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ISSN: 1870-0195
rmcf@afmac.org.mx
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Mxico
Leos-Rivas, Catalina; Verde-Star, Ma. Julia; Cruz-Vega, Delia Elva; Barrn-Gonzlez, Ma. Porfiria;
Rivas-Morales, Catalina; Oranday-Crdenas, Azucena
Actividad biolgica de extractos metanlicos de Heliotropium amplexicaule
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 44, nm. 3, julio-septiembre, 2013, pp. 19-23
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Distrito Federal, Mxico
Catalina Leos-Rivas,1 Ma. Julia Verde-Star,1 Delia Elva Cruz-Vega,2 Ma. Porfiria Barrn-Gonzlez,1
Catalina Rivas-Morales,1 Azucena Oranday-Crdenas1
Resumen
Heliotropium amplexicaule es una planta perteneciente a la familia Boraginacea con antecedentes de contenido de
compuestos con inters farmacolgico. En este estudio se investig la actividad biolgica de los extractos metanlicos de
raz, tallo, flor y hojas de H. amplexicaule sobre diferentes microorganismos. Los resultados mostraron un efecto
amebicida significativo de los extractos de raz, tallo, flor y hojas sobre Entamoeba histolytica con CI50 de 2, 8, 36 y 114.2
g/mL respectivamente; no mostraron actividad sobre las bacterias y dermatofitos probados. La citotoxicidad obtenida
para raz, tallo, hoja y flor sobre la lnea celular Vero fue CI50 de: 250, 200, 175 y 150 g/mL respectivamente; y la toxicidad
para todos los extractos sobre A. salina fue de LD50 > 1,000 g/mL.
Abstract
Heliotropium amplexicaule is a plant belonging to the family Boraginacea with a content background of pharmacological
interest compounds. In this study we have researched the biological activity of the methanol extracts of root, stem, flower
and leaves of H. amplexicaule against different microorganisms. The results showed a significant amebicide effect on
Entamoeba histolytica with IC50 of 2, 8, 36 and 114.2 g/mL (root> stem> flower> leaf) they did not show any effect on
bacteria and dermatophytes tested. On the Vero cell line showed IC50: 250, 200, 175 and 150 g/mL (root, stem, leaf, and
flower). The toxicity on A. saline was LD50> 1,000 g/mL.
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Ensayo de Letalidad sobre Artemia salina incubaron 24 h ms, bajo las mismas condiciones.
Los huevecillos de artemia fueron eclosionados e incubados por Posteriormente para determinar la citotoxicidad, se adicionaron
48 h en agua de mar artificial (Instant Ocean). Se probaron a cada pozo 10 L del reactivo Cell Titer-Blue (Promega, cat.
cinco concentraciones: 0, 100, 300, 500 y 1,000 g/mL; las G8080) y se incubaron por 2 h ms y se determin la
cuales se prepararon a partir de los extractos metanlicos absorbancia a 550 nm utilizando un lector de microplacas
disolvindolos en agua de mar artificial, el control positivo (Biotek, Modelo ELX800). Se estim el porcentaje de
utilizado fue K2 Cr2 O7 al 5%. La prueba se realiz utilizando viabilidad y la Concentracin Inhibitoria 50 % (CI50). Se
microplacas de 96 pozos, donde se depositaron 100 L de agua realizaron tres ensayos independientes por triplicado.
