PENGEMBANGAN DAN VALIDASI METODE ANALISIS HIDROKLOROTIAZID

TABLET DENGAN METODE ABSORBANSI DAN LUAS DAERAH DI BAWAH

KURVA SECARA SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET

Harrizul Rivai1), Neki Okta Deni 2), Dwi Dinni Aulia B2)
1)
. Fakultas Farmasi Universitas Andalas (UNAND) Padang.
2)
. Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi (STIFARM) Padang.
Email: neki.oktadeni@yahoo.com

ABSTRAK

Pengembangan dan validasi metode analisis hidroklorotiazid tablet telah dilakukan dengan metode
absorbansi dan metode luas daerah di bawah kurva secara spektrofotometri ultraviolet. Penelitian ini
menggunakan prinsip perhitungan absorban dan luas daerah di bawah kurva yang diperoleh dari pengukuran
larutan analit dengan menggunakan alat spektrofotometer UV - Vis dan larutan natrium hidroksida 0,1 N sebagai
pelarut terbaik. Linearitas hidroklorotiazid diperoleh pada rentang konsentrasi 4 - 14 g/mL; nilai koefisien
korelasi dengan metode absorbansi dan metode luas daerah di bawah kurva masing masing 0,99984 dan
0,99671. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar sampel yang diperoleh dengan metode absorbansi dan
metode luas daerah di bawah kurva masing-masing adalah 99,50 0,015 % dan 99,97 0,017 %. Rata-rata
persen perolehan kembali yang diperoleh dengan metode absorbansi dan metode luas daerah di bawah kurva
masing-masing adalah 96,99 0,012 % dan 104,78 0,017 %.

Kata kunci : Hidroklorotiazid Tablet, Metode Absorbansi dan Luas Daerah di Bawah Kurva, Spektrofotometri
Ultraviolet

ABSTRACT

Development and validation of analytical methods hydrochlorothiazide tablets have been done by
absorbance method and the method of the area under curve ultraviolet spectrophotometry. This study used the
principle of calculation of absorbance and the area under curve obtained from the measurement of the analyte
solution by using UV - Vis spectrophotometer and sodium hydroxide 0.1 N solution as the best solvent.
Hydrochlorothiazide linearity was obtained in the concentration range of 4 - 14 mg/mL; the correlation
coefficient with the absorbance method and the area under the curve method respectively 0.99984 and 0.99671.
The results showed that the samples obtained by the absorbance method and the method of the area under curve
method was 99.50 0.015 % and 99.97 0.017 %. The average percent recovery obtained by the absorbance
method and the area under curve method was 96.99 0.012 % and 104.78 0.017%.

Keywords: Hydrochlorotiazide tablets, absorbance method and the area under curve method, Ultraviolet
Spectrophotometry

PENDAHULUAN benzotiadiazina-7-sulfonamida
1,1dioksida (Kementerian Kesehatan
Diuretik adalah senyawa yang dapat Republik Indonesia, 2014).
menyebabkan eksresi urin yang lebih Hidroklorotiazid merupakan senyawa
banyak (Mutschler, 1991). Diuretik sulfamoyl yang diturunkan dari
bekerja meningkatkan ekskresi natrium, klortiazid yang dikembangkan dari
klorida dan sejumlah air. Salah satu obat senyawa sulfanilamida. Obat ini bekerja
diuretik yaitu hidroklorotiazid. dibagian muka tubuli distal. Efek
Hidroklorotiazid adalah prototipe diuretisnya lebih ringan dari diuretik kuat
golongan tiazid dan dianjurkan untuk atau lengkungan tetapi bertahan lebih
sebagian kasus hipertensi ringan sampai lama yaitu 6 sampai 12 jam. Daya
sedang dan dalam kombinasi dengan hipotensifnya lebih kuat sehingga banyak
berbagai anti hipertensi lain (Nafrialdi, digunakan pilihan pertama untuk
2007). Nama kimia dari hidroklorotiazid hipertensi ringan sampai sedang (Tjay &
yaitu 6 kloro-3,4-dihidro-2H-1,2,4- Rahardja, 2007).

