ESTERILIZACION Y DESINFECCION
no aprendes lo que te ensean
INTRODUCCION
Los procesos de esterilizacin y/o desinfeccin son
diariamente llevados a cabo, no solamente en el
laboratorio, donde son fundamentales para evitar la
contaminacin de medios, cultivos, placas etc., sino
tambin en otros mbitos tales como los hospitales,
donde fallas en estos procedimientos aumentan la
morbimortalidad de los pacientes.
Pensemos lo que sucede en los quirfanos donde se
deben desinfectar pisos, paredes y techos, esterilizar
instrumental quirrgico e indumentaria del personal, y
descontaminar el aire del ambiente.
O en contraposicin, lo que sucedera si materiales como
catteres, agujas, jeringas, empleados en maniobras
mdicas diarias (extraccin de sangre, vas venosas,
punciones lumbares, toracocentesis, etc.) fueran
utilizados aunque fueran con niveles mnimos de
contaminacin.
Un ejemplo cotidiano donde debe prevalecer el mismo
concepto de esterilidad es en la utilizacin de agujas para
la realizacin de tatuajes (conoce alguna enfermedad
infecciosa que pueda trasmitirse de esta forma?).
El estudiante de medicina en este momento, debe
rpidamente familiarizarse e interiorizarse con ciertos
procesos de desinfeccin y antisepsia como, por Ej.: la
cutnea, previa a la administracin de un inyectable o
durante la cura de una herida, la desinfeccin de un
termmetro clnico o el lavado de manos.
Parece imprescindible entonces, que el estudiante que se
apresta a ingresar a la clnica en breve y que en este
momento ya est en contacto con distintas poblaciones
bacterianas, debe saber manejar en forma fluida la
informacin que le permita discernir cundo es necesario
desinfectar o esterilizar, y llevar a cabo el proceso
correspondiente en forma satisfactoria con el
conocimiento de los fundamentos de lo realizado.
sino lo que quieres aprender, pero...
RAFAEL VIGNOLI
Comencemos por definir algunos trminos que
utilizaremos:
ESTERILIZACION: es el proceso mediante el cual se
alcanza la muerte de todas las formas de vida
microbianas, incluyendo bacterias y sus formas
esporuladas altamente resistentes, hongos y sus esporos,
y virus. Se entiende por muerte, la prdida irreversible de
la capacidad reproductiva del microorganismo.
(deberan estar incluidos dentro de esta definicin la
eliminacin de estructuras como los priones?)
Se trata de un trmino absoluto, donde un objeto est
estril o no lo est, sin rangos intermedios.
DESINFECCION: en este proceso se eliminan los
agentes patgenos reconocidos, pero no necesariamente
todas las formas de vida microbianas.
Es un trmino relativo, donde existen diversos niveles de
desinfeccin, desde una esterilizacin qumica, a una
mnima reduccin del nmero de microorganismos
contaminantes. Estos procedimientos se aplican
nicamente a objetos inanimados.
ANTISEPSIA: es el proceso que por su baja toxicidad,
se utiliza para la destruccin de microorganismos
presentes sobre la superficie cutneo-mucosa. Este
trmino tampoco implica la destruccin de todas las
formas de vida.
Existen agentes como los alcoholes que son antispticos
y desinfectantes a la vez.
Dado que el tema que se est abordando es: mtodos
para controlar o destruir distintas poblaciones
bacterianas; es necesario saber previamente la cintica de
dicha destruccin, es decir de que modo muere una
1
poblacin, y que parmetros inciden sobre este efecto.
CINETICA DE DESTRUCCION DE LAS
POBLACIONES BACTERIANAS
Cuando una poblacin bacteriana es expuesta a un
agente letal fsico o qumico, se produce una progresiva
reduccin del nmero de sobrevivientes, de modo que la
curva que representa el nmero de sobrevivientes en
funcin del tiempo, tiene forma exponencial decreciente
(Fig. 1A).
Si graficamos la curva en una escala semilogartmica,
obtenemos una recta como la de la Fig. 1B. En la misma,
la pendiente (negativa) representa la velocidad de muerte
de la poblacin. Resulta claro que cuanto mayor sea el
valor absoluto de la pendiente, los microorganismos
morirn ms rpido.
Este comportamiento debe tenerse presente siempre, ms
an en las tcnicas de esterilizacin, donde el tiempo de
exposicin al agente es fundamental para alcanzar el
objetivo buscado.
El efecto letal de un agente (por Ej.: el fenol) cambia en
relacin a las distintas cepas, incluso dentro de una
misma especie bacteriana.
Existen adems un conjunto de condiciones
fundamentalmente ambientales que afectan la cintica de
destruccin.
Dentro de estos se encuentran:
1) concentracin del agente
2) tiempo de exposicin
3) pH del medio
4) temperatura
5) presencia de materiales extraos
6) resistencia propia del microorganismo
7) nmero inicial de la poblacin
1. Concentracin del agente:
Si bien este aspecto vara segn el desinfectante y el
microorganismo, existe una relacin inversamente
proporcional entre concentracin y tiempo de
exposicin. A mayores concentraciones de desinfectante,
menor es el tiempo de exposicin para conseguir el
mismo efecto. Tambin se modifica la cintica de
muerte, como lo muestra el cambio de forma en la curva
de sobrevivientes-tiempo, que se transforma muchas
veces de exponencial a altas concentraciones (Fig. 1A)
en sigmoide para concentraciones intermedias (Fig. 2).
En estos casos existe un tiempo inicial de muerte muy
lento que luego se acelera para volver a decaer al final.
Este factor es tan crtico, que se sabe que
concentraciones mnimas de casi cualquier desinfectante
no solo no elimina los microorganismos sino que
permiten su desarrollo.
2. Tiempo de exposicin:
Dada una concentracin de desinfectante, existe un
tiempo mnimo de accin que hay que respetar para
conseguir el efecto buscado. Para dar una idea grfica de
esto, en la Fig. 3 se representa el porcentaje de reduccin
de la flora bacteriana residente en piel de brazos y manos
en funcin del tiempo, para diferentes antisp-ticos de
uso ms o menos comn.
3. Ph:
Entre otras cosas determina el grado de ionizacin del
agente, siendo en general la forma no disociada la que
atraviesa mejor las paredes del microorganismo.
4. Temperatura:
El aumento de la temperatura aumenta el poder
bactericida del agente, siempre que no lo desnaturalice.
As para temperaturas bajas, por lo general, por cada
10C de incremento de esta, la tasa de mortalidad se
duplica.
5. Presencia de materiales extraos:
La presencia de materia orgnica, por ej. mucus, pus,
sangre, heces, etc. influyen negativamente en la actividad
de muchos desinfectantes, incluso llegando a
inactivarlos.
Por lo general forman cubiertas que impiden el contacto
microorganismo-desinfectante, o se combinan con el
agente formando compuestos inertes o menos activos,
etc. Por esto es esencial un buen lavado de la superficie,
antes de intentar un proceso de desinfeccin o
esterilizacin.
Adems el lavado y arrastre tambin disminuye la
poblacin de microorganismos sobre la cual acta el
agente contribuyendo a una ms rpida destruccin
6. Resistencia innata de los microorganismos:
2
La eficacia de cada agente depende tambin de las
propiedades caractersticas de cada microorganismo
contra el cual se lo est aplicando.
As el tipo de pared, la presencia de esporos, la fase de
desarrollo, etc., modifican la resistencia.
Dentro de las formas vegetativas, es el gnero
Micobacterium el ms resistente. Luego dentro de los
Gram (+) se destacan Staphyilococcus y Enterococcus.
Dentro de los Gram(-) Pseudomona, Klebsiella,
Enterobacter, y Serratia son los ms resistentes.
Son estos microorganismos (cocos Gram (+) y bacilos
Gram (-), los ms frecuentes causantes de epidemias
intrahospitalarias debido en primer lugar a no practicar
el lavado de manos tantas veces como sea necesario y
en segundo lugar (por lejos) a la mala utilizacin de
desinfectantes y antispticos.
7) nmero inicial de la poblacin
Finalmente el nmero de la poblacin bacteriana inicial
es importante, porque a mayor nmero de
microorganismos, mayor deber ser la concentracin del
agente y su tiempo de exposicin al mismo.
En este punto al igual que en la remocin de materiales
extraos, toma fundamental relevancia el lavado de
manos, donde por arrastre se consigue una disminucin
importante de la flora normal transitoria, mejorando as
las condiciones de utilizacin del agente a utilizar.
A continuacin iremos viendo progresivamente, el
lavado de manos, y la utilizacin de antispticos,
desinfectantes, hasta llegar finalmente a la esterilizacin,
primero qumica y luego qumica y fsica.
LAS "CRUZADAS" BACTERIANAS
Como se recordar, las bacterias tienen un "aparato
locomotor" constituido fundamentalmente por flagelos,
que les permiten movilizarse en medios lquidos pero no
a travs de superficies slidas o vas areas.
Por lo tanto para que estos microorganismos "vidos de
colonizacin y conquista" puedan trasladarse de un lugar
(o una persona) a otro(a) necesitan de un vehculo, de un
transportador, de un "vector mecnico". Algunas veces
(pero no la mayora) las gotitas de pflugge cumplen con
este cometido.
Sin embargo, a nivel mundial los hospitales
universitarios presentan un ndice de morbi-mortalidad
superior (sobre todo causado por infecciones
intrahospitalarias) que los hospitales no universitarios
(ver Captulo Infecciones Intrahospitalarias).
Cuando los estudiantes arriban al hospital, ya sea durante
el pasaje por las clnicas, o las guardias; su avidez por
tocar, palpar y tactar, unido en ocasiones a la mala
distribucin de las canillas o lo inapropiado de los
jabones y en el peor de los casos a la falta de ejemplo del
mdico responsable del servicio, se les ofrece a los
microorganismos uno de los ms efectivos y trgicos
"vectores": nuestras manos.
De esta forma estos microconquistadores de mil batallas
(que muchas veces han adquirido resistencia tanto a
desinfectantes como a antibiticos), pueden llegar por
intermedio del estudiante, a otros pacientes, que en
general presentan distinto grado de inmunocompromiso
y nivel mas alto de exposicin.
Esto provoca que muchas infecciones oportunistas (por
Ej.: las causadas por P.aeruginosa) den origen a
verdaderas epidemias a nivel intrahospitalario.
Existe una medida sencilla, rpida y barata para evitar
esta diseminacin de microorganismos:
EL LAVADO DE MANOS. Para fundamentar la
efectividad de tan simple medida, recordaremos algunos
conceptos de flora normal.
Existen dos tipos de flora: la flora residente, compuesta
por microorganismos adaptados a cada nicho ecolgico
en particular, capaz de unirse a los receptores cutneo-
mucosos de la zona, instalarse y multiplicarse en los
mismos, permaneciendo all por largo tiempo y
desarrollando una relacin de comensalismo o
mutualismo con el husped. No es sobre esta que acta
fundamentalmente el lavado de manos rutinario, ni es la
gran responsable de colonizaciones cruzadas dentro del
hospital.
La flora transitoria, incluye microorganismos que llegan
adheridos a deshechos orgnicos, que se depositan sobre
la superficie cutneo-mucosa pero no estn
necesariamente adaptados a las condiciones ambientales
zonales, no se unen a los receptores, ni son capaces de
sobrevivir en el lugar en forma prolongada.
Estos son los principales causantes de dichas infecciones
intrahospitalarias y el blanco fundamental del lavado de
manos, que por el arrastre del agua y la accin del jabn
reduce eficientemente esta flora.
Pero no todos los procedimientos requieren las mismas
exigencias con respecto a las tcnicas de lavado.
As para un contacto rutinario como tomar la presin,
auscultar, etc. basta con un lavado vigoroso durante 10"
con agua y jabn. En otros casos deber agregarse el uso
3
 de algn antisptico, como ser:
CLASIFICACION DE LOS DESINFECTANTES
1. antes de realizar procedimientos invasivos (aunque
se utilicen guantes estriles); Para este ordenamiento no nos basaremos en su
2. antes y despus del contacto con heridas quirrgicas composicin qumica sino en dos criterios diferentes:
o traumticas;
3. antes del contacto con pacientes especialmente 1. el rango de actividad y efectividad sobre los
susceptibles (por Ej.: inmunodeprimidos y recin microorganismos (nivel de desinfectante);
nacidos);
4. luego de entrar en contacto con una fuente 2. segn su mecanismo de accin.
contaminada, como puede ser un paciente infectado
o sus secreciones; Trataremos de jerarquizar el primer punto, ya que en la
5. antes y despus del contacto con un paciente de prctica es el criterio fundamental para escoger un
CTI; desinfectante.
6. antes de cualquier procedimiento quirrgico.

