Prctica 1.

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos
Espectrofotometra

Prctica 2. Espectrofotometra

A. Objetivos

Evaluar las bases de la Espectrofotometra, as como el manejo correcto del

espectrofotmetro, para aplicar esta herramienta al estudio, identificacin y
determinacin de la concentracin de biomolculas, en un fluido biolgico o en una
muestra de inters zootcnico.

B. Investigacin previa

1. Resumir mediante un cuadro sinptico las bases tericas de la espectrofotometra

mencionadas en el presente formato y en la informacin presente en el documento
alojado en la siguiente direccin:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_absorcion.pdf
2. Resumir en un esquema, las principales caractersticas estructurales y funcionales de la
hemoglobina y de la Riboflavina.
3. Investigar los tipos de alteraciones en la concentracin de hemoglobina en animales y
su significado clnico (Kaneko, 1989).
4. Predecir los resultados a obtener en las determinaciones a realizar.

C. Introduccin

La Espectrofotometra es una rama de la Qumica Analtica frecuentemente usada en

Bioqumica para analizar diversos componentes presentes en sangre, tejidos, orina y en
diversos materiales biolgicos. La Espectrofotometra permite establecer la concentracin
de una sustancia en solucin, al medir la intensidad luminosa transmitida o absorbida,
comparndola con la luz que transmite una solucin de la misma sustancia, pero de
concentracin conocida denominada patrn.
Cuando las mediciones se realizan empleando longitudes de onda en el rango visible del
espectro (400-700 nm) se habla de Espectrofotometra visible. En este caso la sustancia
a medir puede tener color por s misma y absorbe luz entre 400 a 700 nm (Ej. -
caroteno), o puede ser necesario realizar una reaccin qumica (Ej. glucosa), cuyo

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

producto de la reaccin es colorido y absorbe luz en esta zona del espectro. Otras
sustancias absorben luz en el rango del ultravioleta -debajo de 400 nm-, (protenas y
cidos nucleicos) y otras lo hacen en la zona del infrarrojo -arriba de 700 nm-. En
cualquiera de los casos, la magnitud de la absorcin de luz puede usarse como ndice de
la concentracin de la sustancia problema, pues a mayor concentracin, mayor ser la
absorcin de luz o menor la transmisin de luz (Ley de Lambert-Beer).

La absorcin de luz por una molcula en disolucin est basada en la consideracin de que
un rayo de luz est formado por fotones. Cada fotn tiene una cierta energa que vara
con la longitud de onda (E=hc/); de modo que si los fotones de la luz que atraviesan la
disolucin problema tienen la energa requerida para causar cambios en la molcula en
disolucin, habr absorcin de luz. Sin embargo, no toda la luz incidente se absorbe, pues
algo de la luz se puede transmitir. Esta propiedad en Espectrofotometra se conoce como
Transmitancia de la disolucin (T) y se define como la relacin entre la intensidad de la
luz emergente (I) de la celda conteniendo la disolucin problema y la intensidad de la luz
incidente (I0). La transmitancia se relaciona inversamente con la concentracin de la
sustancia a medir, as a mayor concentracin, menor transmitancia y viceversa.

I
T
I0
(Ec. 1)

Sin embargo, adems de la luz transmitida o absorbida por la muestra, ocurre prdida de
luz por reflexin de luz por la superficie del tubo que contiene la disolucin, por dispersin
y por absorcin por el disolvente y reactivos, por lo tanto se ha convenido en expresar la
transmitancia en trminos relativos ms bien que absolutos, por lo que se mide la
transmitancia de la disolucin problema (Ip) y la de otra disolucin denominada blanco,
(Ib) que contiene todos los elementos del problema excepto precisamente el soluto a
medir. En estas condiciones, se examinan ambas disoluciones en estados equivalentes de
longitud de onda, intensidad de luz incidente y espesor de la disolucin; por lo tanto la
ecuacin 1 (Ec.1) para la transmitancia de la disolucin problema (Tp) queda:
Ip
Tp
Ib
(Ec. 2)

La Transmitancia se expresa en porcentaje o como una fraccin decimal, as en el caso de

que Ip sea igual a Ib, la transmitancia T sera igual a 1 100%.

