Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Caracterizacin y desarrollo de
microorganismos
2) Eubacteriales
Cuentan con flagelos pertricos, varios flagelos insertados en diversos puntos de la clula. Hay varios gneros
de inters como:
3) Actynomicetales
Las estructuras encontradas ms frecuentemente tienen forma de bastn. Son filamentosos, tienen gran
parecido con los hongos, y forman abundantes micelios.
Entre los microorganismos de uso industrial, los actinomicetos son bacterias filamentosas Gram positivas, de
gran inters econmico como productores de antibiticos.
Streptomyces es el gnero ms extenso de actinomicetos, que se caracterizan por tener un metabolismo
secundario que lleva a la produccin de ciertos antibiticos. Entre sus especies de mayor inters encontramos:
Streptomyces spp, sintetiza estreptomicina y vitamina B12, sntesis de colorantes, y en su presencia se puede
sentir olor a tierra debido a la mineralizacin del nitrgeno en el suelo. Streptomyces griseus que tambin
produce estreptomicina, Streptomyces aureofaciens que produce clorotetraciclina, y Streptomyces rimosus
que sintetiza oxitetraciclina.
Nocardia es un gnero que tambin cuenta con especies productoras de antibiticos, como es el caso de
Nocardia mediterranei que sintetiza rifamicina.
Mycobacterium tambin es un gnero de actinomicetos, y se destaca la especie Mycobacterium tuberculosis,
bacteria responsable de la mayor cantidad de casos de tuberculosis del mundo.
1) Ficomycetes
Tambin conocidos como hongos inferiores, tienen talo filamentoso sin tabique ya carecen de septos y sus hifas
estn muy ramificadas. La mayora de ellos forma esporas en el interior de los esporangios.
Entre los gneros ms usado encontramos:
Rhizopus: una de sus especies produce cido fumrico a partir de glucosa.
Mucor: como el moho blanco que se desarrolla en el pan hmedo por producir sustancias amilceas.
Muchas especies de ficomicetos, cuyas hifas no poseen septos, como Rhizopus nigricans, Rhizopus oryae,
Rhizopus delemar, Mucor racemosus y Mucor mucedo, son apropiados para la obtencin de cido fumrico y
cido D-lctico. Otras como Mucor javanicus y Mucor rouxil para la produccin de amilasas.
2) Ascomycetes
Cuentan con un talo unicelular (levaduras) o pluricelular (filamentosos). Es caracterstico de los mismos la
posesin de un micelio septado o tabicado formado por entrecruzamiento de filamentos ramificados, y la
formacin de conidisporas. No presentan clulas flageladas.
Familia Endomycetaceae
Corresponde a las levaduras verdaderas y est formada por 17 gneros, entre los que se destacan:
Saccharomyces: son levaduras esporogneas, y la especie principal es Saccharomyces cerevisieae cuyas
distintas cepas se utilizan en la fermentacin para la produccin de cerveza, vino, aguardientes, y para la
masa de panadera.
Familia Ashbiacene
Es intermedia entre hongos verdaderos y levaduras. La especie de mayor inters es Ashbya gossypii, productora
de vitamina B12.
Familia Aspergillaceae
Son hongos filamentosos llamados hongos verdaderos. Dentro de esta familia estn los gneros ms
importantes en la industria de la fermentacin, por su aplicacin en la sntesis de antibiticos y vitaminas.
Su estructura es compleja, pueden ser pluricelulares y presentan esporos de reproduccin. Forman filamentos
que consisten en hifas formadas por muchas clulas en hilera de forma cilndrica.
Se distinguen por la forma de sus conidios. Los conidiforos terminan en una abultada cabeza a cuyo alrededor
nacen hileras de conidios.
Entre los gneros de mayor inters encontramos:
Penicillium: se desarrolla como un moho verde en el pan hmedo, mermelada, cuero viejo. Se compone de un
micelio formado de filamentos tabicados y ramificados en la superficie de la materia orgnica de la cual se
nutre. Se emplea en la fabricacin de quesos como el roquefort, con el fin de acelerar su madurez. Entre las
especies ms importantes de este gnero encontramos: Penicillium roqueforti usado en la produccin de
quesos azules, Penicillium camembert usado en la produccin de queso Brie y Camembert, Penicillium
chrysogenum y Penicillium notatum en la obtencin de penicilina. Otras especies se aplican en la obtencin
de cido ctrico, fumrico, oxlico, glucnico y glico.
Figura n4: Ciclo de vida de los Ascomicetos, combinan reproduccin sexual y asexual
3) Basidiomycetes
Consisten en un talo formado por filamentos tabicados que se reproducen por esporas que nacen en nmero
constante en la superficie de clulas llamadas basidio.