TECNICA DEL LAVADO DE MANOS

1. Remocin de alhajas (anillos, pulseras, etc.).
2. Lavado vigoroso con agua y jabn durante 10"
y enjuagado con agua corriente. Para un
contacto rutinario basta con estos dos pasos.
Tras secarse con papel, se cierra la canilla con
el mismo.
Para un procedimiento invasio-quirrgico, se agrega
adems:
5. Enjuague abundante con agua corriente (tener
precaucin con los restos de jabn, que de
quedar pueden inactivar los antispticos).
6. Aplicacin de un antisptico (los ms utilizados
son: alcohol al 70%, iodforos, alcohol iodado
al 0.5% y Clorohexidina al 4%)
Corresponde ahora ingresar en el estudio de las
propiedades de los antispticos y desinfectantes mas
comnmente utilizados.

3. Cepillado de uas (reservorio importante de

microorganismos). AGENTES ANTIMICROBIANOS QUIMICOS
(DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS)
4. Cepillado de piel de manos y antebrazos (se
remueve as la flora transitoria y parte de la INTRODUCCION: los desinfectantes (que los
residente). separamos de los antispticos por no utilizarse en piel y
mucosas), tambin se diferencian de los ATBs.

Antibiticos Desinfectantes y Antispticos

1) Pueden aplicarse sobre piel, mucosa y el medio interno 1) No pueden utilizarse en el medio interno y los desinfectantes
ni siquiera sobre piel o mucosas
2) Tienden a ser selectivos para las clulas procariotas no 2) No poseen selectividad, actuando sobre clulas procariotas
actuando sobre eucariotas y eucariotas, razn por la cual no pueden usarse sobre el
medio interno.
3) Actan sobre microorganismos en multiplicacin activa ya 3) Actan sobre microorganismos en cualquier estado
que interfieren con algn paso metablico. metablico (en multiplicacin o no).

4) Se necesitan pequeas cantidades para obtener el efecto 4) Se necesitan mayores concentraciones que los ATBs para
deseado. conseguir el efecto.
5) Actan especficamente sobre bacterias y no sobre hongos 5)Son txicos para muchos tipos e micro- organismos, por ej.:
virus u otros microorganismos hongos, virus, etc.

4
1. NIVEL DE LOS DESINFECTANTES:

Estos son clasificados en tres niveles (alto, mediano y

bajo), segn la intencidad de su actividad sobre bacterias
y esporos, virus (lipdicos y no lipdicos), hongos y sus
esporos, etc.

A. Desinfectantes de alto nivel:

Se caracterizan por actuar inclusive sobre los esporos

bacterianos (forma ms resistentes dentro de los
microorganismos), produciendo una esterilizacin
qumica si el tiempo de accin es el adecuado.

Se utilizan sobre instrumentos mdicos o quirrgicos

termosensibles.

Son rpidamente efectivos sobre bacterias no
esporuladas. Por lo general el nmero de esporos en el
material a desinfectar es insignificante, por lo que la
esterilizacin es rpida.
Dentro de este grupo se encuentran:
I. Oxido de Etileno
II. Formaldehdo al 8% en alcohol 70%
III. Glutaraldehdo al 2%
IV. Perxido de Hidrgeno
Todos estos son desinfectantes estrictos, no pudindose
usar como antispticos.
B. Desinfectantes de mediano nivel:
Si bien no destruyen esporos, si lo hacen con grmenes
tipo: M.tuberculosis, hongos y virus no lipdicos.
Son aquellos que actuando durante un tiempo razonable,
no destruyen esporos, ni Micobacterium, ni virus no
lipdicos por Ej.:
I. Compuestos de Amonio cuaternario
II. Compuestos mercuriales
En la prctica estos compuestos se utilizan para la
limpieza domstica mientras que estn prcticamente en
desuso en los hospitales y laboratorios debido al empleo
de tcticas ms agresivas para la desinfeccin.
La seleccin del agente o el procedimiento a utilizar
depende en gran parte de las caractersticas del objeto, y
de la probabilidad que tiene ste de producir una
infeccin si es utilizado estando contaminado.
Se clasifican as en elementos crtico, semicrtico y no
crtico.

