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Instituto Superior Tcnico

Departamento de Engenharia Qumica

Guia dos Laboratrios III

(Bloco de Mtodos pticos)

2005/2006

M. Amlia Santos
 2

Prefcio

Este guia contm as tcnicas dos trabalhos prticos do bloco de Mtodos

Espectroscpicos da disciplina de Laboratrios III (do 3ano da Licenciatura em Qmica).
Os captulos introductrios esto reduzidos ao mnimo indispensvel. Inclui-se
ainda uma cpia da folha de resultados (boletim de anlise) a apresentar no final de cada
aula, o resumo da constituio de um relatrio completo e ainda (em apndice) notas
resumo sobre o tratamento estatstico dos resultados experimentais.
 3

ndice

Apresentao dos Mtodos 4

Calendrio das Aulas 5
Relatrio 6
Boletim da Anlise 7
I-Tcnicas de Mtodos Espectroscpicos (UV/Vis) 8
1) Mtodos de Absoro Molecular
1-1- Anlise de Multicomponentes de um Comprimido 8
1-2- Anlise de cido Acetylsaliclico ou Paracetamol num Comprimido 12
2) Mtodos de Absoro Atmica
2-1- Doseamento do Ferro num Cereal por Espectroscopia de Absoro Atmica
(chama) 16
2-2- Doseamento do Clcio num Sumo por Espectroscopia de Absoro Atmica
(chama) 19
2-3- Doseamento do Cobre num Cereal por Espectroscopia de Absoro Atmica
(Cmara) 21
3) Mtodos de Emisso por Fluorescncia Molecular
3-1 - Determinao Fluorimtrica do Quinino numa gua Tnica. 24
3-2 Determinao da Riboflvina (Vitamina B2)num comprimido 26
II- Anexo: Mtodos de Clculo e Erros em Determinaes Analticas 29
1 Mtodos de Clculo de Concentraes 29
2 Preciso, Exactido, Sensibilidade e Limite de Deteco 32
3 Anlise Estatstica dos Erros (Sumrio) 33
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Laboratrios III
I- Mtodos Espectroscpicos

I.1. ESPECTROFOTOMETRIA de ABSORO MOLECULAR

-Determinao de multicomponentes (cido acetilsaliclico, paracetamol e
cafena num comprimido de Anadin-Extra)
- Anlise de cido Acetilsaliclico ou Paracetamol num Comprimido.

I.2-1. ESPECTROFOTOMETRIA de ABSORO ATMICA (chama)

Determinao do clcio em sumos
Determinao do ferro num cereal

I.2-2. ESPECTROFOTOMETRIA de ABSORO ATMICA

(cmara de grafite) (demonstrao)
Determinao do cobre num cereal ou sumo

I.3. ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCNCIA MOLECULAR

-Determinao do qunino numa gua tnica
- Doseamento da vitamina B2 num comprimido
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Laboratrios III-Bloco de Mtodos pticos (2005-2006)

Programao das Aulas*

5f
- -
Setembro 19 Apresentao e Erros
Setembro 29 Mtodos pticos 1 (LQA)
Espectroscopia Molecular (2 AM + 1 FM)
G1+G2-.Determinao de multicomponentes num comprimido por
Espectrofotometria de Absoro Molecular
G3- Determinao do quinino em gua tnica por Espectrofluorimetria.
Outubro 6 Mtodos pticos 2 (LQA)
Espectroscopia Molecular (1AM+2 FM)
G1- Determinao do quinino em gua tnica por Espectrofluorimetria.
G2- Determinao da vitamina B2 num sumo (ou num comprimidao) por
Espectrofluorimetria.
G3-.Determinao de multicomponentes num comprimido por
Espectrofotometria de Absoro Molecular

Outubro 20 Mtodos pticos 3 (LQA)

Espectroscopia de Absoro Atmica (AA)
G1-3- Determinao do clcio num sumo (ou do Fe num cereal) por
Espectroscopia de Absoro Atmica

Notas:
- Cada turma tem 3 grupos (Gi, i =1-3) cujas aulas de lab tm a durao de 4 h.
- No incio de cada aula cada aluno efectuar um miniteste escrito (2 perguntas) referente ao trabalho Lab.
- Os alunos tm que ter um caderno de lab onde apontam os resultados.
- No final de cada aula entregam uma folha de resultados ou boletim de anlises (ver modelo)
 6

RELATRIO
I. RESUMO
Determinao de .. existente em (amostra - referir a origem) pela tcnica
de . . Obteve-se .. (erro) de produto por . de amostra.

II. INTRODUO (1pag)

a) Fundamento do mtodo
b) Expresso que relaciona a grandeza medida com a
concentrao. Definio dos parmetros envolvidos na equao.
c) Limite de deteco da tcnica.

III. PARTE EXPERIMENTAL

Alteraes introduzidas tcnica; referir as massas e aos volumes utilizados
ma preparao dos padres e das amostras; referncia a todas as condies
experimentais (por exemplo: comprimento de onda da determinao, caudal de
aspirao em absoro atmica; tipo de aparelho utilizados e a respectivas marcas.

IV. RESULTADOS
a) Tabelas com resultados (por exemplo grandezas
medidas versus volume ou concentrao).
b) Grficos (por exemplo rectas de calibrao).
c) Determinao da quantidade de produto referido
amostra (em % sempre que possvel)
d) Clculo dos erros.