Entre los basidiomicetos, tienen importancia econmica las especies comestibles de setas silvestres, y otros que
pueden ser cultivados con fines alimenticios como el champin.
Los gneros Merulius, Boletus y Polyborus tienen importancia como destructores de madera, ya que adems de
la celulosa atacan a la lignina.
No se encuentran especies de aplicacin industrial.
Reproduccin asexual
Sin fecundacin el microorganismo produce partes u rganos que darn lugar a nuevos individuos. Por ello esta
forma de reproduccin suele llamarse vegetativa. Existen distintas formas de reproduccin asexual que se
observan en los microorganismos:
a) Divisin celular o biparticin
Tiene lugar en bacterias y en levaduras. Por simple divisin de la clula madre se forman dos clulas hijas. El
citoplasma y el material gentico se reparten equitativamente entre los dos nuevos individuos.
En la imagen podemos ver que en primer lugar el ADN circular se adhiere a la membrana por medio del
mesosoma para su replicacin. Luego, se forma un mesosoma nuevo y se forman septos de separacin,
concluyendo en la formacin de dos nuevas clulas.
b) Gemacin
Tambin es una forma de reproduccin de bacterias y levaduras. Se forma una nueva clula a partir de una
excrecencia de la clula madre. Las nuevas clulas se pueden separar de la clula madre y formar nuevas
c) Esporas vegetativas
El tipo de esporulacin ms simple es el desarrollo de la espora a partir del micelio vegetativo, y se denomina
talosporo. Se han observado tres tipos de talosporos:
Blastosporos: se obtienen por gemacin simple, en las cuales las clulas hijas se separan de una clula madre
o se forman lateralmente a partir de un micelio o pseumicelio como en el caso del gnero Candida.
Clamidosporos: esporos en reposo de paredes gruesas, resistentes, producidos por un agrandamiento de las
clulas terminales de las hifas, como es el caso de Candida albicans y Fusarium.
Artrosporos: son el resultado del tipo ms simple de esporulacin en el cual las hifas vegetativas se
fragmentan en esporas cilndricas o en forma de barril de paredes gruesas.
En el caso de los eumicetos, los esporos tienen la funcin de conservacin y difusin de la especie. Se
presentan en muy diversas formas y cantidades segn la especie, en lo cual se basa su clasificacin.
Reproduccin sexual
En este proceso tiene lugar la fecundacin, donde se produce la fusin de dos clulas de distintos gneros para
formar un ncleo, adquiriendo ste material gentico de ambos progenitores.
Cada uno de los ncleos de las clulas sexuales contiene un nmero n de cromosomas caracterstico de la
especie (haploide). Por lo tanto, el ncleo de la clula formada durante la fusin de las clulas sexuales o
cigoto, contiene 2n cromosomas (diploide).
El organismo formado a partir del cigoto, contiene en sus clulas vegetativas ncleos con 2n cromosomas, o
sea es diploide, pero las clulas sexuales o gametos que el organismo forma durante alguna poca de su vida
son haploides.
La variacin de diploide a haploide se realiza durante la meiosis.
a) Meiosis
La meiosis es un proceso por el cual una clula con 2n cromosomas (y dos cromtidas por cada uno) origina
cuatro clulas con n cromosomas de una cromtida.
Consiste en dos divisiones celulares o mitosis sucesivas, en cada una de las cuales se pueden distinguir las
siguientes etapas: profase, metafase, anafase y telofase.
En el comienzo de la meiosis los cromosomas homlogos se asocian forman un bivalente, en cada uno de los
cuales hay cuatro cromtidas.
Figura n10: 1 par de cromosomas homlogos asociados en forma bivalente (un bivalente tiene dos cromosomas y cuatro cromtidas)
MEIOSIS II
Profase II: hay dos clulas hijas con n cromosomas, cada uno con dos cromtidas.
Metafase II: el cromosoma se ubica en el plano ecuatorial (n).
Anafase II: las dos cromtidas de cada cromosoma se separan y se dirigen a los polos (n).
La fase diploide puede tener una duracin ms o menos larga, pero en algn momento tiene lugar la fase
haploide. Es decir, puede haber un cambio continuo de la fase diploide a haploide. Este proceso se ha
observado en hongos filamentosos y en las levaduras, inicindose con la formacin de ascosporas.
Por ejemplo, el gnero Saccharomyces de levaduras, son unicelulares y forman normalmente esporas diploides
(clulas sexuales). El proceso sexual comienza a partir de las ascosporas, llamndose as al asco que contiene
los esporos en su interior, pudindose formar 2, 4, 6 o ms esporos. Los esporos formados durante la
reproduccin sexual son generalmente ms resistentes a la desecacin, el fro y el calor que la forma
vegetativa.
