I.

INTRODUCCIN

Nuestro pas est considerado a nivel mundial como un pas megadiverso y se

encuentra dentro de los 5 pases con mayor nmero de especies vegetales. Sin
embargo, se estima que del total de las plantas existentes en nuestro pas tan solo
el 10% se ha utilizado con fines medicinales, a pesar de que desde la poca
prehispnica los antiguos pobladores hacan uso de preparaciones a base de
plantas para tratar diversas enfermedades. Como prueba de ello se encuentran
libros como el Libellus de Medicinalibus Indorum Herbis (cdice Badiano) escrito
en 1552 por Martn de la Cruz, la Historia de las cosas de Nueva Espaa escrito
en el siglo XVI por fray Bernardino de Sahagn y la Historia Natural de Nueva
Espaa escrito alrededor de 1570 por el doctor Francisco Hernndez, entre otros.

Dentro de la riqueza florstica mexicana, se encuentra el rbol Prunus serotina Ehrh

(capuln), cuya corteza, hojas, inflorescencias y frutos han sido utilizados desde la
poca de los Aztecas hasta nuestros das para el tratamiento de padecimientos
pulmonares, intestinales y cardiovasculares.

En la actualidad, las enfermedades cardiovasculares se han convertido en un grave

problema de salud que se ve reflejado en las estadsticas de la OMS, en las cuales,
estas enfermedades se sitan como la principal causa de muerte a nivel mundial.
Nuestro pas no es la excepcin, debido a que los malos hbitos alimenticios, la
falta de ejercicio, el tabaquismo y el estrs emocional que imperan en nuestra
sociedad han hecho que padecimientos como la hipertensin afecte cada vez ms
a un mayor nmero de personas.

Con base en estos antecedentes y considerando que pocas plantas con uso
medicinal han sido objeto de estudio cientfico, en esta tesis se propone la
realizacin del estudio farmacolgico del extracto acuoso de fruto de P. serotina,
con el fin de contribuir a validar el uso de esta especie vegetal en el tratamiento de
padecimientos pulmonares, intestinales y cardiovasculares.

1
II. ANTECEDENTES

II.1 Enfermedades cardiovasculares

Las enfermedades crnicas no transmisibles (ECNT) son uno de los mayores retos
que enfrenta el sistema de salud en Mxico, debido a que existe un gran nmero de
personas aquejadas por estos padecimientos, por lo que se les considera la causa
ms frecuente de incapacidad prematura. Las ECNT contribuyen de manera
importante a la mortalidad general, ya que tan solo en Mxico en el ao 2000, estas
enfermedades causaron el 73.3% de las muertes y adems generan un impacto en
la economa nacional, debido a que su tratamiento tiene un costo elevado (OMS,
2006; Crdova-Villalobos y col., 2008).

Dentro de las ECNT se encuentran las enfermedades cardiovasculares (ECV), que

son padecimientos que afectan al corazn y a los vasos sanguneos y que, debido
a la transicin epidemiolgica sufrida en los ltimos aos, estn situadas como las
principales causas de muerte a nivel mundial y en Mxico, junto con la diabetes,
ocupan los primeros lugares de morbilidad y mortalidad (Ferreyra y col., 2007;
OMS, 2006 y 2009). Las ECV se relacionan con hbitos de vida propios de las
comunidades urbanas, donde es comn el exagerado consumo de grasas
saturadas, la falta de actividad fsica, el tabaquismo y la tensin emocional, que son
factores que contribuyen a generar un aumento progresivo de padecimientos como:
cardiopata isqumica, hipertensin arterial, enfermedad cerebrovascular, entre
otras (Ferreyra y col., 2007).

La hipertensin, definida como la presin sistlica igual o superior a 140 mm Hg y

diastlica igual o superior a 90 mm Hg (NOM-030-SSA2-199), es uno de los
padecimientos prioritarios que hay que combatir, ya que de acuerdo a la Encuesta
Nacional de Salud elaborada en el ao 2000, la prevalencia de la hipertensin
arterial sistmica en Mxico es del 30.8% (Olaiz-Fernndez y col., 2006),
convirtindola en un problema grave, sobre todo porque un porcentaje significativo

2
de esta poblacin hipertensa se encuentra en la etapa econmicamente activa y,
adems, es considerada como uno de los principales factores de riesgo para las
enfermedades cerebrovascular y vascular coronaria (Cruz, 2001; Mendoza, 2006).

II.2 La biodiversidad de Mxico y su relacin con la medicina tradicional mexicana

La palabra biodiversidad se refiere a la variabilidad de la vida e incluye los

ecosistemas terrestres y acuticos, los complejos ecolgicos de los que forman
parte, as como la diversidad entre las especies y dentro de cada especie. En
Mxico, gracias a su topografa y variedad de climas, se crean mosaicos con
condiciones ambientales que promueven una gran variedad de hbitats y de formas
de vida. Por tal motivo, nuestro pas es considerado a nivel mundial uno de los 12
pases megadiversos y se encuentra dentro de los 5 pases con mayor nmero de
especies de vegetales utilizadas para tratar enfermedades cardiovasculares a nivel
internacional (PROFEPA, 2010). La riqueza de la naturaleza de nuestro pas y la
necesidad de encontrar recursos accesibles para tratar diversos padecimientos,
han dado como resultado que en Mxico desde tiempos prehispnicos, las plantas
medicinales sean parte esencial de las estrategias generadas por la poblacin para
enfrentar las enfermedades cotidianas como trastornos gastrointestinales,
infecciones respiratorias y enfermedades cardiovasculares (FEUM Herbolaria,
2001). Por ejemplo, el rbol de Prunus serotina (capuln) es utilizado en la
medicina tradicional mexicana para el tratamiento de padecimientos pulmonares,
cardiacos, como la hipertensin, diarrea, tos, entre otros (Martnez, 1991; Mills y
Willoughby, 1996; Gioanetto y Blas, 1998).

II.3 El gnero Prunus

El gnero Prunus, encontrado principalmente en zonas templadas, incluye a 400

especies de las cuales muchas son conocidas por sus frutos comestibles como el
chabacano (P. armeniaca, originario de China), el ciruelo (P. domestica, originario
de Asia), la almendra (P. dulcis, originario de Asia), el capuln (P. serotina, originario

3
de Mxico) y el durazno (P. persica, originario de China) (Lpez y Snchez de
Lorenzo, 2001; Caldern de Rzedowski y Rzedowski, 2001; 2005).

Este gnero comprende rboles o arbustos perennifolios o caducifolios, a veces

espinosos; el fruto, en forma de drupa y a veces carente de pulpa jugosa, posee
hueso liso o rugoso y, por lo general, contiene una sola semilla con endospermo
escaso o ausente (Caldern de Rzedowski y Rzedowski, 2001; 2005).

De este gnero, se han aislado varios metabolitos secundarios, de los cuales a

continuacin se mencionan algunos:

Flavonoides, compuestos presentes en los vegetales que protegen al organismo

del dao producido por agentes oxidantes (Martnez-Florez y col., 2002; Jung y
col., 2003); se han aislado glucsidos de camferol (Olszewska y Wolbis, 2001;
Jung y col., 2003) y de quercetina (Olszewska y Wolbis, 2001; Milbury y col.,
2006). Tambin se han obtenido antocianidinas, pigmentos vegetales
responsables de los colores rojo y rojo-azulado de las cerezas (Martnez-Florez
y col., 2002), as como glucsidos de cianidina (Ordaz-Galindo y col., 1999;
Deineka y col., 2004; Ruiz y col., 2005).
Glicsidos cianognicos, compuestos sintetizados a partir de aminocidos como
parte del metabolismo vegetal que al hidrolizarse liberan cianuro de hidrgeno
(Villar y Daz, 2006). Se han aislado tambin la prunasina y la amigdalina
(Santamour, 1998; Yoshikawa y col., 2002; Lu y col., 2005).
Triterpenos, como el cido urslico y derivados de ste (Wolbis y col., 2001;
Shengmin y col., 2002; Amico y col., 2006).
Compuestos aromticos simples: cido procatquico (Shengmin y col., 2002;
Kayano y col., 2004; Milbury y col., 2006) y cido vainillnico (Kayano y col.,
2004; Milbury y col., 2006).
Fenilpropanoides, como el cido cafico, el cido p-cumrico y un glicsido del
cido ferlico (Kayano y col., 2004).

4
II.3.1 Prunus serotina: distribucin geogrfica, taxonoma y caractersticas
morfolgicas

El rbol de Prunus serotina Ehrh. crece en zonas templadas, desde el sur de

Canad hasta el sur de Bolivia y a altitudes entre 1,000 y 3,000 metros en Mxico,
encontrndose en estados como Chihuahua, Coahuila, D.F., Hidalgo, Guanajuato,
Jalisco, Michoacn, Morelia, Oaxaca, Quertaro, San Luis Potos, Tamaulipas y
Veracruz (CONAFOR, 2008).

Su nombre cientfico fue propuesto por Ehrhart y aceptado en 1788 (McVaugh,

1951), mientras que los diversos nombres comunes que recibe en Mxico
dependen de la regin y la lengua indgena predominante: Cerezo (Ario de
Rosales, Mich.); Shencua, Shengua, Xengua (l. tarasca, Mich.); Cusabi (l.
tarahumara, Chih.); Uasiqui, Jeco (l. guarigia, Chih.); Pakshumk (l. mixe, Oax.); T-
nundaya (l. mixteca, Oax.); Tzu\'uri (l. cora, Nay.); Pat, Shimal-ma-lu (l. chontal,
Oax.); Capulitaunday (l. zapoteco, Oax.); Detze, Ghohto (l. Otom, Qro.)
(CONAFOR, 2008). La clasificacin taxonmica de P. serotina, de acuerdo a la
Comisin Nacional para el Conocimiento de la Biodiversidad (CONABIO, 2010), se
describe en el Cuadro 1.

En cuanto a sus caractersticas morfolgicas, P. serotina se caracteriza por ser un

rbol de 5 a 15 m de altura, con un dimetro a la altura del pecho de 1.2 m y copa
ancha de forma ovoide que produce una sombra densa. Las hojas son simples,
alternas, pecioladas, ovaladas a lanceoladas, de 6 a 15 cm de largo por 2 a 5 cm
de ancho; se les observa un haz verde oscuro lustroso y son de margen aserrado.
El tronco presenta ramas alternas, erguido-extendidas y su corteza es de color caf
griscea de aspecto casi liso. Las flores en este rbol son numerosas, pequeas y
de color blanco, generalmente se encuentran agrupadas en racimos axiales
colgantes y largos, de 10 a 15 cm, con pedicelos de 5 a 10 mm de largo y crecen
de enero a marzo (Gamboa, 2007; CONAFOR, 2008).

