PRACTICA N 3

Extraccin de Cafena a partir del t

Introduccin:

Alcaloides:

Los alcaloides constituyen un grupo numeroso de sustancias de origen natural, cuyo

anlisis elemental revela la presencia de carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. Son
nicos en la variedad de sus estructuras, en la respuesta biolgica sobre los organismos
no hospedaderos y en las rutas biogenticas para su formacin. El primer alcaloide
obtenido como un slido puro cristalino fue la morfina, aislada en 1.805 a partir de la
planta conocida como opio.

El inters de los qumicos en esa planta se origin del conocimiento ancestral basado en
que la resina cruda posea efectos analgsicos y narcticos. Entre las propiedades de la
morfina, se reconoci su carcter bsico y, por tanto, se clasific como un lcali vegetal.
En consecuencia, los compuestos con propiedades similares provenientes del reino
vegetal se conocen, en la actualidad, con el nombre genrico de alcaloides. Hoy en
da, se usa la morfina en la terapia mdica, para aliviar el insoportable dolor causado por
algunas enfermedades terminales. Algunos otros alcaloides comunes, de origen vegetal
son: nicotina, cocana y cafena.
La cafena es un alcaloide que se aisl por primera vez en forma pura cristalina en el
ao 1.882. Estructuralmente hablando, es una 1,3,7-trimetilxantina. Es tambin un
derivado de la purina y por lo tanto est relacionada con las bases tipo purinas de los
cidos nuclecos y con el cido rico. Dos compuestos relacionados estrechamente son
las dimetilxantinas, teofilina, que ocurre conjuntamente con la cafena en el t y
teobromina que ocurre en lugar de la cafena en el cacao.
Presencia y contenido de cafena en algunas preparaciones comunes:

La cafena se consigue en las plantas conocidas como caf y t. Tambin est presente
en la nuez de cola, en las hojas de mate, en las semillas de guarana y en pequeas
cantidades en los granos de cacao. El contenido de cafena en los granos de caf es de
aproximadamente 1-2 % en peso y, en las hojas de t aproximadamente 2-4 %.

Sin embargo, debido a las diferencias en los mtodos de elaboracin, una taza de caf
de tamao promedio contiene aproximadamente el doble de cafena (60-260mg/taza de
8 onzas), que el de una taza de t (30-160 mg/taza de 8 onzas).

El contenido de cafena de las bebidas de cola oscila entre 40-50 mg por cada envase de
12 onzas. Muchos analgsicos comerciales tambin contienen cafena para contrarrestar
el efecto adormecedor producido por los ingredientes activos de tales preparaciones.

Tiene muy variados usos en medicina por su efecto estimulante y por su accin
diurtica. Puede producir irritabilidad, insomnio y taquicardia. El consumo excesivo de
caf y t puede conducir a una dependencia con la cafena, de tal manera que pueda
experimentarse dolor de cabeza y an nauseas en su ausencia.

La cafena ha sido siempre una sustancia controversial. Algunas religiones prohben el

consumo de bebidas que las contienen, debido a que la consideran una droga adictiva.
Recientemente ha existido preocupacin debido a que, estructuralmente hablando, la
cafena se asemeja a las bases tipo purina, adenina y guanina, que representan dos de las
cinco bases principales que el organismo usa para formar los cidos nucleicos DNA y
RNA. Se teme que la sustitucin de cafena por adenina o guanina en cualquiera de
estas sustancias de importancia gentica podra conducir a defectos cromosmicos.

Trabajos recientes por investigadores de la universidad Ohio, sugieren que el consumo

excesivo de cafena y otras xantinas est relacionado con el desarrollo de otra
enfermedad cstica del pecho, la cual no es maligna, pero frecuentemente dolorosa,
condicin caracterizada por un crecimiento fibroso en el pecho.

