Manual de Laboratorio de Parasitología 1

BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA
DE PUEBLA
VICERRECTORA DE DOCENCIA
DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN
SUPERIOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
LICENCIATURA EN QUMICO FARMACOBILOGO
AREA: ANLISIS CLNICOS
ASIGNATURA:
LABORATORIO DE PARASITOLOGA I
MANUAL
CDIGO:
CRDITOS: 4
FECHA: MAYO 2009
NIVEL EDUCATIVO:
NOMBRE DEL PROGRAMA
EDUCATIVO:
MODALIDAD ACADMICA:
NOMBRE DE LA ASIGNATURA:
UBICACIN:
CORRELACIN:
Licenciatura
Licenciatura en Qumico Farmacobilogo
Presencial
Nivel Formativo
ASIGNATURAS
PRECEDENTES:
Biologa celular y molecular, Anatoma e

Histologa, Fisiologa I y II, Microbiologa,
Inmunologa y Hematologa I, Qumica
clnica I
ASIGNATURAS
CONSECUENTES:
Parasitologa II
CONOCIMIENTOS
HABILIDADES Y
ACTITUDES
VALORES PREVIOS:
Estructura y funcionamiento de; la clula,

rganos, tejidos, aparatos y sistemas.
Mtodos de estudio de la clula y tejidos,
incluyendo
microscopa
y
sus
modalidades. Clasificacin de los seres
vivos. Mtodos de biologa molecular.
Respuesta inmune y mtodos de
diagnstico. Procesos bioqumicos y
mtodos de diagnstico. Clasificacin de
anemias,
hematopoyesis,
eosinofilia,
citometra hemtica. Hepatopatas y
mtodos de estudio.
Capacidad de observacin, anlisis,
crtica, actitud de colaboracin y de trabajo
en equipo.
Responsabilidad, organizacin
CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE
CONCEPTO
HORAS TEORIA Y PRCTICA.
HORAS DE PRCTICA PROFESIONAL

CRTICA
HORAS DE TRABAJO INDEPENDIENTE
TOTAL
HORAS POR
PERIODO
(PERIODO = 16
SEMANAS)
64
(2 HT/Semana =
32
2 HP/Semana =
32)
0
0
64
NMERO
DE
CRDITOS
0
0
4
AUTORES:
MC Mara de Lourdes Martnez Moreno,

MC Alma Delia Ramrez Guarneros, MC
Martha Alicia Salgado Jurez
FECHA DE DISEO:
MAYO 2009
FECHA DE LA LTIMA
ACTUALIZACIN:
Mayo 2009
REVISORES:
SINOPSIS DE LA REVISIN Y/O

ACTUALIZACIN
MC Alma Delia Ramrez Guarneros, MC

Martha Alicia Salgado Jurez, MC Mara de
Lourdes Martnez Moreno, MC Jos Manuel
Rodrguez Luna, MC Jos Angel Fco. Flores
Hernndez, MC Rafael Muoz Bedolla
Se realiz un anlisis del programa del plan
educativo anterior, y se actualiz de
acuerdo a los criterios de clasificacin de
las enfermedades, de la OMS y de los
requerimientos del proyecto Minerva de
nuestra universidad.
PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:
DISCIPLINA
PROFESIONAL:
Qumico Farmacobilogo
NIVEL ACADMICO:
Maestra
EXPERIENCIA DOCENTE:
EXPERIENCIA
5 aos.
PROFESIONAL:
2 aos en laboratorio
OBJETIVOS:
a. Educacional: formar profesionales con capacidad para participar en los equipos
de salud coadyuvando en el diagnstico, pronstico, teraputica, profilaxis,
prevencin y control de las enfermedades de mayor prevalencia y emergentes
en el pas, que sigue cdigos de tica profesional y cumple con la normatividad
vigente en un marco de responsabilidad hacia el medio ambiente.
b. General: Comprender y aprender la terminologa especfica de la parasitologa, y

los diferentes aspectos de las protozoosis que afectan al humano en particular
en Mxico, as como los mtodos de diagnstico para cada parasitosis y la
importancia de las mismas en la salud pblica, de tal manera que el egresado
adquiera los conocimientos bsicos para coadyuvar en el diagnstico,
prevencin y tratamiento de dichas enfermedades.
c. Especficos:
Aprender las generalidades del parasitismo.
Aprender la morfologa y el ciclo biolgico de los protozoarios de las

diversas localizaciones en el humano; intestinales, tisulares, sanguneas y
de otras localizaciones.
Comprender y relacionar la epidemiologa con la prevencin de las

protozoosis que afectan al humano.
Aprender y manejar las tcnicas de diagnstico de rutina, de las

protozoosis humanas.
Conocer otros mtodos de diagnstico y su clasificacin, de las

protozoosis que afectan a los humanos.
Aprender y comprender los elementos para obtener el control de calidad

en el laboratorio de parasitologa.
Conocer las normas oficiales mexicanas relacionadas con las protozoosis

humanas, as como los programas de control de las mismas, que dictan
los representantes de la OMS y la OPS.
REGLAMENTO Y MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL

El alumno deber:
1-
Siempre presentarse con bata blanca, incluso si en la sesin slo se llevan a

cabo seminarios y o exmenes.
2-
Cumplir con las actividades y o tareas solicitadas por el profesor.
3-
Asistir puntualmente a las sesiones, slo tendr 10 minutos de tolerancia, una

vez que se pase lista, si llega despus, se considerar como falta.
4-
Colocar fuera de las mesas de trabajo, mochilas, suteres, chamarras u otros

objetos que no requiera para la realizacin de la prctica.
5-
Traer el material biolgico o de otro tipo solicitado por el profesor.
6-
Siempre traer guantes, cubreboca y perilla para las pipetas.
7-
Siempre traer jabn y papel sanitario para el aseo de las manos y para la
limpieza del material de vidrio y de las mesas de trabajo.
8-
Solicitar el material que requiere para las prcticas por medio de un vale, ya sea
a el profesor o a la persona encargada del rea del material y reactivos.
9-
Manejar con mucho cuidado el material, las soluciones o reactivos.
10-
Manejar con mucho cuidado las muestras fecales ya que son potencialmente
infectantes.
11-
Siempre pipetear las soluciones, con la perilla correspondiente y nunca con la

boca.
12-
Dejar los frascos de las soluciones en el lugar de donde los tom, despus de su
uso.
13-
No desechar soluciones de colorantes, papeles, muestras biolgicas slidas, ni

material de vidrio roto (portaobjetos, cubreobjetos, tubos) en las tarjas.
14-
No dejar pipetas contaminadas directamente sobre las mesas.
15-
Colocar el material contaminado, as como las muestras fecales, en las bolsas o

recipientes correspondientes, de acuerdo a la
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-
2002, Proteccin ambiental-Salud ambiental- Residuos peligrosos biolgicos
infecciosos- Clasificacin y especificaciones de manejo.
Y de acuerdo a lo
indicado por el profesor.

16-
Manejar y cuidar los microscopios de acuerdo a la informacin proporcionada al

inicio del curso.
17-
Anotarse en la libreta que est al lado del microscopio que utilice, y en su caso
reportar cualquier anomala o desperfecto hallado en el microscopio antes o
durante su manejo.
18-
Limpiar el aceite de inmersin a los objetivos del microscopio, de acuerdo a las

indicaciones dadas por el profesor.
19-
Al trmino de la prctica, dejar desconectados los microscopios, cubrir el

microscopio con su correspondiente funda y dejar cerrada la caja con llave.
20-
Al trmino de la prctica, dejar limpias y desinfectadas las mesas, libres de

papeles, material biolgico o de otro tipo.
21-
Al concluir la prctica, entregar el material que emple segn las indicaciones

de el profesor, as como solicitar la devolucin del vale.
22-
En caso de romper algn material, deber reponerlo a la brevedad posible, para

lo cual se le retendr el vale.
23-
En caso de algn incidente o accidente, deber informarle a el profesor, para

que se tomen las medidas pertinentes.
24-
Antes de retirarse del laboratorio, checar que no se le olvide algo, ya que el

profesor no se har responsable por manuales, celulares, libros, batas, etc,
olvidados.
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002
Elaborada en forma conjunta por la Secretaria de Salud y de Medio Ambiente y
Recursos Naturales, la norma oficial mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
Proteccin Ambiental - Salud Ambiental - Residuos Peligrosos Biolgico - Infecciosos
Clasificacin y Especificaciones de Manejo, fue publicada en el Diario Oficial de la
Federacin el 17 de Febrero del 2003 y sustituye a la NOM-087-ECOL-1995.
Los RPBI se consideran como residuos peligrosos y como tal se debe establecer un
plan integral para su manejo, almacenamiento, transporte, tratamiento y disposicin
final.
PRINCIPALES MODIFICACIONES EFECTUADAS EN LA NOM-087-SEMARNATSSA1-2002.
I.
II.
III.
IV.
V.
Criterios para considerar un residuo como RPBI

Nueva clasificacin de los RPBI
Cantidad de sangre o fluido corporal en los RPBI
Niveles de los establecimientos generadores
Periodo de almacenamiento temporal de los RPBI en los establecimientos
VI.
generadores.
Atribucin a la Secretaria de Salud, para la vigilancia de la norma.
I.
Los lugares que ofrecen atencin mdica y los centros de investigacin, son
considerados establecimientos generadores de materiales contaminados por
agentes biolgico-infecciosos. Estos desechos se denominan
Peligrosos
Biolgico-Infecciosos
(RPBIs),
su
manejo
Residuos
disposicin
inadecuados, representa un riesgo para la salud del personal que labora en estos
sitios, as como para la salud de la poblacin aledaa, ocasionando adems, el
deterioro del medio ambiente. Los microorganismos patgenos, virus, parsitos y
priones (estructuras proteicas) son ejemplos de agentes biolgicos-infecciosos.
Para que un microorganismo sea capaz de producir enfermedad, es decir, que
sea un Agente Biolgico-Infeccioso, debe ocurrir lo siguiente: tener una
concentracin suficiente (inculo), estar en un ambiente propicio (supervivencia),
en presencia de una va de entrada en un hospedero susceptible.
II.
En la Nueva clasificacin, los RPBIs son:

1. La sangre y sus componentes nicamente en estado lquido.
2. Los cultivos de agentes biolgico-infecciosos generados en:
a. Los procedimientos de diagnstico e investigacin.
b. La produccin y el control de agentes biolgico-infecciosos.
3. Los utensilios desechables usados para contener, transferir, inocular y
mezclar cultivos de agentes biolgico-infecciosos.
4. Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven durante las
autopsias, las cirugas o algn otro tipo de intervencin quirrgica que no
estn conservados en solucin de formol.
5. Las muestras biolgicas empleadas en los anlisis clnicos (excepto las
muestras de orina y de excremento), y aquellas usadas en los anlisis
patolgicos.
6. En los centros de investigacin, los cadveres y las partes de los animales
que fueron inoculados con agentes entero patgenos.
7. Los residuos no anatmicos:
a. Los recipientes desechables que contengan sangre lquida.
b. Los materiales desechables que contengan fluidos y secreciones
corporales, provenientes de los pacientes de quienes se sospechen
o exista un diagnstico de una enfermedad infecto-contagiosa
como la tuberculosis.
c. Los materiales de curacin empapados de sangre lquida o de
cualquier otra secrecin o lquido corporal.
d. Los materiales absorbentes utilizados en las jaulas de los animales
que hayan sido expuestos a agentes entero patgenos.
8. Los materiales punzo cortantes desechables como las hojas de bistur, las
agujas de sutura y los estriles de catter. El material de vidrio de
laboratorio, que se haya roto al momento de ser manipulado, se deber
desinfectar o esterilizar y ya no se considerar como RPBIs, por lo
que se podr disponer posteriormente como residuo municipal.
La disposicin general para el desecho de RPBIs en el laboratorio queda de la

siguiente manera:
TIPO DE
ESTADO
RESIDUO
FISICO
Sangre
Lquidos
ENVASADO
Recipientes
hermticos
COLOR
Rojo
Cultivos y
cepas de
agentes
Slidos
Bolsas de
polietileno
Rojo
infecciosos
Patolgicos
Residuos no
anatmicos
Objetos
punzocortantes
III.
Slidos
Slidos
Bolsas de
polietileno
Bolsas de
polietileno
Recipientes
Slidos
rgidos
Amarillo
Rojo
Rojo
polipropileno
Para que un material de curacin se considere como RPBIs, debe ser

desechable y estar goteando, chorreando o escurriendo sangre o cualquier
lquido corporal contemplado en la norma.
IV.
Niveles de los Establecimientos Generadores
NIVEL I
Establecimientos
NIVEL II
NIVEL III
de
atencin mdica hasta

con 5 camas e instituciones de investigacin con excepcin de
Unidades hospitalarias Unidades hospitalarias

de 6 hasta 60 camas.
de ms de 60 camas.
los sealados en el
Nivel III.
Laboratorios clnicos y Laboratorios clnicos y Centros de produccin
bancos de sangre que bancos de sangre que e investigacin experirealicen anlisis de 1 a realicen anlisis de 51 mental en enfermeda50 muestras al da.
a 200 muestras al da.

Bioterios que se dedi-
Unidades hospitalarias quen a la investigacin

psiquitricas.
con agentes biolgicoinfecciosos.
Centros de toma de
muestras para anlisis
clnicos.
Establecimientos
des infecciosas.
Laboratorios clnicos y
bancos de sangre que
realicen anlisis a ms
de 200 muestras al
da.
que Establecimientos
que
generen de 25 a 100 generen ms de 100

kilogramos al mes de kilogramos al mes de
RPBIs.
RPBIs
V.
Perodo de almacenamiento temporal de los RPBIs en los establecimientos

generadores.
NIVEL I
NIVEL II
NIVEL III
30 das mximos de 15 das mximos de 7 das mximos de
almacenamiento
tem- almacenamiento
tem- almacenamiento
tem-
poral.
poral.
poral.
No requiere de rea Si requiere de rea Si requiere de rea
especfica
para
almacenamiento
el especfica
para
tem- almacenamiento
el especfica
tem- almacenamiento
poral.
poral.
Se podrn ubicar los
contenedores
para
el
tem-
poral.
espec- Deber cumplir con las Deber cumplir con las
ficos para los RPBIs* especificaciones esta- especificaciones estaen
el
lugar
ms blecidas en la NOM- blecidas en la NOM-
apropiado dentro de 087-SEMARNATsus instalaciones, de SSA1-2002,

manera
tal
que
no rea
de
para
087-SEMARNATel SSA1-2002,
almacena- rea
obstruyan las vas de miento temporal.
de
para
el
almacena-
miento temporal.
acceso.
*Los contenedores pueden ser plsticos o metlicos, con sealamiento del smbolo
universal de RPBIs y no mezclarlos con la basura municipal.
VI.
Atribucin a la Secretaria de Salud. Corresponde a la secretaria de salud

regular y vigilar el equipamiento, instalacin y funcionamiento de los servicios
mdicos que son los principales generadores de los RPBIs, por ello participa
complementariamente con la SEMARNAT en la regulacin y vigilancia de la
norma, para lo cual se estableci en el cuerpo de la misma, la disposicin de
crear las bases de colaboracin que firmarn ambas dependencias y que sern
publicadas en el Diario Oficial de la Federacin, en las que se especificarn los
puntos de la norma que vigilarn cada una de ellas.
PROGRAMA DE LA ASIGNATURA LABORATORIO DE

PARASITOLOGA I
PRESENTACIN GENERAL DEL PROGRAMA

El Laboratorio de Parasitologa I, proporciona al alumno los conocimientos prcticos de
la morfologa parasitaria as como la metodologa que se requiere para la bsqueda e
identificacin de los parsitos de inters mdico. Esto permitir integrar el conocimiento
terico con los mtodos auxiliares para el diagnstico, la prevencin y el tratamiento
de las parasitosis.
La identificacin de los parsitos por los mtodos de laboratorio es una parte
fundamental del diagnstico integral que realizan otros profesionales del rea de la
salud, ya que el dao que producen los parsitos pueden manifestarse con una gran
gama de alteraciones anatmicas y fisiolgicas, por lo que ste laboratorio se relaciona
con las asignaturas de Qumica Clnica, Inmunologa, Hematologa, Citologa e
Histologa y Anatoma.
OBJETIVOS
Que el alumno:
1) Conozca los diferentes mtodos que se utilizan para el diagnstico de
enfermedades parasitarias.
2) Aprenda a realizar los mtodos mas frecuentemente utilizados en la prctica
profesional de los anlisis clnicos.
3) Conozca el fundamento, la utilidad, las ventajas y las desventajas de las tcnicas
de laboratorio.
4) Aprenda a buscar e identificar por sus caractersticas morfolgicas a los
protozoarios parsitos que afectan al humano.
5) Aprenda a diferenciar formas parasitarias de las estructuras no parasitarias que
se pueden encontrar normalmente en las muestras biolgicas.
6) Conozca y aplique las medidas de seguridad e higiene as como las normas para
el desecho de material infecto contagioso.
7) Conozca los elementos bsicos del control de calidad en parasitologa.
8) Desarrolle la habilidad y actitud del trabajo en equipo.
CONTENIDO
PRIMERA PARTE: Apuntes de Parasitologa (seminario).
Conceptos generales
1-Definicin de parasitologa clnica o mdica y organismos que estudia la parasitologa.
2- Definiciones de: parsito, hospedero,
comensal, microhabitat, parasitismo,
parasitosis, enfermedad parasitaria, infeccin, agente causal o agente etiolgico,

contaminacin, ciclo biolgico o ciclo de vida, forma o etapa infectante o infecciosa,
forma o etapa invasiva, forma o etapa diagnstica, diarrea (y su clasificacin),
protozoario y helminto.
3- Etapas ms comunes por las que cursan los protozoarios durante su ciclo vital:
trofozoto, quiste y ooquiste. Definiciones de los mismos.
4- Etapas ms comunes por las que los helmintos atraviesan durante su ciclo vital:
adulto, larva y huevecillo. Definiciones de los mismos.
5- Nomenclatura de los parsitos y de las enfermedades parasitarias
Diagnstico de las enfermedades parasitarias.

