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UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA


AGRICULTURA
INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

PRACTICA DE LABORATORIO

Nombre: Andrs Acosta Materia: Biologa Molecuar I

Practica N: 3 Fecha: 19/01/2017 Curso/NRC: 1606

1. TEMA: Extraccin de DNA

2. OBJETIVOS:
General:
Seguir el protocolo indicado en la gua de laboratorio para lograr una buena
extraccin de DNA.
Especficos:
Determinar el procedimiento adecuado para impedir la degeneracin/daado del
material vegetal.
Saber que funcin cumple el DNA Zol Reagent material vegetal y por qu estn
importante.

3. MARCO TEORICO:
La extraccin del DNA se realiza a partir de homogenizados de tejidos, de clulas
sanguneas o de restos celulares descamados pilosos. Este procese se puede realizar
por diferentes procesos que son muy similares, con ligeras variantes para cada
proceso. (Jimnez, 2003)

El concepto bsico de la extraccin de DNA se puede dividir esencialmente en 5


pasos, los cuales normalmente suelen ser: Ruptura/lisis de las clulas (esto se lleva a
cabo mediante el uso de detergente o enzimas), eliminacin de protenas, eliminacin
de RNA, extraccin de protenas y precipitacin de DNA. (Zavala, 2005)

4. MATERIALES Y MTODOS:
- DNA Zol Reagent - Esptulas
- Nitrgeno lquido - Gradillas
- Mortero y pistilo - Etanol
- Micropipetas y puntas - Hojas
- Centrifuga - Cloroformo
- Eppendorf - Te

1) Lisis de clulas y ncleos-Homogenizacin de Tejidos


- Aadimos 1 mL DNA Zol por 25-50 mg de tejido.
- Maceramos (tejido congelado en nitrgeno lquido) en morteros congelados.
- Mezclamos a fondo usando una pipeta.
- Incubamos por 5-10 min a temperatura ambiente mezclando por inversin.
- Aadimos 600 uL cloroformo.
2) Centrifugacin
- Centrifugamos por 6 min a 14000 rpm a TA.
- Transferimos el sobrenadante a un nuevo tubo.
3) Precipitacin
- Precipitamos con 0.5 mL de etanol 100% por 1 mL de DNA Zol usado.
- Mezclamos por inversin y almacnanos a TA por 1-3 min.
- Centrifugamos a 4000 rpm por 1-2 min a TA. Eliminamos el sobrenadante.
4) Lavado
- Lavados el precipitado 2 veces con 1 mL de etanol al 95%.
- En cada lavado centrifugamos a 4000 rpm por 1-2 min.
5) Suspensin
- Secamos el DNA a TA por 10-15 min.
- Disolvimos el pellet en TE.

5. RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
Para la extraccin de DNA de material vegetal se debe procurar mantener al material a
bajas temperaturas para as evitar su oxidacin y por ende perdida del material
gentico.

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Fig. 1. Material vegetal pulverizado en mortero congelado.

Al tener el material pulverizado junto con el DNA Zol se puede o no realizar un proceso
de purificacin con ayuda de cloroformo para hacer que la muestra obtenga una mejor
cada libre de molculas contaminantes.

Fig. 2. Adicin de cloroformo para purificacin de muestras.

En la parte de lavado, es importante realizarlo dos veces mnimo para asegurar una
buena limpieza de cualquier tipo de residuo que haya podido quedar despus de la
precipitacin del DNA.

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Fig. 3. Tubos eppendorf con muestra de DNA visible despus del lavado.

6. DISCUSION:
Dependiendo del protocolo de extraccin de DNA que se utilice se puede variar tanto
en los tiempos de reposo, centrifugacin y as mismo en los reactivos utilizados para
las distintas etapas como la lisis celular, la precipitacin o el lavado. (Ghislain,
Dapeng, & Herrera , 1998)

La eliminacin de protenas, lpidos, azcares, RNA, en otros, es una parte


fundamental del proceso, ya que esto impedir que se obtenga una extraccin fallida y
as poder realizar el estudio pertinente con el DNA que se extrae con seguridad de no
tener fallas en el proceso. (Snchez, Zrate, Gallego, & Tohme, 2005)

7. CONCLUSIONES:
Durante todo el procedimiento se debe ser muy cuidadoso con cada paso a seguir ya
que se requiere de una gran precisin sobre todo en los momentos de aplicar los
diferentes reactivos a la muestra en uso.

El DNA Zol Reagent es el reactivo que se encarga de producir la lisis celular adems
de y se encarga de aislar el DNA tanto genmico con en caso de ser necesario viral.

8. BIBLIOGRAFA:
Ghislain, M., Dapeng, Z., & Herrera , M. (1998). Protocolos de Laboratorio de Biologa
Molecular. Lima: CIP.
Jimnez, A. (2003). Manual de Neurogenpetica. Madrid: Edigrafos.

4
Snchez, I., Zrate, L., Gallego, G., & Tohme, J. (2005). Un Nuevo Modelo para la
Identificacin de la Diversidad Gentica de Cacao en Colombia. Cauca: CIAT.
Zavala, J. (2005). Manual de Tcnicas Bsicas de Biologa Molecular. Mrida: Ediciones
de la Universidad Autnoma de Yucatn.