PRACTICA DE LABORATORIO QUIMICO DE BIOLOGIA

LEIDY ENITH IMBACHI LULIGO

TEGNOLOGICA AUTONOMA DEL PACIFICO

GESTION AMBIENTAL

MICROBIOLOGIA

CALI - VALLE

OCTUBRE 31 - 2015

LABORATORIO QUIMICO DE BIOLOGIA

 MITCHELL ESCOBAR CARDONA

BIOINGENIERO

TEGNOLOGICA AUTONOMA DEL PACIFICO

GESTION AMBIENTAL

MICROBIOLOGIA

SANTANDER DE QUILICHAO

NOVIEMBRE 7 - 2015

INTRODUCCIN
Este trabajo fue realizado en el laboratorio qumico de biologa de la Universidad
Tecnolgica Autnoma del Pacifico de Cali. Quien nos permite experimentar y
conocer que los microorganismos estn en cualquier lugar del entorno
humano. Pueden estar presentes en un nmero extremadamente grande como
pequeos y con una variedad de tipos, como tambin los microorganismos pueden
ser eliminados, inhibidos o muertos por agentes fsicos o qumicos.

Como tambin nos permiti conocer los procedimientos realizados de

esterilizacin del material de vidrio que tiene una gran influencia en la calidad de
los resultados debido a que cada uno tiene sus limes de aplicacin para su
adecuada limpieza y esterilizacin. Porque de lo contrario podran crecer otros
microorganismo que no son requeridos en la prctica a realizar.

RECOMENDACIONES

1. Durante los procedimientos en el laboratorio siempre se deber usar bata bien

abotonada que deber quitarse antes de abandonar el laboratorio.
2. No sacar del laboratorio ningn equipo o medios de cultivos microbianos.
3. Evitar objetos sobre la mesa no relacionados con la prctica de laboratorio.
4. Se prohbe ingerir o almacenar alimentos o bebidas dentro del laboratorio.
5. Se prohbe fumar aplicarse cosmticos o tocarse la cara con las manos o
algn otro objeto. Sede vera lavar las manos con jabn antes de salir del
laboratorio incluso cuando salga por breves periodos.
6. No se admite visitas a personas que distraigan la atencin y pongan en riesgo
la seguridad en el trabajo que se realiza.

MATERIALES QUE SE UTILIZO EN EL LABORATORIO

1. Cajas de Petri de vidrio

2. Pipetas de 10 ml.

1. Matraz 250Ml.

1. Mechero a gas

3. Tubos de ensayo 16 *150 m.m

3. Pinzas metlicas

1. gota de Azul de metileno

1. Probeta

1. varilla de vidrio

1. Vaso de precipitado

1. Bureta,

Placa de Petri

Caldo nutritivo

Torunda de algodn

Micros copio etc.

LA ESTERILIZACION DE LABORATORIO QUIMICO

La esterilizacin, procedimiento que consiste en destruir todos los grmenes vivos
que existan sobre los objetos o sustancias que se desean libre de ellos
(aspticos). No se puede hablar de esterilizacin sin considerar el concepto de
microorganismo. Un microorganismo es un agente microscpico vivo e
imperceptible a los sentidos que generalmente est agrupado en colonias, aunque
bien puede estar como una unidad formadora de colonias (U.F.C.), la que se
desarrolla en un medio apropiado para formar colonias perceptibles. Los
microorganismos pueden ser patgenos (productores de ciertas enfermedades) o
inocuos (los habitualmente hallados en los alimentos, el aire, el polvillo ambiental,
que no perjudica al hombre).

Etapas del proceso de Esterilizacin:

Descontaminacin

Lavado

Desinfeccin I

Empaque

ESTERILIZACION A VAPOR

Material se puede esterilizar en autoclave: Placas de Petri, matraces,

pipetas de vidrio y objetos de metal. Pueden adquirirse de diversos
proveedores cajas y cilindros metlicos que almacenen convenientemente
el material durante la esterilizacin.
Fundamento de la esterilizacin por calor hmedo: El vapor mata las
bacterias por desnaturalizacin de sus protenas. El aire tiene una influencia
importante en la eficacia de la esterilizacin porque su presencia modifica la
relacin presin/temperatura.
Es necesario ajustar el tiempo y la temperatura: Para lograr la
esterilizacin, porque estos son factores crticos en el proceso. Solo cuando
el vapor se coloca bajo presin su temperatura aumenta y esto permite la
esterilizacin.
Se purga el autoclave: Para desplazar el vapor del agua.
La funcin de la cinta testigo en la esterilizacin: Verificar la eficiencia
de la esterilizacin.
El efecto del calor hmedo en los microorganismos: destruye los
microorganismos por coagulacin de sus protenas celulares.
Ventajas del mtodo propuesto: No deja residuos, el autoclave es sencillo
de manejar y es rpido.
 Desventajas del mtodo propuesto: No permite la esterilizacin de
materiales sensibles al calor y no miscibles al agua.