Macronutrientes
Entre ellos estn el carbono, hidrgeno, oxgeno, fsforo, azufre, nitrgeno, magnesio y potasio. Estos son los
elementos requeridos en concentraciones mayores que otros, tales como el hierro, calcio, molibdeno y sodio.
El hidrgeno y el oxgeno forman parte del agua, cuyo requerimiento depende del tipo de microorganismo. En
hongos el requerimiento de agua en el sustrato es del 12%, mientras que en bacterias es mayor al 20%. Estos
elementos adems, forman parte de compuestos orgnicos que se agregan al medio para servir como fuente de
carbono y energa. El oxgeno tambin puede obtenerse del aire. La seleccin de la fuente apropiada de
carbono y nitrgeno constituye generalmente la clave de la preparacin de los medios de cultivo.
El fsforo, azufre, magnesio y potasio suelen suministrarse como fosfato de potasio y sulfato de magnesio. El
fosfato contribuye a mantener el pH apropiado para el cultivo de la mayora de los microorganismos por su
efecto buffer.
Un medio conteniendo sales minerales, sulfatos o cloruro de amonio como fuente de nitrgeno, y sin
compuestos orgnicos que aporten carbono, slo puede permitir la multiplicacin de aquellos microorganismos
capaces de fijar el dixido de carbono de la atmsfera.
La glucosa y el sulfato de amonio son fuentes simples de carbono y nitrgeno, respectivamente, pero algunos
microorganismos requieren el carbono y el nitrgeno bajo la forma de compuestos orgnicos muy complejos.
Estos medios son requeridos por microbios que no tienen la capacidad de sintetizar sus componentes celulares
a partir de compuestos simples. Muchos organismos que viven como parsitos de otros organismos tienen por
lo general estos requerimientos complejos cuando se desea cultivarlos en laboratorio.
Microelementos
Estos son: Mn, Mo, Zn, Cu, Co, Ni, V, B, Cl, Si, Se, W.
La mayora de estos elementos se encuentran en forma de trazas o impurezas en las sales de los
macroelementos.
Factores de crecimiento
Generalmente, ciertos aminocidos, vitaminas y cidos nucleicos son requeridos por los microorganismos para
su crecimiento en un medio dado.
Temperatura de cultivo
Los microorganismos tienen un rango de temperaturas en el cual pueden crecer. Este rango est limitado por la
temperatura mxima de crecimiento, a partir de la cual no pueden vivir e incluso mueren; la temperatura
mnima, por debajo de la cual no pueden crecer quedando generalmente en estado de latencia; y la temperatura
ptima, que es aquella a la cual registran el mximo crecimiento.
Presin osmtica
La mayora de las bacterias son tolerantes a la presin osmtica del medio. Muchas crecen en soluciones donde
la concentracin de sales es del 0,1 al 10%.
Si la clula se encuentra en una solucin hipotnica, es decir que la concentracin de sales en el interior de la
clula es mayor que en el exterior, se producira el ingreso de agua a la clula, la cual podra explotar. Esto
no ocurre gracias a la presencia de la pared celular. Lo contrario ocurre si la clula se encuentra en una solucin
hipertnica, en cuyo caso se produce la salida de agua de la clula (reversible).
Las bacterias marinas requieren un 3,5% de sales.
Tensin de oxgeno
Las bacterias aerobias necesitan oxgeno O 2 como aceptor de electrones. En el caso de que su cultivo se realice
en capas profundas es necesaria la aireacin, ya que las bacterias utilizarn el oxgeno disuelto.
La concentracin de oxgeno disuelto no deber ser inferior a un contenido mnimo determinado para cada
especie, para no perjudicar su respiracin celular. A esta concentracin se la denomina concentracin crtica de
oxgeno.
La velocidad de disolucin de oxgeno se incrementa usando grandes superficies de contacto entre las fases
gaseosas y lquidas, y aumentando la presin parcial de oxgeno en la fase gaseosa.
Para obtener gran superficie de contacto entre las fases se usan distintos procedimientos:
1) Cultivo en superficies planas.
2) Agitacin del medio.
3) Rotacin del recipiente alrededor de su eje vertical.
4) Circulacin de aire a presin.
En el caso del cultivo de bacterias anaerobias, sus soluciones nutritivas se acondicionan al vaco con bombas
de vaco, en frascos cerrados sin burbujas de aire, cubriendo el medio de cultivo con una capa de vaselina
lquida.