Algunos agentes son: El nivel y tipo de desinfeccin que deber lograrse, va a

depender de la categora a la que pertenezca el objeto, su
I. Compuestos clorados (por ej.: hipoclorito de naturaleza y su forma de uso.
sodio)
II. Compuestos iodados (iodforos y alcohol iodado)
Elementos CRITICOS:
III. Compuestos fenlicos
IV. Alcoholes Son los que se introducen directamente en el cuerpo, la
V. Clorohexidina sangre, o cualquier rea del organismo que suele ser
estril; por Ej.: catteres, agujas hipodrmicas, equipos
La mayora de estos son utilizados como desinfectantes de hemodilisis, etc.
y antispticos.
Evidentemente existe un altsimo riesgo de producir una
C. Desinfectantes de bajo nivel: infeccin si estos objetos se encuentran contaminados en
el momento de su uso.
5
El tratamiento para estos elementos deber ser
esterilizacin, en lo posible por mtodos trmicos,
radiaciones, o de lo contrario con un desinfectante de
alto nivel, por Ej.: xido de etileno, glutaraldehdo, cido
peractico, etc., como sucede con los materiales
descartables.
Elementos SEMI CRITICOS:
Estn en contacto con las mucosas intactas (que
normalmente estn colonizadas por la flora normal) pero
no la atraviesan. Encontramos en este grupo:
termmetros (de uso rectal y oral), fibroscopios, tubos
endotraqueales, broncoscopios, etc.
Tambin la esterilizacin es lo ms aconsejable, pero se
acepta una desinfeccin con agentes de alto o mediano
nivel, siempre posterior a un cuidadoso lavado con agua
y detergente.
Elementos NO CRITICOS:
Se encuentran en contacto con la piel sana pero no con
las mucosas. En condiciones normales poseen poca
posibilidad de producir infecciones. Sin embargo,
pueden funcionar como "vectores mecnicos" que
transfieren grmenes de un paciente a otro, lo que
favorece la aparicin de infecciones cruzadas, mas
graves en el caso de pacientes inmunodeprimidos.
Estetoscopios, mscaras faciales y humidificadores, entre
otros, son los objetos que se agrupan aqu.
Se considera suficiente el lavado con agua y detergente,
seguido de la aplicacin de un desinfectante de mediano
nivel.
Teniendo ya una visin global de los agentes qumicos,
podemos comenzar a describirlos, asociados a su:
2. MECANISMO DE ACCION:
La mayora de los desinfectantes se los agrupa en tres
categoras:
A. los que lesionan la membrana celular;
B. los inactivadores irreversibles
protenas;
C. los que lesionan los cidos nucleicos.
No obstante, algunos desinfectantes comparten ms de
uno de estos mecanismos.
PRINCIPALES AGENTES QUIMICOS
DESINFECTANTES DE ALTO NIVEL:
Por su mecanismo de accin, todos los que veremos aqu
actan modificando en forma irreversible grupos
funcionales de protenas y/o cidos nucleicos. Entre otros
efectos, esto provoca inhibicin enzimtica, lo que lleva
a la muerte celular. Los agentes que predominan en este
grupo son los Alquilantes (Oxido de etileno,
formaldehdo, glutaraldehdo).
Estos producen la alquilacin de protenas que
contengan hidrgenos lbiles, los que se encuentran en
los grupos: carboxilo, hidroxilo, sulfhidrilo, amino y
fenol de dichas protenas)
OXIDO DE ETILENO (ETO GAS):
Este gas acta adems de lo dicho, a nivel de los cidos
nucleicos, produciendo mutaciones tanto en bacterias
como en tejidos humanos.
Se utiliza ampliamente para la esterilizacin de
instrumentos termolbiles como ser: tubuladuras de
polietileno (catteres, sondas), equipos electrnicos
medico-quirrgicos, materiales biolgicos, drogas, etc.
El equipo de esterilizacin, si bien es similar al autoclave
que funciona por gravedad, es ms complejo y de
manejo dificultoso. Es necesario controlar ciertos
parmetros para asegurar un buen resultado. Estos son:
a. Composicin del gas: se debe usar mezclas con
fren o CO2 (12% xido de etileno-88% fren
o CO2) ya que puro es altamente inflamable.
b. Grado de humedad (entre 40 y 80%).
c. Temperatura (de 52 a 58C).
d. Tiempo de exposicin (entre 3 y 6 hs).
Cada ciclo de esterilizacin debe ser sometido a
controles biolgicos con esporos de B.subtilis.
PRINCIPALES DESVENTAJAS: Es altamente
txico, mutagnico y carcinognico para los tejidos;
irrita los ojos y las mucosas.
de
Por lo tanto, una vez finalizado el ciclo de esterilizacin,
el gas debe evacuarse del equipo y eliminar por arrastre
6
con aire filtrado los residuos que puedan haber quedado.
GLUTARALDEHIDO:
Se utiliza a temperatura ambiente en solucin al 2%.
Es esporicida para tiempos de accin de 6 a 10 hs.
Es el desinfectante ms utilizado en la esterilizacin de
equipos de endoscopa y de tratamiento respiratorio ya
que no corroe metales y gomas, ni deteriora lentes.
DESVENTAJAS: Es txico para piel, mucosas y ojos;
tambin desprende vapores txicos para el aparato
respiratorio.
FORMALDEHIDO (FORMOL):
Se utiliza en forma gaseosa o lquida. En su estado
gaseoso se usa para desinfectar ambientes, muebles y
artculos termolbiles. En estado lquido (formalina), se
obtiene comercialmente en solucin al 37%, y se utiliza
para conservar tejidos frescos y, para inactivar virus en la
preparacin de vacunas, ya que interfiere poco en la
actividad antignica microbiana.
DESVENTAJAS: produce vapores altamente irritantes,
txicos y carcinognicos, adems de tener escaso poder
de penetracin.
Por todo esto no se utiliza en el laboratorio como un
desinfectante comn.
Utilizado en concentraciones elevadas (37%) tiene
accin esporicida; para la preparacin de vacunas se
utiliza formalina al 0.2 o 0.4%.
Adems de los agentes alquilantes, dentro de este grupo
se encuentra el perxido de hidrgeno, que es un agente
oxidante.
PEROXIDO DE HIDROGENO:
Adems de su mecanismo de accin como agente
oxidante (ver ms adelante) este compuesto produce la
formacin de radicales libres hidroxilos, que contribuyen
a desestabilizar las molculas celulares.
Utilizado en solucin al 3% es de escasa y breve
actividad como antisptico, ya que es rpidamente
inactivado por las enzimas catalasa, tanto de los
microorganismos como las tisulares.
En soluciones estabilizadas al 10% acta como
desinfectante de alto nivel. Se utiliza sobre dispositivos
medico-quirrgicos, lentes de contacto de plstico
blando, etc.
Otra forma de utilizacin es en combinacin con cido
peractico para esterilizar maquinarias (por Ej.: equipos
de pasteurizacin).
El perxido de hidrgeno en solucin al 30% y luego
vaporizado, se utiliza para esterilizar superficies (por Ej.:
cabinas de seguridad)
DESINFECTANTES DE MEDIANO NIVEL:
Se destacan los que actan a nivel de protenas y cidos
nucleicos (agentes oxidantes) y los que actan a nivel de
la membrana citoplsmica; dentro de estos se encuentran
compuestos fenlicos y los alcoholes.
AGENTES OXIDANTES:
Mecanismo de accin: oxidan los grupos sulfhidrilos
(SH) a disulfuro (SS), lo que inactiva las enzimas que los
poseen. Ya hablamos del perxido de hidrgeno, aqu
hablaremos de los halgenos.
HALOGENOS:
Dentro de estos elementos se encuentran el iodo y el
cloro.
COMPUESTOS CLORADOS:
Son los desinfectantes de mediano nivel ms
econmicos, efectivos e inocuos para el hombre.
Pueden presentarse como cloro puro, combinado con una
sulfonamida (Cloramida T) o en sus formas ms
utilizadas: Hipoclorito de sodio (en solucin acuosa) o
de calcio (en tabletas).
El principio activo de todos es el mismo: la liberacin de
cloro molecular, que en presencia de agua se combina
con esta para formar cido hipocloroso, el cual es un
fuerte agente oxidante a pH neutro o cido.
CL2 + H2O --- HCLO + CL- + H-
Si bien es de mediano nivel, el hipoclorito tiene una
dbil accin esporicida. Adems es tuberculicida,
bactericida para todas las formas vegetativas, destruye
los virus envueltos (por Ej.: HIV) e incluso algunos
desnudos (HBV).
La estabilidad de estos productos depende entre otras
cosas de:
1. el pH: si bien acta mejor a pH neutro o cido,
7
 es ms estable a Ph 8;
2. la presencia de materia orgnica: es uno de los
