REVISTA CIENTIFICA, FCV-LUZ / Vol. IV, N? 3, 153-156, 1994 DETERMINACION DE LA DL50 DEL VENENO DE SERPIENTE Crotalus durissus cumanensis DEL ESTADO ZULIA, VENEZUELA Determination of LD50 of Crotalus durissus cumanensis snake venom of Zulia State, Venezuela RESUMEN Se calculé la dosis etal cincuenta (DL50) del veneno de serpientes Crotalus durissus_cumanensis_(cascabel) capturadas en el Estado Zulia, Venezuela, inoculando ratones albinos por via intraperitoneal Se evaluaron dosis ascendentes de veneno desde 4 hasta 14.8 ug por ratén, sometiéndolos a un periodo de observacién entre los 10 minutos y las 48 horas post-inoculacién. Se determiné que existe intima relacién entre la dosis de veneno y su efecto, siendo notable la sensbildad de los animales y la reproduccién del efecto. La DLS0 obtenida para este veneno crotélico fue de 7 ug por ratén cuyo peso vivo oscila entre 19 y 21g. Palabras claves: Veneno, Crotalus durissus cumanensis, cas- abel, DL50. ABSTRACT Fitty lethal dosis (LDS0) of the venom extracted from Crotalus durissus cumanensis (rattlesnake) captured in Zulia State, Venezuela was calculated, inoculating albino mice by it traperttoneal inyection. Doses from 4 to 14.8 pig per mice were evaluated for an observation lapse from 10 minutes to 48 hours after inoculation. It was determined a close relationship be- tween venom doses and its effects, being notorius the sensi vity of the animals and the reproduction of the effects. The ob- Recibido: 10/ 08/93. Aceplado: 22 / 07 / 94. Juan R. Montilla F Marfa V. Alvares de Montilla Tito R. Barros B. Gilberto Negrén G. Unidad de Investigaciones Ofidiolégicas Universidad del Zulia Facultad de Ciencias Veterinarias Maracaibo, Edo. Zulia, Venezuela tained LDS0 determined for this crotalic venom was of 7 11g per mice between 19 to 21 g of live wight. Keywords: Venom, Crotalus durissus rattlesnake, LO5O. cumanensis, INTRODUCCION En relacién al veneno Crotélico, algunas observaciones fueron realizadas por Kocholaty y cols. [6 y 7], que utlizaron ratones y las vias intravenosa e intraperitoneal para la inoculacién de venenos de Crotalus durissus durissus y Crotalus durissus terrificus, para ese momento concluyeron que la via intravenosa revela mejor accién del veneno que la via intraperitoneal, Por otro lado Bolaios [2] veriticé la toxicidad del veneno de Crotalus durissus durissus de América Central, ‘empleando también ratones y las mismas vias de inoculacién, observando que la via intraperitoneal evidencia mayor susceptibilidad del animal y del veneno inoculado. Becker y Glenn [1], Kocholaty y col. [7] y Bolafios [3] fue- ron los primeros en utilizar comparativamente las vias intrave- nosa e intraperitoneal en ratones, para la evaluacién de las ac tividades téxicas y enziméticas de los venenos ofidicos. Los dos itimos autores concluyeron que la via intravenosa era mas eficiente que la intraperitoneal en la determinacién de la toxicidad de los venenos estudiados. Algunos autores [10] comparan en ratones la eficiencia de las vias intraperitoneal e intravenosa en la determinacién de las actividades t6xicas de los venenos Crotalicos. Verifican va- 153DLS0 del veneno de Crotalus durissus cumanensis del Zulia, Venezuela / Montilla y col. TABLA | DETERMINAGION DE LA DL50 DE VENENO DE Crotalus durissus cumanensis NOGULADOS POR VIA INTRAPERITONEAL (0,2 mi), EN RATONES, Dosis de veneno en Tiempo de Observacién SUBEOE IR?! 10 min 30 min 60 min 24h 48h 40 os 016 6 06 ors 52 016 016 016 16 v6 68 016 16 016 46 4/6 88 016 ore 016 4/6 416 14 os 016 016 516 516 148 ors os 016 616 616 0/6 = No. de ratones muertos / No. de ratones inoculados lido el uso de ambas vias, revelando la intraperitoneal ser mas sensible. En este estudio titulamos la potencia del veneno de Cro- talus durissus cumanensis, mediante a determinacién de ta DL50, método recomendado por la O.M.S. [8] y que se define como la dosis que es capaz de matar el 50% de una poblacién en un tiempo dado. En vista de los pocos estudios al respecto realizados en Estado Zulia, nos propusimos determinar la DL5O del vene- no de Crotalus durissus cumanensis en ratones entre 19 y 21 4g. utiizando como via de inoculacién la intraperitoneal. MATERIALES Y METODOS Animales utilizados Ratones: Fueron utiizados 36 ratones albinos entre 19 y 21 g de peso vivo, sin distincién de sexo, provenientes del Bio- terio del Laboratorio de Diagndstico del Ministerio de Agricutu- ray Cria, Regién Zuliana. Serpientes: Se utiizaron 50 serpientes Crotalus duris- sus cumanensis, albergadas en el Bioterio de Serpientes de la Unidad de Investigaciones Ofidioligicas, procedentes de dife- rentes zonas