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Escuela de Medicina Veterinaria, Sede La Serena

Hematologa y Laboratorio Clnico


TM. Rodrigo Nez Crdova
GUIA N1. Frotis sanguneo y Tincin para Hemograma
La utilizacin inteligente del hemograma unido a la clnica, permitir en
un nmero importante de los casos una orientacin diagnstica y en otros, constituir un
valioso elemento de ayuda en el pronstico y tratamiento. Su sencillez de ejecucin y
bajo costo, constituyen ventajas adicionales que permiten su realizacin en todos los
laboratorios clnicos, inclusive los de baja complejidad.
Una buena interpretacin requiere el hbito de una metdica adecuada,
realizando en forma ordenada y secuencial el estudio por separado de las diferentes
series y dems ndices. Tradicionalmente se considera que un hemograma bien
informado debe incluir:
1. Recuento de Eritrocitos.
2. Hemoglobina
3. Hematocrito
4. ndices Corpusculares (VCM, HCM, CHCM, VPM, RDW y otros).
5. Morfologa Eritrocitaria.
6. Velocidad de Eritrosedimentacin (VHS).
7. Recuento de Leucocitos.
8. Frmula Leucocitaria.
9. Morfologa Leucocitaria.
10. Recuento Plaquetario.
11. Morfologa Plaquetaria.
Anticoagulante
Es necesario para llevar a cabo el estudio de las lneas celulares, el uso
de un anticoagulante adecuado, que permita preservar la celularidad y as mantener el
recuento total de la serie roja, blanca y plaquetaria, y adems la conservacin
morfolgica de cada clula que es necesario para una certera identificacin y
diferenciacin morfolgica. EDTA ( cido etilendiaminotetraactico) es el
anticoagulante de eleccin para hematologa, se utiliza a una concentracin 1mg por 1
c.c. de sangre o 0.5 mls de solucin al 1 % para 5 mls de sangre, o 0.1 mls de solucin
al 1% para 1 mls de sangre. La composicin de este anticoagulante junto al potasio,
proporcionan un potente anticoagulante (K2EDTA o K3EDTA). El tubo de recoleccin
de muestra tiene una tapa de color lila que lo caracteriza universalmente, los puede
haber en presentaciones de 0.5, 1, 2, 3, 4 ml principalmente.
Las sangres recogidas con EDTA muestran notable estabilidad de los elementos
celulares, sin evidencias de hemlisis hasta los 8 das de conservacin. El recuento
globular, la hemoglobina, reticulocitos, plaquetas y hematocrito, no muestran
variaciones por 24 y 48 horas en sangres mantenidas a temperatura ambiente y
refrigerador respectivamente. La eritrosedimentacin y los extendidos para

exmenes morfolgicos diferenciales pueden efectuarse en sangres mantenidas entre 3 y


6 horas a temperatura ambiente o 24 horas en refrigerador.
Preparacin del Frotis de sangre.
El frotis sanguneo se realiza para tener una buena visualizacin de los
elementos figurados con microscopa ptica.
Materiales:
- Lanceta estril, en caso de usar muestra capilar (eliminar 1 gota).
- Jeringa y aguja en caso de usar sangre venosa.
- Cubreobjeto
- Portaobjeto.
Procedimiento:
- Luego de extrada la muestra sangunea y llenado el tubo de muestra, en forma
rpida (para evitar coagulacin) depositar una pequea gota en un extremo del
portaobjeto (a 1 cm del borde aprox.). Conviene siempre realizar 2 frotis.
- Mientras se sujeta firmemente con los dedos ndice y pulgar el portaobjeto, con
la otra mano se coloca el cubreobjeto en un ngulo de ms o menos 45, tocando
la gota de sangre. La sangre difunde homogneamente el cubreobjeto y el
portaobjeto.
- Desplazar el cubreobjeto a una velocidad uniforme, sin perder contacto con el
portaobjeto. El extendido sanguneo debe recorrer la mayor parte del largo del
rea del portaobjeto, pero sin llegar hasta el borde terminal del portaobjeto.
- Luego se deja secar en una superficie plana y a temperatura ambiente.
- Una vez seco, inscribir en el extremo inicial del extendido (ms denso) los datos
del paciente utilizando lpiz grafito.
Comentarios: El grosor de la extensin depende de la velocidad (mientras ms
rpido, ms grueso) y del ngulo (mientras ms agudo, ms grueso). Un buen frotis
debe ser: ms angosto y ms corto que el portaobjeto; regular, sin escotaduras ni
agujeros. Ni demasiado grueso ni demasiado delgado. Sin flecos ni estras.

