CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS

KAREN LILIANA RAMIREZ GUTIERREZ

Universidad industrial de Santander

Tecnologa Regencia en farmacia IIl nivel

Microbiologa

S8

----------------------------------------------------------------------------

RESUMEN incluyendo filamentos, esferas (cocos),

barras (bacilos), sacacorchos (vibrios) y
En esta prctica realizamos en el
hlices (espirilos). Las bacterias
microscopio la observacin de algunas
son clulas procariotas, por lo que a
bacterias como los cocos y bacilos.
diferencia de las clulas
Tambin pudimos conocer los medios de
eucariotas (de animales, plantas, hongos,
cultivos bacterianos como la caja de agar
etc.), no tienen el ncleo definido ni
mackonki y agar sangre, se realizo la
presentan, en general, orgnulos
coloracin de gram que consiste en aplicar
membranosos internos. Generalmente
una serie de elementos para tner la
poseen una pared celular y esta se
coloracin de algn frotis esta puede ser
compone de peptidoglicano. Muchas
gram positiva o gran negativa y la
bacterias disponen de flagelos o de otros
coloracin de ziel neelsen que consiste en
sistemas de desplazamiento y son
aplicar azul de metileno de 5 a 10 minutos
mviles. Del estudio de las bacterias se
no se puede decir si es negativa o
encarga la bacteriologa, una rama de
positiva.
la microbiologa. La presencia frecuente
INTRODUCCIN de pared de peptidoglicano junto con su
composicin en lpidos de membrana son
Las bacterias son microorganismos procari
la principal diferencia que presentan frente
otas que presentan un tamao de unos
a las arqueas, el otro importante grupo de
pocos micrmetros (por lo general entre
microorganismos procariotas.
0,5 y 5 m de longitud) y diversas formas,
La tincin es un mtodo sencillo para qumico o fsico, permitiendo observar dos
incrementar el contraste entre la clula y tipos de respuestas diferentes a la tincin
su entorno y por lo tanto contribuye a en una misma muestra. Las dos tinciones
mejorar la imagen observada. Las tcnicas diferenciales mas utilizadas en
de tincin con diversos colorantes facilitan bacteriologa son la tincin de gram y la
la observacin al aumentar notablemente tincin de cido-alcohol resistencia.
el contraste.
Tincin de Gram Esta tincin diferencial
En Microbiologa todas las tinciones se fu propuesta por el medico dans
realizan a partir de suspensiones de Christian Gram (1884) (TORTORA et al.,
microorganismos extendidas en un 2007) que examinando tejido pulmonar de
portaobjetos (frotis), secadas y fijadas. La enfermos fallecidos por neumona observ
fijacin, procedimiento que permite que la bacteria Streptococcus
preservar estructuras celulares, La fijacin pneumoniae, presente en los pulmones,
por calor es la ms utilizada para la retena el colorante conocido como marrn
observacin de bacterias. Este Bismark (sustituido posteriormente por el
procedimiento consiste en pasar el cristal violeta), mientras que el tejido
portaobjetos, con la suspensin bacteriana pulmonar no era capaz de retener el
extendida y seca, a travs de una llama de colorante. Es la tincin diferencial ms
un mechero. La fijacin por calor preserva utilizada de forma rutinaria y
la morfologa externa de los prcticamente la primera prueba a la que
microorganismos pero no las estructuras se someten las muestras de cualquier
internas. origen antes de su estudio. Proporciona
una informacin esencial, adems de
TINCIN DIFERENCIAL
sobre la forma, tamao y agrupacin
Las tinciones diferenciales se utilizan celular, como es el tipo y composicin de
ampliamente en microbiologa; consisten la pared que presentan las bacterias. La
en la aplicacin de dos colorantes que tincin de Gram divide a las bacterias con
contrastan en su intensidad o color y un pared del Dominio Bacteria en dos
paso intermedio que provoca una grandes grupos: bacterias con pared de
respuesta diferente entre microorganismos tipo gram positiva y bacterias con pared de
distintos o entre determinadas clulas tipo gram negativa.
dentro de una poblacin. La diferenciacin
puede ser provocada por un agente
Tincin de cido-alcohol resistencia Se el crecimiento selectivo de estos
trata de un procedimiento de tincin microorganismos
diferencial, conocido como mtodo de
Ziehl-Neelsen, que tiene gran relevancia
por su aplicacin clnica. Permite poder Los medios de cultivo en microbiologa
distinguir aquellos microorganismos cuya
Uno de los sistemas ms importantes para
coloracin resiste la accin de alcoholes y
la identificacin de microorganismos es
cidos suaves (cido-alcohol resistentes)
observar su crecimiento en sustancias
de otros que no resisten la decoloracin
alimenticias artificiales preparadas en el
(no cido-alcohol resistentes). Dentro de
laboratorio. El material alimenticio en el
las bacterias cido alcohol resistentes
que crecen los microorganismos es el
encontramos dos importantes patgenos:
Medio de Cultivo y el crecimiento de los
Mycobacterium tuberculosis y
microorganismos es el Cultivo. Se han
Mycobacterium leprae, microorganismos
preparado ms de 10.000 medios de
responsables de la tuberculosis y la lepra
cultivo diferentes. Para que las bacterias
respectivamente. Estas bacterias
crezcan adecuadamente en un medio de
pertenecen al Phyllum Actinobacteria, un
cultivo artificial debe reunir una serie de
grupo grande y complejo de bacterias
condiciones como son: temperatura, grado
gram positivas, que incluye a la Familia
de humedad y presin de oxgeno
Mycobacteriaceae caracterizada por
adecuadas, as como un grado correcto de
contener en sus paredes celulares un alto
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo
contenido lipdico, ceras con una gran
debe contener los nutrientes y factores de
diversidad de cidos miclicos, molculas
crecimiento necesarios y debe estar
de 60 a 90 tomos de carbono. La
exento de todo microorganismo
presencia de estos lpidos, en la cara
contaminante. La mayora de las bacterias
externa de la pared, hacen que estas
patgenas requieren nutrientes complejos
bacterias sean muy resistentes a la accin
similares en composicin a los lquidos
de compuestos qumicos presentes en su
orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la
entorno, caracterstica que se utiliza para
base de muchos medios de cultivo es una
aislar estos microorganismos: uno de los
infusin de extractos de carne y Peptona a
medios ms frecuentes es el Loewenstein-
la que se aadirn otros ingredientes. El
Jensen con verde malaquita que permite
agar es un elemento solidificante muy
empleado para la preparacin de medios
de cultivo. Se lica completamente a la Medios de cultivos comunes.
temperatura del agua hirviendo y se
Son los ms corrientemente utilizados, y
solidifica al enfriarse a 40 grados. Con
aunque no vamos a enumerarlos todos, s
mnimas excepciones no tiene efecto
son los ms conocidos en un laboratorio
sobre el crecimiento de las bacterias y no
de Microbiologa
es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante Agar nutritivo: El Agar nutritivo es
pero se emplea mucho menos ya que un medio de cultivo usado
bastantes bacterias provocan su licuacin. normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy util
En los diferentes medios de cultivo se
porque permanece solido incluso a
encuentran numerosos materiales de
relativas altas temperaturas.
enriquecimiento como hidratos de
Adems, el crecimiento bacteriano
carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.
en este agar lo hace en la
Los hidratos de Carbono se adicionan por
superficie, por lo que se distinguen
dos motivos fundamentales: para
mejor las colonias pequeas.
incrementar el valor nutritivo del medio y
Agar sangre: Es un medio
para detectar reacciones de fermentacin
enriquecido que se utiliza adems
de los microorganismos que ayuden a
para la investigacin de los
identificarlos. El suero y la sangre
diversos tipos de hemlisis(,
completa se aaden para promover el
gamma ). Se utiliza para el
crecimiento de los microorganismos
crecimiento de estreptococos. Para
menos resistentes. Tambin se aaden
la preparacin del agar sangre se
colorantes que actan como indicadores
puede utilizar el agar nutritivo
para detectar, por ejemplo, la formacin de
enriquecido con cloruro sdico o un
cido o como inhibidores del crecimiento
preparado enriquecido con otras
de unas bacterias y no de otras (el Rojo
sustancias como Columbia o el
Fenol se usa como indicador ya que es
tripticase de soja.
rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D.
La Violeta de Genciana se usa como (Cistina Lactosa Electrlito
inhibidor ya que impide el crecimiento de Deficiente) est recomendado para
la mayoria de las bacterias el recuento e identificacin
Grampositivas). presuntiva de los microorganismos
de las vas urinarias. Su bajo
 contenido en electrolitos evita la bacterias gram negativas. Las
invasin de los cultivos por bacterias entricas que tienen la
Proteus.La presencia de lactosa en habilidad de fermentar lactosa
su composicin le confiere el pueden ser detectadas utilizando el
carcter de medio diferencial, carbohidrato lactosa y el indicador
aunque la interpretacin sea de pH rojo neutro.
diferente al anterior medio por la
El aceite de inmersin se utiliza para
incorporacin de otro indicador: el
aumentar la resolucin de un microscopio
azul de bromotimol. Las colonias
mediante la inmersin de la lente objetivo
lactosa positivas aparecern de
y el espcimen en un aceite transparente
color amarillo y las lactosa
de alto ndice de refraccin.
negativas lo harn con un color
verdoso, blanco o azulado De acuerdo con lo anterior, los objetivos
Agar S.S.: Medio de cultivo
de esta prctica fueron:
utilizado para el aislamiento de
Salmonella spp. y de algunas Analizar las pruebas de laboratorio

