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2 0 1 3;3 2(4):129138
Inmunologa
www.elsevier.es/inmunologia
Revisin
r e s u m e n
Los linfocitos B (LB) son clulas del sistema inmune adaptativo responsables de la respuesta
a la capacidad de producir IL-10 y de reducir la secrecin de IFN-, TNF- e IL-17 por parte
de linfocitos T CD4+ ; adems, las clulas Breg promueven la diferenciacin de linfocitos T a
Palabras clave:
Regulacin
Linfocitos B
Autoinmunidad
autoinmunes. Por consiguiente, se sugiere que las clulas Breg tienen un papel importante
Linfocitos B reguladores
B10
derechos reservados.
B lymphocytes belong to the adaptive immune system and they are responsible for humoral
Regulation
responses. In recent years, it has been demonstrated the existence of B cells with regu-
B lymphocytes
latory capacity (Breg) in humans and mouse models. The regulatory function of these B
Autoimmunity
cells is explained by the production of IL-10 and the reduction of IFN-, TNF- and IL-17
Regulatory B lymphocytes
secretion by CD4 + T cells; in addition, Breg cells promote the differentiation of T lymphocy-
B10
tes into a regulatory phenotype and induce the remission of autoimmune manifestations
in different murine models. In humans, alterations in number and function of Breg cells
precursors
have been reported in systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and other
Interleukin 10
0213-9626/$ see front matter 2013 Sociedad Espaola de Inmunologa. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.inmuno.2013.06.001
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autoimmune diseases. Therefore, it has been suggested that Breg cells have an important
role in the immunopathology of autoimmune diseases and may be a potential target for
future treatments.
Introduccin
Desde hace varias dcadas se conoce el papel que
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Estos hallazgos sugieren que en algunos casos la estimulacin a travs del BCR podra inducir en clulas B un fenotipo
regulador.
Algo similar se observ en el modelo murino de artritis CIA
(del ingls collagen induced arthritis) donde LB provenientes
de ratones DBA/1 (ratn susceptible al desarrollo de CIA) en
fase de remisin de la enfermedad, estimulados in vitro con
un anticuerpo agonista para CD40 y transferidos adoptivamente a un ratn DBA/1, previnieron el desarrollo de la artritis.
Por el contrario, la transferencia de LB de ratones DBA/1 Il10/ no protegi al ratn de la induccin experimental de la
enfermedad20 ; indicando que la produccin de IL-10 por parte
de los LB, similar a lo observado en el modelo de EAE, cumple un papel en el control del desarrollo de la CIA y parece ser
dependiente de la estimulacin por CD40.
En conjunto, estos estudios demostraron que los LB tienen
la capacidad de regular las manifestaciones autoinmunes en
diferentes modelos murinos principalmente mediante la produccin de IL-10. Adems, el uso de ratones decientes revel
la importancia de molculas en esta funcin reguladora, como:
CD1d, TLR, MyD88, CD19, CD40, CD80 y CD86. Estas investigaciones iniciales tambin permitieron un mejor entendimiento
de la funcin de las clulas B con capacidad reguladora (Breg),
por ejemplo su accin sobre los LT CD4+ efectores que conlleva
a la menor produccin de citocinas proinamatorias como el
TNF- y el IFN-14,19 y la induccin de los marcadores asociados con LT reguladores (Treg) IL-10 y Foxp3, los cuales tienen
un papel protector en el contexto de la autoinmunidad15,21
(g. 1). Sin embargo, el desconocimiento de marcadores especcos que permitieran la seleccin y diferenciacin clara de
Breg de otras subpoblaciones de LB, condujo al desarrollo
de diferentes trabajos que se encaminaron a una caracterizacin ms detallada de estas clulas en diferentes modelos
murinos de enfermedad autoinmune.
B10
En el ratn, los LB con fenotipo CD19+ CD5+ CD1dhi , tambin
llamados B10, son hasta el momento los LB reguladores ms
estudiados, y han sido descritos como potentes productores
de IL-10, con capacidad de regular diferentes respuestas inmunes y de aminorar el progreso de los sntomas autoinmunes
en modelos murinos. En ratones C57BL/6 se ha observado
que LB esplnicos estimulados durante 5 h con LPS, PMA (del
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TLR4/9
IFN-
CD19
BCR
Th1
CD80/86
CD1d ?
TNF-
MHC-II
LT
CD4+
Breg
CD5?
