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PBLICA
TECNOLGICO NACIONAL DE
MXICO
MICROBIOLOGA I
1er PARCIAL
ESTERILIZACIN DE MATERIALES
Y MEDIOS DE CULTIVO
PRACTICA 1
PRESENTA
ARREOLA CEBALLOS FRANCISCO FORTINO
FLORES TORRES MARIAM
JIMNEZ OLALDE NICOLS
OLVERA ALMANZA SERGIO
GRADO: 4 GRUPO: A
REVISOR
VIOLETA HERRERA ENCISO.
OBJETIVOS 3
INTRODUCCIN 3
MARCO TERICO 4
MATERIALES Y REACTIVOS 8
PROCEDIMIENTOS 9
RESULTADOS 12
CONCLUSIN 14
BIBLIOGRAFA 15
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OBJETIVOS
INTRODUCCIN
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MARCO TERICO
AGAR
El agar, o agar -agar, es un polisacrido que se obtiene de algas del gnero
Gelidium, algas que se han utilizado en la cocina tradicional japonesa, por sus
propiedades gelificantes, desde hace muchos siglos. Tambin se obtiene de otras
algas, entre ellas especies de los gneros Gracillaria , de las que procede
actualmente la mayora del agar, y de Gelidiella y Pterocladia, que aportan
pequeas cantidades. El agar de mejor calidad de obtiene de Gelidium, aunque en
los ltimos aos se ha extendido mucho la obtencin a partir de cultivos marinos
de Gracillaria, que son ahora la fuente principal de este polisacrido. En Espaa
se obtiene sobre todo de Gelidium corneum. En el listado de aditivos alimentarios
de la Unin Europea, el agar es el E-406.
El agar se considera formado por la mezcla de dos tipos de polisacridos, la
agarosa y la agaropectina. La agarosa es el componente principal, representando
alrededor del 70% del total. Tanto la agarosa como la agaropectina tienen la
misma estructura bsica.
El agar es un polisacrido no digerible, que desde el punto de vista nutricional
forma parte de la "fibra". Las enzimas capaces de degradar el agar son
extraordinariamente raras, incluso entre los microorganismos. Por eso el agar es
tambin un valioso medio de cultivo en bacteriologa.
El Agar Mtodos Estandar fue desarrollado por Buchbinder Baris and Goldstein en
1953 como un requerimiento de la American Public Health Association. Este medio
se formula con los ingredientes originales. El extracto de levadura y la peptona de
casena han sido utilizados en medios diseados para estudiar la presencia de
microorganismos termoflicos en productos lcteos desde 1928.
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La estructura de las colonias
bacterianas se ha examinado
tambin con el microscopio
electrnico de barrido. La
estructura microscpica de las
colonias es a menudo tan
variable como su aspecto visual
(Figura 5.12).
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Complementando la clasificacin es por su consistencia:
- Color
- Viscosidad
- Membranosa
- Dura
- Seca
- Cremosa
- Mucos
MATERIALES Y REACTIVOS
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1. Lavar en forma respectiva el material de vidrio y enjuagar
con abundante agua corriente.
2. Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con
agua destilada. Dejar escurrir el material sobre una toalla o
papel de envolver.
3. Preparar 200 mL de agar bilis rojo violeta en un matraz
Erlenmeyer de 500 ml. Vaciar 5 mL en dos tubos de cultivo
con tapn de rosca que se cerrarn sin llegar al tope.
4. Calentar el medio en una parrilla con agitacin constante
hasta ebullicin (cuidar que no se proyecte) y vaciar 5 mL de medio en 2 tubos con
tapn de rosca. Enjuagar de inmediato la pipeta para evitar que se solidifique el
agar.
5. Preparar 200 mL de medio de cultivo PDA en un matraz Erlenmeyer de 500 mL,
ajustar el pH del medio a 5.6. Colocar un agitador magntico y calentar hasta
ebullicin, cuidando que no se proyecte o derrame. Vaciar 5 mL de medio en
cuatro tubos sin rosca que se taparn con tapn de algodn y gasa.
