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Revista latinoamericana
Artculo de revisin
RESUMEN
En aos recientes la inmunohistocuqmica se ha convertido en una importante herramienta para el diagnstico histopatolgico. La tcnica
de inmunoflurescencia desarrollada por Albert Coons y colaboradores sent las bases de la inmunohistoqumica actual. Para la adecua-
da interpretacin de los inmunorreactantes los patlogos debemos de estar familiarizados con la localizacin celular y subcelular de los
anticuerpos. Hay antgenos celulares localizados en la membrana, el ncleo o el citoplasma as como antgenos extracelulares. Debido
a la gran variedad de factores capaces de influir en la demostracin de antgenos pueden surgir diversos problemas tcnicos y de inter-
pretacin. La fijacin, el tipo, la duracin, el pH del fijador, la temperatura, la sensibilidad de la clona utilizada, el sistema de deteccin y
el cromgeno, entre otros, son esenciales para la adecuada inmunomarcacin.
Palabras clave: inmunohistoqumica, anticuerpos, localizacin.
ABSTRACT
In recent years, immunohistochemistry has become and important tool in diagnostic histopathology. The immunoflorescence technique
described by Albert Coons and colleagues was the cornerstone for what latter became immunohistochemistry. Pathologists have to be
familiarized with the precise cellular and subcellular location of the immunohistochemical reaction for proper interpretations of immunos-
tains. There are cellular antigens with membranous, nuclear and cytoplasmic staining as well as extracellular antigens. Many technical and
interpretative pitfalls may arise because of a wide variety of factors that may influence the demonstration of antigens in paraffin embedded
tissue sections. Fixation, type of tissue, duration and pH of fixative, temperature, as well as the sensitivity of the antibody clone, detection
system, and chormogen, amongst others, are important considerations for proper immunolabling.
Key words: Immunohistochemistry, antibodies, localozation.
L
a inmunohistoqumica es una tcnica que ha tisulares, la deteccin de complejos inmunitarios, la
revolucionado la histopatologa. El desarrollo localizacin de antgenos virales en clulas infectadas
de la metodologa de anticuerpos marca- y de antgenos tumorales en diversas neoplasias. A
dos con fluorescena (inmunofluorescencia pesar de esta trascendente innovacin, la tcnica de
indirecta) realizado por Albert H Coons (figura 1A), inmunofluorescencia fue, hasta cierto punto, de utilidad
Hugh Creech, Norman Jones y Ernst Berlinier, en la limitada en la patologa quirrgica diagnstica, quiz
Universidad de Harvard en 1941, fue el antecedente debido a que requiere tejido fresco y un microscopio
del florecimiento de la inmunopatologa.1 especial (de fluorescencia) que no cuenta con la mejor
El uso de anticuerpos marcados con isotiocianato de resolucin morfolgica. Pero sin duda el mtodo creado
fluorescena le permiti a Coons el estudio detallado por Coons y col. sent las bases de la inmunohistoqu-
de diversos antgenos, la identificacin de protenas mica actual.
En 1959 Rodney Porter y Gerald Edelman descri-
* Departamento de Patologa, Hospital Espaol, Mxico, DF. bieron la estructura de las inmunoglobulinas, por lo
** Departamento de Patologa, Centro Mdico ABC, Mxico, que en 1972 recibieron el premio Nobel de Fisiologa o
DF.
*** Departamento de Biologa Celular y Tisular, Universidad Medicina. Su descubrimiento fue posible gracias a que
Panamericana. Mxico, DF. obtuvieron grandes cantidades de estas protenas de
Correspondencia: Dr. Carlos Ortiz Hidalgo. Departamento de pacientes con mieloma de clulas plasmticas (mieloma
Patologa. Centro Mdico ABC, Sur 136, nm. 116, colonia Las mltiple). Las inmunoglobulinas del mieloma, prote-
Amricas, CP 01120, Mxico, DF.