Cuando todo el caf, t, colas y chocolate se eliminaron de la dieta de las mujeres que
sufran esta enfermedad, se experiment en la mayora de ellas un alivio significativo de
su padecimiento.
Otro problema que no est relacionado con la cafena, pero si con el consumo de
bebidas de t, es que algunas personas que consumen altas cantidades de t, pueden
mostrar sntomas de deficiencia de vitamina B 1 (tiamina). Se sugiere que los taninos del
t pueden formar un complejo con la tiamina, inutilizndola para su funcin metablica.

Una sugerencia alternativa es que la cafena puede reducir los niveles de la enzima
transquetolasa, la que depende de la presencia de tiamina para su actividad. Los niveles
bajos de la enzima mencionada podran producir los mismos sntomas que los bajos
niveles de tiamina.

En el experimento que se pretende realizar en sta prctica, se asla la cafena de las

hojas del t. El principal problema con el aislamiento es que la cafena se encuentra
acompaada de otras sustancias naturales de las cuales debe ser separada. El principal
componente de estas hojas de t es la celulosa, la cual constituye el principal material
estructural de todas las plantas. La celulosa es un polmero de la glucosa.

Por otra parte, la cafena es soluble en agua y es uno de los componentes principales que
se extraen en la solucin que denominamos t. Conjuntamente con la cafena se extraen
algunos otros compuestos, entre ellos los llamados taninos. Los taninos tambin se
disuelven en el agua caliente usada para tratar las hojas de t.

El trmino tanino no se refiere a un solo compuesto homogneo o a sustancias que

poseen estructura qumica similar. Se refiere a una clase de compuestos que tienen
ciertas propiedades en comn. Los taninos son compuestos fenlicos que tienen pesos
moleculares entre 500 y 3.000 y, se usan ampliamente para tratar cueros, en la
manufactura de tintes, papel y seda, para clasificar vino y cerveza y en los procesos
fotogrficos.

Este tipo de compuestos tienen la propiedad de precipitar alcaloides y protenas que se

encuentran disueltas en soluciones acuosas. Se dividen en dos clases: hidrolizables y
condensados o no hidrolizables.

Los taninos del primer tipo son steres de un sacrido, usualmente glucosa, con una o
ms unidades de cido trihidroxibencencarboxlico (cido glico). Representan
estructuras en las cuales algunos de los grupos hidroxilo de la glucosa han sido
esterificados por grupos digaloilos. Producen glucosa y cido glico cuando se
hidrolizan.
Los taninos no hidrolizables que se encuentran en el t, son polmeros de condensacin
de la catequina, derivados de los flavonoles. Estos compuestos no presentan
uniformidad en su estructura. Las molculas de catequina se encuentran usualmente
enlazadas en la posiciones 4 y 8.

Cuando los taninos son extrados en agua caliente, los del tipo
hidrolizable son parcialmente hidrolizados, lo cual significa que
se puede encontrar cido glico libre en la solucin acuosa del t. Los taninos, debido a
sus grupos fenlicos y el cido glico debido a sus grupos carboxilo, son ambos
compuestos que presentan un grado de acidez apreciable.

Si a esta solucin se le agrega una base tal como carbonato de sodio o hidrxido de
sodio, se forman sales inicas de calcio o de sodio de estos compuestos cidos,
fcilmente solubles en agua caliente. La cafena puede extraerse entonces con un
solvente orgnico insoluble en agua tal como el diclorometano cloroformo, ya que
tanto las sales inicas de calcio del cido glico como los taninos no son solubles en
este solvente orgnico y permanecen disueltos en la fase acuosa, liberando la cafena.

La extraccin de las hojas de t directamente con solventes no polares (diclorometano),

para remover la cafena produce pobres resultados puesto que esta se encuentra en la
planta como un complejo parcialmente inico que no es muy soluble en solventes
apolares.

----------------------------------------------------------------------------------------------------------
Aun cuando las clorofilas son solubles en diclorometano, la gran parte de las otras
sustancias componentes de las hojas de t no lo son. De esta manera, la extraccin con
diclorometano de la solucin bsica de t remueve la cafena prcticamente pura.