Tincin de May-Grunwald Giemsa (MGG).


Se usa para teir las clulas sanguneas (u otras) con el fin de realizar el recuento
diferencial y el anlisis morfolgico de los elementos figurados. La tincin de MayGrunwald Giemsa es una tcnica de tincin principalmente para el coloreo de muestras
de frotis sanguneos o extendidos de mdula sea. En los laboratorios clnicos de
hematologa resulta especialmente til para la demostracin de alteraciones en el
nmero, proporcin y morfologa de las clulas sanguneas. Tambin puede ser
adaptada para su utilizacin como una tcnica de tincin clsica para cortes
histolgicos.
Principio: Se usan dos colorantes, el May-Grunwald, que diferencia y tie las
sustancias acidfilas (color rojo) y las basfilos (color azul prpura) y el Giemsa que
tie la cromatina y grnulos azurfilos. Los componentes celulares que tienen afinidad
por ambos tipos de colorantes se denominan neutrfilos y se tien en variados tonos de
violeta. Resultado:

Los ncleos aparecen en colores que van del color azul al prpura-negro.
Los citoplasmas de las clulas maduras aparecen de un color violeta muy plido
o marrn muy plido.
Los glbulos rojos, ricos en hemoglobina aparecen de colores entre rosados y
beige.
Los grnulos de los neutrfilos aparecen de colores entre violeta y marrn.
Los grnulos de los eosinfilos aparecen de color naranja.
Los grnulos de los basfilos de color entre azul y negro.
Los grnulos de los linfocitos grandes aparecen de color prpura.
Las clulas con gran produccin de ARN (como linfocitos productores de
inmunoglobulinas y clulas inmaduras) presentan un citoplasma de color azul
intenso.

Materiales:
-

Solucin de May-Grunwald, que contiene el colorante aninico eosina y el


colorante catinico azul de metileno ambos disueltos en metanol.
Solucin de Giemsa (sol. madre), que contiene eosina, azul de metileno y una
serie de productos de la oxidacin de este ltimo tales como el azur A, el azur B,
el violeta de metilo.
Solucin de Buffer o agua neutra (tamponada) pH 6.8:
Fosfato de K monobsico (KH2PO4)
6.63g
Fosfato de Na dibsico (Na2HPO4)
3.2g
Agua destilada
1000ml

Giemsa de trabajo: La solucin madre de Giemsa es inestable una vez diluda en agua,
por lo que conviene prepararla inmediatamente antes de su uso. Preparar haciendo una
dilucin 1:10 de la solucin madre en Buffer fosfato.
Procedimiento:
-

Se cubre el frotis sanguneo con la solucin de May-Grunwald (sol. alcohlica


que precipita las protenas y fija la preparacin) y se deja actuar por 3 minutos.
Se lava el frotis con Buffer fosfato, dejando actuar por 1 minuto (se tien las
sustancias acidfilas de color rojo y las basfilas de color azul).
Se cubre el frotis con solucin de trabajo de Giemsa y se deja actuar por 15
minutos (tie cromatina y granulaciones azurfilas).
Lavar con Buffer o bien con agua corriente y se deja secar al aire (temperatura
ambiente), inclinando la lmina para que escurra el agua. Limpiar el portaobjeto
por el reverso.
Una vez seco observar por microscopa.

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