E-mail: cortiz@abchospital.com nas de Bence-Jones y macroglobulinas monoclonales
Recibido: enero, 2007. Aceptado: julio, 2007. jugaron un papel fundamental en el esclarecimiento
La versin completa de este artculo tambin est disponible en
de la estructura, gentica, sntesis y metabolismo de
internet: www.revistasmedicasmexicanas.com.mx las inmunoglobulinas. Algunos aos despus, Susu-
Figura 1. A) Albert H. Coons, B) Cesar Milstein, C) Georges J.F. Khler, D) Niels K. Jerne.
En 1984 Cesar Milstein, Georges JF Khler y Niels Actualmente existen numerosas estrategias
K Jerne recibieron el Premio Nobel de Medicina por teraputicas oncolgicas que utilizan anticuerpos
su aportacin para la produccin de anticuerpos monoclonales como el anti-CD20 (Rituximab),4 anti-
monoclonales2 (figura 1 B, C, D). Estos investigadores CD117 (Gleevec) 5 y anti-Her2/neu (Herceptin), 6
pudieron unir dos clulas y obtener un hbrido (hibri- determinantes que pueden hacerse evidentes en el
doma) que comparten caractersticas funcionales de tejido obtenido por biopsia mediante inmunohis-
ambas poblaciones celulares. Fusionaron un linfocito toqumica con anticuerpos monoclonales dirigidos
B del bazo de un ratn inmunizado con eritrocitos de contra CD20, CD117 y Her2/neu, respectivamente
oveja (que produca anticuerpos contra un eptope (vide infra).7
del eritrocito), con clulas plasmticas de mieloma El uso de anticuerpos monoclonales es parte de
de un ratn, la clula resultado de esta fusin viva la rutina de los laboratorio de patologa debido a que
de forma indefinida in vitro. Este hbrido es capaz son de gran utilidad en el diagnstico de tumores me-
secretar inmunoglobulinas en contra del eptope tastsicos de primario desconocido, tumores de partes
del eritrocito de oveja, debido a que el hibridoma blandas, linfomas y leucemias y pueden ayudar a la
tambin haba adquirido la facultad de secrecin identificacin de algunos agentes infecciosos;8 adems,
de inmunoglobulinas del mieloma y su capacidad los anticuerpos monoclonales pueden ser de utilidad
para vivir in vitro. As fue como pudieron producir como factores pronsticos y predictivos en diversos
anticuerpos in vitro en contra de un solo determinan- tumores.
te de una compleja estructura antignica. Klher y Es necesario que el patlogo conozca las ca-
Milstein demostraron que virtualmente es posible ractersticas biolgicas generales de los antgenos
fusionar cualquier clula con lneas celulares de utilizados, as como el tejido con el cual reacciona, la
mieloma, produciendo as cantidades homogneas localizacin celular donde la inmunorreaccin debe
ilimitadas de anticuerpos con la especificidad de la encontrarse, y tener en mente las posibles reacciones
clula fusionada. cruzadas inespecficas de cada anticuerpo. Como
ser secretada hacia la superficie apical celular, por me- Otro marcador de membrana con implicaciones
dio de un mecanismo de inversin de la polaridad, pronsticas es el factor de crecimiento epidrmico que
produce secrecin hacia el estroma, lo que conlleva normalmente se expresa en los estratos basal y supra
el desprendimiento del epitelio de su estroma subya- basal de los epitelios escamosos estratificados y se
cente. De esta forma, la mucina invade el estroma y sobreexpresa en varios carcinomas, por incremento
separa a las clulas de su membrana basal. Lo anterior en el nmero de copias gnicas.23 El anti-EGFR (Ge-
no slo explica el excelente pronstico del carcinoma fitinib) se utiliza en el tratamiento de carcinomas
mucinoso de la mama sino, adems, el hecho de que del pulmn, carcinomas de la cabeza y el cuello, y
casi la mayor parte del moco es extracelular.21 En el otros tipos de tumores. La evaluacin inmunohisto-
carcinoma mucinoso la expresin de algunos inmuno- qumica del anti-EGFR es membranosa y, de manera
rreactantes, como el antgeno de membrana epitelial similar al Her2/neu, existe una forma de evaluar la
