JURNAL ILMU KEFARMASIAN INDONESIA, April 2007, hal. 17-22 Vol. 5, No.

I
ISSN 1693-1831

Analisis Pendahuluan Metabolit Sekunder

dari Kalus Mahkota Dewa
(phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl.)
ERLINDHA GANG GAl *, HERNITAASRIANP, LINDA NOVITN

IFakultas Farmasi Universitas Pancasila

Srengseng Sawah, Jagakarsa, Jakarta Selatan 12640
2Balai pengkajian Bioteknologi, BPPT, Puspiptek, Serpong

Diterima 25 Desember 2006, Disetujui 12 Februari 2007

Abstract: Callus is a cell mass which is formed by cell tissues and formed in explants surface or
explants slice which divide them continuously in a controlled condition. With tissue culture method, the
aim in using callus is for reproduce new plants to get the secondary metabolite which match with the
secondary metabolite from the origin plants. Mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boer!.), from
Thymelaceae family is a very useful plant which can be used for medicine. Its leaves and seed's skin are
the most important parts that usually used. In this experiment, Mahkota's seed is planted in germination
media to get a sterile plant, and then from the plant, we take the leaves for callus initiation. We do a
phytochemical filtering, TLC, and HPLC tests with this callus that we produced then we compared the
result with Mahkota Dewa's leaves. From the phytochemical filtering result we found that both of them
have alkaloid secondary metabolite, flavonoid saponin, tannin, steroidltriterpenoid. We also found some
chromatograms which are similar in TLC and HPLC.

Key words: Phaleria macrocarpa, TLC, HPLC, callus

PENDAHULUAN pengobatan dan menjaga kesehatan dalam jumlah

Tanaman memiliki daya regenerasi yang kuat,
hal ini telah lama disadari dan ini adalah merupakan
titik tolak berkembangnya industri kultur jaringan
tanaman. Beberapa peneliti mengembangkan hasil
penelitian sebelumnya bahwa sel/jaringan dapat
ditanam secara terpisah dalam suatu kulturlmedia
tertentu(l).
Usaha pengembangan tanaman dengan metoda
kultur jaringan tanaman merupakan usaha per-
banyakan varietas tanamanlspesies tanaman secara
vegetatif. Spesies tanaman yang sering dikem-
bangkan adalah tanaman hias; bunga, tanaman per-
tanian seperti sayur-sayuran, buah- buahan(2). Selain
untuk perbanyakan varietas tanaman, saat ini kultur
jaringan diarahkan untuk beberapa tujuan, antara lain
untuk memproduksi metabolit sekunder (alkaloid,
flavonoid, dll).
Dalam bidang farmasi, metoda kultur jaringan
tanaman ini menguntungkan karena dapat meng-
hasilkan suatu metabolit sekunder yang berguna untuk
* Penuliskorespondensi, Hp. 08128170958,
email: erlindha-gangga@yahoo.com
besar, serta tumbuh dalam waktu cepat pada lahan
yang terbatas(2).Awalnya, mahkota dewa (Phaleria
macrocarpa [Scheff.] Boerl.) dibudidayakan sebagai
tanaman hias dan digunakan sebagai tanaman
peneduh, tetapi saat ini berguna/manfaat sebagai
salah satu tanaman obat tradisional yang dikenal
merupakan obat asli Indonesia. Sampai saat ini
sudah banyak penyakit yang berhasil disembuhkan
tergantung pada bagian tanaman yang digunakan.
Bagian yang digunakan biasanya memberikan efek
yang berbeda terhadap jenis penyakit yang dapat
diobatil disembuhkan(3,4).
Bagian yang paling sering dipakai adalah: (l)
Daunnya, digunakan dengan cara merebusnya.
Penyakit yang dapat diobati yaitu, lemah syahwat,
disentri, alergi, dan tumor. (2) Kulit dan daging
buah juga sering digunakan untuk pengobatan flu,
rematik dan kanker rahim. Beberapa keunggulan dan
mahkota dewa ini menjadikannya salah satu tanaman
obat yang mendapatkan perhatian cukup besar untuk
terus dikembangkan(3).
Dalam beberapa hasil penelitian diketahui bahwa
mahkota dewa kaya akan kandungan kimia tetapi
belum semuanya terungkap. Dalam daun dan kulit