Como la Transmitancia y la concentracin no siguen una relacin lineal sino logartmica; la

Transmitancia se puede expresar en funcin de su logaritmo negativo, trmino que recibe
el nombre Densidad ptica (D.O.) o Absorbancia (A).

1
A D.O. log T log log 100% log %T
T
(Ecs. 3)

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

Cualquiera de las ecuaciones presentadas en (3), permite transformar un valor de

Transmitancia en su respectiva Absorbancia o viceversa; de manera que:

a) si T=100%; entonces; A=log 100 log 100=0

b) si T= 0%; entonces; A=log 100 - log 0 = 2
c) si T=70%; T= 0.7 entonces; A= - log 0.7 = 0.1549.

Obsrvese que cuando en las frmulas indicadas (3), se usa (T) (ejercicio c), se refiere a
la Transmitancia en base 1, pero cuando se usa %T, se est refiriendo al porciento de la
Transmitancia (ejercicios a y b). Obviamente, la definicin ms sencilla es la que define la
ecuacin: A= - log T, pero se debe considerar que en este caso se usa la transmitancia (T)
en base 1.

LEY DE LA ESPECTROFOTOMETRA

La Espectrofotometra est basada en la Ley de Lambert-Beer (Bohinsky, 1991), la que

establece que: "la Absorbancia (A) de una disolucin de un compuesto es directamente
proporcional a su concentracin (c), al espesor de la disolucin o longitud que debe
recorrer la luz a travs de la disolucin (b) y a la constante denominada "Coeficiente de
Absortividad molar o Coeficiente de extincin molar ( ). Esta ltima constante
( ) se define como la absorbancia de una solucin 1.0 molar del compuesto de inters,
medida a la longitud de onda elegida. Esta constante tiene unidades de dm 3 mol-1 cm-1 o
molar-1 cm-1. En el cuadro 1 se presentan algunos valores de () para varias biomolculas.

La Ley de Lambert y Beer est representada por la siguiente ecuacin (4)1:

A = bc (Ec. 4)

Como b (longitud que recorre la luz) se puede mantener constante, usando una celda o
cubeta estndar, que generalmente es de 1 cm, la Ley de Lambert-Beer se reduce a la
ecuacin:
A= c (Ec. 5)

Las ecuaciones 4 y 5 establecen que la Absorbancia es directamente proporcional a la

concentracin, de modo que al graficar Absorbancia contra la concentracin, se obtiene
una lnea recta cuya pendiente es el Coeficiente de Absortividad molar por lo que por
estas dos razones, es conveniente usar la variable Absorbancia ms que Transmitancia.

Adicionalmente, partir de la ecuacin de Lambert-Beer (Ec.4), se puede concluir que si

se conoce el valor del Coeficiente de extincin molar o Absortividad molar (), es posible
determinar la concentracin del soluto (c), sin necesidad de utilizar un patrn, ya que

1Para informacin complementaria consultar: * http://www.slideshare.net/cathycruzvazquez/espectroscopa-de-absorcin-uv-

vis-def

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

basta medir la absorbancia de la solucin y sustituirla en la ecuaciones 4 o 5, por lo tanto

si consideramos un valor de para el triptfano de 5 500 molar-1 cm-1 y una absorbancia
de la solucin problema de 0.300, al despejar c de la ecuacin (4), la concentracin
calculada para el aminocido es 5.45 x 10 -5 molar. Con el peso molecular del triptfano,
se pueden conocer los gramos del aminocido (Problemas 13 y 15).

Cuadro 1. Valores del Coeficiente de Absortividad molar ( ) para algunas biomolculas.

Biomolcula Biomolcula
(molar cm )
-1 -1 (molar-1 cm-1)
NAD (340 nm) 0 Fenilalanina (257 nm) 200

NADH (340 nm) 6 220 Adenosin monofosfato 15 400

(AMP), (260 nm)
-Caroteno (450 nm) 2 295 Guanosin monofosfato 11 700
(GMP), (260 nm)
Flavin mononucletido 11 347 Uridn monofosfato 9 900
(FMN)a (UMP), (260 nm)
Triptofano (280 nm)c 5 600 Timidin monofosfato 9 200
(TMP), (260 nm)
Tirosina (275 nm) 1 400 b
Riboflavina 12 200
a
Fuente:http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08II%20ESPECTROFOTOMETR
%C3%8DA.pdf
b
Clark, 1974, c http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_absorcion.pdf