1

Menurut Farmakope Indonesia edisi V
tahun 2014, penetapan kadar hidrokloro-
tiazid dilakukan secara kromatografi cair
kinerja tinggi (KCKT) yang dilengkapi
dengan detektor 254 nm dan kolom 25 cm
x 4,6 mm berisi bahan pengisi L1. Laju alir
lebih kurang 2 mL per menit dengan fase
gerak campuran natrium posfat monobasa
0,1 M-asetonitril P (9:1) (Kementerian
Kesehatan RI, 2014).
Menurut Farmakope Inggris tahun
2009, penetapan kadar hidroklorotiazid
secara spektrofotometri ultraviolet dengan
menggunakan pelarut NaOH 0,01 M pada
panjang gelombang maksimum 273 nm
dan 323 nm diperoleh kadar 98 % sampai
102 % (British Pharmacopoeia, 2009).
Beberapa penelitian sebelumnya telah
dilakukan penetapan kadar
hidroklorotiazid. Salah satunya dengan
spektrofotometri ultraviolet. Pada
penelitian ini diperoleh panjang gelombang
272 nm, menggunakan pelarut NaOH 0,01
N dan air suling. Konsentrasi yang
digunakan 5 g/mL sampai 30 mg/mL
dalam air suling dan 1 g/mL sampai 30
g/mL untuk NaOH 0,01 N. Metode ini
memenuhi persyaratan akurasi karena
ditemukan linear dengan persamaan regresi
y = 0,198 + 0,043x dengan koefisien
regresi 0,999 dan y = 0,029 + 0,059x
dengan koefisien regresi 0,998 sedangkan
persentase akurasi yang diperoleh yaitu
98,75 % dan 98,88 % (Hapse, et al.,
2012).
Pada penelitian sebelumnya juga telah
dikembangkan tentang spektrofotometri
ultraviolet dengan dua metode. Metode
pertama yaitu luas daerah di bawah kurva
dengan daerah pengukuran 265 nm sampai
275 nm. Metode kedua yaitu
spektrofotometri derivatif pada panjang
gelombang 270 nm. Kosentrasi yang
digunakan pada kedua metode tersebut
adalah 1 sampai 5 g/mL dengan pelarut
metanol. Kadar hidroklorotiazid yang
diperoleh pada kedua metode ini, yaitu
99,72 % dengan simpangan baku 0,3123.
Kedua metode ini memenuhi persyaratan
validasi yang mana diperoleh nilai
koefisien regresi (r2) 0,999 dan nilai RSD
< 2 % (Ahmed, et al., 2012).
Selain itu, dikembangkan penetapan
kadar hidroklorotiazid dengan
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT)
yang dilengkapi dengan detektor 210 nm
dan kolom 25 cm dan 4,6 mm. Laju alir
lebih kurang 2 mL per menit dengan fase
gerak campuran metanol dan asam fosfat
dalam air (25:75 v/v). Pada metode ini
diperoleh kadar hidroklorotiazid yaitu 98,7
% 0,8. Nilai koefisien korelasi (r) 0,99
dan nilai RSD 0,86 (Kirschbaum &
Perilman, 1983).
Metode ini menggunakan alat khusus,
membutuhkan biaya yang mahal, dan
memerlukan waktu yang cukup lama.
Selain itu juga menggunakan pelarut yang
relatif mahal. Pengembangan metode
analisis dalam penentuan mutu suatu
produk dengan metoda yang lebih mudah
dapat dilakukan. Dalam hal ini, analisis
tablet hidroklorotiazid dapat dilakukan
dengan menggunakan metode
spektrofotometri ultraviolet karena metode
ini lebih mudah, murah dan terandalkan
dibandingkan dengan metode lainnya.
Metode analisis dengan spektrofotometri
ultraviolet yang sudah ada sebelumnya
yaitu berdasarkan nilai absorban,
transmitan, dan absorbtivitas. Namun,
metode luas daerah di bawah kurva belum
banyak yang menggunakannya. Selain itu,
penatapan kadar hidroklorotiazid dengan
metode luas daerah di bawah kurva yang
dibandingkan dengan metode absorbansi,
belum ada yang melakukannya.
Berdasarkan uraian di atas maka
peneliti bermaksud melakukan penelitian
mengenai pengembangan dan validasi
metode analisis hidrklorotiazid tablet
dengan absorbansi dan luas daerah di
bawah kurva secara spektrofotometri
ultraviolet. Metode ini diharapkan
diperoleh hasil yang lebih akurat pada
validasi metode analisis dan penetapan
kadar pada hidroklorotiazid tablet.
2

