hongos de origen marino-: la diversidad de enzimas y aplicaciones

biotecnolgicas

El ocano es considerado como un gran reservorio de la biodiversidad. Las

comunidades microbianas en ambientes marinos son ecolgicamente relevantes como
intermediarios de la energa, y juegan un papel importante en los ciclos de
regeneracin de nutrientes como descomponedores de materia orgnica muerta y en
descomposicin. En este sentido, los hongos de origen marino pueden ser
considerados como una fuente de enzimas de inters industrial y / o ambiental. cepas
fngicas aisladas a partir de diferentes sustratos, tales como invertebrados, madera en
descomposicin, agua de mar, los sedimentos, y manglar detritus, se han informado de
que los productores de enzimas hidrolticas y / o oxidantes, con alginato liasa, amilasa,
celulasa, quitinasa, glucosidasa, inulinasa, queratinasa, ligninasa, siendo lipasa,
nucleasa, fitasa, proteasa, xilanasa y entre las enzimas producidas por los hongos de
origen marino. Estas enzimas presentes de temperatura y pH ptimos que van desde
35 hasta 70 C, y 3,0 a 11,0, respectivamente. Produccin de alto nivel en
biorreactores se lleva a cabo principalmente mediante fermentacin en estado
sumergido. Ciertas cepas de hongos de origen marino con las enzimas presentes
alcalina y las caractersticas de actividad fra, y la salinidad se considera una condicin
importante en los procesos de seleccin y produccin. La capacidad de adaptacin de
los hongos de origen marino a las condiciones ocenicas puede ser considerado como
un punto de atraccin en el campo de la biotecnologa marina hongos. En esta revisin,
nos centramos en los avances en el descubrimiento de las enzimas de los hongos de
origen marino y su importancia biotecnolgica.

Introduccin

Comunidades marinas microbianas (bacterias, hongos, algas, plancton, y virus) se

consideran componentes ecolgicos importantes en los ambientes marinos debido a su

desempeo en los procesos biogeoqumicos ( Sowell et al., 2008 ). Hongos marinos han

sido clasificados como obligar o facultativa: obligar a los hongos marinos son las que

crecen y esporular exclusivamente en un hbitat marino o del estuario, mientras que

los hongos marinos facultativos son los de agua dulce o de origen terrestre que son
capaces de crecer (y posiblemente esporular) en marina ambientes ( KOHLMEYER y

Volkmann-KOHLMEYER, 2003 ; Li y Wang, 2009 ). Como una clasificacin ms general

de estos organismos, el trmino "hongos de origen marino" se utiliza a menudo porque

la mayora de los hongos aislados de muestras marinas no estn clasificados como

demostrablemente obligar o microorganismos marinos facultativos ( Osterhage, 2001 ).

Hay muchos factores que pueden influir en la actividad, abundancia y distribucin de

los hongos en el medio marino. La aparicin de los hongos marinos se ha informado en

diferentes sustratos (por ejemplo, esponjas, algas, madera, tunicados, sedimentos,

moluscos, corales, plantas, peces), y la ecologa y la filogenia de este grupo se

resumen en Jones (2000) , Jones et al. (2009 , 2011 ), Jones y Pang (2012) y Richards et

al. (2012) . Una gran diversidad de hongos se ha recuperado de largo de las costas,

tales como manglares, arena, playa, ro, y hbitats estuarinos, lo que sugiere que las

influencias ambientales como inundaciones y vientos llevan hongos terrestres hacia los

ambientes marinos. Por lo tanto, los hongos de origen marino a menudo exhiben

rutinariamente caractersticas morfolgicas similares a sus contrapartes terrestres

( Mejanelle et al., 2000 ; Morrison-Gardiner, 2002 ).

Una amplia gama de actividades se ha identificado a partir de medio ambiente marino,

incluyendo antibacterianos, antidiabtico, antifngicos, anti-inflamatorio,

antiprotozoarios, antituberculosis, antiviral, antitumoral, y actividades citotxicas,

muchos de los cuales se puede atribuir a enzimas especficas ( Mayer et al.,

2013 ). Aunque algunos informes relacionados con la produccin de enzimas por los

hongos de origen marino aparecieron en la dcada de 1980, los estudios sobre este

tema comenzaron a publicarse con mayor frecuencia despus de 1999-2000

( Velmurugan y Lee, 2012 ). Salinidad, alta presin, baja temperatura, condiciones

oligotrficas, pH extremos, ampliamente que van contenido de minerales en el agua de

mar, y las condiciones especiales de iluminacin contribuyen a las diferencias entre las

enzimas generadas por microorganismos marinos y enzimas homlogas de

microorganismos terrestres ( Booth y Kenkel, 1986 ; Jones 2000 ; Gomes et al., 2008 ; .
Madhu et al, 2009 ; . Pang et al, 2011 ; Intriago, 2012 ; . Passarini et al, 2013 ; . Rama

et al, 2014 ).

Debido a su inmensa diversidad gentica y bioqumica, los microorganismos marinos

son vistos como una nueva fuente prometedora de enzimas con potenciales

aplicaciones tecnolgicas ( Debashish et al., 2005 ; Zhang y Kim, 2012 ). El mercado de

las enzimas de hongos marinos se divide en cuatro segmentos: (i) enzimas tcnicas,

destinados principalmente para la limpieza, textil, cuero, los biocombustibles, la pulpa

y la industria del papel; (ii) enzimas para alimentos y bebidas; (iii) enzimas para

alimentacin animal; (iv) enzimas relacionadas con las aplicaciones ambientales; y (v)

enzimas relacionadas con aplicaciones farmacuticas y cosmticas.