El diclorometano es fcilmente removido por evaporacin, calentando la solucin que

contiene el extracto en un bao de vapor dentro de una campana extractora de gases, o
por destilacin ya que su punto de ebullicin es suficientemente bajo. La aplicacin de
alguna de estas tcnicas deja como residuo la cafena cruda. La cafena se purifica
entonces por recristalizacin o por sublimacin.

Instrucciones especiales:

Para llevar a cabo este experimento el estudiante deber leer las tcnicas relacionadas
con la filtracin por succin, filtracin por gravedad, extraccin con solventes (uso de
un embudo de separacin), uso de agentes desecantes y sublimacin.

EL DICLOROMETANO ES UN SOLVENTE QUE TIENE UNA TOXICIDAD

SIGNIFICATIVA Y SE SOSPECHA ES UN COMPUESTO CARCINOGNICO
EN HUMANOS. NO INTENTE RESPIRAR LOS VAPORES DE ESTE
SOLVENTE. LOS PROCEDIMIENTOS QUE INVOLUCRAN EL USO DE
DICLOROMETANO DEBEN REALIZARSE EN EL INTERIOR DE LA
CAMPANA EXTRACTORA DE GASES.

Tcnica de Extraccin simple con un embudo de separacin:

Los embudos de separacin se disponen en varias formas diferentes, desde el casi

estrico hasta los alargados. Mientras ms alargados es el embudo de separacin, mayor
es el tiempo requerido para separar las dos fases lquidas.

Para realizar una extraccin, la solucin se coloca en el embudo de separacin (con la

llave cerrada) y se agrega una cantidad de disolvente con el que se realizar la
extraccin. El embudo no debe estar demasiado lleno (un mximo razonable es de la
altura total de4l embudo). La parte superior abierta del embudo se tapa con un tapn de
vidrio o de goma. Durante la agitacin, se sostiene el embudo de una manera muy
especfica, de tal manera que el tapn se mantenga en su lugar con una mano y la llave
con la otra.

a) Derechos: se sujeta el tapn con la mano izquierda asegurndolo con el dedo

ndice. Se invierte el embudo y con la mano derecha se manipula la llave, de tal
forma que descanse entre los dedos pulgar e ndice.
b) Zurdos: es ms fcil usar la mano opuesta para cada posicin anteriormente
descrita.

Despus de una breve agitacin y sosteniendo el embudo en la posicin invertida

indicada, se abre la llave con precaucin para eliminar la presin interior del embudo, se
cierra y se agita suavemente durante uno o dos segundos, y se abre de nuevo la llave.

Cuando deja de aumentar perceptiblemente la presin en el interior del embudo, se

aseguran tapn y llave y se agita enrgicamente durante uno o dos minutos, se abre otra
vez la llave, se cierra y se coloca el embudo en posicin normal dentro del espacio
circular de un aro metlico con unos trozos de tubo de goma para protegerlo de roturas o
en su defecto asegurndolo con unas pinzas metlicas de tamao adecuado.

Se destapa y se deja en reposo hasta que la separacin entre las dos capas lquida sea
ntida. Algunas veces despus de la agitacin, los dos lquidos no se separan muy bien
en dos capas claramente diferenciadas, si no que forman una emulsiona. Si una de las
capas es agua, a menudo, pero no siempre, la emulsin puede destruirse mediante:
 1. Un movimiento de giro suave al lquido del embudo de separacin mantenido en
su posicin normal.
2. Agitacin vigorosa de la capa emulsionada con una varilla de vidrio.
3. Adicin de solucin saturada de cloruro de sodio y agitar suavemente.

Esto disminuye la tensin superficial del agua y permite que las gotas se colecten en las
capas separadas. A menudo, en la interface se colectan pequeas cantidades de material
slido insoluble, haciendo difcil observar el lmite entre las dos capas. El remedio usual
para este problema es filtrar la mezcla heterognea antes de separar las capas.

