1- Prueba de la fosfatasa alcalina termorresistente.

Se usa para la identificacin del genero Pseudomonas, determinando la actividad

enzimtica termolbil de la fosfatasa alcalina que presenta este microorganismo.

La prueba se realiza utilizando el indicador incoloro p-nitrofenil fosfato, el cual se desdobla

para dar p-nitrofenol (compuesto de color amarillo) y fosfato inorgnico, cuando acta
sobre el la enzima fosfatasa producida por todas las especies Pseudomonas, sin embargo, la
mayora de estas bacterias son inactivadas al ser calentadas a 70C, solamente la P.
aeruginosa, P. pseudomallei y P.boreopolis son termorresistentes.

Interpretacin de resultados:

Tubo calentado Tubo no calentado (Control)

Pseudomona Termolbil Negativa (incolora) Positiva (color amarillo)
Pseudomona Termorresistentes Positivo (color amarillo) Positivo (color amarillo)
Otro microorganismo Negativo (incolora) Negativo (incolora)

2- Prueba de la esculina en medio con bilis.

Se realiza para determinar Streptococos del grupo D y Listeria monocytogenes los cuales
tienen la capacidad de hidrolizar el glucsido esculina en esculetina y glucosa en presencia
de bilis.

Mtodo de rutina: El cultivo que contiene esculina con bilis como indicador de hidrolisis
[0,05%] se hace reaccionar con citrato de hierro, la formacin de esculetina junto con la sal
produce un complejo castao oscuro o negro, el cual se puede observar en el pico de la
flauta luego de ser inoculada, demostrando as una reaccin positiva.

3- Prueba de solubilidad en la bilis

Se usa para diferenciar entre el Streptococcu pneumoniae, Haemophilus influenzae, H.
aegyptius soluble en bilis y otras especies de Haemophilus y streptococcus alfa-hemoliticos
no solubles en bilis.

La prueba se realiza para controlar en un tiempo y a una temperatura especifica la

capacidad celular de un microorganismo de producir lisis en presencia de sales biliares
(desoxicolato de sodio o taurocolato de sodio son las ms utilizada por ser los cidos lticos
ms activos). Se utiliza el indicador rojo de metilo que en medio alcalino produce una
coloracin roja o rosada y en medio acido un color amarillo.
Interpretacin de resultados:

Cuando la solucin es clara o comienza aclarar significa que el microorganismo es soluble

en bilis, hay presencia de S. pneumoniae pero si la solucin se mantiene turbia igual que el
control la especie es alfa-Streptococcus u otro organismo.

4- Prueba de fermentacin de los hidratos de carbono.

Se realiza para determinar la capacidad de un organismo de degradar un hidrato de carbono
especifico incorporado a un medio bsico, produciendo acido o acido con gas visible.

Esta prueba se usa para las especies que fermentan glucosa como la Enterobacteriaceae y
para las que fermentan tanto glucosa como lactosa: Escherichia coli, Klebsiella y grupos
Enterobacter. Tambien a diferenciar entre los generos Listeria monocytogenes de especies
de Corynebacterium.

La fermentacin es un proceso metablico de oxidacin-reduccin anaerbico en el cual un

sustrato orgnico sirve como el aceptor de hidrogeno final (aceptor de electrones) en lugar
del oxgeno.

Algunas bacterias pueden fermentar anaerbicamente la glucosa, otras la oxidan y algunas

pueden metabolizarla por ambos mtodos, mientras que otras, aun, son incapaces de utilizar
la glucosa. No todos los monosacridos son degradados por todas las especies bacterianas;
sus formas de fermentacin difieren, ayudando a la identificacin del grupo, gnero o
especie.

Una bacteria puede utilizar diferente ciclos para formar acido pirvico y en el mismo
organismo puede ocurrir simultneamente ms de un ciclo. Pueden emplearse las pruebas
de fermentacin de los hidratos de carbono para determinar que productos terminales se
han formado, pero no los ciclos utilizados.

El indicador de pH que se utiliza para mostrar que un hidrato de carbono ha ido fermentado
es el rojo de fenol, ya que la mayora de los productos finales de metabolismo de los
carbohidratos son cidos orgnicos. Con el rojo de fenol el cambio de color se aproxima al
pH original del medio.

Interpretacin de resultados:

Positivo: Coloracin amarilla, acido (6,8), la produccin de gas es variable.

Negativa: Coloracin rosa-rojizo, alcalina.

 5- Prueba de la catalasa.

Se realizar para la diferenciacin de gnero y especies al comprobar la presencia de catalas

como por ejemplo: Diferenciar el gnero Streptococcus (-) del Micrococcus (+) y/o
Staphylococcus (+), Bacillus (+) del Clostridium (-), Literia monocytogenes (+) y/o
Corynebacterium (+) de Erysupelothrix (-) as como la especie Morella bovi (v) y Morella
kingii (-) de otras especies de Morella(+).

La enzima catalasa se encuentra en la mayora de las bacterias que contiene citocromos, las
que no lo poseen no pueden descomponer el perxido de hidrogeno el cual es formado del
producto final oxidativo de la descomposicin aerbica de los azucares, si el perxido de
hidrogeno se acumula en la bacteria puede causar su muerte debido a su alto nivel de
toxicidad.

6- Prueba del citrato.