5
 Cuadro 1. Clasificacin taxonmica de P. serotina

Nombre cientfico Prunus serotina Ehrh

Reino Plantae
Subreino Tracheobionta
Divisin Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Subclase Rosidae
Orden Rosales
Familia Rosaceae
Gnero Prunus
Especie serotina
P. serotina var. eximia
P. serotina var. rufula
Variedades
P. serotina var. serotina
P. serotina var. virens

El fruto del rbol de P. serotina, clasificado como una drupa que fructifica entre
mayo y agosto, presenta forma esfrica con un dimetro de entre 6 y 8 mm, aunque
en ocasiones puede llegar a ser hasta de 1 cm; la piel del fruto es de color negro
rojizo en la madurez y verde en estado inmaduro; su sabor es agridulce y suele ser
algo astringente (Ordaz-Galindo y col., 1999; Caldern de Rzdedowski y
Rzdedowski, 2001; Gamboa, 2007).

El fruto contiene nicamente una semilla, rodeada por un hueso protector

(endocarpio leoso), que se caracteriza por ser esfrica y de sabor amargo
(Gamboa, 2007). En la Figura 1 se muestran imgenes del rbol de P. serotina y de
sus hojas, flores y frutos.

6
 Figura 1. rbol, hojas, flores y frutos de P. serotina

II.3.2 P. serotina: usos en la medicina tradicional mexicana y su potencial

econmico

Algunas de las partes del rbol de P. serotina han sido utilizadas, desde la poca
prehispnica, para aliviar diversos padecimientos e incluso, en la actualidad, la
tradicin del uso de esta planta con fines medicinales sigue vigente en algunos
lugares de Mxico. Los aztecas empleaban la planta para tratar la diarrea y como
desinflamante. La decoccin de sus hojas se utiliza en el tratamiento de la diarrea y
el dolor abdominal (Lago Patzcuaro), como antiinflamatorio renal (Amealco, Qro.),
para tratar la tos y los resfriados (Xochimilco, D.F.) (Gioanetto y Blas, 1998) y para
el tratamiento del asma y la hipertensin (Mills y Willoughby, 1996).

El fruto maduro se consume entero para el insomnio, en jarabe (maceracin en

agua con azcar) para el tratamiento de la tos (Patzcuaro) y se utiliza para preparar
otros remedios para tratar la diarrea (Martnez, 1991; Gioanetto y Blas, 1998). En
cuanto a la corteza, su decoccin se utiliza como tnico, sedante, para el

7
tratamiento de la diarrea con sangre (Lago de Patzcuaro) y para tratar
padecimientos pulmonares y cardiacos (Mills y Willoughby, 1996; Gioanetto y Blas,
1998).

Adems de su amplio y destacado uso en la medicina tradicional mexicana, este

rbol representa un potencial econmico por sus diversos usos: su madera se
utiliza como material combustible para producir lea o carbn, en la decoracin de
interiores y en carpintera en general. Sus frutos, por su agradable sabor, han sido
utilizados como alimento por los seres humanos, consumindolo en diversas
formas: fresco, en tamales, en conserva (jalea, mermelada), en bebidas frescas e
incluso, tras su fermentacin, en bebidas alcohlicas. A pesar de que el rbol es
poco tolerante a la sombra, presenta una baja necesidad de riego, gran tolerancia a
la contaminacin ambiental, a los suelos cidos y pedregosos y posee un efecto
restaurador que permite que sea utilizado para la recuperacin de terrenos
degradados, sitios en donde hubo explotacin minera, y para la conservacin del
suelo y control de la erosin. Esta especie tambin es utilizada como planta
ornamental por la belleza de su follaje, para proveer sombra y refugio (Martnez,
1991; Gamboa, 2007; CONAFOR, 2008).

II.3.3 Estudios fitoqumicos y farmacolgicos sobre P. serotina realizados

anteriormente

En el 2009, nuestro equipo de trabajo llev a cabo el estudio farmacolgico de diez

plantas mexicanas con uso etnomdico para el tratamiento de enfermedades
cardiovasculares. En el Cuadro 2 se muestran los nombres cientficos de estas diez
especies, sus nombres comunes, las partes de la planta que se emplean y el modo
de preparacin.

Entre estas especies, el extracto acuoso preparado a partir de las hojas y ramas de
P. serotina mostr una relajacin dependiente de la concentracin (concentracin
efectiva media (CE50) = 190.4 g/mL; efecto mximo (Emax) = 70.2%) del msculo

8
liso arterial (Ibarra-Alvarado y col., 2010), lo cual constituy la base para llevar a
cabo el estudio fitoqumico biodirigido de las hojas de esta planta.

Cuadro 2. Plantas mexicanas utilizadas para el tratamiento de ECV

Nombre botnico y Parte de la planta/
Nombres comunes Uso etnomdico
familia modo de preparacin
Toronjil morado, toronjil
rojo, toronjil colorado, Para el
Agastache mexicana Planta entera/
tlalahuhuetl tratamiento de
(Kunth) Lint y Epling Decoccin tomada
(nahuatl), tlalmatl enfermedades del
(Lamiaceae) por va oral
(nahuatl), pinkil corazn
(tepehua)
Caldern, cojojehuite,
Bocconia contsitslats (totonaca), Tallos/
frutescens L. cuatlataya, guachile, Anti-hipertensivo Decoccin tomada
(Papaveraceae) inguande, llora sangre, por va oral
palo santo

Hediondilla, quinoa Partes areas/

Chenopodium Anti-hipertensivo y
negra, yuyo negro, Mezcladas con la
murale L. para tratar la
quelite de perro, sopa, se toman por
(Chenopodiacea) diarrea
quelite de puerco va oral

Flor de manita,
Chirantodendron macpalxchitl Tratamiento de
pentadactylon (nahuatl), mapilxchitl enfermedades del Flores/ Decoccin
Larreat (nahautl), teyacua, corazn y de los tomada por va oral
(Sterculiaceae) mapasuchil, mano de nervios
len
Dracocephalum Tratamiento de Planta entera/
Toronjil, toronjil azul,
moldavica L. enfermedades del Decoccin tomada
toronjil chino
(Lamiaceae) corazn por va oral

Cuadro 2. Plantas mexicanas utilizadas para el tratamiento de ECV (continuacin)

Nombre botnico y Nombres comunes Uso etnomdico Parte de la planta/

9
 familia modo de preparacin
Tratamiento de
Magnolia
Magnolia, palo de enfermedades del Flores/ Decoccin
grandiflora L.
cacique, semramis corazn y tomada por va oral
(Magnoliaceae)
antihipotensor
Prunus serotina ssp.
capuli Capuln, pat
Tallos/ Decoccin
(Cav. ex Spreng) (chontal), shencua Antiarrtmico
tomada por va oral
McVaugh (tarasco)
(Rosaceae)
Pici-gui (zapotec),
Psittacanthus
cuautzictli Planta completa/
calyculatus
(nahuatl), Anti-hipertensivo Decoccin tomada por
G. Don
chak-xkiu (maya), va oral
(Loranthaceae)
injerto
Duraznillo, hierba
Solanum rostratum del sapo, Partes areas/
Anti-hipertensivo y
Dunal ayohuitztle, hierba Decoccin tomada por
para tratar la diarrea
(Solanaceae) del gato, mala va oral
mujer
Sechium edule Sw. Hojas/ Decoccin
Chayote Anti-hipertensivo
(Cucurbitaceae) tomada por va oral

En este estudio, las fracciones obtenidas de la particin del extracto metanlico con
acetato de etilo y diclorometano se evaluaron mediante el modelo de aorta aislada
de rata y se observ que la fraccin de acetato de etilo present mayor actividad
(porcentaje de relajacin), por lo cual se someti a fraccionamiento cromatogrfico.
De este fraccionamiento, se purificaron tres compuestos conocidos: el hipersido,
el cido urslico y la prunina. Los dos primeros relajaron la aorta de rata con mayor
eficacia. En el Cuadro 3 se muestran los valores de CE 50 y Emax del efecto
vasodilatador inducido por los compuestos purificados de P. serotina (Ibarra-
Alvarado y col., 2009).

10
 Cuadro 3. Valores de CE50 y Emax del efecto vasodilatador inducido por los compuestos
purificados de P. serotina

Compuesto CE50 (g/mL) Emax (%)

cido urslico 154.4 7.5 94.1 5.9
Hipersido 91.3 14.1 92.3 7.7
Prunina 66.0 19.4 44.2 5.6

Previamente, Bissels y colaboradores (1974) haban logrado purificar el aldehdo

urslico a partir de las hojas del rbol de P. serotina y Olszewska (2005) haba
identificado, tanto en las hojas como en las inflorescencias, la presencia de
glicsidos de quercetina, camferol e isoramnetina (Cuadro 4). A estos ltimos se les
ha atribuido diversas propiedades, entre ellas, la de inducir vasodilatacin, por lo
que estos metabolitos secundarios pudieran ser tiles en el tratamiento de la
hipertensin.

Cuadro 4. Flavonoides aislados e identificados en P. serotina (Olszewska, 2005)

11
 Compuestos

OH OH

HO O HO O

OH
HO OH
OH OH
O O
H
O
OH O OH O
OH O
CH2OH

camferol-3-O--D-glucopiransido camferol-3-O--L-arabinofuransido
(astragalina) (juglanina)

Cuadro 4. Flavonoides aislados e identificados en P. serotina (continuacin)

Compuestos

OH
OH
OH
HO O

HO O
OH
O HO
O
OH O OH O
O OH
OH O OH
OH
OH

quercetina-3-O-galactsido
camferol-3-O--D-xilopiransido
(hiperina)

OH OH

OH OH OH OH

HO O
HO O
OH
O O
O HO
OH
O
OH O OH OH
OH O

OH O O
HO

quercetina-3-O-(2-O--L-ramnopiranosil)- quercetina-3-O--L-arabinopiransido
-D-glucopiransido (guaijaverina)

OH OH

OH OH

HO O
HO O
OH
OH
HO
O
O OH
O
O OH OH O OH
OH O

12 OH

quercetina-3-O--glucopiransido quercetina-3-O--L-arabino furansido

(isoquercetrina) (avicularina)
Posteriormente, se inici el estudio farmacolgico del fruto de P. sertina, para lo
cual se hicieron recolectas en tres lugares diferentes: Cholula, Puebla; Huimilpan,
Quertaro y Huejotzingo, Puebla. Con el fin de garantizar la extraccin de
metabolitos secundarios de diferentes polaridades y teniendo en cuenta que las
preparaciones empleadas etnomdicamente con fines medicinales incluyen
decocciones en agua y licores, se procedi a preparar extractos acuosos y
orgnicos (etanol y diclorometano) de los frutos y a obtener el aceite esencial de los
mismos para evaluar su actividad sobre la musculatura lisa arterial y bronquial, ya
que solo se haba reportado la presencia de antocianidinas, como la cianidina-3-O-
glucsido y la cianidina-3-O-rutinsido, en la piel del fruto (Ordaz-Galindo y col.,
1999).

Los resultados obtenidos de la evaluacin farmacolgica indicaron que los frutos

provenientes de las recolectas de Huimilpan y Cholula contienen mayor cantidad de
metabolitos polares que pudieran ser los responsables del efecto vasodilatador
observado. En cambio, el extracto de diclorometano y el aceite esencial de los
frutos recolectados en Huejotzingo mostraron mayor eficacia, lo que sugiri que los
metabolitos no polares son responsables, al menos en parte, del efecto
vasodilatador presentado por el fruto de P. serotina. De acuerdo a lo anterior y con
los antecedentes del gnero Prunus, resultaba probable que la planta tuviera
metabolitos polares como glucsidos de flavonoides y, adicionalmente, otros
compuestos no polares capaces de inducir la relajacin de la musculatura lisa
vascular (Villa De la Torre, 2008; Luna, 2009).