CD40
Th17
Treg
IL-17
IL-10
IL-10
Figura 1 Modelo de activacin y funcin general de las clulas Breg murinas. Un modelo de activacin y funcin de las
clulas B reguladoras de murinos, independientemente de la subpoblacin estudiada. a. La estimulacin va TLR, BCR, la
presencia de CD1d, CD5, CD19 y MHC-II, as como la coestimulacin por CD40 y CD80/86, se han implicado en la activacin
de las clulas Breg y en la produccin de IL-10 por parte de estas clulas. b. Las clulas Breg poseen la capacidad de inhibir
la proliferacin, la secrecin de citocinas proinamatorias por LT CD4+ , al igual que inhibir la diferenciacin de estas clulas
a los perles Th1 y Th17 y promover la conversin de LT CD4+ a Treg productores de IL-10 y aumentar la expresin de
Foxp3 en Treg previamente diferenciadas.
medio de la insercin de la secuencia de la protena verde uorescente o de la molcula de supercie Thy1.1 corriente abajo
del promotor de la IL-10; que a la vez alteraba la secuencia del
gen de esta citocina y su posterior expresin. Se observ que
los ratones reporteros Il-10/ tenan una frecuencia similar
de clulas con fenotipo B10 a la de los ratones silvestres y que,
luego de 48 h de estimulacin con LPS in vitro expresaron la
protena verde uorescente o la molcula Thy1.1 en niveles
similares a los de los ratones silvestres. Las clulas B10 con el
gen de Il-10 alterado se diferenciaron en clulas plasmticas
productoras de anticuerpos (principalmente IgM), luego de 3
das de estimulacin in vitro con LPS24 . La IgM se ha asociado
con proteccin en autoinmunidad, mediante la disminucin
de carga antignica (clulas apoptticas) y evitando la activa
proinamatorias a travs de los FcR25 .
cin de senales
El estudio de estas clulas B10 en la induccin de EAE
en ratones inmunizados con MOG mostr que los animales
hi 22
T2-MZP
Efectos observados
Modelos donde se
han estudiado
hi
133
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105
Breg T2-MZP
T2
4
10
MZ
CD21
103
10
0
F0
T1/B1
2
103
10
104
105
CD23
Figura 2 Subpoblaciones de Linfocitos B. Grco de
densidad de citometra de ujo a partir de LB CD19+ de
bazo de ratones C57BL/6. Denicin de las subpoblaciones
de LB basados en la expresin de CD21 y CD23: FO
(CD21low CD23+ ), T2 (CD21hi CD23+ ), ZM (CD21+ CD23 ) y
T1/B1 (CD21low/- CD23 ). Las Breg con fenotipo T2-MZP
hacen parte del grupo de LB T2, mientras que las clulas
B10 no han sido claramente designadas en ninguno de
estos grupos.
C57BL/6 Il-10/ presentaron una frecuencia similar de clulas B10 comparado con ratones silvestres, mientras que los
Cd19/ tuvieron una reduccin signicativa y los ratones
hCD19Tg (con sobreexpresin de CD19 humano) un aumento
marcado de estas clulas. Se observ igualmente que el tratamiento in vivo de ratones C57BL/6 con EAE con un anticuerpo
contra el CD22 elimin preferencialmente las clulas B10 de
bazo, lo que exacerb dramticamente la severidad de la enfermedad. En este mismo estudio, clulas B10 estimuladas in vitro
A
In vivo
LT
IL-10
IL-21
Ag
IL-21r
Ag
IL-21r
BCR
B10pro
BCR
CD80
Produccin /86
MHC-II
de IL-10 y
presentacin
In vitro
TLR4
IL-10
Produccin
clulas B10
IL-21r
B10
Produccin
de IL-10
CD40
IL-10
CD40
B10
B10
LT
B10
Produccin
clulas B10
IL-21r
TLR4
LPS
PIM
LPS
anti-CD40
IL-21
IL-10
IL-10
IL-10
Adicin de IL-21
Figura 3 Modelo de activacin de clulas B10 en ratones. a. Se presenta un modelo de activacin de las clulas B10 in vivo.
