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LINEA LIQUIDA

Amilasa 405
C Mtodo cintico a 405 nm para la determinacin de
AA
amilasa en suero, plasma u orina. Sustrato CNPG3

SIGNIFICACION CLINICA ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE


La amilasa, producida principalmente en el pncreas ex- ALMACENAMIENTO
crino y en las glndulas salivales, escinde los enlaces -1-4 Reactivo Provisto: estable en refrigerador (2-10oC) hasta
glucosdicos de los polisacridos (almidn y glucgeno). la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Se encuentra elevada en el suero de pacientes con pan-
creatitis aguda alcanzando los valores ms elevados entre INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
las 24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego REACTIVOS
para volver a los niveles normales entre las 24 y 48 horas El Reactivo A puede presentar una coloracin amarillenta
siguientes. que no afecta su funcionamiento.
Tambin se ve aumentada en este caso la excrecin urinaria Cuando el espectrofotmetro ha sido llevado a cero con
de la enzima, persistiendo la hiperamilasuria 3 a 5 das, luego agua destilada, las lecturas de absorbancia del Reactivo A
de que la actividad srica ha alcanzado los niveles normales. superiores a 0,500 D.O. (a 405 nm) son indicio de deterioro
Tambin es posible encontrar valores aumentados en cual- del mismo.
quier caso de "abdomen agudo" o intervencin quirrgica en
regiones prximas al pncreas. MUESTRA
La parotiditis bacteriana y paperas se asocian tambin con Suero, plasma heparinizado u orina
elevaciones en los niveles de amilasa srica. a) Recoleccin: si se utiliza suero, obtener de la manera
usual. Separar el suero del cogulo lo ms rpidamente
FUNDAMENTOS DEL METODO posible. En caso de usar plasma ste debe ser heparinizado.
La -amilasa hidroliza el sustrato definido 2-cloro-p-nitrofenil- Si se emplea orina, la determinacin puede efectuarse en
-D-maltotrisido (CNP-G3) para liberar 2-cloro-p-nitrofenol una muestra de orina ocasional.
(CNP), formndose 2-cloro-nitrofenil--D-maltsido (CNP- b) Aditivos: en caso de usar plasma, debe utilizarse hepa-
G2), maltotriosa (G3) y glucosa. El CNP absorbe a 405 nm y la rina para su obtencin. Si se usa orina ver d).
velocidad de aparicin del color es directamente proporcional c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan
a la actividad enzimtica. interferencias por bilirrubina hasta 22 mg/dl (220 mg/l),
hemoglobina hasta 180 mg/dl, triglicridos hasta 1400 mg/dl
REACTIVOS PROVISTOS (14 g/l), ni heparina hasta 50 U/ml.
A. Reactivo A: solucin conteniendo CNP-G3 2,25 mmol/l, En el caso de orina no debe agregarse cido clorhdrico
cloruro de calcio 5 mmol/l, cloruro de sodio 70 mmol/l, tiocia- como conservador.
nato de potasio 900 mmol/l y buffer MES pH 6, 100 mmol/l. Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las
drogas en el presente mtodo.
INSTRUCCIONES PARA SU USO d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: en
Reactivo A: listo para usar. suero la amilasa es estable durante una semana a tempe-
ratura ambiente (si se evita la contaminacin bacteriana) o
PRECAUCIONES varios meses refrigerada.
El Reactivo A es para uso diagnstico "in vitro". En orina, si la muestra no se procesa en el da, es conve-
El Reactivo A es irritante. H315 + H320: Provoca irritacion niente ajustar el pH aproximadamente a 7 (con hidrxido de
cutanea y ocular. P262: Evitar el contacto con los ojos, la sodio) dado que el pH cido inactiva la enzima irreversible-
piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CON- mente. A pH 7 puede conservarse refrigerada por lo menos
TACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con 10 das sin prdida de actividad, si no existe contaminacin
agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, bacteriana.
si lleva y resulta facil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN
CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
jabon abundantes. - Espectrofotmetro.
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales - Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.
de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos. - Cubetas espectrofotomtricas de caras paralelas.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de - Bao de agua a la temperatura de reaccin seleccionada.
acuerdo a la normativa local vigente. - Cronmetro.