y el antgeno carcinoembrionario predominan hacia sobreexpresin del factor de crecimiento epidrmico:
la superficie basal, lo que traduce esta inversin de multiplicando la extensin e intensidad de la positi-
la polaridad (figura 3).21 vidad de la marcacin (0,1,2,3).23,24
Los siguientes tres ejemplos de inmunorreaccin 2) Los antgenos leucocitarios, que incluyen CD-1,
membranosa tienen relevancia clnica bajo ciertas CD-2, CD-3, CD-4, CD-5, CD-7, CD-8, CD-19, CD-20,
circunstancias: CD-43 y CD-45, son receptores de la superficie celular
o ligandos involucrados en el reconocimiento, inte-
1) La expresin membranosa del Her-2/neu tiene raccin, adhesin y transduccin celular de seales
implicaciones pronsticas. Existe correlacin directa o interaccin con protenas solubles-glicoprotenas y
entre la expresin de HER-2/neu y la resistencia a matriz extracelular. La marcacin inmunohistoqumica
citoxano/metotrexato y tamoxifeno. Con tecnologa para estos antgenos produce un patrn perimetral de
recombinante se desarroll un anticuerpo monoclo- membrana debido a la distribucin uniforme de estos
nal contra HER-2/neu, conocido como traztuzumab antgenos en la superficie celular. La expresin de mem-
(huMAB HER-2, Herceptin) que inhibe al HER- brana en los linfocitos neoplsicos puede ser el blanco
2/neu y, a su vez, bloquea el crecimiento de la clula de anticuerpos teraputicos. El ms utilizado en el
neoplsica. Por inmunohistoquimica utilizando Her- tratamiento de linfomas de clulas B y linfoma de Hod-
cepTest (DAKO Corporation), o con cerbB2/CB11 se gkin de predominio linfoctico nodular es el anticuerpo
puede determinar si hay expresin de Her2/neu. La anti-CD-20/rituximab (Mabthera).25 Rituximab es un
interpretacin se hace mediante una escala que va de anticuerpo monoclonal quimrico murino-humano que
0 a 3 (marcacin de membrana) con equivalencia con se une especficamente al CD20 y establece funciones
la sobreexpresin gnica. Cuando las clulas tienen para mediar la lisis de las clulas B.
menos de 20,000 receptores no muestran inmuno- Otro anticuerpo del que recientemente puede
marcacin (negativo, 0); si tienen cerca de 100,000 disponerse es el Campath-1H (Alentuzumab). Este
receptores muestran inmunomarcacin parcial, leve o anticuerpo est dirigido contra el CD52, que es una
moderada de la membrana con menos de 10% de las protena que se encuentra en la membrana de los lin-
clulas con marcacin completa en la membrana (po- focitos B, y que se ha utilizado en el tratamiento de la
sitivo, 1+); cuando tienen 500,000 receptores muestran leucemia linfoctica crnica.26
inmunomarcacin en la membrana en ms de 10% de 3) El CD117 (c-kit) es una protena transmembranosa
las clulas (positivo, 2+), y si tienen aproximadamente de 145 KDa que funciona como receptor de la tirosina
2300,000 receptores muestran inmunomarcacin com- cinasa.27 El gen c-kit se localiza en el cromosoma 4
pleta de la membrana en ms del 10% de las clulas (4q11-12) prximo al gen del receptor del factor de
(positivo, 3+). Cuando se realiza inmunohistoqumica crecimiento epidrmico (EGFR). El CD117 es un epto-
estandarizada en tejidos bien fijados y procesados hay po localizado en el dominio extracelular del receptor
una excelente correlacin entre el nmero de genes y es estructuralmente similar a otros receptores con
amplificados y la expresin proteica membranosa.22 actividad de tirosina cinasa, como el receptor del factor
c) Partn citoplasmtico
Los antgenos que producen un patrn de marcacin
citoplasmtico incluyen: protenas del citoplasma o
vesculas grandes, como: hemoglobina, albmina,
mioglobina, tiroglobulina, enolasa neurona espec-
fica, inmunoglobulinas, CD3, CD79a, bcl-2 y algunas
protenas virales, como el HBsAg, que produce un
patrn homogneo de tincin, casi siempre paranu-
clear. La positividad para estas molculas puede,