METODE PENELITIAN
Alat yang digunakan dalam penelitian
ini adalah spektrofotometer UV-Vis
(Shimadzu UV-1800), sonikator (Brason
1800), pH meter, timbangan analitik
(Precisa XB 220A), erlenmeyer (Iwaki
Pyrex), gelas piala (Iwaki Pyrex), labu
ukur (Iwaki Pyrex), corong (Iwaki Pyrex),
pipet mikro (Iwaki Pyrex), kertas saring
(Whatman No. 41), pipet tetes, bola hisap,
spatel, pengaduk, kertas perkamen,
aluminium foil, dan alat-alat lainnya yang
menunjang penelitian.
Bahan yang digunakan dalam penelitian
ini adalah Hiroklorotiazid murni (PT
Kimia Farma), Hidroklorotiazid Generik
tablet 25 mg (PT Kimia Farma, No. Batch
151554B, Exp. Desember 2020), Natrium
Hidroksida (PT Brataco), Metanol (PT
Merck), Etanol (PT Merck), Kalii
Dihydrogen Posfat (PT Merck) dan
Aquadestilata (CV Novalindo).
Prosedur
Pembuatan Pelarut
1. Pelarut NaOH 0,1 N
Larutkan 162 gram natrium
hidroksida P dalam 150 mL air bebas
karbon dioksida. Dinginkan larutan
hingga suhu kamar, saring melalui
kertas saring yang dikeraskan.
Masukkan 54,5 mL filtrat jernih ke
dalam wadah bertutup rapat dan
encerkan dengan air bebas karbon
dioksida hingga 1000 mL. Pipet 100 mL
dari larutan, masukkan ke dalam labu
ukur 1000 mL cukupkan sampai tanda
batas dengan air bebas karbon dioksida
dan homogenkan (Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia, 2014).
2. Pelarut Dapar Posfat pH 7,2
Timbang kalii dihydrogen fosfat
6,8045 gram dan Natrium hidroksida 2
gram, masing-masing masukan kedalam
labu ukur 250 mL. Kemudian larutkan
dengan air bebas karbon dioksida. Pipet
larutan kalii dihydrogen fosfat sebanyak
125 mL dan larutan Natrium hidroksida
0,2 N sebanyak 86,75 mL campurkan
didalam labu ukur 500 ukur pH sampai
7,2 mL lalu tambahkan air bebas karbon
dioksida sampai tanda batas
(Kementerian Kesehatan RI, 2014).
Pembuatan Larutan baku Hidrokloro-
tiazid 1000 g/mL
1. Pelarut Natrium Hidroksida 0,1 N
Buat larutan baku hidroklorotiazid
murni dengan kadar 1000 g/mL
dengan cara timbang seksama 100 mg
hidroklorotiazid murni menggunakan
timbangan analitik, masukkan ke dalam
labu ukur 100 mL, kemudian
tambahkan sebagian NaOH 0,1 N,
kocok hingga larut lalu dicukupkan
dengan NaOH 0,1 N sampai tanda batas
(Gangola, et al., 2011).
2. Pelarut Dapar Fosfat pH 7,2
Buat larutan baku hidroklorotiazid
murni dengan kadar 1000 g/mL,
dengan cara timbang seksama 100 mg
hidroklorotiazid murni masukkan ke
dalam labu ukur 100 mL, kemudian
tambahkan sebagian dapar fosfat pH
7,2. Kocok hingga larut, lalu
dicukupkan dengan dapar fosfat sampai
tanda batas, kocok homogen (Sowjanya,
et al., 2012).
3. Pelarut Metanol
Buat larutan baku hidroklorotiazid
murni dengan konsentrasi 1000 g/mL,
dengan cara ditimbang seksama 100 mg
hidroklorotiazid masukkan ke dalam
labu ukur 100 mL, dilarutkan dengan
metanol cukupkan dengan metanol
sampai tanda batas, kocok homogen
(Mali, 2015).
3
4. Pelarut Etanol
Buat larutan baku hidroklorotiazid
murni dengan konsentrasi 1000 g/mL,
dengan cara ditimbang seksama 100 mg
hidroklorotiazid masukkan ke dalam
labu ukur 100 mL, dilarutkan dengan
etanol cukupkan dengan etanol sampai
tanda batas, kocok homogen (Sridharan,
et al., 2010).
Penentuan Panjang Gelombang Serapan
Maksimum Hidroklorotiazid
Masing - masing larutan baku
hidroklorotiazid 1000 g/mL dengan
berbagai macam pelarut (NaOH 0,1 N,
dapar fosfat pH 7,2, metanol dan etanol),
lakukan pengenceran hingga didapat
konsentrasi 100 g/mL dengan cara pipet
sebanyak 10 mL, masukkan ke dalam labu
ukur 100 mL. Lalu encerkan dengan
masing-masing pelarut sampai tanda batas,
homogenkan. Kemudian masing-masing
larutan baku hidroklorotiazid 100 g/mL
dengan berbagai macam pelarut, dipipet
dengan mikropipet 1,0 mL masukkan ke
dalam labu ukur 10 mL, kemudian
dicukupkan dengan pelarut masing-masing
sampai tanda batas, kocok homogen
sehingga didapatkan konsentrasi 10
g/mL. Serapan diukur pada rentang
panjang gelombang 200 - 400 nm dengan
spektrofotometer ultraviolet sehingga
diperoleh panjang gelombang serapan
maksimum hidroklorotiazid.
Pembuatan Kurva Kalibrasi Hidroklo-
rotiazid
Pembuatan kurva kalibrasi dilakukan
dengan cara mengencerkan larutan baku
hidroklorotiazid 1000 g/mL menjadi 100
g/mL dalam pelarut terbaik. Kemudian
dipipet dengan mikro pipet sebanyak 0,4
mL, 0,6 mL, 0,8 mL, 1,0 mL, 1,2 mL dan
1,4 mL, masing-masingnya dimasukkan ke
dalam labu ukur 10 mL, cukupkan sampai
tanda batas lalu homogenkan hingga
diperoleh konsentrasi 4 g/mL, 6 g/mL, 8
g/mL, 10 g/mL, 12 g/mL dan 14
g/mL. Kemudian ukur absorban dan luas
daerah di bawah kurva masing-masing
larutan pada panjang gelombang 273 nm
dengan menggunakan spektrofotometer
UV-Vis.
Penetapan Kadar Hidroklorotiazid
Tablet
Penetapan kadar hidroklorotiazid tablet
dilakukan dengan cara timbang 20
hidroklorotiazid tablet, lalu digerus hingga
halus dan timbang setara dengan 100 mg
hidroklorotiazid murni. Larutkan dengan
pelarut terbaik sebanyak 70 mL dalam labu
ukur 100 mL. Sonikasi selama lebih
kurang 10 menit, kemudian cukup dengan
pelarut terbaik sampai tanda batas maka
diperoleh kosentrasi 1000 g/mL. Saring
larutan dengan menggunakan kertas saring
whatman nomor 41.
Dari larutan ini dipipet 10 mL,
kemudian masukkan kedalam labu ukur
100 ml, cukupkan dengan pelarut terbaik
sampai tanda batas, maka diperoleh
konsentrasi 100 g/mL. Pipet 1 mL dari
larutan tersebut, kemudian masukkan
kedalam labu ukur 10 ml, cukupkan
dengan pelarut terbaik sampai tanda batas,
maka diperoleh konsentrasi 10 g/mL.
Ukur absorban dan luas daerah di bawah
kurva pada panjang gelombang 273 nm
dengan spektrofotometer UV-Vis.
Tentukan kadar hidroklorotiazid tablet
berdasarkan persamaan regresi linier
hidroklorotiazid (Sayyed et al., 2015).
Validasi Metode Analisis
1. Uji Linearitas
Uji linearitas dilakukan dari data
pengukuran kurva kalibrasi, kemudian
dianalisis dengan regresi linear sehingga
diperoleh koefisien korelasi (r) yang
menunjukkan linearitasnya. Nilai
linearitas yang baik adalah 0,99 r 1
(Gandjar & Rohman, 2013).
2. Uji Batas Deteksi (LOD) dan Batas
Kuantitasi (LOQ)
4
 Batas deteksi dan batas kuantifikasi
a=
y b x
ditentukan regresi kurva baku yang n
diperoleh. Nilai LOD = 3,3 (SD/S) dan
LOQ = 10 (SD/S), standar deviasi (SD) x
respon ditentukan berdasarkan standar
deviasi residual merupakan nilai regresi
linier y = a + bx (Gandjar & Rohman, x2
2013). n
n xy x . y
3. Uji Akurasi b=
Uji akurasi dilakukan melalui uji
perolehan kembali dengan metode
spiking yaitu dengan cara menambahkan
Keterangan:
sejumlah larutan baku hidroklorotiazid
y = absorban / luas daerah di bawah
dalam suatu larutan uji yang kadarnya
kurva
diketahui dari konsentrasi larutan baku
x = konsentrasi (g/mL)
yang ditambahkan yaitu 80 %, 100 % dan
a = intersep / titik potong pada sumbu Y
120 %, masing-masing dilakukan 3 kali
b = slope
pengulangan. Kemudian dihitung nilai
perolehan kembali baku pembanding yang
ditambahkan pada larutan uji yang 2. Linearitas kurva baku
dinyatakan dengan persen perolehan Tujuan linearitas yaitu untuk
kembali. Metode validasi memenuhi syarat mengetahui seberapa baik kurva
jika persen perolehan kembalinya dengan kalibrasi yang menghubungkan antara
nilai rentang 80 % sampai 120 % (Gandjar respon (y) dan konsentrasi (x).
& Rohman, 2013). Linearitas ditentukan berdasarkan nilai
koefisien korelasi (r) dari persamaan
4. Uji Presisi regresi y = a + bx
Uji presisi dilakukan pada tingkat
keterulangan dengan cara mengukur kadar r
x y x y /n
i i i i