Definicin de diagnstico y de muestra biolgica.
Clasificacin y concepto de los mtodos de diagnstico en parasitologa:
I) Mtodos de diagnstico directo, parasitoscpicos o de certeza.
II) Mtodos de diagnstico indirecto: mtodos de gabinete, mtodos inmunolgicos o
serolgicos, mtodos de biologa molecular y mtodos bioqumicos
Diagnstico de las parasitosis intestinales.

1.- Concepto de materia fecal, heces, o excremento y su composicin.
2.- Obtencin y recoleccin de la materia fecal: tcnicas de obtencin, requisitos o
condiciones de la persona a analizar, requisitos del recipiente de recoleccin, requisitos
que debe reunir la muestra, cantidad de la muestra, nmero de muestras y tiempo de
recoleccin, datos importantes (de la persona, de la muestra, del estudio a realizar y del
mdico)
3.-Tiempo crtico del anlisis y conservacin de la muestra (fsica y qumica).
Examen de las heces o coprologa.

1.. Anlisis fsico o macroscpico: importancia en la parasitologa clnica, caractersticas
que se determinan y cules son las normales.
2.. Anlisis qumico: importancia en la parasitologa clnica, parmetros o componentes
que se determinan, mtodos y valores de referencia, y su valor clnico. Se incluye el
recuento de leucocitos fecales.
3.. Anlisis microbiolgico (microscpico): se hablar slo de los protozoarios y
helmintos.
Anlisis microscpico de las heces.

1) Elementos o estructuras normales y anormales.
2) Mtodos para el anlisis microscpico-parasitolgico de las heces:
A.. Mtodos coproparasitoscpicos (CPS); etimologa del trmino coproparasitoscpico,
definicin de mtodo CPS, clasificacin de los mtodos CPS (cuali y cuantitativos, de
concentracin por flotacin y por sedimentacin), listado de los mtodos CPS ms
frecuentemente empleados y caractersticas generales de dichos mtodos (CPSs:
directo, de Faust, de Ferreira, de Sheater, de MIFC, de Ritchie, de Stoll, de Kato, de
sedimentacin simple en copas, etc.).
B.. Mtodos especiales: concepto, listado de dichos mtodos y caractersticas
generales de los mismos; mtodo del tamizado, mtodo de Graham, cpsula de Beal o
duodenal, sondeo duodenal, mtodo de Baermann, mtodo de Harada-Mori, cultivos

para protozoarios, rectosigmoidoscopa y endoscopa
C.. Mtodos de tincin: en preparado hmedo y en preparado permanentes, ventajas y
desventajas en lo general, listado de tcnicas de tincin para protozoarios y para
helmintos.
D.. Medicin de parsitos en el microscopio: uso de los micrmetros ocular y objetivo,
importancia o aplicacin en el diagnstico.
Mtodos de diagnstico directo para parsitos sanguneos.

1- Obtencin de la muestra y su conservacin.
2- Mtodos de no concentracin: observacin directa o en fresco, frotes sanguneos y
tincin.
3- Mtodos de concentracin: por centrifugacin, gota gruesa, xenodiagnstico para
enfermedad de Chagas, cultivos, inoculacin en animales de laboratorio.
Caractersticas generales de los mtodos anteriores.
Mtodos de diagnstico directo para parsitos tisulares.

1.. Obtencin de la muestra y su conservacin
2.. Mtodos a emplear: biopsia, impronta, corte histolgico, digestin artificial,
triquinoscopa, inoculacin en animales de laboratorio. Caractersticas generales de los
mtodos anteriores.
Mtodos de diagnstico directo para parsitos de otras localizaciones.

1) Obtencin de la muestra y su conservacin de acuerdo a la localizacin.
2) Mtodos ms frecuentes: observacin directa (con o sin tincin), frotes y tincin,
concentrado por centrifugacin y observacin directa del sedimento y cultivos.
Otros datos de inters para el diagnstico

1-Otros estudios de laboratorio; qumica sangunea, pruebas de funcionamiento
heptico, citometra hemtica, etc., como complemento del diagnstico.
2-La eosinoflia
3-Informacin epidemiolgica del paciente
Control de calidad en Parasitologa.

a) Fase preanaltica
b) Fase analtica
c) Fase postanaltica
SEGUNDA PARTE
PRCTICAS DE LABORATORIO.
Prctica No 1: Examen fsico y qumico de las heces.
Prctica No 2: Mtodo coproparasitoscpico (CPS) directo o en fresco.
Prctica No 3: Mtodo CPS de Faust y uso del conservador PAF.
Prctica No 4: Mtodo CPS de Sheater
Prctica No 5: Mtodo CPS de MIFC
Prctica No 6: Amiba en fresco
Prctica No 7: Observacin de protozoarios de tubo digestivo y vas genitourinarias
Prctica No 8: Observacin de protozoarios tisulares.
Prctica No 9: Realizacin de tcnicas de tincin, cultivos y mtodos inmunolgicos.
CRONOGRAMA
SEMANA
1
2
3
PRACTICA
SEMINARIO
SEMINARIO
1
4
5
2
3
7
8
9
5
6
7
10
11
8
9
12
NOMBRE
Fundamento fsico, manejo y cuidados
del microscopio compuesto
Examen fsico y qumico de las heces
Mtodo coproparasitoscpico
(CPS)
directo o en fresco
Mtodo CPS de Faust y uso del
conservador PAF
Mtodo CPS de Sheater
Mtodo CPS de MIFC
Observacin de protozoarios de tubo
digestivo y vas genitourinarias
Observacin de protozoarios tisulares.
Realizacin de tcnicas de tincin,
cultivos y mtodos inmunolgicos
EXAMEN
CRITERIOS DE EVALUACIN
La asistencia al laboratorio ser del 100%
Participacin en seminarios y prcticas
20 %
Reportes individuales
20 %
Reportes por equipo
20 %
Reporte de casos clnicos
20 %
Evaluacin final prctica
20 %
Total
100 %
PAGINA
13
15
20
22
29
36
39
42
48
52
59
SEMINARIO I
ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
Conjunto de acciones planificadas y sistematizadas necesarias para asegurar la
reproducibilidad, especificidad, sensibilidad y precisin de una prueba, dentro del
laboratorio.
EVALUACION INTERNA DE LA CALIDAD
1. FASE PREANALITICA
a) Solicitud de estudios
b) Programa de bioseguridad
c) Informacin y preparacin del paciente (indicaciones de ventanilla)
d) Obtencin directa del producto biolgico
e) Recoleccin, transporte y conservacin del producto biolgico.
f) Recepcin del producto biolgico (criterios de aceptacin o rechazo)
g) Revisin de reactivos (colorantes, sulfato de zinc, etc.)
h) Limpieza de equipos e instrumentos
i) Graficas de control de calidad Levey-Jennings (inmunoparasitologa)
j) Registro de temperaturas de equipos (refrigeradores y estufas)
k) Limpieza de material
2.- FASE ANALITICA

a) Preparacin, almacenamiento y registro de reactivos (bitcoras)
b) Verificacin de instalaciones, equipo y material
c) Realizacin de la prueba (manual de procedimientos)
d) Lectura de la prueba
e) Evaluacin interna de la calidad
f) Almacenamiento de productos biolgicos (bitcoras)
3.- FASE POST-ANALITICA

a) Reporte de resultados( nombre y fase del parasito) en bitcoras de
control interno y en el sistema
b) Confirmacin de los resultados
c) Confidencialidad
d) Informes estadsticos peridicos
e) Archivo de informe
f) Manejo de residuos qumicos (RQ) (manual de procedimientos)
EVALUACION EXTERNA DE LA CALIDAD

a) Programa de evaluacin externa de la calidad
b) Formacin de grupos pares
MATERIAL DE REFERENCIA
Como parte de la evaluacin interna de la calidad en un laboratorio de parasitologa
diagnstica debe de contarse con material de referencia, este corresponde a la
existencia en el lab, de las diferentes fases de los protozoarios, trofozotos, quistes y
ooquistes y de los helmintos, huevos, larvas y adultos, parsitos del hombre, que
puedan ser consultados y comparados (referidos) para emitir un resultado. Tambin
utilizados para la docencia. Este material consiste en:
1) Concentrados de parsitos en forma mltiple (parasiteca)
2) Concentrados de parsitos en forma individual (parasiteca)
3) Laminillas coloreadas semi-permanentes
4) Laminillas coloreadas permanentes
5) Ejemplares microscpicos
6) Diapositivas, fotografas y atlas de parasitologa
1.- Parasiteca mltiple

a) seleccionar una muestra de heces con abundantes parsitos
b) homogeneizar con tritn al 0.1 %
c) tamizar a un tubo de 25x95 mm
d) centrifugar a 2,000 rpm durante dos minutos
e) realizar dos lavados con agua corriente (emulsionar, centrifugar y decantar)
f) decantar y agregar formol al 5%
g) vertir a un frasco de boca ancha con tapadera, dejar sedimentar
h) recambiar el formol diariamente, hasta observar un sobrenadante limpio
i) etiquetar e identificar, conservar en un lugar seco y fresco
2.- Parasiteca individual

a) seleccionar una muestra de heces con abundantes parsitos de una sola especie
y realizar el procedimiento similar a lo anterior
3.- Laminillas o preparaciones semi-permanentes

Corresponden
laminillas
preparaciones
obtenidas
de
mtodos
coproparasitoscpicos (CPS) mediante examen directo o de concentracin, las

cuales son normalmente una suspensin. Preparaciones hmedas de doble
montaje.
a) cubrir la preparacin con cubreobjeto de cristal de 22x22 mm
b) colocar encima un cubreobjeto de 22x40 mm y llenar el espacio con selladores
como: resina sinttica, grenetina al 5% y vaselina-parafina vol/vol, dejar secar.
c) etiquetar e identificar
4.- Laminillas o preparaciones permanentes

Corresponden a laminillas o preparaciones de un producto biolgico el cual se fij y
ti en forma especifica (preparacin seca).
a) fijar, teir y secar la preparacin
b) cubrir con un cubreobjeto de 22x40 mm

c) sellar con resina sinttica
d) dejar secar al aire
e) etiquetar e identificar
FUNDAMENTO FSICO, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO.

APLICACIONES DEL MICROSCOPIO
OBJETIVOS: Repasar algunos conceptos de microscopa tales como; fundamento
ptico o fsico, sistemas y partes que los constituyen, as como las funciones de cada
parte del microscopio, iluminacin Kheller , cuidados y manejo del microscopio y
enfoque. Familiarizarse con el microscopio que se emplear en este curso y aprender a
usarlo.
INTRODUCCIN.El microscopio es el aparato ms importante e indispensable en un laboratorio de
Biologa, su funcin es permitir observar la imagen considerablemente aumentada de
un objeto u organismo que a simple vista pasa desapercibido. La palabra microscopio
proviene de dos races griegas: Micros ; que quiere decir pequeo y scopein ; que
significa observar. En la actualidad existe toda una ciencia dedicada a estudiar las
caractersticas de estos aparatos que cada vez son mas precisos y espectaculares, nos
referimos a la creacin de la microscopa; sta es cada da mas importante, ya que el
conocer las caractersticas de un microscopio nos permite sacar el mayor provecho de
l, dndole una mayor aplicacin.
Existen dos tipos bsicos de microscopio: el simple y el compuesto.
El microscopio simple est formado tan solo por una lente convergente a la que
tambin se le llama "lupa", la cual nos proporciona una imagen virtual y aumentada.
El microscopio compuesto esta constituido por dos sistemas de lentes:
1.- El sistema que est constituido por los objetivos, que son las lentes quedan ms
cerca del objeto de observacin.
2.- El sistema constituido por los oculares, que son las lentes que quedan ms cerca del
observador.
Cada sistema proporciona un aumento independiente y el producto de estos aumentos
parciales dados por oculares y objetivos, determina el aumento total del microscopio.
Para manejar con mayor eficiencia un microscopio, es necesario conocer cmo est
constituido. Las partes que lo constituyen se agrupan en tres sistemas: mecnico,
ptico, y de iluminacin.
A) El sistema mecnico est formado por: una base, la columna, el tubo del
microscopio, la platina, los tornillos para el enfoque y el revolver.
B) El sistema ptico est representado por las lentes oculares y las lentes objetivos.
C) El sistema de iluminacin est representado por la fuente de luz (foco), el
condensador y el diafragma.
Debemos recordar que el objetivo y el ocular del microscopio funcionan como lentes
convergentes biconvexas, por lo que la imagen final que nos proporciona el
microscopio compuesto es virtual, aumentada e invertida.
Toda imagen proporcionada por el sistema ptico de un microscopio, debe reunir tres
caractersticas: poseer un buen poder de resolucin, de penetracin y de definicin.
El poder de resolucin (P.R.): es la caracterstica del microscopio que permite ver con
claridad las estructuras finas y muy cercanas entre si; podemos ver que este poder de
resolucin es directamente proporcional a la longitud de onda media de la luz blanca
(550 nm) (1 nm= 10
-6
mm ) e inversamente proporcional a la apertura numrica (A.N.)
del objetivo. Esto es:
P.R. = O.61
A.N.
Donde P.R.: es la distancia mnima entre dos puntos de la muestra que permite verlos
separados; 0.61 es una constante que representa la diferencia mnima en contraste que
es detectable;
es la longitud de onda de la luz empleada y A.N: la apertura
numrica de la lente del objetivo.

Si las estructuras que se desean precisar, estn colocadas a una distancia menor una
de otra, necesitaremos un objetivo de mayor apertura numrica.
La apertura numrica (A.N.): es una medida del ngulo mximo con que los rayos
provenientes del objeto inciden en la lente del objetivo del microscopio y de ah son
llevados al ojo del observador. Ahora bien, hay dos factores que determinan la apertura
numrica: el ngulo que forman los rayos que penetran por el objetivo y el ndice de
refraccin del medio que exista entre el objeto a observar y el objetivo, dicho de una
manera matemtica, la apertura numrica es el producto del seno del semi ngulo de
abertura (que mide la capacidad de la lente para concentrar la luz) por el ndice de
refraccin del medio que existe entre el objetivo y el objeto a observar. Todos los
objetivos traen grabada la apertura numrica.
El poder de penetracin: es la caracterstica que permite definir simultneamente las
estructuras existentes a diferentes niveles de la preparacin; esto solo se puede lograr
con objetivos de pequeo aumento, a medida que aumenta el poder del objetivo y la
apertura numrica, es menor el poder de resolucin.
El poder de definicin: es la caracterstica que permite una imagen clara, precisa y
con bordes definidos; para esto, el microscopio debe presentar lentes bien pulidas, con
sus aberraciones cromtica y de esfericidad, corregidas.
El ndice de refraccin: es una medida de la velocidad comparativa de luz en un
medio. Cuando existe aire entre la lente y el cubreobjetos, parte de la luz proyectada a
travs de la muestra es desviada (refractada), por lo que a medida que se usa un
objetivo de mayor aumento, la prdida de resolucin tiene un efecto significativo sobre
la calidad de la imagen. El uso de aceite de inmersin (que tiene el mismo ndice de
refraccin que el vidrio) entre la muestra y la lente del objetivo de inmersin, evita el
cambio del ndice de refraccin, y por lo tanto, mejora la resolucin.
MATERIAL.- Microscopio ptico, portaobjetos, cubreobjetos y
alguna muestra para
observar al microscopio.
PROCEDIMIENTO.- a) Seale cada componente del microscopio y anote su funcin y a
qu sistema pertenece. b) Observe los grabados en los oculares y en los objetivos y
anote su significado. c) Ensaye el enfoque una preparacin, empezando con el objetivo
de menor aumento, anotando el aumento total que logra de su imagen en cada caso.
d) Indique cul es el poder de resolucin de cada objetivo. e) Mida el grosor, largo y
ancho del portaobjetos y del cubreobjetos. f) Ensaye la iluminacin Khler
AJUSTE.- en la actualidad casi todos los microscopistas practican la iluminacin
basada en los principios establecidos por Khler, conocida como iluminacin de
Khler. Su finalidad es obtener una distribucin homognea de la iluminacin, sobre el

espcimen a observar, a pesar de las irregularidades de la fuente de luz.
Pasos a seguir para la iluminacin de Khler:
1. Prender la fuente de luz (foco).
2. Enfocar la preparacin con el objetivo de menor aumento (10X)
3. Subir el condensador hasta el tope, con mucho cuidado.
4. Cerrar por completo el diafragma de la lmpara ( o diafragma de campo)
colocado en la base del microscopio (de dnde sale la luz).
5. Cerrar por completo el diafragma de Iris.
6. Observar la figura geomtrica que aparece en el campo (hexgono), y a la cual
se le llama diafragma.
7. Bajar el condensador lentamente hasta lograr la mxima nitidez de los bordes de
la figura geomtrica o diafragma
8. Si no est centrado el diafragma en el campo, entonces:
9. Centrar el diafragma en el campo con los tornillos de centrado que estn en el
condensador, movindolos simultneamente y lentamente, para evitar que el
diafragma salga del campo.
10. Abrir el diafragma de campo luminoso (o de la lmpara) hasta obtener iluminada
un rea igual al campo visual.
11. Si el diafragma est centrado en el campo, ningn vrtice debe salir del campo y
los espacios que hay entre vrtice y vrtice, deben ser iguales.
12. Si no es el caso, debe cerrarse un poco el diafragma de campo luminoso y
repetir los pasos 9, 10 y 11.
13. Abrir completamente el diafragma de campo luminoso. (ste debe estar
siempre, completamente abierto o ligeramente cerrado, slo se cierra
cuando se hace la iluminacin Khler).
14. Abrir poco a poco el diafragma de Iris, hasta obtener una iluminacin que no
lastime a los ojos.
15. Ajustar la intensidad de la luz con el tornillo de control de la intensidad, hasta
donde no lastime a los ojos.
16. Ajustar la altura del condensador dependiendo del objetivo a utilizar.
17. Verificar el ajuste observando por el ocular, el campo debe estar iluminado total y
homogneamente.
Pasos a seguir para enfocar el espcimen o muestra:

1) Con los tornillos macromtricos, bajar con cuidado la platina hasta el tope.
2) Con el revolver, colocar el objetivo de menor aumento (seco dbil) en direccin
del orificio de la platina.
3) Colocar el portaobjetos que contiene la muestra, en la platina, centrndolo en el
rea del orificio de la platina.
4) Asegurar el portaobjetos con las pinzas que hay en la platina.
5) Con los tornillos macromtricos, sin ver por los oculares, subir lentamente la
platina hasta que llegue al tope (actualmente la mayora de los microscopios
compuestos tienen un tope slo para el objetivo seco dbil, se recomienda
verificar esto antes de colocar un portaobjetos).
6) Sin ver todava por los oculares, verificar hacia que sentido (si es hacia mi, o
hacia fuera) se tienen que mover los tornillos macromtricos
para bajar la
platina.
7) Prender la fuente de luz (lmpara o foco).
8) Con los tornillos macromtricos, bajar la platina lentamente hasta obtener una
imagen del espcimen.
9) Afinar la imagen con los tornillos micromtricos.
10) Ajustar la altura del condensador.
11) Ajustar la cantidad de luz con el diafragma de iris.
12) Ajustar la intensidad de luz con el tornillo de control de la intensidad.
13) Observar la muestra.
Si se va a observar con los otros objetivos:
14) Con el revolver cambiar primero al objetivo seco fuerte y seguir los pasos 9 a 13.
15) Con el revolver cambiar al objetivo de inmersin y seguir los pasos 9 a 13
16) Antes de colocar el objetivo de inmersin en direccin de la muestra, debe
siempre colocarse una gotita de aceite de inmersin.
Recomendaciones para el uso de los objetivos:
Objetivo
Objetivo
Objetivo de
Seco dbil
Aproximadamente
Seco fuerte
Aproximadamente
Inmersin
Altura del
de 1- 2 cm por
de 1- 2 cm por
Condensador
condensador
debajo de la
debajo de la
pegado a la platina
platina
platina
Poca X
Media XX
Mucha XXX
Baja X
Media XX
Alta XXX
Caracterstica
Cantidad de luz
(Diafragma de Iris)
Intensidad de luz
(Tornillo de control
de intensidad)
X: significa una medida cualitativa a manera de comparacin.
MICROSCOPIO COMPUESTO Y SUS COMPONENTES PRINCIPALES
OCULARES
CABEZAL
REVOLVER
OBJETIVOS
PLATINA
BRAZO
DESPLAZAMIENTO PLATINA
MACROMTRICO
MICROMTRICO
FOCO
CONDENSADOR
BASE
PRCTICA N 1
EXAMEN FSICO Y QUMICO DE LAS HECES.
OBJETIVOS.- Conocer la importancia de realizar el examen fsico-qumico de las

heces, as como el aprender a hacer cada una de las determinaciones.
Comprender la importancia de la informacin que nos proporciona este examen tanto a
nivel mdico general como a nivel parasitolgico.
INTRODUCCIN.- El examen de las heces o coprologa comprende la observacin

macroscpica, la observacin microscpica y el anlisis qumico.
La observacin macroscpica determina las caractersticas fsicas y la presencia de
parsitos visibles a simple vista.
La observacin microscpica comprende el estudio microbiolgico (bacteriolgico,
parasitolgico, virolgico y micolgico).
El anlisis qumico consiste en la bsqueda de compuestos qumicos tales como;
lpidos, carbohidratos y sangre oculta entre otros.
Estos tres estudios de las heces fecales en su conjunto determinan el estado funcional
e integral del aparato digestivo de un individuo.
En el laboratorio clnico es comn el que se realicen mtodos coproparasitoscpicos,
olvidndose de que previamente debe realizarse un estudio fsico, el cual proporciona
informacin valiosa para orientar hacia qu mtodo coproparasitoscpico es el ideal a
emplear en funcin de lo que se espera hallar de un parsito y de las caractersticas
fsicas de las heces.
Actualmente ste estudio sumado al examen qumico, se ha retomado del pasado y se
le ha considerado relevante para el diagnstico diferencial de muchas enfermedades
tanto infecciosas como no infecciosas.
PRIMERA PARTE
EXAMEN FSICO, MACROSCPICO U ORGANOLPTICO DE LA
MATERIA FECAL
A la observacin macroscpica de la materia fecal, que es rpida y fcil de hacer,

podemos saber desde el punto de vista de la parasitologa, lo siguiente:
1. El tiempo crtico del anlisis
2. El posible agente etiolgico
3. La posible localizacin del dao
4. El estadio del parsito a hallar a nivel microscpico
5. El mtodo coproparasitoscpico a emplear de acuerdo al estadio del parsito
6. El agente etiolgico cuando ste es macroscpico.
CARACTERSTICAS FSICAS NORMALES DE LAS HECES.

La consistencia debe ser blanda con forma cilndrica y replegada sobre s misma
varias veces, de tal manera que al ser emitidas las heces, stas conserven su forma.
La superficie debe ser rugosa y opaca.
El color vara del castao, caf o marrn claro al obscuro.
El olor aunque es desagradable, debe ser soportable (caracterstico).
No debe presentar moco, sangre, pus, parsitos macroscpicos ni restos burdos de
alimentos.
La cantidad de materia fecal que un adulto sano elimina por da es variable en funcin
de la dieta, pero el rango que se considera normal es de 80 a 250 gr repartidas en una
a dos defecaciones por da.
La consistencia de las heces est en funcin de la cantidad de agua, lo que a su vez
determina el estadio de los parsitos a hallar, por lo que:
a) en heces lquidas encontraremos de preferencia trofozotos de protozoarios y larvas
de helmintos.
b) en heces pastosas (semiblandas) encontraremos aunque en menor proporcin,

trofozotos y algunos quistes de protozoarios y tambin larvas de helmintos.
c) en heces blandas y duras se pueden encontrar quistes de protozoarios y
huevecillos de helmintos, que son formas de resistencia de los parsitos.
Como puede observarse a medida que las heces pierden agua, la posibilidad de hallar
sobretodo trofozoitos, disminuye, por lo que la consistencia de las heces determina el
tiempo crtico del anlisis, que es el tiempo que transcurre desde que la materia fecal
es emitida hasta el momento de su anlisis, que si se respeta, esto asegura el hallazgo
sobretodo de trofozotos, tenindose que:
Para heces lquidas y pastosas el tiempo crtico del anlisis es de 30 min.
Para heces blandas el tiempo crtico del anlisis es de 24 hr.
Para heces duras el tiempo crtico del anlisis es de 48 hr.
Despus de ese tiempo las formas parsitas se destruyen (trofozoitos) o se deforman
(quistes, huevos y larvas).
REQUERIMIENTOS
Una muestra fecal recin emitida, libre de contaminantes y recolectada en un frasco
limpio, seco y con tapa hermtica.
Una lupa y un abatelengua. Cubreboca, guantes desechables y cajas de Petri.
PROCEDIMIENTO:
a) con los brazos extendidos y colocando el frasco en la mesa, destpelo poco a poco,
sobretodo si est lleno, para evitar que el contenido salga disparado
b) observe a simple vista la muestra fecal y anote el color y la forma que tenga, tambin
anote cmo es la superficie de la muestra.
c) observe tambin si en la superficie hay sangre, moco, pus, restos burdos de
alimentos y/o parsitos macroscpicos.
d) con un abatelengua detecte la consistencia y removiendo la materia fecal busque
sangre, moco, restos burdos de alimentos y/o parsitos macroscpicos, anote los
hallazgos. De preferencia coloque la muestra en cajas de Petri, para la bsqueda de
los parsitos macroscpicos, ayudndose para ello con una lupa.
FORMA DE REPORTAR:
Nombre del mdico que solicit el estudio.
Nombre del paciente.
Sexo y edad del paciente.
Nombre del mtodo realizado.
Nmero de muestra analizada y fecha de emisin y de anlisis.
Cantidad (solo si es toda la emitida en 24 hr).
Forma: la hallada, siempre y cuando la condicin de la muestra lo permita.
Superficie: la observada.
Color: el hallado, si es el normal se puede reportar como caracterstico.
Consistencia: la observada.
Moco: si no hay se reporta negativo, si lo hay se reporta como positivo, y

adems debe indicarse si se hall mezclado o en la superficie de las heces, y en
este ltimo si fue opaco o brillante, en forma de hilos o corpsculos. La cantidad
se indica con cruces.
Sangre: si no hay se reporta negativo, si hay se reporta positivo, pero debe

indicarse si fue sangre fresca o digerida, la cantidad se indica con cruces.
Pus: si no hay se reporta negativo, si hay se reporta como positivo. La cantidad

se reporta con cruces.
Parsitos macroscpicos: si no hay se reporta negativo, si hay se reporta

como positivo y debe indicarse el estadio y el nombre genrico y si es posible el
nombre de la especie del parsito, as como la cantidad.
Restos burdos de alimentos: si no hay se reporta negativo, si hay se reporta

positivo y hay que indicar el tipo de alimento encontrado.
Otros hallazgos: en los nios es comn pero anormal, encontrar objetos tales
como monedas y canicas entre otros, se puede hallar restos de insectos. Cuando
la muestra no es recolectada adecuadamente y est contaminada, las
caractersticas fsicas se alteran, y esto debe considerarse para el reporte. Todo
hallazgo anormal debe reportarse.
SEGUNDA PARTE DE LA PRCTICA

EXAMEN QUMICO DE LAS HECES
Comprende la determinacin de diversos componentes:
1- pH
2- Sangre oculta
6- Moco fecal o recuento de

leucocitos fecales
3- Azcares reductores
7- Fermentacin de Straburger
4- Actividad trptica
8- Albmina disuelta
5- Grasa fecal
9- Pigmentos biliares
10- Otros: nitrgeno, porfirinas, fsforo, sodio, calcio, magnesio y cloruro,

urobilingeno y glucosa-galactosa
Sin embargo slo seis primeros son de aplicacin en las enfermedades parasitarias.
Actualmente en algunos laboratorios se denomina coproscpico o coprograma al
estudio de pH, grasa fecal, sangre oculta y azcares reductores, incluye adems el
estudio de moco fecal o recuento de leucocitos fecales, as como
el estudio
microscpico por medio de los mtodos coproparasitoscpicos.

A continuacin se hablar brevemente de la importancia de los siguientes estudios:
1.- pH: se utiliza en diagnstico diferencial de diarreas, principalmente para el
diagnstico de malabsorcin de carbohidratos y grasas, as como en la evaluacin de
deficiencia de disacaridasas en el intestino delgado.
Se mide con tiras reactivas.
El valor normal tiende a la neutralidad con un rango de 6.8 - 7.2.
Parasitosis en las que tiene significado clnico: Criptosporidiosis y Giardiosis.
2.- Azcares reductores: ayudan a detectar la deficiencia de enzimas intestinales,

principalmente de la lactosa y de la sucrosa o sacarosa (disacaridasas), debido a
deficiencia congnita o dao no especfico de la mucosa. Tambin es til en el
diagnstico de sndrome de mala absorcin.
Se mide con tabletas de Clinitest.
El valor normal es < 2 mg/g o 0 gr/dl
Parasitosis en las que tiene significado clnico: Ciclosporosis
3.- Sangre oculta: la deteccin de la misma en las heces es una seal de la existencia
de una lcera pptica, de cncer y de otras anormalidades, entre ellas de causa
parasitaria.
Se detecta de diversas formas, puede ser con guayacol, con reactivos comerciales
como Hematest, por el mtodo de ELISA y otros.
El valor normal es negativo.

Parasitosis en las que tiene significado clnico: Amibiasis, tricurosis, uncinariosis.
4.- Actividad trptica: se utiliza para el diagnstico de las siguientes enfermedades;
sndrome de malabsorcin (dnde se incluyen las causas infecciosas por parsitos),
insuficiencia pancretica y de fibrosis qustica.
Existen varios mtodos, que incluyen el empleo de sustratos proticos teidos, tales
como azocasena, o la difusin enzimtica radial en geles de agar, conteniendo sustrato
de casena o gelatina.
El mtodo que refiere la literatura es el de la pelcula radiogrfica, o el de la pelcula de
gelatina.
El valor normal depende de la enfermedad que se quiere diagnosticar, generalmente
se considera como eficiente.
Parasitosis en las que tiene significado clnico: Giardiosis, Ciclosporosis.
5.- Grasa fecal: se utiliza para el diagnstico de diversas enfermedades del hgado, del
pncreas y del intestino (sndrome de malabsorcin, una de las causas es parasitaria).
Existen mtodos cualitativos y cuantitativos.
El ms utilizado y accesible a cualquier laboratorio es el cualitativo, para ello se usa el
colorante Sudn III o Rojo Sudn.
El valor de referencia se da por la cantidad en porcentaje de corpsculos de grasa.
Parasitosis en las que tiene significado clnico: Giardiosis, y algunas coccidiosis como
Isosporosis, Ciclosporosis y Criptosporidiosis.
6.- Moco fecal: los mdicos generalmente lo solicitan para establecer un diagnstico
diferencial entre una etiologa bacteriana y una amibiana, es til para diagnosticar
enfermedades intestinales inflamatorias.
El mtodo es por frotis de moco fecal y tincin generalmente con azul de metileno,
pero se puede teir con Wright o May Grnwald Giemsa
Valor de referencia: si hay mayor cantidad de leucocitos, de 10 20 por campo,
principalmente polimorfonucleares, es indicativo de pus y la infeccin es causada por
bacterias, si hay mayor cantidad de mononucleares la infeccin es de tipo viral. Menos

de 10 leucocitos por campo es sugestivo de amibiasis.
Parasitosis en las que tiene significado clnico: amibiasis intestinal.
REQUERIMIENTOS
Una muestra fecal libre de contaminantes y recolectada en un frasco limpio, seco

y con tapa hermtica.
Papel indicador Merck, para medir el pH
Tabletas de Clinitest, para la determinacin de azcares reductores
Guayacol, bencidina, Hematest, o el reactivo del mtodo con el que se cuente

para la determinacin de sangre oculta.
Solucin salina fisiolgica, pelcula radiogrfica o de gelatina. Para determinar

actividad trptica. O los reactivos del mtodo con el que se cuente.
Colorante Sudn III o Rojo Sudn, o reactivo de Saathoff para determinacin de

grasas.
Solucin de colorante azul de metileno o bien de Wright, para el recuento de

leucocitos
Agua destilada
Etanol al 95%
Etanol al 96%
cido actico glacial
Sulfato de azul de Nilo al 1%
cido actico glacial al 36%
Tubos de ensaye
Pipetas volumtricas
Portaobjetos
Cubreobjetos
Abatelenguas
Aceite de inmersin
Gradilla
Microscopio ptico compuesto
PROCEDIMIENTO:
Siga las instrucciones para cada mtodo de acuerdo a la determinacin que va a
efectuar.
pH
Se examina con el papel indicador Merck que seala el pH aproximado. Las heces
normales son neutras o ligeramente alcalinas entre 6.8 y 7.2, pero la reaccin depende
de mltiples factores, dietticos y endgenos, por lo que se pueden presentar
variaciones, tanto en la salud como en la enfermedad.
La medicin se hace impregnando el papel indicador con las heces con ayuda de una
varilla de vidrio.
SANGRE OCULTA
Para este anlisis es importantsimo que el paciente durante los 2 3 das anteriores a
la toma de muestra se someta a un rgimen riguroso (blanco), sin carne, pescados,
embutidos, lentejas, espinacas, pltanos, etc., es decir alimentos ricos en peroxidasas.
Tampoco deber tomar medicamentos que contengan hierro o hemoglobina, o que
puedan provocar prdidas sanguneas como salicilatos o esteroides. La alimentacin
permitida consiste en: huevos, papas, cebolla, arroz, garbanzos, pan y leche.
La mayora de las pruebas para detectar hemorragias ocultas en heces se basan en la
determinacin de peroxidasas como indicativo del contenido de hemoglobina.
Para ste estudio se pueden encontrar los kits clsicos de guayacol y bencidina. Y hace
un par de aos, que ya se emplean nuevos kits por mtodos inmunocromatogrficos
para la deteccin de hemoglobina especfica humana, lo que evita en muchos casos los
falsos positivos que se dan en los mtodos tradicionales.
A) Reaccin de la bencidina:
Sobre un papel de filtro se untan las heces, luego se ponen unas gotas de bencidina y
agua oxigenada de 10 volmenes. Si el resultado es (+), como resultado de la
presencia de peroxidasa, se formar un halo de color verde azulado en torno a la
muestra fecal.
Bencidina
O2 + o Color Azul verdoso
B) Reaccin de weber o del guayacol:

La prueba es igual que la anterior pero en lugar de poner bencidina se pone guayacol.
La reaccin es la siguiente:
Hemoglobina + H2O2 H2O + O2
C) Test inmunocromatogrfico rpido cualitativo para la deteccin de sangre oculta

en heces (empleado principalmente para el diagnstico de cncer colorrectal).
Principio:
El mtodo emplea una nica combinacin de conjugado monoclonal marcado con oro
coloidal y una fase slida de anticuerpos policlonales para identificar de manera
selectiva hemoglobina humana con un alto grado de sensibilidad y especificidad.
Siga las instrucciones del inserto.
ENZIMAS PROTEOLTICAS (ACTIVIDAD TRPTICA):
Este estudio se efecta para comprobar principalmente la presencia de tripsina y

quimiotripsina.
El mtodo se basa en que las heces normales (hasta una dilucin 1/100 en solucin
salina fisiolgica) licuan la gelatina.
La prueba se realiza aplicando una gota de diferentes diluciones (1/5, 1/10, 1/50, 1/100)
de las heces a estudiar sobre una pelcula de gelatina.
Se considera un resultado positivo si la gelatina queda disuelta en hora.
Positivo hasta una dilucin 1/100
...........................
...........................
...........................
Digestin normal.
Digestin media.
Digestin deficiente.
DETERMINACIN DE GRASA EN HECES:

Una persona normal digiere y reabsorbe casi toda la grasa de su dieta. Cuando la dieta
es normal, la grasa en heces constituye hasta un 20% de los slidos totales.
A) Tcnica de coloracin de sudn III (cualitativa):

Los lpidos se miden en forma de cidos grasos: (0 6.0 g/24h).
Se requiere materia colectada de 48 o 72 hr, con dieta previa de 100 g de grasa normal
por da, durante 5 6 das
Una pequea cantidad de muestra fecal es mezclada con 2 gotas de agua, 2 gotas de
etanol al 95% y 3 4 gotas de colorante de Sudan III, esto aumenta el color amarillo
naranja retrctil de los glbulos de grasa para as identificar las grasas neutras.
Las grasas cidas y de jabn son detectadas por hidrlisis, mezclando la muestra fecal
con 2 3 gotas de Sudan III y de 2 3 partes de cido actico glacial al 36 %, seguido
por un calentamiento a hervir por dos veces, antes de observarlo al microscopio.
Luego se coloca una pequea cantidad de la anterior mezcla en un portaobjetos, se

coloca el cubreobjetos cuidando que no se formen burbujas y se observa al
microscopio, la lectura se hace aplicando el siguiente criterio:
Grasas neutras: < de 50 glbulos de grasa por campo en 40X, se reporta como
normal.
Grasas cidas: < 100 glbulos de grasa en 40X, se considera normal.
Grasas neutras: se observan como gotas de color naranja o rojo.

