Cromatografa

Gaseosa

Cromatografa
en Columna

Fase
Mvil

lquido

Fase
Estacionaria

Gas
Slido
CGS

Liquido
CGL

Es un mtodo de separacin en el cual los componentes de una muestra

se distribuyen entre dos fases: 1 fase estacionaria con gran rea superficial
y otra fase movil (gas)
Los analtos se separan de acuerdo a la presin de vapor relativa
y la afinidad por la fase estacionaria a una dada temperatura.

CGL
Los analitos particionan (absorben) con la fase estacionaria lquida de acuerdo a la
solubilidad a una dada temperatura
CGS
Los analitos se adsorben en la fase estacionaria slida

Ventajas
Equipo de relativo bajo costo (US$20000)
- Anlisis rpidos
- Alta resolucin y sensibilidad
- Alta reproducibilidad
- Requiere bajas cantidades de muestra (g)

Desventajas
Limitadas a muestras de bajo PM y voltiles
- No viable para muestras termolbiles
- Se consume tiempo en la preparacin de derivados voltiles
- Tcnica generalmente destructiva

Esquema de un cromatogfo gaseoso

1) Fase Mvil-Gas
2) Controlador de Flujo
3) Sistema de Inyeccin

4) Fase estacionaria-columna
5) Zona de control de temperatura
6) Detector
7) Sistema de adquisicin de datos

1. Fase mvil: Gas Carrier

Detector

Gas

Conductividad Trmica

He o H2

- Ionizacin a la Llama (FID)

He o N2

- Captura Electrnica

N2 extremadamente seco

- Espectroscopa de Masa

He

Pureza:
- El oxgeno y el agua pueden degradar la fase estacionaria.
- Fases sensibles: Poliesters, poliglicoles y poliamidas
- Gas de pureza del 99.999%
- Agregado de filtros de agua y oxgeno

Sangrado: es la prdida de pequeos fragmentos de la fase estacionaria

como consecuencia de la degradacin de la misma.
Suelen ser fragmentos de masa 355, 281,207 y 73

2. Control de flujo
Esencial para la reproducibilidad y eficiencia del anlisis
- Manmetros externos
P1 = 2500 psi
P2 = 40-60 psi

-Control de presin interna: Control neumtico electrnico (EPC)

Presin de cabeza constante El flujo disminuye al aumentar la temperatura
Flujo constante La presin aumenta al aumentar la temperatura

Presiones de cabeza tpica (psi)

He a 20 cm/seg o H2 a 40 cm/seg
Largo

Dimetro interno de la columna (mm)

(m)

0.10

0.20

0.25

0.32

0.53

10

24.7

5.9

3.7

2.3

0.93

15

38.7

8.9

5.6

3.4

1.40

25

67.6

15.1

9.5

5.7

2.33

30

82.5

18.3

11.5

6.9

2.80

50

31.8

19.6

11.7

4.68

60

38.7

23.8

14.2

5.63

3. Sistema de inyeccin
- Split
- Splitless
- On-Column
- programmed-temperature vaporization (PVT)

-Split
V = 1 l ; Relacin de split 100:1

Ventajas
Separaciones con alta resolucin
Fcil para inyectar
Preserva la vida til de la columna evitando saturacin
Permite retener compuestos no voltiles
Desventajas
Limitacin para el anlisis de compuestos en bajas concentraciones (trazas)
Puede discriminar en la cantidad de analito que entra segn el peso molecular
No sirve para analitos termodegradables

-Splitless
V = 1 l ;
Entra aproximadamente el 95% de la muestra

Ventajas
Fcil para inyectar
Limitacin para el anlisis de compuestos en bajas concentraciones (trazas)
No hay discriminacin de analitos en la inyeccin
Desventajas
Anlisis con menor resolucin
Efectos de saturacin de la columna acortndose la vida til de la misma
No sirve para analitos termodegradables

Inyeccin de la muestra
- Lquido: Jeringa punta biselada
- Gas: Mtodo espacio-cabeza (Headpace)
Jeringa de gases

Loop de presin
Balance de presin

4. Columnas- Fases estacionarias

- Empacadas (<5% anlisis)
- Capilares

Parmetros crticos de columnas capilares

a) Longitud
b) Dimetro Interno
c) Grosor del film de la fase
d) Composicin de la fase
e) Velocidad de flujo
f) Lmite de temperatura

a) Longitud
Longitud (m)

Resolucin

Velocidad

60100

Excelente

Lenta

2530

Buena

Buena

515

Moderada

Rpida

Solucin de compromiso

L = 25-30m

b) Dimetro Interno
Dimetro (mm)

Resolucin

Capacidad

Practicidad

0.1

Muy buena

Regular

Regular

0.250.32

Buena

Buena

Buena

0.53

Regular

Muy buena

Muy buena

Solucin de compromiso
d = 0.25-0.32mm

c) Grosor del film (Fase)