PREPARACIN MATERIAL DE VIDRIO DE USO EN EL LABORATORIO

1. Se enjuaga con abundante agua potable hasta eliminar todo resto de jabn,
luego se enjuaga 2 3 veces con agua destilada, se deja secar por el
tiempo necesario y finalmente se procede a su acondicionamiento de
acuerdo al mtodo de esterilizacin
2. Al utilizar, la eficiencia del lavado se puede evaluar, observando si el agua
escurre en forma continua por su superficie interior, sin dejar gotas aisladas
que sealen un proceso de limpieza deficiente.
3. Una vez que el material est limpio y seco debe ser esterilizado, para ello
previamente deber empacarse de manera que se pueda mantener estril
hasta el momento de su uso.
4. El material que sirve de envoltura final, o que se emplea para su
preparacin, debe tener las caractersticas adecuadas de esterilizacin.

PROCEDIMIENTO

Tubos de ensayo

1. Colocar a cada tubo una tapa plstica o de metal o una torunda de algodn con
la ayuda de una varilla de madera o vidrio, siguiendo las instrucciones dadas por
el profesor.

2. Colocar los tubos preparados en una cesta destinada para tal fin.

3. Cubrir la cesta con papel Craft y sujetar el mismo con pabilo.

Baln o fiola

1. Colocar una torunda de algodn siguiendo las instrucciones dadas por el

profesor.

2. Cubrir el algodn con una porcin de papel Craft y sujetar el mismo con pabilo.
Cuando se utiliza algodn para cubrir tubos, fiolas se debe tomar la precaucin de
que ste pueda ser manipulado con facilidad, para ello no debe quedar ni muy
apretado ni muy flojo y debe alcanzar aproximadamente 3 cm dentro del material
de vidrio.

Pipetas
 1. Colocar una pequea torunda de algodn en el extremo superior de la pipeta
con la ayuda de un alambre.

2. Envolver completamente con papel Craft, segn las indicaciones dadas por el
profesor. Rotular, por la parte externa del papel, la capacidad de la pipeta. Por
ejemplo: 5 ml. Por 1 ml. etc.

3. Envolver con papel Craft siguiendo las indicaciones del profesor.

Las pipetas, as como las placas de Petri, se pueden envolver individualmente de

la manera indicada, o se pueden colocar en grupos, en recipientes met- licos
especialmente diseados para tal fin, denominados pipeteros y plaqueros
respectivamente. Una vez preparado todo el material de vidrio: Esterilizar
siguiendo las instrucciones sealadas en el trabajo prctico

EJEMPLO:

MATERIAL DE LABORATORIO QUIMICO ESTERIALIZADO

PRACTICA DE PREPARACON DE MEDIOS DE CULTIVOS BACTERIANOS

 El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los
microorganismos. La composicin precisa depender de la especie que se quiera cultivar,
porque las necesidades nutricionales varan considerablemente.

Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:

1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgnicos (hidratos de

carbono, aminocidos, vitaminas, etc.) y nutrientes inorgnicos (P, Fe, N, Mg, S, etc.)

2. Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-agar), tampones,

indicador de pH, etc.

Objetivo de la prctica

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los
microorganismos in vitro.

2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de

microbiologa.

3. Hacer un primer acercamiento a la manipulacin de microorganismos. Adquirir la idea de la

importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las tcnicas ms comunes para
realizarlo.

Realizacin prctica de preparacin de medios de cultivos

Cada mesa de trabajo en grupo de dos alumnos se en cargo de la preparacin de una cantidad
s u ficient de un determinado medio de cultivo, para ser utilizado, en su momento. Pero en todos los
casos, los pasos a seguir eran son los siguientes:

Disolver los componentes del medio en agua destilada. Siguiendo las instrucciones del
profesor, aadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la concentracin deseada
 de los mismos. Si el medio contiene un agente solidifican te (agar-agar) hay que calentar
el preparado hasta la ebullicin del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una
completa disolucin del agar (medios slidos y semislidos); para medios lquidos no es
necesario calentar, nicamente se agita la mezcla hasta la completa disolucin de la
misma.
Esterilizar la disolucin.- Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el
crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse el
medio, el procedimiento ser diferente.
Medios slidos en placa.- Tapar el matraz con tapn de algodn y cubrir con papel de
aluminio. Llevar a esterilizar al autoclave (1210C) durante 15-20 minutos. Una vez estril
repartir en placas de Petri estriles y dejar en reposo para que solidifique.