desinfectantes de mediano nivel que se inactiva
ms drsticamente ante la presencia de
sustancias como pus, sangre, heces, etc.
3. la exposicin a la luz. Las diluciones acuosas
se degradan ms rpidamente que las
soluciones concentradas. Por lo tanto, para
conservar productos clorados, es necesario
mantenerlos en recipientes opacos, sin materia
orgnica, lo ms puro posible y a pH 8.
Aun con todas estas precauciones, los productos as
preparados deben renovarse al menos una vez al mes.
La concentracin de cloro activo se mide en partes por
milln (PPM) o gramos por litro (gr/l) de modo que
1000 PPM=1 gr/l o lo que es lo mismo 1PPM = 1 mg/l.
Las formas comerciales ms comunes tienen
concentraciones de 40.000 PPM (Agua jane, Sello rojo,
etc.) o 5.000 PPM (Electrn).
Segn la cantidad de cloro activo y el uso que le vamos a
dar, es la dilucin que debemos hacer, por Ej:
desinfeccin de:
1. Chatas, violines, o heridas muy sucias 5.000
PPM
2. Bocales c/pipetas contaminadas 2.500
PPM
3. Mamaderas o heridas en general 1.000
PPM
4. Frutas, verduras, vajilla, ropa blanca 250
PPM
5. Potabilizacin del agua 2 PPM
Para hacer la dilucin de una solucin concentrada de
hipoclorito de sodio utilizamos la ecuacin V1 * C1 =
V2 * C2
Ej: se necesita preparar 1 lt. de solucin de hipoclorito
de sodio que contenga 2.500 PPM de cloro activo para
preparar un bocal.
C1= 50.000 PPM
V1= x
C2= 2.500 PPM
V2= 1.000 ml
Entonces tenemos: 40.000 PPM * V1 = 2.500 PPM *
1.000 PPM
despejando V1 = 2.500 PPM * 1.000 ml / 40.000 =
62,5 ml Se deben tomar 50 ml de solucin concentrada
y agregarle agua has-ta completar 1 lt.
Algunas equivalencias tiles son:
1 cucharada de sopa = 25 ml
1 cucharadita de te = 5 ml
1 gota = 0.05 ml
Precauciones
a) las diluciones en agua tibia actan ms rpida e
intensamente que en agua fra, pero se degradan
pronto.
b) no es recomendable combinar estas soluciones con
detergentes, los cuales pueden inactivarlas (sobre
todo los catinicos). No obstante, es aconsejable
limpiar previamente con un detergente las superfi-
cies a desinfectar, para eliminar restos orgnicos.
COMPUESTOS DE IODO:
En medicina se los utiliza en soluciones, tinturas o
iodforos, como desinfectantes pero sobre todo como
antispticos.
Usos: preparacin pre operatoria, antisepsia quirrgica
de manos, as como tambin de piel previo a:
inyecciones. parto, transfusio-nes, extraccin de sangre,
etc. Como desinfectante se utiliza so-bre termmetros
clnicos, ampollas de dosis mltiples, sobre su-perficies,
etc.
Tanto las tinturas (2% de iodo + 2.4% de ioduro de
sodio en solu-cin acuosa y alcohol) como las soluciones
fuertes (5% de iodo + 10% de ioduro de potasio en
solucin alcohlica) son inestables en presencia de
materia orgnica y calor, manchan la ropa, tien piel y
mucosas, desencadenan reacciones alrgicas y tienen mal
olor; adems su uso prolongado corroe metales y altera
plsticos.
Por todo esto se prefiere la utilizacin de iodforos que
son me-nos txicos e irritantes.
Iodforos:
Esta forma de desinfectantes esta constituida
funcionalmente por tres componentes: un transportador o
portador de iodo, el iodo disponible y el iodo libre.
Transportador (carrier): es un solubilizante que acta
como reser-vorio de iodo. Generalmente se utilizan para
esto detergentes, de modo de limpiar la piel a la vez de
liberar el halgeno. Tambin se utilizan otro tipo de
agentes activos de superficie, como com-puestos de
amonio cuaternarios, polyvinylpyrrolidona (povidona),
etc.
8
Iodo disponible: es el iodo en solucin, generalmente al
1%. Con-forma el reservorio de complejos de iodo, el
que liberado en pe-queas cantidades asegura una
concentracin constante de iodo li-bre.
No es el iodo que acta en la destruccin de los
microorganismos.
Iodo libre: es el activo, el de accin microbicida, se
cuantifica en PPM y es el que le da el nivel de potencia a
este desinfectan-tante. As los iodoforos son capaces de
destruir bacterias (in-cluida M.tuberculosis), hongos y
virus desnudos, no as los no lipdicos (por Ej: Polio y
Rotavirus).
Si bien tienen cierta actividad esporicida, el tiempo de
exposi-cin debe ser demasiado largo para darle esta
utilidad.
Ventajas: (sobre otros compuestos iodados) mayor
poder de penetra-cin, mayor tiempo de accin, menor
produccin de reacciones ad-versas debido a la baja
concentracin de iodo disponible (1%).
Precauciones: dado que el iodo libre es muy difcil de
medir, cuando sea necesario preparar un iodforo a partir
de un compuesto concentrado, se deber seguir las
instrucciones del fabricante es-trictamente, ya que si
producimos diluciones mayores o menores a las
estipuladas, estaremos disminuyendo la cantidad de iodo
libre.
Alcohol iodado (iodo 0.5% en alcohol etlico al 70%):
posee un buen nivel antisptico, se utiliza para
preparacin quirrgica de piel, sitios de puncin,
desinfeccin de superficies.
Reduce efectivamente la flora cutnea en un minuto.
AGENTES QUE LESIONAN LA MEMBRANA
CITOPLASMICA:
Hablaremos aqu de los compuestos fenlicos y los
alcoholes, que se integran a los desinfectantes de
mediano nivel.
Mecanismo de accin: a nivel general, estos compuestos
producen un desordenamiento estructural de la
membrana citoplsmica, que in-terfiere con su
funcionamiento normal.
Esto provoca la prdida de pequeos metabolitos del
medio intrace-lular y dificulta tanto el transporte activo
como el metabolismo energtico.
COMPUESTOS FENOLICOS:
Agregan a la accin ya descrita, la activacin en forma
irreversi-ble de las oxidasas y deshidrogenasas que se
encuentran unidas a la membrana.
El fenol (cido carblico) como tal, ya no es utilizado
ms que como patrn para comparar otros
desinfectantes. Esto es debido a su alta toxicidad,
carcinogenicidad y su poder corrosivo.
La sustitucin de uno de los hidrgenos del ncleo
fenlico por grupos funcionales tales como alquilo,
difenilo, fenil y cloro, disminuye notablemente los
efectos adversos y aumenta la actividad antibacteriana de
estos compuestos.
La unin de estos fenoles modificados a jabones
aumentan an ms su accin, a la vez que los
hidrosolubilizan.
Dentro de las sustituciones ms utilizadas se encuentran
los al-quilo fenoles (cresoles) y los compuestos
difenlicos (hexacloro-fenol).
Los compuestos fenlicos utilizados en las
concentraciones adecua-das y con el tiempo suficiente
son: bactericidas, virucidas y fun-gicidas; por Ej: el HIV
es inactivado por una solucin fenlica al 0.5%, mientras
que se necesita una solucin al 2% para inactivar hongos.
Por lo general la concentracin utilizada oscila entre 2 y
5%.
CRESOLES:
Se los divide en tres grupos: orto meta y paracresol,
aunque suele utilizarse una mezcla de los tres
denominada tricresol.
Derivados de la destilacin del alquitrn de hulla son
mezclados con jabn y se comercializan por Ej.: como
Creolina.
Esta se utiliza para desinfeccin ambiental por Ej.:
paredes, pi-sos, etc.
HEXACLOROFENOL:
Es un derivado halogenado con gran accin bactericida,
fundamen-talmente sobre bacterias Gram (+), sobre todo
estrepto y estafilo-cocos.
Posee accin persistente, hasta el punto que su mxima
accin bac-tericida se manifiesta luego de varios das de
9
uso consecutivo.
ALCOHOLES (ALCOHOL ETILICO):
Se utilizan como desinfectantes y como antisptico.
Mecanismo de accin: producen precipitacin y
desnaturalizacin de protenas, tambin lesionan la
membrana citoplsmica. La precipi-tacin
desnaturalizacin de protenas depende de la presencia
de: 1) agua y 2) materia orgnica.
Para esto deben ponerse los objetos en inmersin en un
recipiente tapado.
Para preparar las diluciones (por Ej.: de alcohol 70%) a
partir de alcohol rectificado (95%), podemos utilizar la
frmula: C1*V1=C2*V2 de igual manera que para el
hipoclorito de sodio. As para preparar 100 ml de alcohol
70% tenemos:
y
95% * V1 = 70% * 100ml despejando V1 tenemos:
V1 = 70% * 100ml/ 95% = 73.6ml