Por aislamiento entendemos separar un microorganismo de inters de una poblacin microbiana mixta. Si el
microorganismo en cuestin ser aislado de fuentes naturales como agua, suelo, plantas y desechos, los
mtodos para el aislamiento del mismo son diversos. En este procedimiento se debe tener en cuenta que la
composicin qumica de la muestra a partir del cual se va a realizar el aislamiento comienza a variar a partir del
momento en que es tomada, por lo tanto sta se debe procesar rpidamente, tratando de evitar alteraciones que
afecten al microorganismo que interesa.
Aislamiento directo: Se logra a partir de una muestra, cuando el o los microorganismos de inters estn
en una cantidad adecuada, tal que estos microorganismos aparecen en forma tan evidente que pueden ser
aislados directamente. Es el caso de algunos microorganismos formadores de colonias, agrupaciones
destacables o que pueden alterar el medio en que se encuentran.
Aislamiento por enriquecimiento: Cuando el microorganismo que se desea aislar se encuentra en baja
proporcin se utilizan cultivos de enriquecimiento.
En este mtodo se busca favorecer el crecimiento de un tipo dado de microorganismos mediante condiciones de
cultivo adecuadas al mismo, luego se establecen condiciones ambientales para el enriquecimiento, mediante la
fijacin de cierto nmero de factores como la fuente de energa, fuente de carbono, fuente de nitrgeno, aceptor
de hidrgeno, atmsfera, luz, temperatura, pH. Entonces se inocula al medio con una poblacin mixta de
microorganismos.
En la solucin de enriquecimiento se impondr el microorganismo mejor dotado o adaptado, ya que su
crecimiento superar al de los dems. Se realizan transferencias repetidas del cultivo a la misma solucin
nutritiva, y se la extiende en un medio de cultivo slido de igual composicin para aislar la cepa enriquecida.
Cultivo puro
Entendemos por cultivo puro a la descendencia de una sola clula. Para el aislamiento de un cultivo puro
podemos proceder mediante:
- Separacin de medios slidos
- Separacin mediante cultivo unicelulares
- Separacin segn mtodos especiales
Luego, entre las tcnicas para la obtencin de un cultivo puro encontramos:
1.- Mtodos de extensin
Consiste en la distribucin de la muestra sobre un sustrato nutritivo solidificado, se aplica para aislar bacterias,
y no sirve para contarlas. Las muestras diluidas de microorganismos se siembran directamente en la
superficie de la placa que contiene agar, extendindolas con ayuda de un asa de Digralsky de
cristal estril
ste consiste en realizar el extendido del material aislado bajo la forma de estras sobre la superficie de un
medio nutritivo slido adecuado. Adems, en un sector de la misma placa de Petri, se siembran en estras
paralelas varios cultivos de grmenes testigos, dispuestos en estras perpendiculares a las del material aislado.
La placa inoculada se coloca en estufa a la temperatura ptima para el crecimiento del los grmenes testigos.
La inhibicin de crecimiento de estos grmenes debido a la presencia del antibitico producido por los
microorganismos de inters, es representada por las zonas claras ms o menos importantes donde se cruzan las
estras. Esto demuestra la actividad antibitica de la muestra de microorganismos estudiada.
Figura n16: Sensibilidad de una cepa bacteriana a diferentes antibiticos. Se observa una zona de inhibicin alrededor de cinco de los discos, lo cual
muestra que la cepa es sensible a los antibiticos que se impregnaron en estos discos. Y ninguna inhibicin alreded or del disco superior izquierdo, luego
la bacteria es resistente al antibitico impregnado en l
Entre las ventajas de las extensiones o frotis para la identificacin de microorganismos, podemos decir que con
esta tcnica las clulas se ven con mayor claridad. Adems pueden mostrarse las diferencias entre clulas de
distintas especies mediante soluciones colorantes, mediante una tincin diferencial o tincin de Gram,
observando una coloracin violeta en presencia de Gram positivas y roja para Gram negativas.
a) Ensayos de fermentacin
Consisten en la determinacin del poder fermentativo de los microorganismos sobre distintos azcares, con la
medicin del gas desprendido (CO2). Los azcares utilizados con ms frecuencia son glucosa, galactosa,
sacarosa, lactosa, maltosa y rafinosa.
El ensayo de Durham es cualitativo, mientras que el de Einhorn puede ser cuantitativo.
Ensayo de Durham
Se efecta en un tubo de ensayo comn (160 x 16 mm) en cuyo interior se coloca un tubito de hemlisis
invertido. El tubo de ensayo se carga con el medio de cultivo denominado medio basal, el azcar fermentable
y el indicador apropiado, y se esteriliza de acuerdo con las caractersticas del medio y del azcar. El medio
basal puede estar constituido por 5 g de NaCl, 10 g de peptona, agua destilada hasta 1000 ml.
