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26 R.C.Suelo Nutr. Veg. 7 (3) 2007 (26-37) J. Soil Sc. Plant Nutr.

7 (3) 2007 (26-37)

INOCULANTE DE MICROORGANISMOS ENDGENOS


PARA ACELERAR EL PROCESO COMPOSTAJE DE
RESIDUOS SLIDOS URBANOS
Mara Ester Cariello, Liliana Castaeda, Ins Riobo; Jimena Gonzlez

Facultad de Ingeniera Universidad Nacional de Entre Ros Ruta 11 km 10


Oro Verde - CC 47 Suc. 3 - CP 3100 - Paran - Entre Ros - Argentina.
Correpondencia: biologia2@bioingenieria.edu.ar

Endogenous microorganisms inoculant to speed up the composting process


of urban swage sludge

Key words: poli-microbial inoculants, aerobic bacteria, synergic bacteria, composting


process

ABSTRACT

The aim of this study was to speed up the composting process of municipal solid wastes,
piles of material were inoculated with a mixed of endogenous microorganism. The bacteria
identified were Bacillus subtillis and Pseudomonas fluorescens and one fungus, Aspergillus
fumigatus. An inoculant was prepared in a concentration of 1x107 UFC/ml for each micro-
organism and was applied through aspersion, 2 L m-3. The following parameters were
evaluated: Physical aspect, temperature, moisture content, pH, C:N ratio, organic matter,
electric conductivity and cation exchange capacity. The results showed that inoculated
piles reached the stability and maturity, four weeks earlier than the control pile without
inoculation. These results suggested that the inoculant was useful to accelerate the
composting process in the urban wastes.
Inoculante y compostaje de residuos slidos, Cariello et al. 27

Palabras claves: inculos polimicrobianos, bacterias aerbicas, bacterias sinrgicas,


proceso de compostaje
RESUMEN

El objetivo de este estudio fue acelerar el proceso de compostaje de residuos slidos


urbanos, se inocularon pilas de material con una mezcla de microorganismos endgenos.
Las bacterias se identificaron como Bacillus subtillis y Pseudomonas fluorescens y un
hongo, Aspergillus fumigatus. Se prepar un inculo con una concentracin de 1x107
UFC/ml para cada microorganismo y se aplic por aspersin, 2 L m-3 Se evaluaron los
siguientes parmetros: aspecto fsico, temperatura, humedad, pH, relacin C:N, materia
orgnica, conductividad elctrica y capacidad de intercambio catinico. Los resultados
mostraron que las pilas inoculadas alcanzaron las caractersticas de estabilidad y madurez,
cuatro semanas antes de la pila control sin inoculacin. Estos resultados indicaron que
el inculo fue til para acelerar el proceso de compostaje en residuos urbanos.

INTRODUCCIN MATERIALES Y MTODOS

En la actualidad, gran cantidad de residuos Diseo experimental


slidos urbanos hace necesario su
tratamiento (Carpio et al., 2001). El Se trabaj con pilas de compostaje de
compostaje es un mtodo eficiente en la biorresiduos slidos urbanos a cielo
eliminacin de estos residuos, ya que descubierto, en la planta de tratamiento de
permite adems el aprovechamiento del residuos de la ciudad de Crespo, Entre Ros,
producto final (Boulter, 2000). Este proceso Argentina. Las pilas se ubicaron sobre una
tiene una duracin variable, dado por la plataforma de cemento abovedada y rodeada
calidad de los residuos, el tamao de por canaletas para permitir el escurrimiento
partcula, disposicin de la pila , aireacin, del lixiviado. Las pilas tuvieron en promedio
humedad y poblacin biolgica activa. El 1 m3 y 160 kg de material orgnico. Previo
perodo de transformacin es cercano a 170 a su armado, el material se someti a
das, e implica la acumulacin de gran molienda en un molino a martillos para
cantidad de material en las plantas de obtener partculas entre 1 y 3 cm3, tamao
compostaje (Boulter, 2000). En trabajos adecuado para el ataque microbiano, (De
anteriores hemos ensayado inculos Carlo et al., 2001). Para asegurar stas
obtenidos con cultivos monomicrobianos condiciones, se realiz un volteo con
de microorganismos extrados de las pilas, frecuencia semanal (Carpio et al., 1997).
no encontrando diferencias significativas
en el tiempo de compostaje Identificacin de los microorganismos
(De Carlo et al., 2001). Sin embargo, el
inculo constituy un agregado significativo Se tomaron muestras de las pilas de
en nmero para producir una compostaje de las pilas de la misma planta
bioaumentacin y la reduccin del tiempo de procesamiento durante las primeras 3
de formacin y maduracin del compost semanas del proceso. A partir de diluciones
(De Carlo et al., 2001) de la muestra 1x10 -4 en solucin fisiolgica
En el presente trabajo se prob la y para no perder aquellos microorganismos
produccin de un inoculante a partir de un que colonizaron a bajas concentraciones, se
cultivo formado por una mezcla de realiz un aislamiento en las placas con
microorganismos endgenos seleccionados medios Saboureaud triptena de soya. Las
de pilas de compostaje y, por lo tanto, mejor mismas se incubaron a 28 C por 5-7 das
adaptados a esas condiciones (Faure, 1991., para el caso de los hongos y a 37 C por
Vargas-Garca, 2007). 48 h para las bacterias. Las distintas cepas
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aisladas se sembraron en agar nutritivo esta forma se descartaron los


suplementado con almidn al 2 % y lugol microorganismos de baja actividad
como indicador. La actividad amiloltica se degradativa.
valor de acuerdo al dimetro del halo de
degradacin alrededor de cada colonia Cepas seleccionadas y antagonismo
(Madigan et al., 2004). Los mismos
microorganismos se sembraron en medio Para descartar antagonismo entre las cepas
de Wollum II que utiliza celulosa como bacterianas se realiz una curva de
nica fuente de carbono. La actividad crecimiento microbiano en medio lquido:
celuloltica se valor de acuerdo al dimetro se sembraron en caldo triptena de soya
del halo de degradacin alrededor de cada cada una de las cepas bacterianas por
colonia (Wollum, 1982; Figoni et al., 2001). separado y en conjunto y luego se incubaron
La cepas bacterianas se identificaron a 37 C por 24 h. Se tomaron alcuotas a
mediante las siguientes pruebas: morfologa, distintos tiempos para efectuar recuento en
coloracin de Gram, Movilidad en fresco, placa y evaluar las diferencias de los
Catalasa, Formacin de endosporos, monocultivos microbianos con respecto al
Hidrlisis de gelatina, prueba de recuento de ambas bacterias.
oxidacin/fermentacin de glucosa, oxidasa Se realiz un screening de antagonismo
y King A y B (Madigan et al., 2004). Las bacteriano fngico, utilizando el mtodo
cepas fngicas se identificaron mediante del disco central (Reynaldi et al., 2004) de
estudios morfolgicos. Se observ aspecto un cultivo del hongo en medio Lactrimel
y coloracin de la colonia en el anverso y incubado a 28 C por 7 das. Se tomaron
reverso en medio Saboureaud en cultivo discos de 7 mm de dimetro del rea de
fresco y envejecido. Se realiz diseccin de esporulacin del micelio y se colocaron en
la colonia para la observacin microscpica placas de triptena de soya a 30 mm de
de la tabicacin del micelio. Se indujo la distancia de la siembra de spots de las
fructificacin con la tcnica del colonias bacterianas y se incubaron a 37 C
microcultivo en medio Lactrimel en cmara por 48 a 72 h. Luego se midi el dimetro
hmeda e incubacin a 28 C por 5 y 7 das de las colonias prestando atencin a su
(Madigan et al., 2004). uniformidad. Como control se usaron placas
que contenan slo el hongo o bacterias.
Seleccin de las cepas Las pruebas de interaccin entre estos
microorganismos presentes en el compost
De las cepas aisladas de las pilas, se realiz se realizaron para asegurar que no existiese
la seleccin de aquellas que demostraron competencia, ni produccin de sustancias
mayores actividades amiloltica y celuloltica inhibidoras secretadas al medio. Esto
de acuerdo a los halos de degradacin permiti incorporar los microorganismos
obtenidos en los cultivos. Se valor la seleccionados en una concentracin
actividad amiloltica y celuloltica de 30 significativa y probar su efecto como
cepas bacterianas, de ellas 10 fueron las que acelerador del proceso de compostaje. Estas
presentaron los mayores halos de pruebas permitieron descartar los
degradacin. Asimismo se valor la microorganismos que presentaron algn
actividad amiloltica y celuloltica de 10 grado de inhibicin mutua. Para el caso de
cepas fngicas, de ellas se seleccionaron las bacterias se observ la concavidad en
las dos ms activas. As en total se las colonias en las zonas enfrentadas en el
seleccionaron 12 cepas. cultivo en placa. Tambin se observ la
La seleccin de los microorganismos ms disminucin de la pendiente de la curva de
activos se realiz con una confiabilidad del crecimiento en medio lquido para el cultivo
95%, utilizando los halos de hidrlisis mixto con respecto a la pendiente individual
mayores o iguales 0,5 cm de dimetro. De de crecimiento de cada una de ellas.
Inoculante y compostaje de residuos slidos, Cariello et al. 29