1. El alcohol etlico rectificado (95%) provoca
gran deshidrata-cin en los microorganismos,
de manera que impide su penetra-cin en los
mismos. Por lo tanto, las concentraciones ms
efectivas son las que oscilan entre el 60 y 80%
en agua des-tilada, siendo la preparacin mas
efectiva al 70%.
Concentraciones por debajo del 50% no causan
ningn efecto.
2. La materia orgnica inactiva los alcoholes, por
lo que se re-comienda limpiar la superficie
antes de desinfectar con al-cohol.
Las lesiones en la membrana citoplsmica se deben a
que el al-cohol penetra en la regin hidrocarbonada,
desorganizando la es-tructura lipdica.
El alcohol 70% es rpidamente bactericida sobre las
formas vegeta-tivas bacterianas tanto Gram (+) como
Gram (-), es tuberculicida, fungicida y viricida,
incluyendo a Citomegalovirus (CMV), HIV, y HBV. No
acta sobre esporos.
Principales caractersticas:
a. No tiene buena penetracin sobre materia
orgnica.
b. No esteriliza desinfecta.
c. Se utiliza fundamentalmente para desinfectar
materiales semi crticos y no crticos (por Ej:
termmetros clnicos, pinzas, limpieza de
mesadas, etc.) y antisepsia de piel.
A esta cantidad se le agrega agua destilada hasta
completar los 100ml.
CLOROHEXIDINA:
Se encuentra dentro de los antispticos ms utilizados a
nivel hospitalario.
Se trata de un compuesto fuertemente bsico, que en este
estado es insoluble en agua y poco soluble en la mayora
de los solventes orgnicos. Para solubilizarla se preparan
distintas sales (la ms utilizada es el gluconato), donde se
obtiene una concentracin de clorohexidina de hasta el
20%.
Las preparaciones ms utilizadas contienen entre un 0.5
y 4% de producto.
Su pH ptimo de accin se encuentra entre 5.5 y 7.
A pH 5 y 6 acta fundamentalmente sobre Gram (-),
mientras que a pH mayores acta tambin sobre Gram
(+).
Como el estudiante recordar, la flora normal de la piel
est constituida fundamentalmente por microorganismos
Gram (+), por lo tanto a pH neutro, la clorohexidina se
transforma en un excelente antisptico cutneo.
Su espectro es bastante amplio, abarcando bacterias
Gram (+) y Gram (-), hongos y levaduras, es
bacteriosttico (detienen el crecimiento pero no mata)
para M.tuberculosis, ms no tiene actividad sobre
esporos.

A nivel de piel se utiliza para antisepsia de manos,
previo a in-yecciones, punciones venosas, etc.
Los alcoholes se evaporan rpidamente, sin dejar
residuos sobre las superficies tratadas. Esto es ventajoso
cuando se aplica sobre la piel ya que no mancha ni deja
mal olor, pero es inconveniente cuando se aplica a
objetos inanimados, ya que no se consiguen largos
perodos de contacto entre el desinfectante y el objeto.
Mecanismo de accin: Su accin se debera a su unin a
grupos negativamente cargados de las molculas
celulares. Esto producira precipitacin de protenas y
cidos nucleicos, inactivacin enzimtica y prdida
irreversible del contenido citoplsmico.
La clorohexidina no presenta absorcin cutnea
significativa, por lo que prcticamente no tiene efectos
adversos por esta va. Ocasionalmente produce
sensibilizacin cutnea a nivel genital, las soluciones
10
concentradas pueden producir hematurias cuando son
utilizadas para lavado vesical; tambin ototoxicidad y
causar irritacin de las conjuntivas y otros tejidos
sensibles.
PRINCIPALES CARACTERISTICAS:
a. Acta en forma mas lenta que los alcoholes
pero su efecto persiste ms tiempo.
b. Tiene efecto acumulativo.
c. Buena accin sobre bacterias Gram (+), Gram
(-) y virus.
d. Baja toxicidad e irritabilidad.
e. Sus diluciones mantienen mas que los iodforos
la actividad bactericida.
f. Al 4% es ideal para el lavado quirrgico de
manos y preparacin pre-quirrgica de piel.
DESINFECTANTES DE BAJO NIVEL: Se
encuentran aqu los compuestos de amonio cuaternarios
y los compuestos mercuriales.
Este tipo de agentes no deben usarse como antispticos,
ni para desinfectar elementos semicrticos; tampoco
deben utilizarse dentro de recipientes (por Ej.: vocales)
para desinfectar por inmersin, puesto que muchos
microorganismos (por Ej.: Pseudomona) son capaces de
multiplicarse en estas condiciones; han habido incluso
epidemias intrahospitalarias a partir del mal manejo de
estos desinfectantes.

Esto ltimo se debe a:

a. acta rpidamente, reduciendo la flora

transitoria en un 99% en 15" y la residente en
un 99.9% en 30" (se recomiendan lavados de
2';

b. si bien tiene efecto inmediato con una sola

aplicacin, presenta efecto acumulativo con el
uso regular. De manera que va aumentando su
accin bactericida de un lavado de manos a
otro;

c. tiene accin persistente: tanto las manos del

cirujano como la piel que circunda la cisura
debe mantenerse libre de grmenes durante la
intervencin.
El sobrecrecimiento de la flora normal en
ambas partes es un hecho frecuente, por su gran
afinidad por la piel (a la cual se adhiere) la
clorohexidina evita esto, manteniendo por
varias horas su accin.

Las preparaciones ms utilizadas son:

A. Jabn quirrgico: constituido por gluconato

de clorohexidina al 4% y se utiliza en: lavado
quirrgico de manos, preparacin quirrgica de
piel, antisepsia general de piel, lavado y
antisepsia de heridas, preparacin de piel para
procedimientos invasivos, etc.

B. Solucin alcohlica: constituida por gluconato

de clorohexidina al 0.5% en alcohol etlico al
70%, se utiliza en: antisepsia general de piel,
preparacin de piel para procedimientos
invasivos, etc.
11
 FIG 4: Trayectoria ondulante de un fotn. Lo
comprendido dentro de la llave, corresponde a
su longitud de onda

FIG 1: Representacin del nmero de

sobrevivientes de una poblacin bacteriana en

FIG:2 Representacin del comportamiento sigmoide

de la cintica de destruccin para concentraciones
intermedias de desinfectantes

Fig. 5: Estructura de dos molculas de

pirimidina (timina-timina) adyacentes de la
misma cadena.
A. Organizacin normal; B. organizacin luego
de exposicin a rayos UV donde se puede ver el
ciclo
butano que se forma entre los carbonos 5 y 6
de ambas molculas.

