Diario Internacional de Morfología - Cambios Morfológicos y Bioquimicos de Salmonella Hadar Expuestas A Extracto Acuoso de Ajo

12/4/2014 Diario Internacional de Morfologa - Cambios Morfolgicos y Bioquimicos de Salmonella hadar Expuestas a Extracto Acuoso de Ajo
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Int. J. Morphol. v.27 n.3 Temuco septiembre 2009
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hadar Expuestas a Extracto Acuoso de Ajo
* H. Belguith; ** F. Kthiri; *** A. Ben Ammar; *** H. Jaafoura; * J. Ben Permalink
Hamida y ** A. Landoulsi
* Unit de Protomie Fonctionnelle et de biopreservacin Alimentaire. Instituto Superior de Ciencias Biolgicas

Aplicadas de Tnez, Tunisie.
** Laboratoire de Biochimie et de Biologie molculaire. Facult des Sciences de Bizerta, Tnez.
*** Servicio commun de microscopie lectronique una transmisin, Facult de Mdecine de Tnez, Tunisie.
Correspondencia a:
Resumen: El efecto sobre la Salmonella hadar crecimiento se investig usando un medio lquido estril fresco
(Pronadisa, Hispanlab) que contiene extracto de ajo acuoso (AGE) a diferentes concentraciones (0, 11, 12, y 13
mg / ml). El extracto de ajo aadido a estas concentraciones finales tuvo un efecto bacteriosttico sobre
Salmonella hadar. El efecto de estos concentracin bacteriosttica de la edad sobre el crecimiento de la serovar
probado, revel un patrn de inhibicin que se caracteriza por: (i) una fase de inhibicin transitoria cuya duracin
fue de proporcional a la concentracin de AGE (ii) una fase de crecimiento se reanuda que mostr una tasa de
crecimiento menor que en los controles no inhibidos, y (iii) la entrada en fase estacionaria a una densidad cultura
inferior. La concentracin inhibitoria mnima y las concentraciones mnimas bactericidas estaban muy cerca, MIC
ajo fue de 12 mg / ml y el CBM fue 14 mg / ml. Entre las actividades enzimticas seguidas con el sistema API-
ZYM, se detectaron cambios significativos durante la fase de inhibicin. Estos cambios bioqumicos representan
una respuesta adaptativa a la tensin de ajo. Algunas actividades enzimticas celulares desaparecieron, mientras
que otras fueron inducidas o mantenidas despus de la adicin EDAD. Imgenes TEM de las muestras tratadas
con la concentracin bacteriosttica de edad (12 mg / ml) revelaron la ruptura de las paredes celulares y la
disposicin no homognea de materiales citoplsmicas dentro de las bacterias tratadas.
PALABRAS CLAVE: Allium sativum ; La alicina; Efectos antimicrobianos; Ajo; Salmonella hada ;
Ultraestructura.
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-95022009000300013 1/12
RESUMEN: El efecto Sobre el Crecimiento de Salmonella hadar FUE investigado utilizando ONU Medio Lquido
estril fresco (Pronadisa, Hispanlab) conteniendo el extracto acuoso de ajo (EAA) en Diferentes Concentraciones
(0, 11, 12 y 13 mg / ml). El extracto de ajo aadido estafa ESTAS Concentraciones Tuvo sin efecto
bacteriosttico Sobre . Salmonella hadar La prueba serovar Revelo sin patrn de inhibicin caracterizado by: (i)
Una fase de inhibicin transitoria Cuya DURACIN FUE Proporcional a la Concentracin de EAA, (ii) Una
reanudacin de la fase de Crecimiento, la Cual Mostro Una TASA Ms baja de Crecimiento Que Controles inhibicin
pecado, y (iii) Una Ingreso en fase estacionaria estafa Una Menor densidad de Cultivo. La CONCENTRACION
MINIMA inhibitoria (CMI) y la Concentracin Minima bactericida (CMB) cercanas MUY fuern, la CMI de ajo FUE de
12 mg / ml y la CMB FUE de 14 mg / ml. Las Actividades enzimticas seguidas estafa El Sistema API-ZYM,
mostraron Cambios significativos Durante la fase de inhibicin. Ests Cambios Bioquimicos representan Una
Respuesta adaptativa al Estrs del ajo. ALGUNAS Actividades enzimticas Celulares desaparecieron, MIENTRAS
Que Otras were inducidas o mantenidas despues de la Adicion de EAA. Las imagenes de MET de las Muestras
Tratadas Con La Concentracin del bacteriosttico EAA (12 mg / ml) revelaron la ruptura de las paredes Celulares
y la Disposicin no homognea de Materiales citoplasmticos Dentro De Las Bacterias Tratadas.
PALABRAS CLAVE: Allium sativum ; Alicina; Efectos antimicrobianos; Ajo; Salmonella hadar ;
Ultraestructura.
Introduccin
Resistencia a los antibiticos en los patgenos transmitidos por los alimentos es un hecho, a pesar de las
diferencias cualitativas y cuantitativas importantes se han observado (Teuber, 1999). Las cepas de patgenos
transmitidos por los alimentos resistentes a una variedad de antimicrobianos se han convertido en un importante
problema de salud (Kiessling et al ., 2002) y podra disminuir la aplicacin con xito de las medidas de control de la
putrefaccin y patgenos microorganismos, muchas veces conduce a la utilizacin de menos seguro, alternativas
eficaces o costosos (Levy, 1997).
El nmero cada vez mayor de bacterias que estn desarrollando resistencia a los antibiticos clsicos (Cohen,
1992; Walsh, 2000; Cole et al ., 2002) lleva la mayor parte del inters actual en molculas antimicrobianas de
plantas en la esperanza de que puedeproporcionar pistas tiles en antiinfeccioso candidatos a frmacos. Varios
agentes antimicrobianos se aislaron de la planta incluyendo metabolitos secundarios como aceite esencial y
Terenoides, entre los que se pueden citar las xantonas, benzofenonas, cumarinas y flavonoides (Nkengfack et al.
, 2002; Komgeum . et al , 2005).
Recientemente, ha habido un creciente inters en el descubrimiento de nuevos antimicrobianos naturales. Este ha