Hasta el momento, se desconoce el mecanismo por el cual las clulas B10pro adquieren la competencia de producir IL-10
in vivo. Sin embargo, se postula que estas clulas reconocen el antgeno (Ag) a travs de su BCR, lo internalizan, lo procesan
y lo presentan al LT CD4+ va MHC-II. El LT activado expresa el CD40L que al unirse a su ligando induce la produccion de
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LT
In vivo
A
Ag
CD80
/86
BCR
Presentacin
CD40
MHC
Produccin
de IL-10
Antignica
T2-MZP
T2-MZP
Produccin
de IL-10
TLR4/9
In vitro
BCR
CD40
IL-10
T2-MZP
IL-10
LPS/CpG
PIM
anti-IgM
anti-CD40
Figura 4 Modelo de activacin de clulas T2-MZP en ratones. a. Se presenta un modelo de activacin de los LB T2-MZP
Fenotipo
Mecanismo de
regulacin
Dependiente de contacto
clula-clula36 . Independiente de
IL-1036
Estmulos
activadores
Estudiada en
36
136
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a los LB T2 humanos. Se encontr que estas clulas estimuladas va CD40 suprimieron la produccin de TNF- e IFN-
pero no de IL-17 por LT CD4+ , as como parte de la proliferacin de estas clulas en respuesta al anti-CD3. La adicin de
un anticuerpo anti-IL-10 as como el bloqueo de la coestimulacin mediada por CD80 y CD86 evit que estas Breg inhibieran
la proliferacin de LT CD4+ , pero se sigui observando el bloque en la produccin de TNF- e IFN-. Contrariamente, el
bloqueo de la interaccin CD40-CD40L impidi que las Breg
suprimieran la proliferacin de LT, pero no se observ efecto
sobre la produccin de IFN- y TNF-37,38 . Estos datos sugieren que la regulacin mediada por estas clulas Breg requiere,
por una parte, de IL-10 y la coestimulacin va CD80/86 para
inhibir la produccin de citocinas proinamatorias, y por otra,
de la coestimulacin del CD40 para inhibir la proliferacin de
LT.
En pacientes con LES se ha encontrado que la proporcin
de estas clulas Breg est aumentada (15% del total de LB)
en comparacin con controles sanos y con pacientes con sndrome de Sjgren y osteoartritis (10%). A pesar del nmero
elevado en LES, se ha observado que estas clulas son incapaces de suprimir la produccin de TNF- e IFN- por parte
de LT CD4+ estimulados con anti-CD3, mientras que las clulas de individuos sanos as como de pacientes con sndrome
de Sjgren y osteoartritis s lo hacen37 . Las clulas Breg de
pacientes con LES estimuladas con un anticuerpo agonista de
CD40 tuvieron una produccin signicativamente menor
de IL-10 en comparacin con controles sanos, sin que se
observara en los pacientes defectos en el nivel de expresin
de esta molcula coestimuladora37 . Estos resultados sugie
de CD40 en las clulas
ren alteraciones en la senalizacin
Breg de los pacientes con LES, lo cual podra explicar en
parte las alteraciones en la tolerancia que presentan estos
pacientes.
Otro estudio report que la supresin mediada por esta
clase de Breg se encuentra defectuosa en pacientes con LES;
la proliferacin de LT estimulados con anti-CD3 fue regulada negativamente por las clulas Breg de pacientes con AR
y sndrome de Sjgren y no por las Breg de pacientes con
LES38 . Se ha encontrado que pacientes con AR tratados
con anti-CD20 (rituximab), un anticuerpo que reduce signicativamente las poblaciones de LB (en un 97%), repueblan su
sangre perifrica con LB CD27 e IgD+ , los cuales presentan
un incremento en la expresin de CD38 y CD539 , sugiriendo
que la mejora clnica observada en los pacientes luego del
uso de rituximab podra asociarse con un incremento de LB
con fenotipo regulador. Sin embargo, se requieren estudios
adicionales que permitan sacar conclusiones denitivas al
respecto.