larutan baku hidroklorotiazid dengan (x x ) ( y y)

i
2
i
2

konsentrasi 10 g/mL, 12 g/mL dan 14

g/mL pada 3 waktu yang berbeda dalam
satu hari (intraday) dengan pengulangan Persamaan regresi ini dapat digunakan
masing-masing 6 kali. Pengukuran larutan jika faktor korelasinya 0,99 r 1
baku hidroklorotiazid dengan konsentrasi (Gandjar & Rohman, 2013).
yang sama pada 3 hari berturut-turut
(interday) dengan pengulangan masing-
3. Batas deteksi (LOD) dan batas
masing 6 kali. Nilai RSD antara 1 sampai 2
kuantitasi (LOQ)
% (Gandjar & Rohman, 2013).
Tujuan penentuan batas deteksi yaitu
untuk mengetahui jumlah terkecil analit
Analisis Data
yang masih bisa dideteksi namun tidak
perlu dapat terukur dan tujuan
1. Penetapan kadar
penentuan batas kuantitasi yaitu untuk
Kadar diklofenak natrium dalam tablet
mengetahui jumlah terkecil analit yang
ditentukan berdasarkan persamaan
masih bisa diukur dengan akurat
regresi linier y = a + bx.
(Gandjar & Rohman, 2013).

5
 S y2. x
Y 2
a Y b XY Tujuan dilakukan presisi yaitu untuk
n2 mengetahui kedekatan hasil analisis
apabila dilakukan oleh analis yang sama
S y / x S y2/ x dengan waktu yang berbeda. Presisi
dinyatakan dengan simpangan baku
relatif (RSD) atau koefisien variasi.
Batas deteksi dan batas kuantitasi
dihitung berdasarkan rumus: SD
RSD= x 100 %
a. Batas deteksi (LOD), x
Karena k = 3,3 atau 10, simpangan baku
(Sb) = Sy/x, maka:
3,3 Sy /x Simpangan baku relatif (RSD)
LOD= dinyatakan memenuhi validasi metode
b
jika nilai RSD antara 1 - 2 % (Gandjar
b. Batas kuantitasi (LOQ) & Rohman, 2013).
10 Sy /x
LOQ=
b

6. Analisa statistika data penelitian

4. Akurasi
Tujuan dilakukan akurasi yaitu untuk
mengetahui bahwa metode analisis
mempunyai derajat kedekatan hasil
analisis dengan kadar analit yang
sebenarnya. Akurasi diukur sebagai
banyaknya analit yang diperoleh
kembali.
CFCA
perolehan kembali :=
CA
100
CF : konsentrasi total sampel yang
diperoleh dari pengukuran
CA : konsentrasi sampel sebenarnya
C*A : konsentrasi analit yang
ditambahkan
Metode validasi memenuhi syarat jika
persen perolehan kembalinya dengan
nilai rentang 80 - 120 % (Gandjar &
Rohman, 2013).
5. Presisi
Data yang diperoleh dari penelitian ini
selanjutnya dilakukan analisa statistika
data penelitian dengan menggunakan
metode uji t sampel berpasangan dengan
menggunakan program SPSS 17.00. Data
yang dianalisis adalah:
a) Kadar hidroklorotiazid tablet dengan
metode absorbansi dan luas daerah di
bawah kurva.
b) Uji akurasi hidroklorotiazid tablet
x
dengan metode absorbansi dan luas
daerah di bawah kurva.
c) Uji presisi intraday hidroklorotiazid
tablet dengan metode absorbansi dan
luas daerah di bawah kurva.
d) Uji presisi interday hidroklorotiazid
tablet dengan metode absorbansi dan
luas daerah di bawah kurva.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini, ada empat pelarut
yang uji cobakan untuk memperoleh
pelarut terbaik. Pelarut yang diuji antara
lain pelarut NaOH 0,1 N, dapar fosfat pH
7,2, metanol, dan etanol.

6
 Gambar 1. Spektrum analit dalam pelarut NaOH 0,1 N

Pada Gambar 1 terlihat spektrum serapan menghasilkan max 273,00 nm dengan

hidroklorotiazid pembanding (konsentrasi absorban 0,520.
10 g/mL) dalam pelarut NaOH 0,1 N

Gambar 2. Spektrum analit dalam pelarut dapar fosfat pH 7,2

Pada Gambar 2 terlihat spektrum serapan 7,2 menghasilkan max 271,60 nm

hidroklorotiazid pembanding (konsentrasi dengan absorban 0,154.
10 g/mL) dalam pelarut dapar fosfat pH

7
 Gambar 3. Spektrum analit dalam pelarut metanol

Pada Gambar 3 terlihat spektrum serapan menghasilkan max 270,40 nm dengan

hidroklorotiazid pembanding (konsentrasi absorban 0,827.
10 g/mL) dalam pelarut metanol

Gambar 4. Spektrum analit dalam pelarut etanol

Pada Gambar 4 terlihat spektrum serapan
hidroklorotiazid pembanding (konsentrasi
10 g/mL) dalam pelarut etanol
menghasilkan max 270,60 nm dengan
absorban 0,660. Berdasarkan keempat
pelarut yang digunakan, maka dapat
disimpulkan pelarut yang terbaik adalah
NaOH 0,1 N. Hal ini disebabkan kelarutan
hidroklorotiazid yang mudah larut dalam
pelarut NaOH (Kementerian Kesehatan RI,
2014). Pelarut NaOH merupakan pelarut
yang tidak mudah menguap sehingga
dalam penggunaanya lebih stabil dan
pelarut NaOH merupakan pelarut non
organik. Selain itu dengan menggunakan
pelarut NaOH hidroklorotiazid
menunjukkan max 273,00 nm yang sesuai
standar Farmakope Indonesia dan
Farmakope British dimana absorban

8
memasuki rentang antara 0,2 sampai 0,8
yaitu 0,520 (Gandjar & Rohman, 2013).
Pembuatan kurva kalibrasi hidrokloro-
tiazid dengan konsentrasi 4, 6, 8, 10,12, 14
g/mL dengan melihat hubungan antara
konsentrasi dengan absorban didapatkan
persamaan regresi linier, yaitu y = 0,03608
+ 0,04865x, sedangkan dari pembuatan
kurva kalibrasi hidroklorotiazid dengan
melihat hubungan antara konsentrasi
dengan luas daerah di bawah kurva
didapatkan persamaan regresi linier yaitu y
= 0,81215 + 0,63255x. Kurva kalibrasi
dapat di lihat pada gambar di bawah ini.