http://www.univpancasila.ac.id 8/20
18 GANGGA ET AL.
buahnya terkandung alkaloid, terpenoid, saponin
dan flavonoid, sedangkan pada daunnya ditemukan
senyawa lignan (polifenolY3,4).
Beberapa keunggulan yang dimiliki oleh
mahkota dew a menyebabkan mahkota dewa
mendapatkan perhatian yang besar dari beberapa
negara. Saat ini mahkota dewa sedang diteliti dan
dikembangkan secara serius sebagai obat untuk
penyembuhan beberapa penyakit. Negara yang
sedang mengembangkan penelitian ini antara lain:
Belanda, Taiwan, Singapura, dan Malaysia(4).
Tujuan penelitian ini adalah untuk membuktikan
bahwa metoda kultur jaringan tanaman mahkota
dewa menghasilkan metabolit sekunder yang sarna
dengan metabolit sekunder yang dihasilkan dari
tanaman asalnya.
BAHAN DAN METODE
BAHAN. Biji mahkota dewa yang digunakan
diperoleh dari Kebun Raya Bogor. Media kultur
jaringan (Media MS) kloroform, alkohol, akuades,
metanol, natrium hipoklorit, ammonia, asam klorida,
amil alkohol, ferri (III) klorida, formaldehid, natrium
asetat, natrium hidroksida, eter, petroleumeter,
n-heksan, etil asetat, anisaldehid, asam sulfat,
agar, gula, mio-inositol, sitokinin (BAP), hormon,
auks in (2-4-D), pereaksi Liebermann Bouchard,
Dragendorff, pereaksi Mayer, pereaksi Stiasny.
METODE. Menumbuhkan tanaman steril.
Buah segar tanaman mahkota dewa dicuci bersih
dibawah air mengalir di dalam Laminar Air Flow
(LAF), kemudian permukaan buah disterilkan
menggunakan alkohol 90% selama I menit, lalu biji
dipisahkan dari daging buah. Biji yang diperoleh
digunakan sebagai eksplan untuk menumbuhkan
tanaman steril. Eksplan ditanam pada media semi
padat dengan cara yang aseptis, dilakukan di dalam
LAP kabinet untuk mencegah terjadinya kontaminasi
ataupun cemaran mikrob.
Kultur kalus. (a) Tahap inisiasi. Inisiasi kultur
kalus dilakukan menggunakan daun mahkota dewa
sebagai sumber eksplan yang diperoleh dari tanaman
steril biji mahkota dewa yang ditumbuhkan pada
media dasar MS dengan penambahan zat pengatur
tumbuh untuk menginisiasi kultur kalus. Kultur
disimpan di ruang gelap dan petumbuhan kalus
diamati setiap minggu. (b) Tahap perbanyakan kalus.
Perbanyakan kalus dilakukan dengan memindahkan
/subkultur masa kalus kedalam media baru berulang
kali (media yang digunakan boleh sarna) pada
peri ode tertentu menggunakan media tumbuh
yang paling optimal dan pemberiaan zat pengatur
tumbuh yang paling sesuai untuk mempercepat dan
http://www.univpancasila.ac.id
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
memperbanyak tumbuhnya kalus. (c) Uji penapisan
fitokimia. Kalus yang berasal dari daun tanaman steril
dan daun tanaman liar mahkota dewa dikumpulkan
kemudian ditimbang, lalu dikeringkan dengan cara
diangin-anginkan, kemudian ditimbang kembali
untuk memperoleh bobot kalus dan daun kering.
Selanjutnya dilakukan penapisan fitokimia terhadap
kalus kering dan daun kering mahkota dewa (sebagai
pembanding). Uji penapisan menggunakan metoda
Famsworth(9). (d) Pembuatan ekstrak. Serbuk daun
dan kalus mahkota dewa ditimbang masing-masing
10 gram dimaserasi 4x dengan metanol, tiap kali
250 ml. Basil maserasi dipekatkan dengan vakum
rotavapor sampai diperoleh ekstrak kental kalus dan
daun. (e) Pembuatan media. Media yang digunakan
adalah media yang diperkenalkan oleh Murashige
dan Skoog (Media MS). Media ini umumnya sering
digunakan sebagai media dasar dari metode kultur
jaringan. Timbang bahan-bahan penyusun media
se-jumlah tertentu sesuai kebutuhan. pB larutan/
media diatur sekitar 5,8. Media kemudian dimasuk-
kan ke dalam wadahltabung kultur steril yang telah
dipersiapkan lalu sterilkan dalam autoklaf dengan
suhu 121C selama 20 men it. Selanjutnya media
disimpan dalam ruang kultur sebelum digunakan.
Analisa kualitatif secara KLT (kromato-
graft lapis tipis). Terhadap ekstrak kental daun
dan kalus mahkota dewa dilakukan uji analisis
kualitatif menggunakan metode KLT dengan fase
gerak cairan eluasi campuran antara n-heksan -
etil asetat - isopropanol (l : 2 : 17). Basil KLT
(kromatogram) dilihat dengan sinar UV 'A 254 nm
dan 366 nm kemudian disemprot dengan penampak
bercak yang terdiri dari campuran anisaldehid dan
asam sulfat pekat .
Analisa kualitatif secara KCKT (kromato-
graft cair kinerja tinggi). KCKT adalah tehnik
pemisahan berdasarkan fase diam padat (kolom
nukleosil CI8 dan fase gerak cair (metanol - air
dengan perbandingan 10 : 90) dengan tekanan
tinggi, sehingga terjadi pemisahan secara partisi,
adsorpsi ataupun penukar ion, tergantung fase diam
yang digunakan. Pada ekstrak kental kalus dan daun
dilakukan analisa kualitatif secara KCKT untuk
mengetahui profil kromatogram senyawa metabolit
sekunder yang terkandung didalamnya. Pada panjang
gelombang ('A) 230 nm dan 300 nm.Volume injeksi
20 Ill.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Menumbuhkan tanaman steril. Pada
pertumbuhan tanaman steril yang berasal dari
8/20
Vol. 5,2007 Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 19

