Medios de cultivo

Hernn Crdenas1., Camilo Seplveda2.

Carrera de Ingeniera Civil Ambiental, Universidad de La Frontera

1. Resumen (20%)

Un medio del cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos
(Carlos Gamazo et al., 2005). El objetivo de este prctico fue preparar un medio de cultivo
denominado caldo verde brillante- bilis-lactosa, el cual es un medio selectivo recomendado
para el recuento de coliformes totales y fecales, por la tcnica del nmero ms probable,
previamente esterilizados. Se realiz disolviendo 8,2 gramos del medio de cultivo en 205 ml
de agua destilada, donde se regul el pH. Posteriormente, se introdujo en 20 tubos de ensayo
previamente esterilizados, a las cuales se les introdujo campanas Durham, para ser
autoclavadas a 121C por 15 minutos. Lo que se esperara es el crecimiento de bacterias
coliformes y la inhibicin de la flora acompaante, los cuales, fermentaran la lactosa con
produccin de cido y gas (Camacho et al., 2009).

2. Resultados y discusin (50%)

Para preparar el medio de cultivo (caldo verde brillante- bilis-lactosa), tuvimos que ajustar
inicialmente ciertos parmetros, como el peso del medio de cultivo, a razn de 40 gramos de
polvo en 1 litro de agua destilada; asumimos que para 20 tubos necesitaramos 205 ml de
agua destilada, de lo cual nos arroj 8,2 gramos del medio.

40 gramos 1000 ml
x = 8,2 gramos
x 205 ml

A continuacin se mezcl los 8,2 gramos del medio de cultivo en 205 ml de agua destilada
para ser homogeneizada en un agitador magntico hasta que la solucin quedar
completamente diluida. Posteriormente se ajust el pH a un cierto rango debido a las
instrucciones del fabricante del medio de cultivo (7,2 0,2), por lo que se aadi cido
clorhdrico 0,1 N. (ver tabla 1)

Finalmente se transfiri a razn de 10 ml por tubo la solucin del medio de cultivo para ser
autoclavadas durante 15 minutos a 121 C. Destacar que cada tubo de ensayo se le aadi
inicialmente campanas Durham.
Tabla 1: Evaluacin de medios de cultivos
Medio de ml gastados
Medio de Grs/ml N Lote Fecha de pH cultivo Mtodo de
cultivo expiracin del pH pH NaOH HCl esterilizacin
agua inicial final

Caldo verde 8,2 VM010854 05/12/2005 5,55 7,32 7,22 - 0,95 Autoclave
Bilis brillante 205

Plate Count 7,29 2299024 30/06/2017 5,55 7,04 7,04 - - Autoclave

Agar 306,7

Caldo 2,8 2114040 31/03/2017 5,55 6,75 6,93 0,07 - Autoclave

Lactosado 215,4

Se espera que el caldo verde brillante-bilis-lactosa forme gas dentro de las primeras 48 horas
a 35C. Esto constituye una confirmacin positiva para coliformes fecales, especialmente
para la presencia del grupo Coli-Enterobacter, debido a que es una propiedad del grupo
coliforme, la fermentacin de la lactosa con produccin de cido y gas que queda demostrado
al usar las campanas Durham (figura 1) (Camacho et al., 2009).

Figura 1: Prueba positiva, crecimiento con produccin de gas

3. Conclusin (25%)

Este estudio demostr que a pesar que el caldo verde brillante- bilis-lactosa se encontraba
con fecha expirada desde el ao 2005 no afect la elaboracin del medio de cultivo. Esto
implica que cuando se realice la siembra de los microorganismos se encontrarn con los
nutrientes necesarios para su desarrollo (temperatura, grado de humedad, presin de
oxgeno, pH, entre otros).

4. Referencias (5%).

Referencia de un libro:
Hugo Montoya (2008). Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines (2th
ed.).Medelln Colombia (Capitulo 3).

C. Gamazo.,I. Lpez-Goi.,R. Daz. Manual Prctico de Microbiologa (3th ed.). Pamplona

Espaa (Capitulo 2).

Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para
el Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.

tems Nota:
Resumen (20%)
Resultados y discusin (50%)
Conclusin (25%)
Referencias (5%)
Nota Final: