidratos abundantes no tecido conjuntivo.
H

H
OH

COOH
H
OH

OH

OH C

OH C
H

OH

cido - D -glicurnico

HO

OH

OH

cido - L -idurnico

2. Aminoacares. Nos aminoacares um grupo hidroxila (mais


comumente no carbono 2) substitudo por um grupo amino. Esses
compostos so constituintes comuns dos carboidratos complexos
encontrados associados a lipdeos e protenas celulares. Os mais
freqentes so: a D glicosamina e a D galactosamina. Os
aminoacares
muitas
vezes
esto
acetilados.
O
cido
Nacetilneuramnico (a forma mais comum de cido silico) um
produto de condensao da N-acetilmanosamina e do cido pirvico.
Os cidos silicos so cetoses contendo nove tomos de carbonos que
podem ser amidados com cido actico ou glicoltico (cido
hidroxiactico). So componentes das glicoprotenas e glicolipdeos.

OH

Conformao de barco

C. Derivados de monossacardeos

COOH

Projeo de haworth

CH2 OH

HO

127

128

Motta Bioqumica
CH2 OH
H

CH

OH

OH C

CH2 OH
O

OH CH

OH

OH

OH

NH2

NH2

D Glicosamina

D Galactosamina
COOH
C

H3C

OH

NH C

HO

OH

OH

CH2 OH

cido silico (cido N acetilneuramnico)

3. Desoxiacares. Nos desoxiacares um grupo OH


substitudo por H. Dois importantes desoxiacares encontrados nas
clulas so: a L fucose (formado a partir da D manose por reaes de
reduo) e a 2desoxi D ribose. A fucose encontrada nas
glicoprotenas que determinam os antgenos do sistema ABO de
grupos sangneos na superfcie dos eritrcitos. A desoxirribose
componente do DNA.
H
H

CH3
H

OH C
OH

OH C
C
H

- L -Fucose

OH

CH2 OH O
C H
H C
OH

OH
H C
C H
H

- D -Desoxirribose

5.2 Dissacardeos e oligossacardeos


Quando ligados entre si por uma ligao Oglicosdica, (formada
por um grupo hidroxila de uma molcula de acar com o tomo de
carbono anomrico de outra molcula de acar) os monossacardeos
formam uma grande variedade de molculas. Os dissacardeos so
glicosdeos compostos por dois monossacardeos (como a maltose, a
lactose e a sacarose). Os oligossacardeos so polmeros
relativamente pequenos que consistem de dois a dez (ou mais)
monossacardeos. Os tomos de carbonos anomricos quando
participantes de ligaes glicosdicas no so oxidados pelos ons
cpricos.

5 Carboidratos

A. Dissacardeos
1. Maltose. A maltose obtida de hidrlise do amido e consiste
de dois resduos de glicose em uma ligao glicosdica (14) onde
o C1 de uma glicose liga-se ao C4 de outra glicose. O segundo
resduo de glicose da maltose contm um tomo de carbono
anomrico livre (C1), capaz de existir na forma ou piranosdica,
sendo assim, um acar redutor, alm de apresentar atividade ptica
(mutarrotao).
CH2 OH

CH2 OH

O
OH

O
4

OH

OH

OH

OH

OH

Maltose, ligao (14)

A isomaltose um dissacardio onde a ligao formada entre o


C1 de um resduo de glicose e o C6 de outra, constituindo uma
ligao glicosdica (16). A isomaltose tambm contm tomo de
carbono anomrico livre.
CH2 OH
H

O
OH

OH

O
OH
6

CH2
O
OH
OH
OH

Isomaltose, ligao (16)

2. Sacarose. A sacarose (acar comum extrado da cana)


constituda pela unio de uma - D -glicose com a D frutose, pela
ligao glicosdica ,(12) indicando que a ligao ocorre entre os
carbonos anomricos de cada acar (C1 na glicose e C2 na frutose).
A sacarose um acar no-redutor por no ter terminao redutora
livre. No apresenta, tambm, atividade ptica (mutarrotao), pois
no contm carbono anomrico livre.
6

CH2 OH

HO

HOCH2

1()

OH

2 ( )

HO

CH2 OH
6

OH

OH

Glicose

Frutose
Sacarose

3. Lactose. A lactose encontrada apenas no leite, sendo formada


pela unio do C1 da D galactose com o C4 da D glicose, numa

129

130

Motta Bioqumica

ligao glicosdica (14). Apresenta mutarrotao e capacidade


redutora por possuir carbono anomrico livre na glicose.
CH2 OH

CH2 OH
O
OH

O
1

OH

OH

OH
OH

OH

Lactose, ligao (14)

B. Oligossacardeos
Os oligossacardeos so pequenos polmeros muitas vezes
encontrados ligados a polipeptdeos e a glicolipdeos. Existem duas
classes de oligossacardeos: os Nligados e os Oligados. Os
oligossacardeos Nligados esto unidos a polipeptdeos por uma
ligao Nglicosdica com o grupo amino da cadeia lateral do
aminocido asparagina. Os oligossacardeos Oligados esto unidos
pelo grupo hidroxila da cadeia lateral do aminocido serina ou
treonina nas cadeias polipeptdicas ou pelo grupo hidroxila dos
lipdeos de membrana.

5.3 Polissacardeos
Os polissacardeos (ou glicanos) so formados por longas cadeias
de unidades de monossacardeos unidas entre si por ligaes
glicosdicas. So insolveis em gua e no tem sabor nem poder
redutor. So classificados como:

Homopolissacardeos (homoglicanos) contm apenas um nico


tipo de monossacardeo, por exemplo, amido, glicognio e
celulose.

Heteropolissacardeos (heteroglicanos) contm dois ou mais tipos


diferentes de monossacardeos, por exemplo, cido hialurnico,
condroitina sulfato, dermatana sulfato e heparina.

A. Homopolissacardeos
So polmeros de carboidratos formados apenas por um nico tipo
de monossacardeo.
1. Amido. O amido um homopolissacardeo depositado nos
cloroplastos das clulas vegetais como grnulos insolveis. a forma
de armazenamento de glicose nas plantas e empregado como
combustvel pelas clulas do organismo. constitudo por uma
mistura de dois tipos de polmeros da glicose:

Amilose. So polmeros de cadeias longas de resduos de


D glicose unidos por ligaes glicosdicas (14).

5 Carboidratos

CH2 OH
H

CH2 OH
O

H
OH

OH

H
O

O
H
OH

OH

Glicose

H
O

Glicose

-Amilose

Amilopectina. uma estrutura altamente ramificada formada por


resduos de D glicose unidos por ligaes glicosdicas
(14), mas, tambm, por vrias ligaes (16) nos pontos de
ramificao, que ocorrem entre cada 24-30 resduos. Esses
polmeros tm tantas extremidades no-redutoras quantas
ramificaes, porm apenas uma extremidade redutora.
CH2 OH
H
O

O
H
OH

OH

(1

6) ponto de
ramificao

CH2

O
H
OH

OH

H
O

Amilopectina

2. Glicognio. a mais importante forma de polissacardio de


reserva da glicose das clulas animais. A estrutura do glicognio
assemelha-se da amilopectina, exceto pelo maior nmero de
ramificaes que ocorrem em intervalos de 812 resduos de glicose
(na amilopectina os intervalos das ramificaes so de 24-30 resduos
de glicose). Essa estrutura altamente ramificada, torna suas unidades
de glicose mais facilmente mobilizveis em perodos de necessidade
metablica. O glicognio est presente principalmente no msculo
esqueltico e no fgado, onde ocorre na forma de grnulos
citoplasmticos.

131

132

Motta Bioqumica

Tabela 5.1 Comparao da amilose, amilopectina e glicognio


Amilose

Amilopectina

Glicognio

Unidades monomricas

D -glicose

D -glicose

D -glicose

Peso molecular

4.000 500.000

50.000 16 x 10 6

50.000 n x 10 6

Tipo de polmero

Linear

Ramificado

Ramificado

Pontos de ramificao

24 30 resduos de glicose

8 12 resduos de glicose

Ligaes glicosdicas

(1 4)

(1 4), (1 6)

(1 4), (1 6)

3. Celulose. uma seqncia linear de unidades de D glicose


unidas por ligaes glicosdicas (14). o principal componente
das paredes celulares nos vegetais e um dos compostos orgnicos
mais abundantes na biosfera. A hidrlise parcial da celulose produz o
dissacardio redutor celobiose:

CH2 OH
H

CH2 OH
O

H
OH

OH

O
H

Glicose

O
H

H
O

OH

OH
Glicose

Celulose

Os vertebrados no tm celulases e, portanto, no podem


hidrolisar as ligaes (14) da celulose presentes na madeira e
fibras vegetais. Entretanto, alguns herbvoros contm microrganismos
produtores de celulases, razo pela qual podem digerir celulose.
4. Quitina. o principal componente estrutural do exoesqueleto
de invertebrados como insetos e crustceos. A quitina constituda de
resduos de Nacetilglicosamina em ligaes (14) e forma longas
cadeias retas que exerce papel estrutural. Se diferencia quimicamente
da celulose quanto ao substituinte em C2, que um grupamento
amina acetilado em lugar de uma hidroxila.

5 Carboidratos

CH3
C
6

CH2 OH
O

OH

H
2

CH2 OH

H
5

OH

CH2 OH

NH

OH

NH

H H
2

NH
C

CH3

CH3

B. Heteropolissacardeos
So polmeros de carboidratos formados por mais de um tipo de
carboidratos. Os principais exemplos so os glicosaminoglicanos e os
peptdeoglicanos.
1. Glicosaminoglicanos (GAG). So polissacardeos lineares
constitudos por resduos repetitivos de dissacardeos de cido
urnico (geralmente o cido D glicurnico ou o cido L idurnico) e
de Nacetilglicosamina ou Nacetilgalactosamina. Em alguns
glicosaminoglicanos uma ou mais das hidroxilas do acar aminado
esto esterificadas com sulfatos. Os grupos carboxilato e os grupos
sulfato contribuem para a alta densidade de cargas negativas dos
glicosaminoglicanos. Tanto a carga eltrica como a estrutura
macromolecular, colabora para o seu papel biolgico de lubrificar e
manter tecido conjuntivo. Esses compostos formam solues de alta
viscosidade e elasticidade pela absoro de grandes quantidades de
gua. Atuam assim, na estabilizao e suporte dos elementos fibrosos
e celulares dos tecidos, tambm como contribuem na manuteno do
equilbrio da gua e sal do organismo.
CH2OH
H
C

CH
OH

OH C

CH2 OH
O

OH CH

OH

OH

NH

NH

H
O

CH3

N Acetil D glicosamina

OH

CH3

N Acetil D galactosamina

Na sntese dos glicosaminoglicanos, os grupos sulfato so


introduzidos em posies especficas da cadeia polissacardica por
um doador de sulfato ativo, o 3fosfoadenosilfosfosulfato (PAPS) em
reao catalisada por sulfotransferases.
Os
glicosaminoglicanos
esto
presentes
nos
espaos
extracelulares como uma matriz gelatinosa que embebem o colgeno e
outras protenas, particularmente nos tecidos conjuntivos (cartilagens,
tendes, pele, parede de vasos sangneos). O glicosaminoglicano

133

134

Motta Bioqumica

heparina no est presente no tecido conjuntivo, mas ocorre como


grnulos nas clulas das paredes arteriais e tem funo anticoagulante
inibe a coagulao evitando a formao de cogulos.
Tabela 5.2 Estrutura dos principais dissacardeos repetidos de alguns glicosaminoglicanos da
matriz extracelular
Principais dissacardeos repetidos
Glicosaminoglicano
s
Componente 1

Ligao
glicosdic
a

Ligao
glicosdica
Componente 2

Hialuronato

D Glicuronato

(1 3)

N Acetilglicosamina

(1 4)

Condroitina sulfato

D Glicuronato

(1 3)

N Acetilgalactosamina

(1 4)

Dermatana sulfato

L Iduronato

(1 3)

N Acetilgalactosamina

(1 4)

Queratona sulfato

D Galactose

(1 4)

N Acetilglicosamina

(1 3)

Vrias enfermidades genticas denominadas mucopolissacaridoses


so causadas por defeitos no metabolismo dos glicosaminoglicanos.
As desordens so caracterizadas pelo acmulo nos tecidos e a
excreo na urina de produtos oligossacardicos derivados do seu
desdobramento incompleto, devido a deficincia de uma ou mais
hidrolases lisossomais (Tabela 5.3).
Tabela 5.3 Enfermidades genticas envolvendo o metabolismo dos
glicosaminoglicanos (mucopolissacaridoses).
Sndrome e sinais clnicos

Enzima deficiente

Produtos
acumulados

Hurler : defeitos sseos,


retardamento mental,
embaamento da crnea, morte
prematura

L Iduronidase

Dermatana sulfato

Scheie : embaamento da crnea,


articulaes rgidas

L Iduronidase

Hunter : semelhante aos de Hurler


sem efeitos sobre a crnea

Iduronatosulfatase

Heparana sulfato

Sanfilippo A : grave retardamento


mental

Heparan sulfatase

Heparana sulfato

Sanfilippo B : defeitos sseos,


retardamento psicomotor

N Acetilglicosaminidase

Heparana sulfato

Maroteaux-Lamy : graves defeitos


esquelticos

N Acetilgalactosamina
sulfatase

Dermatana sulfato

Morquio : defeitos graves dos


ossos, da crnea

Galactosamina sulfatase

Queratana sulfato

Sly : retardamento mental

D Glicuronidase

Heparana sulfato
Dermatana sulfato
Heparana sulfato
Dermatana sulfato

Condroitina sulfato
Dermatana sulfato
Heparana sulfato

DiFerrante : retardamento mental

Glicosamina 6 sulfato
sulfatase

Queratan sulfato
Heparana sulfato

2. Peptideoglicanos (murenas). As paredes celulares de muitas


bactrias so formadas por peptdeosglicanos, que so cadeias de

5 Carboidratos

heteroglicanos ligados a peptdeos. So macromolculas que


consistem de cadeias polissacardicas e polipeptdicas unidas por
ligaes cruzadas covalentes e so componentes da parede celular de
bactrias. A virulncia e os antgenos caractersticos das bactrias so
propriedades do revestimento das suas paredes celulares. As bactrias
so classificadas de acordo com a colorao ou no pelo corante de
Gram:

Bactrias grampositivas, ex.: Staphylococcus aureus, possuem


parede celular espessa (~25 nm) formada por vrias camadas de
peptdeoglicanos que envolvem a sua membrana plasmtica.

Bactrias gramnegativas, ex.: Escherichia coli, possuem uma


parede celular fina (~23 nm) consistindo de uma nica camada
de peptdeoglicano inserida entre membranas lipdicas interna e
externa. Essa estrutura responsvel pela maior resistncia das
bactrias gram-negativas aos antibiticos.

A estrutura polimrica dos peptdeosglicanos composta de


cadeias lineares Nacetil D glicosamina (GlcNAc) e de cido
Nacetilmurmico (MurNAc) alternadas, unidos por ligaes
(14). Cadeias dessas estruturas so covalentemente cruzadas pelas
cadeias laterais de seus tetrapeptdeos constitudas alternativamente
por resduos de D e L aminocidos.

135

136

Motta Bioqumica

N-Acetilglicosamina

cido-N-Acetilmurmico

CH2 OH
H

CH2 OH
O

OH

NHCOCH3

O
H

NHCOCH3

H
O
H3 C

CH

NH
L-Ala

CH
C

CH3
O

NH
CH
Isoglutamato

COO

CH2
CH2
C

NH
L-Lys

CH
C

(CH2 )4

NH3+

NH
D-Ala

CH

CH3

COO
Peptideoglicano

5.4 Glicoconjugados
Os compostos que resultam da ligao covalente de molculas de
carboidratos s protenas e aos lipdeos so coletivamente
denominados glicoconjugados. Exercem efeitos profundos nas
funes celulares e tambm como mediadores para interaes
especficas clula-clula de organismos multicelulares. H duas
classes de conjugados carboidratos-protenas: as glicoprotenas e os
proteoglicanos.
A. Glicoprotenas
As glicoprotenas so protenas conjugadas que possuem como
grupos prostticos um ou vrios oligosacardeos formando uma srie
de unidades repetidas e ligadas covalentemente a uma protena. Essa
definio
exclui
os
proteoglicanos
que
sero
descritos
posteriormente.

5 Carboidratos

A ligao covalente entre os acares e a cadeia peptdica a


parte central da estrutura das glicoprotenas. As principais so: (1)
ligaes Nglicosdicas entre a Nacetilglicosamina (GlcNAc) e o
aminocido asparagina (Asn), (2) ligaes Oglicosdicas entre a
Nacetilgalactosamina (GalNAc) e o grupo OH da serina (Ser) ou
treonina (Thr).
As glicoprotenas so molculas constituintes da maioria dos
organismos vivos. Ocorrem nas clulas na forma solvel ou ligada s
membranas, e nos lquidos extracelulares. Os vertebrados so
particularmente ricos em glicoprotenas. Exemplos dessas substncias
incluem a protena transferrina (transportadora de ferro), a
ceruloplasmina (transportadora de cobre), fatores da coagulao
sangnea e muitos componentes do complemento (protenas
envolvidas em reaes do sistema imune). Vrios hormnios so
glicoprotenas, por exemplo, o hormnio folculo estimulante (FSH),
produzido pela hipfise anterior que estimula o desenvolvimento dos
ovrios na mulher e a espermatognese no homem. Alm disso,
muitas enzimas so glicoprotenas. A ribonuclease (RNase), a enzima
que degrada o cido ribonuclico, um exemplo bem estudado.
Outras glicoprotenas so protenas integrais de membrana. Entre
elas, a (Na + K + )ATPase (protena que bombeia Na + para fora e K +
para dentro da clula) e o complexo de histocompatibilidade principal
(MHC) (marcador da superfcie celular externa que reconhece os
antgenos proticos dos hospedeiros) so exemplos especialmente
interessantes..
As molculas de protenas so protegidas da desnaturao em
presena de glicoprotenas. Por exemplo, a RNase A bovina mais
susceptvel a desnaturao pelo calor que sua contrapartida
glicosilada, a RNase B. Vrios estudos tm demonstrado que as
glicoprotenas ricas em acares so relativamente resistentes
protelise (quebra de polipeptdeos por reaes hidrolticas
catalisadas por enzimas). Como o carboidrato est sobre a superfcie
da molcula, pode formar uma cpsula envolvendo a cadeia
polipeptdica das enzimas proteolticas.
Os carboidratos nas glicoprotenas parecem afetar a funo
biolgica. Em algumas glicoprotenas, essa funo mais facilmente
discernida que em outras. Por exemplo, o elevado contedo de
resduos de cido silico responsvel pela alta viscosidade das
mucinas salivares (as glicoprotenas lubrificantes da saliva). Outro
exemplo so as glicoprotenas anticongelamento dos peixes da
Antrtica. Aparentemente, os resduos dissacardicos formam pontes
de hidrognio com as molculas de gua. O processo retarda a
formao de cristais de gelo.
As glicoprotenas tambm so importantes como mediadores para
os eventos clula-molcula, clula-vrus e clula-clula. Um dos
exemplos do envolvimento glicoprotico nas interaes clulamolcula incluem o receptor de insulina, o qual liga a insulina para
facilitar o transporte de glicose para o interior de numerosas clulas.
Em parte, isso realizado pelo recrutamento de transportadores de
glicose para a membrana plasmtica. Alm disso, o transportador de
glicose que atua no deslocamento da glicose para dentro da clula
tambm uma glicoprotena. A interao entre gp120, a glicoprotena
ligadora na clula-alvo do vrus da imunodeficincia humana (HIV, o
agente causador da AIDS) e as clulas hospedeiras um exemplo da
interao clulavrus. O acoplamento do gp120 ao receptor CD4

137

138

Motta Bioqumica

(glicoprotena transmembrana) encontrado na superfcie de vrios


clulas hospedeiras considerada a primeira etapa no processo
infeccioso.
As glicoprotenas estruturais da clula, componentes do
glicoclix, exercem papel fundamental na adeso celular. O processo
um evento crtico nas interaes do crescimento e diferenciao
clula-clula. As substncias denominadas molculas de adeso
celular (CAMs) esto envolvidas no desenvolvimento embrionrio do
sistema nervoso do rato. Os resduos de cido silico nos
oligossacardeos Nligados de vrias CAMs so importantes nesse
fenmeno.
Atualmente, o contedo de carboidratos nas glicoprotenas est
sendo empregado na investigao de processos normais como o
desenvolvimento de nervos e de certos processos patolgicos. Por
exemplo, as variaes nos contedos de galactose nos anticorpos IgG
esto diretamente relacionadas com a severidade (o grau de
inflamao) da artrite juvenil. Alm disso, a distribuio dos
carboidratos de superfcie em clulas cancerosas pode contribuir no
processo diagnstico de tumores e metstases.
B. Proteoglicanos
Os proteoglicanos so macromolculas presentes na matriz
extracelular, constitudas pala unio covalente e no-covalente de
protenas e glicosaminoglicanos (GAG). As cadeias GAG esto
ligadas s protenas por ligaes N e Oglicosdicas. So
substncias polianinicas formadas por cadeias de unidades
diolosdicas
repetidas
como
a
queratonasulfato
e
o
condroitinasulfato que esto covalentemente ligadas ao esqueleto
polipeptdico chamado protena central. Essas protenas esto ligadas
no-covalentemente a um longo filamento de cido hialurnico. A
cartilagem, que formada por uma rede de fibrilas de colgeno
preenchida por proteoglicanos, pode amortecer foras compressivas
porque esses polianons so altamente hidratados e expulsam a gua
durante a compresso. Quando a cessa a presso, a gua retorna aos
proteoglicanos que voltam a ter a estrutura inicial.

5 Carboidratos

Oligossacardeos N-ligados
Protena central

Queratona sulfato
Condroitina sulfato

cido hialurnico

Figura 5.5
Estrutura do proteoglicano. Existem vrias protenas centrais ligadas de modo no-covalente
ao filamento central de cido hialurnico.

Resumo
1. Os carboidratos, as molculas mais abundantes na natureza, so
classificados como monossacardeos, dissacardeos, oligossacardeos e
polissacardeos de acordo com o nmero de unidades de acar que
contm. Os carboidratos tambm ocorrem como componentes de outras
biomolculas. Glicoconjugados so molculas de protenas e lipdeos
covalentemente ligados a grupos carboidratos. Incluem proteoglicanos,
glicoprotenas e glicolipdeos.

2. Os monossacardeos com grupos funcionais aldedo so aldoses; aqueles


com grupos cetona so cetoses. Acares simples pertencem famlia D e
de acordo com a configurao do carbono assimtrico mais distante
dos grupos funcionais aldedo e cetona semelhantes ao D e L ismero do
gliceraldedo. A famlia D contm os acares biologicamente mais
importantes.
L,

3. Acares que contm cinco ou seis carbonos existem nas formas cclicas
que resultam da reao entre grupos hidroxila e aldedo (produto
hemiacetal) ou grupos cetonas (produto hemicetal). Tanto nos anis com
cinco membros (furanoses) como os anis com seis membros (piranoses),
o grupo hidroxila ligado ao carbono anomrico est abaixo () ou acima
() do plano do anel. A interconverso espontnea entre as formas e
chamada mutarrotao.

4. Os acares simples sofrem vrios tipos de raes qumicas. Derivados


dessas

molculas,

como

os

cidos

urnicos,

aminoacares,

139

140

Motta Bioqumica

desoxiacares e acares fosforilados, exercem importantes papis no


metabolismo celular.

5. Hemiacetais e hemicetais reagem com lcoois para formar acetais e cetais,


respectivamente. Quando a forma cclica hemiacetal ou hemicetal de um
monossacardeo reage com um lcool, a nova ligao denominada
ligao glicosdica, e o composto chamado glicosdeo.

6. As ligaes glicosdicas so formadas entre o carbono anomrico de um


monossacardeo e um dos grupos hidroxila livre de outro
monossacardeo. Dissacardeos so carboidratos compostos de dois
monossacardeos. Os oligossacardeos, carboidratos que contm at 10
unidades de monossacardeos, esto muitas vezes ligados a protenas e
lipdeos. As molculas de polissacardeos so compostas de grande
nmero de unidades de monossacardeos, tem estrutura linear como a
celulose e amilose ou estrutura ramificada como o glicognio e
amilopectina. Os polissacardeos podem ser formados por um nico tipo
de
acar
(homopolissacardeos)
ou
tipos
mltiplos
(heteropolissacardeos).

7. Os trs homopolissacardeos mais comuns encontrados na natureza


(amido, glicognio e celulose) fornecem D -glicose quando so
hidrolizados. A celulose um material estrutural das plantas; amido e
glicognio so formas de armazenamento de glicose nos vegetais e
clulas animais, respectivamente. A quitina, o principal composto
estrutural dos exoesqueletos dos insetos, composta de resduos de
N acetil glicosamina ligados a carbonos no-ramificados. Os
glicosaminoglicanos, os principais componentes dos proteoglicanos, e
murena, um constituinte fundamental das paredes das clulas
bacterianas, so exemplos de heteropolissacardeos, polmeros de
carboidratos que contm mais de um tipo de monossacardeo.

8. A enorme heterogeneidade dos proteoglicanos, que so encontrados


predominantemente na matriz extracelular dos tecidos, exercem diversos,
mas ainda no totalmente entendidos, papis nos organismos vivos. As
glicoprotenas ocorrem nas clulas, tanto na forma solvel como na
forma ligada membrana, e em lquidos extracelulares. Devido a sua
estrutura diversificada, os glicoconjugados, que incluem os
proteoglicanos, glicoprotenas e glicolipdeos, exercem importantes
funes na transferncia de informaes nos seres vivos.

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 106-22.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So
Paulo: Sarvier, 2002. p. 409-40.
STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 1996. p.
437-556.
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed.
New York: McGraw-Hill, 2003. p. 200-33.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre: Artmed, 2000. p. 195-218.

6
Metabolismo dos Carboidratos

Objetivos
1.

Descrever a digesto e absoro dos carboidratos

2.

Descrever a seqncia as reaes da gliclise, incluindo seus substratos,


produtos e co-fatores.

3.

Calcular o balano energtico da transformao de 1 mol de glicose em 2 mol


de lactato (gliclise anaerbica).

4.

Explicar como a relao [ATP]/[ADP] pode controlar a velocidade da gliclise.

5.

Descrever a formao do glicognio (glicognese)

6.

Descrever a degradao do glicognio (glicogenlise).

7.

Reconhecer a ao da adrenalina e do glucagon no metabolismo do


glicognio.

8.

Descrever o papel fisiolgico do efeito controle do AMPc sobre o metabolismo


dos carboidratos.

9.

Descrever a gliconeognese a partir do lactato, alanina e glicerol.

10. Descrever a via pentose-fosfato.


11. Explicar como a galactose, a frutose e a manose so utilizadas para a
produo de energia.

Os carboidratos, as biomolculas mais abundantes na natureza,


so as fontes universais de nutrientes para as clulas humanas. A
glicose o carboidrato mais importante. Nas clulas, a glicose
degradada ou armazenada por diferentes vias. A gliclise transforma
a glicose em duas molculas de piruvato (ou lactato) posteriormente,
degradado para a produo de energia. O glicognio, a forma de
armazenamento da glicose nos mamferos, sintetizado pela
glicognese. As reaes da glicogenlise desdobram o glicognio em
glicose. tambm possvel sintetizar glicose a partir de precursores
no carboidratos pelo mecanismo chamado gliconeognese. A via
das pentoses fosfato converte a glicose em ribose5fosfato (o
acar utilizado para a sntese dos nucleotdeos e cidos nuclicos) e
outros tipos de monossacardeos. O NADPH, um importante agente
redutor celular, tambm produzido por essa via.
A sntese e o uso da glicose, o principal combustvel da maioria
dos organismos, o foco de discusso do metabolismo dos

143

144

Motta

Bioqumica

Intolerncia lactose
Alguns grupos populacionais
apresentam carncia de lactase
na idade adulta. A deficincia
dessa enzima impede a hidrlise
da lactose que se acumula no
lmem intestinal. A grande
presso osmtica exercida pela
lactose no-absorvida promove
um influxo de gua para o
intestino. A lactose degradada
pela ao bacteriana, forma vrios
cidos com a liberao de dixido
de carbono. A combinao desses
efeitos provoca distenso
abdominal, clicas, nusea e
diarria. Essa condio
conhecida como intolerncia `a
lactose.

carboidratos. Nos vertebrados, a glicose transportada atravs do


corpo pelo sangue. Quando as reservas de energia celular esto
baixas, a glicose degradada pela via glicoltica. As molculas de
glicose no necessrias para a imediata produo de energia, so
armazenadas como glicognio no fgado e msculo. Dependendo das
necessidades metablicas da clula, a glicose pode tambm ser
empregada para sintetizar outros monossacardeos, cidos graxos e
certos aminocidos.

6.1 Digesto e absoro dos carboidratos


Os principais carboidratos da dieta so: o amido, a sacarose e a
lactose. O glicognio, a maltose, a glicose livre e a frutose livre
constituem fraes relativamente menores de carboidratos ingeridos.
A absoro dos carboidratos pelas clulas do intestino delgado
realizada aps hidrlise dos dissacardeos, oligossacardeos e
polissacardeos em seus componentes monossacardeos. As quebras
ocorrem seqencialmente em diferentes segmentos do trato
gastrointestinal por reaes enzimticas:
1. -Amilase salivar. A digesto do amido inicia durante a
mastigao pela ao -amilase salivar (ptialina) que hidrolisa as
ligaes glicosdicas (14), com a liberao de maltose e
oligossacardeos. Contudo, a -amilase salivar no contribui
significativamente para a hidrlise dos polissacardeos, devido ao
breve contato entre a enzima e o substrato. Ao atingir o estmago, a
enzima inativada pelo baixo pH gstrico.
2. -Amilase pancretica. O amido e o glicognio so
hidrolisados no duodeno em presena da -amilase pancretica que
produz maltose como produto principal e oligossacardeos chamados
dextrinas contendo em mdia oito unidades de glicose com uma ou
mais ligaes glicosdicas (16). Certa quantidade de isomaltose
(dissacardeo) tambm formada.
Amilase
Amido (ou glicognio)

maltose + dextrina

3. Enzimas da superfcie intestinal. A hidrlise final da maltose


e dextrina realizada pela maltase e a dextrinase, presentes na
superfcie das clulas epiteliais do intestino delgado. Outras enzimas
tambm atuam na superfcie das clulas intestinais: a isomaltase, que
hidrolisa as ligaes (1 6) da isomaltose, a sacarase, que hidrolisa
as ligaes , (1 2) da sacarose em glicose e frutose, a lactase que
fornece glicose e galactose pela hidrolise das ligaes (1 4) da
lactose.
Maltase
Maltose + H 2 O

2 D glicose
Dextrinase
Dextrina + H 2 O

n D glicose
Isomaltase
Isomaltose + H 2 O
2 D glicose

Sacarose + H 2 O Sacarase

Lactase
Lactose + H 2 O

D -frutose

+ D glicose

D -galactose

+ D glicose

6 Metabolismo dos carboidratos

145

Quadro 6.1 Diabete melito

O diabete melito (DM) uma sndrome de


etiologia mltipla, decorrente da falta de insulina
e/ou da incapacidade da insulina de exercer
adequadamente seus efeitos. Caracteriza-se por
hiperglicemia crnica com distrbios do metabolismo
dos carboidratos, lipdeos e protenas.
Pacientes
portadores
de
episdios
hiperglicmicos, quando no tratados, desenvolvem
cetoacidose ou coma hiperosmolar. Com o progresso
da doena aumenta o risco de desenvolver
complicaes crnicas, tais como: retinopatia,
angiopatia, doena renal, neuropatia, proteinria,
infeco, hiperlipemia e doena aterosclertica.

DM tipo 1 acredita-se ter susceptibilidade


gentica no desenvolvimento do diabetes. A
exposio a um desencadeador (viral, ambiental,
toxina) estimula a destruio imunologicamente
mediada das clulas . A hiperglicemia est presente
quando 80-90% das clulas esto destrudas.
Diabetes melito tipo 2. Resulta, em geral, de
graus variveis de resistncia insulina e deficincia
relativa de secreo de insulina. A maioria dos
pacientes tem excesso de peso e a cetoacidose
ocorre apenas em situaes especiais, como durante
infeces graves. Ao redor de 80-90% de todos os
casos de diabetes correspondem a esse tipo. Ocorre,
em geral, em indivduos obesos com mais de 40
anos, de forma lenta e com histria familiar de
diabetes.
Os
pacientes
apresentam sintomas
moderados e no so dependentes de insulina para
prevenir cetonria. Nesses casos os nveis de
insulina podem ser: normais, diminudos ou
aumentados.

Diabetes melito tipo 1 (imuno-mediado). Resulta


primariamente
da
destruio
das
clulas

pancreticas e tem tendncia a cetoacidose. Inclui


casos decorrentes de doena auto-imune e aqueles
nos quais a causa da destruio das clulas no
conhecida. O tipo 1 compreende 5-10% de todos os
casos de diabetes melito. Pacientes com

A captao de monossacardeos do lmen para a clula intestinal


efetuada por dois mecanismos:

Transporte passivo (difuso facilitada). O movimento da glicose


est a favor do gradiente de concentrao (de um
compartimento de maior concentrao de glicose para um
compartimento de menor concentrao). A difuso facilitada
mediada por um sistema de transporte de monossacardeos do
tipo Na + independente. O mecanismo tem alta especificidade
para D frutose.

Transporte ativo. A glicose captada do lmen para a clula


epitelial
do
intestino
por
um
co transportador
Na + monossacardeo (SGLT). um processo ativo indireto cujo
mecanismo envolve a (Na + K + ) ATPase (bomba de (Na + K + ),
que remove o Na + da clula, em troca de K + , com a hidrlise
concomitante de ATP (ver Captulo 9: seo 9.4.D). O mecanismo
tem alta especificidade por D glicose e D galactose.
Lmem
Glicose

Na+

Capilar
Glicose
Glicose

Na+
ATP
Na+

K+
ADP
K+

Figura 6.1
Captao da glicose por transporte ativo

146

Motta

Bioqumica

Aps a absoro, a glicose no sangue aumenta e as clulas das


ilhotas pancreticas secretam insulina que estimula a captao de
glicose principalmente pelos tecidos adiposo e muscular. O fgado, o
crebro e os eritrcitos, no necessitam de insulina para captao de
glicose por suas clulas (tecidos insulino independentes). Outros
hormnios e enzimas, alm de vrios mecanismos de controle, so
importantes na regulao da glicemia.

6.2 Gliclise
A gliclise (do grego, glykos, doce e lysis, romper), tambm
chamada via de Embden Meyerhof Parnas, a via central do
catabolismo da glicose em uma seqncia de dez reaes enzimticas
que ocorrem no citosol de todas as clulas humanas. Cada molcula
de glicose convertida em duas molculas de piruvato, cada uma
com trs tomos de carbonos em processo no qual vrios tomos de
carbono so oxidados. Parte da energia livre liberada da glicose
conservada na forma de ATP e de NADH. Compreende dois estgios:

Primeiro estgio (fase preparatria). Compreendem cinco reaes


nas quais a glicose fosforilada por dois ATP e convertida em
duas molculas de gliceraldedo 3 fosfato.

Segundo estgio (fase de pagamento). As duas molculas de


gliceraldedo 3 fosfato so oxidadas pelo NAD + e fosforiladas
em reao que emprega o fosfato inorgnico. O resultado lquido
do processo total de gliclise a formao de 2 ATP, 2 NADH e 2
piruvato, s custas de uma molcula de glicose. A equao geral
da gliclise :
Glicose + 2 ADP + 2 P i + 2 NAD +
2 piruvato + 2 NADH + 2 H + + 2 ATP + 2 H 2 O

Em condies de baixo suprimento de oxignio (hipxia) ou em


clulas sem mitocndrias, o produto final da gliclise o lactato e
no o piruvato, em processo denominado gliclise anaerbica:
Glicose + 2 ADP + 2 P i 2 lactato + 2 ATP + 2 H 2 O
Quando o suprimento de oxignio adequado, o piruvato
transformado em acetil CoA nas mitocndrias. O grupo acetil da
acetil CoA totalmente oxidado no ciclo do cido ctrico com a
formao de duas molculas de CO 2 (ver Captulo 7) .
A. Reaes da gliclise
Todas as reaes da gliclise com formao de piruvato (ou
lactato) so catalisadas por enzimas presentes no citoplasma (Figura
6.2). Para cada molcula de glicose so consumidas duas molculas
de ATP no primeiro estgio e no segundo estgio so produzidas
quatro ATP e 2 NADH. Os eltrons oriundos da reoxidao do NADH
em NAD + em condies aerbicas, so transferidos para o oxignio
molecular na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons que

6 Metabolismo dos carboidratos

libera a energia livre para a sntese de ATP pela fosforilao


oxidativa (ver Captulo 8).
Glicose

ATP

Pi

Hexocinase
Glicocinase

Glicose-6-fosfatase

ADP

Glicose-6-fosfato
Glicose
fosfato-isomerase

Frutose-6-fosfato

ATP

Pi

Fosfofrutocinase

Frutose-1,6-difosfatase

ADP

Frutose-1,6-difosfato
Aldolase

Gliceraldedo-3-fosfato
Diidroxiacetona-fosfato
Triose-fosfato-isomerase
Pi
2 NAD+
2 NADH

Gliceraldedo
3-fosfato-desidrogenase

1,3-Bifosfoglicerato (2)
2 ADP
Fosfoglicerato-cinase

2 ATP
3-Fosfoglicerato (2)
Fosfoglicerato-mutase

2-Fosfoglicerato (2)
Enolase

Fosfoenolpiruvato (2)
2 ADP
Piruvato-cinase

2 ATP
2 NADH
2 NAD+

Piruvato (2)
Lactato-desidrogenase

Lactato (2)
Figura 6.2
Reaes da gliclise.

1. Sntese de glicose 6 fosfato (G6P). Na primeira reao da


gliclise, a glicose ativada por fosforilao no grupo hidroxila em

147

148

Motta

Bioqumica

C6 com a formao de glicose 6 fosfato pela transferncia de um


grupo fosfato do ATP em reao irreversvel catalisada pela
hexocinase em presena de ons magnsio que interage com as cargas
negativas dos grupos fosfato para formar o complexo MgATP 2- . A
hexocinase inibida alostericamente pelo produto da reao, a
glicose 6 fosfato.
2+

2+

Mg

O
O

O
O

O
O

Adenosina
O

OH

O
P

Adenosina

MgADP
O

O
Hexocinase

6 CH2

HO

MgATP 2

Mg

O
H
OH

OH
Glicose

H
OH

6 CH2

H
HO

O
H
OH

OH

H
OH

Glicose-6-fosfato

A glicose eletricamente neutra, mas quando fosforilada, tornase um composto carregado negativamente e hidroflico, que impede a
sua transferncia atravs da membrana celular, confinado-a na clula.
A hexocinase tambm catalisa a fosforilao de outras hexoses
(Quadro 6.2)
A glicose livre obtida a partir da hidrlise da glicose-6-fosfato
pela enzima glicose 6 fosfatase e pode ser transportada pelo sangue
para os rgos perifricos:
Gli cos e 6 fosfatase
Glicose 6 fosfato + H 2 O
glicose + P i

A glicose livre formada nessa hidrlise de grande importncia


para a manuteno dos nveis de glicemia pelo fgado, na ltima
etapa da gliconeognese e da glicogenlise. A reao no regenera o
ATP.

6 Metabolismo dos carboidratos

149

Quadro 6.2 Hexocinase e glicocinase

A enzima hexocinase cataliza a fosforilao de


diferentes monossacardios de seis carbonos, como a Dglicose, D manose, D-frutose e D-glicosamina.
Diferentes isoenzimas (protenas que catalisam a
mesma reao) da hexocinase esto presentes em vrios
tecidos de mamferos. Cada isoenzima exibe propriedades
cinticas diferentes. As clulas hepticas (hepatcitos) de
mamferos tambm contm glicocinase (tambm chamada
hexocinase tipo IV) que difere das isoenzimas do msculo
esqueltico. A ao cataltica da glicocinase est restrita a
D-glicose e a D-manose e tem um Km de ~10mM para a
glicose. Essa enzima requer, portanto, nveis bem mais
elevados de glicose para a sua atividade mxima (o Km das
outras isoenzimas ~0,1 mM). A glicocinase no inibida
pela glicose-6-fosfato, mas pelo seu ismero, a frutose-6fosfato e mediada por uma protena reguladora.
Em alguns microorganismos e invertebrados, existe
uma glicocinase
diferente formado por um grupo de
isoenzimas especficas para glicose. Nesses organismos, a
glicocinase catalisa a reao inicial da gliclise.

A glicose eletricamente neutra, mas quando


fosforilada, apresenta uma carga negativa que
impede a sua transferncia atravs da membrana
celular, confinado-a na clula. A hexocinase tambm
catalisa a fosforilao de outras hexoses (ver Quadro
lateral
As clulas do fgado contm glicocinase (ou
hexocinase IV) que tambm catalisa a fosforilao da
glicose a glicose6fosfato. Essa enzima no
inibida pelos teores elevados da glicose6fosfato e
atua quando a concentrao de glicose sangnea
estiver acima dos teores fisiolgicos normais, como,
por
exemplo,
aps
uma
refeio
rica
em
carboidratos. Desse modo, o fgado atua como um
tampo de glicose sangnea, pois capta o excesso
de glicose circulante independente da concentrao
de
glicose6fosfato,
tornando
possvel
o
armazenamento de glicose sob a forma de glicognio
ou cidos graxos. A glicocinase ativada pela
insulina e, assim, sua atividade deficiente nos
estados de desnutrio e no diabete melito.

1.0
Atividade enzimtica relativa

Hexocinase

Glicocinase

Concentrao da glicose (mmol/L)


Figura 6.3
Diferenas na velocidade de fosforilao das enzimas hexocinase e glicocinase em relao concentrao de
glicose.

150

Motta

Bioqumica

Quadro 6.3 Destino da glicose 6 fosfato

A
glicose-6-fosfato

um
importante
intermedirio central para vrias rotas metablicas.

Glicognio

A via alternativa predominante depende do estado


metablico do organismo e varia em diferentes
condies.

cidos urnicos
Glicoprotenas

Glicose-1-fosfato

Glicosamina-6-fosfato

Glicose-6-fosfato

Fosfatase
heptica

Frutose-6-fosfato

Gliclise

Gliconolactona-6-fosfato

Glicose

Via das pentoses-fosfato

Figura 6.4
Destinos da glicose-6-fosfato. A glicose-6-fosfato pode ser usada como: (1) combustvel pelo metabolismo
anaerbico ou aerbico, por exemplo, no msculo; (2) ser convertida em glicose livre no fgado e, subsequentemente,
liberada para o sangue; (3) ser processada pela via das pentoses-fosfato para gerar NADH ou ribose em vrios
tecidos; (4) formar compostos de grande importncia metablica.

2. Converso da glicose-6-fosfato em frutose 6 fosfato (F6P).


A isomerizao reversvel da glicose 6 fosfato em frutose 6 fosfato

catalisada
pela
fosfoglicose isomerase.
A
aldose
(glicose 6 fosfato) convertida em cetose (frutose 6 fosfato). O
oxignio carbonlico se deslocou do C1 para o C2:
CH2 OPO32-

2-

CH2 OPO3

O
OH

CH2 OH
OH
OH

OH

OH
OH

OH

3. Fosforilao da frutose 6 fosfato em frutose 1,6 bifosfato


(FBP). A fosfofrutocinase 1 (PFK 1) catalisa irreversivelmente a
transferncia do grupo fosfato do ATP para o C1 da frutose 6 fosfato
com a formao de frutose 1,6 bifosfato:

6 Metabolismo dos carboidratos

CH2 OPO3

2-

CH2OPO3

CH2 OH
OH

2-

CH2 OPO3 2

ATP (Mg

2+

OH

ADP

OH

OH
OH

OH

A fosfofrutocinase 1 a principal enzima reguladora da gliclise


nos msculos. A atividade da enzima modulada em presena de
ativadores ou inibidores alostricos (Quadro 6.1).
Quadro 6.1 Principais efetores alostricos da fosfofrutocinase-1.
Efetores positivos (ativadores)

Efetores negativos (inibidores)

Frutose 1,6 bifosfato

ATP

Frutose 2,6 bifosfato


ADP
AMP
Fosfato
K+

Citrato
cidos graxos de cadeia longa
H+
Ca +

NADH

A frutose 2,6 bifosfato um potente ativador alostrico da


atividade da fosfofrutocinase 1 (PFK 1) heptica e sintetizada a
partir da frutose 6 fosfato pela ao da fosfofrutocinase 2 (PFK 2)
em resposta a sinais hormonais correlacionados com os nveis de
glicose no sangue. Quando os nveis de glicose sangnea esto
elevados, o estmulo hormonal (insulina) eleva os teores de
frutose 2,6 bifosfato que aumentam a atividade da PFK 1 ativando a
gliclise e reduzindo a atividade da enzima que catalisa a reao
reversa, a frutose 1,6 bifosfatase (inibe a gliconeognese, ver
adiante).
2

O3 POCH2
H

H
OH

O
HO
H

Frutose-6-fosfato

CH2 OH

ATP

ADP

OH

Fosfofrutocinase-2

O3 POCH2
H

CH2 OH
HO

OH

Frutose-2,6-bifosfato

A PFK 2 uma enzima bifuncional que atua como fosfatase


quando fosforilada em resposta ao hormnio glucagon e como cinase
quando defosforilada em resposta ao hormnio insulina.

PO32

151

152

Motta

Bioqumica

ATP

ADP

Frutose
6-fosfato

Frutose
2,6-bifosfato
Frutose
2,6-bifosfatase

Pi

HO

Como a fosforilao catalisada pela fosfofrutocinase-1


irreversvel, a reao inversa, a hidrlise da frutose 1,6 bifosfato em
frutose 6 fosfato e fosfato inorgnico, catalisada por uma enzima
distinta, a frutose 1,6 bifosfatase:
Frutose 6 bifosfatase

Frutose 1,6 bifosfato + H 2 O

Frutose 6 fosfato + P i
A frutose 1,6 bifosfatase importante na via gliconeognese
(ver adiante) e inibida alostericamente pelo AMP e pela
frutose 2,6 bifosfato.
4. Clivagem da Frutose 1,6 bifosfato. A frutose-1,6-bifosfato
clivada entre os carbonos 3 e 4 para produzir duas trioses: o
gliceraldedo 3 fosfato (GAP) e diidroxiacetona fosfato (DHAP)
pela ao da enzima aldolase. O substrato mostrado em cadeia
aberta para a melhor visualizao da reao:
1 CH OPO
2
3
2C O

HO

3C

4C

OH

5C

OH

2-

1 CH OPO 22
3
2C O
3 CH OH
2

4C

5C

OH

6 CH OPO 22
3

6 CH OPO 22
3

A reao no favorvel ( G = +23,8 kJmol -1 ) mas procede


porque os produtos so rapidamente removidos.
e
da
5.
Interconverso
do
gliceraldedo 3 fosfato
diidroxiacetona
fosfato
(DHAP).
A
enzima
triose fosfato isomerase catalisa a interconverso por isomerizao
do gliceraldedo 3 fosfato e da diidroxiacetona fosfato. A reao
dirige a diidroxiacetona fosfato para o gliceraldedo 3 fosfato, pois
esse o nico que pode ser diretamente degradado nas etapas
subseqentes da gliclise:

6 Metabolismo dos carboidratos

H
H

OH

H
C

Triose-fosfato-isomerase

OH

CH2 OPO23

CH2 OPO23

Diidroxiacetonafosfato

Gliceraldedo3-fosfato

A
diidroxiacetona fosfato
por
sua
transformao
em
torna-se
essencial
na
biossntese
dos
glicerol 3 fosfato,
triacilgliceris e fosfolipdios (ver Captulo 9: Metabolismo dos
lipdios).
6. Oxidao do gliceraldedo 3 fosfato a 1,3 bifosfoglicerato
(1,3 BPG). Essa etapa a nica reao de oxidao da gliclise. O
gliceraldedo 3 fosfato oxidado a 1,3 bifosfoglicerato com a
concomitante reduo de um mol de NAD + a NADH, pela enzima
gliceraldedo 3 fosfato desidrogenase:
H

O
C

OPO23

O
1

OH + NAD+ + Pi

CH2 OPO 23

Gliceraldedo
3-fosfato

Gliceraldedo-3-fosfato
desidrogenase

OH + NADH + H +

CH2 OPO23

1,3-Bifosfoglicerato

A reao oxida o aldedo e incorpora um fosfato inorgnico com a


produo do primeiro composto de alta energia da via, o
1,3 bifosfoglicerato (1,3 BPG).
O NADH formado necessita ser reoxidado para a continuao da
via glicoltica, que ocorre por duas vias: (a) a oxidao pela cadeia
mitocondrial transportadora de eltrons ou (b) pela transformao do
piruvato em lactato.
A
partir
do
1,3 bifosfoglicerato

sintetizado
o
2,3 bifosfoglicerato, presente nos eritrcitos e um importante
regulador da ligao do oxignio hemoglobina. Os efeitos
regulatrios do 2,3 bifosfoglicerato so semelhantes aos exercidos
pela frutose 2,6 bifosfato sobre a PFK 1.
7. Formao de ATP a partir do 1,3 bifosfoglicerato. A
fosfoglicerato cinase catalisa a transferncia do fosfato do
1,3 bifosfoglicerato para o ADP gerando o primeiro ATP da via junto
com o 3 fosfoglicerato:

153

154

Motta

Bioqumica

OPO23

O
C

OH

ADP

CH2 OPO23

Fosfoglicerato-cinase

OH

ATP

CH2 OPO23

1,3-Difosfoglicerato

3-Fosfoglicerato

A reao reversvel em condies fisiolgicas pois as energias


livres de hidrlise do ATP e do 1,3 bifosfoglicerato apresentam
magnitudes semelhantes. A produo de ATP pela transferncia direta
de fosfato do substrato (1,3 bifosfoglicerato) para o ADP em
ausncia de oxignio, denominada fosforilao ao nvel do
substrato. Nessa etapa so gerados dois ATP por molcula de glicose.
8. Converso do 3 fosfoglicerato a 2 fosfoglicerato (2PG). O
3 fosfoglicerato convertido reversivelmente a 2 fosfoglicerato pela
ao da fosfoglicerato mutase que requer a presena de
2,3 bifosfoglicerato (ver acima) para a sua ao:
O

OH

OPO23

2
3

O
C

Fosfoglicerato-mutase

OPO23

OH

3 - Fosfoglicerato

2 - Fosfoglicerato

9. Desidratao do 2 fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato (PEP).


A enolase catalisa a remoo reversvel de uma molcula de gua do
2 fosfoglicerato para formar o segundo intermedirio de alta
energia, o fosfoenolpiruvato:
O

OPO23

OH

2
3

H
3 - Fosfoglicerato

C
H
Enolase

OPO23 + H2 O

C
H
Fosfoenolpiruvato

A reao reversvel apesar do elevado contedo energtico do


fosfoenolpiruvato.
10. Formao do piruvato. A transferncia do grupo fosfato do
fosfoenolpiruvato para o ADP formando piruvato e ATP catalisada
pela enzima piruvato cinase (PK) e presena de Mg 2+ ou Mn 2+ e K + :

6 Metabolismo dos carboidratos

O
C

OPO23

+ ADP

Piruvato-cinase

CH2

O + ATP

CH3

Fosfoenolpiruvato

Piruvato

Sob condies fisiolgicas, a reao altamente exergnica,


fornecendo energia livre suficiente para a formao de ATP. Essa a
segunda reao da gliclise que fosforila o ATP ao nvel do substrato.
Nesse estgio so gerados dois ATP por molcula de glicose.
A piruvato cinase uma enzima alostrica ativada por nveis
elevados de frutose 1,6 bifosfato e inibida pelo ATP e alanina. A
piruvato cinase tambm modulada por uma protena-cinase
dependente de AMPc. Em teores diminudos de glicemia, o glucagon
eleva os nveis intracelulares de AMPc promovendo a fosforilao e
inibio da piruvato cinase. Desse modo, a gliclise interrompida e
o piruvato desviado para a sntese da glicose pela gliconeognese
que, por sua vez, tambm estimulada pelo glucagon. A
piruvato cinase reativada por defosforilao realizada por uma
fosfoprotena fosfatase.
B. Reduo do piruvato em lactato
O piruvato pode seguir vrias vias metablicas. Nos tecidos que
funcionam sob condies anaerbicas, como o msculo esqueltico
durante atividades fsicas vigorosas, o piruvato reduzido a lactato
para gerar novamente NAD + (fermentao homolctica) o que permite
a continuao da gliclise com baixa produo de ATP.
A reduo do piruvato a lactato catalisada pela
lactato desidrogenase com o emprego de NADH como agente
redutor:
O

C
C

C
O

CH3
Piruvato

NH2

+
N
R

O
C

H+

Lactato-desidrogenase

HO

C
H

CH3
NADH

Lactato

O NADH utilizado na reduo gerado durante a gliclise na


oxidao do gliceraldedo 3 fosfato a gliceraldedo 1,3 bifosfato
(Figura 6.4).

NH2
+
N
R
NAD+

155

156

Motta

Bioqumica

Lactato

Piruvato

NAD+

NADH +H +

Gliceraldedo
3 - fosfato

Gliceraldedo
1,3 - bifosfato
Pi

Figura 6.5
Reciclagem do NADH na gliclise anaerbica. O NADH produzido na
converso do gliceraldedo 3 fosfato a gliceraldedo 1,3 bifosfato
oxidado quando o piruvato convertido a lactato.

Essa reao a principal opo empregada pelas clulas sob


condies hipxicas como em msculos esquelticos submetidos
atividade intensa, por exemplo, para a reoxidao do NADH a NAD +
no citosol e, assim, prosseguir produzindo ATP pela gliclise. O
lactato formado no msculo ativo difunde para o sangue e
transportado at o fgado, onde convertido em glicose pela
gliconeognese (ver adiante) .
Alguns tecidos como os eritrcitos, mesmo sob condies
aerbicas, produzem lactato como produto final da gliclise.
C. Rendimento energtico da gliclise
Durante a gliclise, a energia livre liberada na transformao de
uma molcula de glicose a dois piruvato conservada na forma de
dois ATP. A variao de energia livre G 0 = 135,6 kJmol -1 em
todo o processo. Parte da energia liberada dissipada como calor. A
equao :
Glicose + 2 NAD + + 2 ADP + 2 P i
2 piruvato + 2 NADH + 2 H + +2 ATP + 2 H 2 O
Reaes

ATP/mol de glicose

Fosforilao da glicose

Fosforilao da frutose 6 fosfato

2(1,3 Bifosfoglicerato 3 fosfoglicerato)

+2

2(Fosfoenolpiruvato piruvato)

+2

Total lquido

+2

A Tabela 6.1 mostra as variaes de energia livre de cada reao


da gliclise em condies fisiolgicas ( G) e no estado-padro
( G ). Parte das reaes so endergnicas ( G <0). Entretanto,
quando a variao de energia livre real ( G) de cada reao
calculada a partir de suas concentraes fisiolgicas intracelulares,
somente trs reaes (triose-fosfato-isomerase, fosfoglicerato cinase

6 Metabolismo dos carboidratos

e fosfoglicerato mutase) necessitam energia, mesmo assim, em


pequenas quantidades.
Tabela 6.1 Variao de energia livre padro e da energia livre real de
cada reao de gliclise.
1

Variao de energia livre (kJmol )


Enzima
G (estado-padro)

G (condies
fisiolgicas)

16,7

33,4

+1,7

2,5

Fosfofrutocinase

14,2

22,2

Aldolase

+23,8

-1,3

Triose fosfato isomerase

+7,5

+2,5

Gliceraldedo 3 fosfatodesidrogenase

+6,3

1,7

Fosfoglicerato cinase

18,8

+1,3

Fosfoglicerato mutase

+4,6

+0,8

Enolase

+1,7

3,3

31,4

16,7

Hexocinase
Glicose 6 fosfato isomerase

Piruvato cinase

No transcorrer da via glicoltica em condies aerbicas, dois


NAD + so reduzidos a dois NADH. Os NADH produzidos so
reoxidados em NAD + pela transferncia de seus eltrons para a
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A energia livre
liberada no processo utilizada para a sntese de ATP a partir de ADP
pela fosforilao oxidativa (ver Captulo 8).
Em condies anaerbicas, as clulas do msculo esqueltico
degradam a glicose a lactato e tem G = 196 kJmol 1 :
Glicose + 2 ADP + 2 P i 2 lactato + 2 ATP + 2 H +
Em condies aerbicas, o piruvato no transformado em
lactato e sim transferido para a mitocndria onde convertido em
acetil CoA com posterior oxidao a CO 2 e H 2 O no ciclo do cido
ctrico.
D. Regulao da gliclise
A regulao da gliclise complexa pela sua importncia na
gerao de energia na forma de ATP e pela produo de vrios
intermedirios glicolticos destinados a biossntese. Na maioria das
clulas, a velocidade da gliclise determinada, principalmente, pela
regulao alostrica das enzimas hexocinase, fosfofrutocinase 1
(PFK 1) e piruvato cinase. As reaes catalisadas por essas enzimas
so irreversveis e podem ser ligadas ou desligadas por efetores
alostricos. Por exemplo, a hexocinase inibida pelo excesso de
glicose-6-fosfato. Vrios compostos de alta energia atuam como
efetores alostricos. Por exemplo, elevadas concentraes de AMP
(um indicador de baixa produo de energia) ativa a PFK 1 e a

157

158

Motta

Bioqumica

piruvato cinase. Por outro lado, teores elevados de ATP (um


indicador que as necessidades energticas das clulas foram
atingidas) inibem as duas enzimas. O citrato e a acetil CoA, que
acumulam quando existe ATP em quantidade suficiente, inibem a
e
a
piruvato cinase,
respectivamente.
A
PFK 1
frutose 2,6 bifosfato, produzida por induo de hormnio da PFK 2,
um indicador de altos nveis de glicose disponvel e alostericamente
ativa a PFK 1. O acmulo de frutose 1,6 bifosfato ativa a
piruvato cinase, promove um mecanismo de controle (a
frutose 1,6 bifosfato um ativador alostrico). Na Figura 6.6
mostrada a ao de cada inibidor ou ativador sobre as enzimas
reguladores.

6 Metabolismo dos carboidratos

Glicose
a
Glicognio

G6P

G1P
b

F6P

F2,6P

FBP

G3P

DHAP

BPG
ADP
AMP

ATP
3PG

2PG

PEP
ADP
AMPc

ATP

Lactato

Piruvato

cidos
graxos

Acetil-CoA

ATP
Cliclo do
cido
ctrico

Citrato

Figura 6.6
Caractersticas regulatrias da gliclise.

Aps uma refeio rica em carboidratos, a insulina promove o


aumento na sntese das enzimas glicocinase, fosfofrutocinase 1 e

159

160

Motta

Bioqumica

Metabolismo do lcool
O lcool sintetizado por leveduras
por meio da fermentao alcolica.
um processo em duas etapas em que a
piruvato-descarboxilase remove o
grupo carboxilato do piruvato para
produzir acetaldedo.
Piruvato acetaldedo
2+

A enzima requer Mg e a pirofosfato


de tiamina (TPP).
A lcool-desidrogenase catalisa a
transformao do acetaldedo em
etanol:

piravato cinase. Por outro lado, a sntese dessas mesmas enzimas


reduzida quando o glucagon plasmtico est aumentado e a insulina
reduzida, como no jejum ou diabetes.
E. Destino do piruvato
O piruvato formado na gliclise e de outras fontes utilizado em
diferentes vias metablicas dependendo de vrios fatores e
necessidades momentneas de certos metablitos chave. Os
principais destinos so: sntese de lactato (gliclise em condies
anaerbicas), acetil CoA (ciclo do cido ctrico), oxaloacetato
(gliconeognese) e alanina (sntese de aminocidos) (Figura 6.6).