Debido a que la identidad de los posibles metabolitos apolares contenidos en la

planta se desconoca, se emprendi el estudio fitoqumico biodirigido del extracto
de diclorometano preparado a partir de los frutos de P. serotina. Se obtuvieron 8
fracciones primarias por fraccionamiento cromatogrfico, de las cuales se eligieron
las que presentaron mayor efecto vasodilatador (PD-III y PD-IV), para

13
posteriormente someterlas a cromatografa en columna y poder aislar y purificar los
metabolitos secundarios (Cuadro 5).
Cuadro 5. Compuestos aislados del extracto de diclorometano de P. serotina

Fraccin Compuesto purificado

Uvaol
PD-III
Acido urslico
Aldehdo urslico
PD-IV
-sitosterol

La evaluacin farmacolgica del cido urslico mostr una significativa

vasodilatacin (CE50 = 154 7.5 g/mL; Emax = 94.1 5.9%), dependiente de la
concentracin, respecto al control positivo, que fue acetilcolina (ACh) (CE 50 = 8.7
0.8 g/mL; Emax = 69.5 5.7%).

De manera paralela, se inici el anlisis por cromatografa de gases acoplada a

espectrofotometra de masas del aceite esencial del fruto de P. serotina, el cual
indic que este aceite contiene 58 componentes, entre los cuales se encontraron el
alcohol benclico, el benzaldehdo, el cinamaldehdo, el alcohol cinmico, el -
metoxytolueno, el bencil-etil ter y el bencilbutil ter. Se evalu el efecto
vasodilatador de los cuatro primeros componentes y los resultados indicaron que el
alcohol cinmico (CE50 = 48.1 5.4 g/mL) relaj la aorta con mayor potencia que
los otros tres componentes.

Adicionalmente, se elucid el mecanismo de accin vasodilatador de los cuatro

componentes del aceite esencial anteriormente mencionados. El alcohol benclico,
el benzaldehdo y el cinamaldehdo presentaron un mecanismo de accin
vasodilatador independiente de endotelio, el cual involucra, al menos en parte, la
activacin de los canales de K + voltaje dependientes y activados por ATP. El alcohol
cinmico revel que su mecanismo de accin es mediado por la activacin de la
guanilato ciclasa soluble (sGC, por sus siglas en ingls) y de ambos tipos de
canales de potasio (Luna, 2009).

14
Debido a que slo se ha reportado la presencia de glicsidos cianognicos como la
amigdalina y prunasina en la semilla del fruto de P. serotina (Santamour, 1998),
nuestro equipo de trabajo comenz su estudio qumico y farmacolgico tanto de la
semilla tostada como sin tostar. La microextraccin en fase slida de la semilla
tostada indic la presencia de 66 compuestos voltiles, entre ellos derivados de
pirazinas, y 63 componentes en la semilla sin tostar. En ambos casos, el
componente mayoritario fue el benzaldehdo, compuesto que posee un significativo
efecto vasodilatador. El anlisis qumico proximal indic que el proceso de tostado
no modifica de manera significativa el contenido de nutrientes de la semilla del fruto
de P. serotina. Este anlisis mostr que esta semilla contiene una gran cantidad de
grasas y protenas. Adems, las protenas presentes en la semilla presentaron un
elevado valor de digestibilidad, por lo que la semilla podra sugerirse como una
fuente alternativa de protenas. As mismo, se observ que las semillas contienen
entre 21 y 33% de aceite libre de glucsidos cianognicos y un alto contenido de
cido -eleosterico, compuesto que se caracteriza por presentar efecto citotxico
contra lneas celulares de cncer e inducir un efecto anti-hiperlipidmico (Alveano,
2010).

II.4 Flavonoides y el sistema cardiovascular

Los flavonoides son metabolitos secundarios presentes en los vegetales que se

caracterizan por proteger al organismo del dao producido por agentes oxidantes
tales como: los rayos ultravioleta, la polucin ambiental, sustancias qumicas
presentes en los alimentos, entre otros (Martnez-Florez y col., 2002). Si bien su
capacidad antioxidante es la ms conocida, estos metabolitos presentan una
amplia gama de actividades farmacolgicas, por ejemplo: actividad antitumoral
citotxica, inhibicin enzimtica (ej. NADH-oxidasa, xantina-oxidasa, ciclooxigenasa
y la 5-lipooxigenasa), actividad espasmoltica, actividades antibacteriana,
antifngica y antiparasitaria, actividades estrognica, antitrombtica,
antiinflamatoria, antialrgica, hepatoprotectora y vasodilatadora (Harborne y

15
Williams, 2000; Tenorio y col., 2006a), lo que permite que los flavonoides puedan
ser utilizados en el tratamiento de diversas enfermedades, incluyendo las
cardiovasculares como la hipertensin (Carrn y col., 2010).

Los estudios epidemiolgicos ms importantes llevados a cabo entre 1958 y 1970,

con la participacin de Italia, Grecia, Yugoslavia, Holanda, Finlandia, los Estados
Unidos de Norteamrica y Japn revelaron que hay una correlacin inversa entre la
ingesta diaria de flavonoides y la mortalidad a causa de enfermedad coronaria,
atribuyendo dicho efecto a la combinacin de las propiedades antioxidante,
antiagregante plaquetaria y vasodilatadora de los flavonoides (Duarte y col., 2001;
Tenorio y col., 2006a). Por ejemplo, se ha reportado que el flavonoide quercetina
induce efectos anti-hipertensivos, reduce la hipertrofia renal y cardiaca, la
disfuncin vascular y el nivel oxidativo plasmtico y heptico en ratas hipertensas
(Duarte y col., 2001). As mismo, los compuestos de la familia flavan-3-oles
(flavanoles) presentes en el vino tinto, t negro, cerezas y cocoa han demostrado
poseer efecto cardioprotector (Keen y col., 2005; Valenzuela, 2007; Corti y col.,
2009). La actividad vasodilatadora y el efecto anti-hipertensivo tambin se han
observado en glicsidos de flavonoides (2-O--xylosilvitexina y 3-hidroxi-
5,6,7,8,3',4'-hexametoxiflavona-3--D-glucsido) extrados de la cscara de naranja
(Kumamoto y col., 1985).

Estos estudios demuestran la importancia de los flavonoides en el tratamiento de la

hipertensin. Sin embargo, el mecanismo de accin por medio del cual se logran
los efectos no se conoce con precisin. Algunos estudios muestran que la
relajacin es dependiente del endotelio vinculada principalmente con la va del
xido ntrico-GMP cclico (NO/GMPc), como en el caso de la quercetina-3,4',7-
trimetilter y varios steres metlicos de la quercetina (Guerrero y col., 2002; Carrn
y col., 2010). En cambio, otros estudios sugieren que el mecanismo de
vasorrelajacin de la quercetina y la isoramnetina es independiente del endotelio,
por lo que este efecto no es producido por factores endoteliales (Prez-Vizcano y
col., 2002).

16
II.5 Sistema cardiovascular: vasos sanguneos

El sistema cardiovascular est compuesto por el corazn y los vasos sanguneos

(arterias, venas y capilares), que en conjunto constituyen un importante sistema de
transporte, en el cual el corazn funciona como una bomba que proporciona la
energa necesaria para mover el contenido (la sangre) a travs de un circuito
cerrado constituido por lo vasos sanguneos (Kassab, 2006).

Las arterias son vasos que distribuyen la sangre del corazn a los tejidos, se
ramifican y, progresivamente, en cada una de estas ramificaciones disminuyen su
calibre y se forman las arteriolas. En el interior de los tejidos, las arteriolas se
ramifican en mltiples vasos microscpicos denominados capilares que se
distribuyen entre las clulas y se unen en grupos formando venas pequeas,
llamadas vnulas, que se fusionan para dar lugar a venas de mayor calibre que son
las que retornan la sangre al corazn. Los vasos sanguneos estn constituidos por
tres capas (Figura 2) (Navarro-Cid y col., 1999):

1. Capa interna o tnica ntima: delimita la luz vascular y se encuentra en

contacto directo con la sangre circulante. Est constituida por un endotelio
(epitelio plano o simple) con su membrana basal y puede estar cubierto por
una capa subendotelial, tejido conectivo laxo y a veces una capa muscular
lisa dispersa.
2. Capa media o tnica media: est compuesta por tejido muscular liso y fibras
elsticas. Las ltimas proporcionan a las arterias la elasticidad necesaria
para adaptarse a los cambios de presin originados por el flujo pulstil del
corazn y las dota de una capacidad amortiguadora que les permite
mantener un flujo sanguneo continuo.
3. Capa externa o adventicia: se compone principalmente de tejido conectivo,
presenta tambin fibroblastos, haces de colgeno orientados
longitudinalmente y una pared laxa de fibras elsticas. En esta capa suelen

17
 observarse las terminaciones de nervios y capilares que penetran
ligeramente la capa media.

Figura 2. Estructura de los vasos sanguneos: capilares, arterias y venas

Este sistema se encuentra ricamente inervado por una red de nervios, tanto
simpticos como parasimpticos, por lo que es uno de los sistemas ms
estrechamente controlados por el Sistema Nervioso Autnomo (SNA) (Freeman y
col., 2006). Es importante recordar que la divisin simptica induce en el cuerpo
una reaccin de preparacin a la lucha huda que se debe principalmente a la
liberacin de noradrenalina por las fibras posganglionares y a la secrecin de
adrenalina por la mdula suprarrenal. La divisin parasimptica induce a menudo
efectos antagnicos a travs de la liberacin de acetilcolina a partir de las fibras
posganglionares. Los efectos de la estimulacin del SNA sobre el sistema
cardiovascular se muestran en el Cuadro 6 (Freeman y col., 2006; Ira-Fox, 2008).

18
 Cuadro 6. Efectos de la estimulacin del SNA sobre el sistema cardiovascular

rgano efector Efecto simptico Efecto parasimptico

Coraz Frecuencia Aumenta Disminuye

Velocidad de la conduccin Aumenta Disminuye
n Fuerza de contraccin Aumenta Disminuye
Vasos sanguneos Contraccin Dilatacin

La funcin de los vasos sanguneos puede ser modulada por molculas

biolgicamente activas, como el xido ntrico (NO, por su siglas en ingls) y la
endotelina (ET), liberadas por el endotelio vascular en respuesta a ciertos estmulos
fisiolgicos (Ruesga y col., 2005).

II.5.1 Anatoma y fisiologa del endotelio vascular

El endotelio vascular es una capa nica de clulas que recubre el interior de los
vasos sanguneos y es considerado un rgano vital endcrino y parcrino, lo que
permite que realice funciones importantes como: mantener el tono vascular, regular
el crecimiento celular vascular, regular la adhesin leucocitaria y plaquetaria,
regular la trombosis y la fibrinlisis e intervenir en la inflamacin (Verdejo, 2006).

