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Descomplicando as clulas somticas

So 27 perguntas e respostas que


explicam da maneira mais simples
possvel questes bsicas desse
importante tema para o produtor.

A contagem de clulas somticas (CCS) um dos parmetros


mais usados para avaliao da sade do bere e da qualidade do
leite. O principal fator que influencia a CCS dos rebanhos e
dos animais, individualmente, a presena de infeces na
glndula mamria. Entretanto, mesmo na glndula no infectada
h um nmero de clulas que pode alcanar at 50.000 por
mililitro (ml) de leite, sendo que alguns especialistas
consideram normal contagens de at 100.000 ou 200.000.
O aumento da CCS na glndula mamria resulta
principalmente da atrao de clulas de defesa do sangue, em
conseqncia de uma infeco local. Alm da infeco
intramamria, o nico fator que parece ter uma influncia
importante sobre a CCS a variao diria que ocorre em cada
glndula mamria e peculiar a cada animal.
Portanto, improvvel que outras causas que no afetem a
sade do bere tenham um efeito direto sobre a CCS. Nas
indstrias leiteiras mais avanadas, o uso de equipamentos que
permitem avaliar grande nmero de amostras de leite permitiu o
desenvolvimento de programas de monitoramento da sade de
rebanhos com base na CCS.
A tendncia o uso cada vez maior desses equipamentos,
uma vez que eles apresentam uma srie de vantagens (rapidez,
segurana, confiabilidade) e os programas associados
metodologia so considerados grandes impulsionadores da
melhoria da sade dos rebanhos e da qualidade do leite.
A obteno de grande nmero de dados exige uma anlise
criteriosa para que se possa aproveitar o mximo da informao
gerada. O exame de amostras de leite dos rebanhos permite a
obteno de dados que podem ser teis para o gerenciamento da
sade e do manejo desses rebanhos.
Mas, da mesma forma que para a maioria dos exames
laboratoriais, importante considerar os limites e o alcance
das informaes obtidas. Este artigo foi organizado na forma de
perguntas e respostas, com o objetivo de divulgar conceitos
aceitos internacionalmente a respeito da CCS.

O que so clulas somticas do leite?

So clulas encontradas no leite que se originam do corpo


da vaca. A maioria delas (as clulas brancas do sangue ou
leuccitos) atrada do sangue para a glndula mamria.

O que atrai essas clulas para o bere?


Qualquer agresso (fsica, qumica ou infecciosa) que a
glndula mamria sofra e que resulte em um processo
inflamatrio. A causa mais comum de agresso so infeces
principalmente as de origem bacteriana.

Qual a funo das clulas somticas?

Elas tm a funo de defender o animal de agresses


externas por microorganismos, traumatismos, cortes, substncias
qumicas, etc. Quando a agresso muito intensa, a defesa
tambm exacerbada, o que resulta em aumento exagerado de
clulas e de outras substncias que so tambm transferidas do
sangue para o leite.

As clulas somticas so todas do mesmo tipo?

Elas so principalmente leuccitos (macrfagos,


neutrfilos e linfcitos). Um nmero pequeno representado por
clulas epiteliais (1 a 2% do total). Alguns estudos,
entretanto, apontam de 10 a 20% de clulas epiteliais no leite
normal.

Qual o nmero de clulas somticas aceitvel como


normal?

O leite de vacas sadias tem geralmente menos de 50.000


clulas/ml. Aceita-se como normal (o que significa que o quarto
mamrio no est infectado) contagens de at 100.000
clulas/ml, embora alguns autores considerem como limite
aceitvel at 200.000 clulas/ml.

Qual o fator mais importante para o aumento de clulas


somticas no leite?

a presena de infeco na glndula mamria. No entanto,


um grande nmero de clulas somticas no sempre sinal
garantido de infeco no quarto mamrio. uma indicao que o
bere est respondendo a uma irritao (agresso) de qualquer
natureza.
Como na maioria dos casos, a irritao causada por
microrganismos, h uma correlao alta entre CCS e a presena
de infeco. Tem-se mostrado que a contagem a partir de
250.000/ml permite assegurar com 80% de certeza a presena de
infeco no quarto mamrio.

