Instituto Politcnico Nacional

Escuela nacional de Ciencias Biolgicas

Laboratorio de Mtodos de Anlisis

Separacin de protenas por electroforesis en gel de

poliacrilamida.

Profesor: Francisco Fernndez Lpez

Alumna:

Mariana Rodriguez

Grupo: 4IM1 Semestre: 15/2 Seccin: 3

OBJETIVOS

A) Efectuar la separacin de protenas de varias muestras mediante la

tcnica de electroforesis en poliacrilamida.
B) Determinara cual es el tamao optimo de poro del gel, para la
mejor separacin de cada una de las muestras.

FUNDAMENTO

La electroforesis es la migracin de solutos inicos bajo la influencia de un

campo elctrico; estas partculas migran hacia el ctodo o nodo (electrodos -
y +), en dependencia de una combinacin de su carga, peso molecular y
estructura tridimensional.

La velocidad de migracin (v) de la partcula es directamente proporcional al

producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial elctrico (E) e
inversamente proporcional al coeficiente de friccin (f) relativo a la talla y
forma de la molcula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio.
V=qE/f

La movilidad electrofortica (Me) es un caso particular de la velocidad de

migracin de un in, cuando se aplica un campo elctrico de 1 V/cm. Su signo
es igual al de la carga de la partcula.
RESULTADOS

Tabla 1. Caractersticas de los electroferogramas a diferentes %T

% 5.5 7.5 10 12.5

T

Caracterstica
Longitud del gel antes de teir, 7.5 7.17 7.5 7.6
cm (l)
Longitud del gel despus de teir, 7.9 7.54 8.5 8
cm (l)
Distancia recorrida por el 5.9 6.34 6.9 6.9
colorante, cm(f)
No. De Suero 12 10 10 15
bandas en: Leche 7 6 10 12
Clara 6 7 6 10
Yougurth 2 2 4 7

Clculos para M

l m
M= l
x
f

5.5 %T 7.5%T 10%T

12.5%T

SUERO SUERO SUERO

SUERO

7.5 6.86 7.17 4.76 7.5 3.98

M= 7.9 x 5.9 =1.1 M= 7.54 x 6.34 =0.71 M= 8.5 x 6.9

7.6 2.7
x
=0.5089 M= 8 6.9 =0.37

LECHE LECHE LECHE

LECHE
 7.5 4.65 7.17 4.76 7.5 3.12
x M= 7.54 x 6.34 =0.49 M= 8.5 x 6.9
=0.74
M= 7.9 5.9

7.6 2.7
x
=0.4142 M= 8 6.9 =0.33

CLARA CLARA CLARA

CLARA

7.5 3 7.17 4.76 7.5 1.9

M= 7.9 x 5.9 =0.48 M= 7.54 x 6.34 =0.32 M= 8.5 x 6.9

7.6 2.7
=0.24 M= 8 x 6.9 =0.19

YOUGURTH YOUGURTH YOUGURTH

YOUGURTH

7.5 4.85 7.17 4.76 7.5 3.15

M= 7.9 x 5.9 =0.77 M= 7.54 x 6.34 =0.54 M= 8.5 x 6.9

7.6 2.7
x
=0.41 M= 8 6.9 =0.34

Clculos para Log (MX100)