Para el caso de los hongos se observ la sobre la base de sus mayores actividades
disminucin del dimetro de la colonia del amilolticas, celulolticas y las pruebas de
cultivo mixto frente al de las placas control interaccin, se seleccion una cepa de
o la concavidad en las colonias en las zonas bacilos Gram positivo, Gram negativo y
enfrentadas. La comparacin de las curvas una de hongo de micelio filamentoso. Estos
de crecimiento en medio lquido no result tres microorganismos mostraron ausencia
aplicable a los cultivos mixtos de hongos de inhibicin mutua en el cultivo en medio
y bacterias debido a los diferentes tiempos slido y en la curva de crecimiento en medio
de reproduccin de estas especies. lquido realizada en forma individual y
De las 12 cepas previamente seleccionadas, conjunta. (Figura 1).
Microorgansmos (UFS)

Tiempo (h)

Figura 1: Curva de crecimiento bacteriano en funcin de la temperatura en el proceso de


compostaje de residuos slidos

Figure 1: Bacterial growth as function of temperature during composting processes of


solid urban wastes
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Las bacterias fueron identificadas como Inoculacin de las pilas


Bacillus subtilis (bacilos Gram positivo,
mviles, catalasa positivo, formadores de El inculo conteniendo los tres
endosporos, que fermentan la glucosa e microorganismos seleccionados, cada uno
hidrolizan la gelatina) y Pseudomonas en una concentracin de 1x107 UFC/ml, se
fluorescens (bacilos, Gram negativo, aplic asperjando sobre la superficie de la
mviles, catalasa positivos, oxidasa pilas a razn de 2 L m-3 de materia orgnica.
positivos, que oxidan y no fermentan la La aplicacin se efectu por una nica vez
glucosa ni hidrolizan la gelatina, son al comienzo del proceso y constituy un
positivos para la prueba del medio King B). agregado significativo de acuerdo a los
La cepa fngica fue identificada como recuentos poblacionales totales de las pilas
Aspergillus fumigatus por las caractersticas (De Carlo et al.,2001). En paralelo con cada
macroscpicas de la colonia y microscpicas lote de pilas inoculadas se proces una pila
de las fructificaciones. La observacin testigo sin inculo.
macroscpica de la colonia de este hongo
mostr un micelio blanquecino de aspecto Evaluaciones
pulverulento, que se torna verde grisceo
al madurar y de blanco a marrn al Durante las 20 semanas que dur el proceso
envejecer. Las fructificaciones observadas de compostaje, tanto para el aislamiento de
en microcultivos presentan micelio tabicado, los microorganismos en las primera semanas,
aparecen conidiforos cortos, lisos y con como para la determinacin de los
vesculas, filiades uniseriadas en el tercio parmetros indicadores de estabilidad y
superior de la vescula y conidios en cadena. madurez del proceso, se tomaron muestras
de las pilas, en cinco puntos en la superficie
Preparacin del inculo y en el interior. Estas submuestras se
mezclaron y homogeneizaron para su
Se recolectaron las colonias de bacterias de posterior anlisis.
la superficie de placas de agar triptena de Las variables consideradas tales como
soya previamente incubadas por 24 h a 37 temperatura, pH, relacin C:N,
C y se resuspendieron en solucin conductividad elctrica entre otras han sido
fisiolgica ajustndose al patrn 0,5 de la sugeridas por numerosos autores
escala Mc. Farland. Luego se corrobor su (Iannotti et al., 1994; Wu et al., 2000;
concentracin por recuento en placa. Boulter et a., 2000). Con estos parmetros
De las colonias de hongos cultivadas en es posible observar la estabilidad
medio Lactrimel por 10 das a 28 C se (temperatura ambiente y estable y madurez
recolectaron las esporas por inundacin con del producto final (temperatura ambiente y
suero fisiolgico, ajustndose la pH neutro). La temperatura se midi con
concentracin a 1x107 mediante el recuento termmetro digital en tres puntos al interior
en cmara de esporas. de cada pila. El pH se midi con electrodo
Para cada microorganismo seleccionado de lectura digital en suspensiones acuosas
se prepar un inculo de 1x107 UFC/ml de de muestras molidas en una relacin 1:10
suero fisiolgico. Esta concentracin result (peso seco:volumen). El contenido de
un agregado significativo a la poblacin de humedad se determin en estufa a 105 C
las pilas de acuerdo a los datos obtenidos hasta peso constante. Tambi'n se midi la
de trabajos anteriores (Figoni et al., 2001; relacin C:N, capacidad de intercambio
De Carlo et al,, 2001; Frioni, 1999). catinico y conductividad elctrica. El valor
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de la materia orgnica se obtuvo por capacidad de degradar la materia orgnica