Gambar 5. Kurva kalibrasi analit dengan metode absorbansi

Gambar 6. Kurva kalibrasi analit dengan metode luas daerah di bawah kurva

Penetapan kadar hidroklorotiazid tablet hidroklorotiazid tablet memenuhi

(No. Batch 151554B, Exp. Desember
2020) didapatkan persen kadar yaitu 99,50
% dengan simpangan baku 0,015 dengan
metode absorbansi dan 99,97 % dengan
simpangan baku 0,017 dengan metode luas
daerah di bawah kurva, sehingga kadar
persyaratan sesuai Farmakope Indonesia
edisi V yaitu 90 % sampai 110 %
(Kementerian Kesehatan RI, 2014). Selain
itu, kadar hidroklorotiazid yang diperoleh
juga memenuhi persyaratan Farmakope
Amerika edisi 30 tahun 2007 yaitu 90 %

9
sampai 110 % (U.S.P, 2007), dan
memenuhi persyaratan Farmakope British
tahun 2009 yaitu 90 sampai 110 %. Namun
dengan identifikasi menggunakan
spektrofotometri ultraviolet pada panjang
gelombang 273 nm dan 232 nm diperoleh
kadar 98 % sampai 102 % yang mana ini
berarti kadar yang diperoleh juga
memenuhi persyaratan (British
Pharmacopoeia, 2009).
Pada penelitian sebelumnya dengan
metode absorbansi dengan pelarut NaOH
0,1 N diperoleh kadar 99,12 % dengan
simpangan baku 0,49 (Sayyed, et al.,
2015), sedangkan metode luas daerah
dibawah kurva dengan pelarut metanol
diperoleh kadar hidroklorotiazid 99,63 %
dengan simpangan baku 0,74 (Ilango, et
al., 2012). Hasil penetapan kadar
hidroklorotiazid dapat dilihat pada tabel
dibawah ini.

Tabel I. Penetapan kadar hidroklorotiazid dengan metode absorbansi

No Absorban Kadar Kadar (%)
(g/mL) dalam tablet
1 0,528 10,111 101,11 %
2 0,531 10,173 101,73 %
3 0,520 9,947 99,47 %
4 0,514 9,824 98,24 %
5 0,516 9,865 98,65 %
6 0,512 9,783 97,83 %
Rata-rata 99,50 %
SD 0,015

Tabel II. Penetapan kadar sampel dengan metode luas daerah di bawah
No Luas Kadar Kadar (%)
daerah (g/mL) dalam tablet
1 7,259 10,192 101,92 %
2 7,291 10,424 101,42 %
3 7,131 9,989 99,89 %
4 7,037 9,841 98,41 %
5 7,071 9,895 98,95 %
6 7,025 9,822 98,22 %
Rata-rata 99,97 %
SD 0,017

Linearitas dilakukan dengan membuat diperoleh koefisien korelasi (r) yaitu =

kurva kalibrasi yang menghubungkan
antara konsentrasi dengan absorban dan
konsentrasi dengan luas daerah di bawah
kurva. Tujuan linearitas, yaitu untuk
mengetahui seberapa baik kurva kalibrasi
yang menghubungkan antara respon (y)
dan konsentrasi (x). Linearitas dengan
metode absorbansi diperoleh koefisien
korelasi (r) yaitu = 0,99982 dan linearitas
dengan metode luas daerah di bawah kurva
0,99671 tapi dari kedua hasil koefisien
korelasi di atas koefisien korelasi
hubungan antara konsentrasi dengan
absorban yang memiliki nilai lebih baik
karena lebih mendekati 1 sesuai dengan
literatur yang menyatakan kriteria
penerimaan yaitu nilai koefisien korelasi
(r) mendekati 1 (0,995 r 1) (Gandjar &
Rohman, 2013).