Acetaldedo etanol
O etanol considerado um produto de
excreo do metabolismo da glicose;
seu acmulo txico aos organismos
que o produzem.

Lactato

Acetil-CoA

Alanina

Ciclo
de Cori

Ciclo do
cido ctrico

Sntese de
protenas

Oxaloacetato

Gliconeognese

Figura 6.6
Destinos do piruvato.

6.3 Glicognese
A glicognese a sntese intracelular do glicognio. O glicognio
um polissacardio composto de unidades repetidas de D glicose
unidas por ligaes glicosdicas (1 4) com ramificaes formadas
por ligaes (1 6) a cada 8 a 14 resduos. Constitui a principal
forma de reserva de polissacardeos nos tecidos animais.
O glicognio sintetizado em quase todos os tecidos animais,
mas os maiores depsitos esto presentes no fgado e msculos
esquelticos. O glicognio armazenado em grnulos intracelulares
que tambm contm as enzimas que catalisam as reaes para a sua
sntese e degradao. A glicose armazenada sob a forma de
glicognio no fgado e msculos destinam-se a diferentes funes:

Glicognio heptico. Atua como reservatrio de glicose para a


corrente sangnea com a distribuio para outros tecidos. A
quantidade de glicognio heptico varia amplamente em resposta
ingesto de alimentos. Acumula aps as refeies e, quando
necessrio, degradado lentamente para manter a concentrao
de glicose no sangue mais ou menos constante. As reservas de
glicognio heptico no homem apresentam importante papel
como fonte de glicose no perodo entre as refeies e, em maior
extenso, durante o jejum noturno (isto , 8-16 horas).

Glicognio muscular. Serve como combustvel para gerar ATP


durante a atividade muscular aumentada. formado durante o
repouso aps as refeies. Os nveis de glicognio muscular

6 Metabolismo dos carboidratos

apresentam menor variabilidade do que os teores hepticos em


resposta a ingesto de carboidratos.
A. Reaes da glicognese
A sntese do glicognio ocorre aps as refeies, quando os
teores de glicose sangnea esto elevados. At recentemente,
presumia-se que a glicose sangnea era a nica precursora direta
nesse processo. Entretanto, em condies fisiolgicas, grande parte
do glicognio produzido por um mecanismo envolvendo a
seqncia: glicose da dieta molcula C 3 glicognio heptico. O
lactato e a alanina so as principais molculas-C 3 nesse processo (ver
gliconeognese). O lactato formado nos eritrcitos por gliclise e
captado pelo fgado e convertido em glicose 6 fosfato na
gliconeognese. A discusso a seguir mostra a sntese do glicognio a
partir da glicose-6-fosfato derivada da glicose livre pela ao da
glicocinase (no fgado) ou da hexocinase (no msculo).
1. Sntese da glicose 1 fosfato. A glicose 6 fosfato
pela
convertida
reversivelmente
a
glicose 1 fosfato
fosfoglicomutase, uma enzima que contm um grupo fosforil ligado a
um resduo serina reativo:
2-

CH2 OH

CH2 OPO3

O
OH

OH
OH

OH
OH

2-

OH

OPO3
OH

O grupo fosforil da enzima transferido para a glicose 6 fosfato


com a formao de glicose 1,6 bifosfato (G1,6P) como
intermedirio. Na sntese de glicose 1 fosfato, o grupo fosforil
ligado ao C6 retorna ao resduo serina da enzima.
2. Sntese de uridina difosfato-glicose (UDP glicose ou
UDPG).
Em
presena
da
UDP glicose pirofosforilase,
a
glicose 1 fosfato reage com a trifosfato de uridina (UTP), para
produzir UDP glicose uma forma ativada de glicose. A
UDP glicose um composto doador de unidade glicosil para
biossntese de glicognio. O UDP est ligado ao C1 da glicose
conforme reao descrita por Leloir em 1957:

161

162

Motta

Bioqumica

-D-Glicose-1-fosfato

CH2 OH
H
HO

O
H

H
O

OH

OH

O
NH

UTP

O
O

O
O

CH2

O
H

OH

OH

H2 O
2 Pi

Pirofosfatase
inorgnica

UDP-Glicose
pirofosforilase

PPi

CH2 OH
H
HO

NH
O

N
O

OH

OH

P
O

O
O

CH2

O
H

OH

OH

UDP-Glicose

O pirofosfato inorgnico (PP i ) derivado da UTP, sofre hidrlise


exergnica a dois fosfatos (PP i + H 2 O 2P i ) pela ao da
pirofosfatase inorgnica celular. A variao de energia livre padro
da hidrlise do PP i G 0 = 33,5 kJmol 1 , grande o suficiente para
dirigir a reao de sntese de UDPG.
3. Sntese do glicognio a partir de UDP-glicose. A unidade
glicosil de UDP glicose transferida para uma extremidade
no redutora do glicognio j existente. Isso resulta na anexao de
uma nova unidade de glicose, ligada pelo C1 ao C4, (1 4), da
glicose terminal do polmero de glicognio pr-formado em reao
catalisada pela glicognio-sintase:

6 Metabolismo dos carboidratos

CH2 OH
H
HO

CH2 OH
O

OH

OH

O
O

+
O

Uridina

HO

UDP-glucose

O
H
OH

OH

H
O

Glicognio (n resduos)
Glicognio-sintase

CH2 OH

CH2 OH
H
O
O

P
O

O
O

P
O
UDP

+
O

Uridina

HO

O
H
OH

OH

H
O

O
H
OH

OH

Glicognio (n +1 resduos)

A UDP reconvertida a UTP custa de ATP por meio de uma


reao de transferncia do grupo fosforil catalisada pela
nucleosdio difosfato cinase:
Nucleosdeo difosfato cinase
UDP + ATP
UTP + ADP

Desse modo, o custo total em ATP, para a incorporao de um


resduo de glicose ao glicognio dado pela equao:
(Glicose) n + glicose + 2ATP (glicose) n + 1 + 2ADP + 2P i
O glicognio uma estrutura amplamente ramificada com pontos
de ramificaes a cada 8 a 14 resduos. A ramificao resultante da
ao da enzima amilo-( 1,4 1,6) transglicosilase (enzima de
ramificao). Essa enzima transfere um fragmento de 6 ou 7 resduos
de glicose, da extremidade no-redutora de uma cadeia para o grupo
OH do C6 de uma unidade de glicose na mesma ou em outra cadeia
de glicognio, de modo a formar um enlace (1 6) onde
estabelecido um ponto de ramificao. Esquematicamente tem-se
(cada esfera representa uma unidade de glicose):

H
O

163

164

Motta

Bioqumica

Ligao

(1

6)

Aps a ocorrncia de ramificaes, unidades de glicose podem


ser acrescentadas a partir de resduos glicosil provenientes da
UDP glicose aos terminais no redutores de cada uma das cadeias
originais ou das ramificaes, por meio da glicognio sintase.
Quando um nmero suficiente de unidades so adicionadas desse
modo, ocorrem novas ramificaes.
A sntese de glicognio necessita a existncia de uma cadeia de
glicognio j constituda, qual so adicionados novos resduos de
glicose. Na primeira etapa da sntese, uma glicosil transferase liga o
primeiro resduo de glicose a um grupo OH de uma protena chamada
glicogenina que atua como molde inicial. Essa, por autocatlise,
incorpora novos resduos de glicose, at formar uma pequena cadeia
de at sete resduos doados pela UDP-glicose, produzindo uma
molcula nascente de glicognio. Nesse ponto, a glicognio sintase
inicia a sntese do glicognio, enquanto a glicogenina desliga-se do
polmero.

6.4 Glicogenlise
A degradao do glicognio consiste na clivagem seqencial de
resduos de glicose, a partir das extremidades no redutoras das
ramificaes do glicognio (existe uma extremidade no-redutora
para cada ramificao) e denominada glicogenlise. O rompimento
das ligaes (1 4) ocorre por fosforlise com formao de
D glicose 1 fosfato sob a ao da enzima glicognio fosforilase
e o ataque do fosfato inorgnico.

6 Metabolismo dos carboidratos

Glicognio (n resduos)
CH2 OH
H

Extremidade
no-redutora

HO

CH2 OH
O

OH

OH

O
H

H
1

OH

OH

O
O

O
Glicognio
fosforilase

CH2 OH
O

H
4

HO

CH2 OH

H
1

OH

OH

Glicose-1-fosfato

O
P
O

+
O

HO

O
H

H
1

OH

OH

Glicognio (n -1 resduos)

A glicognio fosforilase age em presena de ons magnsio e


piridoxal 5 fosfato, uma coenzima cujo grupo fosfato atua como um
catalisador cido geral, promovendo o ataque da ligao glicosdica
pelo P i .
A glicognio-fosforilase remove unidades sucessivas de glicose
ao longo da cadeia at restarem quatro resduos de um ponto de
ramificao (1 6). A continuao da degradao ocorre depois da
transferncia de uma unidade de trs resduos de glicose da
ramificao sob a ao da enzima de desramificao do glicognio,
para a extremidade no-redutora de outra ramificao, ou seja,
acontece o rompimento de uma ligao (1 4) com a formao de
uma nova ligao (1 4). Em sua nova posio, os resduos de
glicose so liberados pela ao da glicognio-fosforilase.

A remoo do resduo glicosil restante ligado cadeia principal


por (1 6) realizada por hidrlise (e no fosforlise) pela mesma
enzima de desramificao com a formao de glicose e glicognio

165

166

Motta

Bioqumica

Glucagon/Adrenalina

Receptor
protena G

no-ramificado. Desse modo, explicado o aparecimento de


pequenas quantidades de glicose livre (8 10%) em vez de
glicose 1 fosfato na degradao do glicognio.
O produto final das reaes de degradao do glicognio a
glicose 1 fosfato que convertida em glicose 6 fosfato pela
fosfoglicomutase:
Fosfoglicomutase

glicose 6 fosfato
Glicose 1 fosfato

A fosfoglicomutase requer a glicose 1,6 bifosfato que exerce


papel anlogo ao do 2,3 bifosfoglicerato na reao catalisada pela
fosfogliceromutase (ver Gliclise).
A glicose 6 fosfato pode ser utilizada pela gliclise ou pela via
das pentoses-fosfato (ver adiante). No fgado, a glicose-6-fosfato
tambm sofre a ao da glicose 6 fosfatase para formar glicose:

Protena G

Adenilato
ciclase

6 fosfatase
cos
e
glicose + P i
Glicose 6 fosfato + H 2 O Gli

A glicose resultante liberada da clula para a circulao e


transportada para outros tecidos.
AMPc

6.5 Regulao do metabolismo do glicognio


Protena
cinase A

Fosforilase
cinase

Glicognio
sintase

Glicognio
fosforilase

Inibe
Glicognio
sintase

Promove
glicogenolise

Figura 6.8
Resumo da regulao da glicogniosintase e da glicognio-fosforilase

A sntese e a degradao do glicognio so cuidadosamente


reguladas para evitar a perda de energia. As enzimas das diferentes
vias, a glicognio fosforilase e a glicognio sintase nas formas a
(ativa) e b (inativa ou pouco ativa), so reguladas pelo controle
alostrico e pela modificao covalente das enzimas modulada por
hormnios.
A atividade dessas enzimas , tambm, amplamente dependente
da disponibilidade de vrios intermedirios e co-fatores. Portanto, a
glicognese e a glicogenlise so reguladas de tal modo que as
quantidades de glicose liberadas so ajustadas segundo as
necessidades do organismo.
1. Controle alostrico. A glicognio-sintase e a glicogniofosforilase esto sob controle alostrico por diferentes efetores. A
forma inativa (ou pouco ativa) da glicognio-fosforilase encontrada
no msculo em repouso, denominada glicognio fosforilase b, e
ativada por AMP e inibida por ATP e glicose 6 fosfato. A
glicognio sintase, ao contrrio, ativada pela glicose 6 fosfato.
Desse modo, em presena de teores baixos de ATP e de
glicose 6 fosfato, mas elevados de AMP, a glicognio fosforilase
estimulada e a glicognio sintase inibida, o que favorece a
degradao do glicognio. Por outro lado, quando os teores de ATP e
glicose 6 fosfato esto elevados, a glicognio-sintase estimulada e
favorece a sntese do glicognio.
2. Regulao por modificao covalente. A interconverso das
formas a e b da glicognio-sintase e da glicognio fosforilase
regulada reciprocamente por meio de fosforilao defosforilao
(quando uma enzima estimulada a outra inibida) e so catalisadas
por enzimas que esto sob controle hormonal (insulina, glucagon e
adrenalina) ou estmulo nervoso (ons Ca 2+ ).

6 Metabolismo dos carboidratos

A ativao da glicognio-fosforilase emprega trs enzimas:


fosforilase cinase, protena cinase dependente de AMPc e
fosfoprotena fosfatase 1.
A fosforilase cinase uma protena constituda por quatro
subunidades diferentes, nominadas , , e . A subunidade
cataltica a , enquanto as outras trs subunidades tm funes
reguladoras da atividade da enzima. A fosforilase-cinase convertida
da forma inativa para a forma ativa por um dos dois mecanismos:

Fosforilao das subunidades e pela ao da protena cinase


dependente de AMPc ativada pelo AMP cclico formado sob
estmulo da adrenalina. A subunidade no fosforilada.

Os ons Ca 2+ (o sinal para o incio da contrao muscular) ligamse subunidade atravs da calmodulina (calcium modulating
protein) uma protena que sofre modificaes conformacionais
quando ligada ao clcio.

A
degradao
do
glicognio
ocorre
quando
a
glicognio fosforilase b menos ativa convertida na forma mais
ativa, a glicognio fosforilase a, pela forma ativa da enzima
fosforilase cinase e ATP. Alm das alteraes conformacionais, p
processo envolve a adio de fosfato a glicognio-fosforilase b. Mais
precisamente, a glicognio fosforilase b um dmero (duas
subunidades peptdicas) no fosforilado, enquanto a fosforilase a
fosforilada em cada uma das subunidades:
Glicognio-fosforilase b + 2 ATP
glicognio fosforilase a + 2 ADP
A fosforilase a pode ser convertida novamente em fosforilase b
pela enzima heptica fosfoprotena fosfatase 1:
Fosfoprotena fosfatase1
Glicognio fosforilase a + H 2 O

2 glicognio fosforilase b + 2 P i
A forma ativa da fosforilase-cinase tambm tem um precursor
inativo ativado pela protena cinase dependente de AMPc.
No msculo em repouso, a atividade da protena cinase
dependente de AMPc est sob controle hormonal. O hormnio
adrenalina afeta a seqncia orientando a ativao da fosforilase a
pelo estmulo da enzima adenilato ciclase que catalisa a converso
do ATP a AMP cclico (AMPc)(ver Captulo 4).
O AMPc ativa a protena cinase dependente de AMPc, que por
sua vez, catalisa a fosforilao da fosforilase cinase, dando origem
forma da fosforilase cinase ativa, desencadeando uma srie de passos
que resultam na gerao da glicognio fosforilase a. As atividades
das fosforilases cinases dependem da presena de Ca 2+ , pois existe
um estreito acoplamento entre a glicogenlise e a contrao muscular.
Como efeito final, os ons clcio ativam a glicognio fosforilase e
inativam a glicognio sintase.
A glicognio-sintase tambm ocorre sob duas formas, a e b. A
fosfatase-cinase, que ativa a glicognio-fosforilase, tambm fosforila
e inativa a glicognio-sintase. Em presena da enzima, a

167

168

Motta

Bioqumica

glicognio sintase a reage com o ATP para produzir a


glicognio sintase b (fosforilada). Essa ltima pode ser reconvertida
a glicognio sintase a pela ao da fosfoprotena fosfatase 1 (Figura
6.8).
Devido a seu efeito sobre a protena-cinase dependente de AMPc,
atravs da gerao de AMP cclico, a adrenalina inibe a sntese do
glicognio. A glicognio-sintase e a glicognio-fosforilase so
afetadas pela fosforilao de modo diferente: a glicognio-fosforilase
a (ativa) est ligada ao fosfato, enquanto a glicognio-sintase (ativa)
est na forma desforilada. Como a formao de AMPc estimulado
pela adrenalina transforma as duas enzimas (fosforilase e sintase) em
formas fosforiladas, o resultado a diminuio na sntese do
glicognio (pela inativao da sintase) e o aumento na degradao
(pela ativao da fosforilase). A adrenalina, ao estimular a atividade
da adenilato-ciclase, fornece glicose para as clulas atravs de dois
mecanismos: (1) inibio do armazenamento na forma de glicognio e
(2) aumento no seu desdobramento.

Hormnio (adrenalina ou glucagon)


Via proteina G (G -GTP)

Adelinato-ciclase
(inativa)

Adelinato-ciclase
(ativa)

ATP

AMP cclico + PPi


Fosfodiesterase

AMP
Protena-cinase
(inativa)

Protena-cinase
(ativa)
ATP
ADP

Fosforilase-cinase b

Fosforilase-cinase a
ATP

Fosfatase

ADP

Pi
Glicognio-fosforilase b

Glicognio-fosforilase a

Fosfatase

Pi

Glicognio

Glicose-1-fosfato

Figura 6.9
Regulao do metabolismo do glicognio por modificao covalente das enzimas moduladas
por hormnios.

6 Metabolismo dos carboidratos

169

Quadro 6.4 Doenas de armazenamento de glicognio

Existem vrios distrbios hereditrios que


afetam o metabolismo do glicognio. So causadas
por deficincias de enzimas envolvidas na sntese e
degradao do glicognio, produzindo glicognio
anormal em quantidade ou qualidade.

Elas so coletivamente chamadas de doenas


de armazenamento de glicognio e a condio
conhecida como glicogenose. Essas condies so
divididas em tipos distintos descritos na Tabela abixo

Tipo

Epnimo

Enzima deficiente

Caractersticas

Doena de von Gierke

Glicose 6 fosfatase

Pobre mobilizao do glicognio heptico.


Hipoglicemia em jejum.

II

Doena de Pompe

1,4 Glicosidase (lisossomal)

Acmulo de generalizado de glicognio


lisossomal.

III

Doena de Cori
(dextrinose limite)

Amilo -1,6 glicosidase (enzima de


desramificao)

Acmulo de glicognio com ramos externos


curtos.

IV

Doena de Hendersen
(amilopectinose)

Amilo (1,41,6)-transglicosilase
(enzima de ramificao)

Acmulo de glicognio heptico com ramos


externos longos. Hipoglicemia em jejum.

Doena de McArdle

Glicognio fosforilase muscular

Cimbras musculares durante exerccios.

VI

Doena de Hers

Glicognio fosforilase heptica

Acmulo de glicognio heptico.

VII

Doena de Tarui

Fosfofrutocinase (muscular)

Acmulo de glicognio muscular.

VIII

Fosforilase cinase (heptica)

Acmulo de glicognio heptico.

IX

Doena de FanconiBickel

Fosforilase cinase de todos os rgos

Todos os rgos

Glicognio sintase heptica

Deficincia da quantidade de glicognio

Junto com a regulao descrita acima, a velocidade da sntese e


degradao profundamente influenciada por vrios intermedirios e
co-fatores. Por exemplo, a UDP um inibidor tanto da
UDP glicose pirofosforilase como tambm da glicognio-sintase
heptica. A UDP formada na sntese do glicognio a partir da
UDP glicose, atua como moderador da velocidade da sntese. O
prprio glicognio um inibidor da ativao da glicognio sintase.
Conseqentemente, quantidades excessivas de glicognio tendem a
diminuir a velocidade de sua prpria sntese.

6.6 Gliconeognese
A gliconeognese, a formao de novas molculas de glicose a
partir de precursores no-carboidratos, ocorre no fgado. Em certas
situaes, como acidose metablica ou inanio, os rins tambm
sintetizam glicose. Os precursores no-glicdicos incluem lactato,
piruvato, glicerol e cadeias carbonadas da maioria dos aminocidos.
Entre as refeies, os teores adequados de glicose sangnea so
mantidos pela hidrlise do glicognio heptico. Quando o fgado
esgota seu suprimento de glicognio (exemplo, jejum prolongado ou
exerccio vigoroso), a gliconeognese fornece a quantidade
apropriada de glicose para o organismo. O crebro e os eritrcitos,

170

Motta

Bioqumica

utilizam a glicose como fonte primria de energia. Sob circunstncias


especiais, as clulas do crebro tambm usam corpos cetnicos
(derivados dos cidos graxos) para gerar energia. O msculo
esqueltico em exerccio, emprega a glicose a partir do glicognio em
combinao com cidos graxos e corpos cetnicos para obter energia.
A. Reaes da gliconeognese
Considerando o piruvato como ponto inicial da gliconeognese,
as reaes podem ser comparadas com as da via glicoltica mas, no
sentido inverso. Muitas das enzimas e intermedirios so idnticos.
Sete reaes so reversveis. No entanto, trs so irreversveis:
piruvato cinase ( G = 31,4 kJmol 1 ), fosfofrutocinase 1 ( G =
14,2 kJmol 1 ) e hexocinase ( G = 16,7 kJmol 1 ) e devem ser
contornadas por meio de outras reaes catalisadas por enzimas
diferentes.
Na gliconeognese, as trs reaes irreversveis so contornadas
nas seguintes etapas:
1. Converso de piruvato em fosfoenolpiruvato atravs do
oxaloacetato. So necessrias duas reaes exergnicas para essa
converso. Na mitocndria, o piruvato carboxilado a oxaloacetato
(um composto de quatro carbonos intermedirio do ciclo do cido
ctrico) as custas de ATP em reao catalisada pela
piruvato carboxilase. A coenzima biotina, que funciona como
transportador de bicarbonato, est covalentemente ligada enzima
atravs do grupo amino da lisina.
COO

COO
C

HCO3

CH3

Piruvato-carboxilase

ATP

CH2

ADP+Pi

COO
Piruvato

Bicarbonato

Oxaloacetato

A piruvato-carboxilase ativada alostericamente pela


acetil CoA. O oxaloacetato tanto um precursor para a
gliconeognese quanto um intermedirio do ciclo do cido ctrico.
Nveis elevados de acetil CoA sinalizam a necessidade de mais
oxaloacetato. Se houver excesso de ATP, o oxaloacetato ser utilizado
na gliconeognese; se houver falta de ATP, o oxaloacetato entrar no
ciclo do cido ctrico.
Como a membrana mitocondrial interna impermevel ao
oxaloacetato esse deve ser transportado para o citosol na forma de
malato. O oxaloacetato reduzido a malato na mitocndria pela
malato-desidrogenase.
Malato desidrogenase
Oxaloacetato + NADH + H +

L -malato

+ NAD +

Aps a transferncia do malato para o citosol por meio do


transportador malato cetoglutarato, ocorre reao reversa
catalisada por uma malato-desidrogenase citoplasmtica.

6 Metabolismo dos carboidratos

COO
H

NAD+

NADH + H +

OH

COO
C

CH2

Malato-desidrogenase

COO

CH2
COO

Malato

Oxaloacetato

Em
seguida,
a
descarboxilao
do
oxaloacetato
a
fosfoenolpiruvato catalisada pela fosfoenolpiruvato carboxicinase
presente no citosol, em reao que emprega o GTP como doador do
grupo fosforil.
O
N
N
O

COO
C

CH2

O
O

O
O

CH2

O
H

C
O

Oxaloacetato

NH
N

NH2

OH

OH

GTP
O

CO2

Fosfoenolpiruvato
carboxicinase

N
N

COO

CH2

O
O

P
O

O
O

CH2

O
H

Fosfoenolpiruvato

GTP

NH
N

NH2

OH

OH

A equao global para as reaes de contorno :


Piruvato + ATP + GTP + HCO 3 -
fosfoenolpiruvato + ADP + GDP + P i + CO 2
Para produzir uma molcula de fosfoenolpiruvato a partir do
piruvato so consumidos dois grupos fosfato de alta energia (um do
ATP e outro do GTP).

171

172

Motta

Bioqumica

Citosol

Mitocndria

Piruvato

Piruvato
ATP

CO2
Oxaloacetato

ADP + P
NADH + H+
NAD+

NAD+

Malato

Malato

NADH + H+
Oxaloacetato
ADP

GTP

ATP

GDP

CO2
Fosfoenolpiruvato

Figura 6.11
Formao do fosfoenolpiruvato a partir do piruvato

2. Converso da frutose 1,6 bifosfato a frutose 6 fosfato. A


reao irreversvel catalisada pela fosfofrutocinase na gliclise
contornada pela frutose 1,6 bifosfatase dependente de Mg 2+ :
Frutose1,6 bifosfatase
Frutose 1,6 bifosfato + H 2 O

Frutose 6 fosfato + P i
A reao exergnica ( G = 16,3 kJmol 1 ) e tambm
irreversvel em condies celulares. O ATP no regenerado. A
frutose 1,6 bifosfatase uma enzima alostrica estimulada pelo
citrato e inibida pelo AMP e frutose 2,6 bifosfato.
A frutose-6-fosfato , ento, transformada em glicose 6 fosfato
pela enzima glicose fosfato isomerase.
3. Formao de glicose a partir da glicose 6 fosfato. A
glicose 6 fosfatase, encontrada somente no fgado e rim, catalisa a
hidrlise reversvel da glicose 6 fosfato para formar glicose e P i
( G = 13,8 kJmol 1 ) A glicose subseqentemente liberada para
o sangue.

6 Metabolismo dos carboidratos

CH2 OPO32
H
HO

CH2 OH
O

H
OH
H

H
Glicose-6-fosfatase

H
OH

Glicose-6-fosfato

OH

H2 O

Pi

HO

O
H
OH

OH

H
OH

Glicose

A seqncia de fases da gliconeognese,


fosfoenolpiruvato est resumida na Figura 6.12.

partir

do

A sntese de glicose a partir de duas molculas de piruvato


requer, no mnimo, seis ATP (nas reaes catalisadas por:
fosfoenolpiruvato carboxicinase
e
piruvato carboxilase,
fosfoglicerato cinase). Portanto, a gliconeognese um processo
bastante caro em termos de consumo de energia. Quando a
gliconeognese se processa em altas velocidades, consome mais de
60% do ATP gerado no fgado. Esse ATP proveniente,
principalmente, da oxidao de cidos graxos. As condies
fisiolgicas que necessitam a sntese de glicose, geralmente so as
mesmas que apresentam disponibilidade de cidos graxos no sangue.
Nessas ocasies, os cidos graxos so oxidados na mitocndria a
corpos cetnicos com a conseqente produo de ATP.

173

174

Motta

Bioqumica

Glicose
Pi
Glicose-6-fosfatase

Glicose-6-fosfato
Glicose
fosfato-isomerase

Frutose-6-fosfato
P
Frutose-1,6-difosfatase

Frutose-1,6-difosfato
Aldolase

Gliceraldedo-3-fosfato

Diidroxiacetona-fosfato

Triose-fosfato-isomerase
Gliceraldedo
3-fosfato-desidrogenase

NAD+

1,3-Difosfoglicerato
ADP

NADH

Fosfoglicerato-cinase

ATP
3-Fosfoglicerato
Fosfoglicerato-mutase

2-Fosfoglicerato
Enolase

Fosfoenolpiruvato
CO2 + GDP
Fosfoenolpiruvato-carboxicinase

GTP

Oxaloacetato

Pi + ADP
Piruvato-carboxilase

HCO-3 + ATP

Piruvato

Figura 6.12
Reaes da gliconeognese

B. Precursores para a gliconeognese


Os precursores
gliconeognese so:

no carboidratos

mais

importantes

para

6 Metabolismo dos carboidratos

1. Lactato. liberado pelos eritrcitos e outras clulas sem


mitocndrias e, tambm, pelos msculos esquelticos durante alta
atividade muscular. conduzido ao fgado onde reconvertido a
piruvato pela lactato desidrogenase e, ento, em glicose pela
gliconeognese (Ciclo de Cori). A glicose resultante difunde para a
circulao e captada pelas clulas do msculo esqueltico para
repor os estoques de glicognio. Desse modo, o ciclo de Cori
transfere a energia potencial qumica na forma de glicose do fgado
para os tecidos perifricos.

Msculo
Glicognio

Glicose
6-fosfato

Sangue

Glicognio

(Carboidratos
da dieta)

Glicose

Glicose

Gliclise

Lactato

Fgado

Glicose

Glicose
6-fosfato
Gliconeognese

Lactato

Lactato

Figura 6.13
Interrelao da gliclise muscular e gliconeognese heptica (Ciclo de
Cori)

A gliconeognese a partir do lactato um processo que requer


ATP:
2Lactato + 6ATP + 6H 2 O glicose + ADP + 6P i + 4H +
2. Alanina. o mais importante aminocido convertido a
intermedirios glicolticos para a gliconeognese. Durante o jejum
prolongado ou inanio, a alanina e outros aminocidos so liberados
a partir de protenas presentes nos msculos esquelticos. A alanina
transportada para o fgado, onde sofre transaminao para gerar
piruvato. O piruvato por meio da gliconeognese forma glicose que
pode retornar aos msculos ou ser degrada pela via glicoltica. O
mecanismo chamado ciclo da glicose alanina e tambm transporta
o NH 4 + ao fgado para a sntese da uria. Os aminocidos so as
principais fontes de carbono para a gliconeognese durante o jejum,
quando os suprimentos de glicognio esto esgotados.

175

176

Motta

Bioqumica

Msculo

Sangue

Glicose

Fgado

Glicose

Glicose

Gliclise

Gliconeognese

Piruvato

Piruvato

Transaminao

Transaminao

Alanina

Alanina

Alanina

Figura 6.14
Ciclo da glicose alanina

3. Glicerol. um produto da hidrlise enzimtica dos


triacilgliceris no tecido adiposo (ver Metabolismo dos lipdeos),
transportado at o fgado pelo sangue e ento fosforilado a
glicerol 3 fosfato pela glicerol cinase. O glicerol 3 fosfato
participa da gliconeognese (ou da gliclise) atravs do intermedirio
Por
meio
do
complexo
comum,
o
glicerol 3 fosfato.
o
glicerol 3 fosfato

glicerol 3 fosfato desidrogenase,


transformado em diidroxiacetona fosfato (DHAP) reao que ocorre
quando o teor de NAD + citoplasmtico est relativamente alto.
Glicose

Gliconeognese

Diidroxiacetona
fosfato
Glicerol
NADH, H +

ATP
Glicerol
cinase

ADP

Complexo da glicerol
3-fosfato-desidrogenase

NAD +
Glicerol-3-fosfato

Citosol
Membrana
mitocondrial
interna
Matriz mitocondrial

Glicerol-3-fosfato
desidrogenase
citoslica

QH2

Figura 6.15
Gliconeognese a partir do glicerol. O Glicerol 3 fosfato oxidado em
reaes catalisadas por duas desidrogenases; as duas reaes produzem

6 Metabolismo dos carboidratos


coenzimas reduzidas. Q = ubiquinona (coenzima Q).

Outros substratos participam em menor grau como fonte para a


formao de glicose tais como, os intermedirios do ciclo do cido
ctrico e as cadeias carbonadas de vrios aminocidos.
O lactato, o glicerol, a alanina e outros aminocidos so as fontes
de glicose sangnea durante os estgios intermedirios do jejum (1 a
4 dias).
C. Regulao da gliconeognese
A velocidade da gliconeognese afetada principalmente pela
disponibilidade de substratos, efetores alostricos e hormnios.
Dietas ricas em gorduras, a inanio e o jejum prolongado elevam as
concentraes de lactato, glicerol e aminocidos e estimulam a
gliconeognese.
As
quatro
enzimas-chave
da
gliconeognese
(piruvato carboxilase,
fosfoenolpiruvato carboxicinase,
frutose 1,6 bifosfatase e glicose 6 fosfatase) so afetadas em
diferentes graus por moduladores alostricos. Por exemplo, a
frutose 1,6 bifosfatase ativada pelo ATP e inibida pelo AMP e pela
frutose 2,6 bifosfato. A acetil CoA um modulador alostrico
positivo da piruvato carboxilase. A concentrao da acetil CoA, um
produto da degradao dos cidos graxos, est elevada durante a
inanio.
Como em outras vias bioqumicas, os hormnios afetam a
gliconeognese por alteraes na concentrao dos efetores
alostricos e por modificaes na velocidade de sntese das
enzimas chave. O glucagon (elevado quando o nvel de glicose
diminui) reduz a sntese da frutose 2,6 bifosfato, ativando a funo
fosfatase da PFK 2. A reduo do teor da frutose 2,6 bifosfato
reduz a ativao da PFK 1 e desinibe a frutose 1,6 bifosfatase.
Outro efeito do glucagon nas clulas hepticas a inativao da
enzima glicoltica piruvato cinase. (A protena cinase C, uma
enzima ativada pelo AMPc, converte a piruvato cinase em sua
conformao fosforilada inativa). Os hormnios tambm influenciam
a gliconeognese por alteraes na sntese de enzimas. Por exemplo,
a sntese de enzimas gliconeognicas estimulada pelo cortisol (um
hormnio esteride produzido no crtex da supra-adrenal). A ao da
insulina promove a sntese de novas molculas de glicocinase, PFK 1
e PFK-2. O glucagon promove a sntese de novas molculas de
PEP carboxicinase, frutose 1,6 bifosfatatase e glicose 6 fosfatase.
O controle hormonal da gliconeognese importante no
suprimento de cidos graxos para o fgado alm de regular as
enzimas, tanto glicolticas como gliconeognicas. O glucagon
aumenta a concentrao dos cidos graxos no plasma pela liplise no
tecido adiposo, em ao oposta da insulina. A grande disponibilidade
de cidos graxos, estimulada pelo glucagon, resulta em maior
oxidao dos cidos graxos para formar acetil CoA pelo fgado,
permitindo a sntese da glicose. Por outro lado, a insulina tem efeito
oposto. O glucagon e a insulina tambm regulam a gliconeognese no
fgado por influenciar o estado de fosforilao de enzimas hepticas,
tais como, a piruvato cinase e fosfofrutocinase.

177

178

Motta

Bioqumica

D. Inibio da gliconeognese pelo etanol


O consumo de lcool (etanol), especialmente por indivduos
subalimentados, pode causar hipoglicemia. Essa condio resulta dos
efeitos inibidores do lcool sobre a gliconeognese heptica causado
pelo NADH produzido durante o metabolismo do lcool. O etanol
convertido em acetaldedo (CH 3 CHO) pela reao:
CH 3 CH 2 OH + NAD + CH 3 CHO + NADH + H +
O excesso de NADH no citosol reduz a gliconeognese, pois
desloca
o
equilbrio
das
reaes
catalisadas
pela
lactato desidrogenase e malato desidrogenase, nas direes de
formao do lactato e malato, respectivamente:
Piruvato + NADH + H + lactato + NAD +
Os NADH deveriam ser transportados para a mitocndria pelo
circuito malato aspartato, mas o fgado no consegue faz-lo na
velocidade suficiente para evitar distrbios metablitos. O NADH
excedente bloqueia a converso do lactato a glicose provocando
hipoglicemia e tambm promove a converso da alanina em lactato,
resultando em acmulo desse ltimo no sangue (acidose lctica).
A substncia que ocasiona leses ao nvel do hepatcito, no o
lcool e sim o produto de sua degradao, o acetaldedo.

6.6 Via das pentoses-fosfato


A via das pentoses fosfato (ou desvio hexose monofosfato ou via
oxidativa do fosfogliconato) uma via metablica alternativa
gliclise para a oxidao da glicose que no requer e no produz ATP.
Seus principais produtos so:

NADPH (nicotinamida adenina dinucleotdo fosfato reduzido) um


agente redutor empregado para os processos anablicos.

Ribose 5 fosfato um componente estrutural de nucleotdeos e de


cidos nuclicos.

A via das pentoses-fosfato ocorre no citosol em duas etapas:


etapa oxidativa e a etapa no oxidativa. Na etapa oxidativa a
glicose 6 fosfato convertida ribulose 5 fosfato (Ru5P)
acompanhada pela formao de duas molculas de NADPH.
A etapa no oxidativa envolve a isomerizao e condensao de
vrias molculas diferentes de acar. Trs intermedirios do
processo so utilizados em outras vias: a ribose 5 fosfato, a
frutose 6 fosfato e o gliceraldedo 3 fosfato.
A. Reaes oxidativas
A etapa oxidativa da via das pentoses-fosfato consiste de trs
reaes. Na primeira reao, a glicose 6 fosfato desidrogenase
(G 6 PD) catalisa a oxidao do C1 da glicose 6 fosfato para
formar 6 fosfoglicono lactona e NADPH:

6 Metabolismo dos carboidratos

H+

CH2 OPO32
H
HO

O
H
OH

OH

CH2 OPO32

+
H

NADP+

NADPH

Glicose-6-fosfato
desidrogenase

OH

H
HO

Glicose-6-fosfato

O
H
OH

OH

6-Fosfoglicono
-lactona

Essa reao a etapa limitante da via e controla a velocidade de


produo de NADPH. A deficincia glicose 6 fosfato desidrogenase
nos eritrcitos provoca anemia.
A 6-fosfoglicono lactona ento hidrolisada para produzir a
6 fosfogliconato por meio da 6 fosfoglicono lactonase:
O
CH2 OPO32
H
HO

O
C

O
H
OH

OH

H+

H2 O
O

6-Fosfoglicono
lactonase

OH

HO

OH

OH

CH2 OPO23

6-Fosfoglicono
-lactona

6-Fosfogliconato

O 6 fosfogliconato sofre descarboxilao oxidativa em presena


e
da
6 fosfogliconato desidrogenase,
em
de
NADP +
ribose 5 fosfato. So tambm produzidos CO 2 (proveniente do C1 da
hexose) e uma segunda molcula de NADPH:
O

CO2

OH

HO

OH

OH

NADP +

CH2 OH

NADPH

6-Fosfogliconato
desidrogenase

OH

OH

CH2 OPO23

CH2 OPO23
6 - Fosfogliconato

Ribulose-5-fosfato

Na etapa oxidativa so produzidas duas molculas de NADPH


para cada molcula de glicose 6 fosfato que entra na via.

179

180

Motta

Bioqumica

Quantidades substanciais de NADPH so necessrias para os


processos redutores (exemplo, biossntese dos lipdeos) e
mecanismos antioxidantes (exemplo, clulas com alto riso de leso
oxidativa, como os eritrcitos). As reaes so muito ativas em
clulas que sintetizam grande quantidade de lipdeos, tais como,
tecido adiposo, crtex adrenal, glndulas mamrias e fgado. A via
pouco ativa no msculo esqueltico.
Glicose-6-fosfato
NADP +
Glicose-6-fosfato
desidrogenase

NADPH
6-Fosfogliconolactonato
H2O
6-Fosfoglicono-lactonase

H+
6-Fosfogliconato
NADP +
NADPH
CO2

6-Fosfogliconato
desidrogenase

Ribulose-5-fosfato

Reaes no-oxidativas
Figura 6.16
Reaes oxidativas da via das pentoses-fosfato. Os produtos finais so a
D ribose e o NADPH.

B. Reaes da etapa no-oxidativa


A fase no oxidativa da via inicia com a converso da
ribulose 5 fosfato

ribose 5 fosfato
pela
ribulose 5 fosfato isomerase:
O
CH2 OH
C

OH

OH

CH2 OPO23
Ribulose-5-fosfato

H
C

Ribulose-5-fosfato
isomerase

OH

OH

OH

CH2 OPO23
Ribose-5-fosfato

6 Metabolismo dos carboidratos

A ribulose 5 fosfato pode tambm ser convertida


xilulose 5 fosfato pela ribulose 5 fosfato epimerase:

CH2 OH
CH2 OH
C

CH2 OH

HO

OH

OH

HO

OH

OH

OH

OH

CH2 OPO3 H2

OH

CH2 OPO3 H2

CHO

OH

CH2 OPO3 H2

CH2 OPO3 H2

Essas interconverses fornecem uma mistura de trs pentosesfosfato (ribulose, xilulose e ribose) cujas concentraes dependem
das necessidades da clula.
A xilulose 5 fosfato pode reagir com a ribose 5 fosfato para
formar sedoeptulose 7 fosfato e gliceraldedo 3 fosfato pela
translocase:
CH2 OH
C

HO

OH

OH

OH

CH2 OH
CHO

OH

CH2 OPO3 H2

CHO

HO

OH

OH

OH

OH

CH2 OPO3 H2

CH2 OPO3 H2

CH2 OPO3 H2

A ao da transcetolase requer o co-fator tiamina pirofosfato


(TPP). Envolve a transferncia do grupo glicolaldedo da
D xilulose 5 fosfato para o C1 da ribose 5 fosfato. A unidade
glicolaldedo est ligada ao complexo enzima TPP sendo transferido
direto para o aceptor. Note que o doador do grupo
(xilulose 5 fosfato) e o produto (sedoeptulose 7 fosfato) so
cetoses onde o C3 tem configurao tipo L.
Na reao seguinte, a sedoeptulose 7 fosfato transfere o grupo
diidroxiacetona (C1, C2 e C3) para o gliceraldedo fosfato em reao
reversvel catalisada pela transaldolase, com a formao de
eritrose 4 fosfato e frutose 6 fosfato:
CH2 OH
C

HO

OH

OH

OH

CH2 OPO3 H2

CH2 OH
CHO

OH

CH2 OPO3 H2

CHO

HO

OH

OH

OH

OH

CH2 OPO3 H2

CH2 OPO3 H2

A transaldolase difere da aldolase da via glicoltica por no


liberar a diidroxiacetona livre; essa ltima est ligada a enzima
transaldolase e transferida diretamente ao aceptor.

181

182

Motta

Bioqumica

A eritrose 4 fosfato atua como aceptor na reao da


transcetolase. Ela pode ento reagir com a xilulose 5 fosfato para
fornecer frutose 6 fosfato e gliceraldedo 3 fosfato:
CH2 OH

CH2OH
C
HO

OH

CH2OPO3 H2

OH

HO

OH

OH

CH2 OPO3 H2

OH

CHO

CHO

OH

CH2 OPO3 H2

CH2 OPO3H2

As reaes acima mostram que o resultado lquido da via das


pentoses-fosfato

a
produo
de
frutose 6 fosfato
e
gliceraldedo 3 fosfato. Quando as pentoses no so necessrias para
reaes de biossntese, os metablitos da etapa no oxidativa podem
ser consumidos pela gliclise. Com a cooperao de quatro enzimas
glicolticas, essa via pode resultar na converso de todos os carbonos
da glicose em CO 2 . As enzimas necessrias so: (1)
triose fosfato isomerase para converter o gliceraldedo 3 fosfato a
diidroxiacetona fosfato; (2) aldolase para produzir frutose-1,6e
bifosfato
a
partir
do
gliceraldedo 3 fosfato
diidroxiacetona fosfato; (3) frutose 1,6 bifosfatase para hidrolisar a
a
frutose 6 fosfato;
(4)
frutose 1,6 bifosfato
glicose fosfato isomerase para formar glicose 6 fosfato a partir da
frutose 6 fosfato. A glicose 6 fosfato pode re entrar na via e
repetir o processo. A equao geral da via pentoses fosfato :
6 Glicose 6 fosfato + 12 NADP + + 7 H 2 O
5 glicose 6 fosfato + 6 CO 2 + 12 NADPH + 12 H + + P i
A reao lquida
Glicose 6 P + 12NADP + + 7H 2 O 6CO 2 + 12NADPH + 12H + + P i
De acordo com as consideraes acima, 6
glicose 6 fosfato so convertidos em 6 moles de CO 2 e 5
glicose 6 fosfato. Esse ltimo, pela adio de outro
glicose 6 fosfato, pode ser reciclado atravs das mesmas
Figura 5.24 mostra o esquema do processo geral.

mol de
moles de
mol de
etapas. A

6 Metabolismo dos carboidratos

Ribulose-5-fosfato
Ribulose-5-fosfato-epimerase

Ribulose-5-fosfato-isomerase

Xilulose-5-fosfato

Ribulose-5-fosfato
Translocase

Sedoeptulose-7-fosfato

Gliceraldedo-3-fosfato
Transaldolase

Eritrose-4-fosfato

Transcetolase

Gliceraldedo-3-fosfato

Frutose-6-fosfato

Frutose-6-fosfato

Figura 6.17
Reaes no-oxidativas da via pentoses fosfato.

Alternativamente, a via das pentoses fosfato pode ser concebida


como um desvio para a produo de frutose 6 fosfato a partir da
Tanto
a
glicose 6 fosfato
como
o
glicose 6 fosfato.
gliceraldedo 3 fosfato produzidos pela via das pentoses fosfato
podem ser metabolizados a piruvato e, finalmente, oxidado no
sistema enzimtico mitocondrial.

6.7 Viso geral do metabolismo da glicose em


vrias clulas
O metabolismo da glicose em diversos tecidos ocorre do seguinte
modo:

Eritrcitos. Gliclise (lactato como produto final) e via das


pentoses fosfato.

Crebro. Gliclise (piruvato como produto final), ciclo do cido


ctrico e via das pentoses fosfato.

Clulas musculares. Gliclise (piruvato e lactato como produto


final), ciclo do cido ctrico, via das pentoses fosfato,
glicognese e glicogenlise.

Tecido adiposo. Gliclise, ciclo do cido ctrico, via das


pentoses fosfato, glicognese, glicogenlise e lipognese,.

183

184

Motta

Bioqumica

Quadro 6.4 Defeitos no metabolismo da frutose

So conhecidos trs defeitos hereditrios do


metabolismo da frutose. A frutosria essencial uma
desordem
metablica
benigna
causada
pela
deficincia de frutocinase que est normalmente
presente no fgado, ilhotas do pncreas e no crtex
renal. Os sintomas so: aumento no teor de frutose
no sangue e aparecimento de frutosria aps
ingesto de frutose; mesmo assim, 80 a 90% da
frutose metabolizada e pode permanecer sem
diagnstico.
Outro defeito mais srio, a intolerncia
hereditria frutose, que consiste de deficincia da
frutose-1-fosfato
aldolase
(tambm
chamada
aldolase do Tipo B), provocando hipoglicemia severa
aps a ingesto de frutose. Em crianas o consumo
prolongado de frutose pode levar a uma condio
crnica ou morte.

Nessa desordem, a frutose 1-fosfato acumula


intracelularmente no fgado e rins, resultando em
leso renal com distrbios funcionais. utros sintomas
so: dor abdominal e vmitos. O tratamento consiste
na remoo de frutose e sacarose da dieta. A
hipoglicemia presente nesse distrbios provocada
pela inibio da glicogenlise por interferncia com a
glicognio-fosforilase
pela
frutose
1-fosfato.A
deficincia hereditria da frutose-1,6-bifosfatase
resulta em severa reduo da gliconeognese
heptica, provocando episdios de hipoglicemia,
apnia, hiperventilao, cetose e acidose lctica. Em
neonatos, a deficincia pode ser letal. Em outras
idades os episdios podem ser desencadeados pelo
jejum e infeces febris.

Fgado. Gliclise, ciclo do cido ctrico, glicognese,


glicogenlise, via das pentoses fosfato, gliconeognese,
liberao de glicose para o sangue e formao de glicurondeos
(excreo de frmacos e bilirrubina),

6.8 Metabolismo de outros monossacardeos


importantes
Os monossacardeos frutose, galactose e manose encontrados
comumente em oligossacardeos e polissacardeos, exercem
importante papel como combustveis metablicos. So convertidos
em intermedirios glicolticos.
A. Metabolismo da frutose
As fontes de frutose na dieta incluem frutas, mel e o dissacardeo
sacarose. A frutose pode entrar na via glicoltica por duas vias: (1) no
msculo e tecido adiposo, a frutose fosforilada no C6 para produzir
frutose-6-fosfato pela ao da hexocinase em converso semelhante a
da glicose em glicose 6 fosfato. A frutose 6 fosfato formada entra
na via glicoltica.
2+

Mg
Frutose + ATP
frutose 6 fosfato + ADP

(2) a enzima frutocinase.catalisa a fosforilao da frutose em C1:


2+

Mg
Frutose + ATP
frutose 1 fosfato + ADP

A frutose 1 fosfato entra na gliclise e clivada pela


frutose 1 fosfato aldolase (tambm chamada aldolase do Tipo B)
em diidroxiacetona fosfato (DHAP) e gliceraldedo. A DHAP ,
ento,
convertida
a
gliceraldedo 3 fosfato
pela
triose fosfato isomerase.

6 Metabolismo dos carboidratos

185

Quadro 6.4 Galactosemia

A ausncia hereditria da enzima galactose-1-fosfatouridiltransferase resulta na galactosemia. Os indivduos


portadores desse defeito so inacapazes de metabolizar
galactose derivada do leite (lactose) nos metablitos de
glicose, muitas vezes resultando na formao de cataratas,
hepatomegalia e retardamento mental. O tratamento
consiste em dieta isenta de lactose. A dieta deve ser
realizada durante a infncia para evitar srias leses
irreversveis..
Outro defeito mais srio, a intolerncia
hereditria frutose, que consiste de deficincia da
frutose-1-fosfato
aldolase
(tambm
chamada
aldolase do Tipo B), provocando hipoglicemia severa
aps a ingesto de frutose. Em crianas o consumo
prolongado de frutose pode levar a uma condio
crnica ou morte.

Outra forma de galactosemia mais moderada


envolve a ausncia da enzima galactocinase, que
leva ao acmulo de galactose nos tecidos e a
excreo urinria desse acar. O excesso de
galactose em tecidos convertido a galactitol
(dulcitol), que leva a formao de catarata. O
tratamento o mesmo descrito acima.

Frutose
ATP
Frutocinase

ADP
Frutose-1-fosfato
Frutose-1-fosfato-aldolase

Gliceraldedo

Diidroxiacetona-fosfato

ATP
Gliceraldedo-cinase

Triose-fosfato-isomerase

ADP
Gliceraldedo-3-fosfato

Gliceraldedo-3-fosfato

Figura 6.18
Metabolismo da frutose

O gliceraldedo tambm fosforilado pelo ATP em reao


catalisada pela gliceraldedo cinase para formar gliceraldedo-3fosfato.
Assim, os dois produtos da hidrlise da frutose entram na
gliclise como gliceraldedo 3 fosfato.
B. Metabolismo da galactose
Apesar da galactose e da glicose apresentarem estruturas
similares (so epmeros que diferem na configurao no C4) vrias
reaes so necessrias para que esse acar entre na via glicoltica.
A galactose inicialmente convertida galactose-1-fosfato pela
galactocinase. A seguir, a galactose-1-fosfato transformada em um
a
UDP galactose.
Durante
o
derivado
uridina fosfato,

186

Motta

Bioqumica

desenvolvimento fetal e na infncia a formao da UDP galactose


catalisada
pela
galactose 1 fosfato uridiltransferase.
Na
adolescncia, a UDP galactose produzida pela ao da
UDP galactose pirofosforilase.
A UDP galactose transformada por isomerizao em UDPglicose pela ao da UDP-glicose 4 epimerase. Dependendo das
necessidades metablicas da clula, a UDP-glicose usada
diretamente na sntese do glicognio ou convertida glicose 1fosfato pela UDP glicose pirofosforilase. A glicose 1 fosfato entra
na via glicoltica aps sua converso a glicose 6 fosfato pela
fosfoglicomutase (Figura 6.18).
Galactose
ATP
UTP
UDP - Glicose
pirofosforilase

PPi

Galactocinase

ADP
Galactose-1-fosfato

UDP - Glicose
UDP - Galactose-epimerase

Galactose-1-fosfato
uridiltransferase

UDP - Galactose
Glicose-1-fosfato
Fosfoglicomutase

Glicose-6-fosfato
Figura 6.19
Metabolismo da galactose.

C. Metabolismo da manose
A manose um importante componente dos oligossacardeos
encontrados nas glicoprotenas. A manose fosforilada pela
hexocinase manose 6 fosfato que, a seguir, transformada pela
fosfomanose isomerase em frutose 6 fosfato que entra na via
glicoltica.

6 Metabolismo dos carboidratos

Manose
Hexocinase

Manose-6-fosfato
Fosfomanose
isomerase

Frutose-6-fosfato
Figura 6.20
Metabolismo da manose.

Resumo
1. O metabolismo dos carboidratos est centrado na glicose porque esse
acar uma molcula combustvel importante para a maioria dos
organismos. Se as reservas de energia so baixas, a glicose degradada
pela via glicoltica. As molculas de glicose no utilizadas para a
produo imediata de energia so armazenadas como glicognio (em
animais) ou amido (em vegetais).
2. Durante a gliclise (seqncia de 10 reaes), a glicose fosforilada e
clivada para formar duas molculas de gliceraldedo 3 fosfato. Cada
gliceraldedo 3 fosfato ento convertido em uma molcula de
piruvato. Uma pequena quantidade de energia armazenada em
molculas de ATP e NADH. Em organismos anaerbicos, o piruvato
reduzido a lactato. Durante esse processo, o NAD + regenerado para a
continuao da gliclise. Na presena de O 2 , os organismos aerbicos
convertem o piruvato a acetil CoA e, ento, a CO 2 e H 2 O. A gliclise
controlada principalmente por regulao alostrica de trs enzimas
hexocinase, fosfofrutocinase 1 (PFK 1) e piruvato cinase e pelos
hormnios insulina e glucagon.
3. Durante a gliconeognese, molculas de glicose so sintetizadas a partir
de precursores no carboidratos (lactato, piruvato, glicerol e certos
aminocidos). A seqncia de reaes na gliconeognese corresponde a
reaes da via glicoltica, mas no sentido inverso. As trs reaes
irreversveis da gliclise (sntese do piruvato, converso da
frutose 1,6 bifosfato a frutose 6 fosfato e a formao de glicose a
partir da glicose 6 fosfato) so substitudas na gliconeognese por
reaes energeticamente favorveis.
4. A via das pentoses-fosfato, na qual a glicose-6-fosfato oxidada, ocorre
em duas etapas. Na etapa oxidativa, duas molculas de NADPH so

convertida
em
produzidas
enquanto
a
glicose 6 fosfato
ribulose 5 fosfato. Na etapa no oxidativa, a ribose 5 fosfato e outros
acares so sintetizados. Se a clula necessita mais NADPH que
ribose 5 fosfato (componente dos nucleotdeos e cidos nuclicos)
ento os metablitos da etapa no oxidativa so convertidos em
intermedirios glicolticos.
5. Vrios acares diferentes da glicose so importantes no metabolismo
dos vertebrados. Entre eles esto: frutose, galactose e a manose.

187

188

Motta

Bioqumica

6. O substrato para a sntese de glicognio a UDP glicose, uma forma


ativada do acar. A UDP glicose pirofosforilase catalisa a formao de
UDP glicose a partir da glicose 1 fosfato e UTP. A glicose 6 fosfato
convertida em glicose 1 fosfato pela fosfoglicomutase. Para formar o
glicognio so necessrios duas enzimas: a glicognio sintase e a enzima
de ramificao. A degradao do glicognio requer a glicogniofosforilase e a enzima de desramificao. O equilbrio entre glicognese
(sntese do glicognio) e glicogenlise (clivagem do glicognio)
regulada por vrios hormnios (insulina, glucagon e adrenalina).

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 164-91.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed.
So Paulo: Sarvier, 2002. p. 269-96.
STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 1996. p.
419-36.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre: Artmed, 2000. p. 353-81.

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Ciclo do cido
Ctrico

7
Ciclo do cido Ctrico

Objetivos
1.

Descrever a obteno de acetilCoA pela descarboxilao oxidativa do


piruvato nas mitocndrias.

2.

Reconhecer que o ciclo do cido ctrico a via de oxidao do grupo acetila da


acetilCoA com formao de trs NADH e de um FADH 2 alm da formao de
um ATP (ou GTP) por fosforilao ao nvel do substrato.

3.

Identificar a reao catalisada pela citratosintase como a primeira reao do


ciclo do cido ctrico e reconhecer as substncias participantes.

4.

Identificar as substncias participantes das reaes do ciclo do cido ctrico


catalisadas por: isocitratodesidrogenase, complexo do cetoglutarato,
succinilCoAsintetase (succinatotiocinase), succinato desidrogenase e
malatodesidrogenase.

5.

Explicar a reao catalisada succinilCoAsintetase (succinato tiocinase) na


formao de ATP ao nvel do substrato.

6.

Calcular o nmero de compostos de alta energia (ATP) sintetizados pela


oxidao de um mol acetilCoA no ciclo do cido ctrico.

7.

Descrever os mecanismos de regulao do ciclo do cido ctrico.

8.

Descrever a entrada e sada de intermedirios do ciclo do cido ctrico.

O ciclo do cido ctrico (tambm chamado de ciclo de Krebs ou


ciclo dos cidos tricarboxlicos) o estgio final da oxidao dos
combustveis metablicos. Os tomos de carbono entram no ciclo na
forma de grupos acetila derivados dos carboidratos, cidos graxos e
aminocidos. O grupo acetila ligado a coenzima A (acetil-CoA)
oxidado em oito reaes mitocondriais para formar duas molculas de
CO 2 com a conservao da energia livre liberada em trs molculas
de NADH, uma de FADH 2 e um composto de alta energia (GTP ou
ATP). O NADH e o FADH 2 so oxidados e os eltrons so conduzidos
pela cadeia mitocondrial transportadora de eltrons com a liberao
de energia conservada na forma de ATP sintetizado a partir de ADP e
P i por meio de processo denominado fosforilao oxidativa (ver
Captulo 8). A reao lquida para o ciclo do cido ctrico :

191

192

MOTTA

Bioqumica

Quadro 7.1 Descoberta do ciclo do cido ctrico

A operao do ciclo do cido ctrico foi deduzida


por Hans Krebs em 1937 a partir de observaes
sobre a velocidade de consumo de oxignio durante
a oxidao do piruvato por suspenses de msculos
peitorais de pombos. Esses msculos ativos no vo,
exibem uma velocidade de respirao muito alta e
so apropriados para as investigaes metablicas.
O consumo de oxignio foi monitorado com o auxlio
de um manmetro, um aparelho que permite a
medida das alteraes no volume de um sistema
fechado a presso e temperatura constantes.
Estudos anteriores, principalmente os realizados
por Albert Szent Gyrgyi (1935), mostraram que o
succinato, o fumarato, o malato e o oxaloacetato
estimulavam o consumo de oxignio por esses
msculos. Krebs mostrou que o piruvato tambm
aumentava o consumo de oxignio.

Alm disso, ele tambm observou que a


oxidao do piruvato podia ser grandemente
estimulada pelo oxaloacetato, cis-aconitato, isocitrato
e -cetoglutarato. Os efeitos dessas substncias
eram completamente suprimidos pela adio de
malonato,
um
inibidor
competitivo
da
succinato d esidrogenase. A adio do malonato
tambm acumulava citrato, cetoglutarato e
succinato. Pelo fato da adio do piruvato e
oxaloacetato suspenso ter resultado no acmulo
de citrato, Krebs concluiu que a via operava como um
ciclo. Somente em 1951 foi demonstrado que a
acetil-CoA o intermedirio que condensa com o
oxaloacetato para formar citrato.
Krebs publicou sua descoberta no peridico
Enzimologia j que a revista Nature recusou o artigo
original.

AcetilCoA + 3 NAD + + FAD + GDP + P i + 2 H 2 O


2 CO 2 + 3 NADH + FADH 2 + CoASH + GTP + 3 H +
Alm do papel na gerao de energia, o ciclo do cido ctrico
tambm fonte de unidades monomricas para a biossntese de
carboidratos, lipdeos e aminocidos no-essenciais.
Nesse contexto ser examinado como o piruvato, derivado da
glicose e outros acares atravs da via glicoltica, oxidado
acetil CoA e CO 2 para entrar no ciclo do cido ctrico (Figura 7.1).
O piruvato atravessa a membrana externa da mitocndria via
canais aquosos de protenas transmembranas chamados porinas (ver
Seo 9.4). A piruvato translocase, uma protena da membrana
mitocondrial interna, transporta especificamente o piruvato do espao
intermembrana para a matriz mitocondrial em simporte com o H + (ver
Seo 9.4.B).
Piruvato
CO2
2e
Acetil-CoA

GTP

Ciclo do
cido ctrico

2CO2

8e
Figura 7.1
Associao da gliclise e o ciclo do cido ctrico. O piruvato produzido
na gliclise convertido em acetil CoA, o combustvel do ciclo do cido
ctrico. Os eltrons removidos so transportados pelo NADH e FADH 2 para a
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons no interior das mitocndrias

7 Ciclo do cido ctrico


que fornece energia para a sntese de ATP.