sido tambin cierto en microbiologa de los alimentos. Productos de origen vegetal con propiedades
antimicrobianas han obtenido sobre todo el nfasis para su posible aplicacin en la produccin de alimentos con el
fin de evitar el crecimiento de bacterias y hongos (Fattouch et al,. 2007; Lanciotti et al,. 2004). Mucho enfoque
en la determinacin de la actividad antimicrobiana de extractos de plantas se encuentra en la medicina popular
(Ros y Recio, 2005).
El ajo ( Allium sativum ) es un condimento alimenticio comn muy extendido y utilizado en todas las partes del
mundo como una especia y hierbas medicinales para la prevencin y el tratamiento de una variedad de
enfermedades, desde infecciones a enfermedades del corazn.
El ajo se cree que tiene diversas propiedades farmacolgicas y aplicaciones mdicas (Reuter et al. , 1996). El ajo
se consume principalmente como condimento en diversos alimentos preparados (Amagase et al. , 2001).
El ajo es un agente antibacteriano fuerte y acta como un inhibidor en ambas bacterias Gram-positivas y Gram-
negativas incluyendo especies tales como Escherichia, Salmonella, Streptococcus, Staphylococcus, Klebsiella,
Proteus y Helicobacter pylori (Ankri y Mirelman, 1999; Reuter).
Estas propiedades relacionadas con la salud de ajo se atribuyen a los compuestos orgnicos de azufre, cido de
ster de S-alil-tio-2-propeno-1-sulfnico, que por lo general se hace referencia particularmente alicina, el
compuesto con olor acre. La alicina se produce durante el aplastamiento de ajo por la interaccin de aliina, el
aminocido no proteico y que se libera de las clulas del mesfilo, con el fosfato de piridoxal que contiene la
enzima, alliinase (aliina liasa CE 4.4.1.4) de las clulas de la vaina del haz ( Miron et al , 2000;. Curtis et al ,
2004)..
Numerosos informes indican que el extracto de ajo tiene actividad antiobacterial amplio espectro (Adetumbi y Lau,
1983), sin embargo, el mecanismo de esta accin de inhibicin del crecimiento y el ajo no se conoce.
El modo por el cual los microorganismos son inhibidas por molculas activas de la planta parece implicar diferentes
mecanismos, que no se aclarado por completo. A pesar de que las propiedades antibacterianas y algunos de los
otros efectos positivos de la alicina que ya se detectaron en la dcada de 1940, el mecanismo de accin no se
conoce bien, por lo tanto, la posible aplicacin de la alicina y sus anlogos sintticos no se materializaron. Se
propusieron dos posibles mecanismos de accin de alicina. Un destac la actividad antioxidante de la alicina,
mientras que la otra sugiere que la estructura particular de la alicina lo convierten en un buen candidato para la
interaccin con los grupos SH de las protenas y otros compuestos biolgicos (Miron et al .).
Reactividad de alicina con enzimas, sus propiedades radical-captura y permeabilidad de la membrana preparada,
son considerados como la base de su actividad biolgica (Miron et al , 2002;. Rabinkov . et al , 1998).
El objetivo del presente trabajo fue el primero en evaluar el efecto antimicrobiano del extracto de ajo acuoso en
contra Salmonella hadar , aislado a partir de carne de Turqua Tnez. En segundo lugar, para caracterizar las
respuestas de estrs fisiolgicos y bioqumicos y finalmente para investigar los cambios en la morfologa celular
mediante microscopa electrnica de transmisin. Salmonella hadar fue elegido como el organismo modelo Gram-
negativas, ya que es uno de los principales patgenos humanos y los casos de envenenamiento de alimentos en
el mundo (Reed, 1993).
Material y mtodo
Las bacterias y las condiciones de crecimiento . Salmonella hadar incluido en este estudio se recuper a
partir de carne de Turqua Tnez, comprado a un restaurante de comida rpida.
El almacenamiento a largo plazo de Salmonella hadar muestras fue de 20 C, en glicerol estril (15%). Un
precultivo fue preparado por la transferencia de esta cultura a un medio lquido estril fresca (Pronadisa,
Hispanlab) y se cultiva durante 18 horas a 37 C con agitacin.
Los estudios de inhibicin : cultivos de una noche de la Salmonella hadar se cultiv en medio lquido y se
diluyeron en 50 ml de medio de caldo estril fresca. Extracto de ajo acuoso se aadi a diversas concentraciones
directamente en el matraz y la turbidez se monitoriz midiendo la densidad ptica a 600 nm del medio.
Preparacin del extracto de ajo acuoso (AGE) . Dientes de ajo fresco (70 g) se mezclaron en 35 ml de agua
destilada estril, se centrifug a 5000 rpm y se esterilizan por filtracin (0.45m). Las alcuotas fueron
almacenadas a 20 C hasta que sea necesario. El mtodo de Miron . et al (2002) se utiliz para cuantificar la
cantidad de alicina en EDAD El contenido de alicina aproximado en cada preparacin se determin
espectrofotomtricamente mediante la reaccin con el tiol, 4-mercaptopiridina (Miron et al ;. Bakri y Douglas). Las
diferentes volmenes de extracto de ajo fueron incubadas con 4-mercaptopiridina (10-4 mM) en tampn de
fosfato 50 mM, 2 mM de EDTA pH 7,2, lo que resulta en la formacin de un disulfuro mixto, 4-
allylmercaptothiopyridine y el consiguiente cambio en la absorbancia a 324 nm se monitoriz.
Determinacin de las concentraciones inhibitorias y bactericidas mnimas (MIC y MBC). Se utiliz el