salada artificial con 10 artemias en cada pozo. Las diferentes
concentraciones de los extractos de H. amplexicaule fueron Pruebas Fitoqumicas
agregadas en volumenes de100 L, la microplaca fue incubada Se realizaron las siguientes pruebas qumicas para la
por 24 h a temperatura ambiente.13 Posteriormente, se cont el identificacin parcial de grupos funcionales: la prueba de
numero de organismos vivos y muertos para determinar la Liebermann-Burchard para determinar triterpenos y
viabilidad y la dosis letal al 50 % (DL50). Se calcul la compuestos esteroidales, la prueba de Salkowski para
desviacin estndar de tres experimentos independientes determinar esteroles y metilesteroles, la prueba de Shinoda para
realizados por triplicado. El criterio de toxicidad fue el compuestos de tipo flavonoide, la prueba de Baljet para
siguiente: Valores de DL50 > 1000 g/mL (no txico), 500 sesquiterpenlactonas, la prueba de Dragendorff con la
1000 g/mL (toxicidad dbil) y < 500 g/mL (txico).14 modificacin de Munier y Machelobuf para la determinacin de
alcaloides, la prueba de bromo en tetracloruro de carbono para
Evaluacin de la actividad amebicida de los extractos de H. insaturaciones, la prueba del permanganato de Potasio, para
amplexicaule sobre E. histolytica dobles enlaces, la prueba de 2,4- Dinitrofenilhidracina para
La metodologa se realiz de acuerdo a lo mencionado por grupo carbonilo, la prueba de Molisch para azcares, la prueba
Leos-Rivas et al.15 Partiendo de un cultivo de E. histolytica de NaOH para determinar lactonas, la prueba de Brntrager
HM1-IMSS en medio TYI-S-3316 adicionado con 1 % de para determinar naftaquinonas y antraquinonas, la prueba del
penicilina/estreptomicina y 10 % de suero de ternera en 5 mL, cloruro frrico FeCl3 para determinar oxihidrilos fenlicos, la
se utilizaron los tubos de 13x100 mm de boro silicato y tapn de prueba para la determinacin de cumarinas y la prueba del
rosca, inoculados a una densidad de 1 x 104 cel/mL. Se prepar bicarbonato de sodio para presencia de saponinas.18
una solucin stock de los extractos metanlicos a una
concentracin de 40 mg/mL (p/v) disueltos en dimetil sulfxido Anlisis Estadstico
y esterilizados por filtracin con una membrana de 0.22 m El porcentaje de viabilidad para artemia fue transformado
(Millipore). Se probaron cinco concentraciones de c/u de los utilizando Arcosin O por el ensayo de normalidad
extractos de H. amplexicaule: 2, 20, 60, 100 y 200 g/mL. Se (Kolmogorov-Smirnov), y la comparacin fue realizada
incubaron por 6 d a 37 C, despus de esto la densidad fue utilizando un anlisis no paramtrico de varianza (si fue normal)
determinada utilizando un hemocitmetro (Neubauer, Hausser o la prueba Kruskal-Wallis.19 Para el anlisis estadstico fue
Scientific). El control positivo utilizado fue metronidazol; el utilizado el software SPSS, versin 10.0 (SPSS, Inc.)
ensayo se realiz por triplicado y la concentracin inhibitoria
media fue determinada utilizando la prueba Probit.17 Resultados y discusin
Citotoxicidad sobre clulas normales de mamfero
Fue utilizada la lnea celular Vero de rin de mono verde El proceso de extraccin por maceracin utilizado con las
africano (American Type Culture Collection: CCL-81). Las diferentes partes de la planta H. amplexicaule present
clulas fueron cultivadas en medio M-199 (Gibco, cat. rendimientos diferentes, donde, las hojas mostraron el mayor
11150-059) suplementadas con 4 % de suero fetal bovino, 100 rendimiento con un 7.12 %, seguidos por las flores con un 5.13
U/mL de penicilina G y 100 g/mL de estreptomicina a 37 C %, el tallo con un 3.38 % y finalmente la raz con un 3.28 %.
en atmsfera hmeda con 5 % de CO2. Para el ensayo de Los extractos metanlicos de hojas, raz, inflorescencias y tallos
citotoxicidad se utilizaron microplacas de 96 pozos con 3,000 presentan actividad sobre E. histolytica HM1:IMSS con una
cel/pozo en un volumen de 100 L. La suspensin celular fue CI50 de 114, 2, 36 y 8 g/mL respectivamente (Tabla 1). Estos
incubada a 37 C en atmsfera hmeda con 5 % de CO2 por 24 resultados sobre E. histolytica son consistentes con los
h, despus de este tiempo, a cada pozo se le adicionaron 100 L reportados de Turnefortia densiflora, la cual mostr actividad
del medio de cultivo con las diferentes concentraciones del con una CI50 de 69.1 g/mL;20 as como los reportados con el
extracto metanlico: 0, 100, 300, 500 y 1,000 g/mL. El control extracto metanlico de B. officinalis (CI50 de 33 g/mL),5
positivo utilizado fue Tritn X-100 al 2.5 %, las microplacas se ambas plantas de la misma familia que H. amplexicaule.
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La toxicidad de los extractos metanlicos sobre A. salina Los resultados de las pruebas qumicas realizadas a los
mostraron una DL50 > 1,000 g/mL (Tabla 1), de acuerdo al extractos probados de H. amplexicaule, indicaron que contienen
criterio utilizado,14 estos resultados nos indican que el extracto lactonas, fenoles, azcares, terpenos, esteroles y alcaloides. El
metanlico no tiene efecto txico en ninguna de las dosis potencial teraputico de las plantas de la familia Boraginaceae,
probadas comparadas con el control positivo (K2 Cr2 O7 al 5 %) ha sido demostrado y atribuido a compuestos fitoqumicos
(P > 0.05). polares como compuestos fenlicos, quinonas y alcaloides,8 por
lo que la actividad amebicida presentada por H. amplexicaule
Tabla 1. Actividad amebicida de extractos metanlicos puede ser atribuida a la presencia de stos compuestos.
de H. amplexicaule
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