7.1 Oxidao do piruvato a acetil CoA e CO2


Sob condies aerbicas, o piruvato presente na matriz
mitocondrial convertido em CO 2 e um fragmento de dois carbonos,
a acetil CoA em reao de descarboxilao oxidativa. A reao
catalisada pelo complexo da piruvato desidrogenase constitudo por
trs enzimas distintas: a piruvato desidrogenase (E1), a
diidrolipoil transacetilase (E2) e a diidrolipoi desidrogenase (E3)
associadas de modo no-covalente e cinco diferentes coenzimas. O
complexo est localizado exclusivamente na mitocndria das clulas
eucariticas. Devido a grande energia livre padro negativa dessa
reao sob condies fisiolgicas, o processo irreversvel o que
impede a reao inversa de formao do piruvato a partir do
acetilCoA.
Matriz mitocondrial

Citosol

Piruvato
translocase

Piruvato

S-CoA

Complexo piruvato
desidrogenase

CH3

H+

CO2

HS-CoA
COO

NAD+

CH3

NADH,H +

Piruvato

Acetil-CoA

A operao do complexo da piruvato desidrogenase requer cinco


coenzimas cujos papis funcionais so descritos a seguir.
1. Descarboxilao oxidativa do piruvato. A reao requer o co-fator
pirofosfato
de
tiamina
(TPP)
ligado

enzima
piruvato desidrogenase (E1). O TPP ataca o carbono da carbonila
do piruvato e libera o CO 2 deixando o grupo hidroxietil ligado ao
TPP para formar o hidroxietilTPP (HETTP).
CH3
+

CH3

N
C

+
O

O
C
C

N
C

CH3

OH

CH3

CO2
H

N
C

CH3

Hidroxietil-TPP

CH3
Piruvato

2. Transferncia do grupo hidroxietil do HETTP para a


diidrolipoiltransacetilase (E2). O aceptor do hidroxietil o

193

194

MOTTA

Bioqumica

grupo prosttico lipoamida. A reao de transferncia regenera o


TPP da E1 e oxida o grupo hidroetil a um grupo acetila.
CH3
+

CH3

CH3

CH3

N
C

CH3

C S
CH3

O
C

S
S

HS
HS

S
Lipoamina

cido lipico

Lis

CH2

CH2
CH2

CH2

O
CH2

CH2

CH2

NH
NH

(CH2)4

CH
C

Lipoamina

3. Transferncia do grupo acetila para a coenzima A, em reao


catalisada pela diidrolipoil transacetilase.
Coenzima A
CoA

SH

Acetil CoA
O
CH3

CoA

CH3

HS

HS

HS

4. Regenerao do complexo da piruvato desidrogenase original. O


grupo diidrolipoato da E2 reduzido pela flavina adenina
dinuclotdeo (FAD) em presena de diidrolipoil desidrogenase
com a regenerao do lipoato.

7 Ciclo do cido ctrico

FAD

HS

FADH 2

HS

5. A FADH 2 reoxidada pela transferncia dos eltrons para o


NAD + para formar NADH. O NADH transfere os eltrons para a
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons que est acoplada
sntese de 2,5 molculas de ATP por meio da fosforilao
oxidativa. A reao total de converso de piruvato a acetil CoA
altamente exergnica G = 33,5 kJmol 1 . Como para cada
molcula de glicose, 2 piruvato so formados pela gliclise, so
sintetizadas 5 molculas de ATP.
NAD+

NADH + H +

FADH2

FAD

A representao esquemtica da operao do complexo da


piruvatodesidrogenase est resumida na Figura 7.2.
A atividade do complexo da piruvatodesidrogenase regulada
por mecanismos alostricos e covalentes. O complexo ativado e
inibido alostericamente pelos efetores mostrados no Quadro 7.1.
Quadro 7.1 Principais efetores alostricos do complexo da piruvato desidrogenase.

Efetores positivos (ativadores)

Efetores negativos (inibidores)

Coenzima A

ATP

NAD +

NADH

AMP

AcetilCoA

Ca

2+

cidos graxos de cadeia longa

195

196

MOTTA

Bioqumica

NAD+
FAD
SH
5

SH
S

OH
CH3

CO2

TPP

Diidrolipoil
desidrogenase

Hidroxietil-TPP

S
HS

Lipoamida
1

O
CH3

Piruvato
desidrogenase

Diidrolipoil
transacetilase

Piruvato

TPP

O
CH3

HS

O
C

FAD

NADH + H +

CH3

CoA

Acetil-CoA
HS

CoA

Acetil-diidrolipoamida
Figura 7.2
Operao do complexo da piruvato-desidrogenase. TTP = pirofosfato de tiamina. O lipoato tem dois
grupos tis ( SH) que formam uma ligao dissulfeto ( S S ) por oxidao.

Os mecanismos de regulao alostrica do complexo so


complementados por modificaes covalentes de protenas. O
complexo inibido por fosforilao pela ao de protena-cinase
(altos teores de piruvato, CoASH e NAD + inibem a cinase) e ativado
por desfosforilao pela ao de fosfatases quando os nveis de [ATP]
mitocondrial declinam.
A seguir a frmula d coenzima A (CoA):

7 Ciclo do cido ctrico

Grupo acetil
O
S
Resduo de
-mercaptoetilamida

CH3

CH2
CH2
NH
C

CH2

Adenosina-3-fosfato

CH2

NH2

NH

Resduo de
cido pantotnico

HO

H3 C

CH3

CH2

O
O

CH2

O
H

OH

O
Acetil-coenzima A (acetil-CoA)

A. Destinos metablicos do acetil-CoA


Os principais destinos metablicos do acetil CoA produzido na
mitocndria incluem: (1) completa oxidao do grupo acetila no ciclo
do cido ctrico para a gerao de energia; (2) converso do excesso
de acetil CoA em corpos cetnicos (acetoacetato, hidroxibutirato e
acetona) no fgado; (3) transferncia de unidades acetila para o
citosol com a subseqente biossntese de molculas complexas como
os esteris e cidos graxos de cadeia longa.

197

198

MOTTA

Bioqumica

Piruvato

Aminocidos

cidos graxos

Acetil-CoA

Ciclo do cido
ctrico

Corpos cetnicos

Esteris-cidos
graxos

Figura 7.3
Destinos do acetil-CoA

7.2 Reaes do ciclo do cido ctrico


A oxidao de acetil CoA realizada pelo ciclo do cido ctrico
em oito reaes sucessivas onde entra o grupo acetila (dois carbonos)
e saem duas molculas de CO 2 . (Figura 7.4).

7 Ciclo do cido ctrico

199

O
CH3

CoA

Acetil-CoA
COO
C

NADH

H2 O

CH2

CH2

HO

COO

NAD+

COO

CoASH

1. Citratosintase

CH2

Oxaloacetato

COO

8. Malatodesidrogenase

Citrato

COO
HO

COO

COO

2. Aconitase

CH2

CH2
COO
L-Malato

HO

COO

HO

COO
Isocitrato

7. Fumarase

NAD+

H2 O
Ciclo do
cido ctrico

COO

3. Isocitratodesidrogenase

NADH

CH
HC

CO2

COO

COO

Fumarato

CH2

FADH2

CH2

6. Succinatodesidrogenase

COO
FAD

4. -Cetoglutaratodesidrogenase

CO2

CH2
CoASH

CH2

COO

CoASH

-Cetoglutarato

COO
5. SuccinilCoA-sintetase

COO

NAD+

CH2
CH2

Succionato
GTP
GDP + Pi

Coa

NADH

Succinil-CoA
Figura 7.4
Reaes do ciclo do cido ctrico. O ciclo oxida duas unidades de carbono com a produo de duas molculas de
CO 2 , uma molcula de GTP, trs molculas de NADH e uma molcula de FADH 2 .

1. Condensao da acetil-CoA com o oxaloacetato. A etapa


inicial do ciclo do cido ctrico a condensao do acetilCoA com o

200

MOTTA

Bioqumica

oxalacetato para formar citrato e CoA livre, em reao irreversvel


catalisada pela citrato sintase. A condensao aldlica ocorre entre o
grupo metlico da acetil CoA e o grupo carboxlico do oxaloacetato,
com hidrlise da ligao tioster e a produo de coenzima A livre. A
reao altamente exergnica (G = 31,5 kJmol 1 ).
-

COO

O
C

COO

CH2
-

COO

CoA

CH2
CH3

H2O

HO

COO

CoA SH

CH2
-

COO

A citrato-sintase inibida pelo ATP, NADH, succinil CoA e


steres acil CoA graxos. A velocidade de reao determinada pela
disponibilidade de acetil CoA e do oxaloacetato. O citrato tambm
est envolvido na regulao de outras vias metablicas (inibe a
fosfofrutocinase na gliclise e ativa a acetil CoA carboxilase na
sntese dos cidos graxos) e como fonte de carbono e equivalentes
redutores para vrios processos de sntese.
Alm da condensao com o acetilCoA para formar citrato, o
oxaloacetato pode ser transformado em piruvato, glicose
(gliconeognese) e aspartato.
2. Isomerizao do citrato em isocitrato via cis aconitato. A
aconitase catalisa a isomerizao reversvel do citrato e do isocitrato,
por meio do intermedirio cis aconitato. A mistura em equilbrio
contm 90% de citrato, 4% de cis aconitato e 6% de isocitrato. No
meio celular, a reao deslocada para a direita, porque o isocitrato
rapidamente removido na etapa seguinte do ciclo. A aconitase contm
um centro ferro enxfre que atua tanto na ligao do substrato como
na catlise da reao.

7 Ciclo do cido ctrico

COO

COO
H2 O

CH2
HO

COO
H2 O

CH2

COO

C
CH

COO

COO

Citrato

CH2

COO

CH 2

201

COO

HO

COO

Aconitase

Isocitrato

3. Descarboxilao oxidativa do isocitrato para formar


-cetoglutarato, o primeiro NADH e CO 2 . Na etapa seguinte, o
isocitrato oxidado a cetoglutarato pela enzima alostrica
isocitrato desidrogenaseNAD + dependente. Junto oxidao ocorre
a perda simultnea de CO 2 (remoo do grupo -carboxlico). A
enzima necessita Mg 2+ ou Mn 2+ e ativada pelo ADP e inibida pelo
ATP e NADH.
COO
CH2
H

HO

COO
O

C
H

NAD

H + NADH

CH2
H

C
O

COO
O

C
O

CO2

CH2
H

C
O

CH2

H+

C
C

COO

H
O

C
O

Isocitrato

4. Oxidao e descarboxilao do cetoglutarato para formar


succinil CoA, o segundo NADH e CO 2 . A converso do
cetoglutarato em um composto de alta energia, a succinil CoA,
catalisada pelo complexo enzimtico cetoglutarato desidrogenase.
A reao semelhante reao do complexo da piruvatodesidrogenase utilizada na transformao do piruvato em acetil CoA.
Participam da reao a tiamina pirofosfato, lipoato, coenzima A, FAD
e
NAD + .
O
complexo
multienzimtico
consiste
da
cetoglutarato desidrogenase,
diidrolipoil transuccinilase
e
diidrolipoil desidrogenase como trs unidades catalticas. A reao
produz a segunda molcula de CO 2 e o segundo NADH do ciclo. O
complexo inibido pelo ATP, GTP, NADH, succinil CoA e Ca 2+ .

C
O

-Cetoglutarato

202

MOTTA

Bioqumica

COO

COO
CoASH

CH2

CO2

CH2

CH2
C

CH2
O

NAD+

NADH

COO
-Cetoglutarato

CoA

Succinil-CoA

5. Clivagem da succinil CoA com formao de GTP. A


succinil CoA sintetase (succinato tiocinase) hidrolisa a ligao
tioster de alta energia da succinil CoA (G = 32,6
kJmol 1 )para formar succinato. A energia liberada conservada como
trifosfato de guanosina (GTP) produzida a partir de GDP + P i (G
= 30,5 kJmol 1 ), em uma fosforilao ao nvel do substrato. O teor
energtico do GTP equivalente ao do ATP.
COO

COO

CH2

CH2
C

CoA

GTP

Pi

CH2

CH2

GTP

CoA

SH

COO

Em presena da nucleosdio difosfato cinase e Mg 2+ , o GTP


convertido reversivelmente em ATP:
GTP + ADP ' GDP + ATP
6. Oxidao do succinato para formar fumarato e FADH 2 . O
succinato oxidado a fumarato pela succinato desidrogenase. Essa
enzima necessita de flavina adenina dinucleotdio (FAD) ligada
covalentemente. Nas clulas dos mamferos, a enzima est
firmemente ligada membrana mitocondrial interna sendo um
componente da succinato ubiquinona, um complexo multiprotico
que participa da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A
succinato desidrogenase fortemente inibida competitivamente pelo
malonato e ativada pelo ATP, fsforo inorgnico e succinato.
COO
H

COO
Succinato

Enz-FAD

Enz-FADH2

COO
C

Succinato-desidrogenase

C
OOC

Fumarato

7 Ciclo do cido ctrico

Os co-fatores participam da transferncia de eltrons do succinato


para a ubiquinona.
Q

QH2

Enzima-FADH2

Enzima-FAD

7. Hidratao da liga dupla do fumarato para formar malato e


o terceiro NADH. O fumarato hidratado a L malato pela enzima
fumarase. A enzima estereoespecfica e catalisa a hidratao da
dupla ligao trans do fumarato.
COO
CH
HC

COO
H2 O
Fumarase

OH

COO

COO

Fumarato

Malato

8. Oxidao do malato a oxaloacetato. A reao final do ciclo


catalisada pela malato-desidrogenase com a formao de oxaloacetato
e NADH. A posio de equilbrio dessa reao est deslocada quase
totalmente para a sntese do L malato (G= +29,7 kJmol 1 ).
Entretanto, a rpida remoo do oxaloacetato pela citrato sintase para
a formao de citrato, possibilita a oxidao do malato.
COO
H

NAD+ NAD + H +

OH

CH2

COO
C

Malato-desidrogenase

COO
Malato

CH2
COO
Oxaloacetato

Alm da condensao com a acetilCoA para formar citrato, o


oxaloacetado pode ser transformado em piruvato, glicose
(neoglicognese) e aspartato (ver Metabolismo dos aminocidos).
A. Energia no ciclo do cido ctrico
O ciclo do cido ctrico a via oxidativa terminal para a maioria
dos combustveis metablicos (piruvato, aminocidos e cidos
graxos). Os dois carbonos do grupo acetila que participam do ciclo
so oxidados completamente a CO 2 e H 2 O. A energia liberada por
essas oxidaes conservada na forma de trs NADH, um FADH 2 e
uma molcula de GTP (ou ATP). Para cada NADH que transfere seus
eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons (ver
Captulo 8: Fosforilao oxidativa), aproximadamente 2,5 ATP so
produzidos a partir de ADP + P i . Para cada FADH 2 , cerca de 1,5 ATP
so produzidos. Assim, a completa oxidao do grupo acetila da
acetil CoA no ciclo do cido ctrico produz 10 ATP.

203

204

MOTTA

Bioqumica

B. Regulao do ciclo do cido ctrico


O ciclo do cido ctrico possui vrios nveis de controle para que
as necessidades energticas e biossintticas das clulas sejam
constantemente atingidas. A disponibilidade de substratos (acetilCoA, NAD + , FAD e ADP), a demanda por precursores biossintticos
provenientes do ciclo do cido ctrico e a necessidade de ATP
determinam a velocidade de operao do ciclo.
O suprimento de grupos acetil derivados do piruvato
(carboidratos) ou de cidos graxos (lipdios) fundamental na para a
velocidade do ciclo. A velocidade influenciada por controles
exercidos sobre o complexo da piruvatodesidrogenase (inibido por
acetilCoA, ATP e NADH e ativado por CoA, ADP e NAD + ) e pela
regulao dos processos de transporte e oxidao dos cidos
graxos.
Relao [NADH]/[NAD + ]. Elevadas concentraes de NADH
inibem alostericamente as trs enzimas controladoras do ciclo: a
citratosintase,
a
isocitratodesidrogenase
e
a
cetoglutarato desidrogenase. A isocitrato desidrogenase pode
tambm ser inibida pelo ATP.
Os intermedirios do ciclo podem afetar a atividade de algumas
enzimas.
A
succinil CoA
inibe
o
complexo
cetoglutarato desidrogenase e a citrato sintase. O oxaloacetato
inibe a succinato desidrogenase. Teores de Ca 2+ intramitocondrial
tambm so importantes na regulao do ciclo do cido ctrico. A
piruvato desidrogenase ativada pelo clcio atravs da ao do
ction sobre a fosfatase regulatria. A isocitrato desidrogenase e a
cetoglutarato desidrogenase so estimuladas mais diretamente
pelos ons Ca 2+ .
Alguns intermedirios do ciclo do cido ctrico podem influenciar
o fluxo em outras vias, por exemplo, as enzimas glicolticas
fosfofrutocinase e piruvato cinase, so inibidas pelo citrato e
succinilCoA, respectivamente.
A Figura 7.5 mostra a regulao do fluxo metablico no ciclo do
cido ctrico.

7 Ciclo do cido ctrico

Acetil-CoA
H2O
CoA-SH

Citrato
sintase

NADH, ATP, Citrato

Oxaloacetato

Citrato

Malato
desidrogenase

Malato

Aconitase

Cis-aconitato

Fumarase

Fumarato

Aconitase

Succinato
desidrogenase

Isocitrato
Isocitrato
desidrogenase

Succinato
Succinil-CoA
sintetase

Complexo da
-cetoglutarato
desidrogenase

Succinil-CoA

-Cetoglutarato
Ca2+
NADH

NAD+,ADP, Ca2+
NADH, ATP
CO2

CO2
Figura 7.5
Regulao do fluxo metablico do ciclo do cido ctrico

7.3 Entrada e sada de intermedirios do ciclo do


cido ctrico
O ciclo do cido ctrico tem papel central no catabolismo de
carboidratos, cidos graxos e aminocidos, com liberao e
conservao de energia. Entretanto, o ciclo tambm est envolvido no
fornecimento de precursores para muitas vias biossintticas. O ciclo
do cido ctrico , portanto, anfiblico (anablico e catablico). Os
intermedirios do ciclo (exceto o isocitrato e o succinato) so
precursores ou produtos de vrias molculas biolgicas. Por exemplo,
a succinil CoA precursora da maioria dos tomos de carbono das
porfirinas. Os aminocidos aspartato e glutamato podem ser
provenientes do oxaloacetato e cetoglutarato, respectivamente, via
reaes de transaminao. A sntese de cidos graxos e colesterol no
citosol necessita de acetil CoA gerada a partir do citrato que

205

206

MOTTA

Bioqumica

atravessa a membrana mitocondrial (ver Captulo 10: Metabolismo


dos lipdeos).
Quadro 7.2 Ciclo do glioxilato

Nos vegetais, em certos microrganismos e em


levedura possvel sintetizar carboidratos a partir de
substratos de dois carbonos como o acetato e etanol,
por meio de uma via alternativa chamada ciclo do
glioxilato. A via emprega as enzimas do ciclo do
cido ctrico, alm de duas enzimas ausentes nos
tecidos
animais:
a
isocitrato iase
e
a
malato sintase. Pela ao da isocitrato liase, o
isocitrato clivado em succinato e glioxilato. O
glioxilato condensa com uma segunda molcula de
acetil-CoA sob a ao da malato-sintase (em reao
anloga quela catalisada pela citrato-sintase no
ciclo do cido ctrico) para formar malato.

O malato passa para o citosol, onde oxidado a


oxaloacetato, que pode ser transformado em glicose
pelas reaes da gliconeognese ou se condensar
com outra molcula de acetil CoA e iniciar outra
volta do ciclo.
Nas plantas, o ciclo do glioxalato est localizado
em organelas chamadas glioxissomos.
Os animais vertebrados no apresentam o ciclo
do glioxilato e no podem sintetizar glicose a partir
de acetil CoA. Nas sementes em germinao, as
enzimas do ciclo do glioxilato degradam os cidos
graxos que so convertidos em glicose, precursor da
celulose.

Os intermedirios do ciclo do cido ctrico desviados para a


biossntese de novos compostos devem ser repostos por reaes que
permitam restabelecer seus nveis apropriados. Alm disso, as
flutuaes nas condies celulares podem necessitar de aumento na
atividade do ciclo, o que requer a suplementao de intermedirios. O
processo de reposio de intermedirios do ciclo chamado
anaplerose (do grego, preencher completamente). A produo de
oxaloacetato permite a entrada do grupo acetila no ciclo do cido
ctrico (oxaloacetato + acetil CoA citrato) e a mais importante
reao anaplertica.
Em deficincias de qualquer dos intermedirios do ciclo, o
oxaloacetato formado pela carboxilao reversvel do piruvato por
CO 2 , em reao catalisada pela piruvato carboxilase que contm
biotina como coenzima. O excesso de acetil-CoA ativa
alostericamente a enzima.
Piruvato + CO 2 + ATP + H 2 O ' oxaloacetato + ADP + P i
As reaes do ciclo convertem o oxaloacetato nos intermedirios
deficientes para que se restabelea sua concentrao apropriada.
A sntese do oxaloacetato ocorre tambm a partir do
fosfoenolpiruvato
e

catalisada
pela
fosfoenolpiruvatocarboxicinase presente tanto no citosol como na
matriz mitocondrial. A enzima ativada pelo intermedirio glicoltico
frutose 1,6 bifosfato, cuja concentrao aumenta quando o ciclo do
cido ctrico atua lentamente.
Fosfoenolpiruvato + CO 2 + GDP ' oxaloacetato + GTP
Pela ao conjunta das duas enzimas malatodesidrogenase
(enzima mlica), o malato (e o oxaloacetato) pode ser produzido a
partir do piruvato:
Piruvato + CO 2 + NAD(P)H ' malato + NAD(P) +
Outras reaes que abastecem o ciclo do cido ctrico incluem a
succinil-CoA, um produto do catabolismo de cidos graxos de cadeia
mpar, e os cetocidos a partir do cetoglutarato e oxaloacetato

7 Ciclo do cido ctrico

provenientes dos aminocidos glutamato e aspartato, respectivamente,


via reaes de transaminao.
Por reverso de reaes anaplerticas, os intermedirios do ciclo
do cido ctrico servem como precursores de glicose. Essa funo
demonstrada em certas espcies de microrganismos e plantas que
utilizam o ciclo do glioxilato na sntese de carboidratos a partir da
acetil CoA.

Piruvato

Outros
aminocidos,
purinas,
pirimidinas

Acetil-CoA

Citrato

Oxaloacetato

Asparato

cidos graxos,
esteris

Ciclo do
cido ctrico

Succinil-CoA
Porfirinas,
heme, clorofila

-Cetoglutarato

Glutamato

Purinas
Pirimidinas
Glutamina
Argina
Prolina

Figura 7.6
Papel biossinttico do ciclo do cido ctrico. Os intermedirios do ciclo do
cido ctrico so precursores biossintticos de vrios compostos.

Resumo
1. Os organismos aerbicos empregam o oxignio para gerar energia a
partir de combustveis metablicos por vias bioqumicas: ciclo do cido
ctrico, cadeia mitocondrial transportadora de eltrons e fosforilao
oxidativa.
2. O ciclo do cido ctrico uma srie de oito reaes sucessivas que
oxidam completamente substratos orgnicos, como carboidratos, cidos
graxos e aminocidos para formar CO 2 , H 2 O e coenzimas reduzidas
NADH e FADH 2 . O piruvato, o produto da via glicoltica, convertido a
acetil CoA, o substrato para o ciclo do cido ctrico.
3. Os grupos acetila entram no ciclo do cido ctrico como acetilCoA
produzidos a partir do piruvato por meio do complexo multienzimtico
da piruvato desidrogenase que contm trs enzimas e cinco coenzimas.
4. Alm do papel gerador de energia, o ciclo do cido ctrico tambm
exerce importantes papis, biossntese de glicose (gliconeognese), de
aminocidos, de bases nucleotdicas e de grupos heme.
5. O ciclo do glioxilato, encontrado em alguns vegetais e em alguns fungos,
uma verso modificada do cido ctrico no qual as molculas de dois
carbonos, como o acetato, so convertidos em precursores da glicose.

207

208

MOTTA

Bioqumica

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 47-75.
CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2000. p. 492-519.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So
Paulo: Sarvier, 2002. p. 441-64.
MOTTA, V. T. Bioqumica clnica para o laboratrio: princpios e
interpretaes. 4 ed. Porto Alegre: Editora Mdica Missau, 2003. p. 75-103.

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Fosforilao
Oxidativa

8
Fosforilao Oxidativa

Objetivos
1.

Ordenar os componentes da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons,


de acordo com seus potenciais redox.

2.

Calcular a energia livre padro da oxidao de um composto, dado o potencial


redox padro.

3.

Comparar a energia livre padro de oxidao de um mol de FADH 2 e de 1 mol


de NADH na cadeia respiratria, at a formao de H 2 O.

4.

Explicar como a energia da oxidao de substncias pode ser utilizada para a


sntese de ATP.

5.

Explicar a sntese de ATP pela fosforilao oxidativa atravs da hiptese


quimiosmtica.

6.

Comparar os efeitos de um inibidor da oxidao, de um inibidor da fosforilao


e de um desacoplador, sobre o consumo de oxignio e sobre a produo de
ATP.

7.

Explicar os mecanismos do estresse oxidativo

A degradao de molculas nutrientes gera um nmero reduzido


de molculas de ATP diretamente pela fosforilao ao nvel do
substrato. No entanto, as etapas oxidativas da gliclise, ciclo cido
ctrico, -oxidao dos cidos graxos e da degradao de alguns
aminocidos produzem ATP indiretamente. Isso ocorre pela
reoxidao das coenzimas NADH e FADH 2 formadas pela oxidao
de macromolculas e que transferem seus eltrons para o O 2 por meio
da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A cadeia
formada por complexos proticos (centros redox) localizados na
membrana mitocondrial interna e ligados firmemente a grupos
prostticos capazes de aceitar e doar eltrons (reaes de oxidaoreduo). Grande parte da energia liberada no sistema bombeia
prtons para fora da matriz mitocondrial, gerando um gradiente
eletroqumico de H + . O retorno dos prtons para a matriz
mitocondrial libera energia livre que canalizada para a sntese de
ATP a partir de ADP e P i , por meio da fosforilao oxidativa. Essa a
maior fonte de ATP nas clulas eucariticas. Existe um estreito
acoplamento entre a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons e
a sntese de ATP pela fosforilao oxidativa nas mitocndrias. O ATP
um transdutor energtico universal dos sistemas vivos que
utilizado na conduo da maioria das reaes dependentes de energia.
209

210

MOTTA Bioqumica

As necessidades energticas dirias de um homem de 70 kg em


ocupao sedentria , aproximadamente, 10.000 kJ. A energia livre
padro de hidrlise do ATP 30,5 kJmol 1 . Esse indivduo deve,
portanto, hidrolizar o equivalente a 328 molculas ou 165 kg de ATP
por dia, no entanto, o corpo contm somente cerca de 50 g de ATP. O
clculo sugere que cada molcula de ATP sintetizada e
desfosforilada mais de 3.000 vezes a cada 24 horas para suprir de
energia as atividades do organismo. O atendimento da maior parte
dessas necessidades tem lugar na membrana mitocondrial interna e
realizada por dois sistemas acoplados: a cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons e a fosforilao oxidativa.

8.1 Estrutura mitocondrial


Os processos de liberao e conservao da maior parte de
energia livre nas clulas aerbicas so realizados nas mitocndrias. O
nmero de mitocndrias em diferentes tecidos reflete a funo
fisiolgica do mesmo e determina a capacidade de realizar funes
metablicas aerbicas. O eritrcito, por exemplo, no possui
mitocndrias e, portanto, no apresenta a capacidade de liberar
energia usando o oxignio como aceptor terminal de eltrons. Por
outro lado, a clula cardaca apresenta metade de seu volume
citoslico composto de mitocndrias e altamente dependente dos
processos aerbicos.
A mitocndria formada por duas membranas com diferentes
propriedades e funes biolgicas. A membrana externa lisa
composta de lipdeos (fosfolipdeos e colesterol) e protenas, com
poucas funes enzimticas e de transporte. Contm unidades da
protena porina, que formam canais transmembrana onde ocorre a
livre difuso de vrios ons e de molculas pequenas.

Matriz

Cristas

Membran
a interna

Membran
a externa

8 Fosforilao oxidativa

Figura 8.1
Mitocndria. (a) Acima: diagrama de um corte de uma mitocndria. (b)
Abaixo: microfotografia eletrnica

A membrana mitocondrial interna composta de 75% de


protenas e contm as enzimas envolvidas no transporte de eltrons e
na fosforilao oxidativa. Contm tambm, enzimas e sistemas de
transporte que controlam a transferncia de metablitos entre o
citosol e a matriz mitocondrial. Ao contrrio da membrana externa, a
interna virtualmente impermevel para a maioria das molculas
polares pequenas e ons. A impermeabilidade da membrana
mitocondrial interna promove a compartimentalizao das funes
metablicas entre o citosol e a mitocndria. Os compostos se movem
atravs da membrana mitocndrial mediados por protenas especficas
denominadas carreadores ou translocases. A membrana mitocondrial
interna apresenta pregas voltadas para o interior (circunvolues),
chamadas cristas que aumentam a superfcie da membrana e cujo
nmero reflete a atividade respiratria da clula.
O espao entre a membrana externa e a membrana interna
conhecido como espao intermembranas e equivalente ao citosol
quanto as suas concentraes em metablitos e ons. A regio
delimitada pela membrana interna denominada matriz mitocondrial.
Os principais caractersticas bioqumicas das mitocondriais so:

Membrana externa. Livremente permevel a molculas pequenas


e ons.

Membrana interna. Impermevel maioria das molculas


pequenas e ons, incluindo o H + , Na + , K + , ATP, ADP, Ca 2+ , P, o
piruvato, etc. A membrana contm: cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons, ADP-ATPtranslocases, ATPsintase
(F o F 1 ) e outros transportadores de membrana.

Matriz
mitocondrial.
Contm:
complexo
da
piruvatodesidrogenase, enzimas do ciclo do cido ctrico, enzimas da
oxidao dos cidos graxos, enzimas da oxidao dos
aminocidos, vrias outras enzimas, ribossomos, DNA, ATP, ADP,
P i , Mg 2+ , Ca 2+ , K + e outros substratos solveis.

8.2 Reaes de oxidao-reduo


As reaes de oxidao-reduo (reaes redox) envolvem a
transferncia de eltrons que passam de um doador de eltrons
(redutor) para um aceptor de eltrons (oxidante). Portanto, a

211

212

MOTTA Bioqumica

oxidao a perda de eltrons, enquanto, a reduo o ganho de


eltrons. Nenhuma substncia pode doar eltrons sem que outra os
receba. Assim, uma reao de oxidao-reduo total composta de
duas meiasreaes acopladas (uma reao de oxidao e uma reao
de reduo) e constituem um par redox:
Fe 2+ ' Fe 3+ + e (oxidao)
Cu 2+ + e ' Cu + (reduo)
Em algumas reaes de oxidao-reduo so transferidos tanto
eltrons como prtons (tomos de hidrognio):
SubstratoH 2 Substrato + 2H 2H + + 2e
A tendncia com a qual um doador de eltrons (redutor) perde
seus eltrons para um aceptor eletrnico (oxidante) expressa
quantitativamente pelo potencial de reduo do sistema. O
potencial padro de reduo (E) definido como a fora
eletromotiva (fem), em volts (V), gerado por uma meia-clula onde os
dois membros do par redox conjugado so comparados a uma meiaclula referncia padro de hidrognio (2H + + 2e ' H 2 ) a 25C e 1
atm sob condies padro. O potencialpadro da meia reao do
hidrognio em pH 7,0 E = 0,42 V (volts). A Tabela 8.1 apresenta
os valores de potenciais-padro de reduo de alguns pares redox.
Tabela 8.1 Potenciaispadro de reduo (E ) de algumas reaes
parciais bioqumicas.
E (V)

Par redox

Succinato + CO 2 + 2e ' -cetoglutarato

2H + + 2e ' H 2

-Cetoglutarato + CO 2 + H + + 2e ' isocitrato

Acetoacetato + 2H + 2e ' -hidroxibutirato

NAD + + 2H + + 2e ' NADH + H +

Lipoato + 2H + + 2e ' diidrolipoato

Acetaldedo + 2H + + 2e ' etanol

Piruvato + 2H + + 2e ' lactato

Oxaloacetato + 2H + + 2e ' malato

Coenzima Q (oxid) + 2H + + 2e ' coenzima Q (red)

Citocromo b (Fe 3+ ) + e ' citocromo b (Fe 2+ )

Citocromo c (Fe 3+ ) + e ' citocromo c (Fe 2+ )

Citocromo a (Fe 3+ ) + e ' citocromo a (Fe 2+ )

Citocromo a 3 (Fe 3+ ) + e ' citocromo a 3 (Fe 2+ )

+
O 2 + 2H + 2e ' H 2 O

0,67
0,42
0,38
0,35
0,32
0,29
0,20
0,19
0,17
0,10
0,12
0,22
0,29
0,39
0,82

Quanto maior o potencialpadro de reduo, maior a afinidade


da forma oxidada do par redox em aceitar eltrons e, assim, tornar-se
reduzida.
O potencial de reduo depende das concentraes das espcies
oxidadas e reduzidas. O potencial de reduo (E) est relacionado
com o potencialpadro de reduo (E ) pela equao de Nernst
(proposta em 1881):

8 Fosforilao oxidativa

E ' = E o' +

213

RT [receptor de eltrons ]
ln
[doador de eltrons ]
nF

onde E= potencial de reduo para as concentraes encontradas na


clula em pH 7,0, E = potencialpadro de reduo, R = constante
dos gases (8,31 J K 1 mol 1 , T = temperatura absoluta em graus K
(Kelvin)(298K a 25C), n = nmero de eltrons transferidos, F =
constante de Faraday (96.485 J V 1 mol 1 , a carga eltrica de 1 mol
de eletrons) e ln = logaritmo natural. A 25C, esta equao se reduz a:
E ' = E o' +

[receptor de eltrons]
59
log
n
[doador de eltrons]

Onde E e E so expressos em V (volts).


A energia disponvel para a realizao de trabalho proporcional
a E (diferena nos potenciais de reduo). Quando o valor de E for
positivo, G ser negativa e indica um processo espontneo e pode
produzir trabalho.

NAD + , NADP + e FAD

8.3 Cadeia mitocondrial transportadora de


eltrons
Nas clulas eucariticas o estgio final da oxidao de nutrientes
ocorre na mitocndria. A organela promove a rpida oxidao do
NADH e FADH 2 produzidos nas reaes de gliclise, ciclo do cido
ctrico, oxidao dos cidos graxos e oxidao de alguns
aminocidos. A transferncia de eltrons do NADH e FADH 2 para O 2
se realiza em uma sequncia de reaes de oxidorreduo em
processo denominado cadeia mitocondrial transportadora de eltrons
(CMTE) tambm conhecido como cadeia respiratria. A cadeia
consiste de uma srie de transportadores de eltrons que operam
seqencialmente, formados por protenas integrais de membranas
associadas a grupos prostticos capazes de aceitar ou doar eltrons.
Os eltrons passam atravs dessa cadeia do menor para o maior
potencial-padro de reduo. Na medida que os eltrons so
transferidos ao longo da cadeia, ocorre a liberao de energia livre
suficiente para sintetizar ATP a partir do ADP e P i por meio da
fosforilao oxidativa.
Os componentes da cadeia mitocondrial transportadora de
eltrons esto localizados na superfcie interna da membrana
mitocondrial interna por onde os eltrons provenientes do NADH e
FADH 2 fluem para o oxignio molecular. Os transportadores de
eltrons funcionam em complexos multienzimticos conhecidos como
NADHcoenzima
Q
oxidorredutase
(complexo
I),
succinatocoenzima Q oxidorredutase (complexo II), coenzima Qcitocromo c oxidorredutase (complexo III) e citocromo c oxidase
(complexo IV). Os grupos prostticos transportadores de eltrons
associados aos complexos proticos so: nucleotdeos da
nicotinamida (NAD + ou NADP + ), nucleotdeos da flavina (FMN ou
FAD), ubiquinona (coenzima Q), citocromos e protenas
ferroenxfre.

Apesar das estruturas do


NADH e NADPH serem
semelhantes, suas funes
diferem consideravelmente. O
NADH reconvertido a NAD +
na cadeia respiratria
mitocondrial transportadora de
eltrons, fundamentalmente
para a gerao de ATP. O
NADPH fornece ons hidretos
para a maioria dos processos
sintticos. Neste contexto
examinado somente a
reoxidao do NADH na cadeia
respiratria mitocondrial.

214

MOTTA Bioqumica

Tabela 8.2 Caractersticas dos componentes proticos da cadeia


mitocondrial transportadora de eltrons
Complexo enzimtico

Grupo prosttico

I ( NADH coenzima Q oxidorredutase)

FMN, FeS*

II ( Succinato coenzima Q oxidorredutase)

FAD, FeS

III ( Coenzima Q citocromo c oxidorredutase)

Citocromo b
Citocromo c 1
1 FeS R **

IV ( Citocromo c oxidase)

Citocromo a
Citocromo a 3
Cu A , Cu B

*FeS = grupo ferro enxofre.


**FeS R = centro de Rieske

A. Complexo I transfere eltrons do NADH para a


ubiquinona
A transferncia de eltrons atravs da cadeia respiratria inicia
com o complexo I (tambm chamado NADHcoenzima Q
oxidorredutase ou NADH desidrogenase) catalisa a transferncia de
dois eltrons do NADH (nicotinamida adenina dinucleotdio) para a
coenzima Q (ubiquinona). As principais fontes de NADH incluem
reaes do ciclo do cido ctrico e da oxidao dos cidos graxos.
Composto por 43 cadeias polipeptdicas diferentes, o complexo I a
maior protena transportadora de eltrons. Alm de uma molcula de
FMN (flavina mononucleotdeo), o complexo contm sete centros
ferroenxfre (FeS). Os centros ferroenxfre podem consistir de
dois ou quatro tomos de ferro complexado com igual nmero de ons
sulfeto, mediam a transferncia de um eltron. As protenas que
contm centros ferroenxofre so tambm conhecidas como
ferroprotenas sem heme.

8 Fosforilao oxidativa

C
Nicotinamida

NH2

+
N

CH2

O
Ribose

OH

OH

NH2
O

O
O

O
CH2

Adenosina

OH

OX

X = H Nicotinamida-adenina-dinucleotdeo (NAD+ )
X = PO32 Nicotinamida-adenina-dinucleotdeo-fosfato (NADP+ )

As reaes catalisadas pelas desidrogenases so exemplificadas


esquematicamente pelas equaes:
Substrato reduzido ' Substrato oxidado + 2H + + 2e
NAD + + 2H + + 2e ' NADH + H +
Esta reao envolve a transferncia reversvel de dois prtons +
dois eltrons do substrato para o NAD + . Um prton (H + ) liberado
para o meio e o on hidreto, :H (um prton + dois eltrons),
incorporado na posio 4 do anel de nicotimanida do NAD + :
H

C
NH2
+
N
R
NAD(P)+
(oxidado)

O
NH2

H:

N
R
NAD(P)H
(reduzido)

O NADH oxidado a NAD + pela ao do Complexo I com a


transferncia de + 2H + + 2e para a coenzima Q (CoQ ou ubiquinona)
na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons:

215

216

MOTTA Bioqumica

NADH + H + + CoQ (oxidada) ' NAD + + CoQH 2 (reduzida)


A transferncia envolve vrias etapas intermedirias que ainda
no foram completamente esclarecidas. Os eltrons so transferidos
inicialmente do NADH para a FMN, um dos grupos prostticos da
enzima, para produzir a forma reduzida FMNH 2.
NADH + H + + FMN ' FMNH 2 + NAD +
NH2

Riboflavina

O
CH2
Ribitol

P
O

OH

OH

OH

O
H

H3 C

OCH2

CH2
H3 C

OH

OH

Adenosina

O
NH

O
Flavina-adenina-dinucleotdeo (FAD)

H3C

NH

H3C

H3C

NH

+2H
-2H

H3C

A seguir os eltrons so transferidos da FMNH 2 para uma srie de


protenas ferroenxfre (FeS) cujos grupos mais comuns so 2Fe2S
e 4Fe4S. O estado oxidado frrico (Fe 3+ ) dos grupos capta os
eltrons da FMNH 2 com a liberao de prtons conforme a equao:
FMNH 2 + 2 Protena-Fe 3+ S ' FMN + 2H + + 2 Protena-Fe 2+ S
As protenas ferro-enxfre reduzidas so reoxidadas pela
coenzima Q (CoQ), um pequeno composto lipossolvel presente em
virtualmente todos os sistemas vivos. A CoQ aceita eltrons das
flavoprotenas e reduzida a CoQH 2 em reao reversvel de
transferncia de eltrons:
O
H3C

H3C

OH
CH3

+2H+

CH3
H23C
CH
O

C
H

H3C

CH3

H3C

H23C
CH

CH3

CH2 H

-2H

OH

C
H

CH2 H

8 Fosforilao oxidativa

A reao seguinte mostra a reoxidao das protenas


ferroenxfre na cadeia respiratria mitocondrial pela coenzima Q:
O
R1
2 Protena

2+

Fe S

2H

OH
R3

3+

2 Protena
R2

Fe S

R1

R3

R2

R4

R4
O

OH

Durante a transferncia de dois eltrons atravs dos centros


redox do Complexo I, quatro prtons so translocados da matriz
mitocondrial para o espao intermembrana.
Espao
intermembrana

Complexo I
FMNH2

2e -

Fe-S

2e -

QH2
Q

FMN

Matriz
NAD+

NADH

4H +

H+
Figura 8.2
Fluxo de eltrons e prtons por meio do Complexo I. Os eltrons passam do
NADH para a coenzima Q por vrios centros ferro-enxfre. A reduo do Q a
QH 2 tambm necessita de dois prtons. Quatro prtons so transferidos da
matriz para o espao intermembrana. O fluxo de prtons gera um potencial
eletroqumico atravs da membrana mitocondrial interna que conserva parte
da energia liberada pelas reaes de transferncia de prtons para a sntese
de ATP.

B. Succinato-coenzima Q oxidorredutase (Complexo II)


Uma via independente do Complexo I, permite a entrada de
eltrons de potencial relativamente alto na cadeia mitocondrial
transportadora
de
eltrons,
utilizando
o
complexo
succinatocoenzima Q oxidorredutase (complexo II) que tambm
catalisa a reduo da CoQ a CoQH 2 . Os grupos redox incluem o FAD
(flavina adenina dinucleotdeo), protenas Fe-S e o citocromo b 560 . O
FADH 2 formado no ciclo do cido ctrico pela oxidao do
succinato
a
fumarato
em
presena
da
enzima
succinatodesidrogenase, pertencente ao complexo II. Desse modo, o
FADH 2 produzido no deixa o complexo, mas seus eltrons so
transferidos para as protenas ferro-enxfre e a seguir para a CoQ
para entrar na cadeia. Do mesmo modo, o FADH 2 da
glicerolfosfatodesidrogenase
e
acilCoAdesidrogenase
transferem seus eltrons de alto potencial para a CoQ formando
CoQH 2 . O complexo II no bombeia prtons atravs da membrana
mitocondrial, pois a variao de energia livre insuficiente. Em
conseqncia, forma-se menos ATP pela oxidao do FADH 2 que pela
do NADH (ver adiante).
Apesar dos nomes, os complexos I e II no operam em srie, mas
ambos atingem o mesmo resultado.

217

218

MOTTA Bioqumica

Espao
intermembrana

Complexo II
2e FAD
2e-

Fe-S

QH2

2e -

Q
Matriz

Succinato

Fumarato + 2H

2H

Figura 8.3
Fluxo de eltrons por meio do Complexo II. Os eltrons do succinato passam
por uma flavoprotena e vrias centros FeS para atingir o Q. O complexo II
no contribui diretamente para gradiente de concentrao mas serve para
suprir de eltrons a cadeia mitocondrial de trnasporte.

C. Complexo III transfere eltrons da CoQH 2 para o


citocromo c
O complexo III (coenzima Q-citocromo c oxidorredutase ou
citocromo bc 1 ) catalisa a transferncia de eltrons da CoQH 2 para o
citocromo c com o transporte de prtons da matriz para o espao
intermembranas.
CoQH + citocromo c (Fe 3+ ) ' CoQ + citocromo c (Fe 2+ ) + H +
2

O complexo enzimtico formado no mnimo por oito protenas


diferentes, incluindo dois citocromos b (tipos b 562 e b 566 ) que
apresentam potenciais de oxidorreduo diferentes, um citocromo c 1
e uma protena ferro-enxfre. Devido a essa composio, o complexo
III as vezes denominado complexo citocromo bc 1 .
Nos organismos aerbicos as funes geradoras de energia
possuem vrios citocromos, localizados na membrana mitocondrial
interna. Os citocromos so protenas transportadoras de eltrons
caracterizadas pela presena de um grupo heme (ferro-protoporfirina)
como grupo prosttico. As porfirinas so compostos tetrapirrlicos
que permitem numerosas variaes em sua estrutura, dependendo dos
substituintes no ncleo pirrlico e de suas disposies especficas.
No decorrer dos ciclos catalticos, os tomos de ferro dos citocromos
oscilam entre o estado oxidado frrico (Fe 3+ ), e o estado reduzido
ferroso (Fe 2+ . Os citocromos so classificados pela natureza das
cadeias laterais do grupo heme em trs classes principais,
denominadas a, b e c.
A CoQ reduzida reoxidada pelo citocromo b. O centro reagente
deste intermedirio redox o tomo de ferro do complexo
porfirnico:

8 Fosforilao oxidativa
H2C

CH

H2C

CH3

CH

CH3

H
H3C

C
N

HN
3+

HC

Fe
N

H
H3C

CH2

CH

C
N

2+

HC

HN
Fe

HN

H3C

CH

HN

H3C

CH3

CH3

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

COOH

COOH

COOH

COOH

Quando o citocromo b atua como agente oxidante, o tomo de


ferro convertido de Fe 3+ (frrico) para Fe 2+ (ferroso). Ou seja, cada
molcula de citocromo b aceita um eltron. Como a oxidao da
CoQH 2 envolve a remoo de dois eltrons (e dois prtons), a
completa oxidao de uma molcula deste intermedirio necessita
duas molculas de citocromo b. Os prtons so liberados para o meio:
CoQH 2 + 2 citocromo b (Fe 3+ ) '
CoQ + 2 citocromo b (Fe 2+ ) + 2H +
O citocromo b , subsequentemente, oxidado pelo citocromo c 1 .
O carreador, como todos os citocromos, um complexo ferroporfirinaprotena. Os citocromos diferem entre si com respeito tanto
a poro protica como porfirnica. Entretanto, as reaes redox de
todos os citocromos envolvem a oxidao e reduo do ferro:
2 Citocromo b (Fe 2+ ) + 2 Citocromo c 1 (Fe 3+ ) '
2 Citocromo b (Fe 3+ ) + 2 Citocromo c 1 (Fe 2+ )
O citocromo c 1 reduzido transfere os eltrons para o citocromo c,
uma protena heme (protoporfirina IX) frouxamente ligada cistena
da protena na superfcie interna da membrana.
Quando o citocromo c reage com o citocromo c 1 ocorre a
transferncia de eltrons entre os tomos de ferro:
2 Citocromo c (Fe 2+ ) + 2 Citocromo c (Fe 3+ ) '
1

2 Citocromo c 1 (Fe 3 + ) + 2 Citocromo c (Fe 2 + )


A oxidao de uma molcula de QH 2 acompanhada pela
translocao de quatro prtons atravs da membrana mitocondrial
interna para o espao intermembrana (dois prtons da matriz e outros
dois da QH 2 ).
2H +
c
Q

Espao
intermembrana

2e -

QH2
Matriz

Complexo III
2H +

Figura 8.4
Fluxo de transporte de eltrons e prtons por meio do Complexo III. Os

CH2

219

220

MOTTA Bioqumica
eltrons passam do QH 2 para o citocromo c. Quatro prtons so translocados
atravs da membrana: dois da matriz e dois do QH 2 .

D. Complexo IV oxida o citocromo c e reduz o O 2


O complexo IV (citocromo c oxidase) um complexo protico
que catalisa a transferncia de quatro eltrons do citocromo c at o
oxignio molecular para formar gua:
4 Citocromo c 2+ + O 2 + 4 H + 4 Citocromo c 3+ + 2 H 2 O
Os centros redox do complexo IV nos mamferos incluem grupos
heme e ons cobre situados entre as 13 subunidades em cada metade
do complexo dimrico.
Cada eltron transferido do citocromo c para o centro redox
Cu A , que contm dois ons cobre, e ento para o grupo heme a. A
seguir, o eltron viaja para para um centro binuclear que consiste do
tomo de ferro do heme a 3 e um on cobre (Cu B ). A reduo do O 2
pelos quatro eltrons ocorre no centro binuclear FeCu. A reduo do
O 2 a H 2 O consome quatro prtons da matriz mitocondrial.
A citocromo c oxidase tambm transloca dois prtons da matriz
para o espao intermembrana.
O mecanismo preciso desta fase no est totalmente esclarecido.
A presena de ons de cobre crtica para a transferncia final dos
eltrons para o oxignio.
Espao
Complexo IV intermembrana

c
2e -

CuA

a 3-Cu B

2e-

Matriz
2H +

1/2 O
2

H2O

2H +

Figura 8.5
Fluxo de eltrons e prtons por meio do Complexo IV. Os tomos de ferro
dos grupos heme no citocromo e os tomos de cobre so oxidados e
reduzidos no fluxo de eltrons. O Complexo IV contribui para a concentrao
de prtons de dois modos: a translocao de prtons da matriz para o
espao intermembrana ocorre em associao com a transferncia de
eltrons e a formao de gua remove prtons da matriz.

E. Energia livre da transferncia dos eltrons do NADH para


o O2
A medida de variao de energia livre das reaes de oxidoreduo dependente da diferena de voltagem entre potenciaispadro de reduo, E, do par redox:
E = E (aceptor de eltrons) E (doador de eltrons)
A variao de energia livre padro para a reao dada pela
equao:
G =nFE
onde G a variao de energia livre padro, n o nmero de
eltrons transferidos por mol de reagente convertido, F a constante

8 Fosforilao oxidativa

de proporcionalidade faraday (1 F = 96.485 J w V 1 w mol 1 ), (um fator


que converte volt/equivalente a joule/equivalente) e E a
diferena entre os potenciais-padro de reduo do par redox.
Na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons dois eltrons
so transferidos do NADH (doador de eltrons) atravs de uma srie
de aceptores de eltrons com potenciais de reduo crescentes at o
O 2 (aceptor de eltrons). As reaes parciais para a oxidao do
NADH pelo O 2 so expressas:
NAD + + 2H + + 2e ' NADH + H +
O 2 + 2H + + 2e ' H 2 O

E = 0,32 V

E = +0,82 V

E = +0,820 (0,320) mV = +1,14 mV


A variao de energia livre padro ento dada por

G = 2 x 96.485 x 1,14 V
G = 218 kJmol 1
A energia livre global liberada (218 kJmol 1 ) suficiente para
sintetizar ATP a partir de ADP e P i por meio da fosforilao
oxidativa.

NADH
Stio I
E 0 = + 0,42 V
.
G0

E0 (V)

+0,2

UQH2

-1

Complexo Cit bc 1
Stio II
I
E 0 = + 0,18 V
.
G0
Cit c

Cit a
Cit a3

+0,4

+0,6

-1

Stio III
I
E 0 = + 0,52 V
0
.
G

-1

O2

+0,8
Fluxo de eltrons

Figura 8.6
Relaes energticas na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A
reduo na energia livre ocorre em trs etapas. Em cada etapa (stios I, II e
III) a energia liberada suficiente para a sntese de ATP.

8.4 Fosforilao oxidativa


A fosforilao oxidativa o processo no qual a energia gerada
pela cadeia mitocondrial transportadora de eltrons (CMTE)
conservada na forma de ATP. O processo responsvel pela maioria
do ATP sintetizado em organismos aerbicos. O fluxo de eltrons pela
CMTE, desde o par NADH/NAD + at o par O 2 /H 2 O, libera energia
livre que acoplada ao transporte de prtons por meio de uma

221

222

MOTTA Bioqumica

membrana impermevel ao prton, e conservada como um potencial


eletroqumico de membrana. O fluxo transembrana de prtons fornece
energia livre para a sntese de ATP por meio da ATP-sintase a partir
de ADP e P i .
ADP + P i + H + ' ATP + H 2 O
Apesar dos esforos realizados, ainda no foram identificados
alguns intermedirios da cadeia como tambm certas molculas
chamadas desacoladoras, que impedem a sntese de ATP durante o
CMTE. Alm disso, a hiptese no explica porque toda a membrana
mitocondrial deve estar intacta durante a sntese de ATP.
Alm da sntese de ATP, os gradientes de prtons gerados na
CMTE so dissipados na produo de calor empregando outra via
para os prtons retornarem para a matriz mitocondrial por meio de
uma protena existente nas membranas internas e chamada protena
desacopladora (termogenina), principalmente, no tecido adiposo
marrom.

A. Teoria quimiosmtica
Nas ltimas dcadas foram realizados significativos esforos para
delinear o mecanismo da fosforilao oxidativa. Muitas hipteses
foram propostas, mas somente uma foi amplamente aceita e tem sido
confirmada experimentalmente, a teoria quimiosmtica ou propulsora
de prtons (proposta por Peter Mitchell em 1961) incorporada de
elementos de outra proposta, a do acoplamento conformacional
(1974).
A teoria postula que o transporte de eltrons e a sntese de ATP
esto acoplados pelo gradiente eletroqumico atravs da membrana
mitocondrial interna. Neste modelo, a energia livre do transporte de
eltrons pela cadeia mitocondrial leva ao bombeamento de H +
(prtons) da matriz para o espao intermembrana, estabelecendo um
gradiente eletroqumico de H + (fora prton-motiva, pmf) atravs da
membrana mitocondrial interna. Os H + retornam para a matriz
mitocondrial por meio de canais proticos especficos formados pela
enzima ATP-sintase (ver adiante) que composta de duas unidades
funcionais, F o e F 1 . A energia livre liberada pelo potencial
eletroqumico desse gradiente utilizada para a sntese de ATP a
partir de ADP e P i . Para cada NADH oxidado na matriz mitocondrial
~2,5 ATP so sintetizados, enquanto ~1,5 ATP so formados por
FADH 2 oxidado, j que seus eltrons entram na cadeia em CoQH 2 ,
depois do primeiro stio de bombeamento de prtons.

8 Fosforilao oxidativa

H+

+
I

2e-

III

Espao
intermembrana

IV

Membrana
interna
Matriz

H2O
H+

H+

H+

1/2 O

ATP
sintase

+
2H +
ADP
+
Pi

ATP
+
H2O

Figura 8.7
Acoplamento do transporte mitocondrial de eltrons e a sntese de ATP
(teoria quimiosmtica). O transporte de eltrons movimenta os prtons da
matriz mitocondrial para o espao intermembranas estabelecendo um
gradiente eletroqumico de prtons atravs da membrana mitocondrial
interna. O retorno dos prtons para a matriz via F o F 1 (ATP-sintase) e a
gerao de ATP mostrada esquerda da figura. A energia tambm
utilizada na translocao do Ca 2+ .

B. Sntese de ATP
O acoplamento entre o transporte de eltrons e a sntese de ATP
obtido pelo gradiente eletroqumico. A sntese do ATP na mitocndria
catalisada pelo complexo ATPsintase (ATPsintase bombeadora
de prtons, F o F 1 ATP sintase, complexo V) encontrada na membrana
mitocondrial interna. uma enzima multiprotica composta por duas
subunidades distintas: o F 1 e o F o . O componente F 1 (fator de
acoplamento I) uma protena perifrica de membrana solvel em
gua e formada por cinco diferentes subunidades polipeptdicas na
proporo ( 3 , 3 , , e ). O componente F o um complexo proteco
integral de membrana com oito diferentes tipos de subunidades e
insolvel em gua. O F o o canal transmembrana que transfere
prtons para o stio ativo da ATPsintase. A unidade F 1 catalisa a
sntese de ATP em trs stios ativos. A poro F o da ATP sintase uma
protena integral de membrana formada por trs ou quatro
subunidades.
Quando o componente F 1 est conectado ao componente F o , a
ATPsintase (F o F 1 ATPase) catalisa a sntese de ATP. No entanto,
quando o componente F 1 liberado para a matriz mitocondrial ocorre
uma ao contrria sua funo normal; ele catalisa a hidrlise do
ATP (o reverso da sntese).

223

224

MOTTA Bioqumica

ADP + Pi

ATP

F1
H+

Matriz
F0
Espao
intermembrana

Figura 8.8
Funo da ATPsintase. Os prtons fluem atravs do canal transmembrana
F o do espao intermembrana para a matriz; o componente F 1 catalisa a
sntese do ATP a partir do ADP + P i .

O mecanismo da sntese de ATP a partir de ADP e P i catalisada


pela ATP-sintase foi proposto por Paul Boyer (1979) e consiste de
mecanismo de mudana da ligao no qual os trs stios de F 1 giram
para catalisar a sntese. O mecanismo sugere que a energia no
empregada para formar a ligao fosfoanidro, mas para liberar o ATP
do stio ativo. No stio ativo, o K eq para a reao ADP + P i ' ATP +
H 2 O perto de 1,0. Assim, a formao de ATP no stio ativo
rapidamente
completada.
Contudo,
........
Uma
mudana
conformacional dirigida pelo influxo de prtons enfraquece a ligao
do ATP com a enzima e, assim, o ATP recm-sintetizado deixa a
superfcie da enzima.
A formao e a liberao de ATP ocorre em trs etapas:

1. Uma molcula de ADP e uma molcula de P i ligam-se ao stio O


(aberto).
2. A passagem de prtons para o interior atravs da membrana
mitocondrial interna causa mudanas na conformao dos stios
catalticos. A conformao aberta (O) contendo ADP e P i
recentemente ligado torna-se um stio frouxo (L). O stio
frouxo, j preenchido com ADP e P i , torna-se um stio firme (T).
O stio T contendo ATP converte-se em stio O (aberto).
3. O ATP liberado do stio aberto; o ADP e P i , condensan-se para
formar ATP no stio firme (T).

8 Fosforilao oxidativa

ADP + Pi
O

+P
i

P
AT

AD
P

ADP+Pi
L

Figura 8.3
Mecanismo de mudana de ligao
para ATP-sintase. As diferentes
conformaes dos trs stios so
indicados por diferentes formatos. O
ADP e o P i ligam-se ao stio O. Uma
alterao
conformacional
dependente de energia liberada na
translocao
de
prtons
interconverte os trs stios. O stio O
para L, T para O e O para L. O ATP
sintetizado no stio T e liberado no
stio O.