O aumento do nmero de clulas somticas influenciado da


mesma maneira pelos diferentes microorganismos?

No. Em um estudo publicado em 1979, nos Estados Unidos,


observou-se que um grupo de microorganismos classificado como
patgenos principais (Staphylococcus aureus, Streptococcus
agalactiae, outros estreptococos e coliformes) causaram, em
mdia, aumentos da CCS alm de 1.000.000/ml, enquanto o grupo
dos patgenos secundrios (Corynebacterium bovis e
estafilococos coagulase negativos) causaram, em mdia, aumentos
de 374.000/ml.
Deve-se considerar, entretanto, que outros fatores podem
influenciar esse quadro (a extenso e a durao da infeco, a
prvia exposio da vaca aos microorganismos, a individualidade
da resposta imunolgica de cada animal, etc).
Observa-se, ainda, variao entre os microorganismos do
mesmo grupo. Os estafilococos coagulase negativos, por exemplo,
induzem uma resposta celular mais alta que os demais patgenos
secundrios.

A contagem de clulas somticas aumenta logo aps o parto?

A CCS alta imediatamente aps o parto, mas em vacas


sadias o nmero de clulas vai sendo reduzido medida que
decresce a quantidade de colostro no leite, chegando a menos de
200.000 por ml dentro de 4-5 dias aps o parto. Na segunda
semana, a CCS reduzida para menos de 100.000 por ml.

A produo de leite e o estdio de lactao influenciam a


CCS?

Em vacas de alta produo, a CCS aumenta ligeiramente


quando a produo de leite cai para menos de 4 kg/dia.
Considera-se que a CCS do leite de vacas no infectadas maior
logo aps o parto, baixa durante a lactao e volta a aumentar
prximo secagem.
O mecanismo fisiolgico dessa variao explicado pela
variao de produo ou pelo fator diluio (nmero de clulas
por maior ou menor volume de leite produzido).
Entretanto, o aumento observado em quartos mamrios no
infectados no significativo a ponto de alterar a
interpretao diagnstica (por exemplo, a reao observada no
California Mastitis Test [CMT]).
J se observou um aumento de 80.000 clulas entre 35 dias
e 265 dias de lactao. Esse aumento no significativo em
termos de diagnstico porque se encontra na variao normal da
contagem de clulas.
Aps o parto, a CCS de uma vaca com mastite subclnica
diminui mais lentamente que a de uma vaca sadia e h um aumento
significativo medida que a vaca chega ao final da lactao.
Na vaca sadia, ao contrrio, essas diferenas no so
marcantes.
O leite de vacas mais velhas apresenta contagens de
clulas somticas mais altas?

A idade no afeta a CCS se a glndula mamria livre de


infeco. Entretanto, a reao celular contra agentes
infecciosos em vacas que tenham tido mastite aumenta com a
idade. Muitas vezes, a mastite subclnica e passa
despercebida.
Dessa forma, comum que as vacas mais velhas apresentem
CCS mais alta mesmo quando o bere aparentemente sadio. Aps
uma infeco, a CCS desses animais demora mais tempo a voltar
ao normal.

O nmero de clulas somticas permanece uniforme no mesmo


quarto mamrio?

A CCS mais alta imediatamente aps a ordenha e se mantm


assim por trs a quatro horas. Quando a produo de leite
aumenta no bere, a CCS diminui e atinge o mnimo imediatamente
antes da ordenha. Essas variaes so menores nos animais
sadios que em animais infectados.

Existem variaes dirias na CCS?