Cuando se usa un solvente de alto punto de ebullicin tal como ter etlico (35C) o
diclorometano (41C), la presin en el interior del embudo cerrado se incrementa como
resultado de la evaporacin del solvente a la temperatura ambiente. Por esta razn es
esencial permitir la salida de estos gases para liberar la presin interna del embudo.

Esto se logra, sostenindolo entre las manos tal como se muestra en la figura 1 y
abrindolo de la llave de paso brevemente. Un punto importante a tomar en cuenta, es
tener siempre un conocimiento preciso de la identidad y posicin de las capas acuosa y
orgnica. Mientras mayor sea la densidad de un lquido o de una solucin, la tendencia
de este lquido es permanecer en la parte inferior del embudo.

Por ejemplo al usar ter etlico (d = 0,71 g/ml), y agua (d = 1,00 g/ml), la capa de ter
(orgnica) ser la superior. En cambio al usar cloroformo (d = 1,49) o diclorometano (d
= 1,33 g/ml), la capa orgnica ser la inferior y la acuosa la superior.

En general, los hidrocarburos halogenados (CH2Cl2; CHCl3; CCl4; etc.) tienen valores de
densidades mayores que las correspondientes al agua y estarn en la capa inferior,
mientras que los solventes orgnicos no halogenados (ter etlico, hexano, tolueno)
tienen densidades menores que la del agua y permanecern en la capa superior.

Si en alguna oportunidad, existe duda en relacin a la identidad de las capas, remueva

una gota de la capa superior y adala a un tubo de ensayo que contenga 1 ml de agua y
agite. Si se forma una base homognea, entonces la superior ser la capa acuosa, en
cambio si la gota no se disuelve, entonces la superior ser la capa orgnica.
Al separar las capas, tenga el cuidado de remover la tapa, de otra manera, se desarrollara
un vacio en la parte superior del embudo, que evitar el flujo de lquido a travs de la
llave de paso.

Una precaucin importante a ser tomada en cuenta, es recoger las capas lquidas de
desecho en un recipiente a parte marcado para tal fin, hasta que se tenga la seguridad
que el o los productos que se desean separar hayan sido efectivamente recuperados. Esta
precaucin se toma ante la eventualidad de descartar la capa equivocada, si este es el
caso, el producto deseado puede recobrarse por extraccin de la solucin de desechos.

PARTE EXPERIMENTAL

Caliente a ebullicin 100 ml de agua en un vaso de precipitado de 250 ml, coloque 3

bolsas de t negro (llevadas por el estudiante) de aproximadamente 2 gramos cada una,
de tal manera que estas queden sumergidas en el fondo del recipiente, pero al mismo
tiempo colgadas hacia afuera. Permita que las bolsas permanezcan en contacto con el
agua caliente por 1 minuto. Retire las bolsas de t y colquelas entre dos vidrios reloj.

Presione las bolsas de t hasta que el exceso de solucin sea exprimido y devuelto al
envase original. Descarte las bolsas de t. Enfre la solucin de t hasta temperatura
ambiente usando un bao de agua-hielo.

Trasvase el lquido a un embudo de separacin y extrigalo 3 veces con porciones

sucesivas de 10 ml de diclorometano. Agite la mezcla repetidamente en forma
suavemente por aproximadamente 1 minuto. Las capas se separan despus de reposar
por algunos minutos, an cuando se podra formar alguna emulsin en la interface de las
capas orgnica y acuosa (una emulsin es una suspensin coloidal de gotas de una fase
suspendidas en la otra fase).

Si esto sucede, intente romper la emulsin haciendo girar el embudo suavemente, sujeto
por el vstago, en la parte inferior y en la parte superior por el cuello o quebrando la
emulsin agitando la interface con una varilla de vidrio. Espere entre 2 y 4 minutos. Si
estos procedimientos no funcionan agregue 10 ml de solucin acuosa saturada de
cloruro de sodio, agite y separe las fases.
Separe las fases orgnicas directamente desde el embudo de separacin, recibindola en
una fiola limpia. Trasvase la capa de diclorometano a un embudo de separacin y lvela
dos veces con 20 ml de solucin fra de NaOH y una vez con 20 ml de agua destilada.
Separe la fase orgnica y squela con una capa de sulfato de sodio anhdrido de
aproximadamente 1 cm de espesor.