Los avances en el descubrimiento de las enzimas de los hongos de origen marino y su

importancia biotecnolgica se discuten a continuacin.

La produccin de enzimas por hongos Derivado-Marine

Acceso a cepas fngicas Derivados-Marine

Enfoques dependiente de la cultura han servido de las principales tcnicas utilizadas

para obtener enzimas de hongos para aplicaciones biotecnolgicas. Sin embargo, se

espera que en un futuro prximo, las aplicaciones moleculares, tales como los basados

en el uso de ADN recombinante, se pueden aplicar de forma rutinaria para la expresin

de la enzima marino directamente de bibliotecas metagenmicas. Tales tcnicas

podran permitir el acceso a las enzimas producidas por las comunidades microbianas

que no son cultivables en el laboratorio y que permiten el descubrimiento de nuevos

compuestos que pueden ser utilizados en la biotecnologa, como se comenta por Voget

et al. (2003) y Singh (2010) .

El proceso de aislamiento de hongos comienza con el muestreo sustrato. Kjer et

al. (2010) informaron de metodologas comunes para la recogida de muestras y

discutieron las condiciones especiales para el almacenamiento de muestras de tejido

de animales y algas, y de la hoja de manglar. Esterilizacin de la superficie de la

muestra puede ser realizada por el lavado repetido con agua de mar esterilizada o

agua de mar artificial (ASW). En el estudio de Menezes et al. (2010) , muestras de

invertebrados marinos se esterilizaron primero con cloruro de mercurio (en etanol) y

despus se lavaron dos veces con agua de mar esterilizada. Por el contrario, Passarini

et al. (2013) solamente se lav las muestras con agua de mar esterilizada, que

muestra una mejora en la tasa de recuperacin de hongos. Los resultados de estos

estudios sugieren que el cloruro de mercurio puede llegar a los tejidos internos y matar

a algunas clulas microbianas. Despus de esterilizacin de la superficie, las muestras

se pueden inocular directamente en medios de cultivo de agar en placas de piezas (1

cm 3
) del sustrato o el uso de la tcnica de vertido de placa despus de la trituracin

de sustrato y de dilucin en serie.

Diferentes condiciones de laboratorio se aplican para la recuperacin de cepas de

hongos a partir de sustratos marinos. La mayor diversidad se puede recuperar usando

medios pobres y ricos, y temperatura diferente, pH y condiciones de oxgeno. La

salinidad es una condicin importante y puede lograrse usando agua de mar

esterilizada o ASW. Los medios de cultivo se encuentran tpicamente en la literatura

para el crecimiento de hongos de origen marino son los siguientes: glucosa Agar,

Sabouraud Agar, Boyd, y Kohlmeyer Agar (B & K; Kohlmeyer y Kohlmeyer, 1979 ),

peptona y extracto de levadura Dextrosa Agar, Marine Agar, Potato agar de dextrosa,

agar malta, harina de maz Agar, y la avena agar.

Kjer et al. (2010) describe un protocolo detallado para el aislamiento, purificacin y

caracterizacin de los hongos de origen marino endfitos, y Sponga et

al. (1999) discutieron el aislamiento de hongos a partir de sedimentos marinos y

esponjas. Hallmann et al. (2006) , Abdel-Monem et al. (2013) , y Sette y Bonugli-Santos

(2013) tambin mencionan el uso de determinados nutrientes o compuestos con

determinados niveles de toxicidad para la seleccin de los hongos de crecimiento

lento. Para el aislamiento de levaduras, los mtodos alternativos han sido reportados

por Brauers et al. (2000) y Schulz et al. (2008) , y los mtodos de enriquecimiento

fueron aplicados por Dhevagi y Poorani (2006) y Mohan et al. (2013) para el
aislamiento de actinobacteria marino. Sin embargo, hasta donde sabemos, no existen

reportes en la literatura disponible relacionados con las estrategias de enriquecimiento

para el aislamiento de hongos a partir de sustratos marinos. Informacin adicional

relacionada con el aislamiento de hongos de origen marino se puede encontrar

en Vrijmoed (2000) y Nakagiri (2012) .

Despus del aislamiento, cepas de hongos se purifican y conservado, aunque no existe

un mtodo universal para la conservacin microbiana debido a que la respuesta a los

diferentes mtodos vara entre grupos taxonmicos e incluso entre cepas de la misma

especie. La Federacin Mundial de Colecciones de Cultivos Directrices ( WFCC de

2010 ), orientaciones para el funcionamiento de los Centros de Investigaciones

Biolgicas ( OCDE, 2007 ), y la Gua para la Operacin de las culturas Colecciones de la

Sociedad Brasilea de Microbiologa ( Sette et al., 2007 ) lista una serie de directrices

relacionadas con el mantenimiento y conservacin del material microbiolgico. Algunos

factores deben ser considerados al momento de elegir el mtodo ms apropiado de

conservacin: (i) el perodo de almacenamiento; (ii) la viabilidad continuada de las

propiedades de linaje; y (iii) la importancia de la coleccin con respecto a la

biodiversidad y potencial biotecnolgico. El uso de al menos dos mtodos de

conservacin se enfatiza en todas las directrices antes citadas; estas directrices

tambin mencionan temas relacionados con la bioseguridad y seguridad biolgica.