Las clulas endoteliales (CE) tienen la capacidad de registrar los cambios

hemodinmicos del flujo sanguneo en trminos de presin, fuerzas de
cizallamiento, cambios en su interaccin con plaquetas, leucocitos o mensajeros
circulantes o procedentes de clulas vecinas y responder a ellos con la liberacin
de factores vasoactivos (Rubanyi, 1993).

El endotelio como modulador de la respuesta vasodilatadora y vasoconstrictora

comenz a tomar importancia al observar que la funcin normal de ste rgano

19
dependa de una sustancia que ms tarde se identific como NO (Moncada y col.,
1999; Oliveri, 2005). Sin embargo las CE, adems de NO, producen otras
sustancias vasodilatadoras como la prostaciclina (PGI 2) y la bradicinina (BK), as
como sustancias con actividad vasoconstrictora como la ET (Prez, 2001, Oliveri,
2005; Dias y col., 2009) (Cuadro 7).

Es por ello que diversos procesos patolgicos de origen cardiovascular como la

hipertensin arterial, la hipercolesterolemia, la arterosclerosis y la enfermedad
coronaria se encuentran asociados con la disfuncin del endotelio (Rodrguez-Feo
y col., 2001).

Entre las diversas funciones que realiza el endotelio se encuentran (Ruesga y col.,
2005):

1) Modular la actividad vasomotora arterial mediante la actividad del sistema

renina-angiotensina-aldosterona (SRAA), ya que la enzima convertidora
de angiotensina (ECA) se expresa en la clula endotelial.
2) Intervenir en el proceso de angiognesis mediante la formacin de
factores de crecimiento que estimulan la proliferacin del msculo liso.
3) Regular la permeabilidad capilar.
4) Secretar sustancias causantes de la agregacin y adhesin de las
plaquetas.
5) Atraer monocitos a la pared vascular.
6) Actuar como mediador de factores de coagulacin y fribrinolticos.
7) Intervenir en el mecanismo de respuesta del sistema inmunolgico.

Cuadro 7. Sustancias liberadas por el endotelio (Rodrguez-Feo y col., 2001)

20
 Accin Factores derivados del endotelio vascular
NO, PGI2, factor hiperpolarizante derivado de endotelio (EDHF), BK,
Vasodilatadoras
adrenomodulina, pptido natriurtico-C
Vasoconstrictora ET-1, Angiotensina-II (Ang-II), tromboxano A2, radicales oxidantes,
s prostaglandina H2
Antiproliferativas NO, PGI2, factor de crecimiento transformante-, sulfato de heparina
ET-1, radicales oxidantes, factor de crecimiento derivado de
Proliferativas plaquetas, factor de crecimiento fibroblstico, factor de crecimiento
parecido a insulina, interleucina
Antitrombticas NO, PGI2, activador de plasmingeno, factor von Willebrand
ET-1, radicales oxidantes, inhibidor 1 del activador de plasmingeno,
Protrombticas
fibringeno
Marcadores ICAMs (molculas de adhesin intracelular), quimiocinas, factor
inflamatorios nuclear B
Permeabilidad Receptor para productos avanzados de glucosilacin
Angiognesis Factores de crecimiento endotelial vascular

II.5.1.1 Factores relajantes derivados del endotelio: PGl 2, NO y EDHF

La primera sustancia de origen endotelial descubierta fue la PGI 2, sta fue aislada
de las paredes de anillos de aorta de conejo y cerdo, y dentro de sus principales
acciones se encuentra la inhibicin de la agregacin plaquetaria y la relajacin del
musculo liso vascular (Rang y col., 2008). Este factor endotelial se produce cuando
la fosfolipasa A2 (PLA2) se activa y libera cido araquidnico (AA), el cual es
convertido a prostaglandinas G2 y H2 por la ciclooxigenasa (COX) y luego a
productos ms estables, tales como prostaciclina y otras prostaglandinas (Oliveri,
2005).

En 1980 se observ que la funcin normal del endotelio dependa de una sustancia
esencial para inducir una vasodilatacin en respuesta a la ACh, a la cual
inicialmente se le llam factor relajante derivado de endotelio (EDRF, por sus siglas
en ingls) y aos ms tarde, en 1987, fue identificado como NO por Palmer y
colaboradores (Palmer y col., 1987; Li y Frstermann, 2000; Oliveri, 2005). Gracias

21
a estos trabajos, se sabe que la relajacin dependiente de endotelio, reguladora del
tono arterial, es consecuencia primordialmente de la generacin de NO, el cual
posee diversas funciones que proporcionan una homeostasia orgnica (Cymeryng
y col., 1999).

El NO se sintetiza enzimticamente en las CE a partir de un tomo de nitrgeno del

aminocido semiesencial, L-arginina. La enzima que cataliza la biosntesis es
denominada xido ntrico sintetasa (NOS, por sus siglas en ingls), de la cual se
han purificado, clonado y caracterizado tres isoformas, dos de ellas constitutivas, la
NOS I o NOS neuronal (NOSn) y la NOS III o NOS endotelial (NOSe) y una de ellas
inducible, la NOS II o NOS inducible (NOSi) (Li y Frstermann, 2000; Pocock y
Richards, 2005). La NOSe se expresa en las CE y regula el tono vascular y la
irrigacin de rganos, protege la tnica ntima de la agregacin plaquetaria y
previene la proliferacin del msculo liso, entre otras funciones. Por otro lado, la
NOSi se expresa en macrfagos y la NOSn se expresa principalmente en el tejido
nervioso y estructuras medulares renales (Li y Frstermann, 2000; Durazo-Quiroz,
2007).

Las actividades de la NOSn y la NOSe dependen de la unin del complejo Ca 2+-

calmodulina y su activacin se produce en pocos segundos como respuesta a
estmulos mecnicos, aumentos del flujo sanguneo o la unin de diferentes
sustancias vasoactivas (ACh, BK, ET, etc.) a receptores especficos de membrana.

En cambio, la actividad de la NOSi es independiente de la unin del complejo Ca 2+-

calmodulina y la produccin de NO por la misma requiere un margen de tiempo,
pues necesita la sntesis de novo de esta enzima, la cual es inducida por estrs y
sustancias como citocinas, lipopolisacridos y factores de crecimiento (Prez, 2001;
Durazo-Quiroz, 2007).

Otro de los factores vasodilatadores derivados del endotelio es el factor

hiperpolarizante derivado de endotelio (EDHF por sus siglas en ingls), del cual

22
aunque no se conoce su identidad molecular y su va de sealizacin, desempea
un papel fundamental en la regulacin del tono vascular (Campbell y Falck, 2007;
Grgic y col., 2009).

II.5.1.2 Factores vasoconstrictores derivados del endotelio

Despus del descubrimiento del NO se observ que en algunos lechos vasculares,

fundamentalmente en las venas perifricas, la presencia del endotelio era capaz de
mediar el efecto contrario, la contraccin vascular. En 1985 se demostr que
cultivos de CE producan un factor contrctil dependiente de la presencia de Ca 2+
extracelular y, tres aos ms tarde dicho factor fue identificado como ET
(Baltazares y col., 2005).

La ET es un pptido de 21 aminocidos, de la cual se conocen tres isoformas: ET-

1, aislada por primera vez del endotelio, aunque tambin se expresa en cerebro,
rin, pulmn y otros rganos; ET-2 y ET-3 que se expresan principalmente en
otros tejidos como el intestino, la glndula adrenal, el rin y el cerebro. Las tres
actan sobre las clulas del msculo liso vascular, ejerciendo una accin
vasoconstrictora potente y de larga duracin (Pocock y Richards, 2005), y son
producidas tanto en condiciones basales como por estimulacin mecnica, qumica
y humoral (Moncada, 1999; Navarro-Cid y col., 1999).

II.5.2 Papel del msculo liso en los vasos sanguneos

El msculo liso presente en la capa media o tnica media de los vasos sanguneos
(excepto en los capilares) contiene filamentos de actina y miosina con
caractersticas qumicas similares a las del msculo estriado. La organizacin de
sus filamentos permite que la miosina establezca puentes cruzados, dispuestos de
tal manera que la miosina puede tirar de un filamento de actina en una direccin, a
la vez que simultneamente tira de otro filamento de actina en direccin opuesta,
permitiendo que las clulas musculares lisas se contraigan hasta el 80% de su

23
longitud, en lugar de estar limitadas a menos del 30%, como ocurre en el msculo
esqueltico. Otra diferencia es que en lugar del complejo de troponina, presente en
el msculo estriado, contienen una gran cantidad de calmodulina que es una
protena citoplasmtica estructuralmente similar a la troponina (Guyton, 2006; Ira-
Fox, 2008). En la Figura 3, se observa el corte transversal de una arteria (derecha)
que muestra la ubicacin del msculo liso (izquierda), que forma parte de la tnica
media.

Figura 3. Msculo liso (izquierda) y corte transversal de una arteria (derecha)

II.5.2.1 Mecanismo de contraccin del msculo liso vascular

El fenmeno de vasoconstriccin depende de un incremento del Ca 2+ intracelular

(Ca2+i) independientemente del modo en que se inicie el mecanismo. El Ca 2+ entra
principalmente a travs de canales sensibles al voltaje localizados en la membrana
plasmtica. La apertura de estos canales a su vez es regulada por la intensidad de

24
la despolarizacin, por tanto, cuanto mayor es la despolarizacin, ms cantidad de
Ca2+ entrar en la clula y ms intensa ser la contraccin del msculo liso. Una
vez que el Ca2+ est en el msculo liso, se une a la calmodulina para formar el
complejo Ca2+-calmodulina (CaM-Ca2+) que interacta con la cinasa de la cadena
ligera de la miosina (MLCK) y la activa. La MLCK activada cataliza la fosforilacin
de las cadenas ligeras de la miosina, lo que les permite unirse a la actina, formar
los puentes cruzados y producir la contraccin (Ira-Fox, 2008). En la Figura 4, se
ilustra el mecanismo de contraccin del msculo liso.

Figura 4. Mecanismo de contraccin del msculo liso

II.5.2.2 Mecanismos de relajacin del musculo liso vascular

Independientemente de la causa que produzca la vasodilatacin del musculo liso

vascular a nivel citoplasmtico, dos mecanismos estn implicados en este
fenmeno, los cuales son complementarios y no excluyentes (Flores, 2009):

25
 a) Incremento de los segundos mensajeros guanosn monofosfato cclico
(GMPc) y adenosn monofosfato cclico (AMPc), a nivel de la clula muscular
lisa vascular.
b) Hiperpolarizacin del msculo liso vascular dependiente del endotelio.

El incremento tanto de GMPc como de AMPc se realiza a travs de la estimulacin

de receptores acoplados a protenas G (RAPG). En el caso del GMPc, la va
NO/GMPc puede ser activada por diversos agentes como: nitrovasodilatadores (ej.
nitroprusiato de sodio), histamina, acetilcolina, estrgenos, insulina, epicatequina,
quercetina, crisina, elagitaninos, alfa-naftoflavona, entre otros, razn por la que
frmacos con actividad vasodilatadora aislados de fuentes naturales podra
representar una alternativa teraputica (Tenorio y col., 2006b).