AT
P

ATP

ATP

P
AD

+Pi

T
O

ATP

ATP

+P
i

AD
P

P
AT

C. Transporte ativo do ATP, ADP e P i atravs da membrana


mitocondrial
necessrio que o ATP recm-sintetizado saia da mitocndria
para a sua utilizao no citosol, bem como o retorno do ADP para a
produo de ATP na matriz mitocondrial. No entanto, a membrana
mitocondrial interna impermevel a entrada de ADP e a sada de
ATP. Para que essas molculas atravessem a membrana necessria a

225

226

MOTTA Bioqumica

presena da ATP-ADPtranslocase (translocador de ADPATP)


uma protena mitocondrial transportadora de ons e metablitos
carregados que impelida pelo potencial de membrana. A difuso
dessas molculas carregadas realizada por um mecanismo de
transporte acoplado, ou seja, a entrada de ADP na matriz est
vinculada a sada de ATP, e vice-versa (sistema de antiporte). O
segundo sistema de transporte de membrana a fosfatotranslocase,
que promove a entrada de um P i e um H + (prton) para o interior da
matriz (sistema de simporte P i H + ), que atua em conjunto com a
ATPADP-translocase. A ao combinada desses dois transportadores
promove a troca do ADP e P i citoslicos pelo ATP da matriz
mitocondrial com o ganho lquido de um H + no espao
intermembrana.
Membrana
mitocondrial
interna

Exterior

Interior

F1
ATP-Sintase

3H +

ATP 4+

2
ADP

Pi
1

H+

Figura 8.11
Transporte de ATP, ADP e P i atravs da membrana mitocondrial interna.
A ATP ADP translocase (translocador de ADP ATP) transporta o ATP
recm-sintetizado para o cotosol e ADP e P i para dentro da matriz
+
(antiporte). Notar que a troca de P i e H simporte. (1) Fosfato-translocase e
(2) ATP-ADP-translocase.

A troca ATP-ADP gasta 25% do rendimento energtico da


transferncia de eltrons na cadeia mitocondrial para regenerar o
potencial de membrana.

D. Nmero de ATP gerados via cadeia mitocondrial


transportadora de eltrons
A relao precisa entre o nmero de prtons que retornam para a
matriz mitocondrial atravs da F 1 F o ATP sintase e o nmero de ATP
gerados permance incerto. Existe o consenso de que trs prtons

8 Fosforilao oxidativa

voltam para a matriz para cada ATP gerado. Tambm acredita-se que
o par de eltrons que entra na cadeia transportadora a partir do:

NADH atravs dos Complexos I, III e IV resulta na translocao


de 10 prtons (as estimativas variam entre 9 e 12 prtons) para o
espao intermembrana. O retorno desses 10 prtons por meio da
ATP-sintase promove a sntese de ~2,5 ATP.

FADH 2 que se oxida no complexo II sem passar pelo Complexo I,


transloca seis eltrons para o espao intermembrana. O retorno
desses 6 prtons por meio da ATP-sintase sintetiza ~1,5 ATP.

A razo P/O uma medida do nmero de ATP sintetizados por


tomo de oxignio utilizado, ou por mol de gua produzida. Estudos
recentes confirmaram os valores (2,5 e 1,5) para a razo P/O e,
portanto, no correspondem aos valores anteriormente usados (3 e 2,
respectivamente). O transporte do fosfato para a matriz resulta em um
ganho lquido de um prton. Desse modo, assumindo que 10 prtons
so bombeados para fora da matriz mitocondrial e quatro prtons
retornam para cada ATP sintetizado, 10/4 molculas de ATP so
produzidas para cada dois eltrons liberados do NADH para O 2 na
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. Clculo similar
mostra que 6/4 molculas de ATP so produzidas por eltrons
emanados do FADH 2 .

E. Regulao da fosforilao oxidativa


A velocidade do transporte de eltrons e da fosforilao oxidativa
so controlados estritamente pelas necessidades energticas da clula.
O controle pelo ADP ilustrado pelo fato que a mitocndria s oxida
o NADH e o FADH 2 quando houver disponibilidade de ADP e P i
como substratos para a fosforilao Os eltrons no fluem pela
CMTE at o oxignio, a menos que o ADP seja simultaneamente
fosforilado a ATP. A velocidade da fosforilao oxidativa limitada
pelo quociente de ao das massas [ATP]/[ADP][P i ]. Ou seja, a ATPsintase inibida em altas concentraes de ATP e ativada quando as
concentraes de ADP e P i esto elevadas. A ATPsintase inibida
por altas concentraes de ATP e ativada por teores de ADP e P i
elevados. As quantidades relativas de ATP e ADP intramitocondrial
so controladas por duas protenas transportadoras presentes na
membrana interna: o translocador de ADPATP e o carreador de
fosfato (ver acima).
O translocador de ADPATP uma protena dimrica
responsvel pela troca 1:1 do ATP intramitocondrial pelo ADP
citoplasmtico. Como o ATP possui uma carga negativa a mais que o
ADP, o transporte do ATP para o exterior e do ADP para o interior da
mitocndria so favorecidas. O transporte de H 2 PO 4 junto com um
prton mediada pela fosfato-translocase, tambm conhecida como
H 2 PO 4 /H + simporte (movem solutos atravs da membrana na mesma
direo). O transporte de 4 prtons para o interior necessrio para a
sntese de cada molula de ATP; 3 para dirigir o rotor ATP-sintase e 1
para dirigir o transporte do fosfato para o interior.

F. Desacopladores da fosforilao oxidativa


Os desacopladores da fosforilao oxidativa so substncias
presentes na membrana mitocondrial interna que dissipam o gradiente

227

228

MOTTA Bioqumica

de prtons ao trazerem novamente os prtons do espao


intermembrana para a matriz mitocondrial, contornando a
ATPsintase. Aumentam a permeabilidade dos H + e so capazes de
dissociar a fosforilao oxidativa do transporte de eltrons.
Quadro 8.1 Alguns inibidores que interferem com a fosforilao oxidativa.
Stio de inibio

Agente

Transporte de eltrons

Rotenona
Amital
Antimicina A
Monxido de carbono (CO)
Cianeto
Azida sdica
Piercidina A

Membrana interna

2,4-dinitrofenol (DNP)
Valinomicina

ATP-sintase

Oligomicina
Venturicidina
Protena desacopladora (termogenina)

G. Desacoplamento do transporte de eltrons e


termognese
Recm-nascidos, animais que hibernam e animais adaptados ao
frio necessitam maior produo de energia que a normalmente
produzida pelo metabolismo. Os animais de sangue quente usam o
calor para manter a temperatura do corpo. Sob condies normais, o
transporte de eltrons e a sntese de ATP esto intimamente acoplados
de tal forma que o calor produzido mantido ao mnimo. No tecido
adiposo marrom, a maior parte da energia produzida pela CMTE no
empregada para formar ATP. Em lugar disso, ela dissipada como
calor. (Esse tecido tem cor marrom devido ao grande nmero de
mitocndrias que contm). Ao redor de 10% da protena na membrana
mitocondrial interna constituda de termogenina ou protena
desacopladora que permite que os prtons retornem matriz sem
passar pelo complexo F o F 1 . Desse modo, quando a termogenina est
ativa, a energia de oxidao no conservada na forma de ATP mas
dissipada como calor. A protena desacopladora ativada quando ela
se liga a cidos graxos.
O processo de gerao de calor na gordura marrom, chamado
termognese sem tremor, regulado pela noradrenalina (na
termognese com tremor, o calor produzido pela contrao muscular
involuntria). A noradrenalina, um neurotransmissor liberado por
neurnios especializados que terminam no tecido adiposo marrom,
inicia um mecanismo de cascata que hidroliza molculas de gordura.
Os cidos graxos produzidos por hidrlise das gorduras ativam a
protena desacopladora. A oxidao de cidos graxos continua at
cessar o sinal de noradrenalina ou at que as reservas de gorduram
acabem.

8 Fosforilao oxidativa

H. Transporte de eltrons do citosol para a mitocndria


O NADH produzido na gliclise (na oxidao do
gliceraldedo3fosfato), no pode ser utilizado diretamente pela
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons para a formao de
ATP. Como a gerao de NADH (equivalente reduzido) ocorre no
citosol e a membrana mitocondrial interna impermevel a essa
substncia, possvel transportar somente os eltrons do NADH para
a mitocndria por um dos sistemas de circuitos, tais como, circuito do
glicerolfosfato e o circuito do malatoaspartato.
1. Lanadeira do glicerol-fosfato. Est presente nos msculos e
crebro
dos
mamferos,
e
emprega
a
enzima
3fosfoglicerol desidrogenase
que
catalisa
a
reduo
da
diidroxiacetona fosfato pelo NADH para originar 3fosfoglicerol. O
3fosfoglicerol difunde-se at a face externa da membrana
mitocondrial
interna
onde
localiza-se
uma
outra
3fosfogliceroldesidrogenase que contm FAD. A diidroxiacetona
fosfato regenerada a partir da 3fosfoglicerol formando FADH 2 . O
FADH 2 entrega seus eltrons coenzima Q para seguir a seqncia da
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. Para cada NADH
citoslico oxidado resulta apenas 1,5 ATP. A diidroxiacetonafosfato
, ento, transferida de volta para o citosol.

NADH + H +
Glicerol-3-fosfato
desidrogenase
citoslica

NAD+

Diidroxiacetona
fosfato

Glicerol
3-fosfato

FADH2

Complexo
glicerol-3-fosfato
desidrogenase

FAD

2e

Espao
intermembrana
Figura 8.12
Circuito (lanadeira)
diidroxiacetona-fosfato

Q
Matriz

glicerol-fosfato. O NADH citoslico reduz a


a glicerol 3 fosfato em reao catalisada pela

glicerol 3 fosfato-desidrogenase citoslica. A reao reversa emprega uma


flavoprotena ligada superfcie externa da membrana interna que transfere
os eltrons para a coenzima Q (ubiquinona).

2. Lanadeira do malato-aspartato. Est disponvel nas clulas


hepticas, cardacas e renais e de outros tecidos. Nesse sistema, o
NADH citoslico reduz o oxaloacetato a malato pela
malato desidrogenase extramitocondrial. O malato transpe a
membrana mitocondrial interna onde reoxidado a oxaloacetato pela
malato desidrogenase mitocondrial que utiliza o NAD + como
coenzima. Pela reoxidao do malato na matriz, ocorre a transferncia
dos equivalentes reduzidos provenientes do citosol. O oxalacetato
formado transformado em aspartato que pode atravessar a
membrana. Este sai da mitocndria e, no citosol, regenera o

229

230

MOTTA Bioqumica

oxaloacetato. O NADH regenerado na mitocndria transfere os


eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons, onde
forma ATP.

NAD+
Malato

NADH,H +

Aspartato
transaminase
citoslica

Oxaloacetato

Malato
desidrogenase
citoslica

Aspartato

-Cetoglutarato
Dicarboxilase
translocase

Glutamato

Glutamato
asparato
translocase

Glutamato
-Cetoglutarato

Malato

Malato
desidrogenase
mitocondrial

NAD

Oxaloacetato

NADH,H +
2e

Aspartato
transaminase
mitocondrial

Aspartato

Cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons
(na membrana interna)

Figura 8.13
Circuito do malato-aspartato. O NADH citoslico reduz o oxaloacetato a
malato., que transportado atravs da membrana interna para a matriz
mitocondrial. A reoxidao do malato gera NADH que transfere os eltrons
para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons.

A operao contnua do circuito necessita o retorno do


oxaloacetato para o citosol. O oxaloacetato citoslico regenerado
por meio de reaes de transaminao tanto mitocondriais como
citoslicas.
Todos os tecidos que possuem mitocndria, parecem ter a
carreadores que atravessam a membrana. A proporo de cada
lanadeira varia para cada tecido. O fgado utiliza, principalmente, a
malato-aspartato, enquanto certas clulas musculares so mais
dependentes do circuito do glicerol-fosfato.

8.5 Rendimento da oxidao completa da glicose


Cada molcula de glicose completamente oxidada a CO 2 e H 2 O
pelas vias da gliclise, ciclo do cido ctrico e cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons, utilizando o circuto malato/aspartato (ver
Captulo 6: Metabolismo dos carboidratos) gera 32 molculas de ATP
(Tabela 8.3) aceitando os novos valores para a relao P/O (ver

8 Fosforilao oxidativa

acima). Os valores anteriormente usados para o rendimento de ATP


pela oxidao completa da glicose 38 ATP.
Tabela 8.3 Balano de ATP formados pela completa oxidao da glicose
a CO 2 na gliclise e no ciclo do cido ctrico
ATP/mol

Reaes
Fosforilao da glicose

Fosforilao da glicose 6 fosfato

2 (desfosforilao do 1,3 bifosfoglicerato)

+2

2 (desfosforilao do fosfoenolpiruvato)

+2

2 x 1 NADH (oxidao do gliceraldeido 3 fosfato)

+5

2 x 1 NADH (descarboxilao oxidativa do piruvato)

+5

2 x 3 NADH (ciclo do cido ctrico)

+15

2 x 1 FADH 2 (ciclo do cido ctrico)


2 x 1 GTP (ciclo do cido ctrico)

+2

Total

+3
+31

A utilizao do circuto glicerol-fosfato encontrada no msculo


esqueltico e no crebro, apenas 30ATP so formados.
A oxidao da glicose a CO 2 e H 2 O, libera 2870 kJmol 1 . A
energia livre padro necessria para sintetizar 1 mol de ATP a partir
de ADP e P i 30,5 kJmol 1 A energia livre para a sntese de 32 ATP
corresponde a 32 x 30,5 = 976 kJmol 1 . A eficincia termodinmica
de formao de ATP a partir da glicose 976 x 100/2870 = 34%.
Assim, aproximadamente 34% da energia liberada na completa
oxidao da glicose conservada como ATP.

8.6 Estresse oxidativo


Algumas vezes, o oxignio pode aceitar eltrons para formar
derivados instveis, conhecidos como espcies reativas de oxignio
(ROS) que incluem o radical superxido, perxido de hidrognio,
radical hidroxila e singlet oxigen. Como os ROS reagem facilmente
com vrios componentes celulares, a sua ao pode lesar clulas de
modo significante. Nos organismos vivos, a formao de ROS
geralmente mantida em quantidades mnimas por mecanismos
antioxidantes. (Antioxidantes so substncias que inibem a reao de
molculas com radicais oxignio).
Em certas ocasies, denominadas coletivamente como estresse
oxidativo, os mecanismos antioxidantes so contornados com a
ocorrncia de leso oxidativa. A leso ocorre principalmente por
inativao enzimtica, despolimerizao polissacardica, leses
oxidativas no DNA e rompimento das membranas biolgicas.
Exemplos de circunstncias que podem causar srias leses
oxidativas incluem certas anormalidades metablicas, o consumo
exagerado de certos frmacos, a exposio a radiao intensa e
contato repetitivo com certos contaminates ambientais (exemplo,
fumaa de cigarro).
Alm da contribuio aos processos de envelhecimento, a leso
oxidativa foi relacionada a um grande nmero de doenas, entre as

231

232

MOTTA Bioqumica

quais esto cncer, desordens cardiovasculares (aterosclerose, infarto


do miocrdio, hipertenso), desordens neurolgicas como a esclerose
amiotrfica lateral (ALS; doena de Lou Gehring), doena de
Parkinson, doena de Alzheimer. Vrios tipos de clulas
deliberadamente produzem grandes quantidades de ROS. Por
exemplo, os macrfagos e neutrfilos continuamente atuam buscando
microrganismos e clulas lesionadas.

A. Espcies reativas de oxignio


As propriedades do oxignio esto diretamente relacionadas com
sua estrutura molecular. A molcula de oxignio diatmica um
diradical. Um radical um tomo ou grupo de tomos que contm um
ou mais eltrons no-emparelhados. Dioxignio um diradical porque
possui dois eltrons no-emparelhados. Por essa e outras razes,
quando reage, o dioxignio pode aceitar somente um eltron por vez.
Relembrando que na sequncia da cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons, a H 2 O formada como resultado da
transferncia seqencial de 4 eltrons para o O 2 . Durante o processo,
vrios ROS so formados. A citocromooxidase captura os
intermedirios reativos em seu stio ativo at que todos os 4 eltrons
tenham sido transferidos para o oxignio. Entretanto, os eltrons
podem escapar da via de transporte de eltrons e reagir com o O 2 para
formar ROS.
Sob circunstncias normais, os mecanismos antioxidantes de
defesa celular miniminizam as leses. ROS tambm so formados
durante processos noenzimticos. Por exemplo, a exposio luz
ultravioleta e a radiao ionizante causam a formao de ROS.
O primeiro ROS formado durante a oxidao do oxignio o
radical superxido ( O 2 + e O 2 ). A maioria dos radicais
superxidos so produzidos na cadeia mitocondrial transportadora de
eltrons pelos eltrons derivados do ciclo Q no complexo III e pela
flavina NADHdesidrogenase (complexo I). O radical superxido
atua como nuclefilo e (sob condies especficas) tanto como agente
oxidante como agente redutor. Devido as suas propriedades de
solubilidade, o O 2 causa considervel leses oxidativas aos
componentes fosfolipdicos da membrana. Quando gerado em meio
aquoso, o O 2 reage consigo mesmo para formar O 2 e perxido de
hidrognio (H 2 O 2 ):
2 H + + 2 O 2 O 2 + H 2 O 2
O H 2 O 2 no um radical pois no possui nenhum eltron
desemparelhado. A limitada reatividade do H 2 O 2 permite a sua
passagem atravs de membranas e torna-se grandemente disperso. A
reao subseqente do H 2 O 2 com o o Fe 2+ (ou outro metal de
transio) resulta na produo do radical hidroxila, uma espcie
altamente reativa.
Fe 2+ + H 2 O 2 Fe 3+ + OH + OH
Radicais como o radical hidroxila so especialmente perigosos
porque podem iniciar reaes autocatalticas.

8 Fosforilao oxidativa

B. Mecanismos enzimticos antioxidantes


As principais defesas enzimticas contra o estresse oxidativo so:
a superxidodismutase, o glutationaperoxidase e a catalase. A
ampla distribio celular dessas enzimas previne a ao de espcies
de oxignio reativas.
1. Superxido-dismutase (SOD). uma classe de enzimas que
cataliza a formao de H 2 O 2 e O 2 a partir do radical superxido:
2 O 2 +2 H + H 2 O 2 + O 2

Existem duas formas principais de SOD. Em humanos ocorre no


citoplasma a isoenzima CuZn. Uma isoenzima contendo Mn
encontrada na matriz mitocondrial. A doena de Lou Gehring
(esclerose amiotrfica lateral), uma condio degenerativa fatal na
qual ocorre a degenerao neuromotora, causada por mutao no
gene que codifica a isoenzima CuZn citoslica da SOD.

2. Glutationa peroxidase. uma enzima chave no sistema


responsvel pelo controle dos nveis de peroxidase celular. A enzima
contm selnio e A enzima catalisa a reduo de vrias substncias
pelo agente redutor glutationa (GSH). Alm da reduo do H 2 O 2 pera
formar gua, a glutationa-peroxidase transforma perxidos orgnicos
em lcoois:
2 GSH + R-OOH GSSG + R-OH + H 2 O
Vrias enzimas auxiliares mantm a funo da glutationaperoxidase. A GSH regenerada a partir do GSSG (glutationadissulfeto) pela glutationa-redutase:
GSSG + NADPH + H + 2 GSH + NADP +
O NADPH necessrio para a reao fornecido principalmente
pela via das pentoses-fosfato ( ver Captulo 6: Metabolismo dos
carboidratos). O NADPH tambm produzido por reaes catalisadas
pela isocitrato-desidrogenase e pela enzima mlica.

3. Catalase. uma enzima contendo heme que emprega o H 2 O 2


para oxidar outros substratos:
RH 2 + H 2 O 2 R + 2 H 2 O
Quantidades abundantes de catalase so encontradas
peroxissomos, ricos em H 2 O 2 gerados em vrias reaes:

nos

RH 2 + O 2 R + H 2 O 2
O excesso de H 2 O 2 convertido em gua pela catalase:
2 H2O2 2 H2O + O2

C. Molculas antioxidantes
Os organismos vivos usam molculas antioxidantes para se
autoproteger dos radicais. Alguns dos mais proeminentes incluem a
glutationa (GSH), o tocoferol (vitamina E), cido ascrbico
(vitamina C) e o caroteno.

233

234

MOTTA Bioqumica

Resumo
1. A maioria das reaes que captam ou liberam energia so reaes de
oxidao-reduo. Nessas reaes, os eltrons so transferidos entre o
doador de eltrons (agente redutor) e o aceptor de eltrons (agente
oxidante). Em algumas reaes, somente os eltrons so transferidos; em
outras, tanto os eltrons como os prtons so transferidos. A tendncia
de um par redox conjungado em perder um eltron chamado potencial
redox. Os eltrons fluem espontaneamente do par redox eletronegativo
para o mais positivo. Nas reaes redox favorveis o E positivo e
G negativo.
2. O oxignio empregado pelos organismos aerbicos como aceptor
terminal de eltrons na gerao de energia. Vrias propriedades fsicas e
qumicas o tornam capaz desse papel. Alm de sua disponibilidade, o
oxignio difunde facilmente atravs das membranas celulares e
facilmente aceita eltrons.
3. As molculas de NADH e FADH 2 produzidas na gliclise, -oxidao
dos cidos graxos, oxidao de alguns aminocidos e ciclo do cido
ctrico geram energia na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons.
A via consiste de uma srie de carreadores redox que recebem eltrons
do NADH e FADH 2 . No final do caminho os eltrons, juntamente com os
prtons so doados para o oxignio para formar H 2 O.
4. Durante a oxidao de NADH, existem trs etapas na quais a energia
liberada suficiente para sintetizar ATP. So elas: as etapas I, III e IV.
5. A fosforilao oxidativa o mecanismo no qual o transporte de eltrons
est acoplado para a sntese de ATP. De acordo com a teoria
quimiosmtica, a criao de um gradiente de prtons que acompanha o
transporte de eltrons est acoplado a sntese de ATP.
6. A completa oxidao de uma molcula de glicose resulta na sntese de
29,5 a 31 ATP, dependendo do circuito (lanadeira) de eltrons utilizado,
o circuito glicerol-fosfato ou o circuito malato-aspartato, para transferir
os eltrons do NADH citoplasmtico para a cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons.
7. O uso de oxignio pelos organismos aerbicos relaciona-se com a
produo de ROS (espcies reativas de oxignio). O ROS formado
porque as molculas de diradical de oxignio aceita um eltron por vez.
Exemplos de ROS incluem o radical superxido, perxido de hidrognio,
radical hidroxila e singlet oxigen. O risco da presena de elevado
contedo de ROS mantido ao mnimo por mecanismos celulares de
defesa antioxidante.

Referncias
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of life. 3 ed.
Boston: McGraw-Hill, 2003. p. 298-330.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So
Paulo : Sarvier, 2002. p. 515-62.
STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro : Guanabara-Koogan, 1996. p.
502-28.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre : Artmed, 2000. p. 492-528.

Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Lipdeos e
Membranas

9
Lipdeos e Membranas

Objetivos
1

Compreender as estruturas dos principais lipdeos.

Descrever os fatores que influenciam os pontos de fuso dos cidos graxos.

Descrever os diferentes lipdeos presentes nas membranas.

Descrever as diferentes protenas de membrana.

Compreender o modelo do mosaico fludo e seus refinamentos.

Compreender que a distribuio de ons em cada lado da membrana gera um potencial de


membrana.

Compreender os mecanismos de transporte atravs das membranas.

Compreender as modificaes na bicamada que ocorrem durante a endocitose e da


exocitose.

Os lipdeos so biomolculas que exibem uma grande variedade


estrutural. Molculas como as gorduras e leos, fosfolipdeos,
esterides e carotenides, que diferem grandemente tanto em suas
estruturas como em suas funes so considerados lipdeos. So
compostos orgnicos heterogneos pouco solveis em gua, mas
solveis em solventes no-polares. Alguns lipdeos esto combinados
com outras classes de compostos, tais como protenas (lipoprotenas)
e carboidratos (glicolipdeos).
Os lipdeos participam como componentes no-proticos das
membranas biolgicas, precursores de compostos essenciais, agentes
emulsificantes, isolantes, vitaminas (A, D, E, K), fonte e transporte
de combustvel metablico, alm de componentes de biossinalizao
intra e intercelulares.

9.1 Classificao dos lipdeos


Os lipdeos so freqentemente classificados nos seguintes
grupos:

cidos graxos e seus derivados

Triacilgliceris.

Ceras
235

236

Motta

Bioqumica

Fosfolipdeos (glicerofosfolipdeos e esfingosinas)

Esfingolipdeos (contm molculas do aminolcool esfingosina)

Isoprenides (molculas formadas por unidades repetidas de


isopreno, um hidrocarboneto ramificado de cinco carbonos)
constituem os esterides, vitaminas lipdicas e terpenos.

A. cidos graxos e seus derivados


Os cidos graxos so cidos monocarboxlicos de longas cadeias
de hidrocarbonetos acclicas, no-polares, sem ramificaes e, em
geral, nmero par de tomos de carbono. Podem ser saturados,
monoinsaturados (contm uma ligao dupla) ou poliinsaturados
(contm duas ou mais ligaes duplas). Os mais abundantes contm
C 16 e C 18 tomos. Em geral, as duplas ligaes nos cidos graxos
poliinsaturados esto separadas por um grupo metileno,
CH=CHCH 2 CH=CH, para evitar a oxidao quando expostos em
meio contendo oxignio. Como as ligaes duplas so estruturas
rgidas, as molculas que as contm podem ocorrer sob duas formas
isomricas: cis e trans. Os ismeros cis ocorrem na maioria dos
cidos graxos naturais. Os cidos graxos so componentes
importantes de vrios tipos de molculas lipdicas. As estruturas e
nomes de alguns cidos graxos esto ilustrados na Tabela 9.1. Em
geral, so representados por um smbolo numrico que designa o
comprimento da cadeia. Os tomos so numerados a partir do carbono
da carboxila. A numerao 16:0 designa um cido graxo com C 16 sem
ligaes duplas, enquanto 16:1 9 representa um cido graxo com C 16 e
ligao dupla em C9. Os tomos C2 e C3 dos cidos graxos so
designados e , respectivamente.
O
O

CH 2
2

CH 2
3

cido
graxo

CH2
4

CH 2
5

Grupo
acil
graxo

CH 2
6

CH2
7

CH2
8

CH2
9

CH2

Cadeia
hidrocarbonada

10

CH2

11

CH 3
12

Figura 9.1
Estrutura e nomenclatura dos cidos graxos. Os cidos graxos consistem
de uma longa cauda hidrocarbonada e um terminal com um grupo
carboxlico. Na nomenclatura IUPAC, os carbonos so numerados a partir do
carbono carboxlico. Na nomenclatura comum, o tomo de carbono
adjacente ao carbono carboxlico designado , e os carbonos seguintes
so nomeados , , , etc. O tomo de carbono mais distante do carbono
carboxlico chamado carbono , independente do tamanho da cadeia. O
cido graxo mostrado, laureato (ou dodecanoato), tem 12 carbonos e no

9 Lipdeos e membranas
contm duplas ligaes.

Outro sistema de numerao tambm utilizado na nomenclatura


dos cidos graxos onde o C1 o mais distante do grupo carboxila
(sistema de numerao mega):
Tabela 9.1 Alguns cidos graxos de ocorrncia natural
Smbolo
numrico

Estrutura

Nome comum

cidos graxos saturados


12:0

CH 3 (CH 2 ) 10 COOH

cido lurico

14:0

CH 3 (CH 2 ) 12 COOH

cido mirstico

16:0

CH 3 (CH 2 ) 14 COOH

cido palmtico

18:0

CH 3 (CH 2 ) 16 COOH

cido esterico

20:0

CH 3 (CH 2 ) 18 COOH

cido araqudico

22:0

CH 3 (CH 2 ) 20 COOH

cido benico

24:0

CH 3 (CH 2 ) 22 COOH

cido lignocrico

cidos graxos insaturados


16:1 9

CH 3 (CH 2 ) 5 CH=CH(CH 2 ) 7 COOH

cido palmitolico

18:1

CH 3 (CH 2 ) 7 CH=CH(CH 2 ) 7 COOH

cido olico

18:2

9, 12

CH 3 (CH 2 ) 4 CH=CHCH 2 CH=CH(CH 2 ) 7 COOH

cido linolico

18:3

9, 12, 15

CH 3 -(CH 2 -CH=CH) 3 (CH 2 ) 7 COOH

cido -linolico

CH 3 -(CH 2 ) 3 -(CH 2 -CH=CH) 4 -(CH 2 ) 3 COOH

cido araquidnico

20:4 5, 8, 11, 14

Alm das gorduras provenientes da dieta, o homem pode


sintetizar a maioria dos cidos graxos, mas incapaz de produzir o
cido linolico e o cido linolnico. Esses dois ltimos so
denominados cidos graxos essenciais e so obtidos da dieta. Os
cidos graxos essenciais so precursores para a biossntese de vrios
metablitos importantes. A dermatite um sintoma precoce em
indivduos com dietas pobres em cidos graxos essenciais. Outros
sinais da deficincia incluem demora na cura de ferimentos, reduzida
resistncia a infeces, alopecia (perda de cabelo) e trombocitopenia
(reduo do nmero de plaquetas, um componente essencial nos
processos de coagulao sangnea).
Os pontos de fuso dos cidos graxos elevam com o aumento do
comprimento da cadeia hidrocarbonada. Os cidos graxos saturados
com dez ou mais tomos de carbono so slidos em temperatura
ambiente. Todos os insaturados so lquidos nesta temperatura.
Uma das mais importantes reaes dos cidos graxos a
formao de steres:
RCOOH + ROH ' RCOOR + H 2 O
Essa reao reversvel; ou seja, sob condies favorveis um
ster de cido graxo pode reagir com a gua para formar um cido
graxo e um lcool.

237

238

Motta

Bioqumica

B. Triacilgliceris
Os triacilgliceris (triglicerdeos) so steres de cidos graxos
com o glicerol. A poro cido graxo presente nos steres lipdicos
designada grupo acila. Dependendo do nmero de grupos hidroxila
do glicerol esterificados com cidos graxos, os acilgliceris so
denominados monoacilgliceris, diacilgliceris e triacilgliceris.
Estes compostos so tambm conhecidos como mono, di e
triglicerdeos. So os lipdeos mais abundantes no transporte e
armazenamento de cidos graxos. Os cidos graxos presentes nos
triacilgliceris naturais podem ser iguais (triacilgliceris simples) ou
diferentes (triacilgliceris mistos).
CH2

CH

CH2

O C

O C

CH2

CH2

CH2

CH3

CH3

CH3

Glicerol
O
3 cidos graxos

Triacilglicerol

A maioria dos cidos graxos presentes nos triacilgliceris so


mono ou poliinsaturados em configurao cis. O ponto de fuso
desses compostos determinado, fundamentalmente, pela natureza
dos cidos graxos presentes na molcula.
Em animais, os triacilgliceris (geralmente chamados de
gorduras) tm vrios papis. Primeiro, so as principais formas de
armazenamento e transporte de cidos graxos. As molculas de
triacilgliceris armazenam energia mais eficientemente que o
glicognio por vrias razes:

Os triacilgliceris hidrofbicos so armazenados na forma de


gotculas de gordura no hidratadas em clulas do tecido adiposo.
O glicognio (outra molcula de armazenamento de energia) ligase com substancial quantidade de gua de hidratao (2 gramas
de gua por grama de glicognio). Assim, os triacilgliceris
armazenam uma quantidade muito maior de energia que o
glicognio hidratado.

As molculas de triacilgliceris so mais reduzidas que as dos


carboidratos e, desse modo, sua oxidao libera o dobro em
energia que a oxidao dos acares, ou seja, 38,9 kJg 1
(gordura) e 17,2 kJg 1 (acares).

Segunda importante funo da gordura o isolamento trmico


contra baixas temperaturas, pois uma pobre condutora de calor.
Como o tecido adiposo, com seu elevado contedo de triacilgliceris,
encontrado na camada subcutnea previne a perda de calor.
Nas plantas, os triacilgliceris constituem uma importante
reserva de energia em frutas e sementes. Como essas molculas
contm considerveis quantidades de cidos graxos insaturados
(exemplos, olico e linolico) so chamados leos vegetais. Sementes
ricas em leos incluem amendoim, milho, aafro e feijo de soja.
Abacate e azeitonas so frutas com alto contedo em gorduras.

9 Lipdeos e membranas

C. Ceras
As ceras so misturas complexas de lipdeos no-polares.
Funcionam como um revestimento de proteo em folhas, caules,
frutos e na pele de animais. Os steres so compostos de cidos
graxos de cadeia longa e lcoois de cadeia longa como constituintes
proeminentes da maioria das ceras. Exemplos bem conhecidos de
ceras incluem a cera de carnaba e a cera de abelha. O constituinte
principal da cera de carnaba o ster de melissil ceronato. O
triacontanoil palmitato o principal componente da cera de abelha.
As ceras tambm contm hidrocarbonetos, lcoois, cidos graxos,
aldedos e esteris (lcoois esterides).
D. Fosfolipdeos
Os fosfolipdeos so os principais componentes lipdicos
estruturais das membranas. Alm disso, vrios fosfolipdeos so
agentes emulsificantes (composto que promove a disperso coloidal
de um lquido em outro) e agentes surfactantes (composto que reduz a
tenso superficial de uma soluo, como detergentes). Os
fosfolipdeos exercem essas funes por serem molculas anfiflicas.
Apesar das diferenas estruturais, todos os fosfolipdeos so
constitudos de caudas apolares alifticas de cidos graxos e
cabeas polares que contm fosfato e outros grupos carregados ou
polares.
Quando em concentraes apropriadas, os fosfolopdeos
suspensos em gua se organizam em estruturas ordenadas na forma de
micelas ou bicamadas lipdicas (ver seo 9.3.A).
Existem dois tipos de fosfolipdeos: os glicerofosfolipdeos e as
esfingomielinas.
1. Glicerofosfolipdeos ou fosfoglicerdeos. So molculas que
contm um glicerol, dois cidos graxos de cadeia longa, um fosfato e
um lcool (exemplo, colina). So os principais componentes lipdicos
das
membranas
celulares.
O
cido
fosfatdico
(1,2diacilglicerol3fosfato) o composto, o precursor de outras
molculas de glicerofosfolipdeos, consiste de glicerol3fosfato,
cujas posies C1 e C2 so esterificadas com cidos graxos.

239

240

Motta

Bioqumica

(a)
O

(b)
O

O
1

H2 C

CH

HO

OH

O
1

CH2

Glicerol-3-fosfato

H2 C

CH

Cabea polar
(hidrfila)

CH2

Caudas apolares
(hidrofbicas)

(R1 ) (R2 )
Fosfatidato
Figura 9.2
Glicerofosfolipdeos. (a) Glicerol3fosfato e (b) fosfatidato. O fosfatidato
consiste de glicerol3fosfato com dois grupos acil graxo (R 1 e R 2 ) esterificado
nos grupos hidroxila em C1 e C2.

Os glicerofosfolipdeos so classificados de acordo com o lcool


esterificado ao grupo fosfato. Alguns dos mais importantes so:
fosfatidilcolina
(lecitina),
fosfatidiletanolamina
(cefalina),
fosfatidilglicerol e fosfatidilserina.
Os
cidos
graxos
frequentemente
encontrados
nos
glicerofosfolipdeos tem entre 16 e 20 tomos de carbono. Os cidos
graxos saturados ocorrem geralmente no C1 do glicerol. A posio C2
do glicerol freqentemente ocupada por cidos graxos insaturados.
Um derivado do fosfoinositol denominado fosfatidil4,5bifosfato
(PIP 2 ), encontrado em pequenas quantidades nas membranas e um
importante componente na transduo de sinal. O sistema do
fosfoinositdeo iniciado quando certos hormnios ligam-se aos
receptores especficos na superfcie externa das membranas
plasmticas, descrito no Captulo 12: Regulao do metabolismo
energtico.

9 Lipdeos e membranas

CH3

CH2

CH2

CH

OC

CH3

CH3

O
CH2

CH2

CH

O C

OC

NH3

CH2

CH2

CH2

Fosfatidiletanolamina

CH

CH2

Fosfatidilcolina

CH2

CH2

CH

CH2OH

OH

CH2

CH2

CH

O C

COO

NH3+

CH2

CH

CH2

Fosfatidilglicerol

Fosfatidilserina

Figura 9.3
Glicerofosfolipdeos comuns. Estruturas de quatro glicerofosfolipdeos mais comuns:
Fosfatidilcolina (lecitina), fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol e fosfatidilserina.

2.
Esfingomielinas.
As
esfingomielinas
diferem
dos
fosfoglicerdeos por conterem esfingosina (aminolcool) em lugar de
glicerol. Como as esfingomielinas tambm so classifcadas como
esfingolipdeos, suas estruturas e propriedades so descritas mais
adiante.
(a)

(b)

Fosfocolina
O

OH
HO

CH
CH

Resduo de
palmitato

CH
+

CH 2

Resduo
de serina

NH3

CH
(CH2 )12
CH3
Esfingosina

CH3

CH2

CH

CH

CH

NH

CH

CH3

CH3

O
HO

CH2

CH2

Grupo acila

(H2 C)12 R
CH3
Esfingomielina

Figura 9.4
Estrutura da esfingosina e da esfigomielina. (a) A estrutura da esfingosina derivada da serina e
palmitato. (b) A ligao de um segundo grupo acila e uma fosfatidilcolina (ou fosfoetanolamina) produz
uma esfingomielina.

241

242

Motta

Bioqumica

E. Esfingolipdeos
Os esfingolipdeos so o segundo maior componente lipdico das
membranas animais e vegetais. As molculas de esfingolipdeos
contm um aminolcool de cadeia longa. Em animais, o aminolcool
a esfingosina e nas plantas a fitoesfingosina. As molculas mais
simples desse grupo so as ceramidas, derivadas de cidos graxos
ligados ao grupo amino (NH 2 ) no C2 da esfingosina. As ceramidas
so precursoras das esfingomielinas e glicoesfingolipdeos.
1. Esfingomielina. O grupo lcool primrio da ceramida
esterificado
ao
grupo
fosfrico
da
fosfocolina
ou
da
fosfoetanolamina. A esfingomielina encontrada na maioria das
membranas plasmticas das clulas animais. Como o nome sugere, a
esfingomielina est presente em grande quantidade na bainha de
mielina que reveste e isola os axnios em neurnios. As suas
propriedades isolantes facilitam a rpida transmisso dos impulsos
nervosos.
2. Glicoesfingolipdeos. As ceramidas so tambm precursoras
dos glicoesfingolipdeos (ou glicolipdeos). Nesses compostos, os
monossacardeos, dissacardeos ou oligossacardeos esto ligados por
ligao Oglicosdica. Os glicoesfingolipdeos no contm grupos
fosfato e so eletricamente neutros. As classes mais importantes dos
gliceroesfingolipdeos so os cerebrosdeos, os sulfatdeos e os
gangliosdeos.

Cerebrosdeos. So esfingolipdeos cujas cabeas polares


consistem
de
um
resduo
de
monossacardeo.
Os
galactocerebrosdeos, o exemplo mais comum dessa classe, so
encontrados predominantemente nas clulas das membranas do
crebro.
HOCH2
HO
H

O
H
H

OH

CH2

OH
CH

CH

CH

NH

CH

(H2 C)12

H
OH

CH3
Um cerebrosdeo

Sulfatdeos. So galactocerebrosdeos que contm um grupo


sulfato esterificado na posio 3 do acar. Os sulfatdeos esto
negativamente carregados em pH fisiolgico.

Gangliosdeos. So os glicoesfingolipdeos que possuem


oligossacardeos com um ou mais resduos de cido silico (cido

9 Lipdeos e membranas

Nacetilneuramnico). Os nomes dos gangliosdeos incluem letras


e nmeros subscritos. As letras M, D e T indicam que a molcula
contm um, dois ou trs resduos de cido silico,
respectivamente. Os nmeros designam a seqncia de acares
ligados a ceramida. Os gangliosdeos G M1, G M2 e G M3 so os mais
conhecidos. Os gangliosdeos so componentes das membranas da
superfcie celular.
CH2 OH
H

O
H3 C

NH
H

CHOH
O

CHOH
H

HO

HOCH2

COO

CH2 OH

H HO H
H

O
H

O
H
HO

O
H

O
H
OH
H

CH2

HO
OH CH

CH

CH

NH

CH

(H2 C)12

CH3
Um gangliosdeo

Os glicoesfingolipdeos podem atuar como receptores de certas


toxinas proticas bacterianas, como as que causam clera, ttano e
botulismo. Algumas bactrias tambm ligam-se aos receptores
glicolipdicos, exemplo E. coli, Streptococcus pneumoniae e
Neisseria gonorrhoeae, agentes causadores de infeces urinrias,
pneumonia e gonorria, respectivamente.

243

Bioqumica

Triglicerdeos

Glicerofosfolipdeos

Esfingolipdeos
Esfingomielinas

cido Graxo

Glicoesfingolipdeos

cido Graxo

cido Graxo

cido Graxo
P

lcool

Esfingosina

cido Graxo

Esfingosina

Glicerol

Motta

Glicerol

244

cido Graxo
P

cido Graxo

lcool

Acar

Fosfolipdeos
Figura 9.5
Representao das principais classes de lipdeos. Acar = mono ou oligossacardeo, P =
grupo fosfato.

F. Doenas do armazenamento de esfingolipdeos


(esfingolipidoses)
So causadas por defeitos hereditrios de enzimas necessrias
para a degradao dos esfingolipdeos nos lisossomas e provocam o
acmulo desses compostos nas clulas. A mais comum a doena de
TaySachs, causada pela deficincia da hexoaminidase A, a enzima
que degrada o gangliosdeo G M2 . Como a clula acumula essa
molcula, ocorre uma deteriorao neurolgica. Os sintomas da
doena (cegueira, fraqueza muscular e retardo mental) geralmente
aparecem alguns meses aps o nascimento. No existe terapia para as
doenas de armazenamento dos esfingolipdeos e, portanto, so
fatais.
Quadro 9.1. Doenas do armazenamento de esfingolipdeos
Esfingolipdeo
acumulado

Enzima deficiente

Cegueira, fraqueza
muscular, retardo mental

Gangliosdeo G M 2

Hexoaminidase A

Doena de Gaucher

Retardo mental,
esplenomegalia,
hepatomegalia, eroso de
ossos longos

Glicocerebrosdeo

Glicosdeo

Doena de Krabbe

Desmielinizao, retardo
metal

Galactocerebrosdeo

Galactosidase

Doena de Niemann Pick

Retardo mental

Esfingomielina

Esfingomielinase

Doena

Sintoma

Doena de Tay Sachs

G. Isoprenides
Os isoprenides so um vasto grupo de biomolculas que contm
unidades estruturais repetidas de cinco carbonos conhecidas como
unidades de isoprenos. Os isoprenides so sintetizados a partir do
isopentenil pirofosfato formado do acetilCoA.
Os isoprenides consistem de terpenos e esterides. Os terpenos
so um enorme grupo de substncias encontradas em leos essenciais

9 Lipdeos e membranas

das plantas. Os esterides so derivados do anel hidrocarbonado do


colesterol.
1. Terpenos. Os terpenos so classificados de acordo com o
nmero de resduos de isopreno que contm. Os monoterpenos so
compostos de duas unidades de isopreno (10 tomos de carbono). O
geraniol um monoterpeno encontrado no leo de gernio. Terpenos
que contm trs isoprenides (15 carbonos) so denominados
sesquiterpenos. Farnesene, um importante constituinte do leo de
citronela (uma substncia usada em sabes e perfumes), um
sesquiterpeno. Fitol, um lcool vegetal, um exemplo de diterpenos,
molculas compostas de quatro unidades de isoprenos. O esqualeno,
encontrado em grande quantidade no leo de fgado de tubares,
azeite de oliva e levedura, um exemplo de triterpenos. (Esqualeno
um intermedirio da sntese do esterides). Os carotenides, o
pigmento laranja encontrado em muitas plantas, so tetraterpenos
(molculas compostas de oito unidades de isopreno). Os carotenos
so membros hidrocarbonados desse grupo. Os politerpenos so
molculas de elevado peso molecular composto de centenas ou
milhares de unidades de isopreno. A borracha natural um
politerpeno composto de 3.000-6.000 unidades de isopreno.
CH3
H3C

H
C

CH3

H2C

CH2

CH3

Unidade isopreno

Isopreno

CH3
H2C

O
CH2

CH2 O

O
O

O
-

Isopentenil pirofosfato

Vrias biomolculas importantes so formadas por componentes


no-terpenos ligados a grupos isoprenides. Exemplos incluem
vitamina E (-tocoferol), ubiquinona, vitamina K e algumas
citocinas.
O
CH3

H3 CO

CH3
(CH2

H3 CO
O

CH

CH2 )10 H

Unidades isoprenides
Ubiquinona

2. Esterides. So complexos derivados dos triterpenos


encontrados em clulas eucariticas e em algumas bactrias. Cada
esteride composto de quatro anis no-planares fusionados, trs
com seis carbonos e um com cinco. Distinguem-se os esterides pela
localizao de ligaes duplas carbono-carbono e vrios substituintes
(exemplo, grupos hidroxil, carbonil e alquila).
O colesterol, uma importante molcula dos tecidos animais, um
exemplo de um esteride. Alm de ser um componente essencial das
membranas biolgicas, o colesterol um precursor na biossntese de
todos os hormnios esterides, vitamina D e sais biliares. O

245

246

Motta

Bioqumica

colesterol geralmente armazenado nas clulas como ster de cido


graxo. A reao de esterificao catalisada pela enzima acilCoA:colesterol aciltransferase (ACAT), localizada na face
citoplasmtica do retculo endoplasmtico.
CH3
H3 C

CH

CH2

CH2

CH2

CH3
CH
CH3

H3 C

HO
Colesterol

Os glicosdeos cardacos, molculas que aumentam a intensidade


da contrao do msculo cardaco, esto entre os mais interessantes
derivados dos esterides. Os glicosdeos so acetais contendo
carboidrato. Apesar de vrios glicosdeos cardacos serem
extremamente txicos (exemplo, ouabana, obtida de sementes da
planta Strophantus gratus), outros apresentam propriedades
medicinais. Por exemplo, digitalis, um extrato de folhas secas da
Digitalis purprea (planta ornamental dedaleira), um estimulador
da contrao do msculo cardaco. A digitoxina, o principal
glicosdeo cardiotnico no digitalis, usado no tratamento da
insuficincia cardaca por obstruo dos vasos. Em concentraes
acima das teraputicas, a digitoxina extremamente txica. Tanto a
ouabana como a digitoxina inibem a (Na + K + )ATPase.

9.2 Lipoprotenas
Os triacilgliceris, o colesterol e os steres de colesteril so
insolveis em gua e no podem ser transportados na circulao
como molculas livres. Em lugar disso, essas molculas se agregam
com os fosfolipdeos e protenas anfipticas para formar partculas
esfricas macromoleculares conhecidas como lipoprotenas. As
lipoprotenas tm ncleo hidrofbico contendo triacilgliceris e
steres de colesteril, e camada superficial externa hidroflica que
consiste de uma camada de molculas anfipticas: colesterol,
fosfolipdeos e protenas (apoprotenas ou apolipoprotenas). As
lipoprotenas tambm contm vrias molculas antioxidantes solveis
em lipdeos (exemplo, -tocoferol e vrios carotenides). (Os
antioxidantes destroem os radicais livres, como o radical superxido
e radical hidroxila). As lipoprotenas so classificadas de acordo com
sua densidade:
1. Quilomcrons. Transportam os lipdeos da dieta por meio da
linfa e sangue do intestino para o tecido muscular (para obteno de
energia por oxidao) e adiposo (para armazenamento). Os
quilomcrons esto presentes no sangue somente aps a refeio. Os
quilomcrons remanescentes ricos em colesterol que j perderam a
maioria de seu triacilgliceris pela ao da lipoprotenalipase
capilar so captados pelo fgado por endocitose.

9 Lipdeos e membranas

2. Lipoprotenas de densidade muito baixa (VLDL). So


sintetizadas no fgado. Transportam triacilgliceris e colesterol
endgenos para os tecidos extrahepticos. No transporte das VLDL
atravs do organismo, os triacilgliceris so hidrolizados
progressivamente pela lipoprotenalipase at cidos graxos livres e
glicerol. Alguns cidos graxos livres retornam a circulao, ligados
albumina, porm a maior parte transportada para o interior das
clulas.
Eventualmente,
as
VLDL
remanescentes
triacilgliceroldepletados so captadas pelo fgado ou convertidas em
lipoprotenas de densidade baixa (LDL). A VLDL precursora da
IDL (lipoprotena de densidade intermediria), que por sua vez
precursora da LDL.
3. Lipoprotenas de densidade baixa (LDL). As partculas de
LDL so formadas a partir das VLDL. As LDL enriquecidas de
colesterol e steres de colesteril transportam esses lipdeos para os
tecidos perifricos. A remoo de LDL da circulao mediada por
receptores de LDL (stios especficos de ligao) encontrados tanto
no fgado como em tecidos extrahepticos. Um complexo formado
entre a LDL e o receptor celular entra na clula por endocitose
(engolfamento). As lpases dos lisossomos e proteases degradam as
LDL. O colesterol liberado incorporado nas membranas celulares
ou armazenado como steres de colesteril. A deficincia de receptores
celulares para as LDL desenvolve hipercolesterolemia familiar, na
qual o colesterol acumula no sangue e depositado na pele e artrias.
LDL

Colesterol

Receptor
LDL

Clula

4. Lipoprotenas de densidade alta (HDL). As HDL removem o


colesterol do plasma e dos tecidos extrahepticos, transportando-o
para o fgado. Na superfcie heptica, a HDL se liga ao receptor SRB1 e transfere o colesterol e os steres de colesteril para o interior do
hepatcito. A partcula de HDL com menor contedo de lipdeos
retorna ao plasma. No fgado o colesterol pode ser convertido em sais
biliares, que so excretados na vescula. O risco de aterosclerose
(depsito de colesterol nas artrias) diminui com a elevao dos
nveis de HDL e aumenta com a elevao da concentrao das LDL.

247

248

Motta

Bioqumica

HDL
Transportador/
flipase

Clula

Tabela 9.2 Classificao, propriedades e composio das lipoprotenas humanas.


Parmetro

Quilomcrons

VLDL

LDL

HDL

<0,95

0,951,006

1,019 1,063

1,063 1,21

>70

30 80

18 28

5 12

Mobilidade eletrofortica

Origem

Pr

Composio (% do peso)
Colesterol livre

Densidade (g/mL)
Dimetro (nm)

58

13

Colesterol esterificado

11 14

39

13

Fosfolipdeos

20 23

17

28

Triglicerdeos

84

44 60

11

Protenas

20

50

Local de sntese

Intestino

4 11
Intestino, fgado

Intravascular

Intestino, fgado

9 Lipdeos e membranas

Intestino

Fgado

Lipdios da dieta

Triacilglicerol
Colesterol
ster de colesteril

Quilomcrons

VLDL

Quilomcrons
remanescentes

IDL

LDL

HDL

Colesterol
Triacilglicerol

ster de
colesteril

Tecidos perifricos
Figura 9.6
Viso geral do metabolismo das lipoprotenas. Os quilomcrons formados nas clulas
intestinais transportam os triacilgliceris para os tecidos perifricos, incluindo o msculo
e o tecido adiposo. Os quilomcrons remanescentes entregam os steres de colesteril
para o fgado. As VLDL so formadas no fgado e transportam os lipdeos endgenos
para os tecidos perifricos. Quando as VLDL so degradas (via IDL) o colesterol
esterificado com cidos graxos provenientes do HDL para tornar-se LDL, que transporta
o colesterol para os tecidos extra-hepticos. A HDL envia o colesterol dos tecidos
perifricos para o fgado.

A. Lipoprotenas e aterosclerose
Aterosclerose

caracterizada
por
depsitos
lipdicos
irregularmente distribudos na camada ntima de artrias de grosso e
mdio calibres, provocando o estreitamento das luzes arteriais e
evoluindo, por fim, para fibrose e calcificao. A limitao do fluxo
sangneo responsvel pela maioria dos sintomas clnicos.
Os fatores de risco para a doena arterial coronria so capazes
de lesar o endotlio vascular causando disfuno endotelial. A partir
do dano vascular, ocorre a expresso de molculas de adeso das
clulas vasculares (VCAM1) e protena quimiottica de moncitos
(MCP1) que atraem a entrada de moncitos em direo ao espao
intimal. Os moncitos que se transformam em macrfagos sob a
influncia do fator estimulador de colnias de macrfagos/moncitos
(MCSF) no espao intimal englobaro lipoprotenas modificadas
(predominantemente LDL oxidadas), originando as clulas
espumosas.

249

250

Motta

Bioqumica

Quadro 9.1 Fatores de risco para a doena arterial coronria

So parmetros que parecem guardar relao de


causa e efeito, com a doena arterial coronria.
Fatores de risco so atributos associados a um
aumento substancial da suscetibilidade individual
para a doena coronria, e em especial, para o seu
aparecimento precoce. Os principais so:
Tabagismo
Hipertenso arterial sistmica (140/90 mmHg)

Obesidade (IMC >25 kg/m )


Sedentarismo
Idade (45 anos homens e 55 anos mulheres)
Histria familiar precoce de ateroscleorose (parentes
de primeiro grau <55 anos homens e <65 anos
mulheres)
Fatores

de

risco

emergentes:

lipoprotena

(a),

Hipercolesterolemia >200 mg/dL (LDL-C >160 mg/dL)

homocistena,

HDL-C baixo (<40 mg/dL)

PA1 e tPA), fatores proinflamatrios (protena C

Diabetes melito

reativa), glicemia de jejum alterada e aterosclerose

Hipertrigliceridemia (>200 mg/dL)

fatores

hemostticos

(antgeno

do

subclnica.

Danos posteriores ocorrem quando as clulas endoteliais e da


musculatura lisa iniciam a secreo de alguns peptdios pequenos,
como o fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF),
interleucina1 (IL1) e fator de necrose tumoral (TNF), que
estimulam, perpetuam e ampliam o processo, levando formao da
placa aterosclertica. Esta constituda por elementos celulares,
componentes da matriz extracelular e ncleo lipdico. As placas
podem ser divididas em estveis ou instveis.

9.3 Membranas biolgicas


Muitas das propriedades dos organismos vivos (exemplo,
movimento, crescimento, reproduo e metabolismo) dependem,
direta ou indiretamente, das membranas celulares. As membranas
biolgicas envolvem todas as clulas como tambm separam as
organelas no seu interior. No entanto, as membranas biolgicas no
so meramente barreiras passivas; elas executam uma grande
variedade de funes complexas. Algumas protenas presentes nas
membranas atuam como bombas seletivas que controlam o transporte
de ons e pequenas molculas para dentro e para fora da clula e
tambm geram gradientes de prtons essenciais para a produo de
ATP pela fosforilao oxidativa. Por meio do controle dos sistemas
de transporte seletivo, as concentraes de substncias em
compartimentos celulares so moduladas, excercendo, assim,
influncia sobre as vias metablicas. Receptores proticos especficos
nas membranas reconhecem sinais extracelulares (hormnios,
reguladores de crescimento e de metabolismo) e comunica-os para o
interior das clulas.
As membranas biolgicas tpicas possuem cerca de 25-50% de
lipdeos e 50-75% de protenas. No conceito atualmente aceito,
denominado modelo do mosaico fluido proposto por Singer e
Nicolson em 1972, a membrana uma bicamada lipdica constituda
por uma mistura complexa de fosfolipdeos (glicerofosfolipdeos),
esteris e esfingolipdeos cujas regies no-polares so orientadas
para o centro da bicamada, e os grupos polares para o exterior. As
protenas esto embebidas na bicamada lipdica e determinam as
funes biolgicas da membrana.

9 Lipdeos e membranas

Como cada espcie de clula e organela possui suas prprias


funes, os componentes lipdicos e proticos das membranas
tambm so nicos para cada uma delas. Assim, as membranas so
constitudas por diferentes tipos de lipdeos e de protenas em
combinaes que variam consideravelmente. Por exemplo, a bainha
de mielina que envolve certos nervos, contm relativamente pouca
protena. Em contraste, a membrana mitocondrial interna rica em
protenas, refletindo seu elevado grau de atividade metablica. A
membrana plasmtica dos eritrcitos tambm excepcionalmente rica
em protenas.
Apesar da diversidade da composio e de funes das
membranas, elas compartilham certos atributos fundamentais:
1. As membranas so estruturas em forma de lmina com duas
molculas de espessura que circundam diferentes compartimentos. A
espessura da maioria das membranas 6nm a 10nm.
2. As membranas consistem principalmente de lipdeos e
protenas, mas tambm contm carboidratos tais como, glicoprotenas
e glicolipdeos.
3. Os lipdeos das membranas so molculas relativamente
pequenas com pores hidroflicas e hidrofbicas. Quando
misturados em gua esses lipdeos espontaneamente formam trs
tipos de agregados: micelas, bicamadas e lipossomos.
4. Protenas especficas mediam distintas funes das
membranas. Atuam como bombas, canais, receptores, enzimas e
transdutores de energia. As protenas das membranas esto embebidas
nas bicamadas lipdicas, que criam um meio apropriado para a sua
ao.
5. As membranas so associaes no covalentes. As molculas
de protenas e as de lipdeos esto unidas por interaes nocovalentes.
6. A maioria das membranas so eletricamente polarizadas, cujo
interior negativa [tipicamente 60 milivolts (mV)]. O potencial de
membrana exerce papel fundamental no transporte, na converso de
energia e na excitabilidade.
A. Lipdeos da membrana
Os principais lipdeos de membranas so: gliceroesfingolipdeos,
esfingolipdeos, glicoesfingolipdeos e colesterol. As vrias
membranas celulares de diferentes tcidos tm distintas composies
lipdicas. Os gliceroesfingolipdeos e esfingolipdeos so molculas
anfipticas (caudas hidrofbicas e cabeas hidroflicas) que
constituem os lipdeos mais comuns das membranas celulares. Os
cidos graxos presentes nos gliceroesfingolipdeos e esfingolipdeos
das biomembranas so alifticos de cadeia longa e, em geral, com
C16 e C18. Cerca de 50% dos cidos graxos presentes nas membranas
so insaturados, com uma ou mais duplas ligaes carbono-carbono
na configurao cis.
Os glicoesfingolipdeos tm um acar ligado e no contm
fosfato e so no-inicos. As classes mais importantes so: os
cerebrosdeos, os sulfatdeos e os gangliosdeos.

251

252

Motta

Bioqumica

O colesterol no forma bicamadas por si mesmo mas compe


cerca de 30% do contedo lipdico das membranas biolgicas. O
colesterol modifica a fluidez da membrana e participa do controle da
microestrutura das membranas plasmticas.
Grupamento cabea polar

Caudas apolares
hidrocarbonadas

Figura 9.7
Representao
membrana. O
hidrocarbonadas
saturados (S) ou

S S

esquemtica de fosfolipdeos ou outros lipdeos de


grupamento cabea polar hidroflico, e as caudas
so hidrofbicas. Os cidos graxos nas caudas so
insaturados (I).

Quando em concentraes adequadas, as molculas anfipticas


so suspensas em gua e espontaneamente so agregadas em
estruturas esfricas chamadas micelas. As caudas hidrofbicas
hidrocarbonadas ficam voltadas para o interior excluindo a gua,
enquanto os grupos das cabeas polares (grupos hidroflicos) ficam
no lado de fora da esfera para interagir com a gua permitindo a
solvatao.

Figura 9.8
Micela constituda por agregado de lipdeos de cauda dupla. Os
grupamentos cabea polares esto em contato com a gua, enquanto as
caudas hidrofbicas hidrocarbonadas esto protegidas da gua.

Quando em concentraes apropriadas, os lipdeos anfipticos


organizam-se espontaneamente na gua para formar bicamadas
lipdicas, nas quais duas camadas de lipdeos formam uma lmina

9 Lipdeos e membranas

bimolecular. As pores hidrofbicas em cada lmina, excludas de


gua, interagem entre si. Essa propriedade dos fosfolipdeos (e de
outras molculas lipdicas anfipticas) estabelece a estrutura bsica
de todas as membranas biolgicas.
Aquoso
Hidroflico

Hidrofbico

Hidroflico
Aquoso
Figura 9.9
Representao esquemtica de bicamadas lipdicas. As estruturas
anfiflicas contm cabeas polares ligadas a caudas sinuosas hidrofbicas. As
caudas de cidos graxos insaturados esto dobradas, resultando em maior
espaamento entre os grupamentos cabea polares e, portanto, maior espao
para movimento.