Los mtodos de conservacin recomendadas y las formas de distribucin de los hongos

filamentosos y levaduras se resumen en el estudio reportado por Sette et al. (2013) y

se enumeran en la Tabla 1 .

Varios estudios han explorado los metabolitos de hongos de origen marino utilizando

un enfoque dependiente de la cultura ( Bugni e Irlanda, 2004 ). En este sentido, se

espera que un gran nmero de aislados puede ser conservado en las colecciones de

cultivos de diferentes instituciones de todo el mundo, lo que representa una fuente

potencial de recursos genticos microbianos para aplicaciones

biotecnolgicas. Segn Sette et al. (2013) , los programas de investigacin deben ser
puestos en su lugar como parte de las actividades de recogida de cultivos, segn lo

recomendado por WFCC (2010) Directrices, ya que no slo ayuda a atraer personal de

alta calidad, pero tambin se puede hacer una importante contribucin al conocimiento

de la grupos de organismos mantienen en estas colecciones. Adems, estos programas

aseguran que el personal de mantenerse al tanto de los acontecimientos actuales y

son conscientes de las necesidades de la comunidad de usuarios.

Es importante mencionar que, independientemente de la manera en que se obtuvieron

los recursos genticos microbianos (dependiente de la cultura o enfoques

independiente del cultivo), el acceso (uso) de la biodiversidad microbiana debe seguir

las normas nacionales e internacionales, incluidas las establecidas por el Convenio

sobre la Diversidad Biolgica ( CDB, 2011 ), especialmente el Protocolo de Nagoya

sobre Acceso y Participacin en los Beneficios - ABS.

La deteccin y condiciones de cultivo

No hay un nico mtodo para la deteccin de nuevas enzimas, pero se debe dar

preferencia a la utilizacin de bajo costo, rpida y tcnicas sensibles. Cuando un gran

nmero de microorganismos se va a evaluar, cribado de alto rendimiento (HTS) o

mtodos de control de rendimiento medio (MTS) deben ser considerados en la etapa de

prospeccin ( Sette et al., 2013 ). En una definicin algo arbitraria, 'rendimiento medio

"indica varias determinaciones 100 por da, mientras que el" alto rendimiento "se

considera actualmente que implican la evaluacin de 1.000-10.000 muestras por da

( REETZ, 2006 ).

Screening menudo puede comenzar en la etapa de aislamiento con la adicin de

fuentes especficas de nutrientes (por ejemplo, hidrocarburos poliaromticos - PAH,

pesticidas, antimicrobianos, inductores) en el medio de cultivo para seleccionar

preferentemente el microorganismo capaz de producir la enzima diana ( Da Silva et

al. , 2004 ). Los mtodos colorimtricos en placas de Petri han sido ampliamente

utilizados para la seleccin de enzimas microbianas. En estos mtodos, la enzima diana

convierte un sustrato incoloro en un color de uno o cambia el color medio, tal como se
utiliza para el cribado de la asparaginasa y la glutaminasa ( Thenmozhi et al.,

2011 ; Patil et al, 2012. ; Dhale y Mohan-Kumari de 2014 ), ligninasas ( . Verma et al,

2010 ; . Chen et al, 2011 ), lipasas ( . Duarte et al, 2013 ), xilanasas y celulasas ( Azad

et al, 2013. ). Anlisis de halos, formados por degradacin del sustrato alrededor de la

colonia, se puede aplicar, por ejemplo, para la deteccin de la proteasa ( Zhang y Kim,

2010 ).

Durante la proyeccin y produccin de enzimas a partir de muestras marinas, la

presencia de la sal puede ser crucial ya que se presume que el metabolismo de hongos

de origen marino est adaptada a la salinidad del ocano ( D'Souza et al., 2006 ; . Chen

et al, 2011 ) . Chen et al. (2011) y Bonugli-Santos et al. (2012) lograron mejores

resultados en la seleccin de enzimas que degradan la lignina cuando se aplicaron las

condiciones salinas (ASW). Adems, Arfi et al. (2013) informaron de la secrecin de

enzimas lignocelulolticas adaptados al agua salada desde el mangle

hongo Pestalotiopsis sp. La Tabla 2 enumera una seleccin de las enzimas producidas

por hongos de origen marino, las condiciones de crecimiento, y sus

caractersticas; para todas las enzimas citadas, la salinidad fue considerado en las

condiciones de cultivo.

La produccin de hongos de las enzimas depende de su fisiologa, as como de la

composicin del medio de cultivo ( Baldrian y Gabriel, 2003 ). Carbono y nitrgeno

fuentes juegan un papel importante en la produccin de enzimas; sus efectos se han

investigado en numerosos hongos de ambientes terrestres y tambin son relevantes

para los hongos de origen marino. Sustratos complejos, tales como almidn, casena,

pectina, extracto de malta, salvado de trigo, aceite de oliva, xilano, y bagazo de caa

de azcar, se utilizan para la produccin de enzimas por los hongos de origen marino

(Tabla 2 ). Las enzimas enumeradas en la Tabla 2 fueron producidas por cepas de

hongos recuperados de diferentes sustratos, incluyendo invertebrados marinos

(esponjas y cnidarios), sedimentos, algas, madera en descomposicin, y detritus

hoja. La temperatura ptima y el pH de estas enzimas rangos de 37 a 70 C y 3-9,

respectivamente.
Informacin adicional sobre la seleccin y produccin de enzimas de hongos marinos se

pueden encontrar en Hyde y puntero (2000) , y Velmurugan y Lee (2012) .