ESPECTRO DE ABSORCIN DE UN COMPUESTO

El Espectro de absorcin de un
compuesto puede representarse como
una grfica que relaciona la cantidad de
energa absorbida (Absorbancia) o
emitida por un sistema, en funcin de la
longitud de onda (). En la figura 1 se
presenta el espectro de absorcin de la
Riboflavina (Vit B2). En ste pueden
observarse varios picos de absorcin
tanto en el rango ultravioleta 200-400
nm, como en el rango visible del Figura 1. Espectro de Absorcin de la
espectro (400-700 nm). Riboflavina (Vit B2). (Clark, 1974.)
Los picos de absorcin especficos estn relacionados con grupos funcionales del
compuesto, facilitando su identificacin. Adicionalmente la presencia de picos de
absorcin diferentes a los esperados, permite establecer o refutar la identidad del
compuesto.
Las molculas interaccionan con la radiacin luminosa en un vasto rango de longitudes de
onda, dando lugar al espectro del compuesto en zonas caractersticas. Algunas de estas

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

regiones proporcionan informacin de gran utilidad al bioqumico para identificar

compuestos. Los espectros de absorcin en el ultravioleta (200-400 nm) y regiones
visibles responden a energas de transicin de electrones externos de enlace y de no-
enlace de la molcula. Usualmente estn involucrados electrones deslocalizados tales
como los electrones de los dobles enlaces C=C y el par solitario del nitrgeno y del
oxgeno.

ESPECTROFOTMETRO

El aparato utilizado en Espectrofotometra es el Espectrofotmetro. Dentro de los

componentes generales de este aparato, esquematizados en la figura 2, se puede
observar en primer trmino la fuente de luz, que por lo general es una lmpara a base de
tungsteno o a base de deuterio, enseguida se observa el colimador que orienta el haz de
luz hacia el prisma monocromador o red de difraccin, que descompone la luz blanca.
Enseguida la luz pasa al selector de longitud de onda, con el que se selecciona la longitud
de onda apropiada para cada determinacin. Esta luz es dirigida hacia la cubeta con la
muestra donde es absorbida por sta y posteriormente es detectada por la celda
fotoelctrica o fotocelda y transformada en energa elctrica, la que es medida por el
galvanmetro.

Figura. 2. Componentes bsicos del Espectrofotmetro (Segel, 1976)2

RESTRICCIONES DE LA ESPECTROFOTOMETRA

2Segel, 1976. Clculos Bioqumicos. New York: John Wiley and Sons.

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La ley de Lambert-Beer requiere:

a) que la estructura del soluto no vare con la concentracin, pues cuando esto ocurre
suceden cambios en el grado de ionizacin o en la solvatacin del soluto; estados en
los cuales, la absorcin de luz es diferente a la del soluto a otra concentracin.
b) que el disolvente usado en la disolucin de la muestra, no presente absorcin a la
misma longitud de onda que el soluto que se va a medir.
c) que no haya reacciones secundarias a la reaccin empleada.
d) que el soluto a medir est a una concentracin menor de 1.0 mol dm -3, pues las
disoluciones de mayor concentracin o muy diluidas, no siguen la Ley de Lambert-Beer.

MTODOS PARA CONOCER LA CONCENTRACIN DE UNA SUSTANCIA UTILIZANDO EL

ESPECTROFTOMETRO

Para determinar la concentracin de un compuesto utilizando el Espectrofotmetro, se

puede proceder de tres maneras:

a) Conociendo el coeficiente de Absortividad molar y despejando c de la ecuacin

(4),
b) Usando un solo patrn. En este caso se aplica la siguiente ecuacin:

( Absorbanciadelproble ma)
Concentracin XConcentracindelpat rn
( Absorbanciadelpatrn )
(6)

c) Usando varios patrones. En este caso es necesario realizar una Curva Patrn o
Curva Estndar. Para determinar la concentracin del soluto, se procede de la
siguiente forma:

Con los datos de Absorbancia y concentracin de varios patrones, se obtiene la ecuacin

de la recta (Y = mX + b). Siendo Y la Absorbancia y X la concentracin.
Posteriormente se sustituye en la ecuacin de la recta, la Absorbancia del problema
(Yprob) y se despeja (X) que representa la concentracin del problema.
Es importante considerar en el momento de calcular la concentracin del soluto en la
muestra, la alcuota con que se haya trabajado y las diluciones que se hubieran realizado
a la muestra original.