Evapore calentando sobre una plancha de calentamiento o sobre un bao de mara, el

diclorometano en el interior de una campana extractora de gases, hasta obtener
aproximadamente 3 ml de solucin.

Use una cantidad mnima adicional de diclorometano y una pipeta Pasteur, transfiera la
cafena cruda a una fiola de 25 ml de capacidad. Evapore completamente el
diclorometano hasta obtener los cristales casi blancos de cafena slida. La cafena
cruda puede purificarse por recristalizacin usando el mtodo de mezcla de solventes y
por sublimacin.

Purificacin por recristalizacin:

Disuelva el residuo de cafena contenida en la fiola en 2 o 3 ml de tolueno. Es posible

que sea necesario calentar la solucin en un bao de vapor para disolver totalmente el
slido. Trasfiera la solucin a un frasco erlenmeyer de 25 ml. Lave la fiola que contena
la cafena con una porcin adicional de 2 ml de tolueno y combine esta solucin con la
contenida en el frasco erlenmeyer.

Aada una piedra de ebullicin, caliente la solucin y adicione gota a gota hexano, hasta
que la solucin se torne ligeramente turbia.

Permita que la solucin repose hasta temperatura ambiente. Enfre la solucin en un

bao de agua-hielo y colecte el producto cristalino por filtracin al vacio usando un
embudo buchner de pequeo tamao. Una segunda porcin de cristales puede obtenerse
concentrando las aguas madres (filtrado). Seque los cristales. Pese el producto y calcule
el rendimiento porcentual basado en los 25 gramos aproximadamente de t
originalmente usados. Determine el punto de fusin. Note el color del slido en
comparacin con el material obtenido despus de la sublimacin.

Sublimacin de la cafena:
Finalmente la cafena puede ser purificada por sublimacin. Arme un aparato de
sublimacin consistente en un tubo de ensayo con salida lateral y un dedo frio. Coloque
parte de la cafena en el fondo del tubo de ensayo con salida lateral y conctele el dedo
frio ajustando el sistema por intermedio de un tapn de goma que se fije ajustadamente
al tubo de ensayo.

Coloque mangueras de goma al dedo frio y haga pasar agua por el interior del mismo.
Fije el sistema verticalmente con una pinza a un soporte universal y conctelo a un
sistema de vaco. Abra la llave de agua del sistema de vaco y presione el dedo frio
dentro del tubo de ensayo con salida lateral hasta que se obtenga un buen vacio interior.
Cuando se estime que exista un buen vaco en el sistema, caliente la cafena suave y
cuidadosamente con una llama pequea para sublimar la cafena.

Sostenga el mechero en su mano y aplique calor moviendo la llama por los alrededores
del fondo del tubo. Si la mezcla empieza a fundir, retire la llama por unos segundos
antes de comenzar nuevamente el calentamiento.

Los cristales de cafena sublimados se adhieren a las paredes del dedo frio. Cuando la
sublimacin se haya completado, retire el mechero y permita que el aparato alcance la
temperatura ambiente.

Cuando el aparato este frio, rompa el vaco y con sumo cuidado sostenga el dedo frio
hacia abajo aplicando una ligera presin. Cuidadosamente separe el dedo frio del resto
del sistema de sublimacin.

Si esta operacin no se realiza con el cuidado debido, los cristales sublimados podran
deslizarse desde las paredes externas del dedo frio donde se encuentra adherido y caer
en el fondo del tubo de ensayo, donde se encuentra el residuo.

Cierre la llave que le suministra el agua al dedo frio y desconecte la manguera de goma.
Remueva la cafena adherida al dedo frio, raspando sus paredes con una esptula
pequea, recogiendo los cristales sobre un papel de filtro.

