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Las enzimas son catalizadores biolgicos que se encargan de realizar todas las
transformaciones energticas que ocurren en un organismo, modificando la velocidad
de las reacciones qumicas, ms no el equilibrio final. Las enzimas se caracterizan por
su especificidad y eficacia es importante resaltar que pueden verse afectadas por
factores tales como temperatura, pH, concentracin de enzima, concentracin de
sustrato e inhibidores que son los factores que se estudiarn durante la prctica para
observar cmo reaccionan las enzimas ante ellos.
En la prctica se va a estudiar la actividad enzimtica de la amilasa salival la cual es
una enzima producida en el pncreas y las glndulas salivales, su funcin principal es
la de digerir parcialmente almidn catalizando la hidrlisis del monosacrido la glucosa
y de l disacrido maltosa, su pH normal se encuentra entre 6,7-6,9.
Es importante saber que la amilasa pude ser inhibida y esto puede provocar
disminucin de la digestin de almidn y absorcin de glucosa, uno de esos inhibidores
es la acarbosa que es un medicamento disponible en farmacias este compuesto
produce disminucin de los gases intestinales, existe otro compuesto que puede inhibir
la actividad de la amilasa y es el cido sulfrico. Las enzimas juegan un papel
preponderante a la hora de realizar diagnsticos ya que si alguna se encuentra muy
elevada o muy baja puede indicar una serie de patologas.
Incubaci
Enzim
Tr
Lugo
Agua
Lectura de
Sustrat
pH
n por 5
a (ml)
(min
l (ml)
(ml)
la
o(ml)
7,2
min
absorbanci
(ml)
a a 600
nm
0,2
6,8
0,4
6,
6
37C
1,140
0,964
2
0,6
6,
4
6,
0,8
0,310
0,300
2
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar
Control
Sustrat
Buffe
Incubaci
Lugol
Tr
Agua
Lectura de la
o(ml)
r pH
n por 5
(ml)
(min)
(ml)
absorbancia a
7,2
min
600 nm
(ml)
37C
1,20
CT
o(ml)
(mmol/l)
CN (mmol/l)
Cs (mmol/l)
Enzima
(mmol/m
(ml)
in)
1,140
0,07
0,2
0,035
0,964
0,25
0,4
0,125
0,310
0,9
0,6
0,45
1,210
0,300
0,91
0,8
0,455
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar
Para el clculo de la Vo de la reaccin se utilizar la siguiente frmula:
Vo=
Cs
Tr
Donde:
Cs= mmoles metabolizados
0,07 mmol /l
=0,035 mmoles/min
2 min
Vo=
0,25 mmol/l
=0,125 mmoles/min
2 min
Vo=
0,9 mmol/l
=0,45 mmoles/min
2 min
Vo=
0,91 mmol/l
=0,455 mmoles/min
2 min
Sustr
Buffer
Incubaci
Enzima
Tr
Lugol
Agua
Lectura
1 ml
n por 5
(ml)
(min)
(ml)
(ml)
de la
ato(m
min
absorban
l)
cia a 600
nm
pH 3
0,2
6,5
0,4
6,5
pH 5
1
0,214
37C
2
0,6
pH 7,2
1,004
1
6,5
0,100
0,8
6,5
pH 8
0,063
6,5
0,504
pH 11
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar
Controles
Sustrato
Buffer
Incubaci
Lugol
Tr
Agua
Lectura de la
(ml)
1 ml
n por 5
(ml)
(min
(ml)
absorbancia a
min
600 nm
pH 3
1,235
pH 5
1,237
1,145
37C
pH
7,2
pH 8
1,120
1,054
pH 11
CT (mmol/l)
CN (mmol/l)
Cs (mmol/l)
pH (ml)
ml)
(mmol/meta
bolizacin/
min)
2,33x10
-3
1 x 10-2
7,67 x 10-3
3,84 x 10-3
2,1 x 10-3
2,30 x 10-4
1,15 x 10-4
1 x 10-3
2,33 x 10-6
7,2
1,17 x 10-6
1,6 x 10-3
7,3 x 10-4
3,65 x 10-4
5 x 10-3
2,67 x 10-3
11
1,34 x 10-3
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar
Para calcular Ct se realizo lo siguiente:
1 ml sustrato total x
0,8 g
1 mol
100 mmol
1l
3
x
x
x
=2,33 x 10
1 L 342,30 g
1 mol
1000 ml
( mmoles metabolizados )
=Cs
( mmolmetabolizado
)
min
Tr (Tiempo de reaccin)
pH 5 Vo=
2,30 x 10
=1,15 x 104 mmoles/min
2min
pH 7,2 Vo=
pH 8 Vo=
1,33 x 103
=6,65 x 104 mmoles/min
2 min
7,3 0 x 104
=3,65 x 104 mmoles /min
2 min
pH 11 Vo=
2,67 x 103
=1,34 x 103 mmoles/min
2min
Finalmente se realiz una grfica con las velocidades obtenidas y los pH.
Referencias bibliogrficas