IDENTIFICACIN DE BACTERIAS

Introduccin

En general, las bacterias y otros microorganismos son transparentes, lo que

dificulta su estudio cuando los exmenes se realizan en fresco. Por esta razn,
cuando se quieren conocer los detalles morfolgicos es necesario recurrir a
tinciones. La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen
alguna afinidad especfica por algn componente celular, existen varios tipos de
colorantes entre ellos tenemos:
a) Sales colorantes
b) Colorantes liposolubles

a) Los colorantes ms comnmente usados son sales que pueden ser de tipo
cido o bsico, trminos que no indican necesariamente su pH en solucin,
sino que una parte significativa de la molcula sea aninica o catinica.
Catinicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en
el interior de las clulas y las tien. Ejemplos: azul de metileno,
cristal violeta, safranina.
Aninicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de
modo que no tien las clulas, sino el entorno. En este caso se habla
de tincin negativa. Ejemplos: eosina, nigrosina.

b) Los colorantes liposolubles se combinan con los componentes lipdicos de

la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de los depsitos
de grasa. Ej. negro Sudn. En algunos casos se usan mordientes con la
finalidad de engrosar estructuras muy finas, con el propsito de hacerlas
visibles al microscopio ptico; uno de ellos es el cido tnico que se emplea
en la coloracin de flagelos y espiroquetas.

Objetivos

Objetivo General:
Realizar observaciones e identificar las bacterias procedentes de distintas
muestras naturales (vinagre y yogurt), utilizando tcnicas de coloracin para la
distincin de estas y el grupo al cual pertenecen.

Objetivos Especficos:
c) Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos
de agrupaciones que existen.
d) Practicar con el microscopio ptico al mximo aumento (100X) y fijar con
mayor precisin su forma.
Procedimiento
a) Extender: Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogurt con
una pequea gota de agua.
b) Flamear: pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del
mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir.
c) Teir: primer colorante cristal de violeta y se deja durante 1 minuto y lavar
con agua destilada.
d) Adicionar: lugol que acta como mordiente esperar 1 minuto y lavar
nuevamente con agua destilada.
e) Decolorar: con alcohol cetona y lavamos la muestra.
f) Posterior: agregar safranina y luego lavar.
g) Secar: A temperatura ambiente.
h) Observar: Se aade aceite de inmersin a la muestra y se observa con el
objetivo 100.

Tincin de Gram
Elaborada por Hans Christian Gram en 1884, es la ms empleada en
bacteriologa. Permite diferenciar las bacterias incluso cuando tienen igual
forma y tamao, por esta razn es una tincin diferencial. Las etapas a
seguir se detallan en la Tabla 1. Aunque no totalmente aclarada, la
propiedad de la grampositividad depende de la naturaleza y composicin
qumica de la pared o parte de ella. Se han propuesto varias teoras para su
explicacin, pero la ms aceptada es la que sostiene que las bacterias
gramnegativas son ms permeables al alcohol debido a su alto contenido
en lpidos. Cuando la bacteria se tie con el complejo colorante bsico-
mordiente, ste queda atrapado en las bacterias grampositivas y no puede
ser arrastrado por el decolorante a causa de la naturaleza fsico-qumica de
su pared. Por el contrario, en las gramnegativas es arrastrado debido a su
alto contenido lipdico.

Tabla 1 Etapas en la tincin de Gram

PASOS GRAMPOSITIVAS GRAMNEGATIVAS

Colorante Violeta Violeta

principal: cristal violeta

Mordiente: Lugol Violeta Violeta

 Decolorante: Violeta Transparente

alcohol-cetona

Colorante de contraste: Violeta Rojo

Safranina

BACTERIAS DEL YOGURT

El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A

escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de
una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco
productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy
acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas
bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos,
cocos en cadenas arrosariadas).

BACTERIAS DEL VINAGRE

El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de la
fermentacin espontnea del vino o de bebidas alcohlicas de baja graduacin. La
acetificacin del vino es producida por bacterias aerbicas del cido actico,
principalmente Acetobacter aceti, aunque tambin Gluconobacter. Se trata de
bacilos rectos con flagelos polares.

Las tinciones pueden ser:

Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las
clulas tienen una composicin qumica diferente a la de su entorno, de modo que
ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tie las
clulas (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de clulas
tienen distinta composicin qumica, y por lo tanto reaccionan de forma diferente
frente a una tincin, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes
grupos, segn su capacidad de tincin. En este apartado estn dos tinciones de
importancia taxonmica y mdica: la tincin de Gram y la de cido-alcohol
resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan ms de un colorante.
 a) Azul de metileno (Tincin positiva). Permite teir el interior celular.
Tie microorganismos procariticos (vivos o muertos). Los eucariticos slo
se tien si estn muertos. Algunas estructuras, como los corpsculos
metacromticos, se tien ms intensamente con este colorante que el resto
de la clula.
b) Nigrosina (Tincin negativa). Se trata de un colorante aninico, que no
penetra en el interior celular. Proporciona una visin de la forma y el tamao
celulares al observarse los microorganismos brillantes sobre un fondo
oscuro.

Cmo se ven las bacterias tras realizar una tincin de Gram?

A travs de la tincin de Gram pueden valorarse la afinidad tintorial, forma y
agrupaciones de las bacterias.
-Afinidad tintorial. Permite dividir a las bacterias en 1) grampositivas (violetas)
que retienen el colorante principal tras la decoloracin con alcohol o alcohol-
acetona y 2) gramnegativas (rojas) que pierden el colorante principal tras la
decoloracin por lo que es necesario aplicar un colorante de contraste para
visualizarlas. Esta diferencia de coloracin est basada en la diferencia estructural
de la pared. En las grampositivas el colorante se fija fuertemente al peptidoglicano
que lo "retiene" e impide que "salga" con el decolorante. En las gramnegativas el
colorante es retenido con menos fuerza al ser ms delgada la capa de
peptidoglicano. Adems la mayor cantidad de lpidos presentes hace que el
colorante se elimine al solubiliarse los lpidos en el alcohol.
- Pueden tener diferentes formas:
- esfricas: cocos (Streptococcus spp., Staphylococcus spp., etc)
- cilndricas: bacilos (enterobacterias, Pseudomonasspp., etc...)
- Pueden aparecer aisladas o asociarse en parejas
-[diplococcos: (Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae)],
Cadenas:
-(estreptococcos), tetradas, sarcinas
Racimos:
-(estafilococos), "letras chinas" (corinebacterias), etc.
Bibliografa:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp6.pdf
https://es.scribd.com/doc/51627228/PRACTICA-3-La-Coloracion-de-Gram
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/D
iag_directo.html
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.com.co/p/observacion-de-bacterias.html