Se agrega un indicador, como solucin prpura de bromocresol al 1,6 % u otro.
Ensayo de Einhorn
Utiliza un tubo en U, denominado tubo de Einhorn. Se carga con el medio basal, el indicador y el azcar que
generalmente debe encontrarse al 1%. Se esteriliza todo el sistema y luego se agrega la colonia microbiana. Si
la rama cerrada del tubo en U est graduada, el ensayo resulta cuantitativo, al poder determinar la cantidad de
gas producto de la actividad fermentativa.
Un ejemplo de aplicacin del ensayo de Einhorn es la identificacin de levaduras de cerveza. Encontramos dos
tipos de levaduras de cerveza segn la forma de fermentacin: levaduras de fondo o de baja, que son aquellas
que se desarrollan en el fondo del recipiente de fermentacin, y las levaduras de superficie o de alta que van
hacia la superficie durante la fermentacin, como es el caso de Saccharomyces cerevisiae. La levadura de
superficie desprende un tercio del volumen de gas desprendido por la levadura de fondo, lo cual se debe al
sistema enzimtico que contiene cada tipo. Luego, pueden diferenciarse por el ensayo de Einhorn cuantitativo,
utilizando rafinosa como azcar fermentable.
b) Ensayo de tincin de eumicetes muertos
Se trata de uno de los pocos mtodos que se aplican a levaduras y hongos filamentosos con colorantes.
La membrana celular tiene un papel selectivo en lo que respecta a las sustancias que pueden ingresar a la
clula. Muchos colorantes, tanto cidos como bsicos, pueden penetrar, pero su comportamiento es variado.
Algunos colorantes bsicos vitales como el azul de metileno, rojo neutro, azul de Nilo, atraviesan la membrana,
pero al llegar al protoplasma se transforman por reduccin en la leucobase incolora, de manera que no la tien.
Aqu interviene el poder reductor del complejo enzimtico de la zimasa, especficamente la deshidrogenasa
reducida o sea el DPN.H2, cuyo ncleo piridnico est reducido. El colorante que ha penetrado a travs de la
membrana es el sustrato que utiliza el DPN.H2, de acuerdo con la siguiente ecuacin:
Colorante bsico + DPN.H2 Leucobase + DPN
(reducido) (incolora) (oxidado)
Si la clula muere, el colorante que se encuentra reducido en el citoplasma vuelve a oxidarse, y tie el
citoplasma y ncleo. Esta reaccin se emplea en la industria de la fermentacin de levaduras para determinar
si el microorganismo est vivo o muerto. Se puede inferir que la desorganizacin celular que sigue a la muerte
de la clula es la causa de la prdida del poder reductor del citoplasma. Generalmente se utiliza el azul de
metileno debido a su baja toxicidad.
Los colorantes cidos no penetran o penetran con mucha dificultad cuando la clula est viva. Cuando sta
muere, tien con preferencia al citoplasma, mientras que los colorantes bsicos tien mejor al ncleo debido a
la presencia de cidos nucleicos.
d) Los auxogramas
Del griego auxo = aumentar y gramma = escrito. Este ensayo permite conocer las sustancias que asimila un
microorganismo para su desarrollo.
Consiste en sembrar al microorganismo con un medio basal slido privado de la sustancia a ensayar, y agregar
dicha sustancia nicamente en un determinado sector de la superficie del medio. Por lo tanto, si esta sustancia
es asimilada por el microorganismo, ste desarrollar una colonia solamente en el lugar donde se deposit. Por
ejemplo, para auxogramas donde se estudia la asimilacin de azcares se utiliza como medio basal uno carente
de glcidos, y para el nitrgeno uno carente de compuestos nitrogenados.
La tcnica consiste en sembrar al microorganismo en un medio basal slido en una caja de Petri. Demarcar
varios sectores en el fondo y por fuera de la caja sembrada, y anotar el azcar que se agregar en cada sector, si
lo que se estudia es por ejemplo la asimilacin de azcares. El microorganismo sembrado previamente sobre el
cultivo slido se desarrollar en el sector que contiene azcar que pueda asimilar, el cual se vuelve opaco.
Es de importancia hacer notar que un microorganismo puede asimilar un glcido determinado y no responder a
los ensayos de fermentacin ya que no desprende gas. Es decir, da un auxograma positivo y un ensayo de
Durham negativo. A veces el auxograma es muy lento, pudiendo requerirse hasta 20 das.