Grasas cidas: se observan como escamas que se tien ligeramente, o cristales en
forma de agujas largas y finas, que no se tien.
Jabones: se observan como escamas o cristales que no se tien.
B) Tcnica de Saathoff (sudn III)

Se hace una dilucin de la muestra fecal con solucin salina isotnica, se toma 1 ml de
la misma y se coloca en un tubo, se agrega una gota de reactivo de Saathoff, se agita y
se coloca una gota de la suspensin en un portaobjetos, se coloca el cubreobjetos y se
observa al microscopio.
De 2 3 gotas rojas por campo, son grasas neutras y es normal.
Las grasas se tien de color rojo sin distincin, para hacer la diferenciacin de las
grasas, se agrega a la preparacin, una gota de solucin de Lorish (sulfato de azul de
Nilo al 1%), observndose:
Grasas neutras: de color rosado
cidos grasos: de color azul
Jabones: de color gris azulado
Preparacin del reactivo de Saathoff
1.- Sudn III. 2 gr
2.- Alcohol etlico del 96....10 ml
3.- cido actico glacial..90 ml
C) El mtodo cuantitativo de Van de Kramer, es laborioso, ya que primero se separan

los lpidos de las heces mediante tratamiento de estas con una solucin de hidrxido
potsico alcohlico que contenga pequeas cantidades de alcohol amlico. De sta
manera se produce la formacin de jabones.
Posteriormente se hidrolizan los jabones con HCl y se convierten en cidos grasos,
extrayndose estos a continuacin con ter de petrleo.
Por ltimo se titulan los cidos grasos con NaOH 0.1 N
Y se realizan diversos clculos.
AZCARES REDUCTORES
Las heces deben de ser recientes, no debe dejarse pasar ms de una hora desde que
son emitidas hasta que se realiza el examen.
Hay que diluir una parte de heces en dos partes de agua destilada, mezclar bien y
centrifugar a un nmero bajo de revoluciones (1 500 rpm). Se toman 15 gotas del
sobrenadante, se colocan en un tubo de vidrio y se le aaden dos gotas de HCl 1 N.
Luego se calienta para desdoblar la sacarosa.
Una vez que ha enfriado el lquido anterior, se aade una tableta de CLINITEST(Ames)
para azcares reductores y se deja disolver. A continuacin se compara con la escala
de colores que lleva el reactivo.
El resultado se da en gramos por litro. El resultado ser negativo si es inferior a 2.5 g/L.
Entre 2.5 y 5 es dudoso y ser positivo si es mayor de 5 g/L
CITOLOGIA DE MOCO FECAL O RECUENTO DE LEUCOCITOS FECALES

Tcnica azul de metileno amortiguado (AMA)
Se toma una pequea porcin de la muestra (de preferencia del moco) y se realiza una
extensin en un portaobjetos.
Se le adiciona una gota del colorante AMA y se coloca el cubreobjetos, se deja reposar
5 min y se observa con objetivo 40X.
En caso de duda se repite la operacin, tomando moco de otra parte de la muestra.
Se realiza un conteo de 100 clulas y se informa el porcentaje de clulas observadas.
Resultado:
En caso de no encontrarse leucocitos se reporta como no se observ celularidad.
En caso de encontrarse un nmero escaso de leucocitos polimorfonucleares, se informa
como escasos polimorfonucleares.
En caso de encontrarse las clulas necesarias para hacer el conteo, se reporta de la
siguiente manera:
Polimorfonucleares:
..
Mononucleares:
..
Si existe duda sobre la presencia de eosinfilos en la muestra, se realiza un extendido

del moco fecal, se deja secar y se realiza la tincin especial de Hansel, y se realiza el
conteo de 100 clulas, reportando el porcentaje de eosinfilos hallado.
Valor de referencia: si hay mayor cantidad de leucocitos, de 10 20 por campo,
principalmente polimorfonucleares, es indicativo de pus y la infeccin es causada por
bacterias, si hay mayor cantidad de mononucleares la infeccin es de tipo viral. Menos
de 10 leucocitos por campo es sugestivo de amibiasis.
FORMA DE REPORTAR:
Nombre de la determinacin realizada.
Resultado de cada determinacin y su valor de referencia.
BIBLIOGRAFA
1.- Ivine Enrique, Selva Alejandro. El laboratorio en la clnica. Metodologa analtica,
fisiopatologa e interpretacin semiolgica. 2. edicin. Edit. Mdica panamericana.
1981.
2.- Balcells G. Alfonso. La clnica y el laboratorio. Interpretacin de anlisis y pruebas
funcionales. Exploracin de los sndromes.Cuadro biolgico de las enfermedades. 15.
Edicin. Edit. Salvat.1990.
3.- Todd-Sanford. Davidsohn Israel, Bernard John. Diagnstico clnico por el laboratorio.
6. Edicin. Edit. Salvat. 1978
4.-Bernard H. John. Diagnstico y tratamiento clnicos por el laboratorio.9. edicin. Edit.

Masson-Salvat Medicina 1997.
5.- Snchez R. Williams. Exmen macroscpico de heces. Blog del qumico clnico.
Disponible en http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com
6.- Snchez R. Willianms. pH de la materia fecal, sangre oculta en heces, citologa de
moco fecal, grasa en heces, azcares reductores. Blog del qumico clnico.
Disponible en http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com
7.- Citologa en moco fecal y leucocitos en moco fecal. Instructivo coproanlisis.
Universidad de Yucatan
Disponible en www.quimica.uady.mx/sgc/archivos/...y.../I-FQUI-LAC-04.
8.- Sangre oculta en heces. Inmunocromatogrfico.
Disponible en http://www.monlab.es/productos-orinas-heces/sangre-oculta-heces.html
9.- Anlisis de sangre oculta en heces. Mtodos rpidos.
Disponible en www.clinicadam.com/salud/5/007008.html
10.- Tema 7: Estudio de heces. Digestin. Sangre oculta y cuerpos reductores. (Examen
macroscpico, estudio fsico-qumico)
Disponible en http://inspeccion-uvmi3.iespana.es/inde6977.htm
11.- Meneses B. Vernica. Manual de Parasitologa del laboratorio clnico. (Preparacin
del reactivo de Saathoff).
Disponible en http://www.scribd.com/doc/20828731/Manual-de-Parasitologia
12.- Bautista N. Rodolfo. De Loera G. Alejandro. Exmenes fecales y de asimilacin.
Segunda parte. Revista AMMVEPE (Asociacin Mexicana de Mdicos Veterinarios
Especialistas en Pequeas Especies, A.C.) Val. 7. No. 2 Marzo/AW 1996 INIMV6P: 5864.
Disponible en www.campusveterinariosenweb.com/file.php/1/.../Fecal_-_2.pdf
PRCTICA N 2
MTODO COPROPARASITOSCPICO DIRECTO.
OBJETIVOS: Que el alumno aprenda a realizar un mtodo coproparasitoscpico (CPS)

cualitativo, que conozca las ventajas y desventajas del mismo y que empiece a
familiarizarse microscpicamente con las diferentes estructuras que contienen las
heces, tanto parasitarias como de todo tipo.
INTRODUCCIN.
Esta tcnica parasitoscpica llamada tambin CPS en fresco, es la ms antigua que se
conoce, existen datos acerca de que Anton Van Leewenhoek a mediados del siglo XVII,
fue el primero en realizarla al observar sus propias heces y hallar trofozotos del
protozoario Giardia lamblia .
Es uno de los mtodos CPS ms utilizados en cualquier laboratorio de anlisis clnicos,
debido a que es sencillo y rpido de realizar, adems de que es muy econmico por
requerir de poco material
y de soluciones en pequea cantidad, usuales en el
laboratorio.
FUNDAMENTO.
Este mtodo se basa en la utilizacin de una solucin salina isotnica para mantener
vivos a los trofozotos de protozoarios. As como en la utilizacin de una solucin de
yodo (lugol) para colorear a los quistes y ooquistes de protozoarios; huevos y larvas de
helmintos, (el lugol destruye a los trofozotos).
REQUERIMIENTOS.
Aplicadores de madera o palillos.
Portaobjetos de 25X76 mm.
Cubreobjetos de 22X22 mm.
Microscopio compuesto ptico.
Solucin salina isotnica.
Solucin de yodo o lugol parasitolgico.
Una muestra fecal recin emitida.
PROCEDIMIENTO.
1- En un portaobjetos colocar una gota de solucin salina isotnica.
2- Con el aplicador de madera tomar una muestra fecal de 1 4 mg, de preferencia de
donde haya moco y sangre.
3- Mezclar con cuidado haciendo una suspensin y no un frote, con ayuda de un
palillo o la punta del cubreobjetos
4- Quitar de la suspensin fibras y otros fragmentos grandes.
5- Poner con cuidado el cubreobjetos, evitando la formacin de burbujas.
6- Observar al microscopio primero con el objetivo seco dbil y luego con ms cuidado
con el objetivo seco fuerte cuando localice formas parasitarias.
7- La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la superficie
del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
8- En otro portaobjetos colocar una gota de lugol
9- Luego colocar una muestra de heces de 1 4 mg, con el aplicador de madera.
10- Repetir los pasos del 3 al 8.
11- Reportar lo observado
MTODO CPS DIRECTO
MEDIDAS DE SEGURIDAD.
El material biolgico con el que se trabaja, es potencialmente infectante, por lo que se
recomienda utilizar guantes, cubreboca y abundante detergente para el lavado de
manos, material y rea de trabajo.
INDICACIONES Y LIMITACIONES.
Este mtodo est indicado para la deteccin de trofozotos de protozoarios en heces
que cubran los requisitos para ello.
La muestra fecal empleada es tan pequea que resulta poco representativa.
A la observacin microscpica se observan demasiados detritos, lo cual puede
enmascarar a las formas parasitarias.
FORMA DE REPORTAR.
Fecha y hora de emisin de la muestra
Fecha de realizacin del anlisis de la muestra
Nombre del mtodo realizado, indicando si fue nico o seriado (nmero de muestras)
Estadio del parsito hallado.
Gnero y especie del parsito.
Cantidad de los parsitos reportada con cruces.
Otros hallazgos anormales.
CRITERIO PARA REPORTAR LA CANTIDAD DE PARSITOS EN UN CPS

CUALITATIVO EN UN CAMPO OBSERVADO A 40X (seco fuerte) EN EL
MICROSCOPIO
N DE CRUCES
N DE PARSITOS POR
X
XX
XXX
XXXX
CAMPO
05
5 10
10 20
Ms de 20
INTERPRETACIN
Escaso
Moderado
Abundante
Muy abundante
BIBLIOGRAFA
1) Atas Antonio. Parasitologa mdica. Edit. Mediterrneo. ltima edicin.
2) Becerril Flores Romero Cabello. Parasitologa mdica, de las molculas a la
enfermedad. Edit. Mc Graw Hill. Primera edicin.
3) Lpez Pez Myriam Consuelo. Atlas de parasitologa. Edit. Manual Moderno. Primera
edicin.
4) Rodrguez Prez Elba. Atlas de parasitologa mdica. Edit. Mc Graw Hill.
5) Salazar Schettino - Haro Arteaga - Cabrera Bravo. Diagnstico morfolgico de las
parasitosis.
Edit. Francisco Mndez Cervantes. 2 edicin o la ltima. (Se recomienda
su compra)
6) Shore Garca- Ash. Diagnstico parasitolgico, manual de laboratorio clnico. Edit.
Mdica panamericana. ltima edicin.
7)
Tay-Lara-Velasco-Gutirrez.
Parasitologa
mdica.
Edit.
Francisco
Mndez
Cervantes. ltima edicin

8) W. Peters y H. M. Gilles. Atlas a color de medicina tropical y parasitologa. Edit. Year
Book Medical Publishers.
9) Zaman Viqar. Atlas de Parasitologa mdica. Edit. Mdica panamericana. ltima
edicin.
10) Aprendizaje de la parasitologa basado en problemas. Ana Flisser & Ruy Prez
Tamayo Edit. Editores de Textos Mexicanos 2006
11) Garca LS, Bruckner DA.
Diagnostic medical parasitology American society
microbiology. Washington, DC USA 1993 (2a Edicin) 1997 (3a Edicin)

12) Giono CS, Escobar GA, Valdespino GJL. Diagnostico de laboratorio de infecciones
gastrointestinales.
Unidad IV Diagnostico parasitologico.
control de calidad.
Unidad V Bioseguridad y
Unidad VI Red nacional de laboratorios de diarrea.
Instituto
Nacional de Diagnostico y Referencia Epidemiolgico (INDRE) SSA MEXICO 1994

13) Irene de Haro Arteaga & Aurora Candil Ruiz. Diagnostico de las parasitosis en:
parasitologa mdica. De las molculas a la enfermedad. Becerril Flores Marco &
Romero Cabello Ral. EDS. Editorial MC GRAW HILL 2004
14) Tay ZJ, Gutirrez QM, Lpez MR, Manjarrez Zme, Molina LS.
Microbiologa y
parasitologa mdicas. Mndez Editores 3a Edicin Mxico 2003

15) Organizacin mundial de la salud.
Tablas de identificacin de protozoarios y
helmintos intestinales 2002.

16) National comittee for clinical laboratory estndar (NCCLS).
Procedures for the
recovery and identification of parasites from the intestinal tract approved guideline.
Pennsylvania 1997.
Algunos sitios de internet.
www.facmed.unam.mx (facultad de medicina de la UNAM)
www.estafilococo.com
www.portalesmdicos.com
www.scielo.cl
www.angelfire.com
www.monografias.com
www.microbiologiaclinica.com
www.parasitologia.uchile.cl
quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com
PRCTICA N 3
MTODO COPROPARASITOSCPICO DE FAUST
OBJETIVOS: Aprender a realizar un mtodo coproparasitoscpico cualitativo de

concentracin por flotacin.
Conocer las ventajas y utilidad por las que este mtodo se emplea de rutina en la
mayora de los laboratorios clnicos tanto privados como pblicos.
Realizar la bsqueda e identificacin de formas parsitas en las heces.
Conocer el manejo y la utilidad del conservador qumico PAF en el trabajo rutinario.
INTRODUCCIN.
Este mtodo coproparasitoscpico (CPS) fue descrito en 1938 basndose en los
siguientes antecedentes:
En 1906 Bass la describi originalmente como una tcnica de flotacin con

salmuera, para la recuperacin de huevos de helmintos.
En 1910 el mismo Bass introdujo la centrifugacin.
En 1924 Lane ide un refinamiento de la tcnica, que consisti en realizar un

lavado del sedimento antes de centrifugar con la salmuera.
En 1930 Faust y cols. realizaron pruebas con diferentes soluciones, y la solucin

de sulfato de zinc con densidad de 1.18 Baum, fue la que result ser un medio
adecuado para la flotacin de quistes de protozoarios y huevos de helmintos.
Es uno de los mtodos CPS ms utilizados y preferidos en cualquier laboratorio de

anlisis clnicos, debido a las ventajas que presenta.
Cabe aclarar que debido a que cada laboratorio y cada analista introducen variaciones
a la tcnica, en la actualidad se ha buscado estandarizarla, para cumplir con las
exigencias de calidad y evaluaciones externas.
FUNDAMENTO.
Este mtodo se basa en una diferencia de densidades entre la solucin que se emplea
y la de las formas parasitarias, es decir, se basa en la utilizacin de una solucin de
sulfato de zinc con densidad de 1.18 Baum que por ser mayor a la densidad de las
estructuras parasitarias (1.05 1.15), ocasiona que stas floten.
Adems, la solucin de sulfato de zinc no produce deformacin de las formas
parasitarias y el proceso de flotacin se agiliza con la centrifugacin.
MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Muestra fecal recolectada adecuadamente
Aplicadores de madera
Frasco de vidrio de 100 ml
Abatelenguas o varillas de vidrio
Tubos de ensaye de vidrio de 13 X 100 mm
Embudo de 7.5 cm de dimetro
Coladerita de 3.5 a 5 cm de dimetro
Asa de alambre o microbiolgica, terminada en crculo de 3 5 mm de dimetro,
formando ngulo recto con la varilla.
Mechero Bunsen
Gradilla
Solucin de sulfato de zinc con densidad de 1.18 Baum (al 33% en agua)
Solucin de yodo o lugol parasitolgico.
Agua destilada
Centrfuga
TCNICA (PROCEDIMIENTO).
1- En un frasco de vidrio colocar aproximadamente un gramo de materia fecal y
agregarle 10 ml de agua destilada. Mezclar con el abatelenguas o varilla de vidrio a
hacer una suspensin homognea.
2- Filtrar la suspensin a travs de la coladerita colocada en el embudo y stas a su
vez colocadas en el tubo de ensayo, teniendo cuidado de no llenar completamente
el tubo, debe dejarse siempre aproximadamente un cm del tubo sin llenar.
3- Centrifugar el tubo a 2,000 2,500 rpm durante 1 minuto.
4- Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
5- Resuspender el sedimento con 2 3 ml de agua destilada, ayudndose con un
aplicador de madera y se completa el volumen con ms agua, dejando un cm del
tubo sin llenar, se mezcla nuevamente con el aplicador de madera.
6- Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000 2,500 rpm durante 1 minuto.
7- Repetir los pasos 4 6, hasta que el sobrenadante se observe limpio, no ms de
dos veces.
8- Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
9- Resuspender el sedimento con 2 3 ml de solucin de sulfato de zinc, ayudndose
con un aplicador de madera y se completa el volumen con ms solucin de sulfato
de zinc, dejando un cm del tubo sin llenar, se mezcla nuevamente con el aplicador
de madera.
10-Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000 2,500 rpm durante 2 minutos.
11- Sacar el tubo de la centrfuga con cuidado sin agitarlo y colocarlo en la gradilla.
12-Quemar el asa con el mechero y dejar enfriar.
13-Colocar el anillo del asa sobre la pelcula del sobrenadante y recolectar una
muestra.
14-Depositar la
muestra en una gota de lugol previamente colocada en el
portaobjetos, lavando el anillo del asa en el lugol.