Os lipdeos das membranas so responsveis por vrias outras


caractersticas importantes das membranas biolgicas:
1. Fluidez da membrana. Por no estarem ligadas
covalentemente, existe liberdade para as molculas individuais dos
lipdeos e das protenas se movimentarem lateralmente no plano da
membrana. A rpida difuso lateral de molculas de lipdeos nas
bicamadas , aparentemente, responsvel pelo funcionamento
apropriado de muitas molculas proticas. (O movimento de
transverso no catalisado de um lado para outro flip flop dos
glicerofosfolipdeos e esfingolipdeos nas bicamadas extremamente
raro). A fluidez da membrana principalmente determinada pela
percentagem de cidos graxos insaturados presentes nas molculas de
fosfolipdeos. Altas concentraes de cadeias insaturadas resultam
em membranas mais fluidas. O colesterol modula a estabilidade da
membrana sem comprometer grandemente a fluidez por conter
elementos estruturais rgidos (sistema de anis esterides) e flexveis
(caudas de hidrocarbonetos) que interferem na movimentao das
cadeias laterais de cidos graxos.
2. Permeabilidade seletiva. Devido a sua natureza hidrofbica,
as cadeias hidrocarbonadas nas bicamadas lipdicas organizam uma
barreira virtualmente impenetrvel para o transporte de substncias
inicas e polares. Protenas membranas especficas regulam o
movimento dessas substncias para dentro e para fora das clulas.
Cada membrana exibe sua prpria capacidade de transporte ou
seletividade baseado em seus componentes proticos.
3. Capacidade de auto-selar. Quando as bicamadas lipdicas so
rompidas, elas imediata e espontaneamente so reconstitudas porque
uma quebra na camada lipdica expem as cadeias de hidrocarbonetos
hidrofbicas gua. Como a brecha nas membranas celulares podem
ser letais, a propriedade de reconstituio crtica.

253

254

Motta

Bioqumica

4. Assimetria. As membranas biolgicas so assimtricas; ou


seja, os componentes lipdicos das duas lminas da bicamada so
diferentes. Por exemplo, a membrana dos eritrcitos humanos
possuem substancialmente mais fosfatidilcolina e esfingomielina na
superfcie externa. A maior parte da fosfatidilserina e
fosfatidiletanolamina da membrana est na superfcie interna. A
assimetria da membrana fundamental pois cada lado da membrana
est exposta a diferentes compartimentos (intracelular e extracelular,
respectivamente). A assimetria tem lugar durante a sntese de
membrana, j que a biossntese dos fosfolipdeos ocorre somente em
um lado da membrana. Os componentes proticos das membranas
tambm exibem considervel assimetria com distintos domnios
funcionais diferentes dentro da membrana e as faces citoplasmticas
e extracelulares da membrana.
B. Protenas de membrana
A maioria das funes associadas com as membranas biolgicas
necessita de molculas de protenas. As protenas de membrana so
classificadas de acordo com seus modos de associao com a
bicamada lipdica em protenas integrais, protenas perifricas e
protenas ligadas a lipdeos. Grande parte dessas molculas so
componentes estruturais, enzimas, receptores de hormnios ou
protenas transportadoras.
Protena
integral

Protena
perifrica

Protena
ligada a lipdeos

Figura 9.10
Protenas de membrana. Representao esquemtica de protena integral
firmemente associada membrana por interaes hidrofbicas, protena
perifrica ligada por interaes hidrofbicas e pontes de hidrognio e
protena ligada a lipdeos por meio de cauda hidrofbina incorporada
bicamada.

1. Protenas integrais (intrnsicas). So protenas firmemente


associadas s membranas por meio de ligaes hidrofbicas. Essas
molculas s podem ser separadas pelo rompimento da membrana por
agentes que interferem nas interaes hidrofbicas, como solventes
orgnicos, desnaturantes ou detergentes.
As duas mais importantes protenas integrais de membranas dos
eritrcitos so a glicoforina e a protena de canais de nions. A
glicoforina uma glicoprotena com 131 aminocidos. Cerca de 60%
de seu peso so carboidratos. Certos grupos oligossacardeos da
glicoforina constituem os antgenos dos grupos sangneos ABO e
MN. Entretanto, apesar de todas as pesquisas, as funes da
glicoforina ainda so desconhecidas. A protena de canais de nions

9 Lipdeos e membranas

composta de duas subunidades idnticas, cada uma consistindo de


929 aminocidos. Essa protena exerce um importante papel no
transporte de CO 2 no sangue. O on HCO 3 formado a partir do CO 2
pela ao da anidrase carbnica, difunde atravs da membrana do
eritrcito por meio dos canais de nions em troca do on Cl . A troca
de Cl por HCO 3 , chamada desvio do cloreto, preserva o potencial
eltrico da membrana dos eritrcitos.
2. Protenas perifricas (extrnsicas). So protenas ligadas s
membranas por meio de interaes eletrostticas e pontes de
hidrognio. Algumas protenas perifricas interagem diretamente com
a camada bilipdica. Normalmente, as protenas perifricas podem ser
liberadas das membranas por procedimentos relativamente simples,
tais como, uso de solues salinas concentradas ou mudanas de pH
que alteram as interaes no-covalentes entre as cadeias laterais de
aminocidos.
As protenas perifricas de membranas dos eritrcitos, composta
principalmente de espectrina, anquirina e banda 4.1, esto envolvidas
na preservao da forma de disco bicncavo do eritrcito normal.
Essa forma permite a rpida difuso de O 2 para as molculas de
hemoglobina, posicionando-as a uma distncia menor do que 1 m da
superfcie celular. A espectrina, uma protena filamentosa longa,
um tetrmero, composto de dois dmeros , que ligam a anquirina e
a banda 4.1. A anquirina um peptdeo globular de grande tamanho
que liga a espectrina protena de canal inico. Essa uma conexo
entre o citoesqueleto dos eritrcitos e sua membrana plasmtica. A
banda 4.1 liga-se tanto a espectrina como a filamentos actina (um
componente citoesqueltico encontrado em muitos tipos de clulas).
Como a banda 4.1 tambm se liga a glicoforina, essa tambm est
associada ao citoesqueleto e a membrana.
3. Protenas ligadas a lipdeos. So protenas de membranas que
contm lipdeos ligados covalentemente. Os lipdeos ligados so
responsveis por uma ncora hidrofbica, a qual se insere no interior
da bicamada lipdica e conserva a protena na superfcie da
membrana. A ligao das protenas lipdeos ocorrem de trs modos:
(a) miristoilao: o cido mirstico est unido a protena de
membrana por ligao amida com o grupo -amino da glicina
aminoterminal; (b) palmitolilao: o cido palmtico est unido por
ligao tioster a um resduo de cistena e (c) prenilao: os lipdeos
esto ligados s protenas por unidades de isopreno.

255

256

Motta

Bioqumica

(a)

O
HN
C

CH2
O

(b)

(c)

O
NH

CH

O
NH

CH2

CH2

CH

CH3

O
Figura 9.11
Ancoramento de protenas membrana. (a) Miristoilao. (b) Palmitoilao. (c)
Prenilao. O lipdeo ncora um grupo farnesil com 15 carbonos.

Muitos eucariotos, particularmente os protozorios parasitas,


contm protenas ligadas pelo C-terminal a um grupo
lipdeocarboidratos, conhecido como glicosilfosfatidilinositol (GPI).
A estrutura do grupo GPI consiste de um fosfatidilinositol, um
tetrassacardeo e uma fosfoetanolamina.

9 Lipdeos e membranas

O
O
O
NH

CH

O
NH

CH2

CH2

HO
H

OH

H
O

OH

HO

O
CH2

CH2

CH2

Figura 9.12
Protenas ligadas a glicosilfosfatidilinositol. Os hexgonos representam diferentes monossacardeos
que variam com a identidade da protena. Os resduos de cidos graxos do grupo fosfatidilinositol
tambm variam consideravelmente.

C. Glicoprotenas de membrana
Como os lipdeos de membrana, as protenas de membrana esto
distribudas assimetricamente entre as bicamadas. Por exemplo,
algumas protenas ligadas membrana voltadas para o interior (as
protenas ligadas ao glicosilfosfatidilinositol so excees). A face
exterior da membrana nas clulas de vertebrados rica em
glicoesfingolipdeos (cerebrosdeos e gangliosdeos) e glicoprotenas.
As cadeias de oligossacardeos (polmeros de resduos de
monossacardeos) presentes nas glicoprotenas e que esto
covalentemente ancoradas aos lipdeos e as protenas de membrana
envolvem as clulas como uma cobertura em plumagem.
Vrias cadeias de carboidratos esto ancoradas s protenas como
oligossacardeos N-ligados ou O-ligados. Em muitas protenas

257

258

Motta

Bioqumica

solveis, particularmente as extracelulares, os oligossacardeos


ajudam a estabilizar a protena sob condies extracelulares hostis.
Os resduos de monossacardeo podem ligar-se uns aos outros de
diferentes modos e em seqncias potencialmente ilimitadas. Essa
diversidade, presente em glicolipdeos e glicoprotenas, uma forma
de informao biolgica. Por exemplo, o sistema ABO de grupos
sanguneos baseado na diferena na composio de carboidratos dos
glicolipdeos e das glicoprotenas nos eritrcitos. Muitas outras
clulas parecem reconhecer uma a outra baseado nos carboidratos
existentes em suas superfcies.
(a)

CH2 OH
H
HO

O
H
OH

NH

O
NH

NH
CH2

CH
C

Asn
O

C
CH3

(b)

CH2 OH
HO
H

O
H

NH

OH

NH

CH2

CH
C

Ser
O

CH3
Figura 9.13
Ligao oligossacardica em glicoprotenas. (a) Nos oligossacardeos
Nligados, o resduo N acetilglicosamina est ligado por ligao glicosdica
protena via o N da amida de resduos especficos de Asn. Os oligossacardeos
tipicamente contm vrios resduos monossacardicos adicionais ligados em
seqncia a um dos grupos OH da glicosamina. (b) Nos oligossacardeos
O ligados, a Nacetilgalactosamina est covalentemente ligada a tomos de O
de cadeias laterais de resduos especficos de Ser ou Thr.

9.4 Transporte atravs de membranas


As membranas esto envolvidas em um grande nmero de
funes nas clulas vivas. Entre as mais importantes esto o (a)
transporte de molculas e ons para o interior e exterior das clulas e
de organelas e (b) ligao de hormnios e outras biomolculas.
O fluxo de ons e molculas altamente regulado para atingir as
necessidades metablicas de cada clula. Por exemplo, a membrana
plasmtica regula a entrada de molculas nutrientes e a sada de
produtos de excreo, alm das concentraes intracelulares de ons.
Como as bicamadas lipdicas so geralmente impermeveis a ons e a
molculas polares, o trnsito mediado por protenas integrais que
reconhecem e transportam esses compostos: canais de membranas,
transportadores passivos (movem substratos a favor do seu gradiente
de concentrao) e transportadores ativos (movem o substrato contra
seu gradiente de concentrao). Vrios exemplos dessas estruturas,

9 Lipdeos e membranas

chamadas transportadores, carreadores, transladadores ou permeases,


sero descritas.
Os mecanismos biolgicos de transporte so classificados de
acordo com suas propriedades cinticas e com a necessidade ou no
de energia. Os diferentes sistemas de transporte so realizados por
protenas integrais de membrana (porinas, canais inicos,
transportadores passivos e transportadores ativos), tambm como por
exocitose e endocitose.
A. Sistemas de transporte
O transporte de substratos atravs das membranas executada
por protenas integrais de membrana que se ligam a um substrato de
um lado da membrana, conduzem-no atravs da bicamada e liberamno no outro lado. Os transportadores diferem quanto ao nmero de
solutos (substratos) transportados e na direo em cada um
transportado. O transporte pode ser classificado como:

Uniporte (transporte nico) envolve o movimento de uma nica


molcula de soluto de cada vez. A famlia de transportadores de
glicose constituda de cinco membros, denominados GLUT-1 a
GLUT-5 exemplifica o uniporte.

Simporte (cotransporte) transporta simultaneamente duas


molculas diferentes de soluto na mesma direo. A glicose,
aminocidos, muitos ons e outros nutrientes presentes no filtrado
dos tbulos proximais dos rins so quase completamente
reabsorvidos por processos de simporte.

Antiporte (contratransporte) transporta simultaneamente duas


molculas diferentes de soluto em direes opostas.

Uniporte

Simporte

Antiporte

Figura 9.14 Sistemas de transporte uniporte, simporte e antiporte.

A classificao no descreve se os processos necessitam energia


(transporte ativo) ou independentes de energia (transporte passivo).

259

260

Motta

Bioqumica

Difuso
simples

Difuso
facilitada

Transporte
ativo
ATP

ADP + Pi

Figura 9.15
Transporte de soluto atravs de membranas.

B. Porinas
As porinas so as mais simples transportadoras de membrana.
Esto localizadas nas membranas externas das bactrias,
mitocndrias e cloroplastos. So protenas intrnsicas de membrana
que permitem a livre difuso de molculas de at 1000 D a favor do
seu gradiente de concentrao. Todas as porinas conhecidas so
trmeros proticos nos quais cada subunidade forma um domnio de
16 ou 18 fitas de barril .
As membranas externas de algumas bactrias so ricas em
porinas que permitem a passagem de ons ou pequenas molculas de
um lado da membrana para o outro. As porinas so seletivas a
solutos; atuam como peneira permanentemente aberta.
As aquaporinas so protenas integrais que formam canais para a
passagem de molculas de gua atravs das membranas plasmticas.
Atuam na reabsoro, reteno, secreo e captao de gua em
vrios tecidos. Existem no mnimo dez aquaporinas nos mamferos
com seis segmentos helicoidais que esto envolvidas em diferentes
funes.
C. Canais inicos
As membranas plasmticas das clulas animais contm muitos
canais proticos altamente especficos para determinados ons.
Alguns desses canais esto sempre abertos enquanto outros, abrem e
fecham em resposta a sinais especficos. As membranas de clulas
nervosas possuem canais de potssio que permitem a passagem rpida
do on. Os canais permitem aos ons K + passar at 10.000 vezes mais
facilmente que os ons Na + . Os canais de K + so constitudos de
quatro subunidades idnticas que atravessam a membrana e formam
um cone que circunda o canal inico. As entradas internas e externas
dos canais possuem aminocidos carregados negativamente que
atraem ctions e repelem nions. Os ctions hidratados promovem
uma contrao eletricamente neutra do canal chamada seletividade
inica do filtro. Os ons potssio perdem rapidamente parte de sua
gua de hidratao e atravessam o filtro seletivo. Os ons sdio
aparentemente retm mais gua de hidratao e assim transitam pelo
filtro mais lentamente. O restante do canal tem revestimento
hidrofbico. Baseado na comparao das seqncias de aminocidos,

9 Lipdeos e membranas

as propriedades estruturais dos canais de potssio so tambm


aplicadas a outros tipos de canais.
D. Transporte passivo
O transporte passivo o movimento de molculas ou ons
solveis de um compartimento de maior concentrao, atravs de uma
membrana permevel, para um compartimento de menor
concentrao. O processo no necessita de energia. Os mais simples
transportadores de membrana podem ser classificados de acordo com
o nmero de molculas transportadas.
O transporte passivo inclui dois sistemas: difuso simples e
difuso facilitada.
1. Difuso simples. Cada soluto, impulsionado por movimento
molecular aleatrio, difunde-se atravs da membrana de acordo com
seus respectivos gradientes de concentrao de um compartimento
de maior concentrao para um compartimento de menor
concentrao. O carter hidrofbico das molculas um fator
importante para seu transporte atravs da membrana, uma vez que a
bicamada lipdica hidrofbica. Em geral, quanto maior o gradiente
de concentrao, mais rpida a velocidade de difuso do soluto. A
difuso de molculas pequenas apolares (como O 2 , N 2 e CO 2 ) atravs
da membrana proporcional aos seus gradientes de concentrao.
Molculas polares no-carregadas (como uria, etanol e pequenos
cidos orgnicos) deslocam-se atravs das membranas sem o auxlio
de protenas.
2. Difuso facilitada. Transporte de certas molculas grandes ou
polares (como aminocidos e acares) ocorre atravs de canais
especiais ou molculas transportadoras. Os canais so protenas
transmembrana semelhantes a um tnel. Cada tipo designado pelo
transporte de um soluto especfico. Muitos canais so controlados
quimicamente ou por voltagem. Os canais quimicamente regulados
abrem ou fecham em resposta a sinais qumicos especficos. Por
exemplo, o canal inico por onde se movimenta o Na + no receptor
nicotnico da acetilcolina (encontrada nas membranas das clulas
plasmticas dos msculos) se abre quando a acetilcolina se liga. O
Na + arremetido para o interior da clula com reduo do potencial
eltrico transmembrana que causa despolarizao. A despolarizao
promovida pela acetilcolina abre o canal vizinho de sdio (chamado
de canal de Na + dependente de voltagem). A repolarizao, o
restabelecimento do potencial de membrana, inicia com a difuso de
ons K + para fora da clula atravs de canais de K + dependentes de
voltagem. A difuso de ons K + para o exterior da clula torna o
interior menos positivo, ou seja, mais negativo.
Outra forma de difuso facilitada envolve protenas chamadas
transportadoras ou permeases. No transporte mediado por
transportadores, um soluto especfico liga-se ao transportador em um
lado da membrana e promove uma alterao conformacional no
transportador. O soluto ento translocado atravs da membrana e
liberado. Nos eritrcitos o transportador de glicose um exemplo
bem caracterizado de transportador passivo. Ele permite que a D glicose difunda atravs da membrana da clula para ser utilizada na
gliclise e pela via das pentosesfosfato. A difuso facilitada
aumenta a velocidade que certos solutos se movem em direo do seu

261

262

Motta

Bioqumica

gradiente de concentrao. Esse processo no pode causar o aumento


lquido na concentrao do soluto em um lado da membrana.
E. Transporte ativo
o movimento de substncias contra gradiente de concentrao
ou eletroqumico. O processo de transporte necessita de aporte de
energia. Os sistemas mais importantes de transporte ativo so a
(Na + K + )ATPase (tambm chamada ATPase transportadora de ons
ou bomba de Na + K + ), e a Ca 2+ ATPase (bomba de Ca + ), criam e
mantm gradientes eletroqumicos atravs da membrana plasmtica e
atravs das membranas das organelas. A (Na + K + )ATPase e a
Ca 2+ ATPase usam a energia da hidrlise do ATP na sua translocao
ativa de substncias. As duas formas de transporte ativo so:
transporte ativo primrio e transporte ativo secundrio.
1. Transporte ativo primrio. Os transportadores ativos
primrios utilizam o ATP diretamente como fonte de energia para
impulsionar o transporte de ons e molculas. As diferentes
concentraes de Na + e K + no interior e exterior das clulas
eucariticas so mantidas por mecanismos antiporte pela enzima
(Na + K + )ATPase, encontrada em todas as membranas celulares. Em
cada ciclo, a (Na + K + )ATPase hidrolisa 1 ATP e bombeia 3 ons Na +
para o exterior e 2 ons K + para o interior das clulas.
Uma protena transportadora ativa, a P glicoprotena, parece
exercer papel fundamental na resistncia de clulas tumorais a
quimioterpicos. A resistncia multifrmaco a causa dominante do
malogro no tratamento clnico do cncer humano. A P-glicoprotena
uma glicoprotena integral de membrana abundante em membranas
plasmticas de clulas resistentes a frmacos. Usando o ATP como
fonte de energia, a P-glicoprotena bombeia uma grande variedade de
compostos tais como frmacos, para fora das clulas, contra gradiente
de concentrao. Desse modo, a concentrao de frmacos no citosol
mantida em nveis baixos para evitar a morte da clula. A funo
fisiolgica normal da P-glicoprotena parece ser a remoo de
compostos hidrofbicos txicos da dieta.
2. Transporte ativo secundrio. dirigido por um gradiente
eletroqumico transmembrnico de Na + ou H + utilizado para o
deslocamento. O transporte ativo ascendente de um soluto acoplado
ao transporte descendente de um segundo soluto que foi concentrado
pelo transporte primrio ativo. Por exemplo, o gradiente de Na +
criado pela (Na + K + )ATPase usado no tbulo renal e clulas
intestinais para transportar a D -glicose por um simporte Na + -glicose;
o transporte ativo de glicose, assim, desfaz o gradiente de
concentrao do Na + , que restabelecido pela (Na + K + )ATPase.
(Figura 9.7). Portanto, a hidrlise do ATP indiretamente fornece a
energia necessria captao de glicose, sendo associada pelo
gradiente inico do Na + .

9 Lipdeos e membranas
(Na+-K+ )-ATPase

Glicose-permease
+

Na

Glicose

Na

Exterior

Interior
+

Na

Glicose

Na

Figura 9.16
+
+
Transporte ativo secundrio. A (Na K ) ATPase gera um gradiente de on
sdio (estabelecido por um transporte ativo primrio) que direciona o
transporte ativo secundrio da glicose nas clulas epiteliais do intestino. A
+
glicose transportada juntamente com o Na atravs da membrana
plasmtica para dentro da clula epitelial.

Existem outras protenas transprtadoras que necessitam ATP para


bombear substncias como prtons e ons Ca 2+ contra gradientes de
concentrao. Por exemplo, a Ca 2+ ATPase um sistema de
transporte ativo que bombeia ons clcio para dentro do retculo
endoplasmtico especializado (retculo sarcoplasmtico) das clulas
musculares. O clcio mantido em baixas concentraes no citosol
pela hidrlise do ATP em ADP e P i que direciona o on clcio para o
retculo sarcoplasmtico atravs da membrana e contra um gradiente
eletroqumico.
Defeitos no mecanismo de transporte da membrana podem
provocar srias conseqncias. Um exemplo da disfuno do
transporte ocorre na fibrose cstica. A fibrose cstica, doena
autossmica recessiva, provocada pela falta ou defeito em uma
glicoprotena de membrana, denominada regulador da condutividade
transmembrnica da fibrose cstica (CFTR), que atua como um canal
para ons cloreto nas clulas epiteliais e um membro da famlia de
protenas chamadas transportadores da caixa ATPligante, ABC (ATP
binding cassete). O canal para ons cloreto vital para a absoro de
sal (NaCl) e gua atravs das membranas plasmticas das clulas
epiteliais em tecidos como pulmes, fgado, intestino delgado e
glndulas sudorparas. O transporte de cloretos ocorre quando
molculas sinalizadoras abrem os canais CFTRCl na superfcie das
membranas das clulas epiteliais. Na fibrose cstica, o defeito dos
canais CFTR resulta na reteno de Cl no interior das clulas. Um
muco espesso ou outras formas de secreo causa a excessiva
captao de gua devido presso osmtica. As caractersticas
encontradas na fibrose cstica so: doena pulmonar (obstruo do
fluxo de ar e infeces bacterianas crnicas) e insuficincia
pancretica (impedimento da produo de enzimas digestivas que
pode resultar em deficincia nutricional severa). A mutao mais
comum que causa a fibrose cstica a deleo do resduo Phe 508 da
CFTR, o que causa um enovelamento defeituoso e a insero de uma
protena mutante na membrana plasmtica.

263

264

Motta

Bioqumica

Cl

Lquido
extracelular
Membrana
celular
Citosol
CFTR
Figura 9.17
Regulador da condutividade transmembrnica da fibrose cstica (CFTR).
A protena CFTR est posicionada na membrana celular para formar um
canal para o Cl sair da clula.

H. Endocitose e exocitose
Os mecanismos de transporte descritos acima ocorrem em um
fluxo de molculas ou ons atravs de membranas intactas. As clulas
tambm necessitam importar e exportar molculas muito grandes para
serem transportadas via poros, canais ou protenas transportadoras.
Os procariontes possuem sistemas especializados multicomponentes
em suas membranas que permitem secretar certas protenas (muitas
vezes toxinas ou enzimas) para o meio extracelular. Na maioria das
clulas eucariticas, certos componentes de grande tamanho
transitam para dentro e para fora da clula por endocitose e exocitose,
respectivamente. Nos dois casos, o transporte envolve a formao de
um tipo especializado de vescula lipdica.
1. Endocitose. A endocitose um mecanismo para o transporte
de componentes do meio circundante para o interior do citoplasma. A
endocitose mediada por receptores, inicia com o seqestro de
macromolculas por protenas receptoras especficas presentes nas
membranas plasmticas das clulas. A membrana ento se invagina,
formando uma vescula que contm as molculas ligadas. Uma vez
dentro da clula, a vescula, sem o seu revestimento, funde-se com
endossomos (outro tipo de vescula) e a seguir com um lisossomo. No
interior do lisossomo, o material endocitado e o receptor so
degradados. Alternativamente, o ligante, o receptor, ou ambos podem
ser reciclados entre a membrana plasmtica e o compartimento
endossmico. A fagocitose um caso especial de endocitose.

9 Lipdeos e membranas

Citoplasma

Figura 9.18
A. A endocitose inicia com o seqestro de macromolculas ela membrana
plasmtica da clula. A membrana invagina, formando uma vescula que
contm as molculas ligadas (figura superior). B. Microfotografia eletrnica
da endocitose.

2. Exocitose. A exocitose o inverso da endocitose. Durante a


exocitose, os materiais destinados secreo so encapsulados em
vesculas no aparelho de Golgi. As vesculas podem fundir com a
membrana plasmtica, liberando o seu contedo para o meio
circundante. Os zimognios das enzimas digestivas so exportados
pelas clulas pancreticas desse modo.
Membrana plasmtica

Figura 9.19
Mecanismo da exocitose

265

266

Motta

Bioqumica

9.5 Fuso de membranas


Uma importante caracterstica das membranas biolgicas a sua
capacidade de se fundir com uma outra membrana sem perder a sua
integridade. As protenas integrais necessrias para as fuses de
membranas
so
chamadas
SNAREs
(soluble
Nethylmaleimidesensitive-factor attachment protein receptor) que
exercem funes no direcionamento, ancoragem e fuso de vescula.
A fuso um processo multi-etapas que inicia com a formao de
bastes em forma de grampo que aproximam as protenas ligadas s
membrana-alvo (por exemplo, a membrana da vescula) a outra (por
exemplo, a membrana plasmtica). Vrias protenas parecem
participar na juno das duas membranas preparando-as para a fuso.
Resumo
1. Os lipdeos so biomolculas com grande variedade estrutural. So
solveis em solventes no-polares. So: cidos graxos e seus derivados,
triacilgliceris,
steres
graxos,
fosfolipdeos,
lipoprotenas,
esfingolipdeos e isoprenides.
2. Os cidos graxos so cidos monocarboxlicos que ocorrem
principalmente como triacilgliceris, fosfolipdeos e esfingolipdeos. Os
eicosanides so um grupo de molculas hormnio like derivados de
cidos graxos de cadeias longas. Os eicosanides incluem as
prostaglandinas, tromboxanos e leocotrienos.
3. Os triacilgliceris so steres de glicerol com trs molculas de cidos
graxos. Os triacilgliceris (chamadas gorduras) so slidos a temperatura
ambiente (possuem principalmente cidos graxos saturados). Os lquidos
a temperatura ambiente (ricos em cidos graxos insaturados) so
denominados leos. Os triacilgliceris, a principal forma de transporte e
armazenamento de cidos graxos, so uma importante forma de
armazenamento de energia em animais. Nas plantas so armazenados nas
frutas e sementes.
4. Os fosfolipdeos so componentes estruturais das membranas. Existem
dois tipos de fosfolipdeos: glicerofosfolipdeos e esfingomielinas.
5. Os esfingolipdeos so tambm componentes importantes das membranas
celulares de animais e vegetais. Contm um aminolcool de cadeia
longa. Nos animais esse lcool a esfingosina. A fitoesfingosina
encontrada nos esfingolipdeos vegetais. Os glicolipdeos so
esfingolipdeos que possuem grupos carboidratos e nenhum fosfato.
6. Os isoprenides so molculas que contm unidades isoprnicas de cinco
carbonos repetidas. Os isoprenides consistem de terpenos e esterides.
7. As lipoprotenas plasmticas transportam molculas de lipdeos atravs
da corrente sangnea de um rgo para outro. Elas so classificadas de
acordo com a densidade. Os quilomcrons so lipoprotenas volumosas
de densidade extremamente baixa que transportam os triacilgliceris e
steres de colesteril da dieta, do intestino para o tecido adiposo e
msculo esqueltico. As VLDL so sintetizadas no fgado e transportam
lipdeos para os tecidos. No transporte pela corrente sangnea, elas so
convertidas em LDL. As LDL so captadas pelas clulas por endocitose
aps ligao a receptores especficos localizados na membrana
plasmtica. As HDL, tambm produzidas pelo fgado, captam o
colesterol das membranas celulares e outras partculas lipoproticas. As
LDL tem importante papel no desenvolvimento da aterosclerose.
8. De acordo com o modelo do mosaico fludo, a estrutura bsica das
membranas biolgicas uma bicamada lipdica na qual as protenas

9 Lipdeos e membranas

flutuam. Os lipdeos da membrana (a maioria dos quais so


fosfolipdeos)
so
os
principais
responsveis
pela
fluidez,
permeabilidade seletiva e a capacidade de auto-selar das membranas. As
protenas das membranas geralmente definem as funes biolgicas
especficas. Dependendo de sua localizao, as protenas de membranas
podem ser classificadas como integrais, perifricas ou ligadas a lipdeos.
Exemplos de funes nas quais as protenas de membranas esto
envolvidas incluem o transporte de molculas e ons e a ligao de
hormnios e outros sinais metablicos extracelulares.
9. Algumas molculas pequenas ou hidrofbicas podem difundir atravs da
bicamada lipdica. Poros, canais inicos transportadores passivos e
ativos mediam o movimento de ons e molculas polares atravs das
membranas. As macromolculas deslocam-se para dentro e para fora das
clulas por endocitose ou exocitose, respectivamente.

Referncias
HORTON, H. R., MORAN, L. A., OCHS, R. S., RAWN, J. D., SCRIMGEOUR,
K. G. Principles of biochemistry. 3 ed. Upper Saddle River: Prentice Hall,
2002. p. 264-303.
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed.
New York: McGraw-Hill, 2003. p. 200-33.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So
Paulo: Sarvier, 2002. p. 280-339.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre: Artmed, 2000. p. 195-218.

267

10
Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Metabolismo dos
Lipdeos

10
Metabolismo dos Lipdeos

Objetivos
1.

Descrever a digesto e absoro dos lipdeos.

2.

Descrever o transporte intracelular de cidos graxos atravs da membrana


mitocondrial.

3.
4.

Descrever a oxidao dos cidos graxos usando um esquema metablico.


Calcular o balano energtico da oxidao total de um mol de cido graxo.

5.

Descrever a regulao da oxidao dos cidos graxos.

6.

Descrever a formao e degradao de corpos cetnicos e seu papel na


inanio e diabete melito.

7.

Descrever o transporte de grupos acetil da mitocndria para o citosol.

8.

Descrever as reaes de biossntese de cidos graxos pelo complexo cido


graxo sintase.

9.

Descrever o controle da biossntese dos cidos graxos.

10. Reconhecer que a glicose a principal fonte de acetilCoA, de oxaloacetato e


de NADPH para a biossntese dos cidos graxos.
11. Identificar os processos de formao de cidos graxos de mais de 16 tomos
de carbono e de obteno de cidos graxos insaturados.
12. Descrever a sntese de triglicerdeos.
13. Descrever o metabolismo dos lipdeos de membrana.
14. Descrever o metabolismo do colesterol.
15. Descrever a formao de eicosanides.

A acetilCoA, uma molcula de alta energia composta de


coenzima A e um grupo acetil, exerce papel fundamental no
metabolismo dos lipdeos. Em muitos processos metablicos
relacionados aos lipdeos, a acetilCoA atua como substrato ou
produto. Por exemplo, a acetilCoA no usada imediatamente para a
gerao de energia celular empregada na sntese dos cidos graxos.
Quando os cidos graxos de cadeia longa so oxidados para liberar
energia, forma-se acetilCoA. Trs molculas de acetilCoA so
combinadas para formar isopentenil pirofosfato, a molcula
construtora de isoprenides nas reaes sintticas. Assim, molculas
to diversas como terpenos e esterides encontrados em animais e
plantas so sintetizadas a partir de acetilCoA. Pelo papel importante
dos lipdeos na gerao de energia e na formao de materiais

265

266

Motta

Bioqumica

estruturais para as clulas vivas, o seu metabolismo e os seus


mecanismos de controle so descritos nesse captulo.

10.1 Digesto e absoro dos lipdeos


Os lipdeos ingeridos so constitudos principalmente por
triacilgliceris (90% do total) e, em menor grau, glicerofosfolipdeos,
colesterol, steres de colesteril e cidos graxos livres. No trato
gastrointestinal, os lipdeos so emulsificados, digeridos por enzimas
hidrolticas e absorvidos pelas clulas da mucosa intestinal.
Em razo da pouca solubilidade em meio aquoso, os lipdeos se
agregam em grandes complexos dificultando a hidrlise enzimtica e
a absoro intestinal. Esses obstculos so contornados pelo emprego
de agentes emulsificantes que aumentam a interface lipdio-gua
permitindo a ao das enzimas intestinais hidrossolveis, tambm
como a solubilizao dos produtos de hidrlise.
Os lipdeos da dieta so emulsificados no duodeno pela ao
detergente dos sais biliares. Os sais biliares so molculas
anfipticas sintetizadas pelo fgado a partir do colesterol e
temporariamente armazenados na vescula biliar e liberados no
intestino delgado aps a ingesto de gorduras. Os principais so o
glicocolato de sdio e o taurocolato de sdio derivados dos cidos
glicoclico e tauroclico, respectivamente (ver Seo 10.7.C). A
emulsificao possvel pela natureza anfiptica dos sais biliares. A
poro polar das molculas de sais biliares, interage com a gua,
enquanto o grupo no-polar interage com os lipdeos hidrofbicos.
Desse modo, os lipdeos so finamente dispersos no meio aquoso.
OH
CH3
CH

CH2
H2 C

HO

OH

NH

CH2
COOH

cido glicoclico

OH
CH3
CH

CH2
H2 C

HO

OH
cido tauroclico

NH

CH2
CH2
SO3 H

10 Metabolismo dos lipdeos

Trs enzimas hidrolticas so encontradas no suco pancretico


secretado no duodeno: lipasepancretica, colesterolesterase e
fosfolipase A 2 .
A lipasepancretica catalisa a hidrlise dos triacilgliceris com
a formao de 2monoglicerol e 2 cidos graxos:
O
O
R2

CH2
O

C
O

CH2

R1

R3

Triacilglicerol
H2 O
Lipase
pancretica

O
O

O
R2

CH2
O

C
CH2

O
R3 +

2 H+

OH
H
OH

2-Monoacilglicerol

A colipase, um co-fator protico tambm produzido pelo


pncreas, essencial na estabilizao da lipase, no permitindo sua
desnaturao ou inibio pelos sais biliares.

TG
+AG
+MG
Triacilgliceris

Lipase

Figura 10.1.
Alteraes no estado fsico durante a digesto dos triacilgliceris. (TG =
triacilgliceris, AG = cidos graxos, MG = monoacilgliceris).

Os steres de colesteril ingeridos na dieta so emulsificados pelos


sais biliares e, ento, hidrolisados pela colesterolesterase a
colesterol e cidos graxos livres:
ster de colesteril + H 2 O Colesterol
esterase

colesterol + cido graxo


A fosfolipase A 2 , secretada na forma de pr-enzima e ativada pela
tripsina, catalisa a hidrlise dos resduos de cidos graxos presentes

267

268

Motta

Bioqumica

na
posio
2
lisofosfoglicerdeos:

dos

fosfoglicerdeos,

formando

1-acil

O
1

H2 C

CH

R1

R2

CH2

Glicerofosfolipdeo

O
Fosfolipase A2
H2 O

R2

H+
O

H2 C

CH

OH

CH2

C
R1
Lisofosfoglicerdeo

O suco pancretico contm outras esterases menos especficas


que atuam sobre monoacigliceris e outros steres lipdicos, como os
de vitamina A com cidos carboxlicos.
Os produtos da liplise so incorporados a miscelas mistas com
sais biliares conjugados. As miscelas so os principais veculos no
movimento dos cidos graxos, monoacigliceris e glicerol da luz para
a superfcie das clulas da mucosa intestinal onde ocorre a absoro.
Na ausncia de sais biliares, a absoro dos lipdeos drasticamente
reduzida com a presena excessiva de gorduras nas fezes
(esteatorria). A esteatorria ocorre tambm por deficincia de lipase
pancretica ou defeitos de absoro ao nvel da mucosa intestinal e
outras condies que comprometem a absoro das gorduras.
Na clula da mucosa intestinal, o destino dos cidos graxos
absorvidos determinado pelo comprimento de suas cadeias
carbonadas. cidos graxos de cadeia curta (2-10 tomos de carbono)
so hidrossolveis, sendo diretamente liberados para o sangue portal
sem alteraes e transportados ao fgado unidos albumina. Os
cidos graxos de cadeia longa so convertidos novamente em
triacilgliceris e agrupados com o colesterol, fosfolipdeos e
protenas
especficas
(apolipoprotenas)
que
os
tornam
hidrossolveis. Esses agregados lipoproticos so denominados
quilomcrons e so liberados para os vasos linfticos intestinais e a
seguir para o sangue.
A lipoprotena-lipase (sintetizada pelo msculo esqueltico e
cardaco, glndula mamria de lactantes e tecido adiposo) ligada
superfcie endotelial dos capilares sangneos, converte os
triacilgliceris dos quilomcrons em cidos graxos e glicerol. Esses
compostos so captados por vrios tecidos, principalmente, o adiposo
e o muscular. A lipoprotena-lipase ativada por ligao a uma
protena componente dos quilomcrons, a apoprotena C II.
A concentrao de cidos graxos livres no organismo baixa,
pois suas molculas so detergentes (formam micelas) e podem
romper as membranas celulares. Aps entrar nas clulas,
provavelmente com o auxilia de protenas, os cidos graxos podem
ser (1) oxidados para gerar energia, (2) armazenados como
triacilgliceris ou (3) usados para a sntese de membranas.

10 Metabolismo dos lipdeos

Muitos cidos graxos so empregados pelo fgado e clulas


musculares, especialmente no msculo cardaco, que prefere utilizar
cidos graxos mesmo quando houver disponibilidade de carboidratos.

10.2 Mobilizao dos triacilgliceris (liplise)


Os cidos graxos de fontes alimentares e sintetizados no
organismo, so esterificados a triacilgliceris, transportados via
corrente circulatria e armazenados como gotculas lquidas no
citoplasma das clulas do tecido adiposo. Os triacilgliceris
constituem a fonte mais concentrada de energia qumica do corpo.
Durante o jejum, exerccio vigoroso e em resposta ao estresse, os
triacilgliceris armazenados nos adipcitos so hidrolisados em
cidos graxos e glicerol pela ao da lipase hormnio-sensvel.
Os hormnios adrenalina (epinefrina) e glucagon secretados em
resposta a baixos teores de glicemia, ativam a adenilil ciclase na
membrana
plasmtica
dos
adipcitos
(Figura
10.2).
A
adenilil ciclase transforma ATP em AMPc (AMP cclico) (ver
Captulo 12). A protena cinase dependente de AMPc, fosforila e,
assim, ativa a lipase. Os triacilgliceris so hidrolizados em cidos
graxos e glicerol. Elevados teores de glicose e de insulina sangnea
exercem atividades opostas, acumulando triacilgliceris no tecido
adiposo.
Adrenalina e Glucagon

ATP

Adenilato-ciclase

AMPc

Protena-cinase
(inativa)

Protena-cinase
(ativa)
ATP

ADP
Lipase
hormnio
sensvel
(ativa)

Lipase
hormnio
sensvel
(inativa)

Triacilglicerol

Diacilglicerol
cido graxo

Figura 10.2
Mobilizao de cidos graxos dos adipcitos

Monoacilglicerol
cido graxo

Glicerol
cido graxo

269

270

Motta

Bioqumica

O glicerol conduzido ao fgado e fosforilado a


glicerol 6 fosfato pela glicerol cinase (ver seo 10.5.F). A
glicerol 3 fosfato oxidada pela via glicoltica ou usada na sntese
de triacilgliceris, fosfolipdeos ou glicose (gliconeognese).
Os cidos graxos liberados dos adipcitos so transportados pelo
sangue ligados albumina srica para diferentes tecidos nos quais
serviro como combustveis. Difundem-se para o interior das clulas
por uma protena transportadora de cidos graxos presente na
membrana plasmtica em processo associado ao transporte ativo do
sdio. As clulas variam grandemente em suas capacidades de
transporte e utilizao dos cidos graxos.

10.3 Oxidao dos cidos graxos


Os cidos graxos so degradados por oxidao em uma seqncia
repetitiva de reaes que produzem molculas de acetil CoA e
liberam energia. O mecanismo ocorre principalmente na matriz
mitocondrial das clulas animais, sendo conhecido como oxidao
(existe tambm a oxidao nos peroxissomos) na qual os cidos
graxos so degradados pela remoo de unidades de dois carbonos
(acetil CoA).
O grau de utilizao dos cidos graxos varia de acordo de tecido
para tecido e depende do estado metablico do organismo (condio
absortiva, ps prandial, alimentado, jejum prolongado, inanio,
exerccio, repouso, etc). Durante o jejum prolongado, a maioria dos
tecidos capaz de utilizar os cidos graxos como fonte de energia. O
tecido nervoso e os eritrcitos no empregam os cidos graxos como
combustvel.
Nas mitocndrias, os cidos graxos so degradados pela oxidao
no -carbono (C3) em um grupo ceto (C=O) com a remoo sucessiva
de fragmentos de dois carbonos na forma de acetil CoA,
posteriormente oxidada a CO 2 no ciclo do cido ctrico. Em cada
ciclo da oxidao, forma-se um mol de acetil CoA, um de FADH 2
e um de NADH. No fgado, a energia liberada pela -oxidao
empregada para dirigir a gliconeognese.
A. Ativao de cidos graxos
Antes de serem oxidados, os cidos graxos so ativados pela
adio de CoA para formar acil CoA graxo. O grupo carboxila dos
cidos graxos de cadeia longa reage com o grupo sulfidrlico da CoA
em presena de ATP para produzir acil CoA, AMP e pirofosfato
inorgnico (PP i ) em reao catalisada por uma famlia de enzimas, as
acil-CoA sintases (tiocinases) que esto associadas ao retculo
endoplasmtico ou com a membrana mitocondrial externa.

10 Metabolismo dos lipdeos

O
R

O
cido graxo

O
O

Adenosina

O
H2 O

PPi

2 Pi

O
R

Pirofosfatase
inorgnica

Adenosina

O
Acil-adenilato

SCoA

O
R

SCoA

Acil-CoA

Adenosina

O
AMP

O processo envolve a clivagem do ATP em pirofosfato inorgnico


(PP i ) e AMP, em lugar de ADP e P i . A formao de acil CoA
favorecida pela hidrlise de duas ligaes de alta energia do ATP,
pois o pirofosfato inorgnico hidrolisado subsequentemente pela
pirofosfatase inorgnica:
Pirofosfatase inorgnica

Pirofosfato (PP i ) + H 2 O 2 Fosfato (2P i )

Na reao total duas ligaes fosfato de alta energia so


consumidas (hidrlise do ATP e do pirofosfato), enquanto somente
uma formada (acil CoA), tornando o processo espontneo e
irreversvel.
B. Transporte do grupo acil para as mitocndrias
Os cidos graxos so ativados no citosol, mas a oxidao ocorre
na mitocondria. Como a membrana mitocondrial interna
impermevel aos acil CoA graxos de cadeia longa, os grupos acil
entram na mitocndria por um sistema de lanadeira que emprega a
carnitina (4 trimetilamino 3 hidroxibutirato) como transportador. A
carnitina um composto dipolar derivado do aminocido lisina.
COO

CH2
H

OH

CH2
H3C

CH3

CH3

Carnitina

271

272

Motta

Bioqumica

Duas enzimas participam das reaes: a carnitina acil-transferase


I e a carnitina acil transferase II. A carnitina acil-transferase I
localizada na superfcie externa da membrana mitocondrial interna,
catalisa a transferncia do grupo acil da CoA para o grupo hidroxila
da carnitina, formando acil-carnitina.
A reao reversvel com pequena variao de energia livrepadro, indicando que a energia contida na acil CoA no dissipada
pela formao da acil-carnitina. Essa ltima atravessa a membrana e o
grupo acil transferido da carnitina para a CoA presente na matriz
mitocondrial em reao catalisada pela carnitina acil transferase II
encontrada na superfcie interna da membrana mitocondrial interna:
Citosol
Microfotografia eletrnica de um
adipcito

O
R

SCoA

Carnitina

SCoA

Carnitina

Carnitina:
acilcarnitina
translocase

1
H

Matriz
Membrana
mitocondrial
interna

C Carnitina
O

C SCoA

3
R

C Carnitina

SCoA

Figura 10.3
Transporte dos cidos graxos para a matriz mitocondrial. (1) O grupo acila da
acil CoA citoslica transferido para a carnitina, liberando CoA. (2) A
acil carnitina transportada para a matriz com a subseqente transferncia do
grupo acil para a molcula de CoA intramitocondrial. (3) O grupo acil transferido
para a molcula de CoA do conjunto mitocondrial. (4) A carnitina retorna ao citosol.

A acil-carnitina lanada para o interior da mitocndria por um


transportador
protico
especfico
chamado
carnitina:
A
carnitina
retorna
ao
espao
acilcarnitina translocase.
intermembranas tambm pela translocase.
C. Reaes da -oxidao dos cidos graxos
Na -oxidao, a acil CoA graxo oxidado em um ciclo repetido
de quatro reaes enzimticas: (1) formao de ligao dupla
trans , . (2) Hidratao da ligao dupla, (3) desidrogenao da
L hidroacil CoA e (4) formao de acetil CoA.
1. Formao de dupla ligao trans , . Uma vez na matriz
mitocondrial, o acil CoA graxo oxidado no carbono (remoo de

e
)
por
tomos
de
hidrognio
dos
carbonos
acil CoA desidrogenases que contm FAD, formando dupla ligao
entre os carbonos 2 e 3 em configurao trans ,
(trans 2 enoil CoA). Quando a dupla ligao formada, os eltrons
do acil-CoA graxo so transferidos para o FAD para produzir o
FADH 2 que doa o par de eltrons para a cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons, por meio da flavoprotena de
transferncia de eltrons (ETF), para a ubiquinona (Q) pela ao da
ETF:ubiquinona oxidorredutase com a produo de 1,5 ATP.

10 Metabolismo dos lipdeos

2. Hidratao da ligao dupla. A adio de uma molcula de


gua dupla ligao da trans 2 enoil CoA forma o L ismero da
hidroacil CoA em reao catalisada por enoil CoA hidratases
(crotonases).
L hidroacil CoA.

A enzima
NAD + dependente especfica
para os L ismeros de substratos com diferentes comprimentos de
cadeia, promovendo a produo de cetoacil CoA. O NADH
formado transfere o par de eltrons para a cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons com a subseqente gerao de 2,5 ATP.
3.

Desidrogenao

da

L hidroxiacil CoA desidrogenase

4. Formao de acetil CoA. A reao final catalisada pela


tiolase (acil CoA acetiltransferase), consiste em clivagem de um
fragmento carboxiterminal de dois carbonos na forma de acetil CoA
da 3-cetoacil-CoA entre os C e C . O outro produto uma acil CoA
contendo dois carbonos a menos que a acil CoA original.
A acetil CoA convertida em CO 2 e H 2 O via ciclo do cido
ctrico, enquanto a acil CoA original encurtada em dois tomos de
carbono sofre novo ciclo de quatro reaes da oxidao. A
repetio sucessiva das quatro reaes do processo promove a
degradao completa de cido graxo com nmero par de tomos de
carbono em molculas de acetil CoA.

273

274

Motta

Bioqumica

CH3 (CH2 )n CH2 CH2 C


Acetil-CoA
desidrogenase

H
CH3 (CH2)n C

S CoA

FAD

QH2

FADH 2

Acil CoA graxo

O
C C S

CoA

Enoil CoA

H
Enoil-CoA
hidratase

H2O
O

CH3 (CH2)n CH CH2 C S

Hidroxiacil CoA

CoA

OH
-Hidroxiacil-CoA
desidrogenase

NAD+
NADH + H +
O

CH3 (CH2)n C CH2 C

Tiolase

O
CH3 (CH2)n C

S CoA

Cetoacil CoA

CoA SH

O
S CoA + CH3 C S

Acil-CoA graxo
(2 atomos C menor)

CoA

Acetil-CoA

Figura 10.4
Reaes da via de oxidao de cidos graxos

Oxidao dos cidos graxos nos perossissomos


Nos peroxissomos (organelas subcelulares), ocorre pequena
percentagem de oxidao dos cidos graxos. Em animais, a
oxidao peroxissomal encurta as cadeias de cidos graxos com
mais de 20 carbonos. Os cidos graxos resultantes so degradados nas
mitocndrias pela oxidao. Em muitas clulas vegetais, a
oxidao tem lugar predominantemente nos peroxissomos. (Os
cidos graxos no so fontes de energia importantes para os tecidos
vegetais).
A -oxidao peroxissomal difere da via mitocondrial somente na
primeira etapa onde uma acil CoA oxidase catalisa a reao:

10 Metabolismo dos lipdeos

H H O
CH3 (CH2 )n C C C SCoA
H H
Acil-CoA
FAD

H2 O2

Acil-CoA
oxidase

FADH2

O2

H O
CH3 (CH2 )n C C C SCoA
H
Enoil-CoA

A enoil CoA idntica ao produto da reao da mitocondrial


catalisada pela acil CoA desidrogenase. No entanto, os eltrons
removidos so transferidos diretamente para o oxignio molecular
para formar perxido de hidrognio (H 2 O 2 ) e no para a ubiquinona.
As reaes seguintes so iguais as que ocorrem na mitocndria.
Em algumas sementes em germinao, a oxidao ocorre nos
glioxissomos. Os glioxissomos so peroxissomos especializados que
contm as enzimas do ciclo do glioxilato. A acetil CoA derivada da
oxidao glioxisomal convertida em carboidratos pelo ciclo do
glioxilato e gliconeognese.
D. Produo de energia na oxidao dos cidos graxos
Cada volta do ciclo de oxidao produz um NADH, um FADH 2
e uma acetil CoA. A oxidao do NADH e do FADH 2 na cadeia
mitocondrial transportadora de eltrons acoplada fosforilao
oxidativa, produz 2,5 e 1,5 ATP, respectivamente. Cada molcula de
acetil CoA proveniente da oxidao metabolizada a CO 2 e gua
no ciclo do cido ctrico e fosforilao oxidativa, com a produo de
10 ATP. No entanto, na ativao do cido graxo so consumidos dois
equivalentes de ATP (um ATP transformado em AMP + 2P i ).
Portanto, em condies fisiolgicas, a oxidao completa de uma
molcula de cido palmtico (16 tomos de carbono) dada pela
reao:
PalmitoilCoA + 7 FAD + 7 NAD + + 7 CoA + 7 H 2 O
8 AcetilCoA + 7 FADH 2 + 7 NADH + 7 H +

A produo de ATP a partir da -oxidao do cido palmtico


pelo ciclo do cido ctrico e da fosforilao oxidativa resumida na
Tabela 10.1.

275

276

Motta

Bioqumica

Tabela 10.1 Produo de ATP na oxidao de uma molcula de cido


palmtico
ATP/mol
2

2 equivalentes de ATP (etapa de ativao)


7 FADH 2 oxidados na CMTE (7 x 1,5)

10,5

7 NADH oxidados na CMTE (7 x 2,5)

17,5

8 acetil CoA oxidados no ciclo do cido ctrico (10 x 8)

80

Total:

106

CMTE: cadeia mitocondrial transportadora de eltrons

E. Oxidao dos cidos graxos insaturados


A via de oxidao dos cidos graxos insaturados a mesma dos
cidos graxos saturados at atingir a dupla ligao. O cido olico,
18:1 9 (oleato) e o cido linolico 18:2 9,12 (linoleato), so cidos
graxos comuns que contm duplas ligaes cis o que dificulta a ao
das enzimas da oxidao.
O
1

18

Oleato
O
12

18

Linoleato

Para o linoleato, as primeiras trs voltas da oxidao procedem


de forma usual para liberar trs molculas de acetil CoA. O
acil CoA que inicia a quarta volta tem dupla ligao entre C3 e C4
(originalmente a dupla ligao era C9 e C10). Alm disso, a molcula
um cis enoil CoA que no permite a ao da enoil CoA hidratase
(enzima que catalisa a etapa 2 da oxidao) que reconhece somente
a configurao trans. Esse obstculo metablico removido pela
enzima enoil CoA isomerase, que converte a dupla ligao cis 3,4
em uma dupla ligao trans 2,3 para que a oxidao continue.
O
4

C
SCoA

Enoil-CoA-isomerase

SCoA

2
3

C
O

Um segundo obstculo ocorre aps a primeira reao da quinta


etapa da oxidao. A acil-CoA desidrogenase introduz a dupla

10 Metabolismo dos lipdeos

ligao entre C2 e C3, no entanto, a dupla ligao original entre C12


e C13 do linoato est agora na posio entre C4 e C5. O dienoil-CoA
resultante no um substrato apropriado para a enzima seguinte, a
enoil CoA hidratase da -oxidao. A dienoil CoA sofre uma
reduo pela 2,4 dienoil redutase dependente de NADPH para
converter as suas duas duplas ligaes em uma nica dupla ligao
trans 3,4 que reconhecida pela enoil CoA hidratase e permite a
reentrada do intermedirio na via normal de oxidao e sua
degradao em seis molculas de acetil CoA. O resultado final a
transformao do linoleato em nove molculas de acetil CoA
5

NADPH + H +
NADP +

SCoA

Redutase

O
3

C
SCoA

4
Isomerase

O
3

C
2

SCoA

A oxidao de cidos graxos insaturados produz menor nmero


de ATP que os correspondentes cidos graxos saturados. Quando a
dupla ligao estiver presente no ocorre a etapa catalisada pela
acil CoA desidrogenase ligada ao FAD. Alm disso, a redutase
NADPH dependente consome 2,5 equivalentes de ATP na forma de
NADPH (que energeticamente equivalente ao NADH).
F. Oxidao de cidos graxos de cadeia mpar
Apesar de raros, os cidos graxos com nmero mpar de tomos
de carbono tambm so oxidados na via da -oxidao com formao
de molculas sucessivas de acetil CoA e um fragmento -terminal de
trs carbonos, a propionil CoA. Este composto tambm gerado na
degradao oxidativa dos aminocidos isoleucina, valina, metionina e
treonina. Nas mitocndrias de diversos tecidos, a propionil CoA
sofre carboxilizao pela propionil CoA carboxilase em presena de
biotina para produzir um intermedirio de quatro tomos de carbono,
a D metilmalonil CoA. Na etapa seguinte, a D metilmalonil CoA
L metlmalonil CoA
pela
enzima
epimerizada
a
metilmalonil CoA epimerase.
Pela
ao
da
metilmalonil CoA mutase que requer a vitamina B 12 como co fator,
a L metilmalonil CoA sofre um rearranjo intramolecular e forma
succinil CoA. A succinil CoA entra diretamente no ciclo do cido
ctrico.

277

278

Motta

Bioqumica

O
CH3

CH2

SCoA

Propionil-CoA
ATP + CO2
Propionil-CoA-carboxilase

ADP + Pi

O2 C

SCoA

CH 3
(S)-Metilmalonil-CoA
Metilmalonil-CoA-racemase

O
CHC3

SCoA

CO2
(R)-Metilmalonil-CoA
Metilmalonil-CoA-mutase

O
O2 C

CH2

CH2

SCoA

Succinil-CoA

G. Vias secundrias de oxidao dos cidos graxos


Nos microssomas de alguns tecidos, os cidos graxos de cadeia
ramificada (cidos fitmicos) sofrem oxidao, na qual somente
um tomo de carbono removido por vez a partir do terminal
carboxlico em processo que envolve o NAD + e o ascorbato. A
doena de Refsum um distrbio neurolgico raro, caracterizado
pelo acmulo de cido fitmico nos tecidos nervosos como resultado
de um defeito gentico na -oxidao.
Na oxidao, o terminal (o tomo de carbono mais distante
do grupo carboxila) oxidado a hidroxicido graxo para formar um
cido graxo com duas carboxilas em reao catalisada por oxidases
de funo mista que requerem citocromo P 450, o O 2 e o NADPH como
doador de eltrons. As reaes ocorrem no retculo endoplasmtico
do fgado e do rim. O cido dicarboxlico formado entra na
mitocndria e degradado por oxidao nas duas extremidades da
molcula. Sob condies normais, relativamente pouco cido graxo
oxidado nessa via.

10 Metabolismo dos lipdeos

10.4 Corpos cetnicos


Sob condies normais, a acetil-CoA proveniente da oxidao
utilizada quase em sua totalidade pelo ciclo do cido ctrico e para a
sntese de isoprenides. O metabolismo dos cidos graxos regulado
de tal forma que somente pequenas quantidades de acetil CoA so
produzidas em excesso. Em certas condies metablicas, tais como,
jejum prolongado, inanio e diabete melito, ocorre aumento na
velocidade da oxidao, tornando necessrio reciclar o excesso de
acetil CoA e liberar a CoA livre para novas oxidaes. No fgado,
o grupo acetil da acetil CoA transformado em corpos cetnicos em
processo chamado cetognese. Os corpos cetnicos consistem de
acetoacetato, hidroxibutirato e acetona e so utilizados como
combustvel hidrossolvel pelos tecidos extra hepticos.
A cetognese ocorre em trs reaes:
1. Formao de acetoacetil CoA. A primeira reao na
formao do acetoacetato (fonte primria de todos os corpos
cetnicos) a condensao de duas molculas de acetil CoA para
gerar acetoacetil CoA, catalisada pela acetil CoA acetiltransferase.
A formao da ligao C C favorecida energeticamente pela
ruptura do enlace tioster.
2. Formao de HMG CoA. A acetoacetil CoA convertida a
3 hidroxi 3 metilglutaril CoA (HMG CoA) por condensao com
uma terceira molcula de acetil CoA pela ao da hidroximetilglutaril CoA sintase. A HMG CoA tambm um precursor da
biossntese do colesterol.
3. Formao de acetoacetato e acetil CoA. A clivagem da
HMG CoA
fornece
o
acetoacetato
livre
pela
hidroxi metilglutaril CoA liase.
Parte do acetoacetato reduzido a hidroxibutirato por uma
hidroxibutirato desidrogenase
NAD + dependente
ligada

membrana mitocondrial interna. Essa enzima especfica para o


D ismero em contraste com o L ismero acoplado a CoA
intermediria da oxidao.
Certa quantidade de acetoacetato sofre contnua descarboxilao
no-enzimtica espontnea acetona. Em condies normais a
formao de acetona negligencivel, no entanto, em acmulos
patolgicos de acetoacetato, a quantidade de acetona no sangue pode
ser detectada no ar expirado pelo paciente.
A presena aumentada de corpos cetnicos no sangue e na urina
acompanhado de odor de acetona no ar expirado, denominada
cetose. Essa condio ocorre quando a velocidade de produo de
corpos cetnicos pelo fgado excede a capacidade de sua utilizao
pelos tecidos perifricos, resultando em acmulo no sangue
(cetonemia). Ao ultrapassar o limiar renal, essas substncias
aparecem na urina (cetonria).