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CONDICIONES DE REACCION * Calculados
- Longitud de onda: 405 nm ** Estos valores de referencia se obtuvieron de una poblacin
- Temperatura de reaccin: 25, 30 37oC sana (n = 40), de ambos sexos, con edades comprendidas
- Tiempo de reaccin: 2 minutos entre 17 y 40 aos, con una dieta mixta normal, sin sntomas
de enfermedad aparente.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
PROCEDIMIENTO
valores de referencia.
A) 25-30oC
En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada, CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI
colocar: Amilasa (U/l) x 0,017 = Amilasa (ukat/l)
Reactivo A 2 ml
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Preincubar 3-4 minutos. Luego agregar: Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Muestra 100 ul No pipetear con la boca.
Constituye una causa de resultado errneo la contaminacin
Mezclar inmediatamente y leer absorbancia luego de 1 del Reactivo A con saliva, dada la elevada actividad amilsica
y 2 minutos. Determinar la diferencia entre la segunda de la misma. En tal caso, descartar el Reactivo.
y la primera lectura. Utilizar este valor para los clculos. Evitar el contacto con elementos de goma (tapones, contra-
Se pueden disminuir proporcionalmente los volmenes tapas) que deterioran el Reactivo A.
usando 1 ml de Reactivo A y 50 ul de Muestra.
B) 37oC PERFORMANCE
Como la actividad a esta temperatura es mayor, emplear a) Reproducibilidad: procesando simultneamente repli-
50 ul de Muestra. Seguir el procedimiento segn A). cados de una misma muestra en un mismo da se obtienen
Se pueden disminuir los volmenes usando 1 ml de los siguientes valores:
Reactivo A y 20 ul de Muestra. Nivel D.S. C.V.
51 U/l 0,978 U/l 1,9 %
467 U/l 2,139 U/l 0,46 %
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Amilasa (U/l) = A/min x factor* b) Sensibilidad: depende del fotmetro empleado. En es-
pectrofotmetro a 405 nm con cubetas de caras paralelas de
Temperatura Reactivo A Muestra Factor 1 cm de espesor, para un A/min de 0,001 el mnimo cambio
de actividad detectable ser de 4 U/l (a 37oC).
C 2 ml 100 ul 1.628
25-30 o
c) Linealidad: la reaccin es lineal hasta una actividad de
1 ml 50 ul 1.628
amilasa de 2000 U/l. Para valores superiores, usar muestra
37oC 2 ml 50 ul 3.178 diluida con solucin salina, repetir la determinacin y multi-
1 ml 20 ul 3.953 plicar el resultado por el factor de dilucin.
*los factores estn calculados de acuerdo a la siguiente
PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
frmula general:
Para las instrucciones de programacin consulte el manual
VT
del usuario del analizador en uso.
Factor =
VM x b x CNP x 10-3
PRESENTACION
donde: - 3 x 10 ml (Cd. 1021404)
VT: volumen total - 3 x 10 ml (Cd. 1009326)
VM: volumen de muestra - 4 x 20 ml (Cd. 1009243)
b: paso ptico - 4 x 20 ml (Cd. 1009603)
CNP: coeficiente de absortividad milimolar del CNP
10-3: factor de conversin (absortividad milimolar a micromolar) BIBLIOGRAFIA
- Rauscher, E. et al - Clin. Chem. 31/1:14, 1985.
METODO DE CONTROL DE CALIDAD - Tietz, N. - Clinical Guide to Laboratory Tests - W.B. Saun-
Si la muestra a ensayar es suero, procesar 2 niveles de un ders Co., 1983.
material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con - Lorenzo, L.; Demara, I.; Setta, F.; Taborda, M. - 44th Na-
actividades conocidas de amilasa, con cada determinacin. tional Meeting, AACC, 19-23 julio, 1992, Chicago, Illinois.
Clin. Chem. 38/6:935, Abs. 3, 1992.
VALORES DE REFERENCIA - Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa
Temperatura 25oC 30oC* 37oC Molecular - Qumica Clnica 15/1:51, 1996.
Suero hasta 84 U/l 100 U/l 125 U/l - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Orina ocasional hasta** 455 U/l 540 U/l 680 U/l AACC Press, 4th ed., 2001.

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- NCCLS document Evaluation of the Linearity of Quantita- SIMBOLOS
tive Analytical Methods, EP6-P (1986). Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de
reactivos para diagnstico de Wiener lab.
Este producto cumple con los requerimientos previstos

C por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios


para el diagnstico "in vitro"

P Representante autorizado en la Comunidad Europea


V Uso diagnstico "in vitro"
X Contenido suficiente para <n> ensayos

H Fecha de caducidad

l Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar

Riesgo biolgico
F
Volumen despus de la reconstitucin

Cont. Contenido

g Nmero de lote

M Elaborado por:

Nocivo

Corrosivo / Custico

Irritante

i Consultar instrucciones de uso

Calibr. Calibrador

b Control

b Control Positivo

c Control Negativo

h Nmero de catlogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.


Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina

Wiener lab.
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Tc.: Viviana E. Ctola
Bioqumica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Cert. N: 4484/02 2000 Rosario - Argentina
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