5.5 %T 7.5%T 10%T

12.5%T

SUERO SUERO SUERO

SUERO

Log(1.1x100)=2.03 log(0.71X100)=1.83 log(0.5089X100)=1.7

log(0.37x100)=1.56
LECHE LECHE LECHE
LECHE

Log( 0.74 X 100 =1.86 log(0.49X100)=1.7 log(0.4142X100)=1.7

log(0.33X100)=1.51

CLARA CLARA CLARA

CLARA

Log(0.48X100)=1.68 log(0.32X100)=1.5 log(0.24X100)=1.38

log(0.19X100)=1.28

YOUGURTH YOUGURTH YOUGURTH

YOUGURTH

Log(0.77X100)=1.89 log(0.54X100)=1.73 log(0.41x100)=1.62

log(0.34X100)=1.53

Tabla 2. Movilidad electrofortica relativa promedio

%T Muestr Valores de m de la Valor Movilidad Log(MX1

a protena seleccionada promedio electrofort 00)
(cm) de m (cm) ica relativa
M
Suero 6.9 6.9 6.8 6.86 1.10 2.03
Yogurth 4.8 4.9 4.85 0.77 1.89
5.5 Clara 3 3 3 3 0.48 1.68
Leche 4.6 4.7 4.65 0.74 1.86
Suero 4.7 4.8 4.8 4.76 0.71 1.85
Yogurth 3.6 3.7 3.65 0.54 1.73
7.5 Clara 2.2 2.2 2.16 0.32 1.5
Leche 3.4 3.3 3.39 0.49 1.7
Suero 4.1 4.05 3.8 3.98 0.51 1.70
Yogurth 2.1 1.9 1.7 3.15 0.41 1.62
10 Clara 3.2 3.1 1.9 0.24 1.38
Leche 3.05 3.2 3.12 0.41 1.61
Suero 2.7 2.7 2.7 2.7 0.37 1.56
Yogurth 2.5 2.5 2.5 0.34 1.53
12.5 Clara 1.4 1.4 1.4 1.4 0.19 1.28
Leche 2.4 2.4 2.4 0.33 1.52
 Grfica de Ferguson
14

12 suero
f(x)
f(x)
f(x)
f(x) = - 17.34x +=
== - 15.24x
-34.19
-20.09x
19.27x + 36.14
++42.43
41.49 Linear (suero)
R R
= = 0.99
0.97
R = 0.96 R = 0.97
yogurth
10
Linear (yogurth)
Log (Mx100) clara
8
Linear (clara)
leche
6 Linear (leche)

4
1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 2 2.1

%T

Para tamao y carga de protenas

Teniendo la ecuacin de cada grafica de Ferguson correspondiente se

tiene que la pendiente es el tamao de la partcula y la ordenada al
origen es su carga.

Suero

Y=-15.24x + 36.14 tamao: 15.24 daltones carga: 36.14

Yogurth

Y=-18.52x + 40.13 tamao: 18.52 daltones carga: 40.13

Clara

Y=-17.34x + 34.19 tamao: 17.34 daltones carga: 34.19

Leche

Y=-20.92x + 43.92 tamao: 20.92 daltones carga: 43.92

Preguntas extra:

1.- Concluya acerca del tamao molecular relativo de las protenas y sus
cargas elctricas relativas al pH del regulador de trabajo.

R: Con respecto a la carga de mayor a menor: leche, yogurth, suero y

clara. Con respecto al tamao de mayor a menor: leche, yogurth, clara y
suero.

2.- Diga cul %T recomienda para la separacin de las protenas de cada

muestra, Por qu?

R: El de 12.5 ya que en esta se observa un mayor nmero de bandas

para todas las muestras.

3.- Escriba la reaccin completa para la copolimerizacion de la

acrilamida y la bisacrilamida por radicales libres, Qu funcin tiene el
TEMED y el persulfato de amonio?

R: El TEMED es un estabilizador de radicales libres y el persulfato de

amonio induce la polimerizacin produciendo radicales libres por medio
de su descomposicin qumica.

4.- Mencione una aplicacin de la electroforesis preparativa y una de la

electroforesis analtica.
R: Preparativa; separacin y purificacin de RNA por sedimentacin en
gradiente de densidades. Analtica; indica el grado de grado de
aislamiento y purificacin de una protena.

5.- Defina velocidad de migracin y movilidad electrofortica.

R: movilidad electrofortica; velocidad de migracin corregida por la

intensidad del campo elctrico. Velocidad de migracin: es la velocidad a
la cual se movern las molculas en funcin de sus caractersticas
(forma, tamao y carga)

6.- Defina el termino elctroferograma.

R: Grfico realizado con los resultados de un anlisis por electroforesis

que muestra la secuencia de datos producida por una mquina
automtica de secuenciacin de ADN.

DISCUSIN

Con forme a los resultados podemos ver que existe una mejor resolucin en la
separacin de las protenas de las muestras con forme se va teniendo un
tamao de poro ms pequeo, ya que con esto se van reteniendo mas las
partculas que son ms pequeas y as se van definiendo mejor las bandas de
separacin con forme a tamao y carga ya que son arrastradas por una
corriente elctrica.

CONCLUSIONES

Logramos la separacin de las protenas de 4 muestras en gel de

poliacrilamida.
Determinamos el tamao ptimo de poro para lograr una buena
separacin de las protenas de las muestras.

BIBLIOGRAFIA

http://diccionario.raing.es/es/lema/electroferograma
Voet, Donald. Fundamentos de bioqumica: la vida a nivel
molecular. 2 edicin. Editorial Panamericana, p.c. 154.
Pilar Roca, Jordi Oliver, Ana Mara Rodrguez. Bioqumica: tcnicas y
mtodos p.c. 162-163. Edit. hlice