Tras la activacin de un RAPG en las CE, se propicia la disociacin de la subunidad

q de la protena G la cual activa a la fosfolipasa C (PLC) que cataliza la conversin
de fosfatidil inositol bifosfato (PIP2) a inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG). El
IP3 estimula la liberacin de Ca2+ del retculo endoplsmico y el Ca 2+ liberado se une
a calmodulina para formar el complejo CaM-Ca 2+. Este complejo activa a la NOSe
para generar L-citrulina y el NO, mediante la conversin de L-arginina (Pocock y
Richards, 2005; Tenorio y col., 2006b).

Una vez que el NO se ha formado se difunde hacia las clulas del msculo liso y
activa a la sGC, generando un incremento de GMPc que activa una protena cinasa
dependiente de GMPc (PKG), encargada de fosforilar y activar canales voltaje
dependientes de K+. El K+ sale y genera la hiperpolarizacin de la clula, lo que
induce el cierre de los canales de Ca2+ dependientes de voltaje, lo que provoca una
disminucin en los niveles de ste in en el interior celular y, por tanto, la relajacin
(Rodrguez-Feo y col., 2001).

26
De manera adicional, la PKG activa, mediante fosforilacin, a la fosfatasa (PPT)
que se encarga de desfosforilar la cadena ligera de la miosina (MLC), dejndola
libre e incapaz de contraer el msculo liso (Durazo-Quiroz, 2007).

Por otra parte, la estimulacin de un RAPG en las CE puede activar a la PLA 2,

enzima encargada de producir el AA. Este cido graso acta como sustrato de la
COX para formar la PGI2. Este factor relajante derivado de endotelio activa a su
receptor de membrana acoplado a protena G (R PGI2) e induce la activacin de la
adenilato ciclasa (AC) en la clula muscular, lo que genera un aumento en la
produccin de AMPc que a su vez activa una protena cinasa A (PKA) que fosforila
diversas protenas, provocando la disminucin de Ca 2+i y con ello la relajacin
(Oliveri, 2005; Luna, 2009).

En lo que respecta al EDHF se sabe que, de manera similar al NO, ste factor es
liberado por las clulas endoteliales mediante un proceso dependiente de Ca2+
(Cohen y Vanhoutte, 1995; Oliveri, 2005; Rang y col., 2008), y que su mecanismo
de hiperpolarizacin est mediado por canales de K + activados por Ca2+ (KCa)
(Inokuchi y col., 2003; Griffith, 2004).

La va de sealizacin del EDHF an no est bien determinada, sin embargo, se

han propuesto varias sustancias como posibles mediadores de la actividad de este
factor, entre ellas se encuentran: los cidos epoxieicosatrienoicos (EETs), el in K +,
el pptido natriurtico tipo C, el perxido de hidrgeno y los cidos
trihidroxieicosatrienoicos (Stankevicius y col., 2003; Campbell y Falck, 2007).

II.5.3 Modelos farmacolgicos in vivo para evaluar el efecto hipotensor de

productos naturales

Existen diferentes modelos in vivo, para evaluar el efecto hipotensor de un producto

natural, los cuales permiten seguir el curso de la hipertensin tanto para guiar el

27
desarrollo de un nuevo frmaco como para evaluar el dao producido por esta
enfermedad en el organismo. Dentro de los modelos de hipertensin ms utilizados
se encuentran (Guerrero, 2009):

1. Modelo de la rata espontneamente hipertensa

Este modelo de hipertensin se origin de los experimentos realizados por

Okamoto y Aoki (1963), quienes obtuvieron una cepa de ratas con hipertensin
espontnea (SHR por sus siglas en ingls).

El curso de la hipertensin en este modelo se caracteriza por un incremento

constante de la presin arterial a partir de la 5-6 semana de edad, hasta llegar a
valores entre 180-200 mm Hg de presin arterial sistlica. Las SHRs no presentan
problemas vasculares graves tales como tendencia a desarrollar accidente
cerebrovascular, aterosclerosis macroscpica o trombosis vascular, sin embargo
estas ratas desarrollan hipertrofia cardiaca, que al mes 18-24 de edad origina fallo
cardiaco. Tambin hay una disminucin de la relajacin dependiente de endotelio
alrededor de la semana 13-15 de edad y disfuncin renal que se manifiesta por
proteinuria y disminucin en la depuracin de creatinina (Okamoto y Aoki, 1963;
Pinto y col., 1998).

Posiblemente, este es el modelo in vivo ms utilizado en farmacologa

experimental, debido a que su curso se asemeja al de la hipertensin esencial en el
hombre, lo que permite evaluar factores genticos asociados con la hipertensin
(Freis y col., 1972; Limas y col., 1984; Pinto y col., 1998; Guerrero, 2009). Aunque
es muy sensible para detectar el efecto de frmacos como inhibidores de la enzima
que convierte a la Ang (ECA), antagonistas de Ang-II, bloqueadores de canales de
Ca2+ o vasodilatadores directos, no lo es tanto para bloqueadores del receptor
beta y mucho menos para diurticos y antagonistas de ET, debido a que es un
modelo que cursa con renina alta (Limas y col., 1984; Pinto y col., 1998; Guerrero,
2009). Por esta razn, despus de la administracin de antagonistas de Ca2+
(Zemanckov y Trk, 2009), vasodilatadores directos (Limas y col., 1984) e

28
inhibidores del SRAA (Limas y col., 1984; Sattar y col., 1985) disminuye la presin
arterial de las SHRs (Pinto y col., 1998).

2. Modelo de la rata Dahl sensible a la sal

Este modelo de hipertensin surgi alrededor de los aos 50s, cuando se

estudiaron los efectos de una dieta alta en sal (0-10% de NaCl) sobre la presin
arterial en ratas (Sprague-Dawley) y se observ una diferencia en la variacin de la
presin arterial en respuesta a la ingesta de sal, lo cual fue atribuido por el Dr.
Lewis K. Dahl a la influencia gentica sobre el control de la presin arterial.

En la dcada de 1960, Dahl demostr nuevamente que el consumo en exceso de

sal conduce a un incremento de la presin arterial en ratas y apoyado en las
observaciones anteriores desarroll dos cepas de ratas: una cepa sensible a la sal
y otra resistente a la sal (Dahl y col., 1962; Rapp, 1982).

Cuando las ratas sensibles a la sal eran alimentadas con una dieta alta en sal (8%
NaCl) desarrollaron una severa y fatal hipertensin, caracterizada por un notable
incremento en la presin sangunea, hipertrofia cardiaca, similar a la encontrada en
la SHR, fallo cardiaco a una edad ms temprana (4-5 meses) que en la SHR, dao
renal severo manifestado por una marcada proteinuria y dao en la relajacin
dependiente de endotelio. Mientras tanto, las ratas resistentes a la sal no
desarrollaron hipertensin, a pesar de la alta ingesta de sal. As mismo, cuando las
ratas Dahl sensibles a la sal eran alimentadas con una dieta normal en sal,
desarrollaron un moderado incremento de la presin arterial, demostrando que este
es un modelo de hipertensin gentica con la caracterstica extra de ser sensibles a
la sal (Rapp, 1982; Pinto y col., 1998).

Debido a que este modelo cursa con renina baja, la hipertensin desarrollada est
asociada a una sobrecarga de volumen (Pinto y col., 1998; Guerrero, 2009) y
responde a la inhibicin del SRAA, a diurticos, a vasodilatadores directos, a

29
antagonistas del receptor a ET y, en menor medida, a los bloqueadores de canales
de Ca2+ y beta-bloqueadores (Pinto y col., 1998).

3. Modelo de hipertensin DOCA-sal

Este modelo, un representante tpico de la hipertensin inducida

farmacolgicamente, consiste en la administracin de altas dosis (300 a 1000
mg/Kg) de desoxicorticosterona (DOCA), que en combinacin con el consumo de
solucin salina (1% NaCl) y nefrectoma unilateral, contribuyen al desarrollo de la
hipertensin arterial, hipertrofia cardiaca, dao renal (proteinuria y
glomerulosclerosis) y disminucin de la relajacin dependiente de endotelio (Karam
y col., 1996; Pinto y col., 1998; Sun y Zhang, 2005).

Este modelo se caracteriza por niveles bajos de renina, debido a la supresin del
SRAA, por lo que los inhibidores de la ECA y bloqueadores del receptor a Ang-II
son ineficaces para la reduccin de la presin arterial a diferencia de los frmacos
bloqueadores del receptor de aldosterona y los diurticos que han mostrado ser
efectivos. As mismo, la vasopresina, el sistema nervioso simptico (SNS), la ET y
el estrs oxidativo intervienen en el desarrollo y mantenimiento de la hipertensin
(Karam y col., 1996; Pinto y col., 1998).

4. Rata con hipertensin experimental por deficiencia de NO

En base a los estudios realizados en los que la inhibicin de la sntesis de NO

produca una marcada elevacin de la presin sangunea (Baylis y col., 1992),
surgi el modelo de la rata con hipertensin por deficiencia de NO. Este modelo
utiliza agentes hipertensores, inhibidores de la NOS, como el L-NAME (ster
metlico de N(G)-nitro-L-arginina), el cual se caracteriza por ser fcilmente soluble
en agua a diferencia de otros inhibidores como la N(G)-nitro-L-arginina (Gardiner y
col., 1990).

30
La administracin del L-NAME por un periodo de cuatro semanas produce la
elevacin de la presin arterial, mediante un incremento en la resistencia vascular
perifrica (Patel y col., 1993; Trk, 2008). En fases ms avanzadas, debido a la
inhibicin crnica de la NOS, el modelo se caracteriza por una depresin de la
funcin renal, microangiopata renal hipertensiva (Ribeiro, 1992), disfuncin
endotelial y un incremento vascular a estmulos adrenrgicos (Trk, 2008). Si bien
lo anterior es principalmente producto de la inhibicin de la sntesis de NO, es
importante considerar que en este modelo de hipertensin, tambin estn
involucrados otros factores que incluyen al SRAA, los factores contrctiles
endoteliales, el remodelamiento arterial y el SNS, cuya actividad est regulada por
la biodisponibilidad de NO en el cerebro (Trk, 2008). Por lo anterior, este modelo
es una alternativa al de la rata espontneamente hipertensa, debido a que su costo
es menor y adems su sensibilidad para detectar la actividad antihipertensiva es
mayor, ya que permite identificar adems de frmacos que actan sobre el SRAA,
agentes que actan sobre el sistema nervioso autnomo (Guerrero, 2009).

La hipertensin por deficiencia de NO puede revertirse al eliminar la causa que la

origina (administracin del L-NAME), o bien tras la administracin de frmacos anti-
hipertensivos. Por ejemplo, la administracin de captopril, frmaco inhibidor de la
ECA, y de losartn, antagonista de receptores a Ang-II, atenan el desarrollo de
hipertensin en ratas tratadas con L-NAME (Ribeiro, 1992; Trk, 2008), as mismo
la administracin de donadores de NO, como los nitrovasodilatadores puede
prevenir este tipo de hipertensin (Trk, 2008).