biji buah mahkota dewa menggunakan media
pertumbuhan yang terdiri dan media MS 10% makro-
mikro, ditambah dengan vitamin, mio-inosito1, dan
BAP 0,2 ppm (hormon pertumbuhan), menghasilkan
pertumbuhan yang paling baik.
Pada minggu kedua telah memperlihatkan per-
tumbuhan akar batang, dan daun. Minggu ketiga
sudah terlihat menghasilkan pertumbuhan yang
sempuma karena sudah tampak tanaman bam yang
lengkap yang tediri dari akar, batang dan daun.
Minggu keempat daun sudah terbentuk dengan sem-
puma dan sudah dapat digunakan sebagai eksplan.
Inisiasi kalus. Eksplan (daun) yang berasal dari
tanaman steril ditanam pada media perlakuan yaitu
pertumbuhan 2,0 ppm 2,4 D dan 1,0 ppm BAP.
Pada minggu kedua sudah mulai terbentuk kalus
dan pertumbuhan kalus yang sempuma terjadi pada
minggu kedelapan. Penggunaan hormon 2,4 D sangat
berguna untuk menghambat proses morfogenesis
pada kalus sehingga mampu menginisiasi per-
tumbuhan kalus. Pada minggu keenam kalus sudah
dapat dapat digunakan untuk perbanyakan dengan
cara disubkulturkan.
Perbanyakan kalus. Perbanyakan di1akukan
dengan cara memindahkan kalus (minggu keenam)
pada media yang sarna dengan media pertum-
buhan yang optimal yaitu media MS 10% dengan
penambahan 2,0 ppm 2,4 D dan 1,0 BAP (sub
kultur) beberapa kali sehingga diperoleh jumlah
ka1us 1ebih banyak 1agi. Pada minggu kede1apan
jum1ah kalus sudah banyak dan dapat digunakan
untuk pengujian.
Penapisan fitokimia. Penapisan ini dilakukan
terhadap kalus yang telah dikeringkan dengan cara
diangin - anginkan dan serbuk kering daun mahkota
dewa sebagai pembanding. Hasil uji penapisan
fitokimia menunjukkan bahwa golongan metabo1it
sekunder yang dihasilkan ka1usmempunyai kesamaan
dengan metabolit sekunder yang dihasi1kan oleh
serbuk daun mahkota dewa yaitu golongan alkaloid,
saponin, flavonoid, tannin, dan steroid/triterpenoid.
Sedangkan go long an kumarin tidak ditemukan pada
kalus tetapi ditemukan pada serbuk kering daun
(Tabell).
KLT. Dari data kromatogram terlihat ada
perbedaan kandungan antara ekstrak daun dan
ekstrak kalus yaitu dari jum1ah dan wama bercak
yang terbentuk. Jum1ah bercak dari ekstrak daun
1ebih banyak dari pada yang ditemukan pada ekstrak
ka1us.
Tabell. Penapisan fitokimia daun dan kalus
mahkota dewa
Golongan Daun Kalus
Alkaloid + +
Flavonoid + +
Saponin + +
Tanin + +
Kumarin +
Steroid / triterpenoid + +
Pada sinar UV A 254 nm diperoleh 5 bercak
dari ekstrak daun dan 3 bercak dari ekstrak ka1us.
Pada sinar UV A 366 nm diperoleh 2 bercak dari
ekstrak daun, 1 bercak dari ekstrak kalus, setelah
disemprot dengan penampak bercak dipero1eh 3
bercak dari masing-masing ekstrak (Gambar 1).
Pada bercak yang memiliki hRf sarna dan wama
yang sarna diduga memiliki senyawa yang sarna
dan pada bercak yang berbeda wama maupun hRf
diduga senyawa yang berbeda baik yang terdapat
pada ekstrak daun maupun ekstrak ka1us. Hal ini
diduga karen a terbentuknya senyawa bam pada
proses pembentukan kalus, dan belum sepenuhnya
terbentuk senyawa yang terdapat pada daun karena
ka1usbe1um membentuk difrensiasi menjadi tanaman
yang utuh (Tabel 2).