mtodo de dilucin en caldo para determinar el MIC y MBC. Diluciones seriadas del extracto de ajo acuoso en 5 ml
de caldo inoculado con 50 l de precultivos frescas (inculo, 5x108 UFC ml-1). Los tubos se incubaron a 37 C
durante la noche con agitacin y la dilucin ms alta donde no hubo crecimiento se registr como la MIC. Para la
prueba de MBC, alcuotas (20 l) de caldo de tubos que contenan ningn crecimiento se sembraron en medio slido
y de nuevo incubadas durante la noche a 37 C. Las diluciones ms altas en el que no hubo supervivientes se
registraron como el CBM.
En el mtodo anterior, los controles para cada organismo se realizaron utilizando el medio lquido estril sin
extracto de ajo acuoso. MIC y MBC fueron confirmados por ensayos por triplicado.
Ensayos bioqumicos y enzimticos. Los cambios de diferentes actividades enzimticas celulares de bacterias
tratadas y no tratadas, obtenidos de la inhibicin y el cultivo en fase exponencial de crecimiento, se evalu
usando el sistema API-ZYM (BioMrieux). Las clulas se recogieron, se lavaron dos veces con L-1 de tampn de
fosfato fro 5x10-2 moles (pH 7) y se resuspendieron en 0,85% (w / v) de solucin de NaCl estril.
Cada galera API-ZYM se inocul con dos gotas de suspensin adecuada de las clulas y se incub durante 4
horas a 28 C. Las galeras se activan a continuacin, mediante la adicin de una gota de ZYM-A y los reactivos
ZYM-B y despus de 5 min, valores que van de 0 a 5 en relacin con el color desarrollado en cada reaccin
enzimtica, se asignaron visualmente por medio de la carta de colores suministrada con el sistema.
La microscopa electrnica . Se recogieron muestras para el examen de la inhibicin y el cultivo en fase de