Existem variaes dirias na CCS de vacas individuais, mas


essa variao maior em animais infectados. Tal variao pode
ser causada pelas diferenas dos intervalos de ordenha e por
problemas de diluio do leite.
Quando se adota a amostra composta da produo diria (do
animal), por exemplo, a variao diria desaparece. Isso
justifica a necessidade de se realizar vrios exames do mesmo
animal e do mesmo rebanho.
Recomenda-se por isso, no mnimo, trs exames consecutivos
dos rebanhos (a intervalos semanais, quinzenais ou mensais)
para se fazer um diagnstico ou para se formular programas (por
exemplo, de pagamento por qualidade, de controle da mastite,
etc.) que incluam a CCS como parmetro.

A raa da vaca influencia a CCS?

Alguns estudos demonstram que a raa influencia a CCS.


Vacas da raa Ayrshire tm CCS mais baixas que vacas da raa
Holandesa. Essas diferenas so evidentes quando se comparam
vacas sadias e tambm vacas com infeco subclnica.
Considera-se que aproximadamente 10% das diferenas entre
a CCS de vacas devida gentica. Entretanto, essas
diferenas de CCS no so suficientes para influenciar
significativamente o diagnstico.
Em um estudo realizado com cerca de 290.000 vacas das
raas Ayrshire e Holandesa, em que se comparou a relao de CCS
entre essas raas e a produo anual de leite, as diferenas
entre raas variaram de menos de 50.000 a menos de 100.000
clulas por ml.

O estresse pode aumentar a CCS?

Alguns estudos mostram que quando a vaca est estressada,


por exemplo, quando transferida para um novo rebanho, a sua
CCS aumenta, mas esse aumento no notado quando o bere
livre de infeco. Outros exemplos de estresse (mudana das
condies atmosfricas, agitao, estresse trmico) no afetam
a CCS de vacas no infectadas. Contudo, vacas com mastite
subclnica respondem ao estresse com aumentos significativos de
CCS.

Como se pode aferir a CCS de um rebanho?

Pode-se avaliar CCS a partir de (a) amostras colhidas de


quartos mamrios individuais, (b) amostras coletadas da
produo total diria do animal e (c) amostras do leite total
do rebanho. Em alguns pases essa amostra do leite total
separada, considerando-se as vacas de primeira cria em um grupo
e as demais em outro grupo. Isso porque as primeiras tm CCS
mais baixa.

Quais os testes usados?

Vrios testes podem ser usados para avaliar a CCS. H


testes que avaliam indiretamente, como o caso do CMT que no
conta clulas, mas fornece uma estimativa do nmero. Outros
contam efetivamente as clulas.
O mtodo padro o microscpico, em que esfregaos de
leite preparados em lminas so corados e examinados ao
microscpio. Este mtodo laborioso e no apropriado para
examinar grande nmero de amostras.
Outro mtodo muito usado emprega um equipamento eletrnico
(Coulter counter) que pode ser calibrado para reconhecer e
contar clulas. Nos ltimos anos ganhou grande aceitao o
sistema que usa o princpio da fluorescncia tica (equipamento
Fossomatic, fabricado na Dinamarca).
Mais recentemente, sistemas que usam como princpio para
contagem a citometria de fluxo foram testados. Eles so:
Somascope (fabricado na Holanda), Somacount (Estados Unidos) e
ANADIS (Frana). Esses sistemas foram analisados e considerados
apropriados pelo IDF (FIL, Federao Internacional de
Laticnios) (Reichmuth, J. Mastitis Newsletter 21, 1996).

Quais as vantagens e desvantagens dos diferentes testes de


CCS no leite?

As vantagens e as limitaes, assim como o fundamento de


cada teste so apresentados na Tabela 3. Uma das
caractersticas da maioria dos equipamentos usados em
laboratrio a dificuldade de diferenciar contagens abaixo de
50.000 clulas.
A maioria deles funciona bem para contagens entre 50.000 e
1.000.000 ou mais. Um estudo recente em que se compararam
quatro equipamentos, o Somacount e o ANADIS diferenciaram
melhor as contagens abaixo de 50.000.