algunas veces, mostrar un patrn granular. Las cinasa que quiz juegue un papel fundamental en la
inmunoglobulinas, CD3, CD79a, y bcl-2 tienen mar- gnesis de los LACG.40,41 La localizacin inmunohis-
cacin citoplsmica con acentuacin alrededor de la toqumica subcelular de ALK puede correlacionarse
membrana nuclear. Existen casos raros de linfomas con el patrn de traslocacin. En los LACG con t(2;5)
B de clulas grandes con abundante matriz fibrilar (NPM-ALK) la expresin de ALK coexiste tanto en el
que mediante el uso de CD20 exhibe inmunorreac- ncleo como en el citoplasma. La marcacin granular
cin positiva con patrn de marcacin citoplsmica citoplsmica se relaciona con la t (2;22) (traslocacin
estriada, lo que indica que el material est formado entre el gen de la clathrina-CLTCL y el gen ALK), y
por membrana celular con procesos celulares inter- la marcacin de membrana y citoplasma indica t(1;2)
digitantes (figura 8).39 (traslocacin entre el gen de la tropomiosina- TPM3
y el gen ALK).42,43 La positividad inmunohisto-
qumica para ALK representa un punto esencial en
el diagnstico de los LACG (figura 9). La expresin
del ALK puede identificar un subtipo de LACG que,
predominantemente, ocurre en pacientes jvenes, con
carboxilglutmico (gla). Despus de su produccin glndula mamaria tienen una membrana basal bien
por los osteoblastos, la osteocalcina se incorpora a la desarrollada que puede ser resaltada por medio de
matriz sea y una fraccin se libera a la circulacin inmunomarcacin con colgena IV. Lo anterior y la
y puede medirse como parmetro bioqumico del existencia de clulas mioepiteliales evidenciadas por
metabolismo seo. La osteocalcina se sobreexpresa medio de la actina (p63 o CD10) favorecen el proce-
en presencia de anlogos de la vitamina D, como la so reactivo sobre un carcinoma.63 Para distinguir la
1,25dihidroxivitamina D2 y la 24-epi-1,25dihidroxi- pseudoinvasin provocada por cortes tangenciales en
vitamina D2, en el paso final de la diferenciacin un plipo adenomatoso de un verdadero adenocar-
osteoblstica y en la formacin de osteoide. Est de- cinoma infiltrante puede utilizarse colgena IV (vide
mostrado que algunos fibroblastos pueden expresar infra). Un ejemplo de la utilidad de la colgena IV en
eptopes que pueden producir reacciones cruzadas sarcomas es el diagnstico diferencial histolgico entre
cuando se utilizan anticuerpos policlonales anti-os- histiocitoma fibroso maligno, fibrosarcoma y tumor
teocalcina, por lo que para un diagnstico especfico maligno de vaina nerviosa perifrica. La existencia de
se requieren anticuerpos monoclonales con recono- colgena IV o laminina favorece el tumor maligno de
cimiento selectivo de pptidos. En la deteccin de vaina nerviosa perifrica, cuando la P-S100 y el CD57
tumores formadores de hueso, la osteocalcina tiene (marcadores de tumor maligno de vaina nerviosa
70% de sensibilidad y 100% de especificidad, compa- perifrica) son negativos.64
rada con 90% de sensibilidad y 50% de especificidad Con E-caderina y colgena tipo IV es posible
informada con la osteonectina.59 Adems, hay que evaluar el estado de las uniones intercelulares junto
considerar que la osteonectina puede ser positiva en con la membrana basal. En el adenocarcinoma estos
el tumor de clulas gigantes, el condroblastoma, en anticuerpos muestran marcacin discontinua en 65%
clulas endoteliales y fibroblastos, por lo cual debe con E-caderina y 96% con colgena IV. Las glndulas
tenerse precaucin en su interpretacin.60,61 en focos de pseudoinvasin muestran expresin mem-
branosa intensa, difusa y continua con E-caderina y
b) Colgena tipo IV y laminina continua y bien delimitada en la membrana basal con
La colgena tipo IV es el principal componente colgena tipo IV.65
estructural de la membrana basal.62 Los genes que co-
difican para la molcula de la colgena IV se localizan c) Amiloide
en el cromosoma13q. La colgena IV difiere de los El trmino amiloide (amylum) lo acu en 1838 el bo-