Debido a las condiciones de cultivo influyen claramente en la produccin de enzimas,

la mejor manera de mejorar su produccin es el uso del diseo experimental y el

anlisis estadstico. Esta metodologa se ha aplicado con xito a los hongos terrestres

( Levin et al., 2008 ) y proporciona un enfoque eficiente para determinar las mejores

condiciones de cultivo para maximizar la produccin de enzimas, que a su vez puede

conducir a la optimizacin de procesos. La implementacin del diseo central

compuesto metodologa estadstica, Bonugli-Santos et al. (2010a) lleg a la conclusin

de que la produccin de manganeso peroxidasa de origen marino Mucor

racemosus CBMAI 847 es ms probable en relacin a la concentracin de sal. D'Souza-

Ticlo et al. (2009) demostraron la importancia de la utilizacin de la metodologa de

superficie de respuesta en la evaluacin de los efectos y las interacciones de los

componentes del medio sobre la produccin de lacasa por un hongo de origen

marino. En este estudio, las concentraciones bajas de NH 4 Se encontraron Cl y altas

concentraciones de glucosa para favorecer la produccin de biomasa.

Bioprocesos

Despus de que las condiciones de cultivo ptimas a pequea escala se definen

(matraces con agitacin), los estudios relacionados con la produccin de enzimas en

una escala mayor (biorreactores) y el escalado, que se define por Bliem y Katinger

(1988) como el predecible (ingeniera) aumentar la capacidad de produccin, se debe

realizar. Consumo de sustrato, la formacin del producto, y la biomasa celular son

factores importantes que deben tenerse en cuenta, y cuantificadas, para los estudios

apropiados de escalado. Cepas de hongos de origen marino-adaptadas a un medio

lquido pueden atenuar algunos de los problemas encontrados con las cepas terrestres,

tales como la medicin de la biomasa. Adems, las cepas adaptadas al agua pueden

mostrar un aumento de la produccin de enzimas ( Verbist et al., 2000 ; Masuma et al.,

2001 ).
La produccin a gran escala (por ejemplo, en biorreactores) de glucoamilasa,

superxido dismutasa, peroxidasa de lignina, quitinasa, proteasa, y la glutaminasa por

cepas marinas se informa en la literatura ( Sarkar et al., 2010 ). Estas enzimas se

producen en biorreactores en gran medida a travs de la fermentacin en estado

sumergido, y se enumeran las condiciones relacionadas con el biorreactor de

produccin en la Tabla 3 .

Trincone (2011) describe una visin general de las estrategias adoptadas bioprocesos

para el cultivo de organismos de origen marino para la produccin de enzimas,

incluyendo la proteasa, quitinasa, agarasa, y peroxidasa. Para una mayor discusin

sobre la produccin de enzimas marinas y nuevas perspectivas, vase Kristensen et

al. (2008) y Trincone (2010) .

Para muchas aplicaciones industriales, las enzimas deben ser concentrado, separado, y

/ o purificarse a partir del medio, y las estrategias de purificacin empleadas deben ser

de bajo costo, tener un alto rendimiento y selectividad, ser susceptibles de operaciones

a gran escala y debe tener el potencial de la recuperacin continua de los productos

( Gupta et al., 2004 ; Singh y Mukhopadhyay 2012 ). En algunos casos, las

metodologas de purificacin deben adaptarse para mantener la integridad de las

enzimas ya que la actividad cataltica depende de la estructura conformacional. Varias

estrategias se pueden aplicar para obtener enzimas purificadas. Sin embargo, los

estudios especficos para el establecimiento de estrategias de purificacin enzimtica

marinos son escasos. Algunos informes de aislamiento de la enzima fngica de origen

marino y purificacin se presentan en la Tabla 4 . El grado de purificacin vara

significativamente en funcin del nmero y orden de las etapas, y el proceso de

purificacin en la mayora de los casos se basa en pasos secuenciales, con baja y alta

resolucin. En general, se emplean mtodos de baja especificidad, tales como la

concentracin, seguido de cromatografa. Procesos de purificacin aplicados a las

enzimas a partir de cepas de hongos marinos (Tabla 4 ) pueden llegar a un rendimiento

de recuperacin de 66% y un factor de purificacin de hasta 647 veces. En la mayora

de los casos, aumentando el nmero de pasos conduce a una mayor enriquecimiento,

aunque se observa una disminucin severa en el rendimiento.

Una vez que se obtiene con xito la enzima purificada, la informacin relevante se

puede lograr a travs de la caracterizacin fsico-qumica y bioqumica. Estas

caractersticas son esenciales para guiar una eleccin efectiva de la estrategia de

purificacin a gran escala y la realizacin del potencial de aplicacin de la enzima. Es

de destacar que no hay procesos industriales para la purificacin de la enzima de

origen marino se encontraron en la literatura disponible. Los datos de los estudios

citados en la Tabla 4 muestran que la temperatura y pH ptimos de las enzimas

purificadas producidas por cepas de hongos de origen marino vari desde 35 hasta 75

C y 3,0 a 11,0, respectivamente.