10
 Penentuan batas deteksi dan batas
kuantitasi merupakan parameter yang
sensitivitas. Tujuan penentuan batas
deteksi yaitu untuk mengetahui jumlah
terkecil analit yang masih bisa dideteksi
namun tidak perlu dapat terukur dan tujuan
penentuan batas kuantitasi yaitu untuk
mengetahui jumlah terkecil analit yang
masih bisa diukur dengan akurat (Harmita,
2004). Batas deteksi dan batas kuantitasi
yang diperoleh dari metode absorbansi
yaitu 0,56871 dan 1,72337, sedangkan
batas deteksi dan batas kuantitasi yang
diperoleh dari metode luas daerah di
bawah kurva yaitu 1,13111 dan 3,42760.
Pengujian akurasi pada penelitian
bertujuan untuk mengetahui bahwa metode
analisis mempunyai derajat kedekatan
hasil analisis dengan kadar analit yang
sebenarnya. Ini menggunakan metode
adisi dengan menambahkan sejumlah
analit dengan konsentrasi tertentu pada
sampel yang diperiksa, lalu dianalisis
dengan metode tersebut. Persen perolehan
kembali ditentukan dengan menentukan
berapa persen analit yang telah
ditambahkan dapat ditemukan. Persen
analit yang ditambahkan adalah 80 %, 100
%, dan 120 %. Dari hasil uji perolehan
kembali hidroklorotiazid dengan metode
absorbansi didapatkan persen perolehan
kembali 98,40 %; 96,33 % dan 96,25 %
dengan rata-rata 96,99 % dengan
simpangan baku 0,012 dan persen
perolehan kembali untuk metode luas
daerah di bawah kurva yaitu 105,91 %,
106,01 %, dan 102,43 % dengan rata-rata
104,78 % sehingga kedua metode berada
pada rentang yang diperbolehkan yaitu (80
% sampai 120 %) dengan simpangan baku
0,17 (Gandjar & Rohman, 2013).
Penentuan presisi intraday
hidroklorotiazid dilakukan pada waktu
pagi, siang dan sore hari dengan tiga
konsentrasi berbeda. Pada metoda
absorbansi dengan konsentrasi 10 g/mL
diperoleh RSD yaitu 0,90 %; 0,88 % dan
0,90 %. Konsentrasi 12 g/mL diperoleh
RSD yaitu 0,65 %; 0,64 % dan 0,28 %.
Konsentrasi 14 g/mL diperoleh RSD
yaitu 0,65 %; 0,59 % dan 0,72 %
sedangkan pada metode luas daerah di
bawah kurva dengan konsentrasi 10 g/mL
diperoleh RSD yaitu 1,17 %; 1,28 % dan
1,16 %. Konsentrasi 12 g/mL diperoleh
RSD yaitu 0,83 %; 0,79 % dan 0,16 %.
Konsentrasi 14 g/mL diperoleh RSD
yaitu 0,49 %; 0,47 % dan 0,80 %.
Penentuan presisi interday
hidroklorotiazid dilakukan selama 3 hari
dengan tiga konsentrasi berbeda. Pada
metode absorbansi, hari pertama, kedua,
dan ketiga dengan kosentrasi 10 g/mL
diperoleh RSD yaitu 1,15 %; 0,81 %
dan 1,05 %. Konsentrasi 12 g/mL pada
hari pertama, kedua, dan ketiga diperoleh
RSD berturut-turut yaitu 1,60 %; 0,87 %
dan 0,57 %. Konsentrasi 14 g/mL pada
hari pertama, kedua, dan ketiga diperoleh
RSD berturut-turut yaitu 0,62 %; 0,71 %
dan 0,65 % sedangkan pada metode luas
daerah dibawah kurva, hari pertama,
kedua, dan ketiga dengan kosentrasi 10
g/mL diperoleh RSD Konsentrasi 10
g/mL pada hari pertama, kedua, dan
ketiga diperoleh RSD yaitu 1,37 %; 1,00
% dan 1,29 %. Konsentrasi 12 g/mL pada
hari pertama, kedua, dan ketiga diperoleh
RSD berturut-turut yaitu 1,28 %; 0,63 %
dan 0,41 %. Konsentrasi 14 g/mL pada
hari pertama kedua dan ketiga diperoleh
RSD berturut-turut yaitu 0,48 %; 0,53 %
dan 0,50 %.
KESIMPULAN
Pelarut terbaik yang digunakan untuk
analisis hidroklorotiazid tablet dengan
metode spektrofotometri ultraviolet yaitu
NaOH 0,1 N. Metode absorbansi dan luas
daerah di bawah kurva menunjukkan
bahwa kedua metode tersebut adalah
metode yang valid untuk analisis
hidroklorotiazid tablet. Metode absorbansi
dan luas daerah di bawah kurva secara
spektrofotometri ultraviolet yang telah
divalidasi dapat digunakan untuk
penetapan kadar hidroklorotiazid tablet,
yaitu 99,50 % dengan metode absorbansi
dan 99,70 % dengan metode luas daerah di
bawah kurva. Kadar hidroklorotiazid tablet
11
yang diperoleh memenuhi persyaratan Perhitungannya. Majalah Ilmu
Farmakope Indonesia edisi V tahun 2014 Kefarmasian, 1, (3), 117-135.
dengan kadar hidroklorotiazid tablet yang Ilango, K., & Kumar, S. (2012).
tertera 90 sampai 110 %. Simultaneous Determination of
Omelsartan Medoxomil and
UCAPAN TERIMA KASIH Hydrochlorothiazide by Area Under
Pada kesempatan ini perkenankan Curve and Dual Wavelength
penulis mengucapkan terima kasih yang Spectrophotometric Methods.
setulusnya atas bantuan, bimbingan, doa, Journal of Pharmaceutical Sciences
dukungan, semangat, dan perhatian atas and Research. 4, (10), 1946-1949
terwujudnya tulisan ini kepada Bapak DR. Kementerian Kesehatan Republik
H. Harrizul Rivai, MS selaku Pembimbing Indonesia. (2014). Farmakope
I dan Ibu Dwi Dinni Aulia B, M.Farm, Apt Indonesia. (Edisi V). Jakarta:
selaku pembimbing II atas ilmu dan Kementerian Kesehatan Republik
kesabarannya dalam membimbing penulis Indonesia.
untuk menyelesaikan artikel ini. Kirschbaum, j., & Perilman, S. (1983).
Analisys of Captopril and
DAFTAR PUSTAKA Hydrochlorothiazide Combination
Tablet Formulations by Liquid
Ahmed, M., Jamadar, N., & Shetty, S. Chromatography. American
(2012). Silmutaneous Estimation of Pharmaceutical Association. 73, (5),
Atenolol and Hydrochlorotiazide in 686-687.
Combined Dosage Form By UV- Mali, A. D., (2015). Simultaneous
Spctrophotometric Methods. Actha Determination Of Carvedilol And
Chim Pharm Indica. 2, (3), 134-142. Hydrochlorotiazide In
British Pharmacopoeia. (2009). British Pharmaceutical Dosage Form By
Pharmacopoeia, Volume I & II. Pirst Order Derivative UV
London: The British Pharmacopoeia Spectrophotometry. International
Commision. Journal of Pharmacy and
Gandjar, I. G., & Rohman, A. (2013). Pharmaceutical Sciences, 7, (9),
Kimia Farmasi Analisis. (Edisi XI) 0975-1491.
Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Mutschler, E. (1991). Dinamika Obat
Gangola, R., Kaushik, S., & Sharma, P. Buku Ajar Farmakologi dan
(2011). Spectrophotometric Toksikologi. (Edisi 5). Bandung:
Simultaneous Determination of Penerbit ITB.
Hydrochlorothiazide and Telmisartan Nafrialdi. (2007). Obat yang
in Combined Dosage Form. Journal Mempengaruhi Metabolisme
of Applied Pharmaceutical Science. Elektrolit dan konservasi Air. In S.G
1, (1), 46-49. Gunawan., R. Setiabudy., Nafrialdi
Hapse. S. A., Wagh. V. S., Kadaskar. P. T., & Elysabeth (Eds). Farmakologi
Dokhe. M. D., & Shirsath. A. S. dan Terapi. (Edisi V). Jakarta:
(2012). Spectrophotometric Fakultas Kedokteran Universitas
Estimation and Validation of Indonesia.
Hydrochlorothiazide in Tablet Sayyed, Z. M., Shinde, S. A., Chaudhari,
Dosage Forms By Using Differnt B. P., & Biyani, K. B. (2015).
Solvent. Der Pharma Chemica, 4 Deploment and Validation of UV
(1), 10-14. Spectrophotometric Method for
Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Simultaneous Estimation of
Validasi Metode dan Cara Amlodipine Besylate and
Hydrochlorothiazide in Combined

