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POTENCIAIS BIOELTRICOS (BIOELETROGNESE).

Como possvel medir os potenciais eltricos presentes em nossas clulas?


O potencial de membrana, ou seja, o POTENCIAL DE REPOUSO um
Potencial que surge devido difuso de alguma espcie qumica dotada de
carga eltrica?

Potencial eletroqumico para um dado on (X)

A equao de Nernst

Assumindo uma diferena nula na energia qumica para um on em ambos


os lados da membrana, a diferena de potencial eletroqumico do on (X) pode
ser expressa como a soma das diferenas na energia osmtica e eltrica, ou
seja:

X 2 X 1 X RT ln
X 2 zF
X1 2 1

Quando o sistema est em equilbrio


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K zF 0

2
RT ln
K
1
2 1

RT K

2

zF K Equao de Nernst
2 1 ln
1

a 36.6oC e z=1 e ln A 2.3 log A


Assumindo 1 no meio do lado esquerdo (do esquema acima) ou externo (de
qualquer clula) = 0

E 61mV log
K
2

K
1

O potencial de Nernst para os principais ons pode ser calculado


usando os dados de concentrao dentro e fora da clula em repouso e
adotando o potencial na soluo extracelular igual a zero:

Ion Cf, mM Cd, mM Nernst,


C1 C2 mV
K+ 4 140 -94 mV
Na+ 145 10 +70.8
Ca2+ 2.4 0.0001 +133.5
Cl- 110 4 -87.8

Podemos inicialmente considerar que:


O potencial de repouso, o potencial de Nernst = o potencial de equilbrio
do K+ ou do Cl-
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Os dados experimentais no corroboram os clculos, portanto a membrana


permevel a mais de uma espcie inica. Os trs tipos inicos principais (K+, Na+ e
Cl-) e assumindo um gradiente de voltagem constante atravs da membrana (varie
linearmente), podemos deduzir que o potencial de membrana (Vm) poder ser
calculado usando a equao de Goldman:

RT PK [ Ki ] PNa[ Nai ] PCl [Clo ]


Vm ln
zF PK [ Ko ] PNa[ Nao ] PCl [Cli ]
onde, os subscritos i e o indicam os compartimentos de dentro e fora da clula,
respectivamente.

O potencial calculado difere do experimental em condies de mudana


de temperatura e substncias especficas, indicando a presena de outros
processos de transporte envolvidos, principalmente, a bomba de Na+, K+.
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Dependncia do potencial de membrana em clulas gigantes do gnglio


gastroesofgico do molusco marinho Anisodoris nobilis em funo da
concentrao de K+ na soluo banhante externa das clulas.
A ouabana um inibidor especfico da Na-K-ATPase. A linha traada de acordo
com a equao de Goldman.

A bomba de Na+,K+.
A difuso sempre tende a equilibrar as concentraes de ons nos meios
intra e extracelular. A estabilidade dos gradientes inicos mantida com o
transporte ativo: protenas integrais que transportam ons atravs da membrana
contra seus gradientes eletroqumicos, usando para isto, a energia do
metabolismo.
O acoplamento entre os fluxos ativos de Na+ e K+ constante e pode ser
descrito por uma equao estequiomtrica simples:
3Na+dentro + 2K+fora Bomba 3Na+fora + 2K+dentro
Deste modo, a bomba ou Na+,K+ATPase uma bomba eletrognica.
Assim sendo, ela gera corrente eltrica atravs da membrana, e como
resultado, aumenta a eletronegatividade do espao intracelular em ~10 mV.
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A bomba de Na+,K+ o maior representante do transporte ativo das clulas.

Na maioria das clulas, quase um/tero da energia consumida no


funcionamento da bomba; Nas clulas nervosas eletricamente excitveis, a bomba
de Na+,K+ consome quase dois/teros da energia da clula.
Na ausncia de K+ externo, pouco Na+ bombeado para fora, e na
ausncia de Na+ interno, nenhum K+ bombeado para dentro. Estes dois
fluxos so ditos altamente acoplados, da o nome bomba de Na+,K+.

Evidncia experimental da dependncia de energia do transporte de Na+ para


fora da clula.
A taxa de transporte de Na+ por meio da bomba suficientemente alta: 150-
600 Na+ ons/sec. Por outro lado, a mesma taxa de 105 Na+ ons/sec, em um
nico canal de Na.
A bomba de Na+,K+ uma protena heterodimrica. Sua estrutura
tridimensional e o seu mecanismo molecular de funcionamento so pouco
conhecidos.
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A estrutura esquemtica da bomba de Na+,K+


Efeitos da inibio da bomba Na+,K+.