15-Tomar otras dos asadas de la pelcula del sobrenadante y repetir el paso 14.
16-Mezclar con la punta del cubreobjetos y cubrir la preparacin con el
mismo,
cuidando que no se formen burbujas.

17-Observar la preparacin primero con el objetivo 10X y luego con ms cuidado con
el objetivo 40 45X.
18-La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la superficie

del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
19-Reportar lo observado
FAUST
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas
a- Es sencillo y fcil de realizar.
b- No se invierte mucho tiempo para su realizacin.
c-
Es relativamente econmico por requerir de reactivos no costosos, material y

equipo con el que generalmente cuenta el laboratorio.
d- Hace una buena concentracin de las estructuras parasitarias en la superficie del

sobrenadante debido al proceso flotacin centrifugacin.
e- Y algo muy importante
es que se recuperan la mayora de las estructuras
parasitarias tales como; quistes y ooquistes de protozoarios, larvas y huevecillos de

helmintos.
Desventajas
a. Los huevos de helmintos como Taenia sp, Ascaris lumbricoides no fertilizados y
de trematodos como Fasciola hepatica y Paragonimus mexicanus, as como los
quistes de Balantidium coli, por ser pesados tienden a sedimentar, por lo que
ste mtodo no los recupera.
b. No es posible recuperar trofozotos de protozoarios, ya que se destruyen por la
concentracin del sulfato y por el proceso de centrifugacin.
PRECAUCIONES
La solucin de sulfato de zinc debe prepararse cada tercer da o bien checar

peridicamente la densidad, segn el volumen de trabajo diario.
La toma de muestra de la superficie del sobrenadante debe hacerse en seguida

de la centrifugacin, ya que despus de una hora se pueden sedimentar y/o
deformar las estructuras parasitarias.
El material biolgico con el que se trabaja, es potencialmente infectante, por lo

que se recomienda utilizar guantes, cubreboca y abundante detergente para el
lavado de manos, material y rea de trabajo (en ste caso usar desinfectantes
como el benzal).
FORMA DE REPORTAR.

CUALITATIVO EN UN CAMPO OBSERVADO A 40X (seco fuerte) EN EL
MICROSCOPIO
N DE CRUCES
X
XX
XXX
XXXX
N DE PARSITOS POR
CAMPO
05
5 10
10 20
Ms de 20
INTERPRETACIN
Escaso
Moderado
Abundante
Muy abundante
MTODO COPROPARASITOSCPICO DE FAUST Y USO DEL

CONSERVADOR PAF
INTRODUCCIN.
Cuando se tiene un volumen de trabajo diario grande, o bien se realizan muestreos a
gran escala, ocasiona que no se tenga tiempo suficiente para procesar todas las
muestras y se corre el riesgo de que se deformen o destruyan algunas estructuras
parasitarias.
Lo mismo sucede cuando el laboratorio por la distancia no es accesible para las
personas.
Por ello es que surgi la necesidad del uso de los conservadores o preservadores
qumicos ya sea una sustancia qumica o una mezcla de stas, que contribuyen a
prolongar el tiempo crtico del anlisis de das a meses, dependiendo de la sustancia
qumica y los estadios de los parsitos a conservar.
Uno de los conservadores qumicos que ms se emplea en el trabajo rutinario de
Parasitologa es el PAF porque presenta las siguientes caractersticas:
Nombre comn
Componentes
Estadios
parsitos
PAF
formol)
conserva
(fenol-alcohol- Fenol, solucin salina Trofozoitos,
isotnica,
de
los Tipo de muestra de

que heces para la que se
recomienda
quistes, Para todo tipo
de
formol, ooquistes, huevecillos consistencia de heces
alcohol etlico al 95% y larvas

y agua destilada
II.- Fundamento del uso de los conservadores qumicos
La mayora de estas sustancias son fijadoras, es decir que actan a nivel de los grupos
carboxilo y amino de las protenas de membranas de las formas parasitarias,
ocasionando una precipitacin o coagulacin de esas protenas y endureciendo dichas
membranas, por lo que se conserva la forma original del parsito (caracterstica clave
para su identificacin).
En el caso del PAF, el fenol y el formol son los fijadores.
III.- El Fundamento del mtodo CPS de Faust es el mismo.
IV.- El material, reactivos y equipo, son los mismos que para el mtodo sin uso
del conservador excepto por el PAF.
V.- FORMA DE RECOLECTAR LA MUESTRA
Debe usarse un frasco con las siguientes caractersticas; que sea de vidrio de
preferencia (o de plstico que previamente se haya demostrado que no reacciona con
el PAF), que sea de boca ancha, con tapa hermtica, y con capacidad de 100 - 150 ml.
Se recomiendan los frascos Gerber 2da etapa.
Se colocan 50 ml del conservador PAF en el frasco, se agrega la primera muestra de
heces del tamao de una haba y se mezcla perfectamente con ayuda de un
abatelengua, se tapa el frasco y se guarda en un lugar seco y lejos del sol.
La segunda
muestra se recolecta de la misma manera y la tercera de la misma
manera. Todas las muestras se recolectan en el mismo frasco.

Las muestras pueden recolectarse en 3 das sucesivos o en das alternados de
preferencia.
El frasco guardado en las condiciones indicadas arriba, permite que el PAF conserve a
la muestra hasta por un mes o ms tiempo, dependiendo de las estructuras parasitarias
que contenga.
VI.- TCNICA (PROCEDIMIENTO).
1.
Mezclar con el abatelenguas o varilla de vidrio a hacer una suspensin

homognea, el contenido del frasco (PAF-materia fecal).
2. Filtrar la suspensin a travs de la coladerita colocada en el embudo y stas a
su vez colocadas en el tubo de ensayo, teniendo cuidado de no llenar

completamente el tubo, debe dejarse siempre aproximadamente un cm del tubo
sin llenar.
3. Centrifugar el tubo a 2,000-2,500 rpm durante 1 minuto.
4. Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
5. Re suspender el sedimento con 2-3 ml de PAF, ayudndose con un aplicador de
madera y se completa el volumen con ms PAF, dejando un cm del tubo sin
llenar, se mezcla nuevamente con el aplicador de madera.
6. Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000-2,500 rpm durante 1 minuto.
7. Repetir los pasos 4-6, hasta que el sobrenadante se observe limpio, no ms de
dos veces.
8. Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
9. Re suspender el sedimento con 2-3 ml de Soln de sulfato de zinc, ayudndose
con un aplicador de madera y se completa el volumen con ms soln de sulfato
de zinc, dejando un cm del tubo sin llenar, se mezcla nuevamente con el
aplicador de madera.
10. Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000-2,500 rpm durante 2 minutos.
11. Sacar el tubo de la centrfuga con cuidado sin agitarlo y colocarlo en la gradilla.
12. Quemar el asa con el mechero y dejar enfriar.
13. Colocar el anillo del asa sobre la pelcula del sobrenadante y recolectar una
muestra.
14. Depositar la
muestra en una gota de lugol previamente colocada en el
portaobjetos, lavando el anillo del asa en el lugol.

15. Tomar otras dos asadas de la pelcula del sobrenadante y repetir el paso 14.
16. Mezclar con la punta del cubreobjetos y cubrir la preparacin con el mismo,
17. Observar la preparacin primero con el objetivo 10X y luego con ms cuidado
con el objetivo 40-45X.
18. La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la
superficie del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
19. Reportar lo observado
VII.- VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas
Adems de las propias del mtodo, al usar el PAF se obtienen las siguientes:
a. Se pueden recolectar 3 o ms muestras en el conservador, lo que permite
realizar un CPS seriado.
b. Al ser mayor la cantidad de heces, la muestra es ms representativa, es decir
hay mayor probabilidad de encontrar formas parasitarias, an cuando la
parasitosis sea leve o moderada.
c. Se hace un solo procesamiento de la muestra en lugar de 3, que redunda en un
ahorro de tiempo y econmico para el laboratorio.
d. Se facilita el manejo de la muestra ya que con el conservador se desinfecta y
desodoriza la misma.
e. Se puede procesar la muestra en otro da, cuando en el presente se tengan
demasiadas muestras.
f. La persona a analizar, no tiene que acudir al laboratorio en tres ocasiones, sobre
todo si el laboratorio se encuentra lejos de su domicilio, beneficindole en ahorro
de tiempo y dinero.
g. A nivel comunitario se pueden hacer muestreos a gran escala y luego procesar
las muestras de acuerdo al tiempo que se tenga.
h. Se puede realizar otro preparado de la muestra para su verificacin o
investigacin, en el caso de encontrarse con parsitos no comunes o no
frecuentes en el medio. E incluso se puede remitir la muestra a un centro de
investigacin.
Desventajas
En cuanto al uso del PAF, a pesar de que puede preservar trofozotos, durante la
realizacin del mtodo CPS, stos pueden deformarse o destruirse.
En cuanto al mtodo CPS, las mismas que para el mtodo sin uso del
conservador.
VIII.- PRECAUCIONES
a) Es muy importante advertirle a la persona a analizar que el contenido del PAF es
txico, por lo que no debe estar al alcance de los nios, ni ingerirse ni ponerlo en
contacto directo con las manos u otra parte del cuerpo. En caso contrario deben
tomarse las medidas que para cualquier sustancia txica.
b) Si se usan frascos de vidrio es importante protegerlos durante su transporte al
laboratorio para evitar que se rompan.
c) En cuanto al mtodo CPS, las mismas precauciones que para el mtodo sin uso
del conservador.
IX.- FORMA DE REPORTAR
Igual que con el mtodo sin el uso del conservador.
BIBLIOGRAFA
edicin.
parasitosis.
su compra)
7)
Parasitologa
mdica.
Edit.
Francisco
Mndez

edicin.

gastrointestinales.
control de calidad.
Instituto

Microbiologa y


Procedures for the
Pennsylvania 1997.
www.scielo.cl
www.angelfire.com
www.monografias.com
PRCTICA N 4
MTODO CPS DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN
DE SHEATHER

concentracin por flotacin.
Conocer las ventajas y utilidad de ste mtodo, en el diagnstico de coccidiosis.
INTRODUCCIN
Esta tcnica se ha empleado con buenos resultados en el rea veterinaria, y
recientemente se ha introducido en el laboratorio de parasitologa mdica, como un
apoyo importante en el diagnstico de las coccidiosis.
Debido al tamao pequeo y a la morfologa similar entre los ooquistes de
Cryptosporidium spp y Cyclospora cayetanensis, as como a la cantidad baja de los
mismos que se observan en los coproparasitoscpicos (CPS) de rutina, es que se ha
hecho necesario introducir mtodos CPS que hagan una mejor concentracin de los
ooquistes, as como el que sea ms fcil su recuperacin. Siendo el CPS de Sheather
el que ha demostrado tener dichas ventajas.
Los ooquistes as recuperados y concentrados posteriormente se someten a la tcnica
de tincin de Ziehl-Neelsen modificado, lo que a su vez permite identificar y diferenciar
a Cryptosporidium spp y a Cyclospora cayetanensis
FUNDAMENTO.
Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de
azcar que posee mayor densidad que ellos.
REQUERIMIENTOS.
- Tubos de ensayo 13 x 100.
- Portaobjetos std
- Cubreobjetos de 22X22 mm
- Aplicador.
- Solucin saturada de azcar con densidad de 1.18 Baum
- Asa de platino.
- Gradilla para tubos de ensayo.
- Suero fisiolgico
- Embudo de vidrio.
- Gasa o coladerita
PROCEDIMIENTO.
1.- Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiolgico.
2.-- Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del tubo de
ensayo y filtrar el material homogeneizado.
3.- Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1500 r.p.m. durante 2 a 5
minutos.
4.- Eliminar el sobrenadante, y agregar la solucin de azcar hasta 1 cm del borde del
tubo, agitar hasta disolver el sedimento..
5.- Centrifugar como en el paso anterior.
6.- Completar con la solucin de azcar hasta el borde y esperar de 2 a 5 minutos la
formacin de un menisco.
7.- Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco y
colocarla en portaobjetos.
8.-Agregar lugol, cubrir con un cubreobjetos y observar al microscopio.
9.-En el caso de observar coccidios, de la superficie del preparado, tomar con la asa
de platino o con una pinza curva, una muestra para preparar un frotis para teir por el
mtodo de Ziehl Neelsen modificado.
UTILIDAD
Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y huevos
de helmintos y se usa como mtodo preferencial en el diagnstico de los coccidios:
Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc.
FORMA DE REPORTAR
Informar la presencia de las formas evolutivas de los parsitos encontrados y su
cantidad, expresado en cruces
BIBLIOGRAFA
1.- Rina Girard de Kaminsky. Manual Parasitologa. Mtodos para
laboratorios de
atencin primaria de salud. Universidad nacional autnoma de Honduras (UNAH). 2.

Edicin 2003.
2.- Walter U. Basso, Lucila Venturini y Miguel A. Risso. Comparacin de tcnicas
parasitolgicas para el examen de heces de perro. Parasitol. Da v.22 n.1-2 Santiago
ene. 1998
Disponible en www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0716...script... 3.- De la Fe R. Pedro y col. Estudio de la prevalencia de las endoparasitosis que
afectan a los cerdos en el territorio de Cuba.
Disponible
en
www.cuencarural.com/.../estudio-de-la-prevalencia-de-las-
endoparasitosis-que-afectan-a-los-cerdos-en-el-territorio-de-cuba/ 4.- Salazar Schettino - Haro Arteaga - Cabrera Bravo. Diagnstico morfolgico de las
parasitosis.
Edit. Francisco Mndez Cervantes. 2 edicin o la ltima.
5.- Atas Antonio. Parasitologa mdica.