crecimiento exponencial (clulas tratadas) y el cultivo en fase de crecimiento exponencial (clulas no tratadas).
Despus se desech el sobrenadante (10 000 g durante 5 min a 4 C), la Salmonella hadar de pellets clulas fue
prefijado con 3% de glutaraldehdo en 0,2 M tampn de cacodilato de sodio (pH 7,4). Las muestras se fijaron
posteriormente durante 2 h con 1% de tetrxido de osmio (v / v) en tampn de fosfato de sodio 0,1 M (pH 7,4).
Despus de la fijacin de la muestra se centrifug a 1800 g durante 2 min, el sedimento se lav tres veces en 0,2
M de tampn Na-cacodilato (pH 7,4). Las muestras se deshidrataron en una serie graduada de etanol. Los TEM
fueron tomadas con un microscopio electrnico JEOL-1010 que opera a 80 kV.
RESULTADOS
Efecto del extracto de ajo acuoso en el crecimiento de Salmonella . Con el fin de estudiar el efecto de la
AGE, se ensayaron distintas concentraciones. No se observ ningn efecto sobre las diferentes curvas de
crecimiento celular cuando aadimos un AGE a una concentracin final de menos de 11 mg / ml (media de 89,1 mg
/ ml de alicina). As que habamos estudiado el efecto del extracto de ajo aadido a una concentracin final
comprendido entre 11 y 13 mg / ml.
En comparacin con las suspensiones de clulas de control que carecen de extracto de ajo, se observ una
modificacin de la clsica Salmonella hadar curva de crecimiento. Figura 1 muestra los fenmenos bsicos
observados en la inhibicin del crecimiento celular por el extracto de ajo acuoso.
La figura. 1. Curvas de crecimiento de la Salmonella hadar serovar en medio lquido (Pronadisa, Hispanlab) a 37
C con tratamiento con diferentes concentraciones de extracto de ajo acuoso. Se recogieron muestras cada 20
min y conteos cultivables se realizaron como se describe en "Material y mtodo". Concentraciones de extracto de
ajo acuoso (mg ml -1 ): (): 0; (): 11; (X) 12; (): 13.
La adicin de AGE a estas concentraciones finales en la densidad celular de 0,05 induce la aparicin de una fase
de inhibicin en las Salmonella hadar curvas de crecimiento. Despus de esta fase de inhibicin, el crecimiento
celular se reanud pero a una tasa inferior a las suspensiones de clulas de control. Adems, los cultivos
expuestos a EDAD entraron en la fase estacionaria a una densidad celular sustancialmente menor que la de el
cultivo de control. Este fenmeno parece ser debido a la disminucin en el nmero de bacterias viables.
El efecto de aumento de la concentracin de AGE sobre el crecimiento bacteriano se indica en la figura 1 . Como
la concentracin acuosa de extracto de ajo se increment de 11 a 13 mg ml-1 (89,1-97,2 mg ml-1 de alicina), la
duracin de la fase de inhibicin aumentaron , la tasa de crecimiento despus de la inhibicin disminuy y la
densidad celular en la que se introdujo la fase estacionaria tambin disminuy. La duracin de la fase de inhibicin
fue proporcional a la concentracin de extracto de ajo acuoso y variable de acuerdo con los diferentes serotipos
de Salmonella ensayados. El extracto de ajo aadido a estas concentraciones finales tuvo un efecto
bacteriosttico sobre Salmonella hadar.
Con el fin de estudiar la proporcionalidad de la relacin entre la cantidad de sustancia activa y el dimetro de la
zona de inhibicin, el extracto de ajo (20l) o diluciones se pipetearon en una pila de seis 6 mm de dimetro los
discos Wattman de papel cortadas con una perforadora. El tamao del halo de inhibicin fue claramente
proporcional a la cantidad de AGE aplicado, y se mostr una relacin lineal cuando se representa frente al
logaritmo del dimetro de la zona de inhibicin ( . Fig. 2 ).
La figura. 2. Estudio de la relacin entre la cantidad de sustancia activa y el dimetro de la zona de inhibicin.