diferencia entre los valores de peso seco y (ver abajo) formando cidos orgnicos que
cenizas. Luego el C se obtuvo dividiendo solubilizan el fsforo (Lynch, 1993) y son
por 1.8. El N total se determin de acuerdo activas en el fitocontrol de patgenos (Phae,
al mtodo de Kjeldahl. 990; Fernandez et al., 2001; Bagnasco et
Durante el proceso de compostaje, las pilas al.,1998).
fueron evaluadas a la semana 8 y 12 posterior
a la inoculacin para determinar la presencia Evaluacin y control de las pilas
de Bacillus subtilis, Pseudomonas inoculadas
fluorescens y Aspergillus fumigatus.
Las variables consideradas tales como
RESULTADOS Y DISCUSIN temperatura, pH, relacin C:N,
conductividad elctrica, capacidad de
Microorganismo seleccionados intercambio catinico y el contenido de
humedad es posible observar la estabilidad
La identificacin de las cepas seleccionadas y madurez del producto final y estn
permiti confirmar su potencialidad en el contempladas en la normativa vigente en
inculo debido a sus capacidades Argentina (Ley N 20466 de Fertilizantes y
metablicas y agronmicas ya probadas y Enmiendas Orgnicas). Sin embargo, no
publicadas por diversos autores (e.g. todas estos indicadores presentan patrones
Rechcigl, 1995). Bacillus y Pseudomonas, de evolucin comn y ninguno constituye
producen -amilasas que degradan el por s mismo un nico indicador para todos
almidn al igual que Aspergillus que adems los casos (Tognetti et al., (2006; Sanchez
produce proteasas, glucoamilasas y et al., 2001).
pectinasas. Bacillus produce enzimas
extracelulares que descomponen Humedad
polisacridos, cidos nucleicos y lpidos,
permitiendo que el organismo emplee estos El producto final obtenido de los ensayos
productos como fuentes de carbono y posee una humedad menor al 40 % lo cual
donadores de electrones. Algunas especies coincide con los datos publicados por otros
de Bacillus, y Pseudomonas, poseen autores (Wu et al., 2000). En el inicio del
capacidad enzimtica para degradar diversos proceso la humedad fue del 60 %, en la
componentes de la pared celular de ciertos octava semana de 58 % y a los 3 meses fue
hongos (Vargas-Garca et al., 2007). Bacillus de 52 %. La humedad menor al 40% se
presenta esporas con alta resistencia a los logr de las pilas inoculadas entre las
agentes fsicos y qumicos que constituyen semanas 19 y 20 del proceso de compostaje,
una forma de resistencia al stress ambiental. mientras que en las pilas testigo sin
Su hbitat es el suelo, all se tornan inoculacin demor 24 semanas.
metabolicamente activos cuando tienen
disponibles sustratos para su crecimiento y Temperatura
el agotamiento de estos promueve la
formacin de esporas. Presentan la capacidad La temperatura en las pilas evidencia los
de degradar una enorme variedad de cambios en la calidad y densidad de la
derivados de los tejidos animales y vegetales poblacin microbiana (Hellmann et al.,
(celulosa, almidn, pectina, protenas, agar) 1997; De Carlo et al., (2001). En las pilas
y adems intervienen en los procesos de inoculadas el pico de temperatura se alcanz
nitrificacin, denitrificacin, fijacin de una semana despus en relacin al testigo
nitrgeno, jugando un rol significativo en y logr un valor mayor de 63 C y se
los ciclos del carbono y nitrgeno. Las mantuvo por ms tiempo (Figuras 2). Esto
bacterias seleccionadas poseen adems la evidencia una mayor actividad metablica,
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resultando beneficioso para la eliminacin de temperatura y pH (Madigan et al., 2004),