especies de Shigella spp. a partir para saber la clasificacin de los

de heces, alimentos y otros microorganismos
Aprender las tcnicas de
materiales en los cuales se
preparacin de frotis, de fijacin y
sospeche su presencia.
El agar MacConkey es de coloracin ms utilizadas en el
un medio de cultivo selectivo y estudio microscpico de cultivos
diferencial para bacterias diseado bacterianos
Identificar las principales formas
para aislar
bacterianas y la importancia de
selectivamente bacilos Gram
tinciones simples en la
negativos y entricos (encontrados
caracterizacin morfolgica de
normalmente en el tracto intestinal)
estos microorganismos.
y diferenciarlos en base a
la fermentacin de MATERIALES
1
la lactosa. El cristal violeta y
Caja de petri
las sales biliares inhiben el
Laminillas
crecimiento de organismos gram Incubadora
positivos, lo que permite la Gradilla
Asa bacteriana
seleccin y el aislamiento de
 Mechero
Microscopio
Tubo de ensayo
Aceite de inmersin
Alcohol acetona
Reactivo de lugol
Violeta de genciana
Fuscina de gran
Azul de metileno Ilustracin 1c coloracin de ziel neelsen
10x
RESULTADOS Y DISCUSION

PARTE 1: Observamos en el microscopio

la coloracin de Gram y de ziel Neelsen
donde pudimos ver las bacterias en forma En la coloracin de Gram como se
de cocos y bacilos. muestra en la figura 2 observamos los
bacilos que por su coloracin podemos
En coloracin de ziel neelsen, como se
identificar que son Gram positivos.
puede ver, en las figuras 1a, 1b 1c se
observan leucocitos y cocos que recorren
toda la coloracin.

Ilustracin 1 bacilos
100x
Ilustracin 2 a coloracin de
ziel neelsen 100x se utiliza PARTE 2: observamos los cultivos como
aceite de inmersin en este
el agar sangre y el agar MacConkey y
objetivo para as poder
visualizar mucho mejor como tras pasar algunos das como se
pueden forman las colonias y se ve su
morfologa de las colonias como podemos
observar en las figuras 3y 4.