Qual a relao entre CMT e CCS?

A CCS dos quartos mamrios nos rebanhos geralmente


avaliada por meio do CMT. Neste teste, um pequeno volume de
leite (cerca de 2 ml) misturado com uma soluo de detergente
(lauril sulfato de sdio a 3%). Isso suficiente para coagular
o DNA das clulas presentes no leite. O teste pode ser feito ao
lado do animal, no prprio local da ordenha, usando-se uma
raquete com quatro compartimentos.
No Brasil a interpretao mais comum do CMT considera
cinco escores: negativo (normal), reao suspeita ou traos
(T), reao positiva fraca (+), reao positiva (++) e reao
fortemente positiva (+++).
Em alguns pases adota-se o critrio numrico, que varia
de 1 (negativo) a 5 (fortemente positivo). As reaes 3, 4 e 5
ou +, ++ e +++ indicam infeco. Apesar de o CMT ser um teste
subjetivo (no conta as clulas, apenas faz uma estimativa),
existe uma correlao entre os escores (1 a 5) e a CCS (Tabela
1).

Qual a diferena em termos de utilidade da contagem de


clulas de quartos mamrios ou de vacas e do leite total do
rebanho?

Os dados individuais do animal so usados para determinar


se a vaca ou o quarto mamrio tm mastite ou com a
probabilidade de estarem infectados. Tem-se demonstrado que em
80% dos casos, a CCS acima de 250.000/ml relacionada com a
presena de infeco.
A CCS do leite total do rebanho tem trs usos principais:
(a) pode ser usado para monitorar a prevalncia de mastite no
rebanho (veja a tabela 2); (b) como um indicador da qualidade
do leite cru e (c) como um indicador das condies higinicas
da produo de leite na fazenda.
Alm desses, a CCS pode ser (e ) usada em esquemas de
pagamento de leite por qualidade e como um padro internacional
de monitoramento da produo higinica e de segurana do leite.

Que tipo de monitoramento da qualidade do leite feito


nos pases desenvolvidos, com base na CCS?

Na Unio Europia h um limite de 400.000 clulas/ml para


o leite total do rebanho. A partir de 1998, mesmo o leite
destinado produo industrial ter de obedecer a este limite.
Nos Estados Unidos, o limite de 750.000 clulas, mas alguns
estados estabelecem limites mais rgidos. Em pases como
Austrlia, frica do Sul, Japo e Nova Zelndia, as exigncias
variam entre 250.000 e 500.000 clulas.

Qual a razo da preocupao com a CCS dos rebanhos?

A principal razo econmica. Diversos estudos mostram


que h crescente perda de produo de leite medida que
aumenta a CCS do leite total do rebanho. Um exemplo disso pode
ser observado na Tabela 2. Outras razes so: a interferncia
de altas CCS com a qualidade do leite e a relao entre altas
CCS e os nveis de infeco dos quartos mamrios.

Qual a relao entre CCS e a qualidade do leite?

A reduo dos parmetros de qualidade do leite detectada


quando a contagem de clulas do leite total do rebanho de
400.000/ml. H um aumento indesejvel de alguns componentes do
leite (sdio, cloretos, protenas do soro, soroalbumina,
lactoferrina, imunoglobulinas) e um decrscimo (indesejvel) de
outros componentes (gordura, lactose, casena, clcio,
potssio, etc.).
Como resultado, a produo de vrios derivados do leite,
incluindo queijos, leite em p e produtos fermentados,
prejudicada. Alm disso, a estocagem do leite pasteurizado com
alta CCS prejudicada porque seu tempo de prateleira menor.
A poltica de melhoria da qualidade do leite pela reduo
da CCS afeta a todos, desde o produtor de leite (aumento de
produo e ao melhor preo do leite, quando h programas de
incentivo pela qualidade) at a indstria processadora (melhor
rendimento, melhor qualidade e estabilidade dos derivados e
maior tempo de prateleira), com reflexos positivos no mercado,
pela maior aceitao dos produtos pelo consumidor.