La gran mayora de las enzimas citadas en las Tablas 3 y 4 se obtuvieron de

ascomicetos hongos, con un pequeo porcentaje producido por representantes de

basidiomicetos. El predominio de los ascomicetos en los hbitats acuticos se ha

discutido en la literatura, con la principal hiptesis para explicar este predominio es la

presencia de esporas de adaptacin (apndices) para el ecosistema acutico ( Hyde y

Jones, 1989 ; Prasannarai y Sridhar, 2001 ; Vijaykrishna et al., 2006 ). Este grupo

representa los hongos que son fcilmente cultivables y pueden recuperarse fcilmente

cuando se aplican tcnicas de cultivo dependiente ( Baker et al., 2009 ). Por el

contrario, los basidiomicetos hongos rara vez se aislaron de muestras marinas

( Menezes et al., 2010 ).

Las diferentes especies de los gneros Aspergillus y Penicillium se citan como

productores de origen marino de enzimas. Estos hongos son tolerantes a la sal y se han

reportado en la literatura como hongos invertebrados que habitan ( Holler et al.,

2000 ; . Da Silva et al, 2008 ; . Baker et al, 2009 ; . Menezes et al,

2010 ). El Aspergillus sp. y Penicillium sp. citados en las Tablas 3 y 4 fueron

recuperados de invertebrados marinos, agua de mar, sedimentos profundos, y los

detritus de manglar.
Potencial biotecnolgico

En cuanto al papel ecolgico de los hongos de origen marino, los estudios han

demostrado que sus actividades principales son, en efecto asociados a la

descomposicin de la materia orgnica. Dentro de este contexto, una gran diversidad

de enzimas hidrolticas y oxidativas, que pueden ser utilizados en procesos

biotecnolgicos, han sido reportados para diferentes especies de hongos marinos

(Tablas 2 - 4 ).

De acuerdo con Velmurugan y Lee (2012) , los hongos de origen marino son capaces de

producir enzimas con nuevas caractersticas fisiolgicas, como la tolerancia elevada de

sal, termoestabilidad, barophilicity, y fro-actividad. Sin embargo, pocos estudios hasta

la fecha han demostrado que las enzimas de las cepas de hongos marinos son

diferentes de los producidos por sus homlogos terrestres ( Chi et al., 2009 ). Xilanasas

alcalinas y lacasas tolerantes a metales termoestables son producidas por cepas de

origen marino de Aspergillus niger y unicolor Cerrena ( Raghukumar et al.,

2004b ; D'Souza-Ticlo et al., 2009 ). Endoglucanasas activos de baja temperatura

fueron obtenidos por varias cepas de hongos a partir de la esponja marina Haliclona

Simulans en Irlanda ( Baker et al., 2010 ), y la xilanasa fro-activa se producen por un

origen marino Cladosporium sp. ( Del-Cid et al, 2014. Y por una cepa de hongos

marinos recombinante) (un hongo psychrotrophic del Mar Amarillo; Hou et al.,

2006 ). Quitinasas activas a bajas temperaturas (5 y 10 C) tambin fueron reportados

por Fenice et al. (1998) y Velmurugan et al. (2011) . Se inform de lipasas, proteasas y

celulasas que se produce en los medios slidos a 15 C por cepas de levadura marinos

antrticos aisladas de muestras marinas (por ejemplo, diferentes invertebrados

marinos y sedimentos; Duarte et al, 2013. ).

Enzimas microbianas-activa fros han atrado una atencin creciente en los ltimos

aos ( Wang et al., 2012 ). Adems de las propiedades relacionadas con sus

caractersticas estructurales, una de las principales ventajas relacionadas con el uso de

estas enzimas es los costes de los gastos y de procesamiento de disminucin de

energa asociados con etapas de calentamiento industriales ( Duarte et al.,

2013 ). Hongos tolerantes a la sal y sus enzimas tolerantes a la sal (enzimas

principalmente degradan la lignina,) se han utilizado para la biorremediacin de

contaminantes ambientales ( Passarini et al., 2011 ), tal como se describe en la seccin

"Aplicaciones ambientales." El descubrimiento de las enzimas barotolerant sigue

siendo en la fase inicial ( Velmurugan y Lee, 2012 ).

La capacidad potencial de los hongos de origen marino para crecer en sustratos

relativamente ms sencillas y econmicas, y producen enzimas con diferentes

caractersticas fisiolgicas puede colocarlos en la vanguardia de las aplicaciones

comerciales actuales.

Aplicaciones medioambientales

La decoloracin de textiles E uents ffl sintticos Tintes y

Colorantes residuales procedentes de diversas fuentes introducen contaminantes

orgnicos en los recursos naturales de agua o sistemas de tratamiento de aguas

residuales ( Zaharia y Suteu 2012 ). Estos colorantes pertenecen a clases de

compuestos con azo, antraquinona, trifenilmetano, y estructuras polimricas

heterocclicas. Segn Diwaniyan et al. (2010) , los colorantes azoicos son la clase ms

grande y el ms verstil de los colorantes y representan ms de la mitad de los tintes

sintticos producidos anualmente.