Edit. Mediterrneo. ltima edicin.
PRCTICA N 5
MTODO COPROPARASITOSCPICO DE
CONCENTRACIN POR SEDIMENTACIN DE MIFC

concentracin por sedimentacin que adems utiliza el conservador qumico MIF.
Conocer las ventajas, utilidad y desventajas de este mtodo.
INTRODUCCIN.
Esta tcnica coproparasitoscpica fue descrita en 1955 por Blagg y cols., y es
semejante en gran parte a la tcnica de formol ter (de Ritchie, 1948), slo que en
ste caso se utiliza el conservador MIF en lugar del formol, por lo que es uno de los
mtodos CPS de concentracin por sedimentacin ms utilizados y preferidos en
cualquier laboratorio de anlisis clnicos, debido a las ventajas que presenta.
La introduccin del uso de los conservadores o preservadores qumicos en el
trabajo rutinario de la parasitologa clnica, no slo contribuyen a prolongar el tiempo
crtico del anlisis de das a meses, sino que tambin ha permitido disear otras
tcnicas coproparasitoscpicas o modificarlas, logrando con ello la mejor recuperacin
e identificacin de las formas parasitarias.
El MIF es uno de los conservadores qumicos que en segundo lugar se emplea en el
trabajo rutinario de parasitologa (despus del PAF) porque presenta las siguientes
caractersticas:
Nombre comn
Componentes
Estadios de los
Tipo de muestra de
parsitos que
MIF
(merthiolate- Solucin
iodo-formol)
de
heces para la que se
conserva
recomienda
mer- Trofozoitos, quistes, Para todo tipo de
thiolate rojo, solucin ooquistes, huevos y consistencia

madre de yodo-yoduro larvas
al
5%
respectivamente,
cerina
heces
10%
gliagua
destilada
FUNDAMENTO DEL USO DE LOS CONSERVADORES QUMICOS

La mayora de estas sustancias son fijadoras, es decir que actan a nivel de los grupos
carboxilo y amino de las protenas de membranas de las formas parasitarias,
ocasionando una precipitacin o coagulacin de esas protenas y endureciendo dichas
membranas, por lo que se conserva la forma original del parsito (caracterstica clave
para su identificacin).
En el caso del MIF, el formol es el fijador.
FUNDAMENTO DEL MTODO MIFC

Este mtodo se basa en una diferencia de densidades entre la solucin que se emplea
y la de las formas parasitarias, es decir, se basa en la utilizacin del ter etlico anhidro
con densidad menor o igual a 1, que por ser menor a la densidad de las estructuras
parasitarias (1.05 1.15), ocasiona que stas precipiten o sedimenten y ste proceso
se agiliza con la centrifugacin.
Adems, tambin la acetona que contiene el merthiolate rojo contribuye a reducir la
densidad de toda la solucin.
El ter acta tambin como un saponificador, por lo que al eliminarse los corpsculos
de grasa se facilita la identificacin microscpica de las formas parasitarias.
Por otro lado la eosina que contiene el merthiolate y el lugol que contiene la solucin de
MIF, colorean las estructuras parasitarias, facilitando su identificacin. Aunado a la
accin del formol como fijador.
de

Muestra fecal recolectada adecuadamente
Frasco de vidrio de 100 ml
Abatelenguas
Tubos de ensaye cnicos, graduados, para centrfuga, de 15 ml
Tapn de caucho para el tubo cnico
Pipeta Pasteur de punta larga
Algodn
Embudo de 7.5 cm de dimetro
Coladerita de 3.5 a 5 cm de dimetro
Gradilla
Solucin de MIF
ter etlico anhidro (es importante sta caracterstica por la densidad)
Centrfuga
FORMA DE RECOLECTAR LA MUESTRA
Para la solucin MF (merthiolathe,formol, glicerina y agua destilada) debe usarse un

frasco con las siguientes caractersticas; que sea de vidrio, de boca ancha, con tapa
hermtica, y con capacidad de 100 150 ml. Se recomiendan los frascos Gerber
2da etapa.
Para la solucin madre de lugol debe usarse un frasco con las siguientes
caractersticas; que sea de vidrio y de color mbar, de boca ancha de preferencia,
con tapa hermtica, y con capacidad de 10 20 ml.
Se pueden usar tubos de ensaye para las soluciones, pero para el lugol es muy
importante proteger el tubo del sol, y hay que usar tapones adecuados para evitar el
derrame de las soluciones.
Las cantidades de las soluciones a usar dependen de la cantidad de la muestra

fecal y del nmero de muestras a recolectar, como se indica a continuacin:
Cantidad de heces
Soln MF
Mediana + 0.50 g
Grande + 1.00 g
4.7 ml
9.4 ml
Soln madre de lugol

0.30 ml
0.60 ml
Las soluciones MF y de lugol se mezclan inmediatamente antes de colocar la

muestra fecal (se recomienda lavar el frasco que contena el lugol, con la mezcla de
las dos soluciones, para evitar prdidas de lugol, por ser pequeo el volumen).
Se mezcla perfectamente con ayuda de un abatelengua, se tapa el frasco y se

guarda en un lugar seco y protegido del sol.
Si se van a recolectar ms de una muestra, stas se recolectan por separado, de la

misma manera que la primera. Rotulando cada una de ellas con el nmero
correspondiente.
Las muestras pueden recolectarse en 3 das sucesivos o en das alternados de

preferencia.
El frasco(s) guardado(s) en las condiciones indicadas arriba, permite que la muestra

con el MIF se conserve hasta por una semana, dependiendo de las estructuras
parasitarias que contenga y de la calidad del merthiolate.
Es importante dejar reposar la muestra mnimo 24, para que el MIF pueda llevar a
cabo su funcin, sobre la de colorear a las formas parasitarias.
Se recomienda no dejar pasar ms de dos das posterior a la colecta de la muestra,

para obtener mejores resultados al analizar la muestra.
1-
Mezclar bien la suspensin de MIF- materia fecal, con ayuda de un

abatelenguas.
2- Filtrar la suspensin a travs de la coladerita colocada en el embudo y stas a su

vez colocadas en el tubo de ensayo cnico, teniendo cuidado de no rebasar la
marca de 10 mililtros.
3- Si la cantidad de muestra no es suficiente para llegar a la marca de 10 ml, se
completa con soln de MIF (recin mezcladas las dos soluciones), y se
homogeniza con un aplicador de madera.
4- Se agregan 3 ml de ter etlico anhidro y se tapa el tubo con el tapn de caucho.
5- Agitar vigorosamente pero con cuidado durante un minuto, hay que sujetar el
tapn con un dedo para evitar que se bote el contenido del tubo.
6- Despus de agitar y sin quitar el tapn, se deja reposar el tubo durante 5 10
segundos, para evitar la expulsin del contenido del tubo.
7- Quitar el tapn con cuidado y centrifugar el tubo a 1500 2,000 rpm durante 2
minutos.
8- Sacar con cuidado el tubo de la centrfuga, sin agitar y colocarlo en una gradilla.
9- Observar la formacin de 4 capas en el tubo, de arriba hacia abajo: a) ter con
grasa, b) tapn de restos fecales, c) solucin de MIF y d) sedimento con las
formas parasitarias, si es que las hay.
10-Preparar un aplicador de madera, un hisopo grueso y un frasco para decantar
el sobrenadante.
11- Introducir el aplicador de madera pegado a la pared del tubo, hasta rebasar
aproximadamente 1 1.5
cm el tapn de restos fecales, y sin despegar el
aplicador de la pared del tubo, se gira hasta desprender todo el tapn fecal, se
retira con cuidado el aplicador de madera.
12-Decantar el sobrenadante en un frasco ex profeso, dejando slo el sedimento.
13-Inmediatamente antes de enderezar el tubo, con un hisopo grueso, se limpian las
paredes del tubo de manera circular, sin tocar el precipitado.
14- Colocar el tubo en una gradilla.
15-Tomar de la parte superior del sedimento una muestra pequea con ayuda de la
pipeta Pasteur.
16-Depositar la muestra en una gota de solucin MIF (recin mezcladas las dos
soluciones) previamente colocada en el portaobjetos.

17-Mezclar con la punta del cubreobjetos y cubrir la preparacin con el mismo,
18-Observar la preparacin primero con el objetivo 10X y luego con ms cuidado
con el objetivo 40 45X.
19-La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la
superficie del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
20-Reportar lo observado
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas
a) Es sencillo y fcil de realizar.
b) No se invierte mucho tiempo para su realizacin.
c) Hace una buena concentracin de las estructuras parasitarias en el fondo del
tubo cnico debido al proceso de sedimentacin centrifugacin.
d) Se recuperan estructuras parasitarias tales como; quistes de protozoarios, larvas
y huevecillos de helmintos.
e) Los huevos de helmintos como Taenia sp, Ascaris lumbricoides no fertilizados y
de trematodos como Fasciola hepatica y Paragonimus mexicanus, as como los
quistes de Balantidium coli, por ser pesados tienden a sedimentar, por lo que
ste mtodo es ideal para su recuperacin.
f) Algunos analistas con mucha experiencia en el manejo de sta tcnica han
reportado el hallazgo de trofozotos de protozoarios, sobre todo de Giardia
lamblia, debido al uso del conservador MIF, sin embargo, algunos investigadores
dicen que el ter y la centrifugacin pueden destruir los trofozotos.
g) Los componentes del MIF como el lugol y la eosina que contiene el merthiolate
rojo, colorean a las formas parasitarias en tonos amarillo, naranja, rosado-rojizo,
dependiendo de la madurez y tipo de la estructura parasitaria y del tiempo que
tenga sta en el conservador. Las estructuras no parasitarias tales como
clulas vegetales, fibras vegetales, etc., tienden a teirse de caf, por lo que se
pueden diferenciar muy bien de las parasitarias.
Desventajas
a. Es relativamente caro por requerir de varios reactivos, los tubos cnicos son
ms caros que los que generalmente se usan en laboratorio y no tan fcil de
conseguir en el mercado.
b. Por el tamao de los tubos y su dimetro, se requieren de centrfugas con
camisas adecuadas para ellos.
c. Algunos investigadores dicen que el ter y la centrifugacin pueden destruir los
trofozotos.
PRECAUCIONES
a) En el laboratorio las soluciones de MF y de lugol deben guardarse en frascos
obscuros, de vidrio y con tapa hermtica. En un lugar seco y protegido del sol.
b) Debe checarse la calidad del merthiolate rojo antes de usarlo para preparar el
conservador, la mejor marca es la de Eli Lilly y Co., S.A. de C.V. Mxico.
c) Debe manejarse el ter con mucho cuidado de no ingerirlo, inhalarlo ni ponerlo
en contacto directo con la piel, recordar que es muy voltil, altamente inflamable,
irritante, y con efectos diversos sobre el sistema nerviosos central. Se
recomienda trabajar en un rea bien ventilada y alejada de mecheros.
d) Es muy importante advertirle a la persona a analizar que el contenido de las
soluciones MF y del lugol son txicos, sobre todo el lugol que puede quemar la
piel, por lo que no deben estar al alcance de los nios, ni ingerirse ni ponerlo en
contacto directo con las manos u otra parte del cuerpo. En caso contrario deben
tomarse las medidas que para cualquier sustancia txica.
e) Es importante indicarle a la persona a analizar cmo debe recolectar la muestra,
y el que debe proteger del sol a los frascos.
f) Si se usan frascos de vidrio es importante protegerlos durante su transporte al
laboratorio para evitar que se rompan.
g) El material biolgico con el que se trabaja, es potencialmente infectante, por lo
que se recomienda utilizar guantes, cubreboca y abundante detergente para el
lavado de manos, material y rea de trabajo (en ste caso usar desinfectantes
como el benzal).
FORMA DE REPORTAR.


CUALITATIVOEN UN CAMPO OBSERVADO A 40X (seco fuerte) EN EL
MICROSCOPIO
N DE CRUCES
X
XX
XXX
XXXX
N DE PARSITOS POR
CAMPO
05
5 10
10 20
Ms de 20
INTERPRETACIN
Escaso
Moderado
Abundante
Muy abundante
BIBLIOGRAFA
edicin.
parasitosis.
su compra)

7)
Parasitologa
mdica.
Edit.
Francisco
Mndez

edicin.

gastrointestinales.
control de calidad.
Instituto

Microbiologa y


Procedures for the
Pennsylvania 1997.
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www.monografias.com
PRACTICA No. 6
AMIBA EN FRESCO
OBJETIVOS: Conocer el mtodo de laboratorio para la toma de muestra en el estudio
de la amiba en fresco.
Realizar la bsqueda de trofozoitos y quistes de amibas.
INTRODUCCION
El diagnstico de la amibiasis se realiza demostrando la presencia de trofozoitos o
quistes de Entamoeba histolytica. En el caso de amibiasis intestinal aguda, se debern
buscar a los trofozoitos en una serie de al menos tres muestras sucesivas de materia
fecal, las muestras sern obtenidas de evacuaciones recientemente emitidas (frescas) o
mediante examen de toma de muestra directa, sin administrar purgantes y debern ser
observadas de inmediato sin haberlas sometido a cambios bruscos de temperatura,
porque es posible que se lisen los trofozoitos y ya no se observe nada (soportan hasta
5 % de presin parcial de oxgeno). Cuando se trata de lactantes, no es conveniente
obtener la muestra del paal, porque con frecuencia ya se habrn destruido los
trofozoitos.
Un paciente infantil
1 par de guantes
Materia fecal recin emitida o recolectada directamente del intestino.
Portaobjetos de 7.5X2.5 cm 7.5X5 cm
Cubreobjetos de 22X22 mm, #1 #2
Sonda de alimentacin nasogstrica K 30 del No 7.
Jeringa de 10 ml
Solucin salina fisiolgica (0.85%)
AMA (azul de metileno)
Marcador
Microscopio
Tubo de 13 x 100
Contenedor con solucin desinfectante (Cloro al 5%) para descartar material
Preparacin de reactivos
Solucin salina fisiolgica
Cloruro de sodio.. 0.85 g
Agua destilada. 100 ml
Mezclar hasta disolucin completa de los cristales. Guardar en frasco rotulado. Para
uso diario mantener en frasco de gotero rotulado.
Tincin de Lugol fuerte (parasitolgico).
Iodo metlico..
1 parte
Ioduro de potasio
2 partes
Agua destilada
30 partes
Debe prepararse semanalmente.

Iodo
1g
Ioduro de potasio.
10 g
Agua destilada.
100 ml
Tincin de azul de metileno amortiguado (AMA)

La tincin de (AMA) es una tcnica rpida que se utiliza en preparaciones hmedas,
cuando se sospecha la existencia de trofozotos en las preparaciones con solucin
salina, los cuales han perdido su movilidad y tienden a redondearse haciendo difcil su
identificacin.
Solucin A (solucin de cido actico)

1
cido actico glacial
Agua destilada
1.2 mL
98.8 Ml
Preparacin
Depositar el agua destilada en un matraz, aadir el cido actico y mezclar guardar
bien tapado. Esta solucin es estable durante un mes
Solucin B (solucin de acetato sdico)

1
Acetato sdico (CH3C00Na)

Si se usa acetato sdico cristalino (CH3C00Na.3H 20)
Agua destilada
1.6 g.
2.6 g.
100 mL
Preparacin
Disolver el acetato sdico en 100 mL de agua destilada, mezclar y guardar en frasco
bien tapado. Esta solucin es estable durante 6 meses
Solucin de trabajo para la tincin

1
Solucin A
46.3 mL
Solucin B
3.7 mL
Colorante azul de metileno
0.5 g.
Agua destilada
50.0 mL
Preparacin
Colocar los 50 mL de agua destilada en un matraz y aadir las soluciones A y B mezclar
perfectamente, posteriormente agregar el azul de metileno y agitar hasta que se
disuelva. Guardar en frasco mbar.
Esta solucin es estable indefinidamente, si se sedimenta un poco el colorante se

recomienda filtrar la solucin.
1.- Se llena una jeringa de 10 ml con SSI, a la jeringa se le conecta una sonda de
alimentacin nasogstrica K 30.
2.- Se purga la songa con la solucin salina
3.- Se llena nuevamente la jeringa
4.- Se pide al paciente, o en su caso a la mam que coloque al infante en posicin
supina (boca abajo) se le introducen unos 5 10 cm del extremo libre de la sonda por el
recto y se le inyecta suavemente la solucin contenida en la jeringa.
5.- Si el paciente est muy deshidratado, se vuelve a llenar la jeringa con otros 10 ml de
SSI y se le aplica al paciente.
6.- Una vez que se ha vertido toda la SSI se deja reposar al paciente sin sacarle la
sonda por unos 3 4 minutos, con la finalidad de que la SSI entre en contacto con la
ltima porcin del intestino.
7.- Transcurrido el tiempo se aspira la SSI que ha estado en contacto con el intestino a
travs de la sonda, rotando un poco la sonda para evitar que los orificios de la sonda
entren en contacto con las paredes del intestino y se tape la sonda y evite la succin de
la SSI.
8.- Si no se aspira liquido, retirar la jeringa de la sonda (sin retirar la sonda del recto)
9.- Llenar nuevamente la jeringa y se vuelve colocar en la sonda
10 -Inyectar el agua
11.- Aspirar el lquido, que vendr con la materia fecal
12.- Ya que se hayan succionado unos 3 a 5 ml de SSI se retira la sonda poco a poco,
luego una vez afuera del ano se absorbe aire de manera que todo el lquido contenido
en la sonda pase a la jeringa.
13.- Una vez que est llena la jeringa con la solucin con materia fecal, depositar sta
solucin en el tubo de 13x100.
14.- Pasar este tubo a bao mara a 37 oC.
15.- Se colocan 2 gotas en un portaobjetos, una de las cuales se observa directamente
y a la otra gota con AMA.
Procedimiento de tincin y preparacin de la muestra.

1. Colocar una gota de colorante de azul de metileno (AMA) y otra de solucin
salina sobre un portaobjetos
2. Con una pipeta pasteur
colocar aproximadamente 50 L. de la muestra
problema.
3. Agregar otra gota de solucin salina al 0.85% y homogeneizar.
4. Cubrir la preparacin con cubreobjetos
5. Dejar reposar la preparacin durante 10 m minutos para el AMA y 1 minuto para
la SSI
6. Observar al microscopio con objetivo de 10 a 40X
Medidas de bioseguridad.
- Las mencionadas en el reglamento del laboratorio.
- Todo el material de vidrio (portas, tubos, pipetas, etc.,) que haya estado en contacto
con las muestras biolgicas deber ser colocado en el contenedor con cloro al 5%, y
deber permanecer ah mnimo 10 minutos antes de su lavado convencional.
Interpretacin:
Las muestras obtenidas debern ser observadas de inmediato. Buscar los trofozoitos,
stos son mviles. La identificacin se realiza diferenciando a los trofozoitos de los
macrfagos, los trofozoitos presentan pseudpodos hilinos, son ms grandes (20 30
micromtros) que los macrfagos (12 14 micrmetros).
Formato de reporte:
Nombre de la determinacin realizada.
Resultado de cada determinacin y su valor de referencia.
Limites biolgicos de referencia

Negativo a la presencia de formas parasitarias.
BIBLIOGRAFA

edicin.
parasitosis.
su compra)
7)
Parasitologa
mdica.
Edit.
Francisco
Mndez

edicin.
10) De Technical Report Series No. 255, 1963. World Health Organization y de Ash y
Orihel, 1997.

gastrointestinales.
control de calidad.
Instituto

Microbiologa y


Procedures for the
Pennsylvania 1997.
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PRCTICA N 7
OBSERVACIN DE PROTOZOARIOS DE TUBO DIGESTIVO Y
VAS GENITOURINARIAS
OBJETIVOS
Aprender a realizar la bsqueda e identificacin de protozoarios de tubo digestivo y vas
genitourinarias ms frecuentes en nuestro medio.
Conocer las caractersticas morfolgicas de algunas especies de protozoarios de tubo
digestivo y de vas genitourinarias, de los grupos de los sarcodinos, flagelados, ciliados
y coccidios en sus diferentes etapas de desarrollo; trofozotos, quistes u ooquistes.
Conocer la importancia y las ventajas del uso de algunas tcnicas de tincin
permanente, as como de cortes histolgicos
y los coproparasitoscpicos, en el
diagnstico de las protozoosis.
INTRODUCCIN
Los protozoarios fueron descubiertos por Leeuwenhoek en el ao 1674 conjuntamente
con la invencin del microscopio, y a la fecha se reconocen cerca de 50 000 especies
de protozoarios. Aproximadamente 60 especies son parsitas del humano y cerca de 15
son comensales.
Concepto de protozoario: el protozoario es un organismo unicelular, eucaritico y
hetertrofo, capaz de llevar a cabo por si solo sus funciones vitales de reproduccin,
nutricin respiracin, excrecin y movimiento.
Los protozoarios de importancia mdica presentan un tamao microscpico que oscila
entre 2 a 200 . Su forma es diversa; esfricos, ameboideos, alargados, piriformes, etc.
Presentan ncleo(s), diversos orgnulos y citoesqueleto. Su reproduccin puede ser
asexual o sexual, o de los dos tipos, y puede ser sencilla (divisin binaria) o compleja
(esquizogonia, gametogonia, esporogonia).
Se pueden localizar prcticamente en cualquier parte de nuestro organismo, y producir

cuadros clnicos diversos con sintomatologa poco aparente, o en otros casos las
lesiones pueden ser graves, deformantes e incluso mortales.
Por ejemplo la amibiasis es la tercera enfermedad parasitaria ms importante del
mundo y su agente etiolgico Entamoeba histolytica, causa 40 000 100 000 muertes
por ao por complicaciones.
La giardiosis se calcula que afecta a 16 millones (15%) de personas en las zonas
rurales de Amrica Latina, y su agente etiolgico Giardia lamblia, ha sido identificado
como uno de los principales responsables de episodios diarreicos en guarderas y
asilos.
Los protozoarios se pueden clasificar desde diversos puntos de vista, adems de la
clasificacin taxonmica (reino, phylum, orden, familia, gnero y especie), en:
Clasificacin por rganos de locomocin:
a) ciliados
b) flagelados
c) sarcodinos
d) esporozoarios
e) microsporidios.
Por su microhabitat o localizacin en el hospedero, se clasifican en:
a) protozoarios de tubo digestivo o intestinal
b) protozoarios tisulares
c) protozoarios sanguneos
d) protozoarios de otras localizaciones; genitourinarias, vas respiratorias y bucales.
Por su efecto en el hospedero los protozoarios pueden ser:
a) comensales: no producen enfermedad, pero no deben estar en el humano.
b) parsitos: producen enfermedad.
Caractersticas generales de los protozoarios de acuerdo a la clasificacin por

rganos de locomocin:
Especies
Grupo
rganos de
Tipo de
locomocin
reproduccin
parsitas
para el
Otras caractersticas
Estadios que
presentan
humano
Algunas
Sarcodinos
(amibas)
Otras son
Seudpodos
Fisin binaria
comensales y
otras de vida
libre
Ciliados
Cilios
Conjugacin
Fisin binaria
Slo una
Membrana celular fina, pueden

presentar diferenciacin del
citoplasma en ecto y endoplasma,
Trofozotos
algunas carecen de mitocondrias.
Quistes
Las caractersticas nucleares son

taxonmicas.
Presentan; dos ncleos;
citostoma, citoprocto, as como
vacuolas contrctiles.
Trofozotos
Quistes
Trofozotos
Endodiogenia
Esporozoarios
Esporognica
Esquizogonia
Aphycomplexa
Todas las que
No presentan
*Microsporidios
Flagelos
Flagelados
Membrana
ondulante
Generalmente son intracelulares
Quistes
Presentan una estructura
Ooquistes
caracterstica llamada complejo
Esporozotos
apical, con capacidad para
Gametocitos
penetrar clulas hospederas.
Esquizontes
lo infectan
Merozotos
*Microsporidios:
*Organismos primitivos.
Fisin binaria o
Intracelulares obligados.
mltiple.
El esporoplasma es inoculado
Esporas
Produccin de
directamente en la clula
Esporoplasma
esporas.
hospedera por el tubo polar.

Algunos presentan axostilo
Trofozotos
(rudimento de esqueleto).
Quistes
Fisin binaria
longitudinal
Algunas.
Otras son
comensales
Otros presentan kinetoplasto
Amastigotes
(organelo formado a partir de
Promastigotes
mitocondrias modificadas), con
Epimastigotes
importancia taxonmica
Tripomastigotes
Clasificacin taxonmica de los protozoarios que afectan al humano
REINO
PROTISTA
Algunos gneros de importancia

mdica
Subreino
Protozoa
Phylum
Sarcomastigophora
Subphylum
Subphylum
Sarcodina
Mastigophora
Entamoeba, Naegleria, Acanthamoeba,

Balamuthia
Giardia, Leishmania, Trypanosoma,
Trichomonas, Dientamoeba
Cyclospora, Isospora, Sarcocystis,
Phylum
Apicomplexa
Plasmodium, Toxoplasma,
Cryptosporidium
Phylum
Phylum
Ciliophora
Microspora
Reino
Chromista
Subreino
Chromobiota
Subphylum
Opalinata
Balantidium
Enterocytozoon, Encephalitozoon,
Nosema, otros
Blastocystis
Fuente: Dra. Teresa Uribarren Berrueta. Protozoos. Modificacin a Clasificacin taxonmica. UNAM
REQUERIMIENTOS.
1.- Microscopio ptico compuesto
2.- Coleccin de laminillas con los protozoarios de inters
3.- Papel seda para microscopa
4.- Solucin de alcohol etlico del 96 xilol en volumen 1:1
5.- Aceite de inmersin
6.- Papel sanitario o un trozo de tela de algodn de 15 X 15 cm de lado, para la limpieza

de las laminillas.
DESARROLLO DE LA PRCTICA.
1.- Coloque en el microscopio con mucho cuidado cada una de las laminillas que le
proporcione su maestra(o), recordando los pasos a seguir para el enfoque.
2.- Recuerde que aunque vaya a observar con el objetivo de inmersin, primero debe
enfocar con el objetivo de 10X, luego con el de 40X y luego con el de 100X.
3.- Con el apoyo de algn esquema o atlas, realice las observaciones de la siguiente
manera:
4.- Observe de cada protozoario; el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los
orgnulos que pueda identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del
objetivo con que est observando).
5.- Compare las caractersticas entre las especies de amibas observadas: Entamoeba
histolytica, Entamoeba coli, Endolimax nana y/o Iodamoeba butschlii.
6.- Compare las caractersticas entre las especies de flagelados observados: Giardia
lamblia, Trichomonas vaginalis,Chilomastix mesnili y/o Enteromonas hominis.
7.- Compare las caractersticas entre las especies de coccidias observadas:
Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayetanensis y/o Isospora belli.
8.- Observe el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los orgnulos que pueda
identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del objetivo con que est
observando), de los siguientes protozoarios; Blastocystis hominis y Balantidium coli.
9- Anote el estadio (forma, fase o etapa) del protozoario observado, as como el

mtodo, material biolgico y tcnica de tincin, que se emplearon para obtener cada
laminilla.
10.- Reporte las observaciones de acuerdo al formato que le indique su maestro(a).
IV.- BIBLIOGRAFA
1-Atas Antonio. Parasitologa mdica.Edit. Mediterrneo. Segunda reimpresin.
2-Tay-Lara-Velasco-Gutirrez. Parasitologa mdica. Edit. Francisco Mndez Cervantes.
ltima edicin
3-Uribarren Berrueta Teresa. Protozoos. Departamento de Microbiologa y Parasitologa,
Facultad de Medicina, UNAM. Disponible en www.facmed.unam.mx
4-Biagi Francisco. Enfermedades parasitarias Edit. Manual Moderno. ltima edicin.
5-Rodrguez Prez Elba. Atlas de parasitologa mdica. Edit. Mc Graw Hill.
6- Zaman Viqar. Atlas de Parasitologa Mdica. Edit. Mdica panamericana. ltima
edicin.
PRCTICA N 8
OBSERVACIN DE PROTOZOARIOS TISULARES
OBJETIVOS
Aprender a realizar la bsqueda e identificacin de protozoarios tisulares comunes en
nuestro medio.
Conocer las caractersticas morfolgicas de algunas especies de protozoarios tisulares
de los grupos de; los flagelados y de los esporozoarios en sus diferentes etapas de
desarrollo.
Conocer la importancia y las ventajas del uso de algunos mtodos de diagnstico para
protozoarios sanguneos y de otros tejidos, tales como; frotes y tincin, hemocultivo
corte histolgico e impronta.
INTRODUCCIN
Continuando con la introduccin de la prctica anterior, otro grupo de protozoarios de
inters mdico son los flagelados y los esporozoarios de localizacin en sangre y otros
tejidos.
Dentro de la familia Tripanosomatidae existen dos gneros importantes, el gnero
Trypanosoma, con varias especies, y el gnero Leishmania que incluye muchas
especies.
Los ciclos vitales de los protozoarios de ambos gneros, involucran dos hospederos,
uno vertebrado que puede ser el humano, y uno invertebrado que es un artrpodo, que
a la vez es el vector o transmisor de los protozoarios. Por lo que durante el ciclo
biolgico se pueden desarrollar cuatro estadios que reciben los siguientes nombres;
amastigote, promastigote, epimastigote y tripomastigote.
En el caso del gnero Leishmania, slo dos etapas se reconocen, el amastigote y el
promastigote.
Las especies de Leishmania causan diferentes enfermedades llamadas Leishmaniosis,

ya sea a nivel cutneo, mucocutneo o visceral, que pueden ser incapacitantes y
mutilantes.
Las especies de Trypanosoma tambin causan diferentes enfermedades; Trypanosoma
cruzi causa la enfermedad de Chagas; Trypanosoma gambiense y Trypanosoma
rhodesiense causan la enfermedad del sueo, ambas llegan a ser mortales.
Dentro del grupo de los esporozoarios tisulares, se encuentran los gneros Plasmodium
y Toxoplasma.
En el caso del gnero Plasmodium, existen muchas especies, pero slo cuatro se
reconocen como importantes para el humano; Plasmodium vivax, Plasmodium ovale,
Plasmodium malarie y Plasmodium falciparum, todos ellos son los causantes de la
enfermedad llamada paludismo o malaria, que puede llegar a ser mortal dependiendo
de la especie involucrada.
El ciclo vital de los plasmodios involucra dos hospederos; un artrpodo, que es el
hospedero definitivo y a la vez el vector del protozoario, y un hospedero definitivo que
es el humano. Durante el ciclo biolgico se desarrollan muchos estadios, siendo ms
importantes los que se forman dentro de los eritrocitos humanos; trofozotos,
esquizontes y gametocitos.
En el caso del gnero Toxoplasma, slo se conoce una especie que afecta al humano,
Toxoplasma gondii, que causa la enfermedad llamada toxoplasmosis con dos
modalidades, la adquirida y la congnita, siendo ms relevante la segunda porque se
pueden presentar abortos o malformaciones congnitas.
El ciclo de ste protozoario involucra tambin dos hospederos; un felino, que es el
hospedero definitivo y el hombre u otro animal, que es el hospedero intermediario.
Durante el ciclo se forman varias etapas, de las cuales dos se pueden identificar en el
humano; el trofozoto y el quiste.
El diagnstico por el laboratorio de las enfermedades mencionadas anteriormente no es
fcil por diversas razones; la ubicacin del parsito es intracelular, las enfermedades se
presentan en etapas, y los parsitos cambian de forma y a veces de lugar en el
hospedero, durante esas etapas, y la toma de muestra biolgica representa un riesgo
de infeccin para el que la realiza.
REQUERIMIENTOS.
1-Microscopio ptico compuesto
2-Coleccin de laminillas con los protozoarios de inters
3-Papel seda para microscopa
4-Solucn de alcohol etlico del 96 xilol en volumen 1:1
5-Aceite de inmersin
5-Papel sanitario o un trozo de tela de algodn de 15 X 15 cm de lado, para la limpieza
de las laminillas.
DESARROLLO DE LA PRCTICA.
1.- Coloque en el microscopio con mucho cuidado cada una de las laminillas que le
proporcione su maestra(o), recordando los pasos a seguir para el enfoque.
2.- Recuerde que aunque vaya a observar con el objetivo de inmersin, primero debe
enfocar con el objetivo de 10X, luego con el de 40X y luego con el de 100X.
3.- Con el apoyo de algn esquema o atlas, realice las observaciones de la siguiente
manera:
4.- Observe de cada protozoario; el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los
orgnulos que pueda identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del
objetivo con que est observando).
5.- Compare las caractersticas entre las especies de Leishmania observadas:
Leishmania donovani y Leishmania mexicana.
6.- Compare las caractersticas entre las especies de Plasmodium observadas:
Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum y Plasmodium malarie.
7.- Observe el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los orgnulos que pueda
identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del objetivo con que est
observando), de los siguientes protozoarios; Trypanosoma cruzi y Toxoplasma gondii.
8- Anote el estadio (forma, fase o etapa) del protozoario observado, as como el
mtodo, material biolgico y tcnica de tincin, que se emplearon para obtener cada
laminilla.
9.- Reporte las observaciones de acuerdo al formato que le indique su maestro(a).
BIBLIOGRAFA
1.- Atas Antonio. Parasitologa mdica.Edit. Mediterrneo. Segunda reimpresin.
2.-
Parasitologa
mdica.
Edit.
Francisco
Mndez

3.-
Recursos
en
Parasitologa.
Trypanosomosis,
Leishmaniosis,
Paludismo
Toxoplasmosis. Departamento de Microbiologa y Parasitologa, Facultad de Medicina,

UNAM. Disponible en www.facmed.unam.mx
4.- Becerril Flores Romero Cabello. Parasitologa mdica, de las molculas a la
5.- Rodrguez Prez Elba. Atlas de parasitologa mdica. Edit. Mc Graw Hill.
6.- Zaman Viqar. Atlas de Parasitologa Mdica. Edit. Mdica panamericana. ltima
edicin.
7.- Lpez Pez Myriam Consuelo. Atlas de parasitologa. Edit. Manual Moderno.
Primera edicin.
PRCTICA N 9
REALIZACIN DE TCNICAS DE TINCIN, CULTIVOS Y
MTODOS INMUNOLGICOS.
Se incluye a las tcnicas de Tricrmico de Gomori, Ziehl-Neelsen
modificado y
Giemsa.
De cultivos, se incluye a los descritos para Trichomonas vaginalis, amibas de vida libre,
Trypanosoma cruzi.
De los inmunolgicos, se incluye a los descritos para amibiasis, toxoplasmosis,
enfermedad de chagas.
MTODOS DE COLORACIN PARA PROTOZOARIOS

MTODO DE ZIEHL-NEELSEN (MODIFICADO PARA OBSERVACIN DE
COCCIDIOS: CRYPTOSPORIDIUM Y OTROS)
FUNDAMENTO.
Se basa en el comportamiento cido resistente de la cubierta de estos parsitos, los
cuales se tien de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul, dependiendo del
colorante de contraste usado.
REQUERIMENTOS
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas cubreobjetos.
- Soporte de varillas de vidrio para coloracin de lminas portaobjeto.
- Estiletes o pinzas punta curva.
- Fuscina fenicada
- Verde de malaquita o azul de metileno acuoso
- Metanol.
- Hidrxido de sodio al 4%.
- Alcohol cido
PROCEDIMIENTO.
- Colocar las lminas portaobjetos sobre el soporte de las varillas de vidrio.
- Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de heces en la lmina portaobjeto y dejar
secar.
- Fijar la lmina con alcohol metlico de 2 a 5 minutos y dejar secar.
- Agregar hidrxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el exceso y
lavar con agua.
- Cubrir la lmina con la fucsina fenicada (previa agitacin del frasco) por 5 minutos,
diluida previamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2 mL de agua).
- Lavar suavemente la lmina portaobjeto con agua corriente.
- Decolorar con alcohol cido, cubriendo el portaobjeto por unos segundos hasta
quitar el colorante.
- Lavar suavemente el portaobjeto con agua.
- Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1
1,4% durante 5 minutos, diluidas previamente al tercio.
- Lavar la lmina suavemente con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente.
- Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount, usar una laminilla
cubreobjeto y observar el microscopio.
OBSERVACIN.
Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora aparecen de un color rojo
fucsia sobre un fondo verdoso (con verde de malaquita) o azul (con azul de metileno).
En algunos casos, no se colorean bien, pero la refringencia caracterstica permite
diferenciarlos.
RESULTADO.
Informar los estadios evolutivos de los parsitos encontrados
COLORACIN GRAM Y COLORACIN TRICRMICA (PARA

MICROSPORIDIOS).
FUNDAMENTO.
Se basa en la identificacin de esporas de Enterocytozoon, Encephalitozoon, etc. por la
combinacin de las coloraciones Gram y tricrmica.
REQUERIMENTOS
- Colorante chromotrope
- Coloracin Gram
- Pinza o estilete punta curva.
- Alcoholes 85% y 95% y xilol.
- Mechero de alcohol.
- Microscopio binocular.
- Placas petri 10 x 150 mm.
PROCEDIMIENTO.
- Preparar el set de placas petri 10 x 150 mm.
- Realizar un frotis fino en una lmina o laminilla y dejar secar.
- Fijar el frote pasndolo 3 veces por una llama, un segundo de tiempo por vez.
- Agregar el colorante cristal violeta y esperar 1 minuto.
- Enjuagar en agua corriente y eliminar totalmente el agua.
- Adicionar el yodo de Gram por 30 segundos, remover el exceso con el decolorante y

enjuagar con agua.
- Agregar el colorante chromotrope por 5 minutos de 50C a 55 C.
- Pasar por el decolorante (alcohol 90% y cido actico 1%) de 1 a 3 segundos.
- Pasar por alcohol 95% y por alcohol etlico absoluto por 1 minuto.
- Pasar un minuto por xilol buscando que la coloracin sea adecuada para visualizar el
parsito.
- Realizar el montaje y observar al microscopio.
OBSERVACIN.
Observar al microscopio a 10X y 40X. Para observar al microscopio a 100X, cubrir con
aceite de inmersin.
Se observan las esporas de Enterocytozoon, Encephalitozoon, Nosema, etc., que
aparecen de un color rosado o rojo tenue o fucsia sobre el fondo verde o azul.
RESULTADO.
Informar los parsitos encontrados
COLORACIN TRICHROME (GOMORI WHEATLEY).

