artigo tcnico
Qualificao de um programa de Monitoramento
Ambiental seleo / justificativa dos locais
de amostragem
Autor: Scott Sutton, Ph.D.
Vectech Consultoria Farmacutica
Contato: sbcc@sbcc.com.br
Traduo: Eliane Bennett e Elisa Krippner (Coordenadoras
do Comit de Recomendaes Normativas da SBCC e
ABNT/CB 46), e J. Fernando B. Britto (Secretrio do GEC-4)
O departamento de microbiologia desempenha um
papel crtico na qualificao ou requalificao de uma
instalao. Existem algumas reas de atuao nas quais
a qualificao mais relevante:
Estudos de Limpeza.
Planejamento de Controle de Contaminao.
Estudos de tempo de espera do Equipamento.
(Determinao dos tempos de espera para equipa-
mento limpo e contaminado).
Seleo de pontos de amostragem para monitora-
mento ambiental.
Estabelecimento de nveis de alerta e de ao.
Este artigo focar a seleo dos pontos de amos-
tragem, uma vez que este tema causa uma srie de
confuses no campo. Isto no quer dizer que esta a
nica abordagem para a seleo e, sim, a metodologia
que o autor utilizou no passado. Dadas as limitaes de
espao, esta discusso no envolver amostragem do
sistema de gua, de gases ou de pessoal (tpicos impor-
tantes a serem discutidos em artigos posteriores).
O nmero de pontos a serem avaliados em um estu-
do de qualificao deve ser dividido por tipo de ensaio e
superfcie:
Contagem de partculas em suspenso no ar (no-
viveis).
Amostragem ativa de partculas viveis em suspen-
so no ar.
Amostragem passiva de partculas viveis em sus-
penso no ar (placas de deposio).
Amostragem de superfcie para paredes e pisos.
Amostragem de superfcie para equipamentos.
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Por: Scott Sutton
Nmero de pontos para estudos
de Qualificao
O anexo B da norma NBR/ISO 14644-1 estabelece a
seguinte equao para determinao do nmero mnimo
de pontos de amostragem para contagem de partculas
em suspenso no ar, durante a qualificao do ambiente:
NL = A
Onde:
NL o nmero mnimo de pontos de amostragem
(arredondado para um nmero inteiro imediatamente
superior)
A a rea da sala ou zona limpa em metros quadra-
dos.
Esta equao pode funcionar bem para contagem
de partculas no-viveis (que, afinal, o objetivo da
referida norma), porm, devemos considerar tambm a
amostragem de ar quanto a partculas viveis (em am-
bos os mtodos: ativo e passivo) e o monitoramento de
superfcies com relao a partculas viveis.
Para simplificar, podemos dizer que, recomenda-
do que as amostragens ativas, tanto de viveis quanto
de no-viveis, sejam feitas no mesmo local (ou o mais
prximo possvel para evitar o comprometimento da
outra medio ou da integridade do produto). Portanto,
podemos dizer que o nmero de pontos de amostragem
de partculas viveis em suspenso no ar determinado
segundo o clculo utilizado para partculas no-viveis.
As amostragens passivas (placas de deposio) de
partculas viveis em suspenso no ar so frequente-
mente utilizadas para controle da sala (ou zona) limpa.
Estas amostragens possuem vrias vantagens,
entre as quais a principal vantagem a possibilida-
de de manter a placa em exposio contnua por at
4 horas (o tempo de exposio precisa ser demons-
trado) e no gerar perturbao ao ambiente prximo,
possibilitando, assim, o posicionamento das placas em
locais extremamente prximos de onde o produto se
encontra exposto (veja Whyte, 1996, a respeito desta
e de outras vantagens).
Adicionalmente, as amostragens passivas so me-
nos suscetveis s variaes de fornecedores como no
caso dos amostradores ativos (Yao e Mainelis, 2006).
Contudo, no fica claro como os dados devem ser
interpretados nos casos de reas de fluxo de ar unidire-
cional, usadas nas salas limpas modernas.
A necessidade da amostragem passiva evidente.
As regulamentaes internacionais atuais para o moni-
toramento de ar incluem a sua utilizao e a justificativa
dos locais de amostragem.