FIG3: Representacin del nmero de sobrevivientes

de la flora normal de manos y antebrazos en funcin
del tiempo, para diferentes antispticos de uso
comn. 12
 COMPUESTOS DE AMONIO CUATERNARIO:
(Ej.: cloruro de benzalconio, Rocal, Zephiran, Tritn
k12, etc.) son agentes catinicos y actan a nivel de la
membrana celular (agentes activos de superficie). Los
agentes activos
de superficie son anfipticos (estn constituidos por un
sector hidrofbico y uno hidroflico). En este caso el
residuo hidrofbico se encuentra balanceado por el
residuo hi-droflico positivamente cargado que
constituye el ncleo de amonio cuaternario.
Al ponerse en contacto con la superficie bacteriana, el
grupo catinico se asocia a los grupos fosfato de los
fosfolpidos de membrana, liberando al residuo
hidrofbico, que entra en la regin hidrfoba de la
membrana. Esto altera la semipermeabilidad de la
membrana y provoca la salida de compuestos
fosforilados.
Una vez ocurrido esto, el agente entra en la clula y
desnaturaliza las protenas.
Poseen un rango de accin que abarca fundamentalmente
a bacterias Gram (+).
Las principales aplicaciones se dan para la desinfeccin
de tems no crticos y desinfeccin ambiental domstica.
2. COMPUESTOS MERCURIALES: (Mertiolate,
Mercuriocromo, Metafen, etc.). Son bacteriostticos,
necesitando grandes concentraciones para alcanzar
efectos bactericidas.
Inhiben la actividad enzimtica por unin del mercurio
con los grupos sulfhidrilo de las mismas.
Estas sustancias estn fuera de uso debido a:
a. Aumento por parte de los microorganismos de
la resistencia al mercurio.
b. Poseen efectos txicos sobre tejidos y
corrosivos sobre metales.
c. Son poco activos al pH de los lquidos
corporales.
d. Se inactivan drsticamente con la presencia de
materia orgnica.
Corresponde hablar finalmente de las:
TECNICAS DE ESTERILIZACION
Para esto contamos con procedimientos fsicos o
qumicos.
Estos ltimos ya han sido vistos al considerar los
desinfectantes de alto nivel.
Los procedimientos fsicos se dividen en energticos y
mecnicos. Dentro de los primeros se encuentran: el
calor y las radiaciones, dentro de los segundos, la
filtracin.
A. DESTRUCCION DE MICROORGANISMOS
MEDIANTE CALOR:
La energa trmica es la forma mas efectiva de
esterilizacin.
Esta puede utilizarse como calor hmedo o seco.
I. CALOR HUMEDO:
Mecanismo de Accin: Al igual que los procesos de
desinfeccin, la esterilizacin trmica destruye a los
microorganismos en forma gradual; es por esto que no
hay un nico mecanismo de accin, sino ms bien la
suma de distintos eventos complejos que se van
sucediendo a medida que aumenta la temperatura.
As, aunque el efecto final de la esterilizacin por calor
hmedo a 121C es la desnaturalizacin y coagulacin
de las protenas, son importantes otros mecanismos de
destruccin, que justifican la utilizacin de calor hmedo
a temperaturas inferiores, como veremos ms adelante.
El primer efecto letal sera la produccin de rupturas de
cadena nica en el ADN que provocaran la muerte
celular por activacin o liberacin de enzimas con
actividad de endonucleasas.
El punto crtico aqu, para la supervivencia de la clula
sera su capacidad para reparar la lesin, funcin que
depende del estado gentico y fisiolgico de la bacteria.
A medida que aumenta la temperatura se agregara la
prdida de la integridad funcional de la membrana
citoplsmica, lo que producira interferencias en el
intercambio con el medio externo, los procesos
respiratorios y la sntesis proteica.
Por ltimo, las temperaturas ms elevadas activaran
ribonucleasas que degradando el ARNr producen la
prdida de viabilidad de las clulas expuestas.
Las temperaturas a la cual puede usarse el calor hmedo
son:
Por debajo de 100C --- Pasteurizacin
A 100C --- Ebullicin y Tindalizacin
Por encima de 100C --- Autoclavado
Pasteurizacin: se utiliza para la destruccin de
grmenes patgenos, con resistencia trmica similar o
inferior a M.tuberculosis, Brucella y Salmonella.
13