FUNDAMENTO.
Permite colorear las estructuras internas de los protozoos para su caracterizacin. Esta
tcnica utiliza muestras de heces frescas, preservadas con PVA o fijadas con
Schaudinn. Es un mtodo rpido y de utilidad en el estudio de Entamoeba, Giardia,
Balantidium, Cyclospora y otros protozoarios.
REQUERIMENTOS
- Asa de platino.
- Estilete curvo o pinza curva.
- Agua destilada.
- Tintura de Yodo.
- Cytoseal o blsamo de Canad.
- Alcoholes 85%, 90% y 95% y absoluto.
- Xilol.
- Colorante chromotrope.
- Acido actico.
- Solucin Schaudinn.
- Frascos coplin o placas Petri.
PROCEDIMIENTO.
- Preparar un set de placas Petri 15 x 150 mm con los reactivos correspondientes,
sujetar la laminilla con el porta-laminillas y con el estilete o pinza curva hacer el frote
fino de la muestra sobre la laminilla.
- Fijar la muestra con solucin Schaudinn por 2 a 5 minutos.
- Pasar por alcohol 70% con 2 3 gotas de tintura de yodo.
- Pasar por un minuto por alcohol 70%.
- Pasar por el colorante chromotrope de 8 a 15 minutos.
- Pasar por alcohol 90% con cido actico al 1% de 10 a 15 segundos y ver tono de
coloracin.
- Pasar por alcohol 95% y alcohol absoluto durante 3 minutos.
- Pasar por xilol de 1 a 5 minutos. No debe verse opaco.
- Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount.
OBSERVACIN.
Observar con objetivo de inmersin 100X. El citoplasma de los parsitos se tien de
color verde y el ncleo de color rosado
RESULTADO.
Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo
ENSAYOS INMUNOENZIMATICOS (ELISA)

FUNDAMENTO.
El metodo de ELlSA debe este nombre a sus siglas en ingls: Enzime Linked
Immunosorbent Assay, utiliza como principio una reaccin antgeno-anticuerpo
especfica, que se hace evidente con el empleo de anti- inmnunoglobulinas acopladas a
una enzima (peroxidasa, fosfatasa alcalina). Este conjugado IgG-enzima reacciona de
manera especfica con su antgeno, sin perder sus caractersticas de reactividad
inmunolgica o enzimtica. La accin de la enzima sobre un sustrato genera productos
de reaccin coloridos, lo que permite la realizacin de pruebas cualitativas interpretadas
por la intensidad del color desarrollado y de pruebas cuantitativas utilizando un
colormetro o espectrofotmetro (lector de ELISA),
La tcnica de ELlSA tiene dos variantes:
1. Para determinacin de anticuerpos
2. Para captura de antgeno
En parasitologa la tcnica de ELlSA tiene gran aplicacin en el diagnstico, tanto en
parasitosis intestinales como extraintestinales.
1.
Determinacin de anticuerpos.-En algunas parasitosis es difcil demostrar

la presencia del parsito, pero podemos detectar la respuesta inmune del
paciente (anticuerpos) frente a la presencia del agente extrao como en el caso
de infecciones por Toxoplasma gondii, Taenia solium (fase larvaria-cisticerco),

Toxocara canis y Entamoeba histolytica. La prueba se realiza en muestras de
suero, leche, saliva, lgrimas, humor acuoso y LCR.
2. Captura de antgeno.- Molculas antignicas de parsitos presentes en
diversos productos biolgicos pueden ser identificadas con el empleo de
anticuerpos especficos. La tcnica que se utiliza para este fin es la captura de
antgeno en heces, coproantgeno, para el caso de infecciones intestinales por
Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum y Entamoeba histolytica.
A CONTINUACIN
LES MUESTRO ALGUNOS CUESTIONARIOS, DE LOS QUE
ACTUALMENTE INCLUYO EN MI MANUAL
CUESTIONARIOS
PARA
LAS
PRCTICAS
DE
LABORATORIO
DE
PARASITOLOGA I
PRCTICA No. 1.- EL MICROSCOPIO

1-Qu es un microscopio y cul es su utilidad en nuestra rea?
2-Qu es un microscopio compuesto?
3-Cmo se llama cada uno de los tres sistemas que constituyen al microscopio
compuesto y cul es la funcin de cada sistema?
4-Cules son las partes que constituyen a cada sistema?
5-Cul es la funcin de cada una de las partes mencionadas en la respuesta anterior?
6-Cules son los pasos a seguir para enfocar una muestra?
7-Por qu a los objetivos 10X y 40X se les llama objetivos seco dbil y seco fuerte?
8-Para que tipo de preparados o muestras se emplean los objetivos secos?
9-Por qu al objetivo de 100X se le llama objetivo de inmersin?
10-Para qu tipo de preparados o muestras se emplea el objetivo de inmersin?
11-Qu caracterstica o propiedad presenta el aceite de inmersin para su uso en
microscopa?
12-Cul es la importancia de la iluminacin Khller y cules son los pasos a seguir
para obtenerla?
13-Cul es el principio fsico u ptico del microscopio compuesto?
14-Cules son los cuidados del microscopio tanto para su uso como para su limpieza?
PRCTICA No. 2.- EXAMEN FSICO, ORGANOLPTICO O MACROSCPICO DE LA

MATERIA FECAL.
1- Qu es la materia fecal?
2- Qu elementos constituyen a la materia fecal?
3- Qu aspectos deben considerarse para la recoleccin y obtencin de las heces?
4- Desde el punto de vista parasitolgico, qu informacin nos proporciona el examen
fsico de las heces?
5- Cules son las caractersticas fsicas, organolpticas o macroscpicas normales de
las heces?
6- A qu se debe el color normal de la materia fecal ?
7-A qu se debe el olor normal de las heces?
8-Qu significa la presencia de sangre en la materia fecal?
9-Qu significa la presencia de moco en las heces?
10-A la observacin macroscpica de la materia fecal, qu parsitos (gnero y
especie) y qu estadios de los mismos, se pueden encontrar?
11-Con qu sustancias se pueden contaminar las heces si no son recolectadas
adecuadamente?
12-De qu manera pueden interferir en el examen fsico de las heces, las sustancias
mencionadas en la respuesta anterior?
FALTARA INCLUIR PREGUNTAS PARA EL EXAMEN QUMICO
PRCTICA No 3.- MTODO COPROPARASITOSCPICO DIRECTO

1-Etimolgicamente, qu significa el trmino coproparasitoscpico?
2-Qu es un mtodo coproparasitoscpico?
3-Por qu se le llama tambin CPS en fresco a ste mtodo?
4-Qu es la solucin salina isotnica? y por qu mantiene vivos a los trofozoitos?
5-Qu es la solucin de yodo o lugol parasitolgico? y por qu colorea a las formas

parasitarias?
6-Diga el concepto de trofozoito, quiste y ooquiste de los protozoarios.
7-Diga el concepto de huevo, larva y adulto de los helmintos.
8-Qu otras estructuras aparte de las formas parasitarias, tanto normales como
anormales se encuentran en las heces a nivel microscpico?
9-Cules son las ventajas y las desventajas de ste mtodo?
12- Cmo debe reportarse el resultado de un coproparasitoscpico?
PRCTICA No 4.- MTODO COPROPARASITOSCPICO DE FAUST
1-A qu tipo de CPS pertenece ste mtodo?
2-Qu finalidad tiene el hacer la suspensin de las heces?
3-Qu finalidad tiene el realizar el colado de la suspensin de las heces?
4-Cul es la finalidad de los lavados con agua de la materia fecal?
5-Para qu y por qu se utiliza la solucin de sulfato de zinc a densidad de 1.18
Baum?
6-Qu ventajas presenta ste mtodo con respecto a otros CPS, razones por las que
se utiliza de rutina en la mayora de los laboratorios clnicos?
7-Qu formas parasitarias se pueden recuperar con ste mtodo?
8-Qu desventajas presenta ste mtodo con respecto a otros CPS?
9-Actualmente, cmo se realiza el mtodo?
10-Qu es un conservador qumico?
11-Cules son los componentes del conservador PAF y cmo actan cada uno de
ellos en la materia fecal?
12-Qu ventajas nos proporciona ste conservador en el trabajo rutinario?
13-Qu formas parasitarias preserva el PAF?
PRCTICA No 6.- MTODO COPROPARASITOSCPICO PARA MUESTRAS

PRESERVADAS CON MIF (MIFC).
1-A qu tipo de mtodos CPS pertenece el MIFC?

2-Qu funcin desempea el ter etlico anhdro en este mtodo?
3-Qu funcin desempea el conservador MIF en este mtodo y cules son sus
componentes?
4-Qu formas parasitarias se pueden recuperar con este mtodo?
5-Qu ventajas y desventajas presenta este mtodo con respecto al CPS de Faust?
PRCTICA No
7.-
OBSERVACIN
DE
PROTOZOARIOS
INTESTINALES
CAVITARIOS
1-Describa la morfologa de los trofozotos y quistes de los siguientes protozoarios:
Entamoeba histolytica, Entamoeba coli y Balantidium coli .
2-Indique cul es el microhabitat en el hospedero humano, de cada uno de los
protozoarios anteriores.
3-Qu enfermedad producen cada uno de los protozoarios arriba mencionados?
4-De manera breve explique el ciclo vital de cada uno de los protozoarios anteriormente
mencionados.
5-Diga los mtodos de diagnstico directo que pueden utilizarse para la identificacin
de los protozoarios anteriores, as como la muestra biolgica y las etapas o formas
diagnsticas que se hallaran con cada uno de ellos.
6-Diga qu otras amibas intestinales pueden establecerse en el humano y describa la
morfologa de la etapa diagnstica de las mismas.
7-Cul es la diferencia entre un protozoario parsito y uno comensal?
7-Qu ventajas presentan el uso de las tcnicas de tincin permanente en la
identificacin de los protozoarios intestinales?
8-Diga qu tcnicas de tincin permanente existen para la identificacin de los
protozoarios anteriormente mencionados.
9-Clasifique a los protozoarios anteriores de acuerdo a sus rganos de locomocin.
1- Describa la morfologa del trofozoto de Trichomonas vaginalis.
2- Describa la morfologa del quiste y del trofozoto de Giardia lamblia.
3- Indique el microhabitat en el hospedero humano de cada uno de los parsitos
mencionados.
4- Qu enfermedad producen cada uno de los protozoarios arriba mencionados?
5- De manera breve explique el ciclo vital de cada uno de los protozoarios
anteriormente mencionados.
6- Diga los mtodos de diagnstico directo que pueden utilizarse para la identificacin
de los protozoarios anteriores, as como la muestra biolgica y las etapas o formas
7- Diga qu otros protozoarios flagelados intestinales y cavitarios pueden establecerse
en el humano y describa la morfologa de la etapa diagnstica de las mismas.
8- Diga qu tcnicas de tincin permanente existen para la identificacin de los
protozoarios anteriormente mencionados.
9- Cules son las caractersticas tintoriales de Giardia lamblia y de Trichomonas
vaginalis con las tcnicas de tincin mencionadas anteriormente?
PRCTICA No 8.- OBSERVACIN DEPROTOZOARIOS TISULARES

1-Describa la morfologa del tripomastigote, del epimastigote y del amastigote de
Trypanosoma cruzi.
2-Cul es el microhabitat de Trypanosoma cruzi en el hospedero humano?
3-De manera breve explique el ciclo vital de Trypanosoma cruzi.
4-Qu enfermedad produce Trypanosoma cruzi?
de Trypanosoma cruzi, as como la muestra biolgica y las etapas o formas
6-Qu es un nido de amastigotes?
7-Cules son las caractersticas tintoriales del tripomastigote en el frotis sanguneo
teido con Giemsa?
8-Describa las caractersticas morfolgicas del transmisor de este parsito y mencione
las etapas por las que pasa durante su ciclo vital.
1-Describa la morfologa del amastigote y del promastigote de Leishmania sp.
2-Cul es el microhabitat de ste parsito en el humano?

3-De manera breve explique el ciclo vital de Leishmania sp.
4-Qu tipo de Leishmaniasis se presentan en nuestro pas?
de las diferentes especies de Leishmania sp, as como la muestra biolgica y las etapas
o formas diagnsticas que se hallaran con cada uno de ellos.
6-Describa las caractersticas morfolgicas del transmisor de ste parsito.
1- Cules son las especies de Plasmodium sp que se presentan en nuestro pas?
2- De manera breve explique el ciclo vital de los parsitos del paludismo.
3- Cul es el microhabitat en el humano, de stos parsitos?
4- Describa la morfologa de las diferentes etapas de desarrollo que se presentan en el
ciclo eritroctico, de cada una de las especies arriba indicadas.
5- Diga los mtodos de diagnstico directo que pueden utilizarse para la identificacin
de las diferentes especies de Plasmodium sp, as como la muestra biolgica y las
etapas o formas diagnsticas que se hallaran con cada uno de ellos.
6- Cules son las caractersticas tintoriales de los Plasmodios en un frotis sanguneo
teido con Giemsa?
7- Cules son las caractersticas morfolgicas del transmisor de este parsito?

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BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA

LICENCIATURA EN QUMICO FARMACOBILOGO

AREA: ANLISIS CLNICOS

FECHA: MAYO 2009

Biologa celular y molecular, Anatoma e

Estructura y funcionamiento de; la clula,

CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE

HORAS TEORIA Y PRCTICA.

HORAS DE PRCTICA PROFESIONAL

MC Mara de Lourdes Martnez Moreno,

SINOPSIS DE LA REVISIN Y/O

MC Alma Delia Ramrez Guarneros, MC

PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

b. General: Comprender y aprender la terminologa especfica de la parasitologa, y

Aprender las generalidades del parasitismo.

Aprender la morfologa y el ciclo biolgico de los protozoarios de las

Comprender y relacionar la epidemiologa con la prevencin de las

Aprender y manejar las tcnicas de diagnstico de rutina, de las

Conocer otros mtodos de diagnstico y su clasificacin, de las

Aprender y comprender los elementos para obtener el control de calidad

Conocer las normas oficiales mexicanas relacionadas con las protozoosis

REGLAMENTO Y MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL

Siempre presentarse con bata blanca, incluso si en la sesin slo se llevan a

Cumplir con las actividades y o tareas solicitadas por el profesor.

Asistir puntualmente a las sesiones, slo tendr 10 minutos de tolerancia, una

Colocar fuera de las mesas de trabajo, mochilas, suteres, chamarras u otros

Traer el material biolgico o de otro tipo solicitado por el profesor.

Siempre traer guantes, cubreboca y perilla para las pipetas.

Manejar con mucho cuidado el material, las soluciones o reactivos.

Siempre pipetear las soluciones, con la perilla correspondiente y nunca con la

No desechar soluciones de colorantes, papeles, muestras biolgicas slidas, ni

No dejar pipetas contaminadas directamente sobre las mesas.

Colocar el material contaminado, as como las muestras fecales, en las bolsas o

2002, Proteccin ambiental-Salud ambiental- Residuos peligrosos biolgicos

infecciosos- Clasificacin y especificaciones de manejo.

indicado por el profesor.

Manejar y cuidar los microscopios de acuerdo a la informacin proporcionada al

Limpiar el aceite de inmersin a los objetivos del microscopio, de acuerdo a las

Al trmino de la prctica, dejar desconectados los microscopios, cubrir el

Al trmino de la prctica, dejar limpias y desinfectadas las mesas, libres de

Al concluir la prctica, entregar el material que emple segn las indicaciones

En caso de romper algn material, deber reponerlo a la brevedad posible, para

En caso de algn incidente o accidente, deber informarle a el profesor, para

Antes de retirarse del laboratorio, checar que no se le olvide algo, ya que el

Criterios para considerar un residuo como RPBI

En la Nueva clasificacin, los RPBIs son:

La disposicin general para el desecho de RPBIs en el laboratorio queda de la

Para que un material de curacin se considere como RPBIs, debe ser

Niveles de los Establecimientos Generadores

atencin mdica hasta

Unidades hospitalarias Unidades hospitalarias

a 200 muestras al da.

Unidades hospitalarias quen a la investigacin

con agentes biolgicoinfecciosos.

generen de 25 a 100 generen ms de 100

Perodo de almacenamiento temporal de los RPBIs en los establecimientos

espec- Deber cumplir con las Deber cumplir con las

ficos para los RPBIs* especificaciones esta- especificaciones estaen

ms blecidas en la NOM- blecidas en la NOM-

apropiado dentro de 087-SEMARNATsus instalaciones, de SSA1-2002,

obstruyan las vas de miento temporal.

Atribucin a la Secretaria de Salud. Corresponde a la secretaria de salud

PROGRAMA DE LA ASIGNATURA LABORATORIO DE