V. DISCUSSO E CRTICA

a)Dos resultados
b) Da tcnica

VI. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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Boletim da Anlise Efectuada

Ttulo:

Amostra analisada:

Mtodo/Aparelho:

Resultado Final:

Tabela dos Resultados:

Cp(ppm) L

Amostra

Grfico A vs S: ver folha em anexo

Clculos da concentrao na amostra inicial (com erros):

a) Equao da recta de calibrao:
b) Concentrao da amostra tirada da recta
c) Concentrao na amostra inicial
Comentrios ao trabalho (resultado obtido):

Nomes
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I-Mtodos Espectroscpicos
1-1-ANLISE DE MULTICOMPONENTES DE UM
COMPRIMIDO POR ESPECTROFOTOMETRIA DE UV/VIS

INTRODUO
Esta experincia envolve a determinao de quantidade de aspirina, paracetamol e
cafena nos comprimidos de Anadin-extra, um analgsico venda nas farmcias. A aspirina
tem propriedades como analgsico, antipirtico e anti-inflamatrio. O paracetamol tem
maior eficcia do que a aspirina como antipirtico. A cafena usada devido s suas
propriedades diurticas.1

Existem alguns problemas na anlise destas drogas, incluindo a hidrlise da

aspirina e a dependncia do pH no caso do paracetamol.

O
O CH3
HN
CH3
O
CO2H

OH
Aspirina Paracetamol
(cido acetilsaliclico) (4-hidroxiacetanilide)

O
CH 3
H 3C C N
N C
C H
C C
O N N

CH 3
Cafena

Anlise Quantitativa de Anadin-extra

Uma vez que a aspirina e o seu produto de hidrlise (cido saliclico) tm espectros
de absoro do ultravioleta diferentes, a soluo do comprimido de Anadin-extra deve ser
fortemente bsica para assegurar que toda a aspirina se hidrolizou e apenas o cido
saliclico est a ser analizado. Do mesmo modo, uma vez que o paracetamol sensvel ao
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pH e as formas cida e bsica tm diferentes espectros de absoro no UV, o facto da

soluo estar fortemente bsica, assegura que o paracetamol est todo na forma bsica.
Portanto, a pH elevado, a soluo do comprimido de Anadin-extra contm cido
saliclico (forma bsica), a forma bsica do paracetamol e a cafena.
Estes trs componentes tm espectros de UV diferentes e por isso eles podem ser
analizados simultneamente, atravs da medio da absorvncia da soluo a trs
comprimentos de onda diferentes e resolvendo o sistema de 3 equaes.
Com efeito a absorvncia total da soluo comprimido a cada comprimento de
onda devida soma das contribuies dos trs componentes presentes. (propriedade da
aditividade da Lei de Beer)
A1 = eA1 CA + eP1 CP + eC1 CC
A2 = eA2 CA + eP2 CP + eC2 CC
A3 = eA3 CA + eP3 CP + eC3 CC
em que 1, 2 e 3 so os trs comprimentos de onda aos quais se fazem as medies; CA, CP,
e Cc so as concentraes de aspirina, paracetamol e cafena, respectivamente; os e so as
nove absortividades das trs componentes aos trs comprimentos de onda.
O sistema das trs equaes pode ser resolvido com a calculadora ou usando
matemtica de matrizes para resolver uma equao matricial:
M = AC ou AC = M
C = A-1 M (A-1 o inverso de matriz A)

TCNICA EXPERIMENTAL
A- Preparao das Solues
1) Soluo 0.1M Na OH (500 mL)
2) Solues de aspirina
2-1- Soluo inicial 1g / L

Pese rigorosamente cerca de 1 g de cido acetilsaliclico (aspirina) num copo,

adicione alguns mL de metanol (cerca de 10mL) para dissolver o slido, transfira para um
balo aferido de 1 L, e dilua com gua desionizada at ao trao e agite bem.
2-2 Soluo de trabalho
Prepare uma soluo em que toda a aspirina tenha sido hidrolizada a cido saliclico
pipetando 5 mL da soluo de partida para um balo volumtrico de 100 mL, adicionando
40 mL de soluo 0.1M NaOH e diluindo at ao trao com gua desionizada. Agite bem e
deixe em repouso 10 min. para assegurar que toda a aspirina hidrolizada a cido
saliclico.
3 Solues de paracetamol
3-1 Soluo inicial 1g/L
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Pese rigorosamente cerca de 1 g de paracetamol (4-acetamidofenol) para um copo,

adicione alguns mL de metanol (cerca de 10 mL)at dissolver e transfira para o balo de
1L, diluindo com gua (agite bem).
3-2 Soluo de trabalho
Prepare uma soluo em que todo o paracetamol esteja na forma bsica, pipetando
2 ml de soluo inicial de paracetamol para um balo volumtrico de 100 ml, adicionando
40 ml de soluo 0.1M Na OH, e depois diluindo at ao trao com gua.
4 - Solues de cafena
4-1 Soluo inicial (Proceda como nas solues 3)
4-2 Soluo de trabalho (Proceda como nas solues 3)
5 Solues de Anadin-Extra
5-1 Soluo inicial (100mg / 100 mL)
Esmague um comprimido num almofariz at obter um p muito fino. Pese
rigorosamente cerca de 100 mg do p num copo, adicione alguns mL de metanol e agite
durante alguns minutos. Transfira ento para o balo volumtrico e dilua at ao trao com
gua.
5-2 - Soluo de trabalho
Filtre a soluo inicial, pipete 2 mL desta solua para um balo de 100 mL, e
proceda como em 2-2. Esta soluo instvel e deve ser usada apenas at 1-2 h depois de
ser preparada.
6 - Calcule a mdia da massa dos comprimidos de Anadin-extra
Pese 7 comprimidos e calcule a mdia.
7 - Soluo padro
Prepare em bales volumtricos de 50 mL prepare 4 solues padro para a aspirina,
paracetamol e cafena, a partir das correspondentes solues de trabalho, pipetando 5, 10,
20 e 25 mL para bales volumtricos de 50 mL e diluindo at ao trao com gua
desionizada.