Uma abordagem prudente usar para as placas de
deposio, o mesmo nmero de pontos de amostragem
utilizado para os programas de amostragem ativa de par-
tculas viveis e no-viveis. Os pontos de amostragem
podem no ser necessariamente nos mesmos locais,
mas similares em nmero. Lembre-se que no estamos
falando sobre os locais de amostragem para o programa
de monitoramento ambiental em curso, mas, sim, sobre
a qualificao dos locais de amostragem a serem usa-
dos no programa de monitoramento de rotina.
Resta-nos ainda, determinar o nmero de pontos de
amostragem em superfcies para o estudo de qualifica-
o. No h diretrizes regulatrias para indstria farma-
cutica internacional para a determinao de pontos de
amostragem em superfcies (mesmo o PIC/S, que geral-
mente pode ser consultado para obteno de detalhes
sobre quase tudo em microbiologia, no faz comentrios
nesse sentido - PIC/S 2004). O mesmo ocorre no caso
da PDA (Parenteral Drug Association) Relatrio Tcnico
n 13. Para esta determinao, devemos utilizar nossos
prprios critrios. Uma abordagem para a determinao
do nmero de pontos de amostragem em superfcies
(paredes e pisos) seria usar o mesmo procedimento da
NBR/ISO 14644-1, tratando cada superfcie separada-
mente e determinando o nmero mnimo de pontos em
cada superfcie, como a raiz quadrada da sua rea.
Aps a determinao de nmero de pontos de amos-
tragem em paredes e pisos, ainda temos a questo de
como determinar o nmero de pontos de amostragem
em superfcies de equipamentos. Na minha opinio, esta
questo no pode ser respondida adequadamente com
a mesma abordagem. Esta definio, deve ser avaliada
em cada instalao e o nmero de pontos deve ser defi-
nido em funo da natureza de cada equipamento, bem
como dos processos produtivos associados.
Seleo de pontos
de amostragem
Aps determinar o nmero de pontos para cada sala,
precisamos agora definir sua localizao. Aqui o Relat-
rio Tcnico da PDA fornece uma diretriz til:
Os fatores a serem considerados na seleo dos
pontos para monitoramento de rotina so:
Em quais pontos a contaminao microbiana tem
maior efeito adverso na qualidade do produto?
Quais pontos melhor demonstram uma proliferao
microbiana mais intensa durante a produo?
A seleo do ponto pode envolver um modelo esta-
tstico (por exemplo, segundo os clculos da NBR
ISO 14644-1) ou a seleo dos pontos pode ser feita
baseada em uma grade? Alguns pontos de monitora-
mento de rotina devem ser rotativos?
Quais pontos representam as reas com maior difi-
culdade de acesso ou de serem limpas, higienizadas
e desinfetadas?
Quais atividades na rea contribuem para a dissemi-
nao da contaminao?
O prprio ato de amostragem em um determinado
local perturba o ambiente o suficiente para provocar
erros nos dados ao serem coletados ou pode conta-
minar o produto?
O Guia do FDA para Processamento Assptico
(Aseptic Precessing Guidance - FDA 2004) tambm pro-
porciona alguma orientao na seo IV.A:
A qualidade do ar na proximidade imediata de re-
cipientes/frascos esterilizados expostos e das opera-
es de envase e tamponamento deve ser adequada
com relao concentrao de partculas, sendo a sua
contagem de partculas por metro cbico com valor no
superior a 3520 partculas de dimetro maior ou igual
a 0,5 micrometros, contadas em locais representativos,
normalmente a uma distncia no superior a 1 p (0,3 m)
do local de trabalho, dentro do fluxo de ar e durante as
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artigo tcnico
operaes de envase e tamponamento.
Este nvel de limpeza do ar tambm conhecido com
Classe 100 (ISO classe 5).
Recomendamos que as medies para confirmar a
classe de limpeza do ar em reas crticas sejam feitas
em locais onde h maior potencial de risco para reci-
pientes, frascos e produto exposto esterilizados. re-
comendado que a sonda do contador de partculas seja
posicionada em uma orientao demonstrada para obter
uma amostra significativa.
recomendado que o monitoramento regular seja
executado em cada turno da produo. Recomendamos
conduzir o monitoramento de partculas no-viveis com
um sistema de contagem remoto
NOTA 1. Estes sistemas so capazes de coletar
dados mais abrangentes e geralmente so menos in-
vasivos do que os contadores portteis de partculas.