6. Preparar 200 mL de medio de cultivo cuenta estndar en un matraz Erlenmeyer
de 500 mL. Colocar un agitador magntico y calentar hasta ebullicin.
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c. Cerrar la tapa, apretar las manijas de dos en dos en posicin encontrada y
esperar a que salga el vapor por el orificio de purga, despus cerrarlo con la
vlvula.
d. Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121C o 15 lbs /in 2 de presin
y mantener estas condiciones durante 15 minutos. Revisar continuamente el
manmetro y regular el control de temperatura a valor medio o mnimo.
e. Apagar la autoclave y dejar que la presin baje al valor de cero. Quitar la vlvula
y con la ayuda de guantes de asbesto, abrir cuidadosamente la tapa, desde la
parte trasera para evitar que el vapor caliente cause quemaduras.
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1. Abrir una caja Petri de CE, BRV y PDA, as como un tubo de CE,
BRV y PDA, durante 1 minuto en zonas no aspticas (patio, aulas,
comedor) y etiquetarlas.
2. Abrir una caja Petri de CE, BRV y PDA, as como un tubo de CE,
BRV y PDA, durante 1 minuto en zona asptica (cerca del mechero) y
etiquetarlas.
3. Colocar los tubos y las cajas Petri en una incubadora ajustada a
30C durante 24-48 horas. Las cajas Petri se colocarn con la
tapa hacia abajo.
4. Revisar los tubos y cajas Petri para detectar la presencia de
contaminantes, por la aparicin de turbidez, nata superficial y/o
depsito de material en el fondo de los tubos con medio lquido, as como la
formacin de colonias microbianas en la superficie de los medios slidos.
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RESULTADOS
FIGURA 1.
EN ESTA IMAGEN SE MUESTRA LAS CAJAS CON CULTIVO LAS CUALES FUERON
ABIERTAS EN NUESTRA ZONA ACEPTICA.
FIGURA 2.
EN ESTA IMAGEN SE MUESTRA LAS CAJAS CON CULTIVO LAS CUALES FUERON
ABIERTAS EN ZONAS NO ASPTICAS.
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Descripcin morfolgica
BRV PDA CE
Tiempo de
incubacin 24 hrs. 210 hrs. 24 hrs. 210 hrs. 24 hrs. 210 hrs.
Circular Circular
Circula Puntiform Puntiform filamentos filamentos
Forma r Irregular e e a a
Ondulad Entero Entero
Margen Entero o Entero Entero filamentos filamentos
Elevada convexa convexa
Elevacin Plana convexa Plana Convexa Plana Plana
Translucid
ptica Opaca Opaca Opaco Opaca a
Consistenci Cremosa Cremosa Cremosa
a Dura viscosa Dura mucosa Dura-seca Dura-seca
UFC 2 2 16 23 26 27
CONCLUSIN
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Con esta prctica pudimos conocer los principios de la microbiologa, as mismo,
como realizar de forma correcta la esterilizacin de material y nuestro medio de
cultivo (agar). Conocer la dilucin en placa y para qu sirve este mtodo, conocer
la temperatura general de incubacin para el desarrollo de microorganismos y
poder dar una descripcin morfolgica de nuestro desarrollo microbiano.
BIBLIOGRAFA
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Prescott, L.M. Harley, J.P. y Klein, D.A. 2004. Microbiologa. Madrid,
Espaa. 5a edicin. Mc Graw-Hill Interamericana.
http://es.slideshare.net/pauledreha/agar-de-dextrosa-y-papa
http://ssfe.itorizaba.edu.mx/ntec13/webext/secure/hoja/GUSTAVO%20A
%20COMPLETO/MSDS%20AGAR%20ESTANDAR%20GA.pdf
http://www.britanialab.com/productos/B02143%20REV%2001-VIOLETA
%20ROJO%20Y%20BILIS%20AGAR.pdf
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10
_GlucosaBilisRojoVioleta.pdf
http://electronic-systems.com.mx/pdf/AGAR%20BILIS%20ROJO
%20VIOLETA..pdf
http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/azucares/agar.html
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