31
III. HIPTESIS

El extracto acuoso del fruto de Prunus serotina posee actividad relajante sobre la
musculatura lisa (arterial, ileal y traqueal) y un efecto hipotensor en ratas con
hipertensin inducida con L-NAME.

32
IV.OBJETIVOS

IV.1 General

Evaluar el efecto del extracto acuoso del fruto de Prunus serotina sobre la musculatura
lisa arterial, intestinal y traqueal, as como su efecto hipotensor en ratas con
hipertensin inducida con L-NAME.

IV.2 Especficos

Evaluar el efecto del extracto acuoso de P. serotina sobre la musculatura lisa

arterial, intestinal y traqueal, utilizando el ensayo de aorta aislada de rata y el
ensayo de leon y trquea aislados de cobayo.
Evaluar el efecto hipotensor del extracto acuoso de P. serotina en la presin
arterial de ratas con hipertensin inducida con L-NAME.
Cuantificar el contenido total de fenoles y flavonoides en el extracto acuoso
obtenido del fruto de P. serotina.

33
V. METODOLOGA

V.1 Materiales

V.1.1 Especmenes biolgicos

V.1.1.1 Material vegetal

El fruto maduro de P. serotina se recolect de huertos en San Miguel Tianguizolco,

municipio de Huejotzingo en el Estado de Puebla. El fruto fue identificado y
autentificado por el Dr. Robert Bye, profesor del Instituto de Biologa de la Universidad
Nacional Autnoma de Mxico.

V.1.1.2 Animales de experimentacin

Se utilizaron ratas macho (250-300 g) de la cepa Wistar y cobayos macho (500-800 g)

de la cepa Harley, los cuales se mantuvieron a temperatura ambiente con libre acceso
a alimento y agua.

V.1.2. Compuestos qumicos y solventes

La fenilefrina (Phe), la ACh, el carbacol (CCH), las sales que se utilizaron para preparar
las soluciones fisiolgicas empleadas en los ensayos en los que se utilizaron tejidos
aislados, as como el resto de los reactivos que se utilizaron en las evaluaciones, se
obtuvieron de Sigma (St. Louis, MO, USA) o J.T. Baker (Philipsburg, NJ, USA).

34
V.2 Mtodos

V.2.1 Preservacin del material vegetal

Al llegar el fruto de P. serotina a la Facultad de Qumica de la Universidad Autnoma de

Quertaro, se lav con abundante agua destilada, se sec y se almacen a -70 C
hasta su utilizacin.

V.2.2 Preparacin del extracto acuoso a partir del fruto de Prunus serotina

El fruto entero se segment y se le retir la semilla. Se pesaron 100 g de ste y se

sometieron a una decoccin con 150 mL de agua destilada, calentando la mezcla hasta
ebullicin durante 15 minutos. El extracto obtenido se filtr, se liofiliz y,
posteriormente, se almacen en un frasco mbar en un lugar seco a temperatura
ambiente.

V.2.3 Evaluacin in vitro del extracto acuoso de P. serotina

V.2.3.1 Soluciones fisiolgicas que se emplearon en los ensayos con tejidos

aislados

V.2.3.1.1 Ensayo de aorta aislada de rata

Solucin de Krebs-Henseleit (rata): 126.8 mM NaCl, 5.9 mM KCl, 2.5 mM CaCl 2, 1.2
mM MgCl2, 30 mM NaHCO3, 1.2 mM NaH2PO4 y 5.0 mM D-glucosa (Forstermann y
col., 1994; Feelisch y col., 1999).

V.2.3.1.2 Ensayo de leon aislado de cobayo

35
Solucin de Krebs-Henseleit (cobayo-leon): 110.0 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 2.5 mM
CaCl2, 1.2 mM MgSO4, 25.0 mM NaHCO3, 1.2 mM NaH2PO4 y 11.0 mM D-glucosa
(Rojas y col., 2002).

V.2.3.1.3 Ensayo de trquea aislada de cobayo

Solucin de Krebs-Henseleit (cobayo-trquea): 118.0 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 2.5

mM CaCl2, 1.2 mM MgSO4, 25.0 mM NaHCO3, 1.2 mM KH2PO4 y 11.1 mM D-
glucosa (Navarrete y Rodrguez, 2009).

V.2.3.2 Diseccin de tejidos

Todas las disecciones se realizaron de acuerdo a las indicaciones particulares

sealadas a continuacin y considerando lo indicado en la norma NOM-062-ZOO-
1999: Especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de animales de
laboratorio.

V.2.3.2.1 Aorta

Las ratas fueron anestesiadas con cloroformo y sacrificadas por decapitacin.

Posteriormente, se extrajo la aorta torcica descendente, se coloc en una solucin
fra de Krebs-Henseleit (aorta), se le retir el tejido conectivo y se cortaron anillos
de 4 a 5 mm de longitud.

V.2.3.2.2 leon

Los cobayos fueron anestesiados con cloroformo, sacrificados por decapitacin y,

posteriormente, se les realiz una incisin abdominal para extraer el leon. Este
tejido se coloc en una solucin de Krebs-Henseleit (cobayo-leon) a 37 C, se

36
cortaron fragmentos de alrededor de 1 cm de longitud y cada uno de ellos se lav
antes de utilizarse.

V.2.3.2.3 Trquea

Los cobayos fueron sacrificados con una inyeccin intraperitoneal de pentobarbital

sdico (1 mL). Inmediatamente, se realiz la diseccin de la trquea y se coloc en
una solucin fra de Krebs-Henseleit (cobayo-trquea), se le retir el tejido
conectivo y, posteriormente, se cort en anillos de 2 mm de longitud
aproximadamente.

V.2.3.3 Preparacin del extracto para los ensayos de aorta, leon y trquea aislados

Se prepar una solucin concentrada del extracto acuoso de P. serotina, a partir del
cual se hicieron las diluciones correspondientes para alcanzar las concentraciones
que se evaluaron en la cmara de tejido aislado (1 a 1,000 g/mL). Todas las
diluciones se realizaron con agua destilada.

V.2.3.4 Utilizacin del polgrafo en los ensayos de tejido aislado

Los anillos de cada tejido, en ensayos independientes, se colocaron en cmaras de

incubacin de 7 mL con su respectiva solucin de Krebs-Henseleit a 37 C y con
burbujeo constante de una mezcla de 95% O 2 y 5% de CO2. Las contracciones
mecnicas se registraron por medio de transductores de fuerza Grass modelo
FT03, acoplados a un polgrafo Grass de cuatro canales Modelo 7D (Astro-Med,
Inc. West Warwick, RI, USA).

El tejido se someti a una tensin de reposo (basal) de 1.5 g y se dej estabilizar

por 60 min. Una vez que el tejido alcanz el equilibrio, los segmentos se pre-
contrajeron con una solucin de KCl 100 mM durante 15 minutos para estimular el
msculo liso.

37
Posteriormente, se elimin el KCl lavando de 3 a 8 veces cada una de las cmaras.
El tejido se dej reposar hasta que alcanz nuevamente su tensin basal de 1.5 g y,
una vez estabilizado, los segmentos se contrajeron con Phe (1 M), para el caso
del ensayo en aorta aislada de rata y con ACh (1 M) para los ensayos en trquea
e leon aislados de cobayo.

El extracto acuoso de P. serotina se evalu en un intervalo de concentraciones de 1

a 1,000 g/mL, y comenz a adicionarse 20 min despus de haber inducido la
contraccin.

La respuesta provocada por cada una de las concentraciones del extracto en el

tejido se registr durante un periodo de 10 min y se expres como el porcentaje de
relajacin, tomando como cien por ciento la contraccin alcanzada al adicionar la
Phe o la ACh, segn fuera el caso (Samuelsson, 1991; Feelisch y col., 1999; Rojas
y col., 2002; Ibarra-Alvarado y col., 2007).

V.2.4 Evaluacin in vivo del extracto acuoso del fruto de P. serotina

V.2.4.1 Determinacin del efecto hipotensor del extracto del fruto de P. serotina en
ratas con hipertensin inducida por L-NAME

Se utilizaron 24 ratas macho (250-300 g) de la cepa Wistar con las que se formaron
4 grupos de seis ratas cada uno. Los animales se marcaron, se pesaron (al inicio
del experimento y despus cada semana) y se mantuvieron con un acceso libre a
alimento y agua. De manera adicional, a cada rata se le medi la presin
sangunea en la cola (al inicio del experimento y despus cada semana), con ayuda
del equipo Panlab modelo LE 5650/6 Heater scanner acoplado al equipo Letica
modelo LE5007 Automatic Blood Computer. Los grupos se conformaron como
sigue:

38
 Cuadro 8. Evaluacin del efecto hipotensor del extracto acuoso de P. serotina
Tratamiento
Grupo Nombre
( 30 das; va oral)
1 Control 1 mL de agua destilada
300 mg/kg disuelto en 1 mL de
2 Extracto P. serotina
agua inyectable
30 mg/kg disuelto en 1 mL de
3 L-NAME
agua inyectable
30 mg/kg + 300 mg/kg
4 L-NAME + Extracto P. serotina disueltos en 1 mL de agua
inyectable

Despus de realizar la primera toma de la presin sangunea a los cuatro grupos,

se llev a cabo la primera administracin de agua destilada y la primera dosis de
extracto, agente hipertensor (L-NAME) o la mezcla de ambos por va oral (Cuadro
8).

V.2.4.2 Determinacin del efecto del extracto del fruto de P. serotina sobre la
reactividad vascular

Al trmino de las cuatro semanas del tratamiento (Cuadro 8), se procedi a

sacrificar a las ratas de cada grupo para aislar la aorta y realizar el ensayo de aorta
aislada de rata como se describi anteriormente. En esta serie de experimentos,
una vez que las aortas alcanzaron su tensin basal (1.5 g) y la Phe actu por 20
minutos, se procedi a evaluar la reactividad vascular adicionando CCH de 1x10 -9 a
1x10-4 g/mL. La respuesta provocada por cada adicin de CCH se registr durante
un periodo de 10 minutos y se expres como el porcentaje de relajacin, tomando
como cien por ciento la contraccin alcanzada al adicionar la Phe (Feelisch y col.,
1999; Ibarra-Alvarado y col., 2007).

39
V.2.5 Determinacin de compuestos fenlicos totales y flavonoides

V.2.5.1 Preparacin de extractos

Por triplicado, se pes 0.1 g del extracto acuoso de P. serotina liofilizado en tubos
falcon de 50 mL cubiertos con aluminio. Despus, se adicion a cada tubo la
solucin extractora (80% metanol, 2% cido frmico y 18% de agua destilada), se
homogeniz la mezcla y se someti a sonicacin por 25 minutos. Posteriormente,
las muestras se centrifugaron (15 minutos a 12,300 rpm) y se decantaron a otro
tubo falcon. Con la pastilla restante se repeti una vez ms el proceso de
extraccin y, finalmente, el extracto se filtr y se medi el volumen final.