Determine el punto de fusin de la cafena purificada por este mtodo y compare el

valor obtenido, as como el color de los cristales obtenidos para ambos procesos de
purificacin. Guarde los cristales obtenidos en un recipiente dispuesto para tal fin.

Extraccin de la cafena de refrescos comerciales

Introduccin:

La cola es una planta arbrea africana cuyo fruto, la nuez de cola, se emplea como
tnico y estimulante. En realidad, es todo un gnero de plantas que comprende rboles
de hojas enteras o lobuladas, vellosas, flores en panculas laterales, fruto en folculo
grande coriceo o leoso y semillas grandes, el genero cola comprende unas 40
especies, siendo la ms conocida la cola vera Sterculia acumija, rbol que alcanza
hasta 30 metros de altura, cuyas semillas llamadas nueces de cola, se emplean en
medicina por sus cualidades tnicas.

Los refrescos gaseosos comerciales originarios de Estados Unidos de Norteamrica

como Coca-cola y Pepsi-cola y sus versiones de bajo contenido de azcar o sin azcar,
son muy populares. En esta experiencia vamos a descubrir uno de sus secretos:
contienen cafena adems de otros aditivos.

La cafena es un alcaloide, de frmula condensada C8H10N4O2 de un sabor amargo e

inodoro. Se encuentra en el t, Thea sinensis o Camelia thea, en el caf, Cuphea
arbiga, en las hojas de mate, Llex paraguayensis de Paraguay, argentina y sur de
Brasil; en pasta de guaran, Paulinia sorbilis de Brasil; en el yoco. Paulina yoco de
Venezuela y Colombia y en las nueces de cola, Cola vera. La cafena tiene acciones
estimulantes del sistema nervioso central, de las frecuencias cardiacas y respiratorias y
de la funcin renal, como diurtico. Produce intranquilidad e insomnio.

Procedimiento:

1. Mide el volumen de del contenido de una cocacola o pepsicola no ligeras.

2. Vierta esta cantidad de refresco de cola en un matraz erlenmeyer de 500 ml.
3. Vierta pequeas cantidades de carbonato de sodio para neutralizar los cidos
fosfrico y otros cidos presentes en estos refrescos hasta que cese el burbujeo y
------------.
4. Transfiera la mezcla en un embudo de separacin, adiciona 20 ml de
diclorometano y agita suavemente de 5 a 7 minutos.
5. Separe el lquido incoloro de la capa inferior (diclorometano + cafena) y
virtelo en un vaso de precipitado.
6. Repita el proceso aadiendo otros 20 ml de diclorometano al lquido que qued
en el embudo. Agita, libera la presin en exceso y separa de nuevo la capa
inferior, unindola a la que tienes en el vaso de precipitado.
7. Para que la extraccin sea ms efectiva es conveniente repetir una vez una vez
ms esta operacin. Rene los tres extractos en el vaso de precipitado.
8. Deja evaporar lentamente en un bao de agua caliente, el diclorometano bajo
campana de extraccin de gases. Cuando solo quedan unas gotas, trasvasa a una
cpsula de porcelana y continua evaporando lentamente hasta que quede seca.
La cafena sublima, pasa de estado solido al gaseoso a 178C, por esta razn hay
que tener mucho cuidado y retirar la cpsula del fuego en el momento en el cual,
veas desaparecer la ltima gota pues podras perder toda la cafena extrada.
9. Tapa ahora la cpsula con un vidrio de reloj enfriado previamente con hielo.
Calienta suavemente unos minutos. Podrs observar la cafena slida formando
pequeos cristales en forma de aguja en la cara inferior del vidrio reloj.
10. Para comprobar que el slido cristalizado es efectivamente cafena, puedes
determinar su punto de fusin. La cafena funde a 238C en su forma anhidra.
Tambin puedes verificar su comportamiento de solubilidad: es insoluble en ter
y algo soluble en agua, alcohol, acetona, cloroformo.

Bibliografa:

1. Laswick, J. and Hall, P. (1972). J. of Chem. Education. 49,10,708.

2. Moye, A. (1972). J. of Chem. Education. 49, 194.