Material necesario Cultivos bacterianos un frasco lavador, cristalizador, soporte

y colorantes (azul de metileno), asa de siembra, aceite de inmersin.

Procedimiento

Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una pequea alcuota de

un cultivo bacteriano con el asa de siembra estril.
Hacer el frotis, formando una pelcula homognea sobre el portaobjetos
con el asa de siembra. Dejar secar.
Fijar la preparacin, pasando a travs de la llama del mechero el
portaobjetos.
Cubrir con una gota de colorante (azul de metileno) durante 1 minuto.
Lavar el exceso de colorante con agua.
Dejar secar al aire.
Aadir una gota de aceite de inmersin
Observar con objetivo la diferente estructura y organizacin de la tincin
simple nos proporciona exclusivamente informacin acerca de la forma,
tamao y tipo de agrupacin de los microorganismos. Sin embargo tiene la
ventaja de ser un mtodo muy sencillo y rpido del Microscopio ptico de
campo claro
EL MICROSCOPIO: El Microscopio ptico se pueden observar CLULAS VIVAS o
Preparaciones fijadas o coloreadas; se distinguen la Forma de las clulas y la
presencia de la mayora de sus componentes pero es imposible reconocer la
estructura de los mismos. A Lumnico, constituido por el Espejo, Condensador y
Diafragma.
MICROSCOPIO MONOCULAR MICROSCOPIO VINOCULAR

Las partes del Microscopio son:

Sistema ptico
OCULAR: Es la lente situada cerca del ojo del observador que capta y
ampla la imagen formada en los objetivos.
TUBO: Es una cmara oscura unida al brazo mediante una cremallera.
OBJETIVO: Es el lente situada cerca de la preparacin que ampla la
imagen de sta, lo que significa que es muy importante este elemento del
microscopio, es un elemento vital que permite ver a travs de los oculares.
CONDENSADOR: Es el lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparacin que concentra ms o menos el haz luminoso sobre la
preparacin mediante su acercamiento o alejamiento de la Platina, al
accionar un tornillo similar al macro mtrico.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador que
permite regular la cantidad de luz proveniente del Espejo mediante un
mecanismo de apertura y cierre similar al de la pupila del ojo humano.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecnico
BRAZO es una pieza metlica de forma curvada que gira sobre el pie o
base que Sostiene por su extremo superior al Tubo ptico y en el inferior
 lleva varias piezas importantes como la Platina, el Condensador y el
Diafragma.
PLATINA: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el
lugar donde se deposita la preparacin, que permite el paso de los rayos
procedentes de la fuente de iluminacin situada por debajo. Dos pinzas
sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de
cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento que permite mover la
preparacin de delante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser
monocular, binocular.
REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos que permite, al girar,
cambiar un objetivo u otro.
TORNILLO MACRO y MICROMTRICO: Son tornillos de enfoque, mueven
la platina hacia arriba y hacia abajo. El macro mtrico lo hace de forma
rpida y el micromtrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de
bloqueo que fija la platina a una determinada altura.
BASE: Soporte que mantiene la parte ptica

Mantenimiento y precauciones
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento
en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la
platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto
con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a
usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario
para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el
microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que
queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro
(menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en
un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en
el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol.
No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macro mtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).
 CONCLUSIONES
1. Las principales razones de controlar a los microorganismos son:
Para evitar la transmisin de la enfermedad y la infeccin.
Para erradicar los microorganismos de un hospedero que est
infectado.
Para prevenir el deterioro y alteracin de los materiales por los
microorganismos.
Para tener el control de las posibles contaminaciones durante el
trabajo de laboratorio.
2. Las buenas prcticas necesarias para lograr una buena esterilizacin
del material de vidrio del laboratorio qumico se conservan hasta su
nuevo uso.
 BIBLIOGRAFIA

1. Mtodos de esterilizacin recuperado de:

http://www.quimicayalgomas.com/salud/metodos-de-esterilizacion/

2. Vignoli, R. Esterilizacin y desinfeccin.21p.

http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap% 2027.pdf.

3. Laboratorio de Microbiologa. Mtodos de Esterilizacin.

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/faculta
d_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A9todos_ de_esterilizaci
%C3%B3n.pdf

4. DARNELL, J., et al. Biologa Celular y Molecular. Editorial Mdica

Panamericana, Barcelona, 2003. Cuarta edicin

5. LODISH Harvey and Arnold Berk. 2005. Biologa Celular y

Molecular. 5 edicin Editorial Panamericana

6. SOLOMN .2008. Biologa. Octava edicin Editorial Mc Graw-Hill.