Grosor (m)

Resolucin

Velocidad

Capacidad

0.10.25
15

Muy buena

Muy buena

Regular

Regular

Buena

Muy Buena

d = 0.18-0.32 0.18-0.25 m
d = 0.45-0.53 0.8-1.5 m

Relacin dimetro interno - grosor de film

Relacin de fase
= di / 4 df

A igual dimetro interno y mayor

grosor de film menor valor de
Cuanto menor sea el valor de
ms ser retenido un analito

Usos

< 100

Compuestos muy Voltiles y

de bajo PM

100400

Usada en general. Amplio

rango de compuestos

> 400

Compuestos de alto PM y
anlisis de trazas

 = 320

= 27

d) Fase estacionaria
Es el principal factor en trminos de separacin y selectividad

Existen tres tipos de fases:

- Lquidos que recubren el soporte slido (Non-bonded)
- Fases que estn unidas qumicamente al soporte (Bonded and crosslinked)
- Slidos adsorbentes (PLOT, CGS)

- Existen mas de 400 fases para CGL

- En la prctica para la mayora de las separaciones se necesitan no ms12

10

-Se evala la polaridad y selectividad de la columna

La polaridad est determinada por la estructura de la fase estacionaria

Indice de polaridad

18

Selectividad

19

La selectividad est dada por las interacciones analito-fase estacionaria

Grupo funcional

Fuerzas dispersivas

DipoloDipolo

Puente hidrgeno

Metil

Fuerte

No

No

Fenil

Fuerte

No a dbil

Dbil
Moderado

Cianopropil

Fuerte

Muy fuerte

Trifluoropropil

Fuerte

Moderada

Dbil

Polietilenglicol

Fuerte

Fuerte

Moderado

Fuerzas Dispersivas o de Van der Waals

Las separaciones ocurren bsicamente por la diferencia de punto de ebullicin

Cuando los puntos de ebullicin son similares se recurre a fases de mayor

polaridad para que existan interacciones entre los grupos del analito y de la fase
estacionaria

11

Interacciones Dipolo-Dipolo

Interacciones Puente Hidrgeno

12

100% dimetilpolisiloxano
No Polar
Fase unida qumicamente y entrecruzada
Temperatura mxima 360C
Nombres comerciales: DB-1, ZB-1, SPB-1

Usos
General. Compuestos con
diferente punto de ebullicin.
Aminas, hidrocarburos,
pesticidas, PBCs, fenoles,
fragancias, solventes,
combustibles.

5% fenil-95%dimetilpolisiloxano

No Polar
Fase unida qumicamente y
entrecruzada
Temperatura mxima 350C
Nombres comerciales: DB-5, ZB-5,
SPB-5
Usos
General. Compuestos con diferente
punto de ebullicin.
Semivoltiles, alcaloides,
FAMEs, pesticidas, herbicidas, combustibles.

13

Fenildimetilpolisiloxanos
Polar Intermedia
Fase unida qumicamente y entrecruzada
Temperatura mxima 350C
Nombres comerciales: DB-X, ZB-x, SPB-x
Usos: Alcoholes, drogas, pesticidas, herbicidas, fenoles, esteroides, antidepresivos.

fluropropilmetilpolisiloxanos:
Polaridad Intermedia
Fase unida qumicamente y entrecruzada
Temperatura mxima 320C
Nombres comerciales: DB-200, DB-210
35% trifluoropropil
-metilpolisiloxano
50% trifluoropropi
l-metilpolisiloxano

Usos:
drogas,
muestras ambientales,
solventes residuales,
cetonas, nitroaromticos

14

Cianopropilmetilpolisiloxanos:
Usos: Carbohidratos y esteres metlicos de cidos grasos (FAME).
14% cianopropilfenil-86% dimetilpolisiloxano
Nombre comercial SPB-1701, ZB-1701
Polaridad: media alta / Unida qumicamente
50% cianopropilfenil-50% dimetilpolisiloxano
Nombre comercial DB-225
Polaridad: media alta / Unida qumicamente
50% cianopropil-50% dimetilsiloxano
Nombre comercial DB-23
Polaridad: alta / Unida qumicamente
80% biscianopropil-20% cianopropilsiloxano
Nombre comercial: Sp-2330, Rtx-2330
Polaridad: alta / No unida qumicamente

Polietilenglicol

Polaridad alta
Fase unida qumicamente
y entrecruzada
Temperatura mxima 280C
Nombres comerciales: DB-wax,
supelcowax
Usos:
Alcoholes, aldehdos, aceites
esenciales, glicoles, fragancias,
aminas, FAMEs, cidos.