de potenciales patgenos. No se lo cual permite su persistencia dentro de la
evidenciaron picos de autocalentamiento a poblacin metablicamente activa en el
partir de la semana ocho, propio del perodo proceso de compostaje. Se comprob la
de estabilizacin (Boulter et al., 2000). permanencia de estos gneros y especies al
Segn la literatura, los microorganismos ser re-aislado de las pilas en distintos
seleccionados presentan tolerancia a cambios momentos del proceso hasta la semana 12.

Figura 2: Evolucin de la temperatura en el proceso de compostaje de residuos slidos


urbanos

Figure 2: Temperature evolution during composting processes of solid urban wastes

pH

Tanto las pilas inoculadas como las testigos valores ligeramente alcalinos, mientras que
presentaron pH ligeramente cidos al en las pilas inoculadas el pH aument en
comienzo del proceso, en coincidencia con forma lenta y gradual. Durante las 4 primeras
lo publicado por otros autores (Boulter et semanas del proceso, el pH en las pilas
al., 1999), que se atribuye a los cidos inoculadas se mantuvo por debajo del de las
orgnicos simples, productos iniciales de la pilas testigo (Figura 3). Esta evolucin indic
descomposicin. Las diferencias entre las una adecuada aireacin para la degradacin
pilas inoculadas y las testigos aumentaron aerbica de la materia orgnica (Jimnez y
a partir de la segunda semana, donde las Garca, 1989). El producto final tuvo pH
testigos presentaron un pH cercano al neutro, neutro.
evolucionando a partir de ese momento con
Inoculante y compostaje de residuos slidos, Cariello et al. 33

Figura 3: Evolucin del pH en el proceso de compostaje de residuos slidos urbanos

Figure 3: pH evolution during composting processes of solid urban wastes

Materia orgnica

El porcentaje de materia orgnica (MO) lixiviacin o escurrimiento de los


disminuy a medida que avanza el proceso componentes solubles y material suspendido,
de compostaje, siendo mayor en los dos arrastrando C y N. La relacin C:N de la
primeros meses. Al tratarse de residuos masa es un factor importante a controlar
slidos urbanos se parti de un valor alto, para obtener una degradacin adecuada. En
de 80,6 % y a los tres meses se obtuvo un el proceso del compostaje es importante
valor de 51,7% en las pilas testigo y de 62,8 evitar valores altos debido a que una relacin
% en las inoculadas. Esta proporcin se elevada impide que se desarrolle una
mantuvo con algunas oscilaciones hasta el poblacin microbiana extensa sin nutrientes
final del proceso a la semana 20. adicionales y, por lo tanto el proceso se
retrasa. Las relaciones de C:N bajas
conducen a la volatilizacin del NH3 lo que
Relacin C:N provoca prdidas de N y malos olores (Zhu,
2006). La relacin C:N evaluada en las pilas
Producto del metabolismo microbiano muestra una tendencia general a la
aerbico las pilas de residuos pierden disminucin. Se parti de una relacin C:N
material en forma gaseosa como CO2 y de 30 y a partir de la cuarta semana se
H 2 O. El N se mantiene prcticamente observa un descenso mayor en las pilas
constante, pasando de los residuos a los inoculadas, llegando en la semana 12 a un
microorganismos y/o formando NO 2 - y valor de 15, frente a 17 de las pilas testigo.
NO3 -, adems se producen prdidas por Estos valores se mantuvieron hasta el final
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del proceso (Figura 4). Si bien el valor de Seekins, 1996; Jimnez y Garca, 1989;
la relacin C:N no puede ser tomado como Zucconi et al., 1987) el valor final prximo
indicador absoluto de madurez debido al a 15 resulta adecuado. Este valor no es tan
rango relativamente amplio de variacin elevado como para una vez el compost
(entre 5 y 20) de acuerdo a la naturaleza del aplicado al suelo, inducir el consumo de N
material, en nuestra experiencia, como en del mismo por parte de los microorganismos
la de otros autores (Hirai et al., 1983; (Forster et al., 1993).

Figura 4: Evolucin de la relacin C:N durante el proceso de compostaje de residuos


slidos urbanos
Figure 4: C to N ratio evolution during composting processes of urban waste

Conductividad elctrica

Los valores obtenidos no mostraron una los cinco meses variaron entre 0,57 y 3,95
tendencia definida durante el proceso y dScm-1. Estos valores guardan relacin con
resultaron ser muy dismiles entre las las concentraciones de Ca++, K+ y Na+ y no
distintas pilas. Los valores hallados en las constituyeron en nuestro caso un buen
pilas tanto inoculadas como sin inocular a indicador de madurez.
Inoculante y compostaje de residuos slidos, Cariello et al. 35

Argentina. Los microorganismos


Capacidad de intercambio catinico
seleccionados, componentes del inculo
aislados del proceso en forma natural,
Si bien los valores obtenidos no mostraron
minimizan el riesgo de impacto negativo en
una tendencia definida durante el proceso,
el ambiente y generaron un compost de
el valor encontrado en las pilas inoculadas
calidad.
a los cinco meses de iniciado el proceso fue
86,6 cmol(+)kg-1 suelo frente a 57,6 cmol(+)
AGRADECIMIENTOS
kg-1 de las pilas testigo. Esto sera beneficioso
ya que el compost obtenido de las pilas
Agradecemos al comit editor y en particular
inoculadas tendra mayor potencialidad de
al Dr. F. Matus de la Universidad de La
retencin de nutrientes y capacidad de
Frontera por sus aportes en la redaccin y
retencin de sustancias fitotxicas como
organizacin del manuscrito.
tambin mayor capacidad buffer, indicando
de este modo el grado de madurez del
BIBLIOGRAFA
producto.
BAGNASCO, P., DE LA FUENTE, G.,
Reduccin de volumen y aspectos fsicos
GUALTIERI, F., NOYA, Y., ARIAS,
A. 1998. Fluorescent Pseudomonas
El producto final obtenido posee olor a tierra
spp.as biocontrol agents against forage
mojada, color oscuro, no se distingue la
legume root pathogenic fungi. Soil
materia orgnica de las que se parti y
Biology & Biochemistry 30:1317-
redujo su volumen a un 35 % del inicial.
1322).
BOULTER, J. I., BOLAAND, G. J.,
CONCLUSIONES
TREVORS, J. T. 2000. Compost: A
study of the development process and
El objetivo este estudio fue aislar cepas de
end-product potential for suppression
microorganismos nativos para acelerar el
of turfgrass disease; World Journal of
proceso de compostaje de residuos slidos
Microbiology & Biotechnology 16:
urbanos. Los microorganismos seleccionados
115- 134.
fueron cepas de las bacterias Bacillus subtilis
CARPIO, A; DE CARLO, E; ROSA, A.;
y Pseudomonas fluorescens y la cepa del
CARIELLO, M; CASTAEDA, L.;
hongo Aspergillus fumigatus.
FIGONI, E; GRASSO, N.; RUIZ, A.;
De acuerdo a los indicadores de estabilidad
MASCHERONI, F. 1997
y madurez las pilas de compostaje inoculadas
.Optimizacin de tcnicas para la
con estos microorganismos endgenos
obtencin de un compost regional y su
alcanzaron su estabilidad y madurez en
utilizacin por la comunidad como
menor tiempo que las testigos sin inocular.
mejorador de suelos; Rev. Ciencia
El producto final present los parmetros
docencia y tecnologa- UNER; N 15
de calidad estndares establecidos en
ao 8 , Pag. 25 a 42.
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