V.2.5.2 Determinacin de fenoles totales

El contenido de fenoles totales se determin por el mtodo del reactivo Folin-

Ciocalteau, el cual se basa en la reduccin, en condiciones alcalinas, de este
reactivo por los electrones de los compuestos fenlicos, visualizndose como un
cambio de coloracin de amarillo a azul (Huang y col., 2005). La determinacin de
fenoles totales en la muestra se llev a cabo por triplicado y se realizaron tres
experimentos independientes, utilizando una microplaca. En sta, se colocaron 150
L de reactivo de Folin-Ciocalteau, 30 L del extracto de la muestra (o solucin
extractora en el caso del blanco) y 120 L de carbonato de sodio al 7.5%. Se dej
incubar por 2 horas en la oscuridad a temperatura ambiente y transcurrido el
tiempo, se realiz la lectura a 730 nm en un lector de microplacas marca Microplate
Dynex. Previamente al tratamiento de las muestras por este mtodo, se utiliz
cido glico (GAE) como estndar a diferentes concentraciones (desde 0 hasta
0.16 mg/mL) para obtener la curva de calibracin.

V.2.5.3 Determinacin de flavonoides

40
 La determinacin del contenido de flavonoides se llev a cabo por triplicado y se
realizaron tres experimentos independientes. En tubos eppendorf se colocaron 400
L de agua destilada, 30 L de nitrito de sodio al 5% y 100 L del extracto de la
muestra (o de la solucin en el caso del blanco). Se dej reposar la mezcla por 5
minutos e, inmediatamente, se adicionaron 30 L de cloruro de aluminio al 10%.
Despus de un minuto, se adicionaron 200 L hidrxido de sodio 1 M y 240 L
agua destilada. Para su lectura se agitaron los tubos eppendorf y de cada tubo se
transfirieron 300 L a los pozos de una microplaca. Finalmente, se realiz la lectura
a 510 nm en un lector de microplacas marca Microplate Dynex. Previamente al
tratamiento de las muestras por este mtodo, se utiliz epicatequina como estndar
a diferentes concentraciones (desde 0.018 hasta 0.3 mg/mL) para obtener la curva
de calibracin.

V.2.6 Anlisis estadstico

Con los datos obtenidos en la determinacin de fenoles totales y flavonoides, se

determin la media, la desviacin estndar y la significancia estadstica con la prueba
t-student con un ndice de confianza del 95%.

En cuanto a los ensayos farmacolgicos, se realizaron de 4 a 6 evaluaciones y se

determin la media y el error estndar promedio (S.E.M.). Se realizaron las
respectivas curvas concentracin-respuesta para cada tejido (aorta, leon y
trquea) con ayuda del programa PRISMA 5.0 (Graph Pad Software, San Diego,
CA, USA), ajustando los datos obtenidos a una ecuacin sigmoidal. En cada caso
se calcul la CE50 y la Emax. Los resultados se sometieron a un anlisis de varianza
(ANOVA), seguido por la prueba de Tukey para evaluar la diferencia significativa
entre las medias. Se consideraron estadsticamente significativas aquellas
diferencias con p 0.05.

VI. RESULTADOS

41
VI.1 Evaluacin in vitro del extracto acuoso del fruto de P. serotina sobre la
musculatura lisa ileal, traqueal y arterial

El fruto de P. serotina se ha utilizado en la medicina tradicional mexicana, desde la

poca colonial para tratar la tos (Patzcuaro) y la diarrea (Martnez, 1991; Gioanetto
y Blas, 1998). Nuestros resultados validaron la utilizacin del fruto de esta especie
vegetal para el tratamiento de estas enfermedades, ya que el extracto acuoso del
fruto de P. serotina provoc una relajacin, dependiente de la concentracin, del
msculo liso tanto de la trquea (CE50 = 42.3 7.7 g/mL) como del leon (CE50 =
33.2 6.5 g/mL) de cobayo. Sin embargo, la eficacia del efecto dilatador del
extracto de este fruto fue menor al 50% en ambos casos (trquea e leon) (Cuadro
9 y Figura 5).

Cuadro 9. Valores de CE50 y Emax del efecto relajante inducido por el extracto acuoso del
fruto de P. serotina sobre segmentos de trquea e leon de cobayo

Tejido CE50 (g/mL) Emax (%)

Trquea 42.3 7.7 38.7 2.0
leon 33.2 6.5 49.6 4.5

La decoccin de las hojas de P. serotina se ha utilizado en la medicina tradicional

para el tratamiento de la hipertensin (Mills y Willoughby, 1996). El efecto
hipotensor del t preparado a partir de las hojas de esta planta es causado, al
menos en parte, por su capacidad de relajar la aorta de rata. El efecto vasodilatador
es inducido por dos mecanismos: un efecto antioxidante, que incrementa la
biodisponibilidad del NO, y la estimulacin directa de receptores farmacolgicos
(Ibarra-Alvarado y col., 2010). Aunque el extracto acuoso del fruto de P. serotina, no
es utilizado por los mdicos tradicionales para tratar la hipertensin, decidimos
evaluar el efecto vasodilatador de este extracto, ya que la evaluacin farmacolgica

42
no respaldada por el uso etnomdico puede conducir a extractos o compuestos
activos promisorios (Guerrero, 2009).

60
leon
Trquea

40
Relajacin (%)

20

0
0 1 2 3 4
Log [extracto], g/mL

43
 Figura 5. Curvas concentracin-respuesta del efecto relajante producido por el extracto
acuoso del fruto de P. serotina sobre segmentos de leon y trquea

De manera inesperada, el extracto acuoso del fruto de P. serotina relaj con mayor
eficacia la aorta de rata (Emax = 100 0.7%) que la trquea y el leon de cobayo, lo
cual sugiri que no solo las hojas sino tambin el fruto de esta especie vegetal es
una fuente importante de compuestos vasodilatadores potencialmente tiles para
tratar enfermedades cardiovasculares. El extracto del fruto de esta planta present
un Emax mayor que el de la ACh (Emax = 69.5 5.7%), que fue utilizada como control,
y result ser solo 28 veces menos potente que el control (Cuadro 10 y Figura 6).

Cuadro 10. Valores de CE50 y Emax del efecto vasodilatador inducido por el extracto acuoso
del fruto de P. serotina

Extracto o ACh CE50 (g/mL) Emax (%)

ACh 8.7 0.8 69.5 5.7
Extracto acuoso del fruto de
240.6 29.2 100 0.7
P. serotina

44
 100 ACh
Extracto del fruto
de P. serotina
80
Relajacin (%)

60

40

20

0
-1 0 1 2 3 4
Log [ACh o extracto], g/mL

Figura 6. Curvas concentracin-respuesta del efecto vasodilatador producido por el

extracto acuoso del fruto de P. serotina y por la ACh

45
VI.2 Efecto hipotensor del extracto del fruto de P. serotina en ratas con hipertensin
inducida por L-NAME

Debido a que el evento fisiopatognico central en la hipertensin arterial es el

incremento sostenido de la resistencia perifrica, esto es, un aumento en la
contractilidad de los vasos sanguneos, es evidente que todo agente capaz de
producir efectos vasodilatadores, podra ser til para tratar la hipertensin (Insel y
Motulsky, 1984). Por esta razn, decidimos determinar si el efecto dilatador
producido por el extracto acuoso del fruto de P. serotina sobre la aorta de rata poda
inducir un efecto hipotensor en animales ntegros.

La administracin diaria del extracto a ratas normotensas no modific su presin

arterial sistlica, la cual fue similar a la presin arterial sistlica promedio del grupo
control. Sin embargo, el extracto acuoso del fruto de P. serotina detuvo el desarrollo
de la hipertensin inducida en ratas por la administracin diaria de L-NAME ( 30
mg/kg), un inhibidor de la NOS. Este efecto hipotensor se observ desde la tercera
semana, sin embargo, fue significativo hasta la cuarta semana del experimento
(Figura 7).

46
 140 Ratas H

Ratas H + extracto

Presin sangunea (mmHg) 120 *

100

80
Ratas N
Ratas N + extracto
60
0 1 2 3 4
Tiempo (semanas)

Figura 7. Efecto de la administracin oral del extracto del fruto de P. serotina sobre la
presin sangunea en ratas normotensas (N) e hipertensas (H)

47
VI.3 Efecto del extracto del fruto de Prunus serotina sobre la reactividad vascular

Al trmino de las cuatro semanas de tratamiento (Cuadro 8 y Figura 7), se

sacrificaron las ratas de los cuatro grupos de animales, se extrajeron las aortas y se
determin la relajacin, dependiente de endotelio, producida por diferentes
concentraciones de CCH (un agonista colinrgico), utilizando el ensayo de aorta
aislada de rata.

Los resultados de estos experimentos indicaron que el tratamiento diario de las

ratas con el inhibidor de la NOS (animales hipertensos, ratas H), inhibi, casi por
completo, la reactividad vascular inducida por el carbacol (E max = 6.9 2.4%). Sin
embargo, las aortas de los animales que se trataron con L-NAME y el extracto
acuoso del fruto de P. serotina (Emax = 18.7 3.4%, p < 0.05) conservaron alrededor
de un 44% de su eficacia con respecto al control (E max = 42.7 3.5%). El
tratamiento a largo plazo de los animales normotensos con este extracto no
modific la reactividad de sus aortas con respecto a las aortas obtenidas de las
ratas control (Ratas N) (Cuadro 11 y Figura 8).

Cuadro 11. Valores de Emax del efecto vasodilatador producido por carbacol en aortas de
Ratas N (con y sin extracto) y Ratas H (con y sin extracto)

Animales Emax (%)

Ratas N (control) 42.7 3.5
Ratas N + extracto 46.3 5.0
Ratas H 6.9 2.4
Ratas H + extracto 18.7 3.4*
* p < 0.05 con relacin al control

48
VI.4 Compuestos fenlicos totales y flavonoides en el extracto acuoso del fruto de
P. serotina

Los beneficios para la salud de una dieta rica en polifenoles, entre los que destacan
los flavonoides, se ha atribuido a su actividad antioxidante (Rice-Evans y Miller,
1996), sin embargo, se ha observado que estos compuestos tambin causan una
vasodilatacin, dependiente de endotelio, en ensayos in vitro (Adriambeloson y col.,
1998).

80
Ratas N
Ratas N + extracto
Ratas H
60
Ratas H + extracto
Relajacin, %

40

*
20 *

0
-9 -8 -7 -6 -5 -4
Log [carbacol], M

49
Figura 8. Curvas concentracin-respuesta del efecto vasodilatador inducido por carbacol en
segmentos de aorta obtenidos de Ratas N y H tratadas con o sin extracto acuoso del fruto
de P. serotina

Considerando estos antecedentes determinamos la cantidad de compuestos

fenlicos totales y de flavonoides presentes en el extracto acuoso del fruto de P.
serotina. Los resultados indicaron que el extracto posee una cantidad elevada de
fenoles totales (12.6 0.85 mg de GAE/g de muestra seca), similar a la reportada
para las uvas rojas y las fresas, las cuales poseen una gran cantidad de estos
metabolitos secundarios (Dohadwala y Vita, 2009) (Cuadro 12). Los compuestos
fenlicos mas abundantes en el extracto fueron los flavonoides (8.2 0.4 mg
epicatequina/g de muestra seca), los cuales constituyen aproximadamente el 60%
de los compuestos fenlicos totales.