En los ecosistemas acuticos, colorantes pueden interferir con la fotosntesis y la

difusin de gases y son de preocupacin para la salud humana ( Baughman y Weber,

1994 ; Ciullini et al., 2008 ). Adems, estos compuestos a menudo son recalcitrantes, y

su eliminacin de aguas residuales es difcil y caro ( Hao et al., 2000 ). En este sentido,

un considerable esfuerzo se ha centrado en el desarrollo de tecnologas eficientes y

rentables para el tratamiento de aguas residuales colorantes, incluyendo la

biorremediacin, un proceso en el cual los agentes biolgicos se utilizan para degradar

los contaminantes ambientales. La biorremediacin se basa en la exploracin de las

poblaciones microbianas que pueden modificar o descomponer ciertos contaminantes

( Peixoto et al., 2008 ). Los microorganismos utilizados en la remediacin se pueden

considerar como una alternativa biotecnolgica atractivo para lograr posible la

mineralizacin del contaminante y su transformacin en productos menos txicos con

una mayor solubilidad en agua, que puede ser degradado por la accin de otros

microorganismos ( Cerniglia, 1997 ; Cerniglia y Sutherland, 2001 ).

Varios hongos son conocidos por ser capaces de degradar los contaminantes

persistentes ( Haritash y Kaushik, 2009 ), incluidos los colorantes textiles. Debido a que

un gran nmero de procesos textiles puede generar uents ffl e tener condiciones

salinas y alcalinas, hongos de ambientes marinos demuestran una ventaja biolgica

importante para e ffl uente decoloracin / degradacin debido a que estos hongos se

adaptan a alta concentracin de sal y pH. El mecanismo de tinte decoloracin por

clulas fngicas incluye reacciones oxidativas, que pueden generar derivados no

txicos ( Ciullini et al., 2008 ). Entre las enzimas extracelulares producidas por hongos

filamentosos, el sistema ligninoltico es de gran relevancia en la remediacin ambiental

( Arun et al., 2008 ).

Raghukumar et al. (1996 , 2004a , 2008 ) y D'Souza et al. (2006) mostraron

decoloracin significativa de uents ffl textil correos y colorantes sintticos (por ejemplo,

rojo Congo, verde brillante, y RBBR) por hongos de origen marino. Otros grupos de

investigacin se han centrado en el uso de hongos filamentosos de origen marino para

la decoloracin del tinte sinttico ( Junghanns et al., 2008 ; . Bonugli-Santos et al,

2012 ; . Chen et al, 2014 ). En el estudio realizado por Chen et al. (2014) , un sistema

de inmovilizacin de clulas enteras (usando los hongos de origen

marino Pestalotiopsis sp. J63 y Penicillium janthinellum P1) mostr la capacidad para

decolorar colorante Azure B.

Los nutrientes y los parmetros fsicos tienen un efecto significativo en la decoloracin

del tinte ( Singh et al., 2013 ), y el mecanismo que implica la lacasa pueden diferir

dependiendo de la estructura de colorante ( D'Souza et al., 2006 ). Segn Verma et

al. (2010) , los hongos de origen marino fueron capaces de decolorar dos correos uents
ffl textiles: TEA (que contienen un colorante azoico con un pH de 8,9) y TEB (que

contiene una mezcla de ocho colorantes reactivos con un pH de 2,5). Los ascomicetos y

basidiomicetos estudiados presentan 30 a 60% de decoloracin TEA y 33 a 80% de

decoloracin TEB, respectivamente, bajo condiciones salinas. Los anlisis adicionales

de toxicidad (medida por CL50 valores contra Artemia larvas) y un anlisis de

espectrometra de masas de uents ffl E despus de tratamiento de hongos revel la

degradacin de la mayora de los componentes e ffl uente. Cuanto mejor sea la

capacidad de basidiomicetos de origen marino para decolorar y degradar colorantes

textiles corrobora los resultados de muchos estudios citados en la literatura utilizando

los basidiomicetos terrestres hongos. De hecho, basidiomicetos son considerados los

mejores productores de enzimas ligninolticos, principalmente aquellos clasificados

como hongos de la pudricin blanca.

Basidiomicetos esponja derivados mostraron la capacidad para decolorar tintes textiles

en medio slido bajo tanto salinos y no salinos condiciones ( Bonugli-Santos et al.,

2012 ). Adems, completa decoloracin RBBR se alcanz en medio lquido, con la mejor

decoloracin obtenida utilizando Tinctoporellus sp. CBMAI 1061 despus de 3 das de

incubacin a dos concentraciones de RBBR (500 y 1000 mg / L). Tambin se inform de

RBBR es degradada por hongos filamentosos aislados de coral escleractinio y

zoantdeos recogido a lo largo de la costa norte de Sao Paulo, Brasil. En otro

estudio, Penicillium citrinum CBMAI 853 fue el hongo ms eficiente, decolorante RBBR

(100%) despus de 12 das, seguido por A. sulphureus CBMAI 849 (95%), Cladosporium

cladosporioides CBMAI 857 (93%) y Trichoderma sp. CBMAI 852 (89%; . Da Silva et al,

2008 ).