Veja a Seo X.E para orientao adicional em monito-
ramento de partcula. Algumas operaes podem gerar
altas concentraes de particulado do prprio produto
(por exemplo: envase de ps) que, por sua natureza, no
constituem um risco de contaminao ao produto. Nes-
ses casos, pode no ser vivel avaliar a qualidade do ar
dentro da distncia de um p (0,3 m) e ainda diferenciar a
concentrao de partculas de contaminantes do ar das
partculas geradas pelo prprio produto. Nestes casos,
o ar pode ser amostrado de tal modo que, at onde seja
possvel, caracterize o verdadeiro nvel de contaminao
de partcula extrnseca, qual o produto est exposto.
NOTA 2. A qualificao inicial da rea sob con-
dies dinmicas, sem executar a operao real
de envase, pode proporcionar informaes de base so-
bre a gerao de partculas oriundas da operao sem
produto.
Notas dos tradutores:
A. O uso de sondas remotas para contagem de par-
tcula em reas com elevados graus de limpeza,
pode introduzir erros na contagem de partculas de
maior dimetro (maiores ou iguais a 5 micrometros),
em funo de aumentar a probabilidade de adeso
destas partculas na mangueira existente entre os
captores isocinticos e a entrada dos contadores.
Recomenda-se consultar o fabricante do contador
de partculas para avaliar as mximas distncias e
quantidade de curvas recomendadas.
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B. Recomenda-se realizar ao menos uma contagem de
partculas imediatamente a montante do ponto do
envase (seguindo o sentido de fluxo de ar), para com-
provar a qualidade do ar antes de entrar em contato
com o produto. Por exemplo: em um fluxo unidire-
cional vertical, executar uma amostragem dentro da
faixa de 0,3m acima do ponto de envase.
Mais adiante na Seo X.A lemos :
Tempo de amostragem, frequncia e local, devem
ser selecionados cuidadosamente, baseados na sua
relao com a operao executada. ...
importante que os pontos de monitoramento ava-
liem o maior risco microbiolgico do produto, sendo
esta a parte chave do programa. particularmente im-
portante monitorar a qualidade microbiolgica da rea
crtica para determinar se foram mantidas condies
asspticas durante as atividades de envase e tampona-
mento. As amostragens do ar e das superfcies devem
ser coletadas no local onde ocorre manipulao ou
exposio significativa do produto durante a produo.
Superfcies crticas que entram em contato com o pro-
duto estril devem ser mantidas estreis durante todo o
processo. Quando identificados os pontos crticos para
amostragem, deve-se levar em considerao os riscos
de contaminao no processo, incluindo fatores como:
dificuldade de montagem, durao do processamento e
impacto de intervenes.
O guia EU Manufatura de produtos Medicinais
Estries (Manufacture of Sterile Medicinal Products -
EU2008) proporciona algumas diretrizes para seleo
de pontos de amostragem:
18. Onde ocorrem operaes asspticas, o moni-
toramento precisa ser frequente, usando mtodos como
os de colocao de placas, amostragem volumtrica do
ar e de superfcie. (e.g. hastes com algodo - swabs e
placas de contato). Os mtodos de amostragem usados
na operao no devem interferir na zona de proteo.
Da mesma forma, na mais recente reviso proposta
pelo captulo <1116> da USP (USP2007) indica:
Pontos de amostragem microbiolgica so melho-
res selecionados quando a atividade humana durante as
operaes de manufatura considerada. Observao
cuidadosa e mapeamento de uma sala limpa durante a
fase de qualificao podem fornecer informaes a cer-
ca do posicionamento e da movimentao do pessoal
dentro dos ambientes. Tal observao tambm pode
fornecer informaes importantes a respeito das mani-
pulaes e das intervenes frequentemente realizadas
durante o processo.
Outra rea de interesse com respeito entrada de
contaminantes em salas limpas diz respeito aos pontos
onde a entrada de equipamentos e materiais realizada
a partir de reas de menor classificao para outras de
maior classificao. Portanto, as reas dentro e em tor-
no das portas e das antecmara devem ser includas no
plano de monitoramento.
Vamos resumir algumas consideraes relativas
seleo dos pontos de amostragem para o estudo de
qualificao.