Tabel 2. Penapisan fitokimia daun dan kalus mahkota dewa

Daun Kalus
No Setelah
Sebelum disemprot Setelah disemprot Sebelum disemprot
Bercak disemprot
Sinar Sinar Sinar Sinar
Sinarbiasa Sinarbiasa
UV254nm UV 366nm UV254nm UV366 nm
Merah muda
Coklat tua Merah muda Hijaumuda Coklat tua Merah muda
pucat
Merah muda
2 Coklatmuda Merahmuda Kuningjingga Coklat muda
pucat
Merah muda Merah muda
3 Coklat muda Coklatmuda
pucat pucat
4 Coklat muda

5 Coklat muda

http://www.univpancasila.ac.id 8/20
20 GANGGAETAL. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia

sinar uv 254 nrn sinar uv 366 nrn sinar biasa

sebelum disernprot sebelurn disernprot setelah disernprot

0
0
0

0 0
0 0 0

0 <::) 0
0
0
0

-
K D
K D D

Gambar 1. Kromatogram KLT ekstrak metanol daun dan kalus mahkota dewa. K: kalus, D: daun, fase gerak :
metanol-etil asetat-isopropanol (1 :2: 17), penampak bercak: anisaldehid-asam sulfat pekat

-- 0."c10r UV Yh
R.hntionTim.

~ooooo -i
!
300000 ~
i ..:.
.200000 ~

!
100000 j
J
o ,
t-----~-._--~----~----_,._---- ..
,...
----,-------.----------------i
10 20 2S 30 35 40 45
"'tIl ,.,

minutes

Gambar 2. Profil kromatogram KCKT ekstrak metanol daun mahkota dewa A = 230 nm.

-w- O.t.c-tor uv Vis

.t.ntlon Tim_

100000 ,
,
m~~~il
~ ..... !
I
I
o I i
5 10 15 20 25 30 40

minutes

Gambar 3. Profil kromatogram KCKT ekstrak metanol kalus mahkota dewa A = 230 nm.

http://www.univpancasila.ac.id 8/20
 Vol. 5,2007 Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 21

200000 ~ Deteclot UV VII

1 R t.ntlon Tim.

1500001

I
I
100000 t

I
50000 ~

o
II
i -.---------------------~.----.~----i
10 15 20 .s 25 30 3S .0
invtes

Gambar 4. Profil kromatogram hasil KCKT ekstrak metanol daun mahkota dewa A = 366 nm.