Para que servem os dados de CCS?

Os dados de CCS podem ser usados para:


- Monitorar a sade do rebanho, ou, mais apropriadamente,
a sade do bere dos animais, tanto quanto a efetividade das
medidas de preveno e tratamento das infeces;

- Estabelecer polticas de controle da qualidade do leite,


em bases objetivas;

- Ampliar o conhecimento da epidemiologia (medidas de


prevalncia, incidncia, e anlise dos padres da mastite no
rebanho no decorrer do tempo) que contribuir para a
implementao e acompanhamento de programas de controle das
infeces causadas pelos patgenos contagiosos, principais
responsveis pelas mastites subclnicas;

- Monitorar a eficcia dos esquemas de tratamento da


mastite, especialmente a terapia secagem;

- Identificar deficincias de manejo e possibilitar a


recomendao de procedimentos especficos e efetivos;

- Demonstrar a importncia da mastite subclnica e


funcionar como um motivador dos programas de controle da
mastite e da melhoria da qualidade do leite.

Para que no servem os dados de CCS?

Os dados de CCS no servem:

- Como critrio para selecionar animais para tratamento


(antibitico) da mastite subclnica durante a lactao. Tem
sido demonstrado que o tratamento realizado com base na CCS no
traz benefcio econmico ao produtor e as taxas de cura das
infeces so muito baixas.

- A CCS tambm no serve para ser usada como diagnstico


da mastite, se usada isoladamente. um mtodo excelente de
triagem, que deve ser associado ao exame microbiolgico.

- Os dados tambm no so muito teis para o monitoramento


das mastites causadas por patgenos do ambiente. A prevalncia
da infeco por esses microrganismos tende a ser baixa, e mesmo
rebanhos com predominncia de problemas de mastite ambiental
podem ter CCS abaixo de 300.000 clulas/ml. As excees que
ocorrem se devem ao aumento da incidncia de mastite clnica,
em determinados perodos.
Como devem ser usados os dados de CCS?

Os dados de CCS so teis se usados e analisados em srie


(dados mensais e reunidos a intervalos trimestrais ou
semestrais, por exemplo). necessrio o resultado de vrios
exames, em seqncia, para identificar os nveis de infeco do
rebanho e determinar as tendncias de ocorrncia de novas
infeces.
Isso permitir avaliar a necessidade de implementao de
medidas corretivas ou simplesmente acompanhar as medidas
recomendadas. Deve-se considerar, tambm, a necessidade de se
trabalhar com as mdias das contagens (a mais recomendada sendo
a mdia geomtrica).

Qual a metodologia adequada para a contagem de clulas


somticas no leite?

importante observar os cuidados na coleta das amostras


(para que sejam representativas dos animais ou do leite total
do rebanho), o acondicionamento e o transporte para o
laboratrio (sob refrigerao, dentro do prazo, em recipientes
e com conservantes apropriados, etc.). No laboratrio
importante que sejam usadas metodologias padronizadas e que os
equipamentos sejam calibrados e revisados regularmente, com
superviso externa.
importante lembrar que mesmo mtodos e equipamentos
altamente sofisticados no podem corrigir os erros cometidos
por ocasio da coleta e manuseio das amostras.

Que medidas podem ser adotadas para reduzir a CCS dos


animais e dos rebanhos?

O fundamental a preveno de novas infeces da glndula


mamria, principalmente por meio de medidas higinico-
sanitrias. Estas incluem:

- Medidas gerais: reduo da prevalncia de mastite;


ateno ao manejo e instalaes (condies de estabulao,
umidade, ventilao, cuidados durante o parto, etc.)

