Factores que Afectan la Actividad

Enzimtica.
Regulacin de la Actividad de enzimas
en un Organismo Vivo.

Dra. Mara Mercedes Sobern Lozano

Factores que influyen en la
actividad enzimtica

Concentracin de sustrato
Concentracin de enzima
Temperatura
pH

De qu manera influyen?
 Efecto de Temperatura
Temperatura ptima para la mayora de enzimas de
origen animal: 40 - 45 C.
Insuficiente calor Denaturacin.
para alcanzar Energa cintica es
barrera de tan grande que
energa. excede barrera
No hay catlisis, o energtica. Mayor
es muy baja. colisin entre
molculas

10 20 30 40 50 60 70

Temperatura C
Labilidad trmica de
Glucosa-6-P
deshidrogenasa resulta en
anemia hemoltica.
G-6-PDasa: enzima
importante para mantener
integridad de membrana de
glbulos rojos.
Una mutacin en esta
enzima produce
disminucin de estabilidad
trmica en eritrocitos
HEMLISIS EXCESIVA.
 Efecto de pH
Ionizacin de
aminocidos del sitio
cataltico envueltos en
CATLISIS
Ionizacin en grupos
PROPIAMENTE dicha.
del SUSTRATO para su
fijacin con la enzima.

Ionizacin en otros Ionizacin en

aminocidos de la aminocidos de la
enzima, no ENZIMA involucrados en
ubicados en el sitio fijacin del SUSTRATO.
cataltico.

2 4 6 8 10 12 14
pH
 Efecto de pH en Sistemas Biolgicos
Alcohol deshidrogenasa

CH3CH2OH + NAD+ CH3CHO + NADH + H+

Etanol Acetaldehido

Aldehido deshidrogenasa

CH3CHO + NAD+ + H2O CH3COOH + NADH + H+

Acetaldehido c. actico

Alcohol deshidrogenasa (ADH)

Residuo 47 Residuo 369 pH opt.
constituida por 3 cadenas
polipeptdicas: , , . -1 Arg Arg 10
-2 His Arg 8,5
Variacin de cadena ha dado -3 Arg Cys 7
lugar a isoenzimas de ADH
 Regulacin de la Actividad Enzimtica

1) Control de la
transcripcin.
Biosntesis de la
enzima.
2) Modificacin
covalente
3) Control por
retroaccin
4) Activacin mediante
ruptura
5) Enzimas alostricas
 Control de transcripcin
Segundos mensajeros,
hormonas, nutrientes, -Insulina, hormona
ejercen control en anablica, induce
mecanismos de sntesis de enzimas:
expresin del gen de -Glucoquinasa,
enzimas fosfofructoquinasas,
piruvato quinasa,
glucgeno sintetasa.

- Insulina reprime la
sntesis de enzimas
Insulina va gluconeognica
 Control de la Transcripcin
SNTESIS ENZIMAS REGULADA A NIVEL GENTICO

enciende la transcripcin Bloquea la transcripcin

A, Z = metabolito
H = hormona
 Control de la Transcripcin
SNTESIS ENZIMAS REGULADA A NIVEL GENTICO

Enzimas constitutivas
- Procesos
Sntesis enzimtica Degradacin enzimtica

- Cantidad de protena y mRNA permanecen

inalterados

- No suelen presidir pasos reguladores de vas

metablicas
 Control de la Transcripcin
SNTESIS ENZIMAS REGULADA A NIVEL GENTICO

Enzimas inducibles
- Niveles segn las diferentes circunstancias
metablicas.
- Induccin de la cantidad debido a estmulos.
- Enzimas controladoras de vas metablicas.
- Fcilmente degradadas.

Vida media Ornitina descarboxilasa 15-20 minutos

Lactato deshidrogenasa 150 horas
Ornitina descarboxilasa 0,3-0,5 horas
 Regulacin actividad
enzimas a corto plazo.
Modificacin Covalente: Fosforilacin
/Defosforilacin
Gluggeno sintetasa inactiva

Gluggeno sintetasa activa

Glicgeno fosforilasa inactiva

Glicgeno fosforilasa activa

Glicgeno sintetasa activa

Glicgeno sintetasa inactiva

 Modificacin Covalente
Fosforilacin: Protein quinasas

R CH R CH
ATP ADP
N H N H
O C O C O
Ser H C CH2OH Ser HC CH2O P O-
H N Proteinquinasa H N O-
C O C O
R' CH R' C H
N H N H

Sobre residuos de Ser, Thr, Tyr en protenas blanco

 Modificacin Covalente
Defosforilacin: Protein fosfatasas

R CH Pi R CH
H 2O
N H N H
O C O O C
Ser HC CH2O P O- Ser H C CH2OH
- Fosfatasa
H N O H N
C O C O
R' C H R' CH
N H N H

Sobre residuos previamente fosforilados: Ser-P, Thr-P,

Tyr-P de protena blanco
 Modificacin Covalente: Fosforilacin
/Defosforilacin
Hay algunas proteinquinasas que
fosforilan restos de His, Lys, Arg, Gln,
Asp.

Fosforilaciones sobre Ser/Thr estn

asociadas, generalmente, a procesos de
regulacin metablica.