15

Fases quirales
Consisten en derivados de -, - y -ciclodextrinas
Usos: Separacin de enantimeros
10.5% de -ciclodextrina en DB-1701
Nombre comercial: Ciclodex B
No unida qumicamente
-ciclodextrina en 35% fenilmetilsiloxano
Nombre comercial HP-chiral
No unida qumicamente

16

Fases slidas (CGS)

Consejos sobre fase estacionaria

Si no existe informacin previa:
1) Comenzar con las fases menos polares ( -1; -5).
2) Dentro de las no polares elegir las que tengan mayor estabilidad trmica.
3) Al momento de elegir fases polares evaluar la posibilidad de formar puentes
hidrgenos.
4) Tenga en cuenta que el aumento de polaridad de la columna no implica una
mejora en la resolucin
5) Utilice columnas de 30 metros y dimetro interno de 0.25 o 0.32 mm
6) Las fases estacionarias slidas se utilizan para analizar gases
7) Con estas fases se debera cubrir la mayora de los anlisis:
100% dimetilpolisiloxano
5% fenil-95%dimetilpolisiloxano
14% cianopropilfenil-86% dimetilpolisiloxano
Polietilenglicol

17

5. Zonas de control de temperatura

- Inyectores:
- Muestras voltiles 150-200C
- Muestras con alto Peb 250-300C

- Detectores:
En general se utilizan unos 20 C por encima de la ultima
temperatura del programa de corrida

- Horno:
Dos modalidades: corrida isotrmica o con programa de
temperatura
Limite mximo dado por el lmite de la fase estacionaria
en la columna

- Condicin Isotrmica: Utilizable con analitos con una retencin semejante

Analitos con una retencin diferente

Programa de temperatura

18

- Programa de temperatura
Sin informacin previa se elije un programa con aumento de temperatura lineal
Tinicial = 10C por debajo del Peb del disolvente
Tfinal= Temperatura mxima de la columna. Se deja 30 minutos aproximadamente

El aumento de resolucin de los primeros analitos se puede mejorar al:

- Bajar la temperatura inicial
- Aumentar el tiempo a la temperatura inicial

19

El aumento de resolucin de los ltimos analitos se puede mejorar:

- Disminuyendo la rampa de temperatura

- Utilizando rampas mltiples

6. Detectores
Detector

Selectividad

Lmite de
deteccin

Conductividad
trmica (TCD)

Responde a cambios en la
conductividad en el gas carrier
(universal)

10-9g

Ionizacin a la
llama (FID)

Compuestos orgnicos

10-11g

Captura electrnica
(ECD)

Halgenos

10-12g

Termoinico (NPD)

Compuestos nitrogendos y
fosfordos

10-12g N

Espectrmetro de
masa/Cuadrupolo

MW 500-700

10-13g P
10-9g

(SCAN)

10-12g

(SIMS)

Impacto electrnico
Ionizacin Qumica

20

Las muestras
- Limitadas a muestras de bajo PM y voltiles
- Se consume tiempo en la preparacin de derivados voltiles

1. Reacciones de derivatizacin
-Sililacin
Acidos, Alcoholes, aminas, amidas, amino cidos, carbohidratos
-Acilacin
Alcoholes, aminas, amidas, amino cidos, carbohidratos
-Alquilacin
Acidos, alcoholes, aminas, amidas, carbohidratos

Grupo funcional

Mtodo

Derivado

Acidos

Sililacin

RCOOSi(CH3)3

Alquilacin

RCOOR

Sililacin

ROSi(CH3)3

Acilacin

ROC(O)R

Alquilacin

ROR

Sililacin

RNSi(CH3)3

Acilacin

RNSi(CH3)3

Alquilacin

RNR

Sililacin

RCONSi(CH3)3

Acilacin

RCONHC(O)R

Alquilacin

RCONHR

Alcoholes

Aminas

Amidas

21

2. Preparacin de la muestra
- Limpieza de la muestra
- Concentracin del analto

Procesos extractivos

22

Extraccion en fase slida (SPE)

Ventajas
- Se evitan grandes volmenes de solventes de extraccin.
- Se produce en el cartucho la concentracin del analito.
- Tratamientos selectivos segn la fase estacionaria
- Barato y verstil

23

Microextraccion en fase slida (SPME)

1 Etapa
Extraccin de la muestra

2 Etapa
Anlisis

Ventajas
- Se evitan grandes volmenes de solventes de extraccin.
- Se produce en el cartucho la concentracin del analito.
- Tratamientos rpidos y selectivos segn la fase estacionaria
- Barato ( 1 fibra hasta 50 anlisis) y verstil ( aplicable a CGL y HPLC)

- Fases ms utilizadas
Analito

Fibra

Gases y voltiles

Dimetilpolisiloxano

Aminas y nitroaromticos

Dimetilpolisiloxano / Divinilbenceno

Semivoltiles polares

Poliacrilato

Compuestos polares

Carbowax / Divinilbenceno

24

25

26