Extracto de ajo acuoso (20l) o diluciones se pipeta en una pila de seis 6 mm de dimetro los discos Wattman de
papel cortadas con una perforadora.
Determinacin de MIC y MBC . Tabla I muestra los valores de CIM y CBM determinadas por dilucin en caldo y
se expresan en trminos de la concentracin de extracto de ajo y la concentracin de alicina deducido. MIC fue
de alrededor de 12 mg ml-1 ajo (estimado 9,7 mg ml-1 alicina), mientras que, el valor fue de 14 mg MBC ml-1 ajo
(media 11,3 mg ml-1 de alicina).
Los cambios bioqumicos de Salmonella hadar. Con el fin de evaluar los cambios bioqumicos inducidos por la
AGE durante la Salmonella hadar crecimiento, se analizaron varias actividades enzimticas bacterianas durante la
inhibicin (bacterias tratadas) y la cultura de clulas en fase exponencial (tratadas y no tratadas bacterias).
Entre las actividades enzimticas seguidas con el sistema API-ZYM, algunas actividades enzimticas mostraron
cambios significativos. En comparacin con las clulas no tratadas, se observ que algunas de las actividades de
la enzima se mantuvieron a un nivel bajo, otros ya se indujeron y otros inhibidas ( . Fig. 3 ). Nuestros resultados
mostraron que durante la fase de inhibicin, la mayora de Salmonella hadar actividades enzimticas fueron
totalmente inhibidos tales como esterasa (C 4), Leucina aryllamidase, un-glucosidasa o maltasa. Durante la fase
tratada bacterias de crecimiento de clulas exponenciales presentes diferentes actividades enzimticas, en
comparacin con las clulas no tratadas. Hemos observado que algunas actividades enzimticas se ven afectados
positivamente, tales como (C) 8 actividades esterasa (C 4), lipasa esterasa, pero otra enzima tal como la a-
glucosidasa es ligeramente inhibidos, mientras que, la a-manosidasa se activ.
La figura. 3. Cambios en algunas enzimas niveles de actividad de Salmonella clulas durante el tratamiento EDAD
(12 mg ml-1). I. esterasa (C 4), II. Lipasa esterasa (C8), III. Leucina arilamidasa, IV. Naphtol-AS-BI-
fosfohidrolasa, V. alfa-glucosidasa. VI. alfa-manosidasa. (). Controle las bacterias; (). Bacterias tratadas (fase de
inhibicin); () Las bacterias tratadas (fase exponencial).
Estos resultados mostraron que las diferentes actividades de las enzimas no presentan los mismos cambios
bioqumicos, durante la inhibicin, as como, durante la fase de crecimiento celular exponencial.
Ajo cambios morfolgicos con el estrs asociado . Electrn examen microscpico de las clulas estresadas
confirm el carcter heterogneo de la suspensin celular en comparacin con las clulas de la fase exponencial
no tratados ( . Fig. 4 a ).
La figura. 4. Efecto de ajo acuoso extracto sobre la ultraestructura de Salmonella hadar como se demuestra por
microscopa electrnica de transmisin. Se analizaron las clulas de la fase de crecimiento de inhibicin, y la fase
de crecimiento exponencial.
La morfologa general y la ultraestructura de la envoltura celular de las clulas no tratadas (fase exponencial .
Figs 4 , un , b , c y d ) son bastante similares a las de los bacilos Gram-negativos en general. Figura 3 ilustra los
cambios morfolgicos en la inhibicin de Salmonella tratada clulas en fase. En estas clulas tratadas con la edad
a 12 mg ml-1, el citoplasma era desorganizado y el interior y la membrana externa fueron separadas, la integridad
de la membrana externa, sin embargo no se mantuvo en algunos casos. Hemos observado algunas proyecciones
en forma de varilla que aparecieron en la superficie de la OM. Estas proyecciones parecan implicar la membrana
externa de la pared celular.
Estas proyecciones se hicieron ms numerosas y ya con concentraciones crecientes de AGE ( Figs. 5 b , y c ) y