D. Material y Reactivos

Material
Para Riboflavina Para Hemoglobina

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

pipetas graduadas una de 1.0 y dos Gradilla y celdas cuadradas para 2 cm3
de 10 ml
Papel milimtrico Micropipeta 0-50 L
Espectrofotmetro/cubetas Bao Mara a 37C
2 tubos de ensayo de 16 x 150 ml Puntas para micropipeta
Piceta con H2O 3 Tubos de 13x100mm/gradilla
7 matraces volumtricos de 25 ml Espectrofotmetro
y uno de 100 ml.

Reactivos

*Riboflavina comercial, H2O

*Patrn para hemoglobina (Cianometahemoglobina),
*Reactivo de Drabkin3: Disolver perfectamente en un poco de H2O: 0.2 g de ferrocianuro
de potasio (K3Fe(CN)6, 0.05 g de cianuro de potasio, 0.14 g de fosfato de potasio
dihidrogenado y 1.0 ml de detergente no inico (Sterox SE Harleco o Triton X-100) y
aforar a un litro con agua destilada).
* CuSO4.5H2O R. A.

E. Metodologa

E.1 Procedimiento para usar el espectrofotmetro

1. El espectrofotmetro es un instrumento delicado y costoso; no debe usarse sin conocer

su manejo. Por lo tanto, antes de usarlo, deber de leerse el manual de uso respectivo
y adems, ser instruido por el profesor.
2. Los tubos o celdas sucias o rayadas dan lecturas errneas, por lo que no deben usarse.
Su manejo y limpieza debern hacerse siempre empleando papel suave.
3. Para cada mtodo es necesario preparar un "blanco de reactivos". Este contiene todos
los reactivos, excepto la sustancia problema.
4. Quince minutos antes de usar el aparato, poner la longitud de onda requerida y
encenderlo.
6. Definir en el aparato la unidad a utilizar en las lecturas (Absorbancia o Transmitancia).
7. Transcurridos los 15 minutos, ajustar el aparato a cero con el Blanco de Reactivos
colocado en una cubeta/celda limpia y seca.
8. Posteriormente, colocar la muestra problema en una cubeta limpia y seca y tomar la
lectura.
9. Al terminar, dejar limpias las cubetas/celdas. Apagar, desconectar y cubrir el aparato
con su funda.

E.2 Determinacin del espectro de absorcin de la Riboflavina (Vitamina .B 2)

3 http://www.csi-csif.es/andalucia/modules/mod_ense/revista/pdf/Numero_3/Valoracion%20de%20la
%20hemoglobina_rosarioalorscorrederas.pdf

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1. Medir la Absorbancia de una disolucin de Riboflavina 2.1x10 -5 M en buffer de fosfatos

o solucin de Kiddi Pharmaton 1:10 (1 cm 3 del producto comercial ms 9 cm 3 de
H2O) a longitudes de onda de 300 nm a 500 nm, con intervalos de 10 nm.
2. Para calibrar el aparato, usar un Blanco de Reactivos a base del disolvente usado
(H2O).
3. Determinar la(s) longitud(es) mxima(s) (max) de absorcin. Esta longitud de onda es
la que se trabajara de ahora en adelante para la riboflavina.

E.3 Determinacin de la concentracin de Riboflavina en una preparacin

comercial, utilizando el Coeficiente de Absortividad Molar ()

1. Utilizar la preparacin comercial de Riboflavina del experimento E.2.

2. Medir la absorbancia de la muestra a max (450 nm).
3. Calcular los mg/100 cm3 de Riboflavina en la muestra. Consultar la seccin: Clculos y
Resultados.

E.4 Determinacin de la concentracin de Hemoglobina utilizando un patrn

El mtodo se basa en la reaccin del Fe de la hemoglobina y los componentes del reactivo

de Drabkin. La sangre se diluye con ferrocianuro de potasio y cianuro de potasio (Reactivo
de Drabkin). El ferrocianuro de potasio oxida las hemoglobinas a metahemoglobinas y con
el cianuro (CN-) se forma la cianometahemoglobina, la que tiene una Absorbancia mxima
a 540 nm. La Absorbancia del problema se compara con la del patrn a base de
cianometahemoglobina.