12
 Dosage Form Including Stability in Combined Pharmaceutical Dosage
Study. Journal of Pharmaceutical Form by UV Spectroscopy using
Science and Biocientific Research Multicomponent Mode of Analysis.
(JPSBR). 5, (5), 487-493. International J ournal of
Sowjanya, G., Gangadhar, P., Rao, R., ChemTech Research, 2, (2), 876-879.
Subrahmanyam, P., & Suresh, P. Tjay, T. H. & Rahardja, K. (2007). Obat-
(2012). Simultaneous UV obat Penting, Khasiat dan
spectrphotometric estimation of Penggunaannya. Edisi VI. Jakarta:
enalapril maleate and PT. Elex Media Komputindo.
hydrochlorothiazide in tablets. U.S. Pharmacopoeia. (2007). Unitid States
Journal of Cemical and Pharmacopoeia (USP). Edisi 30.
Pharmaceutical Research. 4, (7), Maryland : U.S. Pharmacopoeia
3483-3488. Convention.
Sridharan, D., Thenmozhi, A., Watson, D. G. (2009). Analisis Farmasi:
Rajamanickam, V., Buku Ajar untuk Mahasiswa
Sundaranandavalli, S., & Farmasi dan Praktisi Kimia
Palanikumar, B. (2010). Farmasi. (Edisi 2). Penerjemah:
Simultaneous Estimation of W.R. Syarief. Jakarta: Penerbit Buku
Irbesartan and Hydrochlorothiazide Kedokteran EGC.

13