279

280

Motta

Bioqumica

O
2 CH3 C

S CoA

Acetil-CoA
acetil-transferase

CoA

CH3 C

CH2 C

Acetoacetil CoA

CoA

OH
CH2

S CoA

Acetil CoA

HMG-CoA-sintase

-OOC

Acetil CoA

O
CH2 C

S CoA

HMG

CoA

CH3
HMG-CoA-liase

Acetil CoA
O

-OOC
NADH + H
NAD+

CH2

CH3

Acetoacetato

CO2

-Hidroxibutirato
desidrogenase

OH
-OOC

CH2

CH

-Hidroxibutirato

CH 2

CH3

CH3

Acetona

Figura 10.5
Sntese de corpos cetnicos nas mitocndrias hepticas. Em
circunstncias normais, somente pequenas quantidades de corpos
cetnicos so produzidas. No jejum prolongado, inanio e diabetes melito
ocorre a formao excessiva de corpos cetnicos.

Em jejum prolongado e diabete melito (estado com insulina baixa


e glucagon elevado), como conseqncia do direcionamento do
oxaloacetato para a formao de glicose (gliconeognese), ocorre
limitao da operao do ciclo do cido ctrico. Desse modo, a grande
quantidade de acetil CoA produzida pela oxidao dos cidos
graxos no fgado canalizada para a sntese de corpos cetnicos.
Quando a formao de corpos cetnicos atinge nveis acima da
capacidade compensatria dos sistemas tampes fisiolgicos,
desenvolve-se cetoacidose.
Vrios tecidos, mais notadamente o msculo cardaco e
esqueltico, empregam corpos cetnicos para gerar energia. O
crebro aumenta consideravelmente a utilizao de corpos cetnicos
como fonte de energia durante o perodo de jejum prolongado e
inanio, economizando a glicose e reduzindo a degradao da
protena muscular para a gliconeognese.
Nos tecidos perifricos, o hidroxibutirato oxidado a
acetoacetato, que ento ativado pela ao de uma tioforase que
emprega a succinil CoA como fonte de CoA, formando

10 Metabolismo dos lipdeos

acetoacetil CoA. Esta ltima sofre clivagem pela tiolase, produzindo


duas molculas de acetil CoA que entram no ciclo do cido ctrico.
OH
CH3

CH

CH3

-Hidroxibutirato

COO

NAD+

-Hidroxibutirato
desidrogenase

NADH + H +

O
CH3
Succinil-S

CH2

COO

Acetoacetato
ATP + CoA SH

CoA

-Cetoacil-CoA
transferase

Succinato

AMP + PPi

CH3

CH2 C

Tiolase

S CoA

Acetoacetil CoA

CoA

O
2 CH3

S CoA

Acetil CoA

Figura 10.6
Catabolismo dos corpos cetnicos. Os corpos cetnicos so transformados
em acetil CoA em alguns rgos, como por exemplo, msculo cardaco e
esqueltico.

10.5 Biossntese de cidos graxos


A maioria dos cidos graxos utilizados pelos mamferos suprida
pela dieta. Todavia, tambm podem sintetizar quase todos os cidos
graxos saturados e insaturados necessrios para os processos
metablicos vitais. No produzem, entretanto, alguns cidos graxos
insaturados, tais como, o linolnico e linolico, que so supridos pela
dieta, sendo denominados cidos graxos essenciais. Esses cidos
graxos so abundantes em peixes e leos vegetais. A deficincia de
cidos graxos essenciais resultante de dieta com baixo contedo em
gorduras apresenta sintomas como o crescimento lento e demora na
cura de ferimentos.
Os cidos graxos so formados a partir de acetil CoA
proveniente, quase totalmente, da glicose da dieta, ingerida alm das
necessidades imediatas de energia e da capacidade de armazenar
glicognio. A sntese ocorre principalmente no tecido adiposo, no
fgado e nas glndulas mamrias de animais em lactao.
Inicialmente formado o cido palmtico (cadeia linear saturada
com 16 tomos de carbono), a partir do qual outros cidos graxos so
derivados.

281

282

Motta

Bioqumica

A. Transporte de acetato mitocondrial para o citosol


A biossntese dos cidos graxos um processo que ocorre
exclusivamente no citosol. Contudo, a acetil CoA gerada nas
mitocndrias no se difunde espontaneamente para o citosol; em
lugar disso, atravessa a membrana mitocondrial interna sob a forma
de citrato, produzido a partir da condensao do oxaloacetato e
acetil CoA no ciclo do cido ctrico. Em concentraes elevadas, o
ATP inibe a enzima isocitrato desidrogenase no ciclo do cido
ctrico, provocando o acmulo de citrato na mitocndria; o excesso
difunde-se livremente para o citosol pela membrana mitocondrial
interna por meio do carreador do tricarboxilato. No citosol, a
acetil CoA regenerada, a partir do citrato pela ao da enzima
ATP citrato liase:
H2 C
HO

C
H2 C

ATP

COOH
COOH + HS

CoA

ADP + Pi

O
H3 C

ATP-citrato-liase

O
S

COOH

CoA + C

COOH

H2 C

COOH

NADP +

CO2 + NADPH
Piruvato

Enzima mlica

H+
Malato
NAD +
Piruvato
HCO3 + ATP

HS-CoA + NAD +

Malato-desidrogenas

Complexo da piruvato
desidrogenase

NADH + H

CO2 + NADH

Piruvato-carboxilase

Pi + ADP

Oxaloacetato
Pi + ADP

Acetil CoA

Acetil Co
Citrato-liase

Oxaloacetato

ATP

HS-CoA

HS-CoA
Citrato-sintase

Citrato

Citrato
nion
(malato, piruvato, P)
i

Matriz mitocondrial
Figura 10.7
Mecanismo de transporte da acetil CoA da mitocndria para o citosol.

Citoso

10 Metabolismo dos lipdeos

Este processo tambm transfere o oxaloacetato da mitocndria


para o citosol.
B. Sntese dos cidos graxos saturados, o cido palmtico
O cido palmtico sintetizado a partir de uma molcula de
acetil CoA e sete molculas de malonil CoA. Esta ltima
produzida pela carboxilao do acetil CoA. Inicialmente, o CO 2
(como bicarbonato, HCO 3 ) ativado por ligao covalente
biotina com a converso do ATP em ADP + P i em reao catalisada
pela biotina carboxilase (ver adiante):
Biotina
carboxilase

Biotina + HCO 3 + ATP


BiotinaCOO + ADP + P i

A seguir, o grupo prosttico carboxibiotina transfere o grupo


carboxilato para o acetil CoA para formar um composto de trs
carbonos, a malonil CoA e regenerar a enzima.
O
Biotina
Biotin

COO + CH3

SCoA

OOC

Acetil-CoA

CH2

SCoA + Biotina

Malonil-CoA

A reao total, catalisada pela acetil CoA carboxilase uma


enzima composta de trs enzimas (protena transportadora de biotina,
biotina carboxilase e a transcarboxilase) em um nico polipeptdeo
multifuncional que requer biotina e Mn 2+ , a etapa limitante de
velocidade na sntese de cidos graxos nos mamferos. A
acetil CoA carboxilase uma enzima alostrica ativada pelo citrato
e isocitrato e inibida por acil CoA de cadeia longa, como o
palmitoil CoA. A biotina est ligada a um resduo de lisina da
enzima.
O

NH

HN

Protena

Acetil-CoA-carboxilase

A malonil CoA o doador das unidades acetil de dois carbonos


para a construo de cidos graxos.
C. Reaes do complexo cido graxo sintase
A produo de cidos graxos de cadeia longa (cido palmtico) a
partir da malonil CoA envolve o sistema multienzimtico
denominado complexo cido graxo sintase, constitudo por seis
enzimas que catalisam etapas sucessivas da sntese. As protenas
enzimticas do complexo esto unidas entre si, operando a seqncia
de forma eficiente e regulada. Portanto, apesar de cada reao ser
examinada separadamente, elas esto intimamente integradas.

283

284

Motta

Bioqumica

Na biossntese dos cidos graxos necessrio que todos os


intermedirios aclicos participantes do processo liguem-se como
tiosteres, protena transportadora de acila (ACP, acil carrier
protein) cujo grupo prosttico, a 4 fosfopantetena, tambm est
presente na estrutura da coenzima A.
Quadro 10.1 Triclosan

Muitos cosmticos, dentifrcios, desodorantes, sabes


antispticos, brinquedos para bebes, alguns tapetes e
utenslios domsticos contm o composto 5-cloro-2-(2,4diclorofenxi)fenol, mais conhecido com triclosan:
Cl

OH
O

Cl

O triclosan inibe a enoil-ACP


texto). A sntese dos cidos grax
sobrevivncia das bactrias. No s
dos anis fenil do triclosan, c
intermedirio da reao, permane
cofator NADPH. O triclosan tambm
de van der Waals e pontes de hi
aminocidos no stio ativo. Alguma
resistentes ao triclosan apresentam
desses contatos.
A ao especfica do triclosa
enzima da sntese de cidos gra
variedades de bactrias resistentes
est sujeito aos mesmos inco
antibiticos a resistncia por mei
ampla utilizao do triclosan aum
resistncia gnica e, portanto, o se
antimicrobiano.

Cl

Esse composto usado a mais de 30 anos como


agente antibacteriano. O triclosan atua como um antibitico
com alvo bioqumico especfico: uma das enzimas da
sntese dos cidos graxos (nas bactrias, as enzimas de
sntese so protenas separadas e no parte de um
complexo multienzimtico).

H
HS

CH 2

CH 2

H
C

CH 2

CH 2

OH CH3
C

CH3

O
CH 2

P
O

Protena transportadora de acila (ACP)

H
HS

CH 2

CH 2

H
C

CH 2

CH 2

OH CH3
C

CH3

O
CH 2

Coenzima A

As etapas catalisadas pelas seis enzimas do complexo cido graxo


sintase que convertem a acetil-CoA e a malonil CoA em cido
palmtico so descritas a seguir.
1. Condensao da acetil e malonil. Inicialmente, o grupo acetil
da acetil CoA transferido para a enzima 3-cetoacil-ACP-sintase em
reao catalisada por uma das seis enzimas do complexo, a
acetil CoA transacilase.
A seguir, o grupo malonil da malonil-CoA transferido para o
grupo SH da ACP pela ao da malonil transacilase.
Malonil transacilase

Malonil-CoA + ACP-SH Malonil-ACP + CoA-SH

P
O

O
O

P
O

10 Metabolismo dos lipdeos

O grupo malonil da malonil ACP condensa com o grupo acetil


ligado enzima 3 cetoacil ACP sintase (por meio da Cys) para
formar acetoacetil ACP em reao irreversvel.
ACP

S
C

CH2

CO 2
O

CH3

C
O

ACP

Enzima

Malonil-ACP

CH2
C

SH

S
C

3-CetoacilACP-sintase

Enzima

CH3
Acetil-Enzima

Acetoacetil-ACP

285

286

Motta

Bioqumica

O
CH3

SCoA

OOC

Acetil-CoA

CH2

Sintase

HSACP
Transacilase

HSCoA

HSCoA

Transacilase

O
CH3

SCoA

Malonil-CoA

O
S

Cys
Sintase

OOC

SACP

Malonil-ACP

3-Cetoacil-ACP-sintase

CO2

O
CH3

CH2

CH2

SACP

Acetoacetil-ACP

H + NADPH
3-Cetoacil-ACP-redutase

NADP +
OH
CH3

O
CH2

SACP

Hidroxibutiril-ACP

H
3-Hidroxiacil-ACP-desidratase

H2 O

CH3

SACP

Crotonil-ACP

H
H + + NADPH
3-Enoil-ACP-redutase

NADP +
O
CH3

CH2

CH2

SACP

Butiril-ACP

SACP

Palmitoil-ACP

(+ 6 ciclos)

O
CH3 CH2

(CH2 )13

H2 O

Palmitoil-tioesterase

HSACP
O
CH3 CH2

(CH2 )13

Palmitato

Figura 10.8
Operao do complexo cido graxo sintase. Biossntese de butiril-ACP a partir
de acetil ACP e malonil ACP.

10 Metabolismo dos lipdeos

No processo, o grupo carboxlico livre de malonil liberado


como CO 2 . Desta forma, o dixido de carbono adicionado durante a
sntese da malonil CoA no incorporado cadeia carbonada do
cido graxo.
2. Reduo do grupo carbonila. A fase seguinte envolve a
reduo do grupo carbonila em C3 da acetoacetil ACP pelo NADPH
e em presena da 3 cetoacil ACP redutase, com a formao de
D hidroxibutiril ACP. O intermedirio 3 hidroxil envolvido na
biossntese apresenta configurao D , em lugar da configurao L ,
encontrada na oxidao.
OH
CH3

(CH2 )n

O
CH2

H
SACP

CH3

(CH2 )n

O
CH2

SCoA

OH

3-Hidroxiacil-ACP intermedirio
para a sntese de cidos graxos
(configurao D)

3-Hidroacil-CoA intermedirio
da -oxidao
(configurao L)

3. Desidratao. A D 3 hidroxibutiril ACP convertida a


crotonil ACP
por
desidratao
pela
ao
da
3 hidroxiacil ACP desidratase. O produto tem configurao trans
na ligao dupla.
4. Reduo da dupla ligao. A enzima 3 enoil ACP redutase
catalisa a reduo da dupla ligao da crotonil ACP pelo NADPH
para fornecer butiril ACP.
Com a produo de butiril ACP est completo o primeiro dos
sete ciclos para a formao de palmitoil ACP. Para formar o
palmitato o ciclo repetido mais seis vezes. O ciclo seguinte
iniciado pela transferncia do grupo butiril do ACP para o grupo SH
da 3 acetoacil ACP sintase (originalmente ocupado pelo grupo
acetil), permitindo ACP receber o malonil de outra molcula de
malonil CoA.
So necessrios sete ciclos completos para produzir
palmitoil ACP posteriormente transformado em palmitato e HS ACP
pela ao da palmitoil tioesterase.
Palmitoil tioesterase

PalmitoilACP + H 2 O Palmitato + HS-ACP

A estequiometria global para a sntese do palmitato a partir do


acetil CoA :
8AcetilCoA + 7ATP + 14NADPH + 14 H +
palmitato + 14NADP + + 8CoASH + 6H 2 O + 7ADP + 7P i

A biossntese do palmitato requer, portanto, acetil CoA, ATP e


NADPH. Os NADPH nos adipcitos e hepatcitos so provenientes
principalmente da via das pentoses-fosfato (ver Captulo 6:
Metabolismo dos carboidratos) e, em menor grau, pela enzima
mlica.
A formao de NADPH pela enzima mlica ocorre em duas
etapas: inicialmente o oxaloacetato reduzido a malato pelo NADH
em reao catalisada pela malato desidrogenase:

287

288

Motta

Bioqumica

Oxaloacetato + NADH + H + Malato + NAD +

A enzima mlica catalisa a descarboxilao oxidativa do malato


com a produo de NADPH:
Malato + NADP + Piruvato + CO 2 + NADPH

O piruvato citoslico entra na mitocndria e convertido a


oxaloacetato pela piruvato carboxilase ou em acetil CoA pela
piruvato desidrogenase.
Para a sntese do palmitato, oito NADPH so gerados pela
transferncia de oito oxaloacetatos de volta mitocndria (pois foram
oito acetil CoA transferidos no caminho inverso).
D. Alongamento e dessaturao dos cidos graxos
O alongamento e a dessaturao (formao de duplas ligaes)
dos cidos graxos biossintetizados ou obtidos da dieta realizado
fundamentalmente por enzimas do sistema reticuloendotelial. (O
processo ocorre somente quando a dieta no contm a quantidade
apropriada de cidos graxos). A alongamento e dessaturao so
especialmente importantes na regulao da fluidez das membranas e
para a sntese de vrios precursores derivados dos cidos graxos,
como os eicosanides. Por exemplo, a mielinizao (um processo no
qual a bainha da mielina formada ao redor de certos nervos)
depende especialmente das reaes de sntese de cidos graxos no
sistema retculo endoplasmtico. cidos graxos saturados e
insaturados de cadeia muito longa so constituintes importantes dos
cerebrosdeos e sulfatdeos encontrados na mielina. Aparentemente as
clulas regulam a fluidez das membranas ajustando os tipos de cidos
graxos que so incorporados na membrana biolgica. Por exemplo,
em climas frios, mais cidos graxos insaturados so incorporados (os
cidos graxos insaturados tm pontos de congelamento mais baixos
que os saturados). Se a dieta no supre a quantidade suficiente dessas
molculas, as vias de sntese dos cidos graxos so ativadas.
O palmitato (cido graxo saturado de C 16 ) formado nas reaes
catalisadas pelo complexo cido graxo sintase, o precursor de
outros cidos graxos de cadeia longa saturados e insaturados. Dois
mecanismos diferentes esto disponveis para o alongamento: um na
mitocndria e outro no retculo endoplasmtico liso. Nos dois
sistemas a palmitoil ACP convertida a palmitoil CoA.
Na mitocndria, o alongamento ocorre pela adio e pela reduo
sucessivas de unidades acetil em um processo inverso oxidao de
cidos graxos. O alongamento do acil CoA no retculo
endoplasmtico envolve condensaes sucessivas de acetil doados
pela malonil CoA. A sntese no retculo endoplasmtico fornece
cidos graxos de cadeia longa (C18 a C24) necessrios para o
desenvolvimento do sistema nervoso central na mielinizao das
clulas nervosas.
Os mamferos superiores so capazes de introduzir duplas
ligaes na configurao cis nos cidos graxos saturados em presena
de NADH e O 2 catalisadas por acil CoA graxo dessaturase (oxidase
de funo mista). As reaes ocorrem no retculo endoplasmtico
heptico e necessitam citocromo b 5 , NADH citocromo b 5 redutase
(uma flavoprotena) e uma dessaturase, firmemente ligados
membrana. Tanto o NADH como o cido graxo so oxidados e dois

10 Metabolismo dos lipdeos

pares de eltrons so transferidos para o O 2 com a formao de H 2 O.


Essas reaes so parte da denominada cadeia microssomial de
eltrons.
As dessaturaes mais freqentes utilizam acil-CoA saturadas
como substratos com a introduo de dupla ligao no C9 a partir do
terminal carboxlico. A estearoil CoA dessaturase catalisa a
transformao do estearil CoA em oleil CoA. Por mecanismo
semelhante, a palmitoleoil CoA produzida a partir da
palmitoil CoA. A atividade desta enzima e sua sntese so
controladas tanto pela dieta como por mecanismos hormonais.
F. Sntese de triacilgliceris
Os triacilgliceris so sintetizados pela adio de acil-CoA graxo
(biossintetizados ou supridos pela dieta) ao glicerol 3 fosfato ou
diidroxiacetona fosfato. A sntese ocorre principalmente no fgado,
intestino e tecido adiposo. O glicerol 3 fosfato formado por duas
vias: (1) a partir da diidroxiacetona fosfato gerada na gliclise (ver
Captulo 6: Metabolismo dos carboidratos) ou (2) formado a partir do
glicerol pela ao da glicerol cinase.
A diidroxiacetona fosfato transformada em glicerol 3 fosfato
em reao catalisada pela glicerol 3 fosfato desidrogenase:
CH2

OH

NADH + H +

NAD+

C
CH2

Glicerol-3-fosfato
desidrogenase

PO23

CH2

OH

CH

OH

CH2

PO 23

No fgado, rim e intestino delgado ocorre a fosforilao do


glicerol livre em presena de glicerol cinase:
CH2 OH
H

ATP

ADP

OH

CH2 OH

CH2 OH
H

Glicerol-cinase

OH

CH2 OPO23

Os adipcitos so desprovidos de glicerol cinase e obtm o


exclusivamente
pela
reao
da
glicerol 3 fosfato
glicerol 3 fosfato desidrogenase. O glicerol livre obtido na
hidrlise dos triacilgliceris nos adipcitos no utilizado no prprio
tecido e sim, levado ao fgado onde transformado em
glicerol 3 fosfato pela glicerol cinase.
Os acil CoA empregados na sntese dos triacilgliceris so
provenientes de cidos graxos livres ativados pela ao das
acil CoA sintetases (ver seo 10.4A):
cido graxo + CoA + ATP acilCoA + AMP + PP i

289

290

Motta

Bioqumica

PO23
O
CH2

CH

OH

OH

CH 2

Glicerol-3-fosfato

O
R1

SCoA
Glicerol-3-fosfato-aciltransferase

HSCoA
O
R2

SCoA
Glicerol-3-fosfato-aciltransferase

HSCoA

PO23
O
CH2

CH

O C

R1

CH 2

Fosfatidato

R2

Fosfatidato-fosfatase

Pi

OH

O
R3

CH2

CH

O C

R1

CH 2
Diacilglicerol
O

R2

SCoA
Diacilglicerol-aciltransferase

HSCoA
CH2

CH

CH 2

C O C

OC

R1

R2

Triacilglicerol

R3

A primeira etapa na biossntese dos triacilgliceris a acilao


dos dois grupos hidroxila livres do glicerol 3 fosfato por duas
molculas de acil CoA graxo para formar diacilglicerol 3 fosfato
(fosfatidato
ou
cido
fosfatdico)
em
presena
da
glicerol 3 fosfato aciltransferase.
converte
o
A
enzima
fosfatidato fosfatase
diacilglicerol 3 fosfato (fosfatidato) em 1,2 diacilglicerol.

10 Metabolismo dos lipdeos

O fosfatidato e o 1,2 diacilglicerol so precursores de


triacilgliceris e de glicerofosfolipdeos.
Na etapa final da biossntese de triacilgliceris ocorre a acilao
do
1,2 diacilglicerol
por
meio
da
da
posio
sn 3
diacilglicerol aciltransferase.

Glicose

Fgado
Glicerol
ATP
ADP

Glicerol
cinase

Clulas
adiposas

Diidroxiacetona
fosfato
NADH
NAD+

Glicerol-3-P
2 Acil-CoA
Diacilglicerol-3-fosfato (fosfatidato)
Pi
Diacilglicerol
Acil-CoA

Fgado
VLDL
sangnea

Triacilglicerol
Clulas
adiposas
Armazenamento
de gordura
Figura 10.9
Viso geral da biossntese dos triacilgliceris. O glicerol 3 f osfato
proveniente do glicerol no fgado e da diidroxiacetona fosfato no tecido
adiposo.

G. Regulao do metabolismo dos cidos graxos


Mecanismos de curta e longa durao esto envolvidos na
regulao do metabolismo dos cidos graxos. Na regulao de curta
durao (medida em minutos) a atividade de muitas enzimas-chave
so modificadas por hormnios. Por exemplo, o glucagon e a
adrenalina (liberados quando as reservas energticas esto baixas ou
quando h um aumento de consumo) estimulam a fosforilao de
vrias enzimas. A fosforilao da lipase hormnio-sensvel presente
nos adipcitos, ativa a hidrlise de triacilglicerol. (A liberao de
noradrenalina dos neurnios no sistema nervoso simptico e do
hormnio do crescimento da hipfise tambm ativa a lipase
hormnio sensvel). Subseqentemente, os cidos graxos so
liberados para o sangue. Os hormnios tambm regulam a utilizao
dos
cidos
graxos
pelos
tecidos.
Por
exemplo,
a
acetil CoA carboxilase inibida pelo glucagon. Em baixas
concentraes de malonil CoA, a sntese de cidos graxos reduzida.
Como a malonil CoA inibe a atividade da carnitina acil transferase

291

292

Motta

Bioqumica

I, os cidos graxos podem ser transportados para a mitocndria, onde


so degradados para gerar energia.
O efeito da insulina sobre o metabolismo dos cidos graxos
oposta aos dos hormnios glucagon e adrenalina. A secreo de
insulina em resposta a elevados nveis de glicose sangnea estimula
a lipognese. A insulina induz a sntese de cidos graxos pela
fosforilao
da
acetil CoA carboxilase
por
um
processo
independente do mecanismo da protena-cinase dependente de AMPc.
A liplise simultnea evitada pela insulina por inibio da ativao
da protena-cinase mediada por AMPc. O processo provoca a
desfosforilao (portanto, a inativao) da lipase hormnio-sensvel.

10.6 Metabolismo de lipdeos de membrana


Os lipdeos de membranas celulares so
principalmente por fosfolipdeos e esfingolipdeos.

compostos

A. Metabolismo dos fosfolipdeos


A biossntese de fosfolipdeos ocorre primariamente na superfcie
do retculo endoplasmtico liso, apesar de algumas enzimas tambm
estarem presentes no complexo de Golgi. Como cada enzima uma
protena associada membrana com seu stio ativo voltado para o
citosol, a biossntese dos fosfolipdeos ocorre na interface da
membrana do retculo plasmtico e o citosol. A composio de cidos
graxos dos fosfolipdeos altera discretamente aps a sua sntese.
(Tipicamente, os cidos graxos insaturados substituem os cidos
graxos saturados originais incorporados durante a sntese). Parte do
remodelamento

executada
por
certas
fosfolipases
e
acil transferases. Provavelmente, o processo permite a clula ajustar
a fluidez de suas membranas.
As snteses da fosfatidiletanolamina e fosfatidilcolina so
similares. A sntese da fosfatidiletanolamina inicia no citoplasma
quando a etanolamina entra na clula e ento imediatamente
fosforilada. Subseqentemente, a fosfoetanolamina reage com a CTP
(trifosfato de citidina) para formar o intermedirio ativado
CDP etanolamina. Vrios nucleotdeos servem como carreadores de
alta energia para molculas especficas. Os derivados CDP tm
importante papel na transferncia de grupos cabea polar na sntese
de
fosfoglicerdeo. A
CDP etanolamina
convertida a
fosfatidiletanolamina quando reage com o diacilglicerol (DAG). A
reao catalisada por uma enzima no retculo endoplasmtico.
A biossntese da fosfatidilcolina similar aquela da
fosfatidiletanolamina. A colina necessria nessa via obtida da dieta.
Entretanto, a fosfatidilcolina tambm sintetizada no fgado a partir
da fosfatidiletanolamina. A fosfatidiletanolamina metilada em trs
etapas pela enzima fosfatidiletanolamina N metiltransferase para
formar o produto trimetilado, a fosfatidilcolina. O doador de metila
a S Adenosilmetionina (SAM) (ver Seo 11.8.A).

10 Metabolismo dos lipdeos

HO

CH 2

NX +3

CH 2

Etanolamina/Colina
ATP
ADP
O
O

CH2

NX +3

CH2

O
Fosfoetanolamina/Fosfocolina
CTP
PPi
O
Citidina

2 Pi

O
O

P
O

CH 2

NX 3+

CH2

CTP-Etanolamina/CDP-Colina

OH
O

CH2

CH

O C O

R1

CH2

R2
Diacilglicerol

CMP
O
O

CH2

CH2

NX +3

O
CH2

CH

C O C
R1

CH2
O

R2
Fosfatidiletanolamina/Fosfatidilcolina

Figura 10.10
Sntese da fosfatidiletanolamina
etanolalamina e CH 3 na colina.

fosfatidilserina.

A fofatidilserina gerada em reao na qual


fosfatidiletanolamina substituda pela serina. A
por uma enzima do retculo endoplasmtico,
mitocndria,
a
fosfatidilserina
pode
ser
fosfatidiletanolamina por descarboxilao.

na

a etanolamina da
reao, catalisada
reversvel. Na
convertida
em

293

294

Motta

Bioqumica

O
O

CH 2

CH2

NH 3+

O
CH2

CH

CH2

C O C O
R1

R2
Fosfatidiletanolamina
HO

CH2

CH2

COO

NH +3
Serina

HO

P HO
O

CH

NH +3

CH2

CH

COO

NH 3+

O
CH2

CH 2

Etanolamina

O
O

CH2

CH2

C O C O
R1

R2
Fosfatidilserina

Figura 10.11
Sntese da fosfatidilserina

O fosfatidilinositol sintetizado
CDP diacilglicerol com o inositol.

pela

condensao

de

10 Metabolismo dos lipdeos

O
O

O
CH2

CH

CH 2

O C O

R1

R2
Fosfatidato
CTP
PPi
O

O
O

CH

Citidina

O
CH2

2 Pi

CH2

C O C O
R1

R2
CDP-Diacilglicerol

HO
H

OH

OH

OH

HO

H
OH

H
Inositol

CMP
H

O
O

O
CH2

CH

C O C
R1

CH2

OH
H

OH
OH
H

HO

OH

R2
Fosfatidilinositol

Figura 10.12
Sntese do fosfatidilinositol

O turnover dos fosfolipdeos rpido. Por exemplo, em clulas


animais, cerca de duas divises celulares so necessrias para a

295

296

Motta

Bioqumica

substituio de metade do nmero total de molculas de


fosfolipdeos. Os fosfoglicerdeos so degradados pelas fosfolipases.
As fosfolipases catalisam o rompimento de ligaes especficas em
molculas de fosfoglicerdeos e so denominadas de acordo com a
ligao clivada. As fosfolipases A 1 e A 2 , que hidrolizam as ligaes
ster dos fosfoglicerdeos em C1 e C2, respectivamente, contribuem
para a remodelao fosfolipdica descrita.
B. Metabolismo dos esfingolipdeos
Os esfingolipdeos em animais possuem ceramida, um derivado
do amino lcool esfingosina. A sntese da ceramina inicia com a
condensao de palmitoil CoA com a serina para formar 3cetoesfinganina.
A
reao

catalisada
pela
uma
enzima
3 cetoesfinganina sintase,
piridoxal 5 fosfato dependente.
A
3 cetoesfinganina

subseqentemente reduzida pelo NADPH para formar esfinganina.


Em processo de duas etapas envolvendo a acil CoA e FADH 2 , a
esfinganina convertida a ceramida. A esfingomielina formada
quando a ceramida reage com a fosfatidilcolina. (Em reao
alternativa, a CDP colina usada em lugar da fosfatidilcolina).
Quando a ceramida reage com com a UDP-glicose, a glicosilceramida
(um
cerebrosdeo
comum,
s
vezes
denominado
como
glicosilcerebrosdeo) produzida. O galactocerebrosdeo, um
precursor de outros glicolipdeos, sintetizado pela reao da
ceramida com a UDP-galactose. Os sulfatdeos so sintetizados
quando os galactocerebrosdeos reagem com a molcula doadora de
sulfato a 3 fosfoadenosina 5 fosfosulfato (PAPS). A transferncia
de grupos sulfato catalisada por uma sulfotransferase microssomal.
Os esfingolipdeos so degradados nos lisossomos. As doenas
chamadas esfingolipidoses, so provocadas pela falta ou defeito das
enzimas necessrias para a degradao dessas molculas.

10.7 Metabolismo dos isoprenides


Os isoprenides ocorrem em todas as clulas eucariticas. Apesar
da grande diversidade das molculas isoprenides, os mecanismos
pelas quais diferentes espcies so sintetizadas so similares. De fato,
a fase inicial da sntese isoprenide (sntese do isopentenil
pirofosfato) parece ser idntica em todas as espcies investigadas.
Pela sua importncia na biologia humana, o colesterol recebeu
enorme ateno dos pesquisadores. Por essa razo, o metabolismo do
colesterol melhor compreendido que qualquer outra molcula de
isoprenide.
A. Biossntese do colesterol
O colesterol do organismo derivado de duas fontes: dieta e
sntese de novo. Quando a dieta fornece colesterol suficiente, a
sntese inibida. A biossntese do colesterol estimulada quando a
dieta tem pouco colesterol.
Apesar de quase todos os tecidos poderem produzir colesterol (p.
ex., glndulas supra renais, ovrios, testculos, pele e intestino), a

10 Metabolismo dos lipdeos

maior parte da sntese ocorre no fgado. A sntese do colesterol pode


ser dividida em trs etapas:

Sntese de HMG CoA ( -hidrxi metilglutaril CoA) a partir


de acetil CoA.

Converso do HMG CoA a esqualeno.

Converso do esqualeno em colesterol.

1. Sntese de HMG CoA a partir do acetato. No citosol duas


molculas de acetil CoA condensam-se para formar acetoacetil CoA
(tambm conhecida como cetobutiril CoA) em reao catalisada
pela tiolase.
Na reao seguinte, o acetoacetil CoA condensa com uma
para
formar
terceira
molcula
de
acetil CoA
hidrxi metilglutaril CoA (HMG CoA). A reao catalisada
pela hidrxi metilglutaril CoA sintase (HMG CoA sintase).
Na mitocndria, o HMG CoA um intermedirio para a sntese de
corpos cetnicos.
2. Converso do HMG CoA a esqualeno. A etapa seguinte da
sntese do colesterol inicia com a reduo da HMG CoA para formar
mevalonato (um composto de 6C) pela ao da HMG CoA redutase.
O NADPH o agente redutor.
A HMG CoA redutase a enzima limitante da velocidade de
sntese de colesterol. Acmulo de colesterol na clula proveniente
tanto da sntese endgena como da dieta ou degradao, reduz a
atividade da HMG CoA redutase de dois modos: (a) inibe a
atividade da enzima e (b) aumenta a degradao da enzima existente.
A atividade e a concentrao da HMG CoA redutase, localizada na
superfcie citoplasmtica do retculo endoplasmtico, afetada em
vrios graus pela concentrao de produtos intermedirios da via (p.
ex.,, mevalonato, farnesil, esqualeno e 7 diidrocolesterol). O
mecanismo preciso pelo qual essa importante enzima regulada,
entretanto, permanece obscuro.

297

298

Motta

Bioqumica

O
CH3

SCoA

CH3

Acetil-CoA

SCoA

Tiolase

SCoA

O
CH3

Acetil-CoA

CH2

SCoA

Acetoacetil-SCoA
O
CH3

SCoA

SCoA

HMG-CoA-sintase

OH
OOC

CH2

CH2

SCoA

CH3
3-Hidroxi-3-metiglutaril-CoA (HMG-CoA)
2 NADPH
HMG-CoA-redutase

2 NADP + + HSCoA

OH
OOC

CH2

CH2

CH2

OH

CH3
Mevalonato

Em uma srie de reaes citoplasmticas, o mevalonato


convertido a farnesil pirofosfato. A mevalonato cinase catalisa a
sntese do fosfomevalonato. Uma segunda reao de fosforilao
catalisada
pela
fosfomevalonato cinase
produz
5 pirofosfomevalonato. A fosforilao aumenta significativamente a
solubilidade das molculas hidrocarbnicas no citoplasma.
O 5 pirofosfomevalonato transformado em isopentenil
pirofosfato em processo envolvendo descarboxilao e desidratao:
O
CH2

C
CH3

CH2

CH2

P
O

Isopentenil pirofosfato

O
O

P
O

10 Metabolismo dos lipdeos

O isopentenil pirofosfato convertido a seguir em seu ismero


dimetilalil pirofosfato pela isopentenil pirofosfato isomerase. (Um
grupo CH 2 =CH CH 2 - sobre uma molcula orgnica muitas vezes
chamadas de grupo alil).
O geranil pirofosfato produzido durante uma reao de
condensao entre isopentenil pirofosfato e dimetilalil pirofosfato.
O pirofosfato tambm um produto da reao e duas reaes
subseqentemente. A geranil transferase catalisa a reao de
condensao entre o geranil pirofosfato e isopentenil pirofosfato
que forma farnesil pirofosfato. O esqualeno sintetizado quando a
(uma
enzima
microssomal)
catalisa a
farnesil transferase
condensao de duas molculas de farnesil pirofosfato. A
farnesil transferase as vezes chamada de esqualeno sintase. Essa
reao requer NADPH como um doador de eltrons.
3. Converso do esqualeno a colesterol. A ltima fase da via
biossinttica do colesterol inicia com a ligao do esqualeno a uma
protena transportadora especfica chamada protena transportadora
de esterol. A converso do esqualeno a lanosterol ocorre enquanto os
intermedirios
esto
ligados
a
essa
protena.
A
esqualeno monoxigenase acrescenta um tomo de oxignio do O 2 na
extremidade da cadeia do esqualeno, produzindo um epxido e,
subseqentemente,
a
ciclizao
(esqualeno 2,3 epxido lanosterol ciclase) que resulta na formao
de
lanosterol
localizada
nos
microssomos.
A
esqualeno monoxigenase requer NADPH e FAD para a sua atividade.
Aps sua sntese, o lanosterol (que contm os quatro anis do ncleo
esteride) liga-se a uma segunda protena transportadora, que
permanece ligada durante as reaes restantes. As atividades das
enzimas que catalisam as restantes 20 reaes necessrias para a
converso do lanosterol a colesterol esto embebidas nas membranas
microssomiais. Em uma srie de transformaes envolvendo NADPH
e algum oxignio, o lanosterol convertido a 7 diidrocolesterol. Esse
produto ento reduzido pelo NADPH para formar colesterol.

299

300

Motta

Bioqumica

(a)

Esqualeno

(b)

Esqualeno dobrado
(c)

Colesterol
Figura 10.13
Estrutura do esqualeno, um precursor do colesterol. (a) Esqualeno com
suas seis unidades isoprnicas, (b) uma molcula de esqualeno dobrado
antes da ciclizao e (c) colesterol, um derivado do esqualeno com C 2 7 .

B. Esterificao do colesterol
O colesterol livre pode ser esterificado para o armazenamento no
fgado ou transportado em partculas VLDL (lipoprotena de
densidade muito baixa) para outros tecidos. Em presena de
acil CoA:colesterol aciltransferase (ACAT) o cido graxo esterifica
o grupo 3OH do colesterol.

10 Metabolismo dos lipdeos

O
R

SCoA

HSCoA

Acil-CoA-colesterol
aciltransferase

HO

Colesterol

O
R

ster do colesteril

C. Transformao do colesterol em cidos biliares


De modo diferente de outras biomolculas, o colesterol e outros
esterides no so degradados em molculas menores. Em lugar
disso, o colesterol convertido em um derivado mais hidroflico para
facilitar sua excreo. O mais importante mecanismo para a
degradao e eliminao do colesterol a sntese dos cidos biliares.
A converso do colesterol a 7 hidrocolesterol, catalisada pela
colesterol 7 hidroxilase (uma enzima microssomal que requer
oxignio, NADPH e citocromo P 450 ), a etapa limitante da
velocidade na sntese de sais biliares. Nas ltimas reaes, a ligao
dupla em C5 rearranjada e reduzida, e um grupo hidroxila adicional
introduzido. Os produtos desse processo, o cido clico e cido
desoxiclico, so convertidos a sais biliares por enzimas
microssomiais que catalisam reaes de conjugao. Nas reaes de
conjugao a solubilidade de uma molcula aumentada pela
converso em um derivado que contm um grupo solvel em gua.
Amidas e steres so exemplos comuns desses derivados conjugados.
A quase totalidade dos cidos biliares esto conjugados com a glicina
ou taurina para formar cido glicoclico ou cido tauroclico,
respectivamente.

301

302

Motta

Bioqumica

O
HO

OH

CH3

CH 3

HO

OH
Colato

Os sais biliares so importantes componentes da bile, um lquido


amarelo-esverdeado produzido pelos hepatcitos que auxiliam na
digesto dos lipdeos. Alm dos sais biliares, a bile contm
colesterol, fosfolipdeos e pigmentos biliares (bilirrubina e
biliverdina) Os pigmentos biliares so produtos de degradao do
heme. Aps sua secreo para as vias biliares e armazenados na
vescula, a bile usada no intestino delgado para aumentar a absoro
das gorduras da dieta. A bile atua como agente emulsificante que
promove a quebra de grandes gotas de gordura em pores menores.
Os sais biliares tambm esto envolvidos na formao de micelas
biliares, que ajudam na absoro de gorduras e das vitaminas lipdeosolvel (A, D, E, K). A maior parte dos sais biliares reabsorvida no
leo distal (perto do final do intestino delgado). Eles entram no
sangue e retornam ao fgado, onde so re-secretados para os dutos
biliares com outros componentes biliares. O significado biolgico das
reaes de conjugao dos cidos biliares parece ser que o processo
de conjugao previne a prematura absoro dos cidos biliares no
trato biliar (dutos biliares e vescula) e intestino delgado. A
reabsoro de sais biliares no leo distal do intestino delgado
aparentemente desencadeado pelo sinal da glicina ou taurina. Estimase que as molculas de sais biliares so recicladas 18 vezes antes de
serem finalmente eliminadas.
D. Sntese de hormnios esterides
Todos os hormnios esterides so derivados do colesterol. A
reao inicial na sntese de hormnios esterides a converso do
colesterol em pregnenolona, pela desmolase, uma enzima
mitocondrial complexa composta de duas hidroxilases, uma das quais
a enzima citocromo P 450 . Aps a sntese, a pregnenolona
transportada ao retculo endoplasmtico, onde convertida a
progesterona. A pregnenolona e progesterona so precursores de
todos os hormnios esterides. Alm do papel de precursor, a
progesterona tambm atua como hormnio. O seu papel primrio
como hormnio a regulao de vrias modificaes fisiolgicas no
tero. Durante o ciclo menstrual, a progesterona produzida por
clulas especializadas no interior do ovrio. Durante a gravidez
produzida em grandes quantidades pela placenta para previr as
contraes do msculo uterino liso.
As quantidades e os tipos de esterides sintetizados em um tecido
especfico so cuidadosamente regulados. As clulas respondem a
sinais qumicos que influenciam o metabolismo dos esterides por

10 Metabolismo dos lipdeos

induo da sntese de enzimas especficas. Os mais importantes sinais


qumicos so os hormnios peptdicos secretados pela hipfise e
vrias prostaglandinas. Por exemplo, o hormnio adrenocorticotrfico
(ACTH) um hormnio peptdeo secretado pela hipfise que estimula
a sntese dos esterides adrenais. Uma das conseqncias da ligao
do ACTH aos receptores da adrenal o aumento da sntese do
17 hidroxilase e 11 hidroxilase. Em contraste, a prostaglandina
F2 inibe a induo da sntese de progesterona nos ovrios. Esse
ltimo processo estimulado pelo hormnio luteinizante (LH), uma
protena tambm produzida pela hipfise.
O processo enzimtico no qual o colesterol convertido a
esterides biologicamente ativos, tambm como o modo pelos quais
os esterides so inativados e preparados para a excreo,
compreende
um
elaborado
mecanismo
conhecido
como
biotransformao. Durante a biotransformao as mesmas (em alguns
casos similares) enzimas so tambm usadas para solubilizar o
xenobitico hidrofbico para torn-los mais facilmente excretados. A
biotransformao do colesterol em cidos biliares descrito a seguir.

10.8 Eicosanides
Os eicosanides so substncias fisiologicamente ativas que
atuam como potentes biosinalizadores produzidos na maioria dos
tecidos dos mamferos. Mediam uma grande variedade de processos
fisiolgicos, tais como, a contrao de msculos lisos, inflamao,
percepo da dor e a regulao do fluxo sangneo. Os eicosanides
tambm esto relacionados com vrias doenas como o infarto do
miocrdio e artrite reumatide. Como agem nos tecidos prximos das
clulas que os produzem, os eicosanides so chamados reguladores
autcrinos e no de hormnios que so transportados pela corrente
sangnea at os stios de ao.
A maioria dos eicosanides so derivados do cido araquidnico
(20:4 5,8,11,14 ), sintetizado a partir do linoleato pela adio de uma
unidade de trs carbonos seguida pela descarboxilao e
dessaturao.

303

304

Motta

Bioqumica

COO
Linoleato

18:2 (

9,12

Dessaturao

-Linoleato

COO
18:3 (

6,9,12

Alongamento

COO
Eicostrienoato

20:3 (

8,11,14

)
COO

Araquidonato

20:4 (

5,8,11,14

Quase todo cido araquidnico armazenado nas membranas


celulares como steres no C2 do glicerol nos fosfoglicerdeos. A
produo de eicosanides inicia aps a liberao do cido
araquidnico a partir de molculas de fosfolipdeos das membranas
pela ao da enzima fosfolipase A 2 ativada por estmulo hormonal e
outros. Os eicosanides, que incluem as prostaglandinas, os
tromboxanos e os leucotrienos, so ativos por curtos perodos (muitas
vezes medidos em segundos ou minutos) e produzidos em pequenas
quantidades.
A. Prostaglandinas
So derivados do cido araquidnico que contm um anel de
ciclopentano com grupos hidrxi em C11 e C15. As molculas que
pertencem a srie E das prostaglandinas tem um grupo carbonila em
C9, enquanto as molculas da srie F tem um grupo OH na mesma
posio. O nmero subescrito no nome das prostaglandinas indica o
nmero de ligaes duplas na molcula. A srie 2, derivada do cido
araquidnico, parece ser o grupo mais importante de prostaglandinas
em humanos.
No retculo endoplasmtico liso, as enzimas cicloxigenase (COX)
e peroxidase catalisam a transformao do araquidonato em PGH 2 , o
precursor de muitas prostaglandinas e tromboxanos. O PGH 2 sofre
modificaes adicionais, dependendo do tecido.

10 Metabolismo dos lipdeos

COO

Araquidonato
2 O2

Ciclooxigenase

COO

O
OOH
Peroxidase

COO

O
OH

As prostaglandinas esto envolvidas em uma grande variedade de


funes de controle. Por exemplo, as prostaglandinas promovem a
inflamao e processos que produzem dor e febre. Atuam nos
processos reprodutivos (exemplo, ovulao e contraes uterinas) e
digesto (exemplo, inibio da secreo gstrica). Aes biolgicas
adicionais de algumas prostaglandinas so mostradas na Figura 10.15.
O bloqueio da produo de prostaglandinas pela inibio das
enzimas de sntese implica no alvio da dor e da inflamao mediadas
pelas prostaglandinas. Por exemplo, os glicocorticides exercem
importantes aes antiinflamatrias por suprimir a resposta imune por
meio da inibio da expresso de ciclooxigenase. Existem duas
formas de cicloxigenase: COX1 e COX2. A enzima COX2 pode ser
induzida em clulas inflamatrias. A supresso da sntese de COX2
por glicocorticides exerce importantes efeitos antiinflamatrios.
Vrios outros inibidores so utilizados como antiinflamatrios tais
como, a aspirina, ibuprofeno (antiinflamatrio no esteride),
paracetamol (Tylenol ), Celebrex e Vioxx .
B Tromboxanos.
So tambm derivados do cido araquidnico. Diferem de outros
eicosanides por possuir um anel cclico ter. O tromboxano A 2
(TXA 2 ), o mais proeminente membro do grupo dos eicosanides,
principalmente produzido pelas plaquetas (fragmentos celulares que
iniciam o processo de coagulao sangnea). Uma vez liberado, o
TXA 2 promove a agregao plaquetria e a vasoconstrio. A
ingesto regular de pequenas doses de aspirina reduzem a
probabilidade de infartos do miocrdio e acidentes vasculares
cerebrais pela inibio da sntese de tromboxana.
C. Leucotrienos

305

306

Motta

Bioqumica

So derivados lineares do cido araquidnico cuja sntese


iniciada por uma reao de peroxidao. Os vrios leucotrienos
diferem na posio do perxido e na natureza do grupo tioter
atacado perto do local da peroxidao. O nome leucotrienos lembra
que eles foram descobertos nos leuccitos (glbulos brancos) e
possuem um trieno (trs duplas ligaes conjugadas) em suas
estruturas. (O termo conjugado indica que as duplas ligaes
carbono-carbono so separadas por uma ligao carbono-carbono
simples). Atuam como mediadores da inflamao e nas reaes
alrgicas. Os leucotrienos LTC 4 , LTD 4 e LTE 4 foram identificados
como componentes da SRS-A (substncia de reao lenta da
anafilaxia). (O subescrito no nome do leucotrieno indica o nmero
total de ligaes duplas). Anafilaxia o tipo imediato e transitrio de
reao imunolgica (alrgica), caracterizada pela contrao dos
msculos lisos e dilatao dos capilares em decorrncia da liberao
de substncias farmacologicamente ativas (histamina, bradicinina,
serotonina e substncia de reao lenta). Durante a inflamao (uma
resposta normal leso tecidual) essas molculas aumentam a perda
de lquidos dos vasos sangneos das reas afetadas. O LTB 4 , um
potente agente quimiottico, atrai leuccitos (infection fighting).
(agentes quimiottico so tambm chamados como quimioatrativos).
Outros efeitos dos leucotrienos incluem a vasoconstrio e a
broncoconstrio (ambos causados pela contrao do msculo liso
nos vasos sangneos e das passagens de ar nos pulmes) e edema
(aumento da permeabilidade capilar que causa a perda de lquidos dos
vasos sangneos).
cido araquidnico

PGH2
PGI2

Leucotrienos

Inflamao

Broncoconstrio,
vasoconstrio,
permeabilidade capilar

Antiagregao
plaquetria

Vasodilatao

PGE 2

Contrao do
msculo liso

Vasodilatao

Figura 10.15
Aes biolgicas de algumas molculas de eicosanides

Todos os
tecidos
TXA2

Agregao
plaquetria

Vasoconstrio

PGF2

Contrao do
msculo liso

Vasoconstrio

Tecido
especfico

10 Metabolismo dos lipdeos

Resumo
1. A acetil CoA exerce papel central na maioria dos processos metablicos
relacionados aos lipdeos. Por exemplo, a acetil CoA usada na sntese
dos cidos graxos. Quando os cidos graxos so degradados para gerar
energia, o produto a acetil CoA.
2. Dependendo das necessidades energticas, as novas molculas de
gordura so empregadas para a gerao de energia ou so armazenadas
nos adipcitos. Quando as reservas de energia do organismos esto
baixas, as gorduras armazenadas so mobilizadas em processo
denominado liplise. Na liplise, os triacilgliceris so hidrolizados em
cidos graxos e glicerol. O glicerol transportado para o fgado, onde
pode ser usado na sntese de lipdeos ou glicose. A maior parte dos
cidos graxos so degradados para formar acetil CoA na mitocndria em
processo denominado oxidao. A oxidao nos peroxissomos
encurtam os cidos graxos muito longos. Outras reaes degradam cidos
graxos de cadeia mpar e insaturados. Quando o produto de degradao
dos cidos graxos (acetil CoA) est presente em excesso, so produzidos
corpos cetnicos.
3. A sntese dos cidos graxos inicia com a carboxilao da acetil CoA
para formar malonil CoA. As demais reaes da sntese dos cidos
graxos so realizadas pelo complexo cido graxos sintase. Vrias
enzimas esto disponveis para o alongamento e o processo de
dessaturao dos cidos graxos da dieta e sintetizados.
4. Aps a sntese dos fosfolipdeos na interface do sistema retculo
endotelial e citoplasma, eles so muitas vezes remodelados, ou seja, a
composio de seus cidos graxos ajustada. O turnover (degradao e
reposio) dos fosfolipdeos, mediado por fosfolipases, rpido.
5. A sntese do componente ceramida dos esfingolipdeos inicia com a
condensao do palmitoil CoA com a serina para formar
3 cetoesfingamina. Em processo de duas etapas envolvendo a acil CoA
e FADH 2 , esfinganina (formada quando a 3 cetoesfinganina reduzida
pelo NADPH) convertida a ceramida. Os esfingolipdeos so
degradados nos lisossomos.
6. As protenas translocadoras de fosfolipdeos, as protenas de troca de
protenas e as vesculas de transio esto envolvidas em um complicado
processo de sntese de membrana e entrega de componentes da membrana
para seus destinos celulares.
7. A sntese de colesterol pode ser dividida em trs etapas: formao de
HMG CoA a partir de acetil CoA, converso de HMG CoA a esqualeno
e transformao do esqualeno a colesterol. O colesterol o precursor de
todos os hormnios esterides e de sais biliares. Os sais biliares so
usados para emulsificar a gordura da dieta.
8. A primeira etapa na sntese dos eicosanides a liberao do cido
araquidnico do C2 do glicerol das molculas de fosfoglicerdeos da
membrana. A ciclooxigenase converte o cido araquidnico em PGG 2 ,
que um precursor das prostaglandinas e tromboxanos. A lipoxigenase
converte o cido araquidnico em precursores dos leucotrienos.

Referncias
HORTON, H. R., MORAN, L. A., OCHS, R. S., RAWN, J. D., SCRIMGEOUR,
K. G. Principles of biochemistry. 3 ed. Upper Saddle River: Prentice Hall,
2002. p. 264-303.

307

308

Motta

Bioqumica
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed.
New York: McGraw-Hill, 2003. p. 373-416.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So
Paulo: Sarvier, 2002. p. 599-638.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre: Artmed, 2000. p. 562-610.

11
Metabolismo do Nitrognio

O nitrognio um elemento essencial encontrado em protenas, em


cidos nuclicos e em outras biomolculas. Apesar do importante papel que
exerce nos organismos vivos, o nitrognio utilizado biologicamente
escasso. Embora o nitrognio molecular (N 2 ) seja abundante na biosfera,
ele quase inerte quimicamente. Portanto, a converso do N 2 para a forma
utilizvel necessita gasto de energia. Certos microorganismos podem
reduzir o N 2 para formar NH 3 (amnia). As plantas e os microorganismos
absorvem NH 3 e NO3 (on nitrato), o produto de oxidao da amnia. As
duas molculas so usadas para a sntese de biomolculas contendo
nitrognio. Os animais no sintetizam molculas contendo nitrognio a
partir de amnia e nitrato. Em lugar disso, eles obtm nitrognio
orgnico, (principalmente aminocidos) da dieta. Em uma complexa srie
de vias, os animais usam o nitrognio dos aminocidos para sintetizar
vrios compostos orgnicos.
O nitrognio encontrado em inmeras biomolculas, como por
exemplo, aminocidos, bases nitrogenadas, porfirinas e alguns lipdeos.
Muitos metablitos contendo nitrognio so necessrios em pequenas
quantidades (ex.: aminas biognicas e glutationa).

11.1 Fixao de nitrognio


Vrias circunstncias limitam a utilizao do nitrognio atmosfrico
nos seres vivos. Devido a estabilidade qumica do nitrognio molecular
atmosfrico, a reduo do N 2 at on amnio ( NH +4 ) (denominado fixao
do nitrognio) necessita de grande quantidade de energia. Por exemplo, no
mnimo 16 ATP so necessrios para reduzir um N 2 a duas NH 3 . Alm
disso, somente alguns procariotos podem fixar nitrognio. Entre eles
esto as bactrias (Azotobacter vinelendii e Clostridium pasteurianum), as
cianobactrias (Nostoc muscorum e Anabaena azollae) e as bactrias
simbiontes (vrias espcies de Rhizobium) localizadas em ndulos de razes
de plantas leguminosas como soja e alfafa.
As espcies fixadoras de nitrognio possuem um complexo da
nitrogenase, cuja estrutura consiste de duas protenas chamadas
dinitrogenase e dinitrogenaseredutase. A dinitrogenase (MoFeprotena)
um 2 2 -heterotetrmero que contm dois tomos de molibdnio (Mo) e 30
tomos de ferro. A dinitrogenaseredutase (Feprotena) um dmero de

319

320

MOTTA

Bioqumica

subunidades idnticas. O complexo da nitrogenase catalisa a produo de


amnia a partir do nitrognio molecular:
N 2 + 8H + + 8e + 16 ATP + 16 H 2 O

2NH 3 + H 2 + 16ADP + 16P i

So necessrios oito eltrons para a reao: seis para a reduo do N 2 e


dois para produzir H 2 . Os dois componentes do complexo da nitrogenase
so inativados irreversivelmente pelo oxignio e, porisso, muitas bactrias
fixadoras de oxignio ficam confinadas em ambientes anaerbicos.
Em condies fisiolgicas, a amnia existe principalmente na forma
protonada, NH +4 (on amnio) (pK 9,25).
A. Nitrificao e desnitrificao
O nitrognio biologicamente til tambm obtido a partir do on
nitrato ( NO3 ) presente na gua e no solo. O nitrato reduzido a on amnio
pelas plantas, fungos e muitas bactrias. Primeiro, a nitratoredutase
catalisa a reduo de dois eltrons do on nitrato a on nitrito ( NO 2 ):
NO3 + 2H + 2 e
+

NO 2 + H 2 O

A seguir, a nitritoredutase converte o nitrito a on amnio:


NO 2 + 8H + 6e
+

NH +4 + 2H 2 O

O nitrato tambm produzido por certas bactrias que oxidam o NH +4 a


NO 2

e a seguir at NO3 , em processo chamado nitrificao. Outros


organismos convertem o on nitrato e o on nitrito de volta a N 2 para a
atmosfera, em mecanismo chamado desnitrificao. Todas essas reaes
constituem o ciclo do nitrognio. (Figura 11.1).
Desnitrificao

N2

Nitrato
NO3
Fixao do
nitrognio

Nitrato
redutase

Nitrogenase

Nitrito
NO2
Nitrito
redutase

NH4+

Aminocidos
Nucleotdeos
Fosfolipdeos
Figura 11.1

Nitrificao

11 Metabolismo do nitrognio
Ciclo do nitrognio. A fixao do nitrognio converte N 2 em on amnio til
biologicamente. O nitrato tambm pode ser convertido a on amnio. A amnia
transformada de volta a N 2 por nitrificao seguida por desnitrificao.

B. Incorporao de ons amnio em aminocidos


Existem duas vias principais para a incorporao de ons amnio para
formar aminocidos e, a seguir, outras biomolculas: (1) aminao redutiva
de cetocidos e (2) formao de amidas de cido asprtico e de cido
glutmico com a subsequente transferncia do nitrognio amida para
formar outros aminocidos.
A glutamato desidrogenase, uma enzima encontrada na mitocndria e
citoplasma de clulas eucariticas e em algumas bactrias, catalisa a
incorporao de ons amnio ao cetoglutarato:
COO
C

COO

NAD(P)H,H +
NADP

CH2

NH 4+

CH2

H3 N

CH2

Glutamato-desidrogenase

COO
-Cetoglutarato

H2 O

CH2
COO
Glutamato

Em eucariotos, a desidrogenase tambm libera ons amnio para a


excreo de nitrognio a partir do glutamato proveniente, sobretudo, das
reaes de transaminao. Como a reao reversvel, o excesso de amnia
promove a sntese de glutamato. A glutamatodesidrogenase uma enzima
alostrica ativada pelo ADP e o GDP, e inibida pelo ATP e o GTP.
Os ons amnio so tambm incorporados ao glutamato para formar
glutamina em presena da glutamina sintetase, enzima encontrada em
todos os organismos. Nos microrganismos, um ponto crtico de entrada
para a fixao de nitrognio. Em animais, a principal via de converso de
ons amnio compostos altamente txicos em glutamina para ser
transportada no sangue. Na primeira etapa da reao, o ATP doa um grupo
fosforil para o glutamato. A seguir, os ons amnio reagem com o
intermedirio (glutamilfosfato), deslocando o P i para produzir
glutamina.
COO
+

H3 N

COO
+

CH2

H3 N
ATP

ADP

CH2

CH2

H3 N
NH 4+

Pi

Glutamato

CH2

C
O

C
CH2

CH2

C
O

COO
+

C
OPO23

-Glutamil-fosfato

NH2

Glutamina

O nome sintetase indica que o ATP consumido na reao.


O crebro, uma fonte rica em glutaminasintetase, especialmente
sensvel aos efeitos txicos de ons amnio. As clulas do crebro
convertem ons amnio em glutamina, uma molcula neutra e notxica.

321

322

MOTTA

Bioqumica

A glutamina , ento, transportada ao fgado, onde ocorre a produo de


compostos nitrogenados para a excreo.
Em muitos organismos, a glutamina e o glutamato esto presentes em
concentraes mais elevadas que outros aminocidos, o que consistente
com seu papel de carreador de aminocidos. Sendo assim, a atividade da
glutaminasintetase fortemente regulada para manter o suprimento
adequado de aminocidos. Por exemplo, a glutaminasintetase
dodecamrica da E. Coli regulada alostericamente e por modificao
covalente.
Em bactrias e vegetais, a enzima glutamato sintase catalisa a
aminao redutiva do cetoglutarato empregando a glutamina como
doadora de nitrognio e o NADH 2 como doador de eltrons (exemplo, em
razes e sementes) e, em algumas plantas, a ferrodoxina reduzida (exemplo,
em folhas):

COO

COO
O

H3 N

CH2

CH2

CH2

CH2

COO

COO
+

H3 N

COO
+

CH2

Glutamato
sintase

C
O

-Cetoglutarato

NADPH
+
NADP +
H+

H3 N
+

CH2

CH2

CH2

COO

COO

NH2

Glutamina

Glutamato

(as reaes catalisadas pelas sintases no requerem ATP). O resultado


das reaes da glutaminasintetase e glutamatosintase
Cetoglutarato + NH +4 + NADPH + ATP
glutamato + NADP + + ADP + P i
Em resumo, a ao combinada das duas reaes incorpora o nitrognio
(on amnio) em um composto orgnico (cetoglutarato, um intermedirio
do ciclo do cido ctrico) para produzir aminocidos (glutamato). Os
mamferos no possuem a glutamatosintase, mesmo assim, as
concentraes de glutamato nesses organismos so relativamente altas
porque o aminocido produzido por outras reaes.