1. Aadir 20 microlitros de sangre a 5 cm 3 del reactivo de Drabkin (1:251). Mezclar muy

bien y mantener a temperatura ambiente al menos por 3 minutos.
2. Leer la Absorbancia a 540 nm frente al blanco de reactivos (Reactivo de Drabkin).
3. Paralelamente, preparar un patrn de cianometahemoglobina (proveniente de un
frasco recin abierto) y proceder de la misma forma que con el problema.

Cuadro 2. Protocolo para la determinacin de Hemoglobina (Mtodo de Drabkin)

Blanco patrn Problema

Patrn - 20 l -

Problema - - 20 l

Reactivo de Drabkin 5 ml 5 ml 5 ml
E. 5 Determinacin espectrofotomtrica de cobre (Cu ) en una solucin
2+

problema mediante una curva patrn.

1. Preparar una solucin 0.500 M de CuSO 4.5H2O y a partir de esta solucin calcular los
ml necesarios para preparar 25 ml de soluciones de molaridad: 0.01, 0.02, 0.03, 0.05
y 0.07 M.

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

2. Leer la Absorbancia de las soluciones a 640 nm. Calibrar contra H 2O como Blanco de
reactivos.
3. Paralelamente leer la absorbancia de una solucin problema entregada por el
profesor(a) y con ayuda de la ecuacin de la recta, calcular los g/L de CuSO4.5H2O y
los g/L de ion Cu2+.

Cuadro 3. Protocolo para la determinacin de cobre (Cu2+)

Patrn de CuSO4.5H2O
(molaridad)
0.01 0.02 0.03 0.05 0.07
ml de sol. CuSO4.5H2O
0.5M
Aforo 25 ml 25 ml 25 ml 25 ml 25 ml
Absorbancia

F. Clculos y Resultados

1. Espectro de Absorcin de Riboflavina: Realizar un cuadro con los resultados de longitud

de onda y absorbancia.
Graficar las absorbancias obtenidas contra la longitud de onda correspondiente y
dibujar el Espectro de Absorcin de la vitamina. Determinar los picos de absorcin
mxima. Analizar la grfica del espectro de absorcin y ratificar la identidad de la
vitamina. Comparar con la figura 1.

2. Clculo de la concentracin de Riboflavina en mg/100 cm 3. Calcular las micromoles de

Riboflavina por tubo, despejando c de la ecuacin 5 y sustituyendo el valor del
coeficiente de absortividad molar () para Riboflavina (12 200 molar-1 cm-1).
Finalmente, calcular con la siguiente ecuacin, los mg Riboflavina /100 cm 3 en la
muestra. Considerar para este clculo la dilucin de la muestra. (Peso molecular de
Riboflavina: 400 g mol-1).

( Abs)(10ml )(100ml)( 400 g / mol )(1000mg / g )

mgRiboflav ina / 100ml
( )(b)(1000ml )(1ml )

3. Hemoglobina (Hb) en g/dl.

| patrn|
| prob|/ ( concentracin del patrn)

Hb ( g/dl ) =

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

* [conc patrn= 15 g/dl] ** Hemoglobina (vacas) 8-15 mg/dl (Kaneko, 1989).

4. Determinacin de Cu2+. Graficar la curva patrn, colocando la Absorbancia en el eje

Y. En el eje X, colocar las concentraciones de los patrones. Obtener la ecuacin de
la recta y con la pendiente y la ordenada calcular la concentracin (molaridad y
gramos) de CuSO4 en la solucin problema y posteriormente la concentracin de ion
Cu2+ (Molaridad y gramos).

G. Autoevaluacin

1. Explicar las bases del funcionamiento del espectrofotmetro.

2. Indicar los componentes principales del espectrofotmetro.
3. Explicar la ley de Lambert-Beer y su aplicacin especfica en alguno de los
experimentos realizados en esta prctica.
4. A partir de la ecuacin de la ley de Lambert-Beer , obtener las unidades del Coeficiente
de Absortividad molar ().
5. Explicar la funcin del "Blanco de Reactivos" en cada determinacin
espectrofotomtrica.
6. Explicar de forma general, en qu consiste una curva patrn y su utilidad.
7. Explicar la(s) ventaja(s) de usar el coeficiente de absortividad molar para calcular la
concentracin de un soluto.
8. Comprobar las unidades resultantes de la frmula propuesta para calcular Riboflavina
en mg/dl.
9. Calcular la Absorbancia correspondiente a los siguientes % de Transmitancia: a)
19.5%, b) 35.5%,

10. Realizar una propuesta de protocolo de curva patrn para determinar fsforo
espectrofotometricamente. El reactivo utilizado es molibdovanadato de amonio (MVA) y
el estndar es una solucin de KH2PO4.