B - Parte Instrumental

1 Ligue o aparelho e faa acerto do zero, do aparelho com a soluo do branco nas 2
clulas. O aparelho traa uma linha de base recta, (fazer o varrimento de comprimento de
onda na gama 230-340 nm e absorvncia 0-0.5.
Para um resto das medies deixar a soluo de branco na clula de referncia
(posio posterior).
2 Para cada um dos componentes, traar o espectro da soluo mais concentrada dos
padres. Determine o comprimento de onda de mxima absoro para cada um dos
componentes o qual derver ser cerca de 296 nm (aspirina, na verdade cido saliclico),
257 nm (paracetamol na forma bsica) e 273 nm (cafena).
3. Para cada componente mea as absorvncias dos padres e amostra aos trs
comprimentos de onda determinados anteriormente. A absorvnciaamostra dever cair
dentro da gama de calibrao, diluindo se necessrio.
 11

C- Clculos
1)Trace as 3 curvas de calibrao para cada um dos trs componentes (use concentraes
em mg/L) e calcule as correspondentes 33 absortividades ().
Escreva o sistema das 3 equaes lineares a trs incgnitas. Para o resolver,
construa a matrix A das absortividades correspondentes ao sistema AC = M, calcule A-1 e
as concentraes dos trs componentes na soluo do comprimido, multiplicando A-1 pela
matriz das absorvncias (M)
C = A-1M.
Calcule a concentrao (mg/comprimido) dos trs componentes no comprimido.

BIBLIOGRAGIA
1) M.L. Simes Gonalves, Mtodos Instrumentais de Anlise de Solues, Fundao
Calouste Gulbenkian,1889, cap.2.
2) D. A. Skoog and J.J. Leary, Principles of Instrumental Analysis, 4th Edition, Saunders,
1992, cap. 7 (pg. 123-149) e cap. 8 pg. 150-175.
3) J. Kerkay, J. Chem. Ed., 1979, 56, 331-333.
 12

ANLISE DE CIDO ACETYLSALICLICO OU PARACETAMOL

NUM COMPRIMIDO POR ESPECTROFOTOMETRIA DE UV/VIS

INTRODUO

Esta experincia envolve a determinao da quantidade de aspirina ou paracetamol

num comprimido, venda nas farmcias. A aspirina tem propriedades como analgsico,
antipirtico e anti-inflamatrio. O paracetamol tem maior eficcia do que a aspirina como
antipirtico. Existem alguns problemas na anlise destas drogas, incluindo a hidrlise da
aspirina e a dependncia do pH no caso do paracetamol.

O
O CH3
HN
CH3
O
CO2H

OH

Aspirina Paracetamol
(cido acetilsaliclico) (4-hidroxiacetanilide)

Anlise quantitativa de um comprimido

Uma vez que a aspirina e o seu produto de hidrlise (cido saliclico) tm espectros
de absoro do ultravioleta diferentes, a soluo do comprimido deve ser fortemente bsica
para assegurar que toda a aspirina se hidrolizou e apenas o cido saliclico est a ser
analizado. Do mesmo modo, uma vez que o paracetamol sensvel ao pH e as formas cida
e bsica tm diferentes espectros de absoro no UV, o facto da soluo estar fortemente
bsica, assegura que o paracetamol est todo na forma bsica. Portanto, a pH elevado, a
soluo do comprimido em estudo contm ou o cido saliclico (forma bsica) ou a forma
bsica do paracetamol.

O mtodo espectrofotomtrico que vamos utilizar para a determinao de um destes

componentes (acido acetilsaliclico ou paracetamol) baseia-se no facto destes apresentarem
absoro de radiao electromagntica UV, devendo a absorvncia medida seguir a lei de
Lambert-Beer:

A = bc
 13

A - absorvncia

- absortividade molar

b - espessura da clula

c - concentrao molar da espcie

importante realar que, neste tipo de determinao, em que apenas se pretende

dosear um componente, a amostra a utilizar no poder conter simultneamente os dois
componentes acima referidos (nem outros constituintes que apresentem absores de
radiao na gama do espectro de absoro do componente em estudo, como ex. a cafena,
ver fig.). Neste caso ter-se-ia que optar por uma determinao simultnea, tendo em conta a
aditividade da lei de Beer.

TCNICA EXPERIMENTAL

A- Preparao das Solues

A-1- Solues para a determinao da aspirina

1) Soluo 0.1 M NaOH (500 mL)

2) Solues de aspirina

2-1- Soluo inicial (1g/L)

Pese rigorosamente cerca de 1 g de cido acetilsaliclico (aspirina) num copo,

adicione alguns mL de metanol (cerca de 10 mL) para dissolver o slido, transfira para um
balo aferido de 1 L, e dilua com gua desionizada at ao trao e agite bem.