que probablemente reflejan la ruptura de la integridad de la envoltura celular.
La figura. 5. Efecto del extracto de ajo acuosa sobre la ultraestructura de Salmonella hadar como se demuestra
por
microscopa electrnica de transmisin. Las clulas tratadas a partir de la fase de crecimiento logartmico
secundaria reanudado fueron analizadas por TEM.
La estructura general de las proyecciones ( las Figs. 4 y 5) fue el de una varilla delgada. Su dimetro, longitud,
nmero y el tamao fue variable. Las secciones transversales ( . Fig. 4 ) mostraron que las proyecciones eran
cilndrica en lugar de cortes de pliegues longitudinales. No haba ninguna estructura interna consistente visible en
las proyecciones, y en este sentido, que se pareca a micelas lipdicas simples.
(a) las muestras de control, a partir de la fase de crecimiento exponencial;
(B, C, D) clulas tratadas con el extracto de ajo 12 mg / ml, a partir de la fase de crecimiento de inhibicin.
DISCUSIN
En este estudio, un marcado efecto inhibitorio de ajo contra Salmonella hadar , que ha sido tambin descrito en
contra de otras bacterias, se observ y confirm. El fenmeno de la inhibicin se caracteriza por: i) una fase de
inhibicin observada durante la fase de retraso que aparece ms largo que el observado en el control del
crecimiento celular, el mismo resultado fue descrito por Feldberg et al . y O 'Gara et al. (2000), ii) una tasa de
crecimiento logartmica reanud secundaria inferior a la velocidad original de crecimiento. Estas observaciones
confirman los descritos por Feldberg et al . La duracin de la inhibicin era proporcional a la concentracin de
extracto de ajo acuosa final, haba una simple relacin lineal entre la actividad de inhibicin y la cantidad de AGE.
Despus de esta fase de inhibicin, las clulas fueron capaces de superar la inhibicin y reanudar el crecimiento,
lo que sugiere que fueron capaces de metabolizar la alicina al compuesto no inhibidor. Aunque el extracto de ajo
acuoso a estas concentraciones es bacteriosttica en vez de bactericida, la observacin de que la tasa de
crecimiento reanudado es sustancialmente ms baja que la tasa de crecimiento no inhibido-cultura sugiere que las
clulas inhibidas no son totalmente capaces de recuperarse de la inhibicin extracto de ajo acuoso. La tasa de
crecimiento secundaria inferior podra indicar la presencia de alguna lesin no reparada en las clulas o el
agotamiento de la limitacin de nutrientes desde el medio durante la fase de inhibicin.
Los valores de MIC y MBC estaban muy cerca de los descritos en la literatura para otras manchas Gram-
negativas, pero que son ms bajas que las tinciones de Gram-positivos (Bakri y Douglas 2005).
En este estudio, hemos demostrado que los diferentes serotipos de Salmonella recogidos en la inhibicin o en la
fase de crecimiento exponencial, pueden experimentar cambios morfolgicos y bioqumicos cuando se expone a la
edad. El ensayo dio una buena proporcionalidad en dilucin en serie ( . Fig. 2 ).
El mecanismo molecular de la actividad antimicrobiana de ajo no es bien conocido en comparacin a los