11.2 Transaminao
As transaminases (tambm chamadas aminotransferases) catalisam a
transferncia reversivel de grupos amino de um aminocido para um
cetocido para produzir um cetocido do aminocido original e um
novo aminocido. Por exemplo:

11 Metabolismo do nitrognio

COO
+

H3 N

COO

CH2

COO
+

CH2

Transaminase

COO

CH2

CH3

CH2

COO

H3 N

C
CH3

COO

Glutamato
(Aminocido)

Piruvato
( -Cetocido)

-Cetoglutarato
( -Cetocido)

Alanina
(Aminocido)

As transaminases requerem piridoxal5fosfato (PLP) como


coenzima. Este composto a forma fosforilada da piridoxina (vitamina B 6 ):
H
2

O3 P

5
H2 C

5
6

4
C

H2 C
OH

4
1+

OH

O
HO

OH

H2 C

3
2

N
H

CH3

N
H

CH3

Pirodoxina
(vitamina B6 )

Pirodoxal-5fosfato (PLP)

A PLP est covalentemente ligada ao stio ativo da enzima via base de


Schiff (RCH=NR, uma aldimina) ligada ao grupo -amino do resduo de
lisina:
Enzima
CH2
CH2
CH2
CH2
H
C
2

O3 PO

N+

H
O

CH2
+

CH3

H
Enzima-PLP
(base de Schiff)

Foras estabilizadoras adicionais incluem interaes inicas entre as


cadeias laterais de aminocidos e o anel piridinium e o grupo fosfato.
As reaes de transaminao exercem papeis centrais tanto na sntese
como degradao dos aminocidos. Alm disso, essas reaes envolvem a
interconverso de aminocidos a piruvato ou cidos dicarboxlicos, e atuam
como ponte entre o metabolismo dos aminocidos e os carboidratos.

323

324

MOTTA

Bioqumica

H
R

O
C

Enzima

H
OH

H NH3
-Aminocido
H

N+

H
Piridoxal-fosfato

H2 O

H2 O

CH3

H N
HC
H

O
O

Base de Schiff

O
N+

CH3

H+

H+

H
O

H
R

H N+
HC
H

O
O

H N+
HC
H

O
N+

N+

CH3

H
Cabnion

CH3

H
Intermedirio quinonide
H+

H+

H
R

H N
H2 C
H
+

O
O

O
N+

CH3

H
H2 O

H2 O

NH2
R

CH2

O
O

H
-Cetocido

Piridoxamina-fosfato

O
N+
H

Figura 11.2
Papel do piridoxal -5-fosfato na transaminao.

CH3

11 Metabolismo do nitrognio

11.3 Aminocidos essencias e noessencias


Os aminocidos diferem de outras classes de biomolculas pois cada
membro sintetizado por via nica. Apesar da diversidade das vias
sintticas, o esqueleto carbonado de cada aminocido derivado dos
mesmos intermedirios metablicos: o piruvato, o oxalacetato, o
cetoglutarato e o 3fosfoglicerato. A tirosina, sintetizada a partir da
fenilalanina, uma exceo.
Os aminocidos sintetizados em quantidades suficientes por mamferos
a partir da amnia e de esqueletos carbonados, so denominados
noessenciais; ou seja, eles esto disponveis para as clulas mesmo
quando no includos na dieta. Por outro lado, os aminocidos essenciais
so aqueles no sintetizados ou sintetizados em velocidade inadequada s
necessidades metablicas do organismo e, portanto, devem ser ingeridos na
dieta. Os aminocidos essenciais e noessenciais esto listados na Tabela
11.1.
Tabela 11.1 Aminocidos essenciais e no essenciais no homem
Essenciais

No essenciais

Arginina

Alanina

Histidina*

Asparagina

Isoleucina

Aspartato

Leucina

Cistena

Lisina

Glutamato

Metionina

Glutamina

Fenilalanina

Glicina

Treonina

Hidroxiprolina

Triptofano

Prolina

Valina

Serina
Tirosina

* A histidina essencial no mnimo at os 12 anos de idade


As fontes exgenas de protenas diferem consideravelmente em suas
propores de aminocidos essenciais. Em geral, os aminocidos essncias
so encontrados em maior quantidade em protenas de origem animal
(exemplo, carne, leite e ovos). As protenas vegetais muitas vezes so
carentes de um ou mais desses aminocidos. Por exemplo, a gliadina
(protena do trigo) tem quantidade insuficiente de lisina enquanto a zena
(protena do milho) tem baixo contedo de lisina e triptofano. Como as
protenas vegetais diferem em sua composio de aminocidos, possvel
obter aminocidos essenciais em quantidades apropriadas a partir da
combinao de diversos vegetais. Por exemplo, o feijo (metionina baixa)
associado com cereais (lisina baixa).
As rotas biossintticas para a produo de aminocidos noessenciais
so descritas a seguir. Ao considerar estes processos, deve-se compreender
que se algum destes aminocidos for excluido da dieta, pode ocorrer uma
elevada demanda de aminocidos essenciais, pois parte destes ltimos so
utilizados na sntese de noessenciais. Por exemplo, a tirosina
classificada como noessencial pois formada a partir da fenilalanina.
Entretanto, na ausncia de tirosina exgena, a quantidade de fenilalanina
necessria aumenta significativamente.

325

326

MOTTA

Bioqumica

A. Biossntese de aminocidos noessenciais


Em mamferos, os aminocidos noessenciais so sintetizados a partir
de vrias fontes, tais como, os aminocidos essenciais (tirosina por
hidroxilao da fenilalanina) ou de intermedirios metablicos comuns: o
piruvato, o oxalacetato, o cetoglutarato e o 3fosfoglicerato.
Alguns aminocidos so formados por reaes de transaminao. Por
essa via, a alanina produzida a partir do piruvato, o glutamato a partir do
cetoglutarato e o aspartato a partir do oxaloacetato. A
glutaminasintetase catalisa a amidao do glutamato para produzir
glutamina. A asparaginasintetase, emprega a glutamina como doador de
grupo amino e converte o aspartato em asparagina:
Glutamina
+
ATP

COO
+

H3 N

Glutamato
+
AMP + PPi

COO
+

H3 N

CH2

CH2

Asparagina-sintetase

C
O
NH2
Asparagina

O O
Aspartato

Somente trs intermedirios metablicos (piruvato, oxaloacetato e


cetoglutarato) fornecem cinco dos dez aminocidos noessenciais por
reaes de transaminao e amidao.
Vias mais complexas convertem glutamato em prolina e arginina:
COO
+

H3 N

CH2
CH2
COO
+

H3 N

CH2

NH

CH2
CH2
COO

C
+

H2 N

NH2

Arginina

Glutamato

COO
C
HN

H
CH2

H2 C CH2
Prolina

A serina tem como precursor a 3fosfoglicerato, um intermedirio da


gliclise. A sntese ocorre em trs reaes:

11 Metabolismo do nitrognio

NAD+

COO
H

NADH

OH

CH2 OPO23

Glutamato
-Cetoglutarato

COO
OH

Pi

COO
+

H3 N

CH2 OPO23

COO
+

H3 N

CH2 OPO 23

CH2
OH

3-Fosfoglicerato

3-Fosfohidroxipiruvato

3-Fosfosserina

Serina

A serina, um aminocido com trs carbonos, produz glicina com dois


carbonos em reao catalisada pela serinahidroximetiltransferase (a
reao reversa converte glicina em serina). A enzima emprega um
mecanismo dependente de piridoxal5fosfato (PLP) para remover o
grupo hidroximetil (CH 2 OH) ligado ao carbono da serina; o fragmento
de um carbono ento transferido para o cofator tetrahidrofolato (THF)
(ver Seo 11.11.b).
Tetraidrofolato
Metileno-tetraidrofolato

COO
+

H3 N

CH2 OH

COO
+

H3 N

Serina-hidroximetil-transferase

Serina

Glicina

O esqueleto carbonado da serina utilizado para a sntese de cistena.


A reao envolve a condensao da serina com a homocistena para formar
cistationina que por clivagem produz cistena, cetobutirato e amnia.
Estas reaes so catalisadas pela cistationinasintetase e cistationina
liase, respectivamente:
COO
+

H3 N

COO
+

H + H3 N

H2 O

COO
+

H3 N

COO
+

H3 N

H2 O

NH 4+

H3 N

COO

COO

H + O

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

OH

CH2

CH2

SH

CH3

SH
Serina

Homocistena

Cistationina

A homocistena derivada da metionina pela formao do


intermedirio Sadenosilmetionina. A transferncia do grupo metila deste
ltimo, libera a Sadenosilhomocistena, que clivada homocistena.
Enquanto os carbonos da cistena so derivados da serina, o enxfre
obtido unicamente a partir da metionina (em processo denominado
transsulfurao). Restrio de cistena na dieta deve ser compensada por
um aumento na ingesto de metionina.
B. Biossntese de aminocidos essencias
Os aminocidos essenciais so sintetizados por vias que necessitam
vrias etapas. Em algum ponto da evoluo, os animais perderam a
capacidade de sintetizar esses aminocidos, provavelmente porque as vias
consumiam muita energia e os compostos j existiam em alimentos. Em

Cistena

-Cetobutirato

327

328

MOTTA

Bioqumica

resumo, os humanos no sintetizam aminocidos ramificados ou aromticos


e, tambm, no incorporam enxfre em compostos como a metionina.
Foi descrito acima que a sntese da cistena em mamferos necessita um
tomo de enxfre derivado, em ltima instncia, da metionina. Em
bactrias, a sntese de metionina requer um tomo de enxfre derivado da
cistena. O enxfre proveniente do sulfeto inorgnico substitui o grupo
acetila da O acetilserina (obtida por acilao da serina) para produzir
cistena..
O
H3 C
COO
+

H3 N

C
CH2

SCoA
+

S 2 + H + CH3 COO

COO

CoASH
H3 N
OH

C
CH2

Serina

COO
+

O
O

H3 N
CH3

CH2

SH

Cistena

O-Acetilserina

A cistena doa, ento, o tomo de enxfre para a homocistena, cujo


esqueleto de quatro carbonos derivado do aspartato. A etapa final da
sntese da metionina catalisada pela metioninasintase, que adiciona
homocistena um grupo metila transportado pelo tetrahidrofolato;
COO
+

H3 N

Metil-tetraidrofolato
Tetraidrofolato

COO
+

H3 N

CH2

CH2

CH2

CH2

SH

CH3
Homocistena

Metionina

Em humanos, nveis elevados de homocistena no sangue esto


associados com a doena cardiovascular. A relao foi inicialmente
descoberta em indivduos com homocistinria, uma desordem em que o
excessso de homocistena excretada na urina. Esses indivduos
desenvolvem aterosclerose ainda crianas, provavelmente porque a
homocistena danifica diretamente as paredes dos vasos sangneos mesmo
em ausncia de teores elevados de LDL. Aumentos na ingesto de folato, a
vitamina precursora do tetraidrofolato, reduz o nvel de homocistena pela
sua converso em metionina.
O aspartato, precursor da metionina, tambm o precursor dos
aminocidos essenciais treonina e lisina. Como esses aminocidos so
derivados de outro aminocido, eles j possuem o grupo amino. Os
aminocidos alifticos (valina, leucina e isoleucina) so sintetizados por
vias que empregam o piruvato como substrato inicial. Esses aminocidos
necessitam uma etapa catalisada por transaminase (com glutamato como
substrato) para introduzir o grupo amino.
Em plantas e bactrias, a via de sntese de aminocidos aromticos
(fenilalanina, tirosina e triptofano) inicia com a condensao do
fosfoenolpiruvato (um intermedirio glicoltico com trs carbonos) com a
eritrose4fosfato (um intermedirio de quatro carbonos na via
pentosefosfato). O produto da reao com sete carbonos cicliza e sofre

11 Metabolismo do nitrognio

modificaes adicionais, incluindo a adio de mais trs carbonos do


fosfoenolpiruvato, para formar o corismato, o intermedirio comum na
sntese dos trs aminocidos aromticos.
O

O
C
OPO 23

CH2

Fosfoenolpiruvato
Pi

C
Pi

Fosfoenolpiruvato

+
O

O
O

COO
CH2

CH2
H

HO

C
H

OH

OH

OH

OH

COO

OH
Corismato

CH2 OPO23

CH2 OPO32
Eritrose-4-fosfato

Como os animais no sintetisam o corismato, essa via alvo de agentes


que podem inibir o metabolismo de plantas sem afetar os animais. Por
exemplo, o herbicida glifosato (Roundup ) compete com o segundo
fosfoenolpiruvato na via que produz corismato.
O

O
C

C
OPO32

C
CH2

CH
HN

Fosfoenolpiruvato

CH2 OPO23
Glifosato

As duas reaes finais da via biossinttica do triptofano (que tem 13


etapas) so catalisadas pela triptofanosintase, uma enzima bifuncional
com uma estrutura quaternria 2 2 . A subunidade cliva o
indol3glicerolfosfato gerando indol e gliceraldedo3fosfato. A
seguir, a subunidade adiciona serina ao indol para produzir triptofano.
COO
+

OH OH
C

C
N H
H

H3 N

Gliceraldedo
3-fosfato
CH2

Indol-3-glicerol-fosfato

Serina

H2 O

CH2

OPO23
N
H
Indol

Indol, o produto da reao da subunidade e o substrato para a reao


da subunidade , nunca se separa da enzima. Em vez disso, o intermedirio
indol se difunde entre os dois stios ativos, no escapando para o solvente
circundante. Esse fenmeno, no qual o intermedirio de duas reaes

N
H
Triptofano

329

330

MOTTA

Bioqumica

diretamente transferido de um stio ativo a outro, chamado canalizao e


aumenta a velocidade do processo ao evitar a perda de intermedirios.
Somente um dos aminocidospadro no sintetizado a partir das
principais vias que metabolizam os carboidratos: a histidina, para o qual, o
ATP fornece um nitrognio e um tomo de carbono. O glutamato e a
glutamina doam os outros dois tomos de nitrognio e os restantes cinco
carbonos so derivados do 5fosforribosilpirofosfato (PRPP).
NH 2
N

N
HC

Glutamina
Glutamato

Ribose-trifosfato

COO
+

H3 N

ATP

O3 P

CH2
C
H

H
C
HO

CH2

+
2

C
HN

H
H

HC

C
O

CH
N

Histidina

C
OH

5-Fosforribosil
pirofosfato (PRPP)

O 5fosforribosilpirofosfato tambm fonte de ribose para os


nucleotdeos. Isso sugere que a histidina talvez tenha sido um dos
primeiros aminocidos sintetizados nos primrdios da vida realizando a
transio de um metabolismo todoRNA para um RNAeprotena.

11.4 Biossntese de nucleotdeos


Os nucleotdeos so sintetizados a partir de precursores metablicos:
aminocidos, ribose5fosfato, CO 2 e NH 3 (via de novo) . O organismo
humano tambm recicla nucleotdeos a partir dos produtos de degradao
de cidos nuclicos e de co-fatores nucleotdeos (via de recuperao).
Apesar do suprimento alimentar de nucleotdeos, as vias biossintticas e de
recuperao so to eficientes que no h necessidade de purinas e
pirimidinas da dieta. Nessa seo sero examinados algumas vias
biossintticas dos nucleotdeos purnicos e pirimidnicos em mamferos.
Os nucleotdeos de purina (AMP e GMP) so sintetizados a partir da
ribose5fosfato (produto da via pentosefosfato) para formar
5fosforribosilpirofosfato (que tambm precursor da histidina):

11 Metabolismo do nitrognio

O3 P

CH2

AMP

ATP

O3 P

CH2

H
O

OH

OH

OH

Ribose-fosfato
pirofosfocinase

Ribose-5-fosfato

OH

OH

HCO3
O
Aspartato

HN
HC

CH2
H

Formil-tetraidrofolato
O3 P

P
O

5-Fosforibosil-pirofosfato

As subsequentes dez etapas da via requerem como substratos a


glutamina, a glicina, o aspartato, o bicarbonato alm de grupos formil
(HC=O) doados pelo tetraidrofolato. O produto a inosina monofosfato
(IMP), um nucleotdeo cuja base a purina hipoxantina:

Glicina
C N
C N

CH

Formil-tetraidrofolato

Glutamina

OH

OH

Inosina-monofosfato (IMP)

O IMP o substrato para duas vias curtas que produzem AMP e GMP.
Na sntese de AMP, um grupo amino do aspartato transferido para a
purina; na sntese de GMP, o glutamato a fonte do grupo amino. As
cinases ento catalisam as reaes de transferncia de grupos fosforil para
converter os nucleosdeos monofosfatos em difosfatos e, a seguir, em
trifosfatos (ATP e GTP).
A Figura 11. 3 indica que a GTP participa da sntese de AMP, enquanto
o ATP participa na sntese de GMP. Altas concentraes de ATP, portanto,
promovem a produo de GMP, enquanto altas concentraes de GTP
promovem a produo de AMP. Essa relao recproca um mecanismo de
controle da produo dos nucleotdeos adenina e guanina. (Como a maioria
dos nucleotdeos destinam-se para a sntese de DNA e RNA, eles so
necessrios em quantidades aproximadamente iguais). A via que produz
AMP e GMP tambm regulada por retroinibio em vrios pontos,
incluindo a primeira etapa, a produo de 5fosforribosilpirofosfato a
partir da ribose5fosfato, que inibida tanto pelo ADP como pelo GDP.

O
O

P
O

331

332

MOTTA

Bioqumica

Ribose-5-fosfato
IMP
Aspartato + GTP
GDP + Pi

NAD+ + H2 O
NADH + H +

OOC

CH2

CH

COO

NH
N

N
N

Adenilosuccinato

N
Ribose-5-fosfato

Ribose-5-fosfato

H
Xantosina-monofosfato (XMP)
Glutamina + ATP + H2 O

Fumarato

Glutamato + AMP + PPi

NH2
N

N
N

N
Ribose-5-fosfato
AMP

N
H2 N

N
H

N
Ribose-5-fosfato
GMP

Figura 11.3
Sntese de AMP e GMP a partir do IMP.

Em contraste aos nucleotdeos das purinas, os nucleotdeos das


pirimidinas so sintetizados como uma base subsequentemente ligada ao
5fosforribosilpirofosfato para formar o nucleotdeo. A via de seis etapas
que forma a uridina monofosfato (UMP) necessita glutamina, aspartato e
bicarbonato.

11 Metabolismo do nitrognio

O
Glutamina

HN

HCO3

O3 P

CH2
H

C
N

CH
CH

Aspartato

OH

OH

Monofosfato de uridina (UMP)

A UMP fosforilada para formar UDP e, a seguir, UTP. A


CTPsintetase catalisa a aminao de UTP a CTP, usando a glutamina
como doador do grupo amino:
NH2

H
N
O

UTP

N
Glutamina
ATP + H2 O

H2 C
H

OH

OH

Glutamato
ADP + Pi

CTP-sintetase

H2 C
H

CTP

A via de sntese de UMP em mamferos regulada principalmente por


retroinibio pelo UMP, UDP e UTP. O ATP ativa a enzima que catalisa a
primeira etapa. Isso ajuda a equlibrar a produo de nucleotdeos purnicos
e pirimidnicos.
At aqui, foram descritas as snteses de ATP, GTP, CTP e UTP, que
so substratos para a sntese de RNA. O DNA sintetizado a partir de
desoxinucleotdeos, que so formados pela reduo de ribonucleosdeos
difosfatoatos ADP, GDP, CDP e UDP seguido de pela fosforilao de
desoxinucleosdeo difosfatos a desoxinucleosdeo trifosfatos.
A dUTP no usada para a sntese de DNA. Em vez disso, ela
rapidamente convertida em nucleotdeos timina (que previne a
incorporao acidental de uracila ao DNA). Inicialmente, a dUTP
hidrolizada a dUMP. A seguir, a timidilatosintase adiciona um grupo
metila ao dUMP para produzir dTMP, usando o metilenotetraidrofolato
como doador de metila.

OH

OH

333

334

MOTTA

Bioqumica

+
O

Desoxirribose
dUMP

H2 N
N

H
N
5

CH2
H
CH2

N
O

H2 C

10

R
N 5, N 10-Metileno-tetraidrofolato
Timidilato
sintase

H
N

+
O

Desoxirribose
dTMP

H2 N

CH3

CH2
N

H
P

H
N

N
O

CH2
HN

Diidrofolato

A reao da serinahidroximetiltransferase a principal fonte de


metilenotetraidrofolato.
Na converso do grupo metileno (CH 2 ) a grupo metila (CH 3 ), a
timidilatosintase converte o co-fator tetraidrofolato diidrofolato. A
enzima diidrofolatoredutase dependente de NADH regenera, ento, o
cofator tetraidrofolato reduzido. Finalmente, dTMP fosforilado para
produzir dTTP, substrato para a DNApolimerase. (Ver Captulo 13).
Como as clulas cancergenas sofrem rpida diviso celular, as enzimas
da sntese de nucleotdeos, incluindo a timidilatosintase e a
diidrofolatoredutase, so altamente ativas. Os compostos que inibem essas
reaes so usados na terapia contra o cncer. Por exemplo, o anlogo da
dUMP,
a
5fluorodesoxiuridilato,
inativa
a
timidilatosintase.
Antifolatos como o metotrexato so inibidores competitivos da
diidrofolatoredutase pois competem com o diidrofolato pela ligao com a
enzima. Em presena de metotrexato, a clula cancergena no regenera o
tetraidrofolato necessrio para a produo de dTMP e a clula morre.
Muitas clulas no cancergenas, cujo crescimento mais lento, no so to
sensveis ao efeito do medicamento.

11.5 Catabolismo dos aminocidos


Aps remoo dos grupos amino, as cadeias carbonadas dos
aminocidos so degradadas para atender 10-15% das necessidades
energticas do organismo. Segundo a natureza dos produtos de degradao,
os aminocidos podem ser classificados como glicognicos (precursores da
gliconeognese) e/ou cetognicos (produtores de corpos cetnicos)(Tabela
11.3).

11 Metabolismo do nitrognio

Tabela 11.3 Aminocidos glicognicos e cetognicos


Glicognicos

Cetognicos

Glicognicos e cetognicos

Alanina

Leucina

Fenilalanina

Arginina

Lisina

Isoleucina

Asparagina

Tirosina

Aspartato

Treonina

Glicina

Triptofano

Cistena
Glutamato
Glutamina
Histidina
Metionina
Prolina
Serina
Valina

Ao examinar a Tabela 11.3 verifica-se que todos os aminocidos,


exceto leucina e lisina, no mnimo parcialmente, so glicognicos; todos os
aminocidos no essenciais so glicognicos; e os esqueletos dos
aminocidos aromticos so tanto glicognicos como cetognicos.
Trs aminocidos so convertidos a substratos glicognicos por
transaminao (o reverso de suas reaes biossintticas): alanina a
piruvato, aspartato a oxaloacetato, e glutamato a cetoglutarato. O
glutamato pode tambm ser desaminado em reao de oxidao (ver Seo
11.1.B). A asparagina forma aspartato por desaminao, que produz, ento,
oxaloacetato por transaminao.
COO
+

H3 N

CH2

COO
NH 4+

H2 O

H3 N

C
CH2

Asparaginase

C
O

-Cetoglutarato
Glutamato

COO
O

C
CH2

Transaminase

C
NH2

Asparagina

C
O

Asparato

Oxaloacetato

Do mesmo modo, a glutamina desaminada a glutamato e, ento,


desaminada a cetoglutarato. A serina convertida em piruvato por
desaminao:
NH 4+

COO
+

H3 N

C
CH2
Serina

COO
C

OH

CH3
Piruvato

335

336

MOTTA

Bioqumica

Notar que nessa reao e na converso da asparagina e glutamina em


suas contrapartes cidas, o grupo amino liberado como NH +4 em lugar de
ser transferido para outro composto.
A prolina e a arginina (sintetizadas a partir do glutamato), e a histidina
so
catabolizadas
a
glutamato,
posteriormente
convertido
a
cetoglutarato. A famlia de aminocidos do glutamato, que inclui
glutamina, prolina, arginina e histidina, constitui ao redor de 25% dos
aminocidos da dieta, de tal modo, que suas contribuies potenciais para o
metabolismo energtico significante.
A cistena convertida a piruvato por um processo que libera amnia
tambm como enxfre:

H2 O

COO
+

H3 N

NH 4+
H2 S

CH2

COO
C

SH

CH3

Cistena

Piruvato

Os produtos das reaes anteriores, piruvato,


cetoglutarato so todos precursores glicognicos.

oxaloacetato

Piruvato
CO2
Piruvato
carboxilase

Gliconeognese

Oxaloacetato

Glicose

Ciclo do
cido
ctrico
-Cetoglutarato

A treonina glicognica e cetognica por formar acetil-CoA e glicina:


COO
+

H3 N

NAD+

CH

NADH + H +

COO
+

H3 N

OH

CH3
Treonina

CoASH

COO
+

H3 N

H
Glicina
+
O

CH3
-Amino

-Cetobutirato
H3 C

SCoA

Acetil-CoA

A acetilCoA precursora de corpos cetnicos e a glicina


potencialmente glicognica se for inicialmente convertida a serina pela
ao da serina-hidroximetiltransferase. A principal rota de desdobramento
da glicina, entretanto, catalisada por um complexo multiprotena
conhecido como sistema de clivagem da glicina

11 Metabolismo do nitrognio

NAD+

COO
+

H3 N

CH2 +

Tetraidrofolato

NADH

Sistema de
clivagem da
glicina

Metileno-tetraidrofolato + NH4+ + CO2

As vias de degradao dos demais aminocidos so mais complexas.


Por exemplo, os aminocidos com cadeias laterais ramificadas valina,
leucina e isoleucina sofrem transaminao para as suas formas
cetocidos e so, ento, ligados coenzima A, em reao de
descarboxilao oxidativa. Essa etapa catalisada pelo complexo da
desidrogenase do cetocido de cadeia ramificada, um complexo
multienzimtico semelhante ao complexo da piruvatodesidrogenase e que
compartilha as mesmas subunidades. A deficincia gentica da
desidrogenase do cetocido de cadeia ramificada causa a doena da
urina do xarope de bordo, na qual altas concentraes de cetocidos de
cadeia ramificada so excretadas na urina que apresenta um odor
caracterstico. A doena fatal caso no seja tratada com uma dieta de
baixo teor de aminocidos de cadeia ramificada.
As reaes iniciais do catabolismo da valina so mostrados na figura
11.
. Etapas subsequentes fornecem o intermedirio do ciclo do cido
ctrico, a succinilCoA. A isoleucina e degrada por uma via similar que
produz succinilCoA e acetilCoA. A degradao da leucina fornece
acetilCoA e o acetoacetato (corpo cetnico). A degradao da lisina segue
uma via diferente, mas, tambm forma acetilCoA e acetoacetato. A
degradao da metionina produz succinilCoA.

337

338

MOTTA

Bioqumica

NH3+
H3 C

CH

CH

COO

CH3
Valina
-Cetoglutarato
Glutamato
O
H3 C

CH

COO

CH3
NAD+ + CoASH
NADH + CO2
O
H3 C

CH

SCoA

CH3
Q
QH2
O
H3 C

CH

SCoA

CH3
Figura 11.2
Etapas iniciais da degradao da valina.

Finalmente, a clivagem de aminocidos aromticos fenilalanina,


tirosina e triptofano fornece o acetoacetato (corpo cetnico) e tambm
um composto glicognico (alanina ou fumarato). A primeira reao na via
de degradao da fenilalanina sua hidroxilao a tirosina (porisso a
tirosina noessencial). A reao usa a tetraidrobiopepterina (derivado da
pterina) como co-fator. A tetraidrobiopepterina oxidada a
diidrobiopeptirina em reao da fenilalaninahidroxilase. O cofator
subsequentemente reduzido forma tetraidro por uma enzima
NADHdependente.

11 Metabolismo do nitrognio

O2
+

H
N

H2 N
N

N H H
8

N H C
HO
H

7
6

CH3

OH

H
CH2

COO

NH3+

Fenilalanina

Tetraidrobiopterina
Fenilalanina
hidroxilase

H2 O
+

H
N

HN
N
H

N H H

N H C
HO

Diidrobiopterina

OH

CH3

HO

H
CH2

C
NH3+

Tirosina

O resumo das interrelaes entre o ciclo do cido ctrico e o


metabolismo dos aminocidos mostrada na Figura 11.3.

COO

339

340

MOTTA

Bioqumica

Alanina
Cistena
Glicina
Serina
Treonina
Triptofano

CO2

Piruvato

Isoleucina
Leucina
Lisina
Treonina

Acetoacetato

Acetil-CoA

Glicose
Asparagina
Aspartato

Citrato

Oxaloacetato

Asparato
Fenilalanina
Tirosina

Fumarato

Leucina
Lisina
Fenilalanina
Triptofano
Tirosina

Ciclo do
cido ctrico

Isocitrato
CO2

Succinil-CoA
Isoleucina
Metionina
Valina

-Cetoglutarato
CO2

Arginina
Glutamato
Glutamina
Histidina
Prolina

Figura 11.3
Resumo das interrelaes entre o ciclo do cido ctrico e o metabolismo dos
aminocidos. Converso dos esqueletos carbonados dos aminocidos em
piruvato, acetoacetato, acetil-CoA, ou intermedirios do ciclo do cido ctrico para
posterior catabolismo.

11.6 Excreo do nitrognio


Os aminocidos so degradados no fgado e, em menor grau, no rim. A
contribuio do msculo esqueltico mnima. No fgado, os grupos amino
dos aminocidos so removidos em processo envolvendo principalmente
dois tipos de reaes: transaminao e desaminao oxidativa.
A. Transaminao
A reao de transaminao transfere reversivelmente o grupo amino
de um aminocido para o cetoglutarado em presena de transaminases
(aminotransferases)(ver Seo 11.2)
Aminocido + cetoglutarato ' cetocido + glutamato
A treonina, arginina, lisina e prolina no sofrem transaminao com o
cetoglutarato.

11 Metabolismo do nitrognio

B. Desaminao oxidativa
A glutamatodesidrogenase catalisa a remoo do grupo amino como
amnia livre a partir do glutamato proveniente, sobretudo, das reaes de
transaminao (ver Seo 11.1.B). No fgado, a enzima est localizada na
matriz mitocondrial e emprega o NAD + ou NADP + como aceptor de
eltrons:
Glutamato

desidrogenase

Glutamato + NAD + + H 2 O

Cetoglutarato + NADH + H + + NH 3
C. L -Aminocido-oxidases
Pequenas quantidades de amnia so formadas pela ao das
encontradas nos peroxissomas do fgado e rins. O
aceptor imediato de eltrons a FMN (flavina mononucleotdeo). A
FMNH 2 produzida reage com o O 2 para formar H 2 O 2 .

L aminocidooxidases

D. Serina e treonina-desidratases
A serina e a treonina no so substratos para as reaes de
transaminaes. Seus grupos amino so removidos por enzimas hepticas
que
necessitam
piridoxalfosfato:
a
serina desidratase
e
treonina desidratase. O esqueleto carbonado produzidos nas reaes so o
piruvato e o cetoglutarato, respectivamente.
E. Urease bacteriana
Cerca de 25% da amnia heptica produzida pela ao de ureases
bacterianas intestinais sobre a uria que difunde do sangue para o lmen
intestinal. A amnia liberada volta ao fgado pela circulao.

11.7 Destino da amnia


Os ons amnio formados por transaminao/desaminao oxidativa e
por outras reaes, so exportados dos tecidos extrahepticos para o
fgado para formar uria, um composto notxico.
Os efeitos txicos dos ons amnio so provocados pela adio dos
mesmos ao cetoglutarato para formar glutamato (ao reversa da
glutamatodesidrogenase). Como o desvio do cetoglutarato interfere no
funcionamento normal do ciclo do cido ctrico, ocorre a diminuio da
oxidao de acetilCoA derivado da glicose, o principal combustvel para
o crebro e, assim, elevar a formao de corpos cetnicos. Como o
cetoglutarato tambm intermedirio em outros processos sua depleo
altera o metabolismo normal da clula. Outros fatores pouco entendidos
tambm atuam para a toxicidade de ons amnio para o crebro.
So dois os mecanismos para o transporte de ons amnio dos tecidos
extrahepticos para o fgado ou para os rins: a sntese de glutamina e o
ciclo glicose alanina.

341

342

MOTTA

Bioqumica

A. Incorporao da amnia ao glutamato para formar glutamina


A maioria dos tecidos sintetizam glutamina a partir do glutamato como
forma de armazenamento temporrio notxico e transporte de amnia
para o fgado ou para os rins. (Ver Seo 11.1.B).
Glutamato + ATP [-glutamilfosfato] + NH +4 glutamina + P i
A glutamina hidrolizada no fgado e rim, a glutamato e amnia pela
ao da enzima glutaminase:
Glutaminase

Glutamina + H 2 O Glutamato + NH 3
No fgado, a amnia liberada pela hidrlise utilizada na sntese de
uria. No rim, alm da atividade da glutaminase para a produo de
glutamato, ocorre a desaminao oxidativa desse ltimo a cetoglutarato
pela ao da glutamatodesidrogenase. Portanto, duas molculas de
amnia so excretadas na urina para cada glutamina transformada em cetoglutarato.
Glutamato

e
desidrogenase
glutamato
cetoglutarato + 2NH 3
Glutamina Glutaminas

Nos tbulos renais, a amnia protonada a ons amnio (NH 4 + ), que


atuam na neutralizao de cidos metablicos na urina.
A glutamina tambm exerce importante papel na biossntese de
hexosaminas, aminocidos, purinas e pirimidinas.
B. Ciclo glicosealanina
Os ons amnio produzidos pela degradao de aminocidos nos
msculos e outros tecidos, so tambm transportados ao fgado como
alanina utilizando o ciclo da glicosealanina. No msculo, os ons amnio
reagem com o cetoglutarato para formar glutamato pela ao da
glutamatodesidrogenase. O glutamato transfere o seu grupo amino ao
piruvato em presena da alaninatransaminase:
Glutamato + piruvato

Alanina
transaminase


cetoglutarato + alanina

A alanina produzida transportada pelo sangue ao fgado onde


transfere o seu grupo amino para o cetoglutarato por meio da
alaninatransaminase, formando glutamato que, por desaminao, produz
cetoglutarato e amnia pela glutamatodesidrogenase.

11.8 Sntese da uria (Ciclo da Uria)


A uria um composto neutro, notxico, altamente solvel e
excretado pela urina o principal produto de excreo do excesso de
nitrognio proveniente do catabolismo dos aminocidos no homem. Com
ingesto normal de protenas, a uria constitui 80% dos produtos
nitrogenados da urina. So ainda encontrados na urina: cido rico,
creatinina, ons amnio e outras formas menores de compostos
nitrogenados. A sntese de uria realizada no fgado por cinco reaes
(duas mitocondriais e trs citoslicas) do ciclo da uria (ciclo de
KrebsHenseleit) (Figura 11.4).

11 Metabolismo do nitrognio

Aminocido

-Cetoglutarato

Glutamato
desidrogenase

Transaminase

-Cetocido

HCO3

NH3

Glutamato

Carbamoil-fosfato-sintetase

Carbamoil
fosfato

Ornitina

Citrulina

Uria
Aspartato

-Cetocido
Transaminase

Arginina

Argininosuccinato

Aminocido
Oxaloacetato

Fumarato
Malato
Fumarase
Figura 11.4
Ciclo da uria. As enzimas que participam do ciclo so: (1) carbamoil-fosfato-sintetase, (2) ornitinatranscarbamoilase, (3) arginino-succinato-sintetase, (4) arginino-succinase e (5) arginase. As enzimas (1) e
(2) so mitocondriais e as enzimas 3-5 so citoslicas.

1. Carbamoilfosfatosintetase I. O substrato inicial para o ciclo da


uria uma molcula ativada produzida pela condensao do bicarbonato
e on amnio, catalisada pela carbamoilfosfatosintetase I. A reao
consome dois ATP e produz carbamoilfosfato (composto de alta energia).
Tecnicamente a reao no faz parte do ciclo da uria.

343

344

MOTTA

Bioqumica

ADP
O
HO

O
ADP
O
HO

OPO23

:NH3

Carbonil
fosfato

Pi
O
O

NH2

Carbamato

ATP
ADP
O
2

O3 P

NH2

Carbamoil-fosfato

Figura 11.5
Sntese da carbamoilfosfato catalisada pela carbamoilfosfatosintetase I. O
ATP ativa o fosfato para formar a carbonilafosfato. O NH 3 reage com a
carbamilafosfato para formar carbamato. A incorporao de um segundo grupo
fosforil forma carbamoil-fosfato e ADP.

A enzima requer Nacetilglutamato como efetor alostrico positivo.


Essa a etapa limitante de sntese da uria.
2. Ornitinatranscarbamoilase. A reao seguinte do ciclo a
transferncia
do
grupo
carbamoil
(NH 2 CO),
oriundo
do
carbamoilfosfato, para a ornitina para produzir citrulina. A reao ocorre
na matriz mitocondrial pela ao da ornitinatranscarbamoilase. A
citrulina transferida para o citosol por uma protena transportadora
especfica. As reaes seguintes do ciclo da uria tem lugar no citosol.

11 Metabolismo do nitrognio

O
H3 N

CH 2

CH 2

H2 N

CH 2
H

NH2

CH 2

O
O

CH 2

+ Pi

CH 2

NH3+

COO

NH3+

COO
Carbamoil-fosfato

Ornitina

Citrulina

3. Argininosuccinatosintetase. O segundo grupo amino da uria


doado pelo aspartato. A condensao necessita ATP e catalisada pela
argininosuccinatosintetase.
Os
produtos
formados
so:
argininosuccinato, AMP e pirofosfato (PP i ). O pirofosfato (forte inibidor
da reao) clivado a ortofosfato (2P i ). A clivagem supre energia adicional
para as reaes sintticas, alm de remover o efeito inibidor do pirofosfato.
O
H

NH2

H
COO

CH 2
CH 2

CH 2
H

H3 N

ATP

AMP + PPi

COO
Citrulina

CH 2

CH 2

COO

N
CH 2

NH3+

COO
Aspartato

COO

CH 2

CH 2
NH3+

COO

Argininossuccinato

A principal fonte de aspartato a transaminao do glutamato com o


oxaloacetato:
Oxaloacetato + glutamato ' aspartato + cetoglutarato
4.
Argininosuccinase.
A
argininosuccinase
(argininossuccinatoliase) catalisa a clivagem do arginino-succinato para
fornecer arginina e fumarato. A sntese do fumarato une o ciclo da uria ao
ciclo da cido ctrico. O fumarato tambm pode ser reconvertido a
aspartato.

345

346

MOTTA

Bioqumica

O
H

NH2

CH 2

H3 N

CH 2
H

ATP

COO

CH 2

AMP + PPi

CH 2
CH 2

CH 2

COO

CH 2

CH 2
NH3+

COO

COO

COO

NH3+

COO

Citrulina

Argininossuccinato

Aspartato

5. Arginase. Somente o fgado possui a enzima arginase que catalisa a


hidrlise da arginina produzindo uria e regenerando a ornitina. A ornitina
retorna para a mitocndria onde condensa novamente com a
carbamoilfosfato para reiniciar o ciclo. Atravs da corrente sangnea, a
uria transportada at os rins, onde excretada pela urina.
H2 N

NH2+

NH

NH3+
H2 O

CH 2

CH 2

CH 2

CH 2

CH 2

CH 2

NH3+

COO
Arginina

O
+

H2 N

NH2

NH3+

COO
Ornitina

Uria

A uria proveniente, portanto, de dois grupos amino, um da amnia e


outro do aspartato, e de um carbono fornecido pelo bicarbonato.
A sntese de uma molcula de uria requer quatro ATP. Dois para a
sntese de carbamoilfosfato e um para a formao de argininossuccinato;
esse ltimo clivado em AMP e pirofosfato (PP i ) cuja hidrlise fornece
dois ortofosfatos (2P i ). Duas molculas de ATP so consumidas para gerar
o ATP a partir de AMP. Mesmo assim, o ciclo da uria rende 2 ATP por
meio de reaes auxiliares. A reao da glutamatodesidrogenase produz
NADH (ou NADPH), e a converso de malato a oxaloacetato pela
malatodesidrogenase tambm gera NADH (equivalente a 3 ATP). Total
das duas reaes: 6 ATP. O rendimento lquido 2 ATP por molcula de
uria.
A. Regulao do ciclo da uria
A carbamoilfosfatosintetase I mitocondrial ativada alostericamente
pelo Nacetilglutamato, produzido a partir do glutamato e de acetilCoA
em reao catalisada pela Nacetilglutamatosintase, que ativada pela
arginina.

11 Metabolismo do nitrognio

COO
+

H3 N

CH2

HSCoA

O
+

H3 C

H3 C

COO
NH

CH2

SCoA

CH2

CH2

COO

COO
Glutamato

Acetil-CoA

N-Acetilglutamato

Quando a quebra metablica de aminocidos aumenta, a concentrao


do glutamato eleva e estimula a sntese do Nacetilglutamato que, por sua
vez, aumenta a sntese de uria.
As demais enzimas do ciclo da uria so reguladas pela concentrao
de seus substratos. So modificadas por variaes no consumo de protenas
na dieta. Aps alguns dias de alteraes no contedo protico da dieta,
ocorrem mudanas na produo de uria. Vrios hormnios (exemplo,
glucagon e glicocorticides) esto envolvidos no controle da velocidade de
sntese das enzimas do ciclo.

11.9 Excreo de nitrognio como cido rico


A uria uma substncia relativamente no-txica e facilmente
transportada pelo sangue at os rins. Entretanto, a molcula de uria
necessita grandes quantidades de gua para a sua excreo eficiente.
Vertebrados voadores como os pssaros e para os rptis adaptados a
ambientes ridos, isso um srio problema. Esses organismos produzem
cido rico como produto de excreo de nitrognio que eliminado como
uma mistura semifluda.
O
HN
O

H
N
O

N
H

N
H

cido rico

O cido rico tambm o produto final da degradao de purina


nucleotdeos em primatas e alguns outros animais. As molculas de
nucleotdeos so desdobradas por nucleotidases (que removem os grupos
fosfato para formar nucleosdeos) e desaminases (que removem os
substituintes amnicos do anel). A reao final do catabolismo de purina
nucleotdeos catalisada pela xantina oxidase para formar cido rico:
O
N

HN
O

N
H
Xantina

N
H

O2 , H2 O

H2 O2

HN

Xantina-oxidase

N
H

N
H

cido rico

347

348

MOTTA

Bioqumica

O excesso de cido rico, que pouco solvel em meio aquoso, resulta


em deposio de cristais de urato de sdio na forma de clculos renais. O
cido rico tambm pode precipitar nas articulaes, principalmente, dos
joelhos e dos dedos do p, em uma condio clnica dolorosa conhecida
como gota. O excesso de cido rico pode ser tratado por um anlogo de
purina que bloqueia a atividade da xantinaoxidase. Os intermedirios
anteriores do catabolismo da purinas, que so mais solveis que o cido
rico, so ento excretados.
As pirimidinas nucleotdeos, de modo semelhante as purinas, sofrem
desaminao e remoo dos grupos fosfato e ribose. Os produtos das
reaes so muitas vezes utilizados nas vias de recuperao para regenerar
nucleotdeos. Entretanto, de modo diferente das purinas, as bases
pirimidnicas (uracila e timina) podem ser ainda degradas como derivados
de CoA. Consequentemente, o catabolismo das pirimidinas celulares
contribui levemente para o pool de combustveis metablicos, enquanto o
excesso de purinas so excretados.

11.10 Molculas derivadas dos aminocidos


Os aminocidos alm de servirem como blocos construtores de
polipeptdeos, so precursores de muitas biomolculas de grande
importncia fisiolgica. Na discusso seguinte, sero abordadas a sntese
de vrias dessas molculas, por exemplo, neurotransmissores, glutationa,
alcalides, porfirinas e nucleotdeos. Como esses processos envolvem a
transferncia de carbonos, a seo inicia com uma descrio do
metabolismo de monocarbonos.
Grupamentos de uma unidade de carbono (em vrios estgios de
oxidao) so transferidos de um composto para outro em fases importantes
do metabolismo como a sntese e destoxificao. Dois so os carreadores
de compostos monocarbnicos: a S-adenosilmetionina e o tetraidrofolato.
A. S adenosilmetionina (SAM)
A Sadenosilmetionina doadora de grupos metila (CH 3 ) de um
intermedirio a outro em vrias reaes de sntese.
NH2
N
N
CH3
+S

CH2

H2 C
H2 C
+

H3 N

CH

N
N

OH

OH

COO
S-Adenosinilmetionina

obtido pela transferncia do grupo adenosil do ATP para a


metionina:
Metionina + ATP SAdenosilmetionina + P i + PP i

11 Metabolismo do nitrognio

O grupo sulfnio da Sadenosilmetionina reage com aceptores


nuclefilos e doa grupos metila para as reaes de sntese. Por exemplo, a
converso do hormnio noradrenalina em adrenalina:
HO

HO

OH
CH

HO

CH2

NH3

Noradrenalina

OH
CH

HO

CH2

NH2

CH3

Adrenalina

A S-adenosilmetionina atua como doador de metila em reaes de


metilao de fosfolipdeos, protenas, DNA e RNA (Tabela 11.4).
Tabela 11.4 Transferncia de grupos metila a partir da
S-adenosilmetionina.
Aceptor metlico

Produto metilado

cido guanidinoactico

Creatina

Fosfatidiletanolamina (3 metilas)

Fosfatidilcolina

Nicotinamida

N Metilnicotinamida

Noradrenalina

Adrenalina

Carnosina

Anserina

cido aminobutrico (GABA)

Carnitina

RNA de transferncia e ribossmico

RNA metilado

DNA

DNA metilado

B. Tetraidrofolato (THF)
O tetraidrofolato (THF) cofator derivado do folato, atua como um
carregador de unidades de um carbono (C 1 ) em vrias reaes do
metabolismo dos aminocidos e dos nucleotdeos. Os mamferos no
sintetizam folato (a forma oxidada do tetraidrofolato) e devem obt-lo a
partir de alimentos. As exigncias por folato aumenta durante as primeiras
semanas de gravidez, quando o sistema nervoso fetal comea a se
desenvolver. Suprimentos de folato parecem prevenir certos defeitos do
tubo neural como a spina bfida, na qual o cordo espinhal permanece
exposto.

349

350

MOTTA

Bioqumica

(a)
N

H2 N
HN

H
CH
N H
2

COO

CH

O
CH 2

CH2

n OH

2-Amino-4-oxo
6-metilpterina

(b)

p-Aminobenzoato

Glutamatos
(n=1-6)

H2 N

HN
O

H
CH2

N H
H2 C N
10

N 5 ,N 10-Metilenotetraidrofolato
Figura 11.2
Tetraidrofolato (THF). (a) O cofator consiste de um derivado da pterina, um
resduo de p aminobenzoato e mais de seis resduos de glutamato. a forma
reduzida da vitamina folato. Os quatro tomos de H da forma tetraidro esto
sombreados. (b) Na converso da serina em glicina, um grupo metileno
(sombreado) liga-se ao N5 e N10 do tetraidrofolato. O tetraidrofolato pode carregar
unidades de um carbono de diferentes estados de oxidao. Por exemplo, um
grupo metila ligado ao N5 e um grupo formil (HCO) ligado ao N5 ou N10.

O tetraidrofolato aceita unidades de um carbono de vrios aminocidos


ou de seus metablitos. Um exemplo proeminente a remoo do grupo
hidroximetil da serina com a consequente formao de glicina. Alm da
serina, outros intermedirios doam unidades de um carbono ao
tetraidrofolato (Tabela 11.5).

11 Metabolismo do nitrognio

Tabela 11.5 Doadores de unidades de um carbono (C 1 ) ao tetraidrofolato (THF)


Doador

Mecanismo

Serina

Converso em glicina com transferncia de metileno

Formaldedo

Combinao direta

Metionina

Oxidao da metila; transferida como HC=O

Colina

Converso em betana; os grupos metila so oxidados e


transferidos

Sarcosina
Glicina

Oxidao da metila; transferida como H 2 C=O


Oxidao a formato, que transferido

cido aminolevulnico

Oxidao a formato, que transferido

Triptofano

Oxidao N-formilquinurinina, doador de formato

Formato

Combinao direta

Histidina

Formao do cido formiminoglutmico e transferncia


de formimidoil (-HC=NH)

C. Neurotransmissores
Na terminao do nervo, a chegada do impulso nervoso influencia uma
segunda clula, como, por exemplo, outro nervo, msculo esqueltico,
msculo involuntrio ou glndula secretria. A juno entre o terminal do
nervo e a clula seguinte a sinapse. A chegada do potencial de ao na
sinapse resulta na liberao de uma substncia transmissora pela membrana
pr-sinaptica que atravessa a lacuna (espao entre as clulas) e libera o
sinal ao se ligar a um receptor especfico presente na membrana
pssinptica. Os neurotransmissores so molculas pequenas que
comunicam os impulsos nervosos atravs da maioria das sinapses. Podem
ser excitatrios ou inibitrios.
Muitos neurotransmissores so aminocidos ou aminas primrias ou
secundrias derivadas de aminocidos (aminas biognicas) (Tabela 11.6).
Nessa seo, ser realizada uma breve discusso de aminocidos, aminas
biogncias e do xido ntrico como neurotransmissores.
Tabela 11.6 Neurotransmissores aminocidos e aminas.
Aminocidos

Aminas

Glicina

Noradrenalina (norepinefrina)

Glutamato

Adrenalina (epinefrina)

cido -aminobutrico (GABA)

Dopamina
Serotonina
Histamina

1. Glicina. um neurotransmissor inibitrio para a medula espinhal e


grande parte do tronco cerebral onde bloqueia o impulso que migra atravs
do cordo medular para os neurnios motores, para estimular o msculo
esqueltico. As terminaes nervosas pr-sinpticas apresentam uma
sistema de transporte para remover a glicina da sinapse. A inibio surge
pelo aumento da condutncia de Cl. A estricnina provoca rigidez e
convulses ao se ligar aos receptores de glicina. A apamina, a amida
polipeptdica de 18 resduos de aminocidos do veneno de abelha, funciona
de forma semelhante.

351

352

MOTTA

Bioqumica

2. Glutamato. o neurotransmissor excitatrio amplamente distribudo


pelo sistema nervoso central. O glutamato reciclado nos neurnios e nas
clulas gliais. A clula glial transforma o glutamato em glutamina, que
ento difunde novamente para o neurnio. A glutaminase mitocondrial no
neurnio produz novamente o glutamato, para reutilizao. A ativao de
seu receptor (NmetilDaspartato, NMDA) aumenta a sensibilidade aos
estmulos de outros neurotransmissores. O lcool inibe a influencia do
glutamato, e deste modo diminui a sensibilidade aos estmulos. O
glutamato monossdico suspeito de contribuir para alguns distrbios
psicolgicos, apesar desse fato no ter sido ainda comprovado.
3. cido aminobutrico (GABA). Atua como neurotransmissor
inibitrio no sistema nervoso central. A ligao do GABA ao seu receptor
aumeta a permeabilidade da membrana da clula nervosa para os ons
cloretos (Os benzodiazepnicos, uma classe de tranqilizantes que reduzem
a ansiedade e causam relaxamento muscular, provocam uma
potencializao da resposta ao GABA aumentando a condutncia da
membrana para cloretos).
+

H3 N

CH2
CH2
CH2

COO
-Aminobutirato

Existem dois tipos de receptores deste neurotransmissor: os GABA e


os GABA, dos quais apenas o primeiro estimulado pelo lcool,
benzodiazepinas e barbituricos do que resulta uma diminuio de
sensibilidade para outros estmulos. O efeito ansioltico do lcool
mediado pelos receptores de GABA
4. Catecolaminas. Compreendem a dopamina, noradrenalina
(norepinefrina) e adrenalina (epinefrina), e so derivadas do aminocido
tirosina. A dopamina e noradrenalina so usadas no crebro como
neurotransmissores excitatrios. Fora do sistema nervoso, a noradrenalina e
a adrenalina so liberadas principalmente pela medula adrenal e pelo
sistema nervoso perifrico. Como ambas regulam vrios aspectos do
metabolismo, elas so consideradas hormnios.
COO
+

H3 N

CH3
+

H3 N

CH2

CH2

Tirosina

H3 N

CH2

HO
OH

+
H3 N

CH2
CH

OH

HO
OH
Dopamina

CH2
CH

HO
OH

Noradrenalina

OH

HO
OH

Adrenalina

OH
Catecol

A secreo da adrenalina em resposta ao estresse, trauma, exerccio


vioroso ou hipoglicemia causa a rpida mobilizao de energia
armazenada, ou seja, glicose do fgado e cidos graxos do tecido adiposo.
A reao na qual a noradrenalina metilada para formar adrenalina

11 Metabolismo do nitrognio

mediada pela enzima feniletanolaminaNmetiltransferase (PNMT). Apesar


da enzima ocorrer predominatemente nas clulas cromafnicas da medula
adrenal ela tambm encontrada em certas pores do crebro onde a
adrenalina funciona como um neurotransmissor. Evidncias recentes
indicam que a adrenalina e a noradrenalina esto presentes em vrios
outros rgos (exemplo, fgado, corao e pulmo)
5. Serotonina (5-hidroxitriptamina). A serotonina um poderoso
vasoconstritor e estimulador da contrao do msculo liso e inibidor da
secreo gstrica. encontrada no crebro, intestino, mastcitos e
plaquetas, bem como em tumores carcinides. No crebro atua,
aparentemente, como um agente neuro-hormonal que aumenta a atividade
do nervo. A serotonina sintetizada a partir do triptofano.
COO
+

H3 N

H3 N

CH2

CH2
CH2

HO

N
H
Triptofano

N
H
Serotonina

Baixos nveis de serotonina no crebro esto relacionados depresso,


agresso e hiperatividade. O efeito antidepressivo de medicamentos como o
Prozac resulta de sua capacidade de aumentar os teores de serotonina pelo
bloqueio da reabsoro do neurotransmissor liberado.
A
serotonina

tambem
convertida
em
melatonina
(N-acetil-5-metoxitriptamina) formada na glndula pineal e retina. Sua
concentrao baixa durante o dia e alta no escuro. Como a melatonina
parece influenciar a sntese de alguns neurotransmissores que controlam o
ritmo circadiano, ela tem sido usada para o tratamento de distrbios do
sono e do jet lag.
CH3
O

C
HN

CH2
CH2

CH3 O

N
H
Melatonina

6. Histamina. uma amina produzida por muitos tecidos do organismo,


e tem efeitos fisiolgicos complexos. um mediador de reaes alrgicas e
inflamatrias, um estimulador da produo gstrica de cido e um
neurotransmissor em diversas reas do crebro. A histamina formada pela
descarboxilao da L histidina em uma reao catalisada pela
histidinadescarboxilase,
uma
enzima
que
necessita
de
piridoxal5fosfato.

353

354

MOTTA

Bioqumica

7. xido ntrico. um gs altamente reativo. Alm de muitas funes


do xido ntrico (regulao da presso sangnea, inibio da coagulao
sangnea e a destruio de clulas estranhas, lesadas ou cancerosas pelos
macrfagos) ele tambm atua como um neurotransmissor. O xido ntrico
(NO) sintetizado a partir da arginina pela xidontricosintase (NOS)
sendo produzido em muitas reas do crebro onde sua funo est
relacionada com a funo neurotransmissora do glutamato. Quando o
glutamato liberado de um neurnio e se liga a certas classes de receptores
do glutamato, um fluxo de Ca 2+ atravs de uma membrana ps-sinaptica
disparado, o que estimula a sntese da NOS. Uma vez sintetizado, o xido
ntrico difunde de sua clula de origem para a clula pr-sinptica, onde os
sinais promovem a liberao do glutamato. Em outras palavras, o NO atua
como um neurotransmissor retrgado; ou seja, ele promove um ciclo no
qual o glutamato liberado do neurnio pr-sinaptico e ento liga-se e
promove potenciais de ao no neurnio pssinptico. Esse mecanismo
potenciador exerce importante papel no aprendizado e na formao da
memria, tambm como em outras funes no crebro dos mamferos.
D. Glutationa (GSH)
A glutationa (glutamilcisteinilglicina) tripeptdeo contendo uma
sulfidrila. A glutationa (GSH) est envolvida na sntese do DNA e RNA, de
certos eicosanides e de outras biomolculas. Em muitos desses processos,
a GSH atua como agente redutor que mantm os grupos sulfidrilicos das
enzimas e outras molculas no estado reduzido. Alm de proteger as
clulas das radiaes, da toxicidade do oxignio e de toxinas ambientais, a
GSH tambm promove o transporte de aminocidos (ciclo glutamil).
A GSH contribui para a proteo das clulas das toxinas ambientais. A
GSH reage com vrias molculas estranhas para formar conjugados de
GSH. A ligao desses substratos com a GSH, prepara-os para a excreo,
que pode ser espontnea ou catalisada pelas glutationaStransferases
(tambm conhecidas como ligandinas). Antes da excreo urinria, os GSH
conjugados so geralmente convertidos em cidos mercaptricos.
E. Biossntese do grupo heme
O heme, uma das molculas mais complexas sintetizadas pelos
mamferos, tem um anel porfirnico contendo ferro. O heme um
componente estrutural da hemoglobina, mioglobina e citocromos. A via
biossinttica do heme predominante no fgado, medula ssea, clulas
intestinais e em reticulcitos (clulas precursores de eritrcitos contendo
ncleo).
Na primeira etapa da sntese, a glicina se condensa com succinil-CoA,
formando o -aminolevulinato (ALA) em reao catalisada pela
ALAsintase que necessita de fosfato de piridoxal. a etapa comprometida
da biossntese de porfirinas. A ALAsintase, uma enzima mitocondrial,
inibida alostericamente pela hemina um derivado do heme contendo Fe + .
Na etapa seguinte da sntese da porfirina, duas molculas de ALA
condensam para formar porfobilinognio. A forfobilinognio-sintase, que
catalisa essa reao, uma enzima contendo zinco extremamente sensvel
ao envenenamento por metais pesados. A uroporfirinognio I sintase
catalisa a condensao simtrica de quatro molculas de porfobilinognio.
Quando quatro molculas de CO 2 so removidas, catalisada pela
uroporfirinogniodescarboxilase, o coproporfirinognio sintetizado. A

11 Metabolismo do nitrognio

reao seguida pela remoo de duas molculas de CO 2 adicionais,


formando assim, o protoporfirinognio IX. A oxidao do grupos metilenos
do anel porfirnico produz a protoporfirina IX, o precursor direto do heme.
A etapa final da sntese do heme a insero de Fe 2+ , uma reao que
ocorre espontaneamente mas acelerada pela ferroquelatase.
A protoporfirina IX tambm um precursor das clorofilas. Aps a
incorporao de magnsio (Mg 2+ ), a enzima Mg-protoporfirinametilesterase catalisa a adio do grupo metila para formar Mgprotoporfirina IX monometilester. Essa molcula ento convertida em
clorofila em vrias reaes induzidas pela luz.
F. Degradao do grupo heme
Com cerca de 120 dias de vida, as clulas vermelhas envelhecem
pelo esgotamento das enzimas eritrocitrias. Como conseqncia, elas so
removidas da circulao pelos macrfagos do sistema retculo endotelial
(bao, fgado e medula ssea) onde so degradadas. O ferro retorna ao
plasma e se liga tranferrina. A globina degradada em seus aminocidos
componentes para posterior reutilizao. A protoporfirina IX forma
bilirrubina.
A protoporfirina oxidada biliverdina um pigmento verde escuro
e monxido de carbono (CO) pela hemeoxigenase. A biliverdina
convertida em bilirrubina, um tetrapirrol insolvel em solues aquosas,
em reao catalisada pela biliverdinaredutase.