15000
+
R tention
aetector
Tim
UV Vis

....:

10000

5000 I
0L- o 10
.-----.--.
15 20 25 30 35
__ 40
~ 45
Minutes

Gambar 5. Profil kromatogram hasil KCKT ekstrak metanol kalus mahkota dewa A = 366 nm.

KCKT. Profil krornatograrn dari ekstrak daun berbeda karen a rnasih rnenunjukkan beberapa
dan ekstrak kalus pada A 230 nrn diperoleh jurnlah persarnaan. Sehingga diduga kalus dari rnahkota
puncak yang berbeda. Profil krornatograrn dari dewa dapat rnenghasilkan senyawa rnetabolit
ekstrak daun dan ekstrak kalus pada A 360 nrn, sekunder yang sarna dengan daun dari tanarnan
diperoleh hasil yang harnpir sarna dengan profil asalnya.
sebelumnya, yaitu ada perbedaan profil krornatograrn
tetapi dengan adanya perbedaan itu tidak rnenutup
DAFTAR PUSTAKA
kernungkinan ada senyawa yang sarna karena pada
beberapa retention time rnernberikan puncak yang
1. Wetherell DE Pengantar propagasi tanaman secara
sarna walau tinggi puncaknya sedikit berbeda. Hal in vitro. New Jersey: Avery Publishing Inc; 1989.
ini rnungkin disebabkan dari konsentrasi senyawa 2. Hendaryono DPS, Wijayani A. Teknik kultur
yang tidak sarna (Garnbar 2,3,4,5). jaringan: pengenalan dan petunjuk perbanyakan
tanaman secara vegetatif modern. Yogyakarta:
SIMPULAN Kanisius; 1994.
3. Harmanto Ning. Mahkota Dewa (Revisi), obat pusaka
Hasil uji penapisan fitokirnia dari daun dan para dewa. Jakarta: AgroMedia Pustaka; 2003. hal
1,7-11,15- 20.
kalus rnahkota dewa rnenunjukkan bahwa keduanya
4. Winarto WP. Mahkota Dewa: budi daya dan
rnengandung rnetabolit sekunder yang sarna yaitu
pemanfaatan untuk obat, Seri Agrisehat. Jakarta:
golongan alkaloid, flavonoid,saponin, tannin, steroid Penebar Swadaya.2003. hall-II, 17-20,55.
/triterpenoid. 5. Perry ML ANew species of Ph ale ria (Thymelaceae)
Hasil KLT dan KCKT rnernberikan bercak dan from New Guinea, Vol XXXIX Cambridge, Mass:
puncak sedikit berbeda, tetapi tidak sepenuhnya Journal of The Arnold Arboretum of Harvard
University; 1958.
http://www.univpancasila.ac.id 8/20
22 GANGGAET AL.
6. Shargol DP, Ngo TT. Biotechnological application
of plant cultures. Tokyo: CRC Press; 1994.
7. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Cara
pembuatan simplisia. Jilid 1. Jakarta: Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan; 1983.
8. Farnswoorth NR. Biological and phytochemical
screening of plants. J Pharm Sci. 1966; 55(3).
9. George FE, Sherrington'DP. Plant propagation
by tissue culture. Handbook and Diectory of
Commercial Laboratories; 1984.
http://www.univpancasila.ac.id
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
10. Gamborg 01, Phillips Gc. Plant cell, tissue and organ
culture. Fundamental methods, Springer. 2004. p.67-
72,315.
11. Stahl E. Analisis obat secara kromatografi dan
mikroskopi. Terjemahan oleh Padmawinata K.
Bandung: Penerbit ITB; 1985.
12. Krstolovic AM, Brown PR. Reversed phase HPLC:
theory, practice and biochemical Application. New
York: John Wiley. & Sons. Inc; 1982.
8/20