Fluxo de Na+ de um axnio gigante da Lula em potencial de repouso, seguido


por um perodo de estimulao, em gua do mar contendo sdio radioativo.
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Modelo molecular proposto.

Equilbrio de Gibbs-Donnan
Um sistema (como a clula) contendo ons permeantes e no permeantes, o
potencial eletroqumico para todos os ons permeantes dentro e fora da clula
so iguais. Este o Equilbrio de Gibbs-Donnan. Deste modo para os ons
K+ e Cl-, o potencial de equilbrio de Gibbs-Donnan, escrito como:

RT ln
K zF 0

K
A
K + A B
B

RT ln
Cl zF 0

Cl
A
A B
Cl
B
======================================
K ln [Cl ] ln [Cl ]

K
A A B
ln
[Cl ]
B [Cl ] B A
onde, os subscritos A e B indicam os meios intra- e extra celular, respectivamente.
K


[Cl ] B
[ K ] A [Cl ] A [ K ] B [Cl ] B
K
A

B [Cl ] A

Equao de Gibbs-Donnan.
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A influncia dos ons no permeantes.
Podemos deduzir que a presena de nions no permeantes resulta em
potencial eltrico negativo, no compartimento onde ele est presente.

No caso da figura acima Y- um nion no permeante. A presena dele s no


lado esquerdo desequilibra a concentrao de K+ e conseqentemente
modifica a distribuio do Cl-.
A equao do Gibbs-Donnan indica que se a mudana da concentrao do K+
X, o equilbrio pode ser descrito como
(0.1 + X)*X = (0.1-X)2

Tudo isso forma a diferena de potencial entre o lado A e o lado B. Se


assumirmos que o potencial no lado B zero, temos que o lado A est sob
potencial negativo:
A-B= -61 mV log(2) = -18.4 mV

Uma presso adicional precisa ser aplicada no lado contendo os nions


no permeantes, em condies de equilbrio de Donnan, para evitar o fluxo
de gua para a cmara A.

1 atm =1.013 x 105 N m-2;

1 N m-2 = 1P;

1 bar = 1 x 105 N m-2 (P);

1 mmHg (Tor)=133.3 N m-2 (P);


mmH2O = 9.81 P = 1 kg m-2.
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De maneira geral, os nions no permeantes so responsveis pela
gerao de 10mV no potencial de repouso.

Uma presso adicional precisa ser aplicada no lado contendo os nions


no permeantes, em condies de equilbrio de Donnan, para evitar o fluxo
de gua para a cmara A. De forma simplificada a presso osmtica () pode
ser expressa pela lei de Vant Hoff:
= RT iC
onde i o nmero das partculas (ons) criadas por uma molcula
do soluto;
C a concentrao molar do soluto;
um coeficiente osmtico.
O termo iC pode ser considerado como a concentrao osmtica
efetiva e se chama osmolaridade (Osmoles/litro).

Assumindo que i e para K e Cl so bem prximos do 1


+ -

~ RT * C
Onde: Ci, , concentrao em Mol/m3 ; 1 atm = 1.01 x 105 N/m2
Resoluo: C = 134 Mol/m3;
= 134 (Mol/m3) x RT (J/Mol) = 332012 N/m2 ~ 3 atm

CONCLUSO

O potencial de repouso consiste basicamente de trs componentes:

1) Transporte ativo - bomba de K+,Na+ (~ -10 mV);

2) Equilbrio de Donnan (~ -10 mV) e

3) Potencial de Difuso.
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A EQUAO DE CONDUTNCIA.

Ento o equilbrio para qualquer componente (A+ ou A-) em um sistema de


dois compartimentos separados por uma membrana permevel, deve
apresentar igualdade entre a diferena da energia osmtica e a diferena da
energia eltrica do componente:

zF i o RT ln
Ai i o Eeq E Nerrnst
Ao
Nessa situao o fluxo resultante de A nulo! Isso a situao dos ons
distribudos entre os meios intra e extracelular. Ento o fluxo do qualquer
componente A acontece se o potencial de membrana (Vm ) diferente do
potencial de Nernst (Eeq) para o componente A.

A fora eltrica (F) que move ons pode ser expressa como:

F ~ (Vm - Eeq)

Como os ons possuem carga, o fluxo inico igual a corrente eltrica (I). Ento
da lei de Ohm:
I K g K (Vm E K )
I Na g Na (Vm E Na )
I Cl g Cl (Vm ECl )

Vm potencial