otros tipos de colgena en su secuencia de aminoci- tnico Matthias Schleiden para describir la apariencia
dos, pues no forma fibras y su estructura helicoidal del almidn en las plantas. En 1854 Rudolf Virchow
se interrumpe. La laminina y la enactina-nidogen emple el trmino para designar a los cuerpos ami-
son otros de los componentes de la membrana basal lceos del sistema nervioso debido a su reaccin con
que se une a los glucosaminoglicanos: actan como tinciones de yodo. Virchow estaba convencido que
puente para la unin de la colgena tipo IV de la los cuerpos amilceos cerebrales podan considerar-
membrana basal con la matriz adyacente. Adems, la se idnticos al almidn de las plantas y aplicaba el
colgena IV forma el sustrato para el crecimiento de trmino amiloide para las enfermedades llamadas
algunas clulas endoteliales, musculares y de nervios degeneracin lardcea o ceroide de rganos, como
perifricos y participa en la interaccin intercelular. el hgado o el bazo.66
Quiz la alteracin estructural de la colgena IV La existencia de amiloide define un grupo de
contribuya a diversas alteraciones en la morfologa enfermedades con etiopatogenia diversa, cuyas ca-
celular.62 ractersticas sobresalientes son: el depsito tisular de
Los anticuerpos contra colgena IV son tiles para material proteinceo acelular, amorfo, eosinfilo y que
evaluar la integridad de las membranas en clulas muestra birrefringencia color verde-manzana con luz
normales, as como la ausencia de sta en carcinomas. polarizada con la tincin de rojo Congo.67 El amiloide
La adenosis esclerosante y la microglandular de la corresponde a diversos grupos de protenas fibrilares
herpes simple en endometrio gestacional, y del cito- cuado, la inmunohistoqumica no nos ser de mucha
megalovirus cuando se utiliza hibridacin in situ.77,79 ayuda, e incluso los resultados pueden ser confusos
La tincin de biotina se localiza con ms frecuencia y orientarnos a un diagnstico errneo. Al pensar
en el citoplasma, casi siempre con patrn granular o en seleccionar una batera de anticuerpos debemos
moteado. La biotina tambin puede localizarse en el preguntarnos:
ncleo, como puede verse en el endometrio gestacio-
nal, en las mrulas del carcinoma de endometrio, 1) Cul es el diagnstico ms probable, dada la
en el blastoma pulmonar, en la variante cribiforme del morfologa de la lesin y el cuadro clnico?
carcinoma papilar de tiroides, en el pancreatoblastoma 2) Qu anticuerpos podran reaccionar en forma
y en los adenomas colnicos.80-83 Estas falsas positivas positiva y cules seran negativos en la lesin que
secundarias a la actividad de biotina endgena pueden estamos pensando, y
sospecharse cuando la localizacin y el patrn subce- 3) Cmo estos anticuerpos deberan localizarse en
lular de un anticuerpo dado no es el esperado, como la membrana, en el ncleo o en el citoplasma?
el patrn idntico de marcacin visto con mltiples
anticuerpos dirigidos contra diferentes antgenos, Es claro que la ayuda de la inmunohistoqumica
particularmente si la tincin es dbil. La forma de est directamente relacionada con las preguntas que
solucionar esta marcacin de biotna endgena es con nosotros hagamos durante el examen morfolgico de
la inmunomarcacin con un bloqueo avidina-biotina la lesin y que las inmunorreacciones interpretadas
o un sistema de deteccin alternativo que no incluya aisladamente, en la mayor parte de las situaciones,
avidina-biotina, como el sistema de deteccin de po- no son de mucha utilidad; es decir, slo obtendre-
lmeros o peroxidasa-antiperoxidasa. Sin embargo, mos respuestas adecuadas si hacemos las preguntas
estos sistemas de deteccin no estn totalmente libres correctas.
de tinciones inespecficas. Un ejemplo relativamente
comn es observar la tincin citoplasmtica difusa REFERENCIAS
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