geogréticas del Estado Zula, debidamente identi- ticadas y matenidas en jaulas individuales. Venenos Las muestras de veneno utiizadas fueron obtenidas de extracciones efectuadas manualmente, previa anoxia de la serpiente con C02, liofiizadas y almacenadas a -20°C [4]. ‘Solucién de Veneno La dilucién de veneno crotélico se prepard en solucién de Cloruro de Sodio al 0,85% conteniendo 10 mgr/ml del vene- 154 no. La solucién fue centritugada a 5000 rpm, por 20 minutos, a fin de eliminar eventuales impurezas [11]. Se distribuyé en ali- cuotas de 0,1 ml en viajes herméticamente tapados y manteni- dos a -20°C. Al momento de ser utilizadas las dosis fueron descongeladas y reconstituidas con 0,9 mide Cloruro de Sodio al 0,85% para preparar las diluciones. Las dosis de veneno Inoculadas en cada animal estaban siempre contenidas en 0,2 mi de solucién. Via de Inoculacién Se utllz6 sisteméticamente la via intraperitoneal. Cada dosis fue ensayada en lotes de 6 animales. La toxicidad del veneno fue determinada en términos de DLSO segtin el método de Spearman-Karbér [8]. ‘Tiempo de Observacién Los ratones inoculados fueron sometidos a la observa- clon de las reacciones a tiempos de 10, 30 y 60 minutos, y a las 24 y 48 horas. [10 y 11] RESULTADOS El andlisis de los datos obtenidos en la TABLA |, de- muestra la posibilidad del calculo de la DLS0 del veneno Crota- lico, a través del empleo de ratones, ya que la Inoculacién por via intraperitoneal de dosis escalonadas de veneno, presenta resuttados que guardan intima relacién entre el progreso de las mismas y sus efectos. Si se comparan nuestros resultados con los presentados por Silles Villarroel y cols. [11], se comprueba la existencia de concordancia con ellos, ya que reptiendo la DLO en dias dife- rentes y con la misma solucién de veneno por via intraperito- neal, se obtuvo resultados con satisfactoria sensibilidad y re-An en a TABLA I REPETICION DE LA DETERMINACION DE LA DL50 DEL VENENO DE Crotalus durissus cumanensis INOCULADO EN DIAS DIFERENTES CON UNA MISMA SOLUCION DE VENENO POR VIA INTRAPERITONEAL (0,2 ml) EN RATONES ENTRE 19 Y21 g DE PESO ono 2478 oot ous 0/6 = No. de ratones muertos / No. de ratones inoculados producibilidad, tal como se muestra en los resultados expues- tos en la TABLA Il Los resultados expuestos en las TABLAS | y Il, al igual como lo exponen Silles Vilartoel y cols [11], caracterizan as- pectos fundamentales en la importancia de la determinacién de la DLSO. Se destaca la ausencla de muertes, inmediatas antes de la primera hora de observacién, consecuente a posibles acci- dentes de inoculactén, TABLA |. Debe existir una regularidad en la oourrencia de esas muertes en funcién al progreso de las dosis inoculadas TA- BLA. Asi mismo se debe enfatizar la reproducibilidad del mé- todo, conforme puede ser verificado a través de los resultados de repetidos ensayos realizados, TABLA Il. La obtencién de los resultados nos permitié definir ta DLSO del veneno de Crotalus durissus cumanensis, como la cantidad de veneno que al ser inoculado intraperitonealmente fen ratones entre 19 y 21 g de peso vivo, provocs la muerte del '50% de los animales inoculados dentro de un perfodo de ob- servacién de 48 horas. La DL50 del veneno de las serpientes del género Crota- lus del Estado Zulia, es de 7 pg por ratén entre 19 y 21 g de peso vivo. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES La DLS0 del veneno de Crotalus durissus cumanensis puede ser determinada a través de inoculaciones por via intra- peritoneal en ratones blancos entre 19 y 21 g sin distincién de 0X0. Este experimento demostré que se pueden obtener re- sultados satistactorios tanto en sensibilidad como en reprodu- cbilidad. Se recomienda determinar la DL50 del veneno de las serpientes de acuerdo a la zona geogritica de su captura, ya que se ha demostrado variaciones significativas en su compo- sicién quimica que podrian tener importancia médica, filogené- tica y taxonémica. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS [1] Becker, R.E. and Glenn, W.G. Differential resistance of mice at various time levels to the lethality of rattlesnake venom (Grotalus atrox). Tex. Rep. Biol. Med., 25: 360-4 1967. [2] Bolafios, R. Toxicity of Costa Rica snake venoms for the white mouse. Amer. j. trop. Med. Hyg., 21:360-3. 1972, [3] Bolafios, R. Serpientes, venenos y Ofidismo en Centroa- mérica San José, Costa Rica. 1984. [4] De Biasi P.; Belluomini, H.E.; Hoge, A.R. e Puorto G. Uso do gas carbénico na extrasao de veneno de serpen- tes. Mem, Inst. Butantan, 40/41:167/172. 1976/77. [5] De Diego, A. y Sarchi, M.I. 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