Aps determinar o nmero mnimo de pontos numa
sala, devemos determinar sua localizao mais til. Esta
determinao deve ser documentada por escrito e deve
considerar:
Vetores de contaminao (maanetas, painis de
controle, portas, etc.)
reas de intenso trfego
Fluxo de pessoas
Fluxo de materiais
Fluxo de rejeitos
Superfcies difceis de ser desenfeitadas
HVAC (retorna primeiramente neste caso)
Risco ao produto
Extenso da exposio do produto
Tipo de atividade desenvolvida prximo ao local
Potencial de Contaminao atravs de intervenes
e manipulaes
Seleo de pontos de rotina
aps o estudo de Qualificao
O estudo de qualificao deve contemplar uma
amostragem suficiente, tanto sob condies em repou-
so como em operao, para permitir uma identificao media fill ou no teste de esterilidade de produto que foi
adequada de pontos que forneam informaes teis.
Deve ficar claro que o termo informao til no biental proporciona informaes valiosas para a investi-
deve descrever os pontos que proporcionam as conta-
gens mais desejadas, mas aqueles que, ou forneam as
contagens mais altas (indicando o valor mais sensvel
ou crtico do estado de controle da sala) ou se mostra-
ram adequados para constatar um eventual problema
na sala. recomendado que o nmero de pontos em
uma sala ou zona seja igualmente norteado por dados
gerados durante este estudo. Tanto o nmero como a
localizao dos pontos em cada rea ou zona limpa deve
ser justificado no relatrio deste estudo de qualificao.
A seo X.1.A do guia do FDA relevante para a se-
guinte considerao:
Todos os pontos de monitoramento ambiental de-
vem ser descritos em POPs com detalhe suficiente para
permitir amostragem reprodutvel deste ponto. POPs
escritos devem tambm levar em considerao os se-
guintes aspectos:
1. Frequncia de amostragem
2. Quando as amostras foram tomadas (por exemplo:
durante a operao ou aps a concluso das opera-
es)
3. Durao da amostragem
4. Tamanho da amostra (e.g, rea da superfcie, volume
do ar)
5. Equipamento especfico de amostragem e tcnicas
especficas
6. Nveis de alerta e de ao
7. Respostas apropriadas a desvios oriundos dos nveis
de alerta e ao
Nota sobre o Catlogo
de micro-organismos
O FDA recomendou claramente que se estabeleces-
se uma listagem de micro-organismos comuns encon-
trados em ambientes asspticos de manufatura. Esta
expectativa demonstrada na seo X.B (FDA 2004).
A caracterizao de micro-organismos recuperados
proporciona informao vital para o programa de moni-
toramento ambiental. Os micro-organismos isolados no
monitoramento ambiental frequentemente podem ser
relacionados com os contaminantes encontrados no
contaminado. Todo o processo de monitoramento am-
gao. recomendado que o monitoramento das reas
limpas crticas e as reas imediatamente ao redor, bem
como o monitoramento do pessoal, inclua a identificao
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artigo tcnico
de rotina de micro-organismos no nvel de espcie (ou
do gnero, quando necessrio).
Em alguns casos, dados de tendncia de ambientes
revelaram a migrao de micro-organismos para dentro
da sala de processamento assptica, oriundos das reas
no controladas ou de reas menos controladas.
Estabelecer um programa adequado para deteco/
diferenciao dos micro-organismos nos ambientes me-
nos controlados, como no caso dos ambientes Classe
100.000 (ISO classe 8), pode frequentemente ser fun-
damental para deteco de tais tendncias. No mnimo,
recomendado que o programa requeira a identificao
das espcies (ou do gnero, quando necessrio) de
micro-organismos nesses ambientes auxiliares, a inter-
valos frequentes, para estabelecer um banco de dados
vlido dos contaminantes presentes no local durante o
processamento (e para demonstrar que os procedimen-
tos de limpeza e sanitizao continuam eficazes).
O estudo de qualificao de Monitoramento Ambien-
tal uma oportunidade excelente para dar incio a este
catlogo e para gerar informaes a respeito da eficcia
do programa de limpeza e sanitizao sob o ponto de
vista microbiolgico.
Referncias
EU. 2008. EudraLex The Rules Governing Me-
dicinal Products in the European Union Volume
4: EU Guidelines to Good Manufacturing Practi-
ce Medicinal Products for Human and Veterinary
Use: Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Pro-
ducts.
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lification, Non-sterile Process Validation, Cleaning
Validation
PDA. 2001 PDA Tech Report #13 (Revised): Fun-
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USP 2007 <1116> Microbiological Control andMo-
nitoring Environments Used for the Manufacture of
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