Cuadro 12. Contenido de fenoles totales

Contenido de fenoles totales
Fruto
mg de GAE/g de muestra seca
Prunus serotina 12.6 0.85
Uvas rojas 12.0
Fresas 12.3

50
51
VII. DISCUSIN

El fruto de P. serotina, popularmente llamado capuln, es utilizado en la medicina

tradicional mexicana para tratar diversas enfermedades, tales como la tos y la
diarrea. A pesar de su importancia etnomdica, existen pocos estudios centrados
en validar su uso en la medicina tradicional. Por esta razn, se plante en esta tesis
el estudio farmacolgico del extracto acuoso del fruto de esta especie vegetal. Los
resultados de este estudio contribuyeron a validar el efecto antitusivo y antidiarreico
atribuido al fruto de P. serotina. De manera adicional, se determin que el extracto
del fruto de esta planta presenta un efecto hipotensor. Este hallazgo adquiere
mayor importancia si se considera que actualmente las enfermedades
cardiovasculares constituyen un importante problema de salud en Mxico. Cada
ao, se incrementa notablemente el nmero de personas que est siendo afectada
por la hipertensin, debido a que los factores de riesgo que contribuyen a
desarrollarla, como el consumo exagerado de grasas saturadas, la falta de
actividad fsica, el tabaquismo y la tensin emocional, se han convertido en
hbitos propios de la poblacin (Cruz, 2001; Mendoza, 2006; Ferreyra y col.,
2007).

Con el fin de contribuir a validar cientficamente el uso tradicional del fruto de P.

serotina en el tratamiento de la diarrea y la tos, se llevaron a cabo ensayos
utilizando tejidos aislados (leon y trquea de cobayo). Este tipo de ensayos ha
resultado ser de gran utilidad para hacer la evaluacin farmacolgica de extractos y
compuestos puros con efecto vasodilatador, debido a que son sencillos y requieren
de pequeas cantidades de muestra (Guerrero, 2009). Los resultados obtenidos de
estos experimentos demostraron que el extracto acuoso produce una relajacin,
dependiente de la concentracin, del msculo liso ileal y traqueal de cobayo (Figura
5), lo que aporta evidencia cientfica de que el extracto acuoso de P. serotina puede
ser utilizado para tratar padecimientos como la tos y la diarrea (Martnez, 1991;
Gioanetto y Blas, 1998).

52
Aunque el fruto de P. serotina no se ha utilizado tradicionalmente para tratar
enfermedades cardiovasculares como la hipertensin, se evalu su efecto
vasodilatador, tomando en cuenta que la infusin de sus hojas s se utiliza en la
medicina tradicional para el tratamiento de la hipertensin (Mills y Willoughby, 1996)
y que la evaluacin farmacolgica de plantas, o partes de stas, que no han sido
utilizadas por los mdicos tradicionales para tratar determinadas enfermedades, ha
conducido al descubrimiento de extractos y compuestos puros con actividad
farmacolgica promisoria (Guerrero, 2009). Los resultados de esta evaluacin
indicaron que el extracto del fruto de P. serotina tiene la capacidad de relajar, de
una manera dependiente de la concentracin, el msculo liso arterial (Emax = 100
0.7%). Este efecto vasodilatador fue mayor en la aorta de rata que en la trquea
(Emax = 42.3 7.7%) o el leon (Emax = 33.2 6.5%) de cobayo (Cuadros 9 y 10).
Estos resultados, por una parte, corroboran que el extracto acuoso de P. serotina
posee actividad vasodilatadora (Villa De la Torre, 2008) y, por otra, sugiere que el
extracto acuoso de esta planta puede ser utilizado para el tratamiento de
enfermedades cardiovasculares como la hipertensin.

Debido a que el extracto disminuy la resistencia vascular perifrica (relajacin del

segmento de aorta), era de esperarse que disminuyera la presin arterial (Guerrero,
2009). Nuestros resultados confirmaron esta hiptesis, ya que las ratas con
hipertensin inducida con L-NAME (Ratas H) a las que se les administr el extracto
del fruto de P. serotina redujeron de manera significativa el progreso de la
hipertensin (Figura 7). Este incremento en la presin sangunea de las Ratas H
fue el resultado de la inhibicin de la biosntesis del NO (Rubanyi, 1993), el factor
vasodilatador ms importante (Verdejo, 2000), cuyo papel una vez liberado por las
clulas endoteliales es relajar el musculo liso vascular a travs activacin la sGC
(Stankevicius y col., 2003; Verdejo, 2006). El extracto del fruto de esta planta no
modific la presin arterial de ratas normotensas (Ratas N), lo cual est de acuerdo
con los resultados obtenidos para frmacos utilizados en la clnica como los
inhibidores de la ECA, los bloqueadores del receptor adrenrgico beta, los
bloqueadores de canales de Ca2+ dependientes de voltaje, los diurticos y los anti-

53
hipertensivos de accin central, en donde se ha observado que estos frmacos
ejercen efectos vasodilatadores notorios en ratas hipertensas, mientras que no
modifica la presin sangunea de Ratas N (Guerrero, 2009).

El trastorno inducido por la inhibicin prolongada de la NOSe, modifica la

homeostasia vascular y conduce a la perdida de la integridad vascular (Verdejo,
2006; Dias y col., 2009). De tal forma que una exposicin prolongada al inhibidor L-
NAME altera las funciones del endotelio, generando el fenmeno conocido como
disfuncin endotelial (Prez, 2001; Guerrero, 2009), que tambin contribuye a
incrementar la susceptibilidad a desarrollar hipertensin (Versari y col., 2009).

Con el fin de conocer el efecto del extracto acuoso de P. serotina sobre la

disfuncin endotelial, despus de las cuatro semanas de tratamiento, en ausencia o
en presencia de L-NAME, las ratas de los cuatro grupos se sacrificaron, se les
extrajo la aorta y se evalu la vasodilatacin, dependiente de endotelio, en
respuesta al carbacol. Los resultados obtenidos mostraron que la vasodilatacin
dependiente de endotelio se inhibi, casi por completo, en el grupo de ratas H en
comparacin con la vasodilatacin observada en las ratas N (Figura 8), lo que
sugiere que en las ratas H la integridad del endotelio se deterioro, debido a la
deficiencia de NO (Cai y Harrison, 2000; Prez, 2001; Verdejo, 2006), ya que se ha
observado que ste vasodilatador endgeno participa en varios mecanismos
protectores del endotelio (Prez, 2001; Versari y col., 2009). En cuanto al grupo de
ratas H que recibieron de manera simultnea el extracto acuoso, se observ un
incremento significativo (p < 0.05) en la vasodilatacin dependiente del endotelio en
respuesta al carbacol, lo que demuestra que la administracin a largo plazo del
extracto, adems de poseer un efecto hipotensor, tambin proporciona un efecto
protector contra la disfuncin endotelial producida por la hipertensin inducida por
L-NAME.

En general, una dieta rica en frutas y verduras se ha asociado con varios efectos
benficos para la salud como: reducir el riesgo de desarrollar enfermedades

54
cardiovasculares, cncer, diabetes y procesos inflamatorios (Vasco y col., 2009;
Pascual-Teresa y col., 2010), debido a que en su composicin poseen agua, fibra,
vitaminas, minerales y compuestos fenlicos (Tenorio y col., 2006a). En varios
estudios, se ha reportado que los compuestos fenlicos, en particular los
flavonoides, pueden inducir vasodilatacin mediante el incremento de la
biodisponibilidad del NO (Versari y col., 2009), debido que su capacidad
antioxidante evita que especies reactivas de oxgeno como el anin superxido
inactiven el NO y generen peroxinitritos (Verdejo, 2006; Versari y col., 2009;
Mladenka y col., 2010). Sin embargo, la baja correlacin encontrada entre el efecto
vasodilatador y la actividad antioxidante (Ibarra-Alvarado y col., 2010), sugiere que
en la vasodilatacin producida por estos compuestos intervienen otros
mecanismos, tales como: la activacin de canales de K + dependientes de voltaje
(Calderone y col., 2004) y la activacin de la va del NO/GMPc (Mullen y col., 2002;
Tenorio y col., 2006b), entre otros.

En el caso particular del extracto acuoso obtenido a partir del fruto de P. serotina,
se realiz la cuantificacin de compuestos fenlicos y flavonoides, y se encontr
que el extracto contiene una cantidad de fenoles totales (12.6 0.85 mg GAE/g de
muestra seca) similar al de otras frutas comnmente consumidas por la poblacin,
como las fresas (12.3 mg GAE/g de muestra seca) y las uvas rojas (12.0 mg GAE/g
de muestra seca) (Vinson y col., 2001), las cuales contienen una gran cantidad de
compuestos fenlicos, incluyendo flavonoides, cidos fenlicos y resveratrol
(Dohadwala y Vita, 2009). As mismo, como se esperaba, una gran parte de los
compuestos fenlicos son flavonoides (alrededor del 60%). Estos compuestos
contribuyen, de manera importante, a los beneficios asociados al consumo de
frutas y verduras, debido a que presentan actividad antioxidante, espasmoltica,
antibacteriana, antifngica, antiparasitaria, antitrombtica, antiinflamatoria,
antialrgica, hepatoprotectora y vasodilatadora (Harborne y Williams, 2000; Tenorio
y col., 2006a; Vasco y col., 2009).

55
Los resultados obtenidos en la presente tesis validaron cientficamente el uso del
fruto de P. serotina en la medicina tradicional mexicana para el tratamiento de la tos
y la diarrea. Adems, el efecto vasodilatador intenso producido por el extracto
sugiere que el fruto de P. serotina representa una fuente de compuestos
vasodilatadores potencialmente tiles para tratar enfermedades cardiovasculares.
Finalmente, nuestros resultados sugieren que los compuestos fenlicos, en
particular los flavonoides, podran contribuir, de manera importante, a los efectos
farmacolgicos (antitusivo, antidiarreico y vasodilatador) producidos por el extracto
acuoso del fruto de P. serotina.

56
VIII. CONCLUSIONES

El extracto acuoso del fruto de P. serotina relaja, de una manera dependiente

de la concentracin, la musculatura lisa intestinal y traqueal, lo cual valida el
uso del fruto de esta planta en la medicina tradicional mexicana para el
tratamiento de la tos y la diarrea.

El fruto de P. serotina contiene compuestos activos capaces de relajar, de

una manera dependiente de la concentracin y con elevada eficacia, la aorta
de rata.

El extracto acuoso del fruto de P. serotina posee efecto hipotensor en ratas

con hipertensin inducida por L-NAME, pero no modifica la presin de ratas
normotensas.

Los animales con hipertensin inducida por L-NAME tratados con el extracto
objeto de estudio frenaron la progresin de la disfuncin endotelial (efecto
protector) generada por la hipertensin.

Los efectos farmacolgicos que posee el extracto acuoso obtenido a partir

del fruto de P. serotina son producidos, al menos en parte, por los
compuestos fenlicos, en particular los flavonoides.

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