NORMA TCNICA NTC

COLOMBIANA 3906

1996-07-24

AZCAR Y MELAZAS.
RECUENTO DE BACTERIAS MESFILAS
AEROBIAS. MTODO DE FILTRACIN POR
MEMBRANA

E: SUGAR AND MOLASSES. MESOPHILIC BACTERIAL

COUNT. MEMBRANE FILTRATION METHOD

CORRESPONDENCIA:

DESCRIPTORES: anlisis microbiolgico; anlisis

bacteriolgico; microbiologa; bacterias
mesfilas aerobias.

I.C.S.: 07.100.30; 67.180.10

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435

Prohibida su reproduccin Editada 2001-08-11

 PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo nacional

de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el sector
gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en los
mercados interno y externo.

La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica

est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo
caracterizado por la participacin del pblico en general.

La NTC 3906 fue ratificada por el Consejo Directivo de 1996-07-24.

Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a travs
de su participacin en el Comit Tcnico.

COLOMBINA S. A. INGENIO SAN CARLOS

INGENIO CENTRAL CASTILLA MANUELITA S. A.
INGENIO DEL CAUCA MAYAGUEZ S. A.
INGENIO LA CABAA MINISTERIO DE AGRICULTURA
INGENIO PICHICHI NESTL DE COLOMBIA
INGENIO PROVIDENCIA NULAB LTDA.
INGENIO RIOPAILA POSTOBN S. A.
INGENIO RISARALDA

Adems de las anteriores, en consulta pblica el proyecto se puso a consideracin de las

siguientes empresas:

CENICAA
CIAMSA
PURIFICACIN Y ANLISIS DE FLUIDOS

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIN DE NORMALIZACIN
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3906

AZCAR Y MELAZAS.
RECUENTO DE BACTERIAS MESFILAS AEROBIAS.
MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA

1. OBJETO

Esta norma establece la tcnica para determinar el recuento de bacterias mesfilas en azcar y
productos de azcar, por el mtodo de filtracin por membrana.

2. DEFINICIONES

Bacterias mesfilas aerobias y facultativas viables: microorganismos que crecen en presencia de

oxgeno o en tensiones menores de oxgeno, a temperaturas de incubacin entre 15 oC y 40 oC.
Las condiciones que favorecen el crecimiento de un amplio espectro de especies de bacterias se
establecen usando un medio nutritivo general.

3. ENSAYO

3.1 PRINCIPIO

La tcnica consiste en hacer pasar una solucin de azcar a travs de una membrana filtrante de
steres de celulosa de 0,45 m de tamao de poro donde quedan retenidas las bacterias, se
incuba de 24 h a 48 h, a 35 oC 2 oC y se hace el recuento.

3.2 EQUIPOS Y MATERIALES

- Estufa

- Sistema de vaco

- Incubadora

- Balanza

- Pinzas punta plana

1
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3906

- Material de vidrio para laboratorio

- Equipo de filtracin por membrana

- Mechero

- Almohadilla absorbente para impregnarla con el medio de cultivo

- Membrana de steres de celulosa de 0,45 m de poro

- Esptula

- Autoclave

- Cajas de Petri de 47 mm y 50 mm de dimetro

El equipo de filtracin y el material de vidrio deben ser estriles. Se deben usar tcnicas
aspticas en todo el procedimiento.

3.3 DILUYENTE, MEDIO DE CULTIVO, REACTIVOS Y OTROS PRODUCTOS

3.3.1 Diluyente

Agua peptonada estril para dilucin. Debe estar fresca y a temperatura ambiente al momento de
usarla. Se puede preparar con la siguiente formulacin:

Peptona 1 g/L

Cloruro de sodio 8,5 g/L

Agua destilada 1 000 ml

pH 7,0

Se esteriliza por 15 min a 121 C

Se puede utilizar cualquier otro diluyente enriquecido.

3.3.2 Medio de cultivo

Se utiliza el medio de cultivo Agar para recuento de grmenes en placa de pH 7,0 que contiene
todos los requerimientos nutricionales para bacterias que crezcan en un rango de temperatura
entre 15 oC y 40 oC. Debe prepararse de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Si no se
dispone del medio puede prepararse de acuerdo con la siguiente formulacin:

Tryptona 5 g/L

Extracto de levadura 2,5 g/L

2
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3906

Glucosa 1 g/L

Agar agar 15 g/L

Agua 1000 ml

pH 7,0 0,2

3.3.3 Desinfectante para el rea de trabajo

3.4 PROCEDIMIENTO

3.4.1 Preparacin de la muestra

De una muestra representativa de azcar, se pesan aspticamente 10 g de azcar o lo

correspondiente a 10 g de materia seca en el caso azcar lquido. Se adiciona el diluyente
esterilizado hasta completar un volumen de 100 ml. Se agita hasta disolver o mezclar la solucin
de azcar.

3.4.2 Preparacin de las cajas de Petri

Si el medio de cultivo es lquido se coloca una almohadilla absorbente sobre la caja de Petri y se
adicionan 2 ml de medio de cultivo. Si el medio de cultivo es slido en la caja de Petri se deja
solidificar de 5 ml a 7 ml de medio de cultivo.

3.4.3 Siembra e incubacin

- Se abre el portafiltros aspticamente y con una pinza flameada y fra se toma la

membrana de celulosa y se coloca entre el filtro y el embudo. Se cierra bien el
portafiltros para que no se salga la solucin.

- Se destapa el portafiltro por la parte superior y se vierte la solucin de azcar, se

deposita rpidamente y se cierra el portafiltro.

- Se conecta el equipo de filtracin al sistema de vaco y se hace pasar la solucin a

travs de la membrana de celulosa y el filtro.

- Se destapa el portafiltro, en forma asptica y con una pinza estril y fra se retira la
membrana y se deposita en la caja de Petri preparada previamente.

- Se llevan a incubacin las cajas de Petri de forma invertida, durante 24 h a 48 h a

35 oC 2 oC.

3.5 RECUENTO DE COLONIAS Y EXPRESIN DE RESULTADOS

- Las colonias caractersticas de bacterias mesfilas son de color claro, beige,

amarillas o blancas, pequeas, de borde bien definido; cuando se encuentran en
gran cantidad forman una pelcula lisa imposibilitando su recuento, se repite la
siembra utilizando una menor cantidad de muestra, 1 g de azcar haciendo la
correccin respectiva en el resultado final.

3
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3906

- Se considera un crecimiento ptimo cuando las colonias aisladas estn

distribuidas por toda la membrana, cuando se obtiene este crecimiento se procede
a realizar el recuento de la siguiente forma: se comienza por la parte superior y se
va descendiendo, procurando no repetir alguna colonia (vase la Figura 1).

Figura 1. Diagrama para conteo de colonias

Una vez obtenido el recuento, el resultado se expresa as:

Nmero de unidades formadoras de colonias contadas en 10 g de azcar (cantidad de muestra) = "X" UFC/10g

Donde:

"X": nmero de bacterias contadas

UFC: unidades formadoras de colonias