F
ig
ur
a
3
cultivos bacterianos
Ilustracin 1bcoloracion de ziel neelsen
40x

Figura 4 cultivos de agar sangre
y macconkey
PARTE 3: tincin de Gram Colocamos
sobre un portaobjetos una pequea
alcuota de un cultivo bacteriano con el
asa bacteriana hicimos un frotis, formando
una pelcula homognea sobre el
portaobjetos con el asa. Observa en la
figura 5
Ilustracin 3 colocacin del
frotis
Dejamos secar unos minutos. Luego
cogimos la preparacin y pasndola a
travs de la llama del mechero el
portaobjetos para as fijarla como
podemos observar en le figura 6.
Palpamos la
parte inferior del
portaobjetos
Ilustracin 4 fijacin de
con frotis el dorso de
la mano
izquierda para enfriar y comprobar que no
hubo sobrecalentamiento. Luego hicimos la
tincin la cual consista en:
Cubrir con unas gotas de cristal violeta
durante 1 minuto. Y se Lavabo el
exceso de colorante con agua.
Aadir el reactivo lugol, solucin de
yodo-ioduro potsico, durante 1 minuto.
Se Lavabo el exceso con agua.
Lavar la preparacin con alcohol
acetona durante 30 segundos (el tiempo
de decoloracin es clave para un resultado
correcto). Se Lavabo inmediatamente con
abundante agua.
por ultimo se Cubri con el colorante de
contraste, Fuscina durante 1 minuto. Y se
Lavabo el exceso de colorante con agua.
Dejamos secar al aire como podemos
observar en la figura 7
Ilustracin 5 muestra del frotis
Ahora cogimos esa muestra se le agrego
una gota de aceite de inmersin y la
Observamos con objetivo de inmersin
(100 x).
La diferente estructura y organizacin de
la pared celular en estos dos tipos de
organismos hace que ambos grupos
respondan de manera distinta, as
mientras las bacterias gram positivas
mantienen y conservan el complejo cristal
violeta-iodo, las bacterias gram negativas
se decoloran rpidamente con la
aplicacin del alcohol, admitiendo el
colorante de contraste que proporciona un
color entre rosa y rojo que contrasta con el
intenso color violeta (Figs. 7 y 8).

Ilustracin 7 tincin de
Gram cocos (Gram
positivos) Microscopa de
campo claro100x
Ilustracin 8 tincin de Gram de
bacilos (Gram negativos) Microscopa
de campo claro 100x
Tincin de ziel neelsen
Colocamos sobre un portaobjetos una
gota de agua y una pequea porcin de un
cultivo bacteriano con el asa bacteriana.
Se hizo el frotis, formando una pelcula
homognea sobre el portaobjetos con el
asa. Dejamos secar. Fijamos
preparacin, pasando a travs de la llama
del mechero el portaobjetos. Figura 9
Ilustracin 9 muestra de frotis
Cubrimos con el colorante de contraste,
azul de metileno durante 5 minutos. Luego
Lavamos el exceso de colorante con agua
y por ultimo Dejamos secar al aire.
Ahora se Aadi una gota de aceite de
inmersin para Observar con objetivo de
inmersin (100 x).
Estas bacterias son resistentes al
tratamiento con alcoholes y cidos suaves
conservando el colorante fundamental,
mientras que organismos que no posean
esta caracterstica son rpidamente
decolorados y pueden teirse con el
colorante de contraste en este caso azul
de metileno. Como se observa en la figura
10.
la
Ilustracin 10 Tincin Ziehl-
Neelsen estos son cocos.
Microscopa de campo claro
(100x
 ess.com/2012/09/medios-de-
CONCLUSIONES
cultivo-en-un-laboratorio-de-
microbiologc3ada.pdf
Al realizar una siembra
de microorganismos, debemos tener en
cuenta que tcnica se va a utilizar, debido Laboratorio de microbiologa:
a que estas varan respecto a las conocimientos bsicos para un
caractersticas del microorganismo a
clnico. Tcnicas de bsicas de
tratar. Tambin debe tenerse en cuenta la
forma, espacio y el objetivo al que bacteriologa. Consultado el 01 de
se quiere llegar, pues dependiendo de marzo de 2017 disponible en:
esto la tcnica de siembra es diferente. Un
http://www.sciencedirect.com/scien
microorganismo se puede sembrar en un
medio lquido o en la superficie de un ce/article/pii/S0716864014700720
medio slido de agar.

Tambin es de gran importancia el aceite

de inmersin para poner visualizar muy Universidad industrial de
bien los microorganismos en el objetivo
Santander. Gua de laboratorio.
100x
Laboratorio de microbiologa 1
clasificacin de bacterias.
REFERENCIAS Consultado el 28 de febrero de
2017. Disponible en :
http://ead.uis.edu.co/Repositorio/re
MEDIOS DE CULTIVO EN UN
genciadefarmacia/Nivel_III/Microbi
LABORATORIO DE
ologia/Documentos/Unidad_1/MCB
MICROBIOLOGA. Cultivos
01_Laboratorio_I.pdf
bacterianos. Consultado el 02 de
marzo de 2017. Disponible en
https://libroslaboratorio.files.wordpr