- Intervalo entre as ordenhas: qualidade da cama e do


ambiente de circulao dos animais (limpos e secos), ateno
aos animais no perodo da secagem (aplicao de antibiticos
especficos);

- Durante a ordenha: condies de tetas (limpas e secas


antes da ordenha); desinfeco de tetas (depois, sempre, e
antes, em casos especficos); procedimentos adequados antes e
durante a ordenha (preveno de estresse, conforto do animal,
ordenha rpida e completa); higienizao e manuteno adequada
dos equipamentos de ordenha; fornecimento de rao aos animais
aps a ordenha (para evitar que se deitem).

Tabela 1. Contagem de clulas somticas (CCS) de 3.012


amostras de leite, distribudas entre diferentes classes de
escores do California Mastitis Test (CMT).
Escore doInterpretao do
CMT escore N de amostras CCS (x 1.000/ml)
1 (-) negativo 2.029 80
2 (T) reao suspeita 313 334
3 (+) fracamente positivo 311 670
4 (++) positivo 237 1.354
5 (+++) fortemente positivo 122 4.456
Fonte: Brito et al. Pesq. Vet. Bras. 17(2): 49-53, 1997.

Tabela 2. Relao entre Contagem de Clulas Somticas (CCS) e


percentual de perda de produo de leite.
CCS do leite Quartos mamrios Decrscimo da
total do infectados (%) produo
rebanho (%)
200.000 6 0*
500.000 16 6
1.000.000 32 18
1.500.000 48 29
*Perda calculada como um percentual da produo esperada a
200.000 clulas/ml.
Fonte: NMC. Current concepts of bovine mastitis. 1996.
Tabela 3. Fundamentos, vantagens e limitaes dos testes de
contagem de clulas somticas no leite.
Teste Fundamento Vantagens e limitaes
Contagem As clulas so o teste padro,
microscpica direta contadas em uma reconhecido pelo IDF (FIL).
lmina, ao laborioso, cansativo
microscpio. (induz a erros de
contagens); no apropriado
para grande nmero de
amostras.
Contador tipo Usa um contador Mtodo amplamente usado.
Coulter eletrnico que pode Apresenta limitaes para o
ser calibrado para teste de grande nmero de
reconhecer e contar amostras e por no ser
clulas. informatizado.
tico-fluorescente Conta clulas que tm Mtodo automtico, barato,
(equipamento intensidade mnima de de fcil processamento e
Fossomatic) fluorescncia, devido muito usado na maioria dos
colorao do DNA pases desenvolvidos. Os
nuclico. vrios modelos se adaptam a
diferentes exigncias dos
laboratrios. Limitaes:
preo do equipamento e
manuteno (dependendo da
regio).
Citometria de fluxo Usa um sistema tico Praticamente as mesmas do
(equipamentos: (laser) para detectar equipamento Fossomatic.
Somascope, Somacount e contar clulas,
e ANADIS) cujos ncleos so
corados com uma
substncia qumica
(colorao do DNA).
Wisconsin Mastitis O leite misturado um mtodo indireto.
Test (WMT); com um detergente e o Inapropriado para grande
Viscosmetro DNA das clulas se nmero de amostras. No
torna viscoso. Quanto permite automao. No
mais clulas, mais diferencia contagens baixas
DNA e mais de clulas.
viscosidade. A
velocidade de
passagem da mistura
leite+detergente pelo
orifcio de um tubo
a medida do nmero e
clulas.
California Mastitis uma adaptao do prtico, barato e pode ser
Test (CMT) WMT em que o aplicado ao lado do animal,
detergente com resultado imediato.
misturado com o leite Subjetivo (a interpretao
em uma raquete e o pode variar entre pessoas) e
grau de formao do permite apenas uma
gel (viscosidade) estimativa do nmero de
estimado clulas.
visualmente).
Fonte: compilao de diversos autores.

Jos Renaldi Feitosa Brito e Maria


Aparecida V. P. Brito, pesquisadores
da Embrapa-Gado de Leite.
e-mail: kbrito@artnet.com.br