Las clulas Breg CD19+ CD38hi CD24hi de sangre perifrica de
individuos sanos indujeron en LT CD4+ CD25+ estimulados con
anti-CD3 un perl regulador productor de IL-10 e inhibieron la
diferenciacin de estos linfocitos a los perles Th1 y Th17. Sin
embargo, las clulas Breg de pacientes con AR fueron incapaces de inducir dicho fenotipo regulador y de inhibir el perl
Th17, pero conservaron la capacidad de bloquear la diferenciacin a Th140 . Tambin se observ que pacientes con AR activa
tenan un menor nmero de Breg circulantes comparado con
individuos sanos y con AR inactiva40 . Estos resultados muestran que los pacientes con AR activa tienen alteraciones tanto
Conclusiones y perspectivas
La caracterizacin que se tiene hasta el momento de las Breg
independiente de la produccin de IL-10 no permite una denicin precisa y exacta de estas clulas, ya que los marcadores
de membrana utilizados se comparten con otras poblaciones de LB que no poseen propiedades reguladoras y/o poseen
caractersticas de clulas inmaduras (g. 2). Por lo tanto, se
requiere de estudios que permitan denir mejor el fenotipo
de estas clulas. Algo similar ocurre con los mecanismos funcionales, ya que an son controversiales los elementos que
participan en la regulacin mediada por estas clulas; por
ejemplo, se desconoce cul es el papel de la presentacin
antignica y la expresin de molculas como FasL, TRAIL (del
ingls tumor necrosis factorrelated apoptosis-inducing ligand),
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PD-L1, PD-L2 y granzimas43 . Adicionalmente, falta por esclarecer si estas clulas recirculan por los sitios de inamacin y
si regulan adems de los LT, otros tipos celulares como las clulas dendrticas, monocitos, NKT (de su sigla en ingls natural
killer T), entre otras. Tambin es necesario aclarar el papel que
cumple el CD1d expresado por las clulas Breg; esta molcula
ha sido relacionada con la presentacin antignica a clulas
NKT, a las cuales se les han descrito funciones reguladoras
como la inhibicin de la produccin de IL-17 e induccin del
reclutamiento de Treg44 . Recientemente, se ha reportado en
ratones que los LB productores de IL-10 son capaces de diferenciarse a clulas secretoras de anticuerpos tipo IgM e IgG; en
humanos se ha observado que los LB productores de IL-10 provenientes de sangre perifrica de individuos sanos expresan
10 veces ms niveles de ARNm que codica para anticuerpos tipo IgG4 en comparacin con los LB que no producen
IL-10; a estos anticuerpos IgG4 se les ha asociado un papel
no-inamatorio, dado que no activan el complemento24,45 . El
papel regulador de los LB productores de IL-10 y de anticuerpos queda por esclarecer, pero es posible que la secrecin
de IgM e IgG4 sea parte del mecanismo mediante el cual
las clulas Breg son capaces de regular las manifestaciones
autoinmunes.
Los datos obtenidos hasta el momento revelan las diferencias existentes en el fenotipo y funcin de las clulas Breg
humanas y murinas. Por ejemplo, en estos ltimos la regulacin es mediada principalmente por la produccin de IL-10,
mientras que algunos datos de Breg humanas muestran que
el efecto regulador de la proliferacin de LT CD4+ es independiente de la produccin de esta citocina. Por lo tanto, se
requiere aclarar si efectivamente la IL-10 producida por las
Breg humanas est implicada parcialmente en la regulacin
de las manifestaciones autoinmunes. A pesar de esta discordancia, hay similitud en el requerimiento de molculas
coestimuladoras como el CD40, CD80 y CD86 para que las Breg
puedan inhibir la proliferacin de LT CD4+ CD25 y/o la produccin de citocinas proinamatorias como el IFN-, TNF- e
IL-17.
Hasta el momento se desconoce si el aumento de las
manifestaciones autoinmunes en ciertas inmunodeciencias
primarias se debe en parte a la existencia de alteraciones
en la generacin o funcin de LB con fenotipo regulador.
Sin embargo, en inmunodeciencias humorales se desarrolla un porcentaje importante de estas manifestaciones, lo que
sugiere un papel de los LB en el balance de las respuestas anti
y proinamatorias de estos individuos. El estudio continuado
de las clulas Breg en el humano y el modelo murino permitir un mejor entendimiento de los mecanismos regulatorios,
as como la comprensin del papel que cumplen estas clulas
en la inmunopatologa de las enfermedades autoinmunes y la
bsqueda de nuevas terapias o abordajes teraputicos alternativos para los pacientes con enfermedades inamatorias
crnicas.
Financiacin
El presente trabajo ha sido nanciado por COLCIENCIAS, proyecto 111554531390, y ha recibido apoyo del Programa de
Sostenibilidad 2013-2014 de la Universidad de Antioquia.
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Conicto de intereses
Los autores declaran no tener ningn conicto de intereses.
bibliograf a
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