2-2 Soluo de trabalho

Prepare uma soluo em que toda a aspirina tenha sido hidrolizada a cido saliclico
pipetando 5 mL da soluo de partida para um balo volumtrico de 100 mL, adicionando
40 mL de soluo 0.1 M NaOH e diluindo at ao trao com gua desionizada. Agite bem e
deixe em repouso 10 min. para assegurar que toda a aspirina hidrolizada a cido
saliclico.

A-2 - Solues para a determinao do paracetamol

 14

1) Soluo 0.1 M NaOH (500 mL)

2) Solues de paracetamol

2-1 Soluo inicial (1g/L)

Pese rigorosamente cerca de 1 g de paracetamol (4-acetamidofenol) para um copo,

adicione alguns mL de metanol (cerca de 10 mL)at dissolver e transfira para o balo de
1L, diluindo com gua (agite bem).

2-2 Soluo de trabalho

Prepare uma soluo em que todo o paracetamol esteja na forma bsica, pipetando
2 mL de soluo inicial de paracetamol para um balo volumtrico de 100 mL, adicionando
40 mL de soluo 0.1 M NaOH, e depois diluindo at ao trao com gua.

A-3 Solues de Comprimido

1) Soluo inicial (100 mg/100 mL)

Esmague um comprimido num almofariz at obter um p muito fino. Pese

rigorosamente cerca de 100 mg do p num copo, adicione alguns mL de metanol e agite
durante alguns minutos. Transfira ento para o balo volumtrico e dilua at ao trao com
gua.

1-2 - Soluo de trabalho

Filtre a soluo inicial, pipete 2 mL desta solua para um balo de 100 mL, e
proceda como em 2-2. Esta soluo instvel e deve ser usada apenas at 1-2 h depois de
ser preparada.

A-4 Solues Padro

Em bales volumtricos de 50 mL, prepare 5 solues padro para a aspirina e

paracetamol, a partir das correspondentes solues de trabalho, pipetando 5, 10, 15, 20 e 25
mL para bales volumtricos de 50 mL e dilua at ao trao com gua desionizada.

B - Parte Instrumental
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1 Ligue o aparelho e faa o acerto do zero do aparelho com a soluo do branco nas duas
clulas. O aparelho traa uma linha de base recta (fazer o varrimento de comprimento de
onda na gama 230-340 nm e absorvncia 0.0-0.5). Para o resto das medies deixar a
soluo de branco na clula de referncia (posio posterior).

2 Trae o espectro da soluo mais concentrada dos padres. Determine o comprimento

de onda de absoro mxima do componente em estudo, o qual dever ser cerca de 296 nm
(aspirina, na verdade cido saliclico) e 257 nm (paracetamol na forma bsica).

3. Para o componente a dosear, mea as absorvncias dos padres e da amostra ao

comprimento de onda determinado anteriormente. A absorvncia da amostra dever cair
dentro da gama de calibrao, diluindo se necessrio.

4 Para a determinao da concentrao na amostra, calcule a massa dos comprimidos

(pese 7 comprimidos e calcule a mdia).

BIBLIOGRAFIA

1) M.L. Simes Gonalves, Mtodos Instrumentais de Anlise de Solues, Fundao

Calouste Gulbenkian,1989, cap.2.

2) D.A. Skoog and J.J. Leary, Principles of Instrumental Analysis, 4th Edition, Saunders,
1992, cap. 7 (pg. 123-149) e Cap. 8, pg. 150-175.

3) J. Kerkay, J. Chem. Ed., 1979, 56, 331-333.

 16

2-1- DOSEAMENTO DO FERRO NUM CEREAL POR

ESPECTROSCOPIA DE ABSORO ATMICA

1. INTRODUO

A absoro atmica um mtodo de chama em que esta usada para atomizar uma
soluo, mas no para excitar os tomos a um estado de energia mais elevado, ao invs do
que acontece na fotometria de chama. O facto de a chama ser apenas utilizada para
atomizar a soluo elimina grande parte das interferncias presentes nesta ltima tcnica.
A excitao , no caso da absoro atmica, produzida por uma lmpada cujo
ctodo emissor oco e feito do elemento a determinar, emitindo radiaes com as
frequncias caractersticas desse elemento. Os tomos neutros, livres, no estado de mais
baixa energia, existentes na chama podem absorv-las, incluindo a frequncia de
ressonncia correspondente transio do estado fundamental para o nvel excitado de
mais baixa energia. Estes tomos excitados voltam depois ao estado fundamental, podendo
emitir energia radiante com a frequncia de ressonncia, mas esta transmitida em todas as
direces e a fraco detectada pelo espectrofotmetro no produz perturbao notvel na
medida da radiao no absorvida.
A radiao que passou atravs da chama, com o elemento a determinar e com o
solvente, vai em seguida a um sistema de seleco de comprimentos de onda e, depois, a
sua intensidade medida num detector, determinando-se qual a percentagem que foi
absorvida. Num espectrofotmetro de absoro atmica, munido dum registador, mede-se a
absoro em relao linha de base traada com o solvente.
A absorvncia e a concentrao esto relacionadas pela lei de Lambert-Beer

- log T = - log I / Io = A = a b c

em que

I - intensidade de radiao transmitida

Io - intensidade de radiao incidente
T - transmitncia
A - absorvncia
 17

a - absortividade (constante para cada espcie de solvente)

b - espessura do meio absorvente (neste caso a chama)
c - concentrao

2. PARTE EXPERIMENTAL

2.1 Material e aparelhos

- Material corrente de laboratrio

- Espectrofotmetro de absoro atmica
- Lmpada de ctodo oco de ferro

2.2 Solues a preparar

- 1 l de HCl (1 M)
- 250 ml de uma soluo 100 ppm em ferro a partir de FeCl3 usando como solvente
a soluo de HCl (1 M); por diluio desta soluo preparar 100 ml de uma soluo 10 ppm
em ferro usando novamente o HCl (1M) como solvente, por diluio desta prepare 50 ml de
uma soluo 1 ppm em ferro novamente em HCl (1M).

2.3 Tcnica

Preparao dos padres

Para bales de 25 ml pipete 10, 20, da soluo 1 ppm em ferro e 5, 10, 15 ml da

soluo 10 ppm em ferro; perfaa ao trao com HCl (1M). Prepare tambm um branco.

Preparao da amostra

Pese rigorosamente cerca de 2 gramas do produto a analisar num Erlenmeyer de 250

ml e adicione-lhe 50 ml da soluo de HCl (1M). Tape o copo com um vidro de relgio e
leve a ferver durante 30 minutos. Agite, de vez em quando, com uma vareta, no deixando
que haja projeces da amostra para fora do copo. Se a evaporao for muito intensa,
reduza o aquecimento e, se necessrio, adicione mais alguns mililitros de HCl (1M).
 18

Deixe arrefecer e filtre ento a soluo para um balo de 100 ml. Perfaa o volume
com a soluo de HCl (1M). Se tiver indicao do fabricante sobre o teor em ferro no
produto a analisar, faa uma ou duas diluies de modo a ter uma concentrao em ferro na
soluo resultante compreendida entre as concentraes dos padres.
Caso no tenha aquela indicao proceda por tentativas at obter esta situao.
Use sempre HCl (1M) como solvente.
Leve as solues padro e amostra ao aparelho de absoro atmica, depois de
escolhidas as condies experimentais para a sua utilizao, mea as absorvncias das
vrias solues.
Use o mtodo da recta de calibrao para determinar a concentrao da amostra na
soluo levada ao aparelho e a partir da calcule o erro estatstico associado a esta
determinao.

3. BIBLIOGRAFIA

LASWICK, P. H. , J. Chem. Ed., 50 (1973), 132.

 19

2-2- DETERMINAO DO CLCIO EM SUMOS POR

ESPECTROSCOPIA DE ABSORO ATMICA

1. INTRODUO

A absoro atmica um mtodo de chama em que esta usada para atomizar uma
soluo, mas no para excitar os tomos a um estado de energia mais elevado, ao invs do
que sucede na fotometria de chama. O facto de a chama ser apenas utilizada para atomizar a
soluo elimina parte das interferncias presentes nesta ltima tcnica.
A excitao , no caso da absoro atmica, produzida por uma lmpada cujo
ctodo emissor feito do elemento a determinar e emite radiaes com as frequncias
caracteristicas desse elemento. Os tomos neutros, livres, no estado de mais baixa energia
existentes na chama podem absorv-las, incluindo a frquncia de ressonncia
correspondente transio do estado fundamental para o nvel excitado de mais baixa
energia. Estes tomos excitados voltam depois ao estado fundamental, podendo emitir
energia radiante com a frequncia de ressonncia, mas esta transmitida em todas as
direces e a fraco detectada pelo espectrofotmetro no produz perturbao notvel na
medida da radiao no absorvida.
A radiao que passou atravs da chama, com o elemento a determinar e com o
solvente, vai em seguida a um sistema de seleco de comprimentos de onda e depois a sua
intensidade medida num detector, determinando-se qual a percentagem que foi absorvida.
Num espectrofotmetro de absoro atmica, munido dum registador, mede-se a absoro
em relao linha de base traada com o solvente.
A absorvncia e a concentrao esto relacionadas pela lei de Lambert-Beer.

I
log T = log = A=abc
I0

em que

I - intensidade de radiao transmitida

I - intensidade de radiao incidente
T - transmitncia
A - absorvncia
a - absortividade (constante para cada espcie absorvente)
b - espessura do meio absorvente (neste caso a chama)
c - concentrao
 20

2. PARTE EXPERIMENTAL

2.1. Material e aparelhagem

- material corrente de laboratrio

- espectrofotmetro de absoro atmica
- lmpada de ctodo oco de clcio
- centrfuga

2.2. Solues a preparar

- 1 l soluo 500 g/ml em Ca, a partir de carbonato de clcio (adicione HCl

gota a gota at dissolver).
- 250 ml soluo 100 g/ml em Ca, a partir da soluo anterior.
- 100 ml soluo 5 % em La, a partir de xido de lantneo (La2O3 ,
adicione gota a gota at se dissolver).
- HCl (6 M).

2.3. Tcnica

Preparao da amostra

Filtre cerca de 50 ml de sumo por um filtro de poros apertados. Se necessrio

centrifuge previamente a amostra de modo a obter um lquido lmpido.

Determinao do clcio

Em bales de 100 ml prepare uma gama de 5 solues-padro de concentrao

compreendida entre 0 e 7 ppm em Ca a partir da soluo 100g/ /ml. Adicione a todas elas
10 ml da soluo de La, 20 ml da soluo de HCl e 5 ml de sumo. Prepare ainda um branco
para calibrar o aparelho.
Determine o teor em Ca no sumo pelo mtodo de adio de padro.

3. BIBLIOGRAFIA

. A. N. Strohl, J. Chem. Educ., vol. 62, n 4, pg. 343 (1985).

. M. Lurdes S. S. Gonalves, Mtodos Instrumentais para Anlise de Solues, Ed.
Fundao Calouste Gulbenkian, Lisboa (1983).
 21

2-3- DOSEAMENTO DO COBRE NUM CEREAL POR

ESPECTROSCOPIA DE ABSORO ATMICA (CMARA DE
GRAFITE)

1. INTRODUO

A absoro atmica com cmara de grafite um mtodo de absoro em que a

cmara (tubo de grafite) aquecida electricamente) usada para atomizar uma soluo, mas
no para excitar os tomos a um estado de energia mais elevado. O facto de o tubo de
grafite (atomizador) ter reduzidas dimenses (l = 3 cm), de a amostra no ser aspirada e
nublizada e atomizada em meio comburente, como no mtodo de chama, elimina grande
parte das interferncias presentes nesta ltima tcnica e tenha vrias vantagens. Entre estas
destacam-se o menor volume de amostra, o mais baixo limite de deteco e menores
interferncias.

A excitao produzida por uma lmpada cujo ctodo emissor oco e feito do
elemento a determinar, emitindo radiaes com as frequncias caractersticas desse
elemento. Os tomos neutros, livres, no estado de mais baixa energia, existentes na cmara
podem absorv-las, incluindo a frequncia de ressonncia correspondente transio do
estado fundamental para o nvel excitado de mais baixa energia.
A radiao que passou atravs do tubo de grafite, com o elemento a determinar,
vai em seguida a um sistema de seleco de comprimentos de onda e, depois, a sua
intensidade medida num detector, determinando-se qual a percentagem que foi absorvida.
A amostra que pipetada para a cmara sujeita a vrios passos de variao de
temperatura com o tempo cuja funo evaporao ao solvente, reduo a cinzas e
atomizao.
A absorvncia e a concentrao na soluo esto relacionadas pela lei de Lambert-
Beer (vlida no percurso ptico).

-log T = -log I/Io = A = A = a b c

em que
I - intensidade de radiao transmitida
Io - intensidade de radiao incidente
T - transmitncia
 22

A - absorvncia
a - absortividade (constante para cada espcie de solvente)
b - espessura do meio absorvente (neste caso a cmara)
c - concentrao

2. PARTE EXPERIMENTAL

2.1 Material e aparelhos

- Material corrente de laboratrio

- Espectrofotmetro de absoro atmica com cmara de grafite (ver Fig.1)
- Lmpada de ctodo oco de cobre

2.2 Solues a preparar

- 11 de HCl (1 M)
- A partir de uma soluo stock 1000 ppm em cobre (Cu(NO)2) prepare uma
soluo 1000 ppb em cobre em soluo de HCl (1 M); preparar 100 ml de uma
soluo 50 ppb em cobre usando novamente a soluo de HCl (1M) como
solvente.

2.3 Tcnica

Preparao de padres (0, 5, 10, 15, 20, 25 ppb)

Esta preparao feita automaticamente pelo aparelho, usando o branco (HCl,
1M) e a soluo mais concentrada (50 ppm), aps prvia programao de concentrao
dos padres no aparelho.

Preparao da amostra

Pese rigorosamente cerca de 1,5 gramas do cereal a analisar num Erlenmyer de

250 ml e adicione-lhe 50 ml da soluo de HCl (1M). Tape o copo com um vidro de
relgio e leve a ferver durante 30 minutos. Agite, de vez em quando, com uma vareta,
no deixando que haja projeces da amostra para fora do copo. Se a evaporao for
muito intensa, reduza o aquecimento e, se necessrio, adicione mais alguns mililitros de
HCl (1M).

Deixe arrefecer e filtre ento a soluo para um balo de 100 ml. Perfaa o
volume com a soluo de HCl (1M). Se tiver indicao do fabricante sobre o teor em
 23

cobre no produto a analisar, faa uma ou duas diluies de modo a ter uma concentrao
em cobre na soluo resultante compreendida entre as concentraes dos padres.
Faa o programa das concentraes dos padres, conforme indicao no
aparelho.
Faa em seguida o programa no que concerne s temperaturas dos vrios passos
(evaporao, reduo a cinzas e atomizao e limpeza) velocidade e tempo de
aquecimento e fluxo de azoto de um modo semelhante ao representado na Tabela I.
Introduza o branco e a soluo mais concentrada e a amostra em cuvetes do
tambor de doseamento automtico ("autosampler").
Recolha os dados das absorvncias referentes aos padres e amostras e use o
mtodo da recta de calibrao para determinar a concentrao da amostra na soluo
levada ao aparelho e a partir da calcule o erro estatstico associado a esta determinao.

3. BIBLIOGRAFIA

LASWICK, P.H., J. Chem. Ed. 50 (1973), 132.

B. WELZ, Atomic Absorption Spectroscopy, VCH, Germany, 1985.

Tabela I. Programao da cmara de grafite.

Temperatura (oC) Tempo (s) Fluxo de N2 Leitura (ON/OFF)

85 5 3.0 OFF
95 40 3.0 OFF
120 10 3.0 OFF
1000 5 3.0 OFF
1000 1 3.0 OFF
1000 2 0 OFF
2300 1.1 0 ON
2300 2 0 ON
2300 2 3.0 OFF
 24

3.1-DETERMINAO FLUORIMTRICA DO QUININO EM GUA

TNICA

1 - Introduo

O presente trabalho ilustra as potencialidades da fluorescncia molecular como

mtodo analtico.
O quinino numa soluo de H2SO4 (0,05 M) apresenta duas bandas de absoro
centradas em 250 e 350 nm. Qualquer que seja o comprimento da onda de excitao o
mximo da emisso situa-se sempre a 450 nm.

CH2

HO
N

H3CO

Quinino

Espectro de excitao ( ) e emisso ( ) de fluorescncia do sulfato de quinino

em H2SO4 (0,05M)

O quinino uma substncia muito utilizada como padro e para muitos fluormetros
comerciais a sua sensibilidade definida em termos de fluorescncia de quinino.
Interferncias - O quinino pode existir na gua tnica sob a forma de hidrocloreto ou
sulfato de quinino at um contedo mximo de 65,4 ppm de quinino.
A nica interferncia que pode aparecer na dosagem do quinino na gua tnica o
io cloreto que actua como agente de extino da fluorescncia do quinino. No entanto esse
efeito pode ser desprezado se a concentrao em io cloreto for inferior a 0,4.10-3 M como
acontece vulgarmente. Para a concentrao de io cloreto indicada o erro cometido
inferior a 0,4%.

2 - Parte Experimental

2.1 - Reagentes

. sulfato de quinino dihidratado: (C20H24N2O2)2.H2SO4.2H2O

. cido sulfrico concentrado, pr-anlise.

2.2 - Material e aparelhagem

 25

. espectrofluormetro*/ fluormetro
. material corrente de laboratrio

2.3 - Preparao de solues

100 ml - soluo de cido sulfrico 1 M. Fazer uma toma de 14 ml de H2SO4

concentrado (36 N) para um balo de 50 ml contendo cerca de 25 ml de gua
destilada e depois perfazer ao trao (a concentrao desta soluo 5M). Diluir a
soluo de 1/5.

500 ml - soluo de cido sulfrico 0,05 M por diluio da soluo anterior.

1 l - soluo padro de sulfato de quinino, 100 ppm em quinino. Pesar 120,7 mg de
sulfato de quinino dihidratado e transferir para um balo de 1000 ml. Juntar 50
ml de H2SO4 1 M e perfazer ao trao com gua destilada.
50 ml - soluo intermdia 10 ppm quinino. Diluir de 1/10 a soluo anterior,
perfazendo o volume com H2SO4 0,05 M.
Soluo amostra (gua tnica) - Fazer uma toma de 5 ml de gua tnica para um balo de
250 ml e perfazer ao trao com H2SO4 0,05 M.

2.4 Tcnica

Preparar padres de concentrao 0,2 ; 0,5 ; 0,8 ; 1,2 ; 1,6 e 2,0 ppm de quinino em bales
de 25 ml, perfazendo sempre o volume com H2SO4 0,05 M. Prepare ainda um branco.
Aps a calibrao do aparelho, ler as intensidades de emisso para cada uma das solues.
Tendo em conta a diluio da amostra determinar o teor de quinino na gua tnica
analisada e comparar o resultado obtido com as indicaes do rtulo.

Nota: 1)-O hidrocloreto de quinino comercial contm duas molculas de gua:

C20H24N2O2.HCl.2H2O.
2)- Caso use um espectrofluormetro use para os padres concentraes mais
diluidas (10 vezes ) do que as indicadas na tcnica.

3 - Bibliografia

O'Reilly, J. E., J. Chem. Educ. 52 (9) , 610 (1975)

 26

3.2-DETERMINAO FLUORIMTRICA DA RIBOFLAVINA

(VITAMINA B2) NUM COMPRIMIDO

1 Introduo

A riboflavina (vitamina B2) uma vitamina essencial ao metabolismo dos animais,

(catalizao de reaces qumicas) e, embora no so sintetizada pelos mesmos,
abundantemente distribuda em gneros alimentcios animais e vegetais, tais como fgado,
leite, rim, carne, ovos, ostras, nabos, beterraba e farelo de arroz. A ausncia dessa vitamina
no organismo pode causar queda de cabelo, leses na pele, olhos, lbios, boca e orgos
genitais entre outras.
A riboflavina (7,8-dimetil-10-(ribitil)isoaloxazina) uma molcula aromtica cuja sua
estrutura molecular est abaixo indicada.
OH

HO
OH

HO

N N O

NH
N

Na sua forma cristalina um p amarelo-alaranjado (p.f. = 285C), levemente

solvel em gua ( 0,1 g/l) e em lcool, e insolvel em ter etlico e clorofrmio. Em
soluo aquosa, a riboflavina exibe uma fluorescncia na regio do visvel, que ao olho
humano se apresenta como verde-amarelada ( = 530-545 nm), pelo que a Farmacopeia
Americana (USP-23) e a A.O.A.C. recomendam que o seu doseamento seja efectuado pelo
mtodo fluorimtrico, com excitao ao comprimento de onda de 444 nm e medida da
intensidade de fluorescncia a 530 nm.

No estado anidro, a riboflavina estvel luz, porm, em solues alcalinas

decompe-se rapidamente. Na presena de oxignio, a riboflavina transformada
irreversivelmente pela luz em luminoflavina, lumicromo e compostos de menor
importncia.

2 Parte experimental

2.1 Reagentes
 27

Riboflavina
cido actico concentrado, proanlise.