Segn Raghukumar et al. (2004a) , los hongos de origen marino son a menudo ms

eficaz que los hongos terrestres en el tratamiento de diversos colores e uents ffl porque

estn mejor adaptados para llevar a cabo bajo condiciones extremas (alta salinidad).
La degradacin de los hidrocarburos aromticos policclicos (HAP)

Hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs) estn ampliamente distribuidos en el

medio ambiente y pueden persistir durante largos perodos de tiempo ( Shuttleworth y

Cerniglia, 1995 ). Molculas de PHA se componen de dos o ms anillos condensados de

benceno y se forman durante la combustin de molculas orgnicas y su posterior

recombinacin ( Haritash y Kaushik, 2009 ). Los bosques, filtraciones de petrleo,

erupciones volcnicas y exudados de rboles constituyen algunas fuentes naturales de

los HAP. Las fuentes antropognicas de HAP incluyen la quema de combustibles fsiles,

alquitrn de hulla, madera, basura, basura, residuos de aceite lubricante, y los filtros

de aceite, la incineracin de residuos slidos municipales y los derrames de petrleo y

de descarga ( Kaushik y Haritash de 2006 ). Ciertos PHAs se consideran txicos,

mutagnicos y cancergenos ( Peakall et al., 1982 ).

La base de los diversos mecanismos conocidos del metabolismo aerbico de PAHs

implica la oxidacin del anillo aromtico ( Bamforth y Singleton, 2005 ). El sistema

ligninoltico y el sistema de monooxigenasa de citocromo P-450 pueden estar

implicados en la degradacin de PAH por hongos filamentosos ( Haritash y Kaushik,

2009 ).

Passarini et al. (2011) informaron de que el hongo A. sclerotiorum CBMAI 849 mostr

99,7% pireno (2 mg en 30 ml) y 76.6% de benzo [a] pireno (1 mg en 30 ml) la

degradacin despus de 8 y 16 das, respectivamente. Benzo [a] pireno agotamiento

(> 50,0%) tambin se logr por Mucor racemosus CBMAI 847. datos de HPLC-DAD-MS

mostraron que A. sclerotiorum CBMAI 849 y M. racemosus CBMAI 847 son capaces de

metabolizar pireno a pyrenylsulfate y benzo [a ] pireno de benzo [a] pyrenylsulfate, lo

que sugiere que el mecanismo de hidroxilacin es mediada por un citocromo P-450

monooxigenasa, seguido por conjugacin con iones de sulfato. En el estudio realizado

por Wu et al. (2009) , Aspergillus sp. BAP14 aislado de sedimento marino (la costa

China) mostr la capacidad de degradar benzo [a] pireno: el hongo fue capaz de

eliminar aproximadamente 30% y 60% BaP (0,010 mg / ml) despus de 3 y 12 das,

respectivamente. En otro estudio, dos hongos de origen marino no identificado (NIOCC

# 312 y # NIOCC 2a) fueron capaces de eliminar fenantreno de un medio de cultivo por

adsorcin sobre el micelio de hongos ( Raghukumar et al., 2006 ).

Teniendo en cuenta que el uso de los hongos de origen marino para la biorremediacin

de ambientes salinos contaminadas es facilitado por su tolerancia a condiciones

salinas, estos microorganismos son recursos microbianos importantes para aplicacin

biotecnolgica en la biorremediacin de ambientes de PAH-contaminado, tales como

mar y los sedimentos marinos.

Aplicaciones industriales

Diferentes enzimas producidas por los hongos de origen marino han sido reportados en

la literatura y estn relacionados con la produccin industrial de: (i) las lipasas, para el

desarrollo de cosmticos y como componentes de la medicina (enzimas digestivas) o

reactivos clnicos ( Zhang y Kim, 2010 ; Murray et al 2013. ); (ii) las proteasas, para la

produccin de digestivos y anti-inflamatorias drogas ( Zhang y Kim, 2010 ); (iii)

ligninasas, con aplicaciones biotecnolgicas en muchos sectores, incluyendo las

industrias tales como la qumica, combustible, alimentos, agricultura, papel, textil y

cosmtica ( Raghukumar et al., 1994 ; Sette y Bonugli-Santos, 2013 ); y (iv) otros

compuestos (por ejemplo, L -glutaminase, tanasa y alginasa), con posibles aplicaciones

en los sectores de alimentos / bebidas (farmacutica y Velmurugan y Lee, 2012 ).

La proporcin de las enzimas utilizadas para la alimentacin y bebidas est en

constante crecimiento, con una previsin de crecimiento superior al promedio para los

prximos aos debido a la demanda de nuevas aplicaciones en los sectores lcteos y

repostera, entre otros. Los estudios han puesto de manifiesto los avances en la

tecnologa de los alimentos y han sealado las capacidades de microorganismos

marinos en la produccin de compuestos activos, incluyendo las protenas y enzimas

( Bashir et al., 2011 ; Dewapriya y Kim, 2014 ).

Enzimas ligninolticos presentan importantes propiedades biotecnolgicas, ya que

podran ser capaces de degradar una amplia variedad de sustratos a travs de

reacciones oxidantes libres mediados por radicales. Estas enzimas tambin se pueden

considerar un gran recurso en el campo de biocombustibles, debido a la posible

resistencia y la actividad en presencia de disolventes y diferentes condiciones de

pH. Aunque no hay informes en la literatura disponible en relacin con el uso de los

hongos de origen marino o sus enzimas para la produccin de etanol (segunda

generacin), Raghukumar et al. (2004b) mostraron mineralizacin de lignina eficiente

por el hongo basidiomiceto NIOCC # 312 aislados de la descomposicin de la hierba del

mar. Adems, Intriago (2012) inform de la posibilidad de la utilizacin de

microorganismos marinos en la produccin de etanol celulsico. Es importante destacar

que los hongos clasificados como basidiomicetos son los mejores productores de

enzimas ligninolticas; Por lo tanto, esta clase de hongos debe ser considerado como el

objetivo en estudios relacionados con aplicaciones industriales y ambientales ( Chung

et al., 2000 ), incluyendo el tratamiento biolgico de sustrato lignocelulsico para la

produccin de biocombustible.