Fosforilacin sobre Tyr est con procesos

de crecimiento celular y diferenciacin.
Modificacin covalente
Adenilacin: Sistema de la Glutamina sintetasa

AT = adenililtransferasa
 Activacin mediante ruptura proteoltica

Tripsingeno
Eliminacin de un
hexapptido del Quimotripsingeno
extremo N- enteropeptidasa
terminal del
tripsingeno, por
enteropeptidasa,
Tripsina

-Quimotripsina
Proelastasa
Procarboxi-
peptidasa

-Quimotripsina
Elastasa
Carboxipeptidasa
Quimotripsingeno
(Inactivo)

Tripsina

-Quimotripsina
(activa)

Autocatlisis
(quimotripsina)

-Quimotripsina
(activa)
Mecanismo de Coagulacin sangunea
Factor VIII Mecanismo de Coagulacin sangunea

Factor de von
(285 kDa, 2,351 aminocidos) Willebrand
Trombina
Arg-372 Arg-1689

Factor de von
Willebrand

Arg-740 Arg-1648

Factor de von
Willebrand

Factor VIIIa
H3N 40 kDa 50 kDa Ca2+ 74 kDa COO-
Hay tres variedades de hemofilia:

Un caso de Hemofilia A
HEMOFILIA A, dficit del
factor VIIIa de coagulacin,

HEMOFILIA B, dficit del

factor IXa de coagulacin,

HEMOFILIA C, dficit del

factor XIa.
 Control por Retroinhibicin
Hexoquinasa
Glucosa + ATP Glucosa-6-P + ADP

E1 E2 E3 E4
A B C D E

E5 E6 E7
Sntesis de nucletidos de D E F G
purinas y pirimidinas E3
E1 E2
A B C

E4
K L M N
E8 E9 E10
AMP
-
- GMP
 Enzimas Alostricas

Presentan
subunidades
(oligomricas) Generalmente son
enzimas reguladoras
de vas metablicas.

Actividad regulada
Poseen sitios catalticos
mediante un CENTRO
y alostricos que pueden
ALOSTRICO, sitio
estar ubicados en una
distinto del sitio
misma subunidad o en
activo de la enzima.
diferentes subunidades
de la enzima alostrica
 Protena-cinasa (PKA)

Enzima tetramrica:
Dos subunidades
catalticas y dos
subunidades
reguladoras

Muchos
sustratos
fosforilados
 Sitio
cataltico
Aspartato
Transcarbamilasa

Sitio Participa en la
regulador
ATCasa en estado T sntesis de
pirimidinas.

Tiene 6 subunidades
catalticas (C) y 6
subunidades
reguladoras (R)

ATCasa en estado R
 Enzimas Alostricas

Efector o regulador
alostrico
(inhibidor o activador)
estructuralmente
diferente de los
sustratos; se fija en su
propio sitio lejos de
sitio activo

Efector o regulador
alostrico
No se modifica como
resultado de accin
cataltica
Fosfofructoquinasa-1 (PFK-1)

[ATP] es alta, INHIBE

a la enzima unindose
a un sitio diferente al
sitio activo, esto
produce un cambio
estructural en la
enzima, que baja
fuertemente su
afinidad por fructosa-
6-P.
Citrato, INHIBE
alostricamente a la
PFK-1.
Fructosa-2,6-biP,
AMP, ADP, ACTIVA
fuertemente a esta
enzima.
 Enzimas Alostricas

Pueden adoptar 2 conformaciones

interconvertibles:
-R (relajada, alta afinidad por S)
-T (tensa, baja afinidad por S).
 Enzimas Alostricas
Fijacin de ligandos no sigue comportamiento
Michaelis-Menten.

Vm

Curva sigmoidal es
caracterstica de fijacin
cooperativa de ligandos a
mltiples sitios de fijacin de la
protena.
v
[S]0.5 (K0.5) es a menudo usado para
representar la concentracin de
sustrato que permite alcanzar la mitad
de la velocidad de reaccin catalizada
por una enzima alostrica.

[S]0.5 [S]
 Interaccin Homotrpica
Fijacin de S a un protmero afecta fijacin
de otra molcula de S a otro protmero de la
enzima

Interaccin Heterotrpica
Efecto producido por el sustrato (S),
activador (A), inhibidor (I)
REGULACIN DE LA ASPARTATO TRANSCARBAMILASA (ATCasa)

X Carbamilfosfato
Aspartato
sintetasa II
transcarbamilasa

N-carbamil
Citidina trifosfato
aspartato
(CTP)
REGULACIN DE LA ASPARTATO TRANSCARBAMILASA (ATCasa)
Mecanismo de interacciones
alostricas y cooperatividad
Modelo de simetra (concertado) de Monod-Wyman-
Changeux

s
T

equilibrio

s s s s s s s
R
s s s

1 ligando se une a Simetra molecular S se une de

protmero en cualquier conservada preferencia a
conformacin. durante cambio estado R
Cuando ocurre cambio conformacional A se une slo a R.
conformacional, se I se une slo a T
altera afinidad de los
protmeros por ligando
 Modelo encaje inducido secuencial
Koshland-Nmethy-Filmer

- Ligando induce cambio conformacional en una

subunidad.
- Surgen interacciones cooperativas de este cambio
conformacional sobre las otras subunidades.
S S
s s s

S S
s s s s
s s s
 Clasificacin de Enzimas Alostricas
Clase K
Efector altera el Km pero no Vm
Grfica doble recproca similar a inhibicin
competitiva porque afecta afinidad de centro
de fijacin de S
Clase V
Efector altera Vm pero no Km
Grfica doble recproca similar a inhibicin no
competitiva porque incrementan/disminuyen
velocidad de descomposicin de E-S
 Fin del
primer
captulo!