2.2 Material/Aparelhagem

Espectrofluormetro/Fluormetro
Material corrente de laboratrio
Folha de alumnio

2.3 Preparao de Solues

1L - Soluo de cido actico 5% (v/v)

500 mL - Soluo me em riboflavina (20 ppm)

Dissolve-se 10,0 mg de riboflavina num balo volumtrico de 500 mL usando a
soluo de cido actico a 5% (V/V).

50 mL - Soluo intermdia de riboflavina (2,0 ppm) por diluio da soluo anterior em

cido actico 5% (V/V).
Soluo amostra - Esmague um comprimido contendo vitamina B2 num almofariz at obter
um p fino. Pese rigorosamente cerca de 50 mg do p num copo e adicione
soluo de cido actico 5% (V/V) at se dissolver (caso exista precipitado
insolvel proceda a uma filtrao). Transfira, ento, para um balo volumtrico de
500 mL e dilua at ao trao com a soluo de cido.

2.4 Tcnica

1. Em bales de 25 mL, prepare 5 padres de concentrao entre 0,02 e 0,2 ppm de

riboflavina em cido actico 5% (V/V). Prepare ainda um branco.
2. Aps a calibrao do aparelho, selecione os comprimentos de onda de excitao e de
emisso experimental e leia as intensidades de emisso para cada uma das solues
padro e amostra. (Se a absorvncia da amostra sair do intervalo dado pelos
padres proceda a uma nova diluio desta).
3. Tendo em conta a diluio da amostra, determine o teor de riboflavina no comprimido e
compare o resultado obtido com as indicaes do rtulo.

ATENO: Uma vez que a riboflavina sensvel luz, os bales volumtricos que contm
solues dessa vitamina devem ser envolvidos com folha de alumnio.

3 Bibliografia

1) http://www.chembio.niu.edu/eletrochem/lab3.htm
 28

2) C.H. Whitnah, B.L. Bernice, M.M. Kramer, J. Am. Soc. 1937, 59, 1153.
3) M.L. Gonalves, Mtodos Instrumentais para Anlise de Solues, 4 edio,
Fundao Calouste Gulbenkian, 2001, Lisboa.
 29

II-Anexo: Mtodos de Clculo e Erros em Qumica Analtica

1. Mtodos de Clculo de Concentraes

(Calibrao com Padres)

a) Mtodo da recta de calibrao

CP1 CP2 ... CPi

+ amos-
tra

Lpadro = K Cpadro K (L = valor de Leitura)

Lamostra = K Camostra Cam.= Lamostra/K

Lam

Cp
Cam

- Determinao da concentrao da amostra pelo mtodo da recta de calibrao

b) Mtodo da adio de padro
 30

Usa-se quando MATRIZ AMOSTRA MATRIZ PADRES, afectando o

valor de K que relaciona o valor de Leitura com a amostra e os padres.

CPi CP2 ... CPi

Vam Vam Vam

Lmedido = K' (Cpadro + Camostra) (Camostra = const)

L=0 Cam. = - Cpad.

Cam = -(CP)L=O Cp

c) Mtodo do -padro interno

Determinao da concentrao da amostra pelo mtodo da adio de padro

Lpadro = K Cpadro = K' Vinjectado Cpadro

 31

Lpad.int. = K1 Cpad int. = K1' Vinjectado C pad.int.

Lpadro / Lpad.int. = Cpadro / C pad.int.
C pad.int. = Constante

Lpadro / Lpad.int. = Cpadro

Camostra= Lamostra / Lpad.int. /

CP1 CP2 ... CPi

+ am.
Pi Pi Pi Pi

Lam /Lpi

Cp
Cam

2. Preciso, Exactido,
- Determinao Sensibilidade e Limite
da concentrao da amostra de Deteco
pelo mtodo de padro interno

1. Preciso

Mede a disperso dos resultados experimentais em relao mdia.

 32

( Erros aleatrios)

( xi x )
Avaliao- Mtodos Estatsticos
x
a) Exactido

Mede o desvio em relao ao valor real.

( Erros sistemticos)

( xc xr )
Avaliao- (?)
xr

b) Sensibilidade

Razo entre o acrscimo do valor lido, L, e a variao da concentrao AC,

correspondente aquele acrscimo (L/C).
Se L = F(c) relao linear (L/C = declive da recta de calibrao)

c) Limite de Deteco

Menor valor que se pode distinguir do zero

Menor valor de concentrao que um dado mtodo consegue medir.

Avaliao: limite de deteco operacional (L.D.)

a = coeficiente angular da recta

L.D. = 3 y/x/a y / x = desvio padro da estimativa

3- Anlise estatstica dos Erros (Sumrio)

a) Recta dos mnimos quadrados e erros associados (programa Excell)
y = (a a) (b a)
 33

a: declive; a erro associado.

b: ordenada na origem; b erro associado.

Qualquer destes parmetros calculado pelo Excell

b) Clculo do erro na concentrao da amostra x0, a partir da recta dos

mnimos quadrados:

Mtodo da recta de calibrao

x02 = (x/y2 /a2) {(1/n) + (1/L) + (yo-y)2/[a2(xi-x)2]}

y/x2 : desvio padro da estimativa (standard error

dado na folha de clculo do Excell),
n = nmero de pontos experimentais
L = nmero de leituras para cada padro ou amostra;
x = mdia dos valores de xi; y = mdia dos valores
de yi
xi = cada valor de x

Mtodo de adio de padro

x2 = (x/y2 /a2) {(1/n) + y2/[a2(xi-x)2]}