Este no es un mtodo de esterilizacin sino de
desinfeccin, donde no se destruyen ni esporos ni virus
no lipdicos (por Ej.: HAV).
Existen dos mtodos de pasteurizacin: o se calienta a
65C durante 30' o a 72C durante 15". Luego ambas se
enfran rpidamente a 10C.
Esta tcnica se utiliza fundamentalmente en la
descontaminacin de la leche.
Ebullicin: consiste en mantener un objeto o sustancia
en un bao a 100C durante 30'. Aplicado as destruye la
mayora de las formas vegetativas bacterianas, hongos y
virus lipdicos (por Ej.: Herpesvirus y HIV). En cambio
no es efectivo para la destruccin de esporos y virus no
envueltos.
La repeticin de este proceso durante tres das
consecutivos, constituye la Tindalizacin. Su
fundamento terico est dado por la destruccin de las
formas vegetetivas durante los perodos de ebullicin,
permitiendo que los esporos germinen durante el reposo
volvindose susceptibles al prximo calentamiento.
Tampoco aqu se esteriliza.
Autoclavado: utiliza vapor de agua a 121C durante 15'o
20'. Esta temperatura se logra si se obtiene una presin
de una atmsfera relativa (dos atmsferas absolutas), ya
que el aumento de la presin provoca aumentos
proporcionales en el punto de ebullicin del agua. Es el
mecanismo de destruccin microbiana ms efectivo, y
bien utilizado asegura esterilizacin. El equipo que se
utiliza es el autoclave, del cual existen distintos tipos,
como ser:
1. Vertical de manejo manual.
2. Que opera por gravedad.
3. De esterilizacin rpida.
1. AUTOCLAVE VERTICAL DE MANEJO
MANUAL: consta de dos recipientes cilndricos, uno
externo con tapa de cierre hermtico que se asegura por
mltiples tornillos y uno interno donde se pone el
material a esterilizar.
El recipiente externo contiene adems, una vlvula de
seguridad, un manmetro o termmetro y una llave de
salida o escape.
La fuente de calor puede venir incluida en el equipo,
como una resistencia elctrica o se le suministra aparte,
desde abajo, generalmente mediante gas.
Dentro del recipiente externo se coloca agua destilada, la
cual al llegar al punto de ebullicin producir el vapor
que al entrar en contacto con los microorganismos,
actuar como agente esterilizante.
Los materiales se cargan dentro del recipiente interno
que al no tener tapa permite una fluida entrada de vapor,
pero evita el contacto de estos con el agua.
El aire es mal conductor del calor, lo que impide llegar a
las 2 temperaturas necesarias, por lo que una vez cargado
y cerrado el autoclave debe purgarse. Esto se consigue
dejando la llave de escape abierta hasta que el vapor, por
arrastre, elimine el aire contenido en el equipo. Se cierra
la llave, se deja que la presin llegue a una atmsfera
relativa (15 lbs.) y luego se cuenta el tiempo.
Terminado el ciclo, se apaga la fuente de calor y se deja
descender la temperatura. No debe abrirse la tapa
hasta que la presin del sistema se iguale a la
atmosfrica !!!.
Tampoco se debe provocar una liberacin brusca del
vapor (por Ej.: abriendo la llave de escape) ya que si hay
lquidos dentro del autoclave, alcanzarn rpidamente
estado de ebullicin y se derramarn, debido a que
disminuye la presin pero no la temperatura.
2. AUTOCLAVES QUE OPERAN POR
GRAVEDAD: son equipos elctricos, automticos o
manuales. El vapor se produce dentro de una doble pared
y se libera desde la parte superior del autoclave, de
manera de desplazar por gravedad el aire hacia abajo, y
promover su escape por una llave de salida inferior.
Como precaucin debe introducirse el vapor lentamente
para que no se caliente el aire al salir.
Luego del purgado, las etapas son iguales a las del
autoclave vertical.
3. EQUIPOS DE ESTERILIZACION RAPIDA: son
automticos y consiguen un ciclo de esterilizacin en 20'.
Si bien en sus partes fundamentales son similares a los
anteriores, su funcionamiento es diferente. Poseen una
bomba de vaco que extrae rpidamente el aire del
equipo.
De este modo se reduce la presin; cuando esta llega a
15 o 20 mmHg, se libera el vapor, que en estas
condiciones se distribuye en forma homognea por todo
14
el espacio en breves minutos.
En estos autoclaves, se puede reducir el tiempo de
esterilizacin a 3' ya que se puede llevar la presin a 3
Atm. absolutas (134C).
La descompresin se logra permitiendo el ingreso de aire
filtrado y precalentado. Algunos equipos permiten
adems el secado final mediante vaco y reentrada de
aire caliente.
Mediante el autoclavado se pueden esterilizar una gran
variedad de objetos y lquidos, siempre que no
contengan por Ej.: antibiticos que pueden perder
actividad, protenas que coagulen, azcares que se
caramelicen, etc. As se esterilizan guantes, telas,
algodn, papel, lquidos, filtros, algunos plsticos y
gomas, etc.
Los lquidos a esterilizar deben estar fraccionados en
frascos cerrados pero con la tapa de rosca floja, de modo
que pueda salir el aire y entrar el vapor.
Aquellos materiales que no se encuentren dentro de
algn recipiente que los proteja de la recontaminacin al
sacarlos del autoclave, debern ser envueltos con una
doble capa de papel, de manera de formar pequeos
paquetes; entre estos objetos se encuentran: guantes,
ropa, placas de Petri, pipetas, tubos de ensayo, etc.
Se debe de tener cuidado de no sobrecargar el autoclave,
de manera tal que los paquetes y frascos impidan el flujo
libre del vapor.
No se deben esterilizar por este mtodo equipos que
resulten corrodos por el agua como instrumentos
metlicos. Tampoco polvos o aceites ya que son
impermeables al vapor.
II. CALOR SECO:
Mecanismo de accin: Es diferente al del calor hmedo.
El calor seco (o desecacin en general) provoca
desnaturalizacin de protenas, lesiones por oxidacin y
efectos txicos por niveles elevados de electrolitos.
La accin letal es el resultado del calor trasmitido desde
el material con el cual los microorganismos estn en
contacto, y no desde el aire caliente que los rodea.
Existen tres formas principales de esterilizacin por calor
seco: flambeado, incineracin y mediante la utilizacin
del horno Pasteur. Hablaremos solamente de esta
ltima.
Para ello se necesita alcanzar mayor tiempo y
temperatura que en el autoclave, debindose mantener un
objeto a 160C durante 2hs. El motivo de estos
incrementos estaran dados porque la ausencia de agua
disminuira el nmero de grupos polares de las cadenas
peptdicas, lo que dara mayor estabilidad a las
molculas bacterianas, por lo que se requerira mayor
energa para abrirlas.
HORNO PASTEUR O POUPINELL: consiste en un
recinto metlico de doble pared con aislante entre ambas
(para evitar la prdida de calor) y una puerta.
La fuente de calor suele ser elctrica y est incorporada.
Posee un ventilador que facilita la circulacin del aire
caliente, para homogeneizar la temperatura.
Un termmetro (con alcance mnimo de 200C) visible
desde afuera, registra la temperatura del interior del
recinto.
Por calor seco se pueden esterilizar: materiales de
inyectables, vidrios, instrumentos quirrgicos y objetos
metlicos, as como aceites, vaselinas y polvos, que
como ya se ha dicho son impermeables al vapor.
Precauciones:
! Colocar paquetes pequeos y espaciados, para
no interferir con la difusin del calor.
! La recarga del horno debe hacerse cuando este
se encuentre fro, de lo contrario su interior
alcanzar la temperatura antes que el material a
esterilizar, por lo que se medir mal el tiempo.
Controles de esterilizacin: Existen tres tipos: fsicos
qumicos
biolgicos
Controles fsicos: estn relacionados al operario que
realiza el procedimiento y la vigilancia de ciertos
parmetros como: presin, tiempo, temperatura, etc.
Controles qumicos: consiste en tiras de papel con una
sustancia que cambia de color al ser expuesto a la
temperatura correspondiente. La ventaja de este mtodo,
es la rapidez con que se sabe el resultado, ya que es
inmediato. La gran desventaja es que dice poco sobre el
tiempo de exposicin, por lo que no asegura un
procedimiento correcto.
Estos controles deben utilizarse en todos los ciclos de
esterilizacin
Controles biolgicos: consisten en exponer esporos
15
bacterianos al ciclo de esterilizacin y luego verificar su
viabilidad.
Son los ms seguros. Dentro de una ampolla se encuentra
un medio de cultivo apropiado para el desarrollo de las
bacterias en estudio. Por fuera de esta, un tubo plstico,
contiene una cinta de papel marcador de pH,
impregnado con esporos de bacterias capaces de resistir
temperaturas cercanas a los procesos realizados.

Se utilizan esporos de Bacillus estearothermophilus en

el autoclave y de B.subtilis en la poupinell.

Este sistema se coloca dentro del paquete menos

accesible ya sea para el calor o el vapor. Finalizado el
ciclo de esterilizacin, se rompe la ampolla (por presin
manual
PRINCIPALES CARACTERISTICAS DE LOS METODOS DE ESTERILIZACION POR AUTOCLAVADO Y
POUPINELL

AUTOCLAVE POUPINELL

Temp. requerida 121C 160C

Tiempo 15-20' 2 hs.

Coagulacin y desnaturalizacin de protenas. Desnat. proteica, lesiones por oxidacin y

Mec. de accin toxicidad por producir aumento de
electrolitos.

Modo de accin Por difusin de vapor de agua. Calentamiento por contigidad.

Materiales Vidrios, medios de cultivo, gomas, telas, algodn, Vidrios, instrumentos metlicos, polvos,
guantes, algunos plsticos, etc.. aceites y vaselinas, etc..
esterilizables
Materiales Medios con ciertos ATBs, azcares o protenas; Gomas; plsticos; instrumentos
no esterilizables polvos; vaselinas y aceites; metales oxidables; .termosensibles; medios con ATBs,
instrumentos mdicos termosensibles como azcares y protenas; guantes; algodn;
broncoscopio, etc. papeles.

sobre el tubo) , esto pone en contacto el medio con los esporos) y se incuba en un bao (a 60C para Bacillus
estearothermophilus y a 37C para B.subtilis) durante ms de 48hs. Si existen microorganismos viables, su metabolismo
provocar un cambio de pH que har virar el
color del marcador, revelando el fallo del procedimiento, por lo que deber volverse a esterilizar todo.
Este tipo de controles debe realizarse peridicamente, o cuando se dude de la efectividad del procedimiento.

B. ESTERILIZACION POR RADIACIONES

Con este fin pueden utilizarse tanto las radiaciones ultravioletas (UV) como las ionizantes y rayos infrarrojos.

Como el estudiante recordar, con respecto a la naturaleza de la luz se acepta una combinacin entre la teora cuntica y la
electromagntica. Es decir, que existe una partcula indivisible (denominada cuanto) constituida por un fotn que se
desplaza a travs del espacio describiendo una trayectoria ondulatoria ( fig.4).

16
La energa de un fotn es inversamente proporcional a la longitud de onda de la radiacin, sabiendo que longitud de onda
es la distancia que existe entre dos puntos correspondientes de la trayectoria ondulante (Fig. 4). Parte de esta energa es
absorbida por los sistemas biolgicos cuando estos son expuestos a las radiaciones. La fraccin de energa absorbida es
directamente proporcional a la

intensidad de la radiacin, al tiempo de exposicin a la misma y a un coeficiente de absorcin que es caracterstico de cada
material.

Veremos qu sucede a nivel molecular cuando las radiaciones interactan con la materia.

Cuando la radiacin incidente tiene energa suficiente puede elevar el nivel energtico de los electrones, hasta el punto de
arrancarlos de su orbital (producindose ionizaciones).

Si la energa es menor, los electrones aumentan su nivel de energa pero slo temporalmente, volviendo a su estado inicial
luego de un perodo de tiempo.