COOH COOH
CH2
CH

H3C

CH3

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2
CH

CH3

H
O

Bilirrubina

A bilirrubina produzida no SRE apolar e insolvel em gua e


transportada para o fgado via corrente circulatria ligada de maneira firme
mas reversvel, albumina.
A bilirrubina isolada da albumina entra na clula heptica e
conjugada pela ao da uridinadifosfatoglicuroniltransferase (UDPGT)
com o cido UDPglicurnico para produzir o monoglicurondio e o
diglicurondio da bilirrubina (bilirrubuna conjugada). O derivado
conjugado, solvel em gua, excretado do hepatcito na forma de bile e
constitui um dos pigmentos biliares. Devido a solubilidade em gua, a
bilirrubina conjugada encontrada em pequenas quantidades tanto no
plasma como na urina. No intestino grosso, a bilirrubina degrada por
enzimas bacterianas para formar urobilinognio.
A ictercia a pigmentao amarela da pele, esclertica e membranas
mucosas, resultante do acmulo de bilirrubina ou de seus conjugados.
Torna-se evidente clinicamente quando as concentraes plasmticas de
bilirrubina total excedem 3,0 mg/dL, apesar de graus menores tambm

355

356

MOTTA

Bioqumica

terem significncia clnica. A ictercia o sinal mais precoce de uma srie


de patologias hepticas e biliares.
Resumo
1. Os organismos fixadores de nitrognio convertem N 2 em NH 3 em reao
consumidora de ATP. O nitrato e nitrito pode tambm serem reduzidos a NH 3 .
2. A amnia incoporada glutamina pela ao da glutamina sintetase.
3. A transaminase emprega um grupo prosttico PLP para
intrconverso reversvel de aminocidos e cetocidos.

catalisar

4. Os organismos variam grandemente em suas capacidades de sintetizar


aminocidos. Alguns organismos (exemplo, plantas e alguns microorganismos)
podem produzir todas as molculas de aminocidos necessrias a partir da
fixao de nitrognio. Os animais podem produzir somente alguns
aminocidos. Os aminocidos no essenciais so produzidos a partir de
molculas precursoras, enquanto os aminocidos essenciais devem ser obtidos
da dieta.
5. Nas reaes de transaminao (uma das mais proeminentes dos aminocidos),
novos aminocidos so produzidos quando os grupos -amino so transferidos
do doador aminocido ao receptor -cetocido. Como as reaes de
transaminao so reversveis, elas atuam tanto na sntese como na degradao.
Os ons amnio ou o nitrognio amida da glutamina podem ser diretamente
incorporados aos aminocidos e, eventualmente, a outros metablitos.
6. Os aminocidos so classificados como cetognicos ou glicognicos com base
no destino de seus esqueletos carbonados se so convertidos em cidos
graxos/corpos cetnicos ou glicose. Alguns aminocidos so classificados tanto
cetognicos como glicognicos porque seus esqueletos carbonados so
precursores de gorduras e de carboidratos.
7. Os aminocidos so precursores de muitas biomolculas fisiologicamente
importantes. Muitos dos processos que sintetizam essas molculas envolvem a
transferncia de grupos de monocarbonos (exemplo, metila, metileno, metenil e
formil). A S-adenosilmetionina (SAM) e tetraidrofolato (THF) so os mais
importantes carreadores de grupos de um carbono.
8. Muitas
molculas
derivadas
dos
aminocidos
incluem
vrios
neurotransmissores (exemplo, GABA, catecolaminas, serotonina, histamina e
xido ntrico) e hormnios (exemplo, cido indol actico). A glutationa um
exemplo de derivado de aminocido que exerce um papel essencial nas clulas.
O heme um exemplo de um sistema complexo de anis heterocclicos
derivado da glicina e da succinil CoA. A via biossinttica que produz heme
similar a uma que produz as clorofilas nas plantas.
9. A porfirina do heme degradada para formar o produto de excreo, a
bilirrubina em um processo de biotransformao que envolve as enzimas heme
oxigenase e biliverdina-redutase e UDP glicurosiltransferase. Aps sofre
reaes de conjugao, a bilirrubina excretada como um componente da bile.

Referncias
BROSNAN, J. T. Glutamate, at the interface between amino acid and carbohydrate
metabolism. J. Nutr., 130:988S-990S, 2000.
HORTON, H. R., MORAN, L. A., OCHS, R. S., RAWN, J. D., SCRIMGEOUR, K. G.
Principles of biochemistry. 3 ed. Upper Saddle River: Prentice Hall, 2002. p. 53167.
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed. New York
: McGraw-Hill, 2003. p. 449-529.

11 Metabolismo do nitrognio
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So Paulo :
Sarvier, 2002. p. 639-81.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto Alegre :
Artmed, 2000. p. 562-610.

Informaes adicionais
Metabolic Pathways of Biochemistry: http://www.gwu.edu/~mpb/
The Medical Biochemistry Page: http://www.indstate.edu/thcme/mwking/home.html
Biochemistry (Moskow): http://www.protein.bio.msu.su/biokhimiya/

357

12
Captulo

VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Regulao do
Metabolismo
Energtico

12
Regulao do Metabolismo
Energtico

Objetivos
1.

Compreender as estratgias intracelulares de regulao do metabolismo.

2.

Discutir o controle extracelular do metabolismo em relao a influncia


hormonal sobre o metabolismo celular.

3.

Discutir a produo e o papel dos segundos mensageiros na transduo de


sinal.

4.

Discutir o mecanismo de ao dos hormnios hidrofbicos.

A operao simultnea das vias anablicas (sntese) e catablicas


(degradao) seria improdutiva e impraticvel termodinamicamente.
As diferenas existentes entre os processos sintticos e degradativos
so coordenados para facilitar a regulao das vias. O controle do
metabolismo realizado no interior da clula (controle intracelular)
ou por estmulos externos clula (controle extracelular).

12.1 Controle intracelular do metabolismo


A regulao das vias metablicas deve ser considerada em termos
das caractersticas de cada reao constituinte. A partir do
conhecimento das concentraes intracelulares dos substrato(s) e
produto(s) de uma reao, possvel calcular a relao
[produto]/[substrato] e comparar o resultado obtido com o valor
estabelecido para a constante de equilbrio (K eq ) da reao.
Distinguem-se dois casos:
1. Reaes prximas do equilbrio. Os componentes da reao
quando presentes em concentraes prximas das concentraes de
equilbrio, o valor da relao [produto]/[substrato] prxima ao K eq
e, portanto, valores de G so prximos de zero. So reaes no
sujeitas a regulao e rapidamente leva substratos e produtos
concentrao de equilbrio. Tais reaes so facilmente revertidas por
mudanas das concentraes de produtos e/ou reagentes. Mudanas
nas concentraes dos substratos produzem rpida e concomitante
alterao nos nveis do produto at que o equilbrio seja atingido. Do

343

344

MOTTA Bioqumica

mesmo modo, quando os produtos estiverem em excesso, a reao


ocorrer na direo inversa at que as concentraes de equilbrio
sejam atingidas. A velocidade dessas reaes regulada pela
concentrao relativa de substratos e de produtos.
2. Reaes longe do equilbrio. O valor da relao
[produto]/[substrato] apresenta-se distante da K eq e a G grande
(reaes irreversveis). A atividade da enzima baixa e no permite
que o equilbrio seja atingido. Conseqentemente, os substratos
acumulam-se enquanto a quantidade de produto reduzida devido
transformao do mesmo pela enzima seguinte na via. Mudanas na
atividade da enzima (ex.: interaes alostricas) podem modificar a
velocidade da reao e, assim, alterar o fluxo metablico (velocidade
de escoamento) por meio de uma via que pode variar em resposta s
necessidades metablicas do organismo. Muitas reaes que operam
longe do equilbrio so irreversveis (exergnicas) e determinam a
velocidade de toda a via metablica. So chamadas etapas limitantes
da reao. As enzimas que catalisam reaes longe do equilbrio
esto sujeitas a regulao por diversos mecanismos.
A. Mecanismos de controle de vias metablicas
A conservao dos recursos celulares e o controle dos fluxos
metablicos so realizados por diferentes estratgias. Baseiam-se em
mecanismos de controle da atividade e concentrao das enzimas:
1. Controle alostrico. Os efetores alostricos negativos ou
positivos ligam-se a stios alostricos que catalisam etapas chaves
das vias metablicas (reaes essencialmente irreversveis). Os
efetores (moduladores) podem ser substratos, produtos ou coenzimas (ver Captulo 3: Enzimas).
A

E1

E1

E2

E2

E3

E3

E4

E4

E5

E5

2. Ciclos de substratos. So teis quando reaes opostas de noequilbrio anablicas ou catablicas envolvem o mesmo
intermedirio mas seguem em direes opostas. Em ausncia de
regulao, os dois metablitos podem ser continuamente
produzidos. O fluxo atravs de tais ciclos do substrato permite a
regulao recproca por diferentes enzimas alostricas que
catalisam a reao direta e a reao oposta. Os ciclos do substrato
determinam a direo e a amplitude das alteraes no fluxo
metablico em funo das modificaes nas concentraes dos
efetores alostricos.
3. Ciclos de interconverses enzimticas (modificaes covalentes).
Realizam a sintonia-fina do fluxo de vias metablicas. As
enzimas envolvidas podem existir sob duas formas, fosforiladas e

12 Regulao do metabolismo energtico

nofosforiladas. A converso de uma forma em outra, envolve a


modificao covalente da enzima. Em pH fisiolgico, o grupo
fosfato portador de duas cargas negativas e a fosforilao
resulta na introduo de grupo carregado que induz novos
arranjos na estrutura protica da enzima. A modificao
conformacional pode ser revertida por defosforilao. A
fosforilao e a defosforilao protica realizada por cinases e
fosfatases em reaes de no-equilbrio reguladas por efetores
alostricos.
4. Disponibilidade de substratos. um mecanismo que controla
muitas vias metablicas. O controle opera em vrios nveis
celulares:
A membrana plasmtica regula a entrada de nutrientes. Alguns
hormnios podem ser necessrios para efetuar a captao de
certos nutrientes, exemplo, a insulina promove a entrada de
glicose nas clulas-alvo.
As membranas intracelulares controlam a velocidade de entrada
de metablitos em um compartimento em particular. O fluxo
metablico pode ser controlado limitando a concentrao de
substrato, exemplo, a velocidade de entrada da acilCoA na
matriz mitocondrial modula a velocidade da oxidao dos
cidos graxos.
A atividade metablica de outras vias pode influenciar a
atividade enzimtica. O ciclo do cido ctrico pode ser inibido
pela utilizao de acetil-CoA e oxaloacetato em outras vias.
5. Estado energtico. As vias anablicas podem ser reguladas pela
disponibilidade de energia (ATP) para conduzir as reaes
endergnicas. Assim, as vias catablicas (reaes exergnicas)
operam em resposta as demandas por energia para aos processos
biossintticos (reaes endergnicas) em reaes acopladas
baseadas no efeito somatrio da energia livre.
6. Alteraes nas concentraes de enzimas chaves. um
mecanismo que envolve modificaes na velocidade de sntese ou
de degradao de enzimas chaves em resposta s necessidades
metablicas. Altas concentraes de substrato podem induzir
sntese de novas molculas de enzima, em fenmeno conhecido
como induo enzimtica. No incio, a induo enzimtica ocorre
no fgado e envolve a transcrio do gene especfico codificador
da enzima seguido pela traduo do mRNA para gerar molculas
adicionais da enzima. De modo inverso, a presena do produto
final de uma via pode interromper a sntese da enzima necessria
para a sua produo, um evento chamado represso enzimtica. A
molcula do repressor (produto final), inibe a sntese da enzima
pertinente pelo bloqueio da transcrio do gene. O resultado um
declnio progressivo na concentrao da enzima por meio de
processos celulares degradativos normais. As velocidades de
sntese e degradao de muitas enzimas reguladoras so alteradas
por hormnios.

345

346

MOTTA Bioqumica

12.2 Controle extracelular do metabolismo


As membranas plasmticas das clulas contm receptores
especficos que permitem que a clula responda a estmulos qumicos
externos que no podem atravessar a membrana. Nos organismos
multicelulares os estmulos so:

Hormnios. So mensageiros qumicos sintetizados pelas


glndulas endcrinas e transportados pela corrente sangnea aos
locais de ao, que costumam ser distantes do ponto de origem do
hormnio.

Neurotransmissores. So molculas liberadas pelas clulas


nervosas que atuam como sinais qumicos para alterar o
comportamento de clulas vizinhas.

Fatores de crescimento. So protenas que regulam a proliferao


celular.

A. Hormnios
As atividades metablicas intracelulares so coordenadas em
algum grau por mensageiros qumicos conhecidos por hormnios. A
sntese e secreo de muitos hormnios so reguladas por complexos
mecanismos de cascata e controlados em ltima anlise, pelo sistema
nervoso central. Os hormnios so produzidos por clulas
especializadas (sistema endcrino) e transportados pelo sangue para
ajustar a atividade fisiolgica das clulas-alvo. Muitos hormnios
modificam as funes celulares por alteraes na atividade ou
concentrao de enzimas. As principais hormnios envolvidos no
metabolismo energtico so:

Hormnios polipeptdicos. Existe uma grande variedade de


hormnios polipeptdicos, como por exemplo, os hormnios
hipotalmicos e hormnios hipofisrios. De grande interesse para
o metabolismo energtico so os hormnios insulina e glucagon.
A expresso, hormnios polipeptdicos envolvem tambm fatores
de crescimento e citocinas.

Hormnios derivados de aminocidos. Principalmente tirosina e


fenilalanina. Exemplos, a adrenalina (ou epinefrina) sintetizada
na medula adrenal e a tiroxina (T 4 ) e triiodotironina (T 3 )
produzidas pela tireide.

Hormnios esterides. So hormnios sintetizados a partir do


colesterol. Formam duas classes: os hormnios sexuais e
progestacionais e os hormnios adrenais.

Os hormnios polipeptdicos e alguns hormnios derivados de


aminocidos, tais como a adrenalina, so solveis em gua
(hidroflicos), mas insolveis em lipdeos e, portanto, no atravessam
as membranas plasmticas das clulas. No penetram nas clulasalvo, mas interagem com receptores especficos presentes na
superfcie celular para desencadear respostas intracelulares. As aes
no interior das clulas so mediadas por molculas de baixo peso
molecular denominadas segundos mensageiros (a molcula de
hormnio o primeiro mensageiro).

12 Regulao do metabolismo energtico

Os
hormnios
esterides
e
tireoideanos
(tiroxina
e
triiodotironina) atuam por diferentes mecanismos. Aps difuso para
dentro das clulas-alvo, se ligam a protenas receptoras especficas no
citoplasma e se movem para o interior do ncleo onde se unem a
stios especficos do DNA. Alteram a transcrio gnica e, assim, a
sntese protica.

B. Transduo de sinal
A transduo de sinal a capacidade da clula em responder aos
sinais extracelulares por meio de um conjunto de protenas que
reconhecem o sinal hormonal, transmitem o sinal para o interior da
clula e medeiam alteraes da atividade enzimtica e da expresso
gnica.
As vias de transduo de sinal variam grandemente em seus
detalhes moleculares, no entanto, certos elementos so semelhantes:
1. Os receptores localizados na superfcie das clulas reconhecem as
caractersticas estruturais do ligante (molculas extracelulares). O
ligante pode ser um fator de crescimento ou um hormnio
peptdico, um neurotransmissor ou uma molcula odorante. A
ligao do receptor a seu ligante altamente especfica,
envolvendo interaes hidrofbicas ou interaes eletrostticas.
2. Os receptores so protenas transmembrana que se comunicam
tanto com o exterior como com o interior da clula. A ligao do
ligante altera a conformao da molcula do receptor,
transmitindo assim, o sinal atravs da membrana.
3. Alteraes conformacionais podem modificar as interaes do
receptor com outras protenas ou podem estimular a prpria
atividade cataltica. Por exemplo, alguns receptores so enzimas
enquanto outros so canais inicos que abrem ou fecham em
resposta a ligao do ligante.
4. A ligao do ligante ao receptor inicia uma srie de eventos que
ocorrem em cascata com cada componente da via de sinalizao
ativando a seguinte. Essas etapas servem para amplificar o sinal
inicial. Muitas vias sinalizadoras envolvem protenas cinases,
enzimas que transferem o grupo fosforil do ATP para um
substrato polipeptdico. As cinases so de dois tipos: as tirosinacinases transferem um grupo fosforil para o grupo OH de uma
cadeia lateral da Tyr. As Ser/Thr-cinases transferem o grupo para
a cadeia lateral da Ser ou Thr.

CH2

PO23

CH2

PO32

CH2

PO23

CH3
Fosfo-Tyr

Fosfo-Ser

Fosfo-Thr

5. Vias sinalizadoras constitudas por enzimas que geram sinais


intracelulares chamados segundos mensageiros (para distinguir
do primeiro mensageiro ou extracelular). Os segundos
mensageiros incluem ons clcio e derivados nucleotdicos e
lipdicos, que difundem por alguma distncia no citosol celular.
Os movimentos dos segundos mensageiros ou outros

347

348

MOTTA Bioqumica

componentes da via sinalizadora podem ser necessrios para que


um sinal extracelular promova alteraes em vias metablicas
cujas enzimas esto localizadas longe da superfcie celular ou no
interior de organelas. Se a via sinalizadora altera a expresso
gnica, o sinal deve viajar at o ncleo, onde reconhecido por
mecanismos de importao nuclear. Os mais importantes
segundos mensageiros so: AMP cclico (AMPc), GMP cclico
(GMPc), 1,2diacilglicerol (DAG), inositol1,4,5trifosfato (IP 3 )
e Ca 2+ .
Estmulo externo
(Primeiro mensageiro)

Receptor de
membrana

Transdutor

Efetor
enzimtico

Membrana
plasmtica

Segundo mensageiro
Efetores citoplasmticos e nucleares
Resposta celular
Figura 12.1
Mecanismos gerais de transduo de sinal atravs da membrana plasmtica
da clula.

6. Via de sinalizao com chave liga/desliga. O mesmo sinal que


inicia uma resposta intracelular pode tambm ativar um
mecanismo de reduo da resposta. Por exemplo, a ativao de
uma protena-cinase muitas vezes desencadeia a ativao de uma
fosfatase, uma enzima que remove o grupo fosforil e assim,
restabelece os componentes sinalizadores ao seu estado de
repouso. Esse mecanismo tende a limitar tanto a extenso como a
durao dos efeitos de um hormnio.

D. Ao da insulina
Logo aps uma refeio, a concentrao da glicose sangnea
pode aumentar em cerca de 8 mM, em relao concentrao normal
de 3,65,6 mM. O aumento da glicose circulante desencadeia a
liberao do hormnio insulina.
A insulina um hormnio polipeptdico de 51 aminocidos,
secretado pelas clulas das ilhotas pancreticas (Langerhans), que
promove a utilizao da glicose, a sntese de protenas e a formao e
o armazenamento de triacilgliceris. As principais aes metablicas
da insulina so:

Msculo e outros tecidos. Promovem o transporte da glicose para


o interior das clulas, estimulam a sntese do glicognio e
suprimem a degradao do glicognio.

12 Regulao do metabolismo energtico

Adipcitos. Ativa a lipase lipoprotica extracelular, aumenta o


nvel da acetilCoAcarboxilase e estimula a sntese de
triacilgliceris.

Uma vez liberada para o sangue, a insulina liga-se aos receptores


de insulina na superfcie das clulas dos msculos e outros tecidos. O
receptor de insulina um membro de uma famlia de receptores de
superfcie celular que se ligam a vrios polipeptdeos, por exemplo,
EGF (fator de crescimento epidrmico), PDGF (fator de crescimento
derivado de plaquetas) e IGFI (fator de crescimento semelhante
insulina). Apesar das diferenas estruturais existentes entre os
membros do grupo, eles possuem algumas caractersticas em comum:
(1) um domnio externo que interage com ligantes extracelulares
especficos, (2) um segmento transmembrana e (3) um domnio
cataltico citoplasmtico com atividade tirosinacinase. Quando um
ligante (por exemplo, a insulina) interage com o domnio externo,
uma mudana conformacional na protena receptora ativa o domnio
tirosinacinase. A tirosina-cinase ativa inicia uma cascata de
fosforilao que provoca a autofosforilao do domnio
tirosinacinase.
O receptor de insulina uma glicoprotena transmembrana
composta por estrutura quaternria () 2 . Duas grandes subunidades
(135 kD) so extracelulares, onde se liga a insulina. Cada
subunidade (95 kD) em sua poro intracelular, contm um
segmento
transmembrana
e
domnios
com
atividade
de
tirosinacinase. Na ausncia do hormnio, os dois domnios
intracelulares das subunidades esto separados. A ligao da
insulina desencadeia uma modificao conformacional no receptor
que junta os domnios. Cada domnio intracelular da subunidade
uma tirosinacinase que promove a autofosforilao. A
tirosinacinase tambm fosforila um ou mais resduos de tirosina em
outras protenas, incluindo a IRS1 (substrato1 do receptor de
insulina) que desencadeia eventos adicionais na clula.
A ligao da insulina s subunidades ativa a tirosinacinase do
receptor e causa a fosforilao em cascata que modula vrias
protenas intracelulares. Por exemplo, a insulina ligada inibe a lipase
sensvel a hormnios nos adipcitos. Aparentemente, isso ocorre pela
ativao de uma fosfatase que defosforila a lipase. Alm disso, vrios
estudos sugerem que segundos mensageiros tambm so empregados,
por exemplo, o inositol monofosfato ou 1,2diacilglicerol (DAG), na
ativao da protenacinase C.
A ligao de insulina inicia uma cascata de fosforilao que induz
a transferncia de vrias protenas para a superfcie celular. Exemplos
dessas molculas incluem certas isoformas dos transportadores de
glicose e os receptores de LDL e IGFII. O movimento das molculas
para a membrana plasmtica na fase psabsortiva do ciclo
jejumalimentado, promove a captao de nutrientes pela clula e
sinais promotores do crescimento.
Componentes adicionais das vias de transduo de sinal contm
uma regio conhecida como domnio SH2 formada por uma cadeia
lateral de Arg que interage com os grupos fosfo-Tyr do receptor e
com outras protenas. Essas interaes permitem que a ligao de um
hormnio altere a atividade de vrias protenas intracelulares. Em um

349

350

MOTTA Bioqumica

caso, uma poro do receptor clivada por uma protease e viaja at o


ncleo, onde modula a transcrio gnica.
Insulina altera os processos metablicos
Somente as clulas que possuem receptores para a insulina
respondem ao hormnio e, o tipo de resposta, varia para cada tipo de
clula. Nos tecidos insulina-responsivos como os msculos e o tecido
adiposo, a insulina estimula fortemente o transporte de glicose para o
interior das clulas. A V max para o transporte da glicose aumenta, no
porque a insulina altera a atividade cataltica intrnsica do
transportador, mas porque a insulina aumenta o nmero de
transportadores da superfcie celular. Esses transportadores
denominados GLUT4 (transportador de glicose isoforma 4) para
distinguir de outras protenas transportadoras de glicose, so
estimulados nas membranas de vesculas intracelulares. Quando a
insulina se liga clula, a vescula funde-se com a membrana
plasmtica. Essa translocao do transportadores para a superfcie
celular aumenta a velocidade pela qual a glicose entra na clula. A
GLUT4 um transportador passivo, que opera de forma similar ao
transportador de glicose nos eritrcitos. Quando o estmulo insulnico
removido, os transportadores retornam para as vesculas
intracelulares por endocitose.

GLUT 4
Insulina

Microvescula
com GLUT 4
Figura 12.2
Efeito da insulina sobre o GLUT4. A insulina estimula a fuso da
microvescula com a protena transportadora de glicose GLUT4 aumentando
o nmero de transportadores de glicose na membrana plasmtica.

A insulina estimula a captao de cidos graxos e glicose.


Quando o hormnio se liga ao seu receptor no tecido adiposo, ocorre
a ativao da protena extracelular lipase lipoprotica, que remove os
cidos graxos das lipoprotenas circulantes para serem captados e
armazenados nos adipcitos.
A ligao da insulina em seus receptores na superfcie celular
tambm modula as enzimas do metabolismo do glicognio. O
metabolismo do glicognio caracterizado pelo equilbrio entre a
sntese e a degradao do glicognio. A sntese realizada pela
enzima glicognio-sintase, que adiciona unidades de glicose aos
terminais de um polmero de glicognio (ver Captulo 6).
A glicognio-fosforilase mobiliza resduos de glicose do
glicognio por fosforlise (clivagem pela adio de um grupo fosfato
em lugar de gua) para a gliclise. A insulina participa indiretamente
da regulao da glicogniosintase e da glicogniofosforilase. O

12 Regulao do metabolismo energtico

351

receptor tirosinacinase para a insulina ativa outras protenas,


incluindo fosfatases que defosforilam (ativam) a glicogniosintase e
defosforilam (desativam) a glicogniofosfarilase. Isso resulta na
acelerao da sntese do glicognio enquanto a velocidade da
glicogenlise diminui. De fato, as mltiplas cinases e fosfatases
interagem com as enzimas do metabolismo do glicognio para
produzir uma sintonia fina na regulao que, ao final, controlada
por sinais introduzidos por hormnios extracelulares.

Quadro 12.1 Efeitos metablicos do diabetes


A caracterstica fundamental do diabetes no-tratado
a hiperglicemia crnica (elevadas taxas de glicose no
sangue). A perda de sensibilidade pelos tecidos insulina
promove a falta de captao de glicose. O metabolismo
responde como se no existisse glicose disponvel, de tal
modo que a gliconeognese aumenta produzindo maior
hiperglicemia. A glicose circulante em altas concentraes
participa da glicao no-enzimtica das protenas. Esse
processo lento, mas as protenas glicadas podem
gradualmente acumular e danificar tecidos provocando, por
exemplo, doena arterial coronria, retinopatia, nefropatia,
catarata e neuropatia.
A leso tecidual tambm pode resultar de efeitos
metablicos da hiperglicemia. Como os msculos e o tecido
adiposo so incapazes de aumentar a captao de glicose
em resposta insulina, a glicose penetra em outros tecidos.
No interior dessas clulas, a aldose-redutase catalisa a
converso da glicose em sorbitol:
+

Glicose + NADPH sorbitol + NADP

Como a aldose-redutase tem um Km elevado para a


glicose (ao redor de 100 mM), a velocidade da reao
normalmente muito lenta. No entanto, sob condies
hiperglicmicas, o sorbitol acumula e pode alterar o
equilbrio osmtico da clula que modifica a funo renal e
desencadeia a precipitao de protenas em outros tecidos.
A agregao das protenas no cristalino leva catarata. Os
neurnios e as clulas que revestem os vasos sangneos
tambm podem ser lesados, aumentando a probabilidade de
neuropatias e problemas circulatrios que em casos severos
resultam em infarto do miocrdio, derrames ou amputao
das extremidades.
O diabetes tambm uma desordem do metabolismo
das gorduras, pois a insulina normalmente estimula a
sntese de triacilglicerol e suprime a liplise nos adipcitos.
O diabetes no-controlado tende a metabolizar os cidos
graxos em lugar dos carboidratos, o que resulta na produo
de corpos cetnicos. O excesso de produo de corpos
cetnicos leva a cetoacidose diabtica.

No diabetes, o organismo acredita estar em jejum.


Paradoxalmente, cerca de 80% dos pacientes com diabetes
tipo 2 so obesos. A obesidade particularmente com grandes
depsitos abdominais est fortemente correlacionada com o
desenvolvimento da doena. Isso se deve ao aumento dos
nveis de cidos graxos circulantes que podem interferir no
metabolismo de outros combustveis metablicos, os
carboidratos. Desse modo, as clulas empregam menos
glicose como combustvel. Como resposta, as clulas do
pncreas deveriam aumentar a produo de insulina (alguns
tipos de diabetes tipo 2 apresentam elevados teores de
insulina) no entanto, eventualmente ela est reduzida.
O tecido adiposo exerce um papel ativo no
desenvolvimeto de diabetes do tipo 2. Os adipcitos no so
depsitos inertes de gordura mas sintetizam ativamente
hormnios peptdicos e esterides, que atuam em outros
rgos incluindo o crebro. Por exemplo, os adipcitos
secretam leptina, um hormnio que ajuda a regular o apetite e
contribui no desenvolvimento da obesidade.
Os adipcitos tambm produzem dois hormnios, fator de
necrose tumoral (TNF) e resistina. O hormnio protico
resistina pode explicar como a obesidade se relaciona ao
diabetes tipo 2. Em pessoas obesas, os adipcitos produzem
nveis aumentados de resistina que atuam prejudicando o
funcionamento dos receptores de insulina que existem na
clula. Assim, as clulas deixam de responder insulina
quando existe muita resistina no sangue. Deste modo, as
pessoas obesas tm mais resistina e, como conseqncia,
respondem pior insulina, desenvolvendo diabetes.
Certos frmacos empregados para tratar o diabetes tipo 2
parecem diminuir a quantidade de resistina secretada pelos
adipcitos. No entanto, o papel da resistina sob condies
normais (no-diabticos) permanece obscura.

C. Ao do glucagon e das catecolaminas


Algumas horas aps uma refeio, a glicose da dieta foi captada
pelas clulas e consumida como combustvel, armazenada como
glicognio ou convertida em cidos graxos para ser utilizada a longo
prazo. A partir desse momento, o fgado inicia a mobilizao da
glicose para manter a concentrao da glicose sangnea constante.
Essa fase do metabolismo no mais regulada pela insulina mas por
outros hormnios, principalmente o glucagon e as catecolaminas
(adrenalina e noradrenalina).

352

MOTTA Bioqumica

O glucagon, um hormnio peptdico com 29 resduos de


aminocidos, sintetizado e liberado pelas clulas das ilhotas
pancreticas quando a concentrao da glicose sangnea comea a
cair abaixo de 5 mM. De modo diferente da insulina, o glucagon
estimula o fgado para liberar a glicose produzida pela glicogenlise
e gliconeognese, e estimula a liplise no tecido adiposo para liberar
os cidos graxos para a circulao. As clulas musculares no
apresentam receptores para o glucagon e, portanto, no responde ao
hormnio.
Apesar dos mecanismos de transduo de sinais diferirem um
pouco, as catecolaminas promovem os mesmos efeitos gerais que o
glucagon. Por exemplo, o estmulo da adrenalina sobre as clulas
musculares ativa a glicogenlise, que disponibiliza mais glicose para
a contrao muscular. As catecolaminas so derivadas da tirosina e
sintetizadas pelo sistema nervoso central como neurotransmissores ou
pela medula adrenal como hormnios. As aes das catecolaminas so
mediadas por duas classes de receptores na superfcie celular, os
receptores adrenrgicos e os adrenrgicos.
Os receptores do glucagon e os receptores adrenrgicos, tais
como, o receptor adrenrgico, so glicoprotenas transmembranas
hlices transmembranas (receptores
que
possuem
sete
serpenteantes). Esses receptores possuem uma extremidade
Nterminal extracelular que contm o local de ligao do hormnio
(sete seqncias de 2025 resduos hidrofbicos cada) que formam
trs alas extracelulares e trs alas intracelulares alm de uma
poro no lado citoslico da membrana plasmtica na qual a protena
G particular se liga. Os receptores do glucagon e das catecolaminas
no so tirosinacinases, mas a ligao desses hormnios
desencadeiam alteraes conformacionais que afetam a poro
intracelular da protena. Acredita-se que esses receptores atuam como
protenas alostricas que alternam entre duas conformaes, em
resposta ao ligante ligado.
Protenas G: mediadores intracelulares
No interior das clulas, uma protena trimrica conhecida como
protena G interage com a poro intracelular de receptores. As
protenas G so assim chamadas por que ligam GDP e GTP. Os trs
tipos de subunidades da protena G so designadas , e . Na forma
inativa, a protena G existe como um trmero ligado a GDP pela
subunidade . A ligao de um ligante a um receptor apropriado
desencadeia uma alterao conformacional da protena G, que
provavelmente mediada por uma extenso C-terminal da subunidade
. Como resultado, a subunidade libera a GDP e, em seguida, liga a
GTP em seu lugar. O terceiro grupo fosfato da GTP no facilmente
acomodado no trmero , de tal modo que a subunidade se
dissocia dos componentes , que permanecem fortemente ligados
como um dmero. Uma vez dissociados, tanto a subunidade GTP
como o dmero tornam-se ativos; ou seja, eles interagem com
componentes celulares na via de transduo de sinal.
A atividade sinalizadora da protena G est limitada pela
atividade da GTPase intrnsica da subunidade , que hidrolisa GTP a
GDP + P i . A hidrlise do GTP permite que as trs subunidades da

12 Regulao do metabolismo energtico

protena G retornem sua conformao original ( GDP ) (Figura


12.2).
Complexo
hormnio-receptor

GDP

GDP

GTP

GTP

Inativo

Ativo
H2O
Atividade
GTPase

Pi
GDP
Inativo
Figura 12.2
Ciclo da protena G. O trmero , com o GDP ligado a subunidade ,
inativo. A ligao do ligante ao receptor associado com a protena G
desencadeia modificaes conformacionais que causam a substituio do
GDP pelo GTP e a subunidade se dissocia do dmero . As duas pores
da protena G so ativas na via de sinalizao. A atividade da GTPase do
subunidade retorna a protena G a sua forma trimrica inativa.

O nucleotdeo GDP ligado protena G trimrica dissocia com


uma velocidade basal de cerca de 10 5 s 1 , o que significa que a
ativao fisiolgica da protena G (a liberao de GDP e a ligao de
GTP) pode levar horas. In vivo, a troca de GDP pelo GTP ocorre em
menos de um segundo pela ajuda de protenas conhecidas como GEFs
(guanine nucleotide exchange factors). De modo similar, a velocidade
cataltica GTPase muitas vezes aumentada por protenas acessrias
conhecidas como GAPs (GTPase activating proteins), que
impulsionam a atividade da GTPase de cerca de 24 min 1 para,
aproximadamente, 10 2 10 3 min 1 .
Via adenililciclase
As subunidades separadas GTP e exercem diferentes efeitos
sobre as protenas celulares. Por exemplo, a subunidade GTP liga e
ativa alostericamente a enzima adenilil ciclase, uma protena integral
presente na superfcie interna da membrana que catalisa a sntese de
AMP cclico (AMPc) a partir de ATP:

353

354

MOTTA Bioqumica

NH2

NH2
N

N
O
O

P
O

O
O

H2 C

PPi

H2
C
O

OH

HO

H
O
P O

ATP

Adenilil-ciclase

OH

AMP-cclico (AMPc)

O stio cataltico da adenililciclase inclui duas cadeias laterais


Asp tambm como ons metlicos (provavelmente Mg 2+ ) que
coordena com os dois resduos Asp e os grupos fosfato do ATP.
O AMPc um segundo mensageiro, uma substncia pequena e
altamente solvel que pode livremente difundir na clula. O AMPc
ativa uma Ser/Thr cinase chamada protena cinase A. Na ausncia de
AMPc, essa cinase um tetrmero inativo formado por duas
subunidades reguladoras (R) e duas catalticas (C)

Consequentemente, o nvel de segundo memsageiro AMPc


determina o nvel de atividade da protena-cinase A. O sinal AMPc (e
portanto, a atividade da protena-cinase A) desligado pela ao da
fosfodiesterase que converte o AMPc em AMP:
NH2
N

N
H

O
P O

Fosfodiesterase

OH
AMPc

H2 O

H
N

N
O

H2 C

O
H

H
O

H2
C
O

NH2

H
HO

OH

AMP

Um dos alvos intracelulares da protenacinase A a


fosforilase cinase,
a
enzima
que
fosforila
(desativa)
a
glicogniosintase e fosforila (ativa) a glicognio-fosforilase. Os
eventos sinalizadores explicam como hormnios como o glucagon e
adrenalina, que desencadeiam a produo de AMPc, promovem a
glicogenlise e inibem a sntese do glicognio. Embora a
fosforilasecinase seja ativado pela protenacinase A, ela s
ativada ao mximo quando os ons Ca 2+ esto presentes como
resultado de outras vias sinalizadoras (ver adiante).

12 Regulao do metabolismo energtico

Os receptores com sete hlices transmembranas, modificam a sua


conformao em resposta ao estmulo externo a, assim, ativam as
protenas G. Esses receptores so responsveis pela transmisso de
informaes provenientes de diferentes sinais.
A estimulao da adenilil-ciclase pela protena G de curta
durao, pois a subunidade G tambm uma GTPase que hidrolisa o
GTP a GDP + P i . Em funo da ao da GTPase da subunidade G , a
atividade da adenilil-ciclase depende da estimulao hormonal
contnua, cessando em ausncia do hormnio. Isso fundamental para
o segundo mensageiro que uma vez gerado deve ser desativado
rapidamente.
As protenas alvo afetados pelo AMPc dependem do tipo de
clula. Alm disso, vrios hormnios podem ativar a mesma protena
G. Portanto, diferentes hormnios podem realizar o mesmo efeito. Por
exemplo, em clulas hepticas a degradao do glicognio pode ser
iniciada tanto pela adrenalina como pelo glucagon.
Alm das protenas G que ativam a adenililciclase, existem
protenas G inibitrias que promovem a reduo dos nveis de AMPc
por ligao em diferentes stios da protena adenililciclase. Assim, o
mesmo hormnio pode criar efeitos estimuladores pela ligao a um
dos receptores mas tambm pode causar inibio por ligao a outro
tipo de receptor. Outras protenas G ativam a AMPc fosfodiesterase,
produzindo efeitos similares nos processos dependentes de AMPc.
Consequentemente, a resposta celular a um sinal hormonal no
depende somente da presena do receptor apropriado, mas tambm se
a protena G associada est na forma ativada ou inibitria. Como um
nico tipo de hormnio pode ativar dois tipos de protena G, o
sistema sinalizador pode ser ativo somente por curtos perodos antes
de ser desativado.

355

Glucagon/Adrenalina

Receptor
protena G

Protena G

Adenilato
ciclase

AMPc

Protena
cinase A

Fosforilase
cinase

Glicognio
sintase

Glicognio
fosforilase

Inibe
Glicognio
sintase

Promove
glicogenolise

Figura 12.3
Resumo da regulao da glicogniosintase e da glicognio-fosforilase

356

MOTTA Bioqumica

Hormnio
estimulador

Hormnio
inibidor
Adenilil
ciclase

Rs

Ri

Gs GDP

GDP

GTP (+)
Gs

GTP
Gi

GTP

GTP
ATP

GDP

Gi

GDP

PPi

AMPc
5-AMP

Protena
cinase A
(inativa)

Fosfodiesterase

Protena
cinase A
(ativa)

Protena-OH

Protena

Resposta
celular

Figura 12.4
Sistema de sinalizao da adenilil-ciclase. A ligao do hormnio ao receptor R S
promove sua ligao protena G estimuladora (G S ) que estimula a troca de GDP por
GTP na sua subunidade G S . Outros hormnios podem se ligar ao receptor inibitrio (R i )
que est acoplado adenilil ciclase pela protena G inibitria (G i ). A G S ativa a
adenilil ciclase, enquanto a G i inibe-a. O AMPc ativa a protena-cinase A, resultando na
fosforilao das protenas celulares.

As protenas G participam de outras vias de sinalizao


Via guanilil- ciclase
Um dos importantes alvos das protenas G a guanililciclase,
enzima que catalisa a transformao de trifosfato de guanosina (GTP)
em GMP cclico (GMPc), um segundo mensageiro. Apesar da sntese
de GMP cclico ocorrer em quase todos os tecidos animais, seu papel
no metabolismo celular ainda no foi plenamente esclarecido. Duas
guanililciclase esto envolvidas na transduo de sinal. Uma est
ligada membrana e atua como receptora de hormnio. A outra uma
enzima citoplasmtica.

12 Regulao do metabolismo energtico

1. Guanililciclase ligada membrana. Dois tipos de molculas


ativam a guanililciclase ligada membrana: o fator natriurtico
atrial e a enterotoxina bacteriana.

Fator natriurtico atrial (FNA). um peptdeo liberado das


clulas atriais cardacas em resposta ao volume de sangue. O
efeito fisiolgico do FNA reduzir a presso sangnea via
vasodilatao e diurese (aumento da excreo urinria) por meio
do GMPc. O GMPc citoslico ativa a fosforilao da enzima
protena-cinase G. O papel dessa enzima na mediao dos efeitos
do FNA ainda no foi esclarecido. O FNA ativa a guanililciclase
em vrios tipos de clulas. Por exemplo, nos tbulos coletores
renais, a sntese de GMPc estimulada pelo FNA, aumenta a
excreo renal do Na + e gua.

Enterotoxina bacteriana. A ligao da enterotoxina (produzida


por vrias espcies de bactrias) guanililciclase encontrada na
membrana plasmtica das clulas intestinais causa diarria. Por
exemplo, determinadas linhagens de E. coli produzem uma
enterotoxina termolbil (protena semelhante toxina da clera).
A interao da enterotoxina ao receptor plasmtico do entercito
ligado a guanililciclase desencadeia a excessiva secreo de
eletrlitos e gua no lmen do intestino delgado.

2.
Guanililciclase
citoplasmtica.
A
guanililciclase
citoplasmtica possui um grupo prosttico heme. A enzima ativada
pelo Ca 2+ , assim qualquer aumento do Ca 2+ citoplasmtico promove a
sntese de GMPc. Essa guanililciclase ativada pelo xido ntrico
(NO). Algumas evidncias sugerem que a ligao do NO ao grupo
heme ativa a enzima. Em vrios tipos de clulas (exemplo, clulas do
msculo liso), a GMPc estimula o funcionamento dos canais de ons.
Sistema do fosfoinositdeo e clcio
O sistema do fosfoinositdeo media a ao de hormnios, de
fatores de crescimento e de outros ligantes. A adrenalina liga-se a um
receptor conhecido como receptor adrenrgico que faz parte do
sistema fosfoinositdeo que tambm formado por um receptor com
sete segmentos transmembrnicos, uma protena G e uma protenacinase especfica. A protena G associada com o receptor
adrenrgico ativa a enzima celular fosfolipase C ligada
membrana plasmtica. A enzima ativa catalisa a clivagem do
fosfatidilinositol4,5difosfato (PIP 2 ) para formar dois segundos
mensageiros: o 1,2diacilglicerol (DAG) e o inositol1,4,5trifosfato
(IP 3 ).

357

358

MOTTA Bioqumica

O
O

O
CH2

CH

OC

R1

CH2

OPO32

OH

OH

HO

O3 PO
H

OPO32

OH

OH

HO

H
OPO32

H
H
OPO32

H2 O

Inositol-1,4,5-trifosfato (IP3 )

Fosfolipase C

OH

R2
Fosfatidilinositol-4,5-difosfato (PIP2 )

CH2

CH

OC

R1

CH2

R2

1,2-Diacilglicerol

O PIP 2 est presente em pequenas quantidades mas pode ser


sintetizado a partir do fosfatidilinositol4fosfato (PIP) que, por sua
vez, produzido a partir do fosfatidilinositol (PI) por fosforilao
especfica.
1. Diacilglicerol (DAC). O 1,2diacilglicerol um segundo
mensageiro lipossolvel que permanece na membrana plasmtica e
ativa a protenacinase C (PKC). Foram identificadas vrias
protenascinase C. Dependendo da clula, a protenacinase C
ativada fosforila enzimas reguladoras especficas ativando-as ou
inativando-as. So conhecidas no mnimo 11 diferentes isoformas de
protenascinases C presentes em diferentes tecidos.
Em baixas concentraes de ons Ca 2+ e em ausncia de DG, as
PCKs so inativas. A ligao da DG causa uma alterao
conformacional que aumenta a afinidade das PCKs pelos ons Ca 2+ e
DG. Ao ligar-se membrana plasmtica, a isoenzima torna-se ativada.
2. Inositol1,4,5trifosfato (IP 3 ). O inositol1,4,5trifosfato
hidrossolvel e se difunde desde a membrana atravs do citoplasma
para interagir com receptores especficos do retculo endoplasmtico
onde se liga a um canal de transporte de Ca 2+ abrindo-o e liberando
o Ca 2+ para o citosol. O efluxo dos ons clcio dos depsitos no
retculo endoplasmtico induz uma modificao conformacional no
receptor IP 3 que causa a abertura dos canais ons Ca 2+ da membrana
plasmtica e, assim, desencadeia vrios processos celulares. O
principal receptor protico para os ons Ca 2+ a calmodulina uma
protena que se liga ao Ca 2+ . Os complexos clciocalmodulina so
capazes de mediar muitas reaes reguladas pelo clcio. De fato, a
calmodulina a subunidade reguladora de algumas enzimas
(exemplo, a fosforilase-cinase, que converte a fosforilase b em
fosforilase a no metabolismo do glicognio).
A transmisso do sinal encerrada pela defosforilao do IP 3 pela
ao
hidroltica
da
inositoltrifosfatase
para
formar

12 Regulao do metabolismo energtico

inositol1,4bifosfato. Os ons Ca 2+ podem retornar aos seus


estoques intracelulares pela ao de uma Ca 2+ ATPase s custas da
hidrlise de ATP.
Ligante
Espao extracelular
R
Gq GDP

GTP
Gq
GDP

PLC

DG
PKC

PIP2

Protena-OH

Ca2+

GTP

Protena

Resposta
celular
IP3
IP2
IP
Retculo
endoplasmtico

Ca2+
Resposta
celular

Lmen

Fosfatases

Canal Ca 2+

Figura 12.5
Sistema de sinalizao do fosfoinositdeo. A ligao do ligante a seu receptor
transmembrana R ativa a fosfolipase C (PLC) por meio da protena G q . A fosfolipase C
catalisa a hidrlise de PIP 2 nos segundos mensageiros IP 3 e diacilglicerol (DG). O IP 3
hidrossolvel difunde do citoplasma para o retculo endoplasmtico onde estimula a
2+
que vai ativar, via calmodulina, numerosos processos celulares. O
liberao do Ca
2+
diacilglicerol permanece associado membrana, onde juntamente como o Ca ativa a

protena cinase C (PKC), que fosforila e modula muitas protenas celulares.

359

360

MOTTA Bioqumica

Glucagon

Adrenalina

Receptor
-adrenrgico

Receptor
-adrenrgico

Fosfolipase C

Receptor
de glucagon

Adenilato
ciclase

Adenilato
ciclase

ATP

PIP2

ATP

DG
IP3
cAMP
Ca2+

Ca2+
Glicognio

Glicognio
sintase

Glicognio
fosforilase

UDP - glicose
Retculo
endoplasmtico
UDP - glicose
pirofosforilase

G1P
Fosfoglicomutase

G6P
Glicose-6-fosfatase

Clula heptica

Glicose

Glicose

Figura 12.6
Viso geral da ao da adrenalina e glucagon no metabolismo do glicognio.
PIP 2 = fosfatidilinositol4,5bifosfato, IP 3 = inositol1,4,5trifosfato, DG =
1,2diacilglicerol

D. Hormnios esterides e tireoideanos


Os mecanismos de transduo de sinal das molculas de
hormnios hidrofbicos resultam em modificaes na expresso
gnica. Os hormnios esterides e tireoideanos so molculas
hidrofbicas e lipossolveis transportadas pelo sangue ligadas a
diferentes protenas. Os transportadores de esterides incluem a
globulina
de
ligao
a
corticoesterides
(CBG,

12 Regulao do metabolismo energtico

corticosteroidbinding globulin) ou transcortina, a globulina de


ligao a hormnios sexuais (SHBG, sex hormone binding globulin),
a protena de ligao a andrgeno (BPP, androgen binding protein) e
a albumina. Os hormnios tireodeanos so transportados pela
globulina transportadora de tiroxina, pralbumina transportadora de
tiroxina e albumina.
Ao atingir as clulasalvo, as molculas de hormnios
hidrofbicos se dissociam de suas protenas transportadoras e
difundem atravs das membranas plasmticas para ligarem-se aos
receptores intracelulares especficos. O complexo hormnioreceptor
interage com fatores de transcrio alterando a expresso gnica e
afetando, assim, a sntese protica. Enquanto os hormnios
polipeptdeos e as catecolaminas efetuam alteraes rpidas (dentro
de segundos ou minutos) por meio de ativao ou inibio de enzimas
prexistentes, a ao dos hormnios esterides e tireoideanos
observada em prazos mais longos (dias ou semanas).
A atividade dos hormnios hidrofbicos limitada nas clulas
eucariticas pela presena de molculas receptoras. Os hormnios
podem difundir para clulas noalvo, mas em ausncia de molculas
receptoras apropriadas, no exercem suas atividades. Nos
tecidosalvo, dependendo do tipo de hormnio envolvido, a interao
pode ocorrer no citoplasma (exemplo, glicocorticides) ou no interior
do ncleo (exemplo, estrognios, andrognios e hormnios
tireoideanos):

Receptores glicocorticides presentes principalmente no


citoplasma das clulasalvo e complexados a protenas que se
ligam ao DNA para a regulao da transcrio.

Receptores do estradiol e progesterona so predominantemente


encontrados no ncleo.

Receptores de homnios tireoideanos esto sempre ligados ao


DNA.

Os receptores hormonais intracelulares existem em nveis ao


redor de 10010.000 molculas por clula e apresentam grande
afinidade por seu ligante.
Dentro do ncleo, cada complexo hormnio esteridereceptor
liga-se a segmentos especficos do DNA chamados elementos de
resposta a hormnios (HRE), cuja seqncia de consenso consiste
de duas seqncias de seis nucleotdeos separados por trs
nucleotdeos (n). As seqncias de consenso no DNA de resposta aos
glicocorticides e progesterona so:
AGAACAnnnTGTTCT
TCTTGTnnnACAAGA
Os dmeros receptores interagem com fatores de transcrio,
outras protenas ligadoras de DNA e cofatores para afetar a
transcrio do genealvo no mRNA o qual serve como um modelo
para a sntese ribossmica das protenas. Estima-se que cada tipo de
HRE pode influenciar a transcrio de 50100 genes.
Conseqentemente, a ligao de um complexo hormnio esteridereceptor a seu HRE induz alteraes em larga escala na funo
celular.

361

362

MOTTA Bioqumica

O estradiol liga-se ao complexo receptorhsp (hsp: protena de


choque trmico) fracamente associado com o ncleo. Aps a
dissociao e a dimerizao do receptor, o dmero receptor liga-se ao
HRE, cuja seqncia de consenso :
AGGTCAnnnTGACCT
TCCAGTnnnACTGGA
Segue-se a transcrio e a sntese das protenas.
Aps entrar na clula, os hormnios tireoideanos ligam-se
temporariamente a protenas especficas citoplasmticas. As
molculas dos hormnios migram para o ncleo e mitocndria onde
interagem com receptores. No ncleo, a ligao dos hormnios
tireoideanos inicia a transcrio de genes que exercem papis
fundamentais em vrios processos celulares, como aqueles que
codificam o hormnio de crescimento e a (Na + K + )ATPase. Na
mitocndria, os hormnios tireoideanos promovem o consumo de
oxignio e o aumento da oxidao dos cidos graxos.

E. Fatores de crescimento
A sobrevivncia dos organismos multicelulares necessita que a
proliferao e a diferenciao celular seja rigorosamente controlada.
As condies que regulam esses processos no esto ainda
completamente esclarecidas. Entretanto, uma variedade de
polipeptdeos e protenas hormnioslike, denominados fatores de
crescimento (ou citocinas), parecem regular o crescimento, a
diferenciao e a proliferao de vrias clulas. Muitas vezes, a ao
de vrios fatores de crescimento necessria para promover respostas
celulares. Os fatores de crescimento diferem dos hormnios por
serem sintetizados em vrios tipos de clulas e no somente nas
clulas endcrinas. Exemplos de fatores de crescimento em
mamferos incluem o fator de crescimento epidrmico (EGF), fator de
crescimento derivado das plaquetas (PDGF) e as somatomedinas.
Molculas similares como as interleucinas, que promovem a
proliferao e diferenciao celular no sistema imune, tambm so
consideradas citocinas. Vrias molculas supressoras do crescimento
tambm foram caracterizadas. Os mecanismos pelos quais as citocinas
exercem seus efeitos ainda so motivos de estudo. Alguns aspectos da
ao das citocinas foram identificados e lembram aqueles observados
para os hormnios.
1. Fator de crescimento epidermal (EGF). um mitgeno
(estimulador da diviso celular) para um grande nmero de clulas
epiteliais, como as epidrmicas e de revestimento gastrointestinal. O
EGF desencadeia a diviso celular quando se liga aos receptores EGF
da membrana plasmtica, que so tirosinascinases estruturalmente
semelhantes aos receptores de insulina (ver acima).
2. Fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF).
secretado pelas plaquetas sangneas durante o processo de
coagulao. Atuando com o EGF, o PDGF estimula o processo
mitognico nos fibroblastos e em outras clulas vizinhas durante a
cura de ferimentos. O PDGF tambm promove a sntese de colgeno
nos fibroblastos.

12 Regulao do metabolismo energtico

3. Somatomedinas. So polipeptdeos que mediam as aes


promotoras de crescimento do GH (hormnio do crescimento).
Produzidas no fgado e em outros rgos (exemplo, msculo,
fibroblasto, osso e rim) quando o GH se liga ao seu receptor na
superfcie celular, as somatomedinas estimulam o crescimento animal.
As somatomedinas tambm promovem os mesmos processos
metablicos realizados pela insulina (exemplo, transporte de glicose e
sntese de gorduras). Por essa razo, as duas somatomedinas
encontradas em humanos so chamadas fatores de crescimento I e II
semelhantes insulina (IGFI e IGFII). Como outros fatores de
crescimento polipeptdicos, as somatomedinas desencadeiam
processos intracelulares pela ligao a receptores na superfcie
celular. Os receptores da somatomedina so tirosinacinases.
4. Interleucina2 (IL2). uma grupo de citocinas pequenas
protenas liberadas por vrias clulas do organismo, normalmente em
resposta a um estmulo ativador que regulam o sistema imune alm
de promover o crescimento e a diferenciao celular. A IL2
derivada de linfcitos T auxiliares que causa proliferao dos
linfcitos T e linfcitos B ativados. As clulas so tambm
estimuladas a produzir receptores de IL2. A unio da IL2 aos
receptores deflagra a diviso celular para a produo de numerosas
clulas T idnticas. Esse processo, tambm como outros aspectos da
resposta imune, continua at que o antgeno seja eliminado do corpo.
O frmaco imunossupressor ciclosporina A inibe a produo de IL2
suprimindo respostas indesejveis, tais como a rejeio de enxertos.
5. Citocinas inibidoras do crescimento. Os interferons so uma
classe de pequenas citocinas proticas e glicoprotenas, produzidas
pelas clulas T, pelos fibroblastos e por outras clulas em resposta a
infeces virais e outros estmulos biolgicos e sintticos. Os
interferons ligam-se a receptores especficos nas membranas
celulares; seus efeitos consistem em induo de enzimas, supresso
da proliferao celular, inibio da proliferao viral, intensificao
da atividade fagoctica dos macrfagos e aumento da atividade
citotxica dos linfcitos T. Os interferons so divididos em cinco
grandes classes (alfa, beta, gama, tau e mega) e vrias subclasses.
Os fatores de necrose tumoral (TNF) so txicos para as clulas
tumorais. Tanto o TNF (produzido pelos leuccitos fagocticos
antgenoativados) e o TNF (produzido por clulas T ativadas)
suprimem a diviso celular. Tambm exercem vrios papis na
regulao de vrios processos de desenvolvimento.

12.3 Compartimentalizao
Muitas vias anablicas e catablicas esto confinadas a diferentes
compartimentos celulares. Nas clulas hepticas, a biossntese dos
cidos graxos a partir da acetilCoA ocorre no citosol onde as
enzimas para a biossntese e para a gerao de NADPH esto
localizadas. A degradao dos cidos graxos (oxidao) ocorre no
interior da mitocndria onde as enzimas apropriadas e os processos
para a fosforilao oxidativa esto presentes. Assim, a biossntese e a
degradao dos cidos graxos ocorrem em diferentes compartimentos.

363

364

MOTTA Bioqumica

A realizao de reaes em compartimentos especficos (matriz


mitocondrial e citosol) requer mecanismos para transportar
substncias atravs das membranas. Os dois mecanismos principais
de transporte so:

Sistemas de transporte. Utilizam protenas transportadoras


especficas que medeiam os movimentos transmembrana entre a
mitocndria e citosol de pequenos ons inorgnicos, piruvato,
carnitina/acilcarnitina, citrato, aspartato, malato, adenina
nucleotdeo, citrulina e ornitina.

Sistemas de lanadeiras (circuitos). Os grupos funcionais ou


tomos em lugar de molculas, atravessam a membrana. O grupo
funcional transferido para um composto que transferido para
outro compartimento, ex.: lanadeira malatoaspartato em que os
eltrons do NADH citoslico so transportados para a
mitocndria.

Resumo
1. Os hormnios so molculas que transferem informaes entre as
clulas. Para assegurar o controle do metabolismo, a sntese e a secreo
da maioria dos hormnios nos mamferos so regulados por um complexo
mecanismo em cascata controlado pelo SNC. Alm disso, o mecanismo
de retro-alimentao negativa controla com preciso a sntese de vrios
hormnios.
2. Fatores de crescimento (ou citocinas) so polipeptdeos que regulam o
crescimento, a diferenciao e proliferao celular. Eles diferem dos
hormnios por serem produzidos por vrios tipos de clulas em lugar de
clulas glandulares especializadas.
3. Os hormnios e fatores de crescimento transmitem sinais regulatrios
para as clulasalvo por meio da ligao a receptores especficos.
Hormnios solveis em gua tipicamente se ligam a receptores na
superfcie das clulasalvo para produzir respostas no interior das
clulas. Eles alteram a atividade de vrias enzimas e/ou mecanismos de
transporte.
4. Os segundos mensageiros AMPc, GMPc, IP 3 , DAG e Ca 2+ muitas vezes
mediam a mensagem hormonal ou de fatores de crescimento.
5. O sistema de sinalizao do AMPc consiste de um receptor, de uma
protena G, da adenilil-ciclase e de uma protenacinase dependente de
AMPc.
6. No sistema do fosfoinositdeo, a ligao do hormnio provoca a hidrlise
do fosfatidil4,5difosfato (PIP 2 ), produzindo inositol1,4,5trifosfato
(IP 3 ), que abre canais de Ca 2+ , e diacilglicerol (DG), que ativa a
protenacinase C.
7. De modo geral, os hormnios da tireide e esterides hidrofbicos
ligam-se a receptores intracelulares. O complexo hormnioreceptor
subsequentemente liga-se a segmentos especficos de DNA chamados
elementos de resposta a um hormnio (HRE). A ligao de um complexo
hormnioreceptor a um HRE aumenta ou diminui a expresso de genes
especficos.
8. A insulina, sintetizada pelo pncreas em resposta glicose, liga-se ao
receptor tirosinacinase. A resposta celular insulina a captao de
glicose e cidos graxos.

12 Regulao do metabolismo energtico

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 164-91.
CANTLEY, L.C. The phosphoinositide 3-kinase pathway. Science, 296:1655-7,
2002.
LEHNINGER, A. L. Princpios de bioqumica. 2 ed. So Paulo: Sarvier, 1995.
p. 269-96.
STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 1996. p.
419-36.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre: Artmed, 2000. p. 353-81.
Website: http://www.copewithcytokines.de/

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