A pesar de la relevancia de las enzimas de hongos de origen marino, los datos

disponibles relativos a las solicitudes de patentes o depsitos asociados a la

biotecnologa el uso de estos hongos son insuficientes. Las patentes relacionadas con

la biotecnologa marina presentada en la base de datos de la Organizacin Mundial de

la Propiedad Intelectual (OMPI) se asocian sobre todo con las bacterias y

cianobacterias.

Para la recogida de datos, se realiz una bsqueda en cuatro bases de datos: Oficina

Europea de Patentes (EPO), Espacenet-LatPat (Amrica, Estados Unidos y Espaa),

Instituto Nacional de la Propiedad Industrial (INPI; Brasil), y bioprospeccin de Recursos

de Informacin (Universidad de las Naciones Unidas, Japn). De stos, slo OEP

proporcion resultados al utilizar las palabras clave "hongos marinos" y se encontraron

catorce patentes presentadas, pero slo once estn relacionadas con la biotecnologa

"enzimas de hongos marinos."; ninguna de las patentes registradas se relaciona con la

produccin de enzimas.
Otra bsqueda relacionada con patentes basadas en organismos marinos se realiz en

bioprospeccin de recursos de informacin (base de datos) utilizando una bsqueda

general (que se realiz slo en esta base de datos debido a su tamao ms

pequeo). Se encontr un total de 105 patentes (o solicitudes). Los resultados

mostraron solo una patente alemana relacionada con un hongo filamentoso no

identificado asociado con la esponja marina Xestospongia exigua , que se utiliza para la

sntesis de biomolculas con propiedades farmacuticas. Adems, se ha encontrado

una patente japonesa relacionada con pectinasa produccin por la

levadura Cryptococcus sp. La bsqueda revel un bajo nmero de patentes de hongos

de origen marino, con 46,6% de las patentes (o solicitudes) est relacionado con otros

microorganismos marinos, tales como bacterias y arqueas. En un estudio previo

realizado por Teixeira et al. (2010) utilizando la base de datos nacional (INPI), se

encontraron 39 patentes, con un 84% en referencia a las algas, el 9% de los animales,

un 3% a diversos microorganismos y el 3% a otros organismos (no especificado).

Entre los organismos marinos con potencial biotecnolgico, hay relativamente pocas

solicitudes de patentes y registros de hongos. Sin embargo, teniendo en cuenta la lnea

de tiempo relacionado con el campo de la micologa marino (Figura 1 ), incluyendo los

avances actuales en este campo, un aumento significativo de solicitudes de patente

debe ser observado en un futuro prximo. En 2014, nuestro grupo de investigacin

depositado una solicitud de patente en el INPI (nmero de depsito INPI BR 10 2014

008 502 5) en relacin con el proceso de produccin de la enzima lacasa por el

basidiomicetos de origen marino Peniophora sp. CBMAI 1063 (enzima lacasa y su

uso). Esta enzima es muy produce slo en condiciones salinas, que muestra claramente

la influencia del medio marino en la produccin de esta enzima.

Conclusin y perspectivas futuras

Estudios relacionados con la prospeccin de enzimas de hongos de origen marino

podran resultar en el descubrimiento de nuevas enzimas que son diferentes de sus

contrapartes terrestres y tambin aumentar nuestra comprensin de la diversidad y la

ecologa microbiana de este grupo. Teniendo en cuenta que los ecosistemas marinos se
consideran un entorno poco explorado, ya la luz de los estudios en curso relacionados

con la diversidad marina-hongos a base de dependiente de la cultura y los enfoques

independientes, es razonable esperar que los nuevos taxones de hongos recuperado de

los hbitats marinos ser reportado en el corto plazo.

condiciones marinas (por ejemplo, la salinidad, presin, temperatura y luz) contribuir a

las diferencias significativas entre las enzimas producidas por microorganismos

marinos y enzimas homlogas de sus contrapartes terrestres. Sin embargo, no se han

evaluado a fondo los estudios relacionados con la diferencia efectiva de estas

enzimas. Tales estudios soportar aplicaciones, y aumentar nuestra comprensin de la

ecologa, de los hongos de origen marino. Caracterizacin molecular, cristalografa, y la

modulacin de la enzima combinada con la evaluacin enzimologa clsica podran

ayudar a abordar cuestiones relacionadas con cataliza y funciones. Adems, debe

alentarse a los estudios relacionados con la transferencia de genes para acelerar el

desarrollo de las biotecnologas econmicamente viables asociados a la aplicacin de

los hongos de origen marino en los sectores industriales y ambientales.

Los resultados presentados en esta revisin destacan el potencial de enzimas de

hongos de origen marino para la biotecnologa. Para mejorar el acceso a los

microorganismos marinos y el uso de sus enzimas, nacional y debe ser establecido

programas internacionales, incluyendo la provisin de instalaciones para el muestreo

microbiana marina (especialmente en ambientes extremos, tales como las

profundidades del mar); cultivo; prospeccin; preservacin; y mantenimiento de las

colecciones de cultivos.

Declaracion de conflicto de interes

Los autores declaran que la investigacin se llev a cabo en ausencia de cualquier

relacin comercial o financiera que puedan interpretarse como un posible conflicto de

intereses.