Este estado elevado de energa se denomina estado excitado. La molcula excitada podr transferir ese exceso de energa a
otras, en forma de energa vibratoria (producindose calor); o disiparla en forma de radiacin electromagntica.

Debido a la relativamente baja cantidad de energa que son capaces de transmitir los rayos UV, slo afectan a los electrones
de los tomos perifricos de las molculas, producindose solo estados de excitacin.

Las radiaciones ionizantes son las que pueden extraer electrones de sus orbitales.

Los rayos infrarrojos slo pueden provocar energa vibratoria, por lo que slo generan calor.

Hablaremos a continuacin solamente de las radiaciones UV ya que son las ms utilizadas en nuestros laboratorios.

No obstante, el estudiante debe saber que las radiaciones ionizantes son cada vez ms utilizadas en los laboratorios como
tcnicas de esterilizacin de rutina, ya que los adelantos tecnolgicos han simplificado estos equipos y su manipulacin. Se
utilizan para la esterilizacin de materiales descartables como jeringas, agujas, materiales para vas, etc.

RADIACIONES UV:

Mecanismo de accin: el principal mecanismo del efecto letal de la luz UV sobre las bacterias, se atribuye a su absorcin
por el ADN y el resultante dao de este. As provocan la formacin de uniones covalentes entre los residuos de pirimidina
adyacentes pertenecientes a la misma cadena, lo que provoca la formacin de dmeros de pirimidina de tipo ciclobutano
(Fig. 5).

Esto produce distorsiones en la forma del DNA e interfiere en el apareamiento normal de las bases.

El resultado final es la inhibicin de la sntesis de ADN y secundario a esto, inhibicin del crecimiento y la respiracin.

APLICACIONES: estas radiaciones pueden producirse artificialmente con lmparas de vapor de mercurio.

Son igualmente efectivas para Gram (+) y Gram(-).

Su principal uso es para esterilizar el aire y superficies, ya que no penetran en slidos y lo hacen pobremente en lquidos.

C. ESTERILIZACION POR METODOS MECANICOS:

FILTRACION
17
Es el mtodo usado en el laboratorio para esterilizar lquidos termolbiles.

Existen distintos tipos de filtros: de asbesto-celulosa, de vidrio, de cermica y de steres de celulosa o membranas. Las
membranas estn compuestas por steres de celulosa biolgicamente inertes. Los poros varan desde 0.025m a 25m de
dimetro, siendo los de 0.22m los ms utilizados ya que son lo suficientemente pequeos para detener a todas las
bacterias. Con este mtodo se esterilizan: azcares, urea, sueros, antibiticos, etc.

Los filtros de membrana tambin se utilizan en Microbiologa para otros propsitos. Dado que son inertes, proporcionan un
buen medio para recoger microorganismos, por ejemplo para cultivar bacterias que se encuentran en bajas concentraciones
en un gran volumen de lquido. El mecanismo de accin es bastante simple: detienen todas las partculas que posean un
tamao mayor que los poros. En realidad los "poros" quedan formados por los espacios que resultan de la superposisin de
las fibras de las distintas capas que forman la membrana. As, algunas partculas de menor tamao son retenidas por otros
mecanismos como las fuerzas de Van der Waals o por suma de partculas retenidas previamente, etc. por lo cual "el
tamao del poro" es un valor virtual definido por el tamao de la partcula retenida, ms que por un dimetro real y
medible.

ALGUNAS RECOMENDACIONES AL FINAL DEL CAPITULO

I. El mecanismo de esterilizacin ms efectivo es el AUTOCLAVADO, siempre que sea posible, este debe ser el
procedimiento a elegir.

II. La etapa de purgado debe hacerse a temperaturas moderadas, ya que a altas temperaturas el vapor comienza a salir
sin arrastrar al aire, lo que nos lleva a cerrar la llave de escape antes de tiempo.

III. Los materiales que vienen esterilizados de origen y que son de un nico uso NUNCA DEBERAN SER
REESTERILIZADOS NI REUSADOS.

IV. En caso de tener que manejar material contaminado como ser instrumental y ropa luego de un acto quirrgico, este
debe ser manejado con guantes y pasado por un proceso de autoclavado previo a la limpieza de restos orgnicos
(con el fin de eliminar todos los microorganismos, salvo los que puedan estar protegidos por elementos como
sangre, secreciones, restos necrticos, etc.), luego si, esterilizarlos definitivamente.

Ciclo Decontaminacin-Limpieza-Esterilizacin

V. Cuando se use un antisptico debern tenerse algunas precauciones:

# lavar la regin previamente para eliminar restos orgnicos;

# retirar con abundante agua cualquier residuo de jabn;
# secar la superficie, ya que se pueden provocar diluciones excesivas del producto (fundamentalmente en
el caso de los iodforos y alcoholes) disminuyendo su actividad;
# dejarlo actuar un tiempo apropiado, se recomiendan 2' antes de realizar cualquier procedimiento.

VI. Con respecto al uso de jabones: estos debern quedar en lugares secos ya que de estar sumergidos en agua, pueden
transformarse en un reservorio de grmenes (sobre todo Gram (-).
Las jaboneras debern lavarse con frecuencia y los recipientes para jabn lquido debern removerse
aproximadamente cada 15 das, tirando el contenido que les quede, limpindolos y agregndoles soluciones
nuevas.
VII. Por ltimo pero no menos importante, la salud de los pacientes y del personal en cualquier servicio mdico
depender en gran parte de la medida en que todos los integrantes del grupo de salud, incluyendo los estudiantes, trabajen
siempre medularmente con el criterio de asepsia.

Actividades Prcticas:

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PRACTICO N1

El estudiante realizar en el autoclave la esterilizacin del material suministrado. Para esto contar con un equipo que
esquemticamente es as:

Fig. 6: Autoclave

Procedimiento:

1. Poner 2.5 lts. de agua destilada en el autoclave.

2. Disponer el material a esterilizar sobre una plataforma evitando amontonamiento. Los frascos deben estar con la
tapa floja y las cajas metlicas con la tapa entreabierta.

3. Cerrar y atornillar la tapa del autoclave.

4. Verificar que la llave de salida se encuentre abierta.

5. Encender la fuente trmica para hervir el agua dentro del autoclave.

6. Purgar hasta 5' despus que se vea salir por la llave de escape solo vapor.

7. Cerrar la llave.

8. Controlar el aparato de registro que puede ser un manmetro calibrado en grs./cm2 o lbs/sq.in (libras por pulgada
cuadrada), o un termmetro en C o F. Cuando el aparato registre 1.054 grs./cm2, 15 lbs/sq.in, 121C o 249.8F, se
empezar a contar el tiempo.

9. Mantener el registro constante durante 15-20 minutos.

10. Apagar la fuente trmica y dejar enfriar sin abrir.

11. Cuando la temperatura o presin haya descendido, abrir la llave de escape de vapor.

12. Abrir el autoclave.

Los materiales salen hmedos por el contacto con el vapor. Aquellos que estn envueltos en papel debern secarse en la
estufa, ya que el papel mojado es muy fcil de romper y el material se contaminara nuevamente.

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PRACTICO No 2:
Desinfeccin por Hipoclorito de Sodio

Se estudiar el efecto del Hipoclorito de Sodio para la desinfeccin del agua.

Se parte de 10 ml de agua contaminada con una concentracin conocida e importante de E.coli (10 UFC/ml).

Se aplica hipoclorito de sodio segn las recomendaciones (2 PPM), a partir de una solucin madre de 50 PPM.

Luego se realizan cultivos del agua con asa calibrada de 0.05 ml en agar sangre a los 0.5 y 15 minutos de agregado el
desinfectante. Se incuban las placas a 37C durante 24 hs. y se leen los resultados.

PRACTICO No 3:
Lavado y antisepsia de manos

Se realizarn impresiones de los dedos contaminados en placas de agar sangre. A continuacin se proceder a lavar las
manos con jabn y a secarlas con aire caliente o toallas de papel. Se efectuarn nuevas impresiones luego del lavado. Por
ltimo se aplicar un antisptico: alcohol 70 dejndolo actuar por 1' y luego secado; se realizan nuevas impresiones en una
tercera placa y se incuban las tres, discutindose luego de 24 hs. los resultados.

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