11. La adenina del cido nucleico tiene un coeficiente de absortividad molar de 13100
molar-1 cm-1 a 263 m. Calcular la concentracin molar de una solucin de adenina, si
la solucin colocada en una celda de absorcin de 1.00 cm tiene 75% de
Transmitancia. (R=9.54 X 10-6 molar).

12. Calcular los mg/100 cm3 de Riboflavina en una preparacin comercial si la

transmitancia fue 18 %. Considerar el coeficiente de absortividad molar () igual a 12
200 molar -1 cm-1, longitud de la cubeta de 1 cm, dilucin de la muestra 1:10 y como
peso molecular de la vitamina 400 g mol-1. (R= 24.4 mg/100 ml).

13. Una mezcla de nucletidos obtenida por hidrlisis de una muestra de ADN, posee
una Absorbancia a 260 nm de 0.547 (b=1). Suponiendo que la composicin de ese

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

DNA sea equimolar en los cuatro desoxirribonucletidos, calcular la concentracin

milimolar de nucletidos en la muestra analizada. (R= 0.05 mM). (Ver valores de en
el cuadro 1).

14. A partir de los siguientes datos: a) obtener la grfica de la curva patrn, b) obtener
la ecuacin de la recta y c) calcular los gramos de soluto/ tubo si la absorbancia es
0.07. (Respuesta: y=9097x - 0.129, g soluto/tubo= 2.19 x10-5).
X Y
g patrn/tubo Abs
1.5 X 10-5 0.033
3.0 X 10-5 0.111
6.0 X 10-5 0.417
9.0 X 10-5 0.700

15. De acuerdo con la referencia (Toribio y Peinado), explicar cmo se puede calcular el
coeficiente de absortividad con los datos del problema anterior (16).

16. Una solucin de permanganato de potasio 1.28X10 -4 molar tiene una Transmitancia
de 50% a 525 m en una celda de 1.00 cm.
a) Qu.Absorbancia.tiene.la.solucin? (R=0.301)
b) Cunto vale A y T, a 2.56 X10-4 molar? (R= A=0.601, %T= 25)
c) Qu concentracin correspondera a una T= 75%?. (R=5.3 X10 -5 M)

5. Se tiene una solucin 2.00X10-4 molar, con A= 1.0 a = 320 m en una celda de 1 cm.
a)
Cul es el coeficiente de extincin molar? (R=5.00 X 10 3)
b) Cul es el % T ? (R= 10 %)
c) Cul es el % T de una solucin 4.00X10 -4 molar, en la celda?. (R=1 %)
d) De acuerdo a esto, cmo se puede conocer el coeficiente de extincin molar?

17. Definir 10 conceptos clave relacionados con la presente prctica (ejemplos : ,

Transmitancia, hipohemoglobinemia, curva patrn, Absorbancia, patrn, fotocelda,
cubeta, etc.).

18. Explicar el mtodo para medir hemoglobina basado en el uso del reactivo de
Drabkin.

19. Describir brevemente los tres mtodos para calcular la concentracin de un soluto
mediante espectrofotometra.

H. Bibliografa

1. Bohinsky, R. 1991. Bioqumica. 5 Ed. Addison Wesley. Iberoamericana S.A. El

captulo 1 contiene un apartado sobre la metodologa utilizada en Bioqumica.

2. Peinado, J. y Toribio J. Espectro de Absorcin de las formas oxidada y reducida del

FMN. Ley de Lambert y Beer. Clculo del coeficiente de extincin molar. Recuperado el

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Unidad I. Mtodos y Tcnicas Bioqumicos

17 de enero 2011, de http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-

mol/pdfs/08II%20ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf

3. Kaneko, J. J. 1989. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Appendix VII. San

Diego, California Academic Press, Inc.

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