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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE SAN LUIS

POTOS

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LABORATORIO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL.

NOMBRE DE LA ALUMNA: YESENIA


CASTAEDA ESTRADA.

FECHA: 22 DE SEPTIEMBRE DEL 2016


DA: JUEVES HORA: DE 14:00 -16:00 HRS.

NOMBRE DE LA PRCTICA:
CROMATOGRAFA DE GASES

PRELABORATORIO No.4
CROMATOGRAFA DE LQUIDOS
Objetivos:
o Integrar los elementos estructurales de un cromatgrafo de lquidos,
traslada los conocimientos adquiridos de los parmetros
cromatograficos y utiliza la informacin para el anlisis cualitativo y
cuantitativo de una muestra real.
o Interpretar los resultados obtenidos a partir de parmetros de calidad
de mediciones.

RESUMEN DE LA INVESTIGACIN
TERICA
1. Qu es la cromatografa de lquidos de alta eficiencia (CLAR o
HLPC)?
Es una tcnica de separacin que involucra:
La inyeccin de una pequea cantidad de una muestra liquida.
Dentro de un tubo (columna) que contiene una fase estacionaria liquida
Donde los componentes de la muestra son forzados a avanzar a lo largo
de la columna por una fase mvil liquida a alta presin. Suministrada por
una bomba.
2. Para establecer el mtodo en cromatografa de reparto, Cules
son las distintas propiedades y funciones de la fase mvil en la
cromatografa de gases y en la cromatografa de lquidos? y Cmo
influyen esas caractersticas en los dos mtodos (cromatografa de
gases y HPLC)?
CG: Lleva los componentes de la muestra a travs de la fase estacionaria
y no contribuye al proceso de separacin. El hecho de que el gas de
arrastre sea He, N2, H2 no afecta de manera importante la separacin.
HPLC: Los componentes de la muestra interaccionan con la fase
estacionaria y la mvil (se sienten atrados por ambas). Los resultados
satisfactorios de una separacin dependen en forma determinante de la
naturaleza de la fase mvil.

3. En cromatografa de reparto, cuales son las caractersticas de las


columnas para:
a) Rellenos de fase normal
b) Rellenos de fase inversa

Rellenos de la fase normal: La fase estacionaria es no polar (C18, C8,


etc.) y la fase mvil es un solvente relativamente polar [agua o agua-
solvente orgnico (metanol, acetonitrilo, etc)]. EL 90% de la
cromatografa usa este modo

Rellenos de la fase inversa: La fase estacionaria es polar (siloxanos),


y como fase mvil se emplea un solvente relativamente no polar
(hexano, iso-octano, acetato de etilo). til para separar: ismeros
cic-trans, compuestos quirales.

4. A) Qu es una elucin isocratica?


B) Qu es la elucin con gradiente?
Elucin isocratica: Cuando la bomba alimenta un solo disolvente o mezcla
de disolvente de composicin constante.
Elucin con gradiente: Cuando la bomba alimenta dos o ms disolventes
que difieren de manera notable en cuanto a polaridad y varan en
composicin durante la separacin. La relacin entre los solventes se
hace variar de forma programada, por etapas.
5. A) Menciona cinco tipos de detectores para HPLC
B) Explica Cmo funciona el detector de absorbancia
ultravioleta?
De absorbancia UV, Espectrmetro de masas, de fluorescencia, de
absorbancia R, De ndice de refraccin.
Los detectores UV, VIS, y PDA se clasifican como detectores de
absorbancia. Proporcionan una buena sensibilidad para que compuestos
que absorbe la luz a nivel ~ pg. Son fciles de operar y proporcionar una
buena estabilidad. Detectores de UV es un detector muy comnmente
utilizado para el anlisis HPLC. Durante el anlisis, la muestra pasa a
travs de una celda de vidrio claro sin color, llamada celda de flujo.
Cuando la luz UV se irradia en la celda de flujo, la muestra absorbe una
parte de la luz UV. As, la intensidad de la luz UV observada para la fase
mvil (sin muestra) y la muestra que contiene eluyente ser diferente.
Mediante la medicin de esta diferencia, la cantidad de muestra se
puede determinar. Puesto que la absorbancia de UV tambin difiere
depender de qu longitud de onda se utiliza, es importante elegir una
longitud de onda apropiada en funcin del tipo de analito. Un detector de
UV estndar permite al usuario elegir la longitud de onda entre 195 a
370 nm. Se usa ms comnmente de 254 nm. En comparacin con un
detector de UV, VIS utiliza un detector de longitud de onda ms larga
(400 ~ 700 nm). Hay detectores que proporcionan ms amplia seleccin
de longitud de onda, cubriendo ambos rangos de UV y VIS (195 ~ 700
nm), llamados UV / VIS detector. PDA detecta un espectro completo de
forma simultnea. Detectores UV y VIS visualizar el resultado obtenido
en dos dimensiones (intensidad de la luz y el tiempo), pero PDA aade la
tercera dimensin (longitud de onda). Esto es conveniente para
determinar la longitud de onda ms adecuada sin repetir los anlisis.

DA CINCO APLICACIONES DE LA HPLC


La HPLC es ptima para la separacin de compuestos qumicos y
biolgicos voltiles puede separar:
Frmacos como analgsicos, antibiticos
Compuestos bioqumicos: protenas, carbohidratos
Productos alimenticios: edulcoraciones, colorantes
Contaminantes en aire polvo, agua, asfalto: pesticidas, fenoles.
Hidrocarburos pesados: aceite de motor, asfalto
1. DIAGRAMA DESCRIPTIVO DE UN
CROMATGRAFO DE LQUIDOS DE ALTA
EFICACIA.
Los componentes son separados a lo largo de la columna los cuales llegan
al detector, el cual mide su cantidad. La seal generada por el detector
es registrada en funcin del tiempo en una grfica llamada
cromatograma

2. EXPLICA LA FUNCIN DE CADA UNA DE SUS


PARTES
Reservorios: Contiene los disolventes empleados como fase mvil.
Bomba: Bombea a la fase mvil a lo largo del equipo, a una
velocidad de flujo en mL/ min. Los flujos normales en HPLC son de
1-2 mL/min. Las bombas pueden alcanzar presiones de 400-600
bar.
Inyector: Permite introducir la muestra liquida en el flujo de la
fase mvil. Generalmente se inyectan de 5 a 20 micro litros de
muestra.
Columna: es donde se lleva a cabo la separacin de los
componentes de la muestra
Detector: Sirve para medir la cantidad de molculas que eluyen de
la columna, para poder realizar un anlisis cuantitativo.
Registrador: Controla todos los mdulos del cromatograma,
adems de que muestra grficamente la seal del detector y la
grfica contra el tiempo en el cromatograma.

BIBLIOGRAFA

Skoog, D.A., Leary, J.J., Anlisis instrumental, McGraw Hill, 4a


ed., 1994, Espaa.
Skoog, D.A., Holler, F.J., Principios de analisis instrumental,
Cengage Learning, 5 ed., 2005, Mexico.
HARRIS, D.C., Anlisis Qumico Cuantitativo, Grupo

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