antibiticos y cidos orgnicos. Varios autores han planteado la hiptesis de que los cidos orgnicos pueden
daar la membrana externa o citoplasmtica, obstaculizar la sntesis macromolecular o desnaturalizar las protenas
y el ADN (revisado por Ricke, 2003). Efecto de monolaurina puede ser similar. El aumento de la permeabilidad de
las membranas bacterianas tambin puede potenciar el efecto de otros agentes antimicrobianos como se muestra
con cido lctico y laurilsulfato de sodio (Al Komi et al. , 2000). Ellos han encontrado que las bacterias mantienen
la integridad de las membranas en las clulas tratadas con caprlico y cido lurico o monolaurina. El aumento en
K + permeabilidad de la membrana citoplasmtica, que generalmente conduce a la disipacin del potencial de
membrana (Katsu et al., 1984), no se observ.
Feldberg et al . (1988) describieron que la in vitro mecanismo de Salmonella typhimurium inhibicin del
crecimiento por la alicina en concentraciones bacteriostticas (0,2 a 0,5 mM) se encontr que era debido a una
inhibicin de retraso y parcial de ADN y la sntesis de protenas y una inhibicin inmediata de la sntesis de ARN, lo
que sugiere que este es el objetivo principal de la accin alicina.
Para dilucidar el mecanismo de accin de la edad, los cambios morfolgicos en Salmonella hadar que ocurren tras
el tratamiento AGE fueron examinadas por microscopa electrnica de transmisin. En contraste con el control de
bacterias con membranas celulares intactas ( las Figs. 4 y 5 ), bacterias EDAD tratados mostraron una notable
lisis de la membrana celular y la disposicin no homognea de materiales citoplsmicos.
Ajo acuoso extracto acta principalmente en bacterias Gram-negativas, y su membrana externa (OM), que est
ausente en las bacterias Gram-positivas, parece ser uno de sus principales objetivos. Parece que la EDAD altera
la ultraestructura de la OM, mientras que los cambios no se ven en la membrana citoplasmtica.
El efecto caracterstico de la edad sobre la morfologa de Salmonella parece ser la formacin de diversos tipos de
proyecciones y vesculas en la membrana externa de la envoltura celular.
Las alteraciones de los otros componentes de la clula son vistos en la edad 12 mg / ml, lo que probablemente es
causa de graves daos. Estos resultados estn en buen acuerdo general con un dao evidente en la
ultraestructura de las bacterias Gram-negativas.
Estos hallazgos son consistentes con los estudios correspondientes de Salmonella typhimurium , en los que
Louatmaa et al. (1976) tambin encontraron que las bacterias tratadas por polimixina presentan estas
proyecciones. Ellos describieron que en las secciones delgadas, estas proyecciones parecan estar consista en
una unidad de membrana claramente continua con todo el OM, sin participacin de toda la envoltura celular.
Nuestros resultados sugieren que estas proyecciones estn involucrados en el OM. alteraciones causadas por la
edad y pueden explicar algunos de los efectos antibacterianos de ajo. La causa fsica de estas alteraciones en la
morfologa OM puede ser debido a la prdida de ciertas protenas de la membrana externa y / o lipolpolysaccharids
(Irvin et al., 1975).
El cambio de las diferentes actividades enzimticas celulares durante el tratamiento AGE tambin puede formar
parte de la estrategia de las bacterias frente a condiciones de estrs. En resumen, los resultados presentados
arrojan nueva luz sobre el comportamiento de las bacterias Gram-negativas patgenas bajo estrs EDAD. Este
agente antibacteriano desencadena varios cambios morfolgicos y bioqumicos que permitan Salmonella hadar
para escapar de los efectos deletreos de ajo. Por otra parte, la resistencia natural de estas clulas a los
compuestos del ajo es desconocida. Se est trabajando en nuestro laboratorio para determinar los mecanismos de
toxicidad de ajo y para identificar molculas que participan en la alteracin de OM.
Reconocimiento . Estamos en deuda con el profesor Ben Aissa de El Laboratorio de Agua y Alimentos Borne
de Vigilancia del Instituto Pasteur de Tnez, por el don de los serotipos de Salmonella. Agradecemos al profesor
Gaja Monji y Aissi Ahmed por su lectura crtica y la revisin del manuscrito.
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Correspondencia a:
Belguith Hatem
Unit de Protomie Fonctionnelle
et de biopreservacin Alimentaire
Institut Suprieur des Ciencias Biolgicas Aplicadas de Tunis
9 Avenue Zouhair Essafi. 1007
Tunis
Tunisie
Fax 216 72 5905 66.
Email: hatem.belguith @ fsb.rnu.tn
Recibido: 17-04-2009
Aceptado: 11-08-2009
2014 Sociedad Chilena de Anatom a
Casilla 54-D Temuco - Chile Tel:. (56-45) 232 5571 Fax: (56-45) 232 5600 ijmorpho@ufrontera.cl

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* Unit de Protomie Fonctionnelle et de biopreservacin Alimentaire. Instituto Superior de Ciencias Biolgicas

** Laboratoire de Biochimie et de Biologie molculaire. Facult des Sciences de Bizerta, Tnez.

Recientemente, ha habido un creciente inters en el descubrimiento de nuevos antimicrobianos naturales. Este ha

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Levy, SW Antibioticresistance:. orgenes, evolucin, seleccin y propagacin Chichester, Ciba Foundation

Reed, GHFoodborne enfermedades (Parte I)-estafiloccica ("estafilococo") intoxicacin alimentaria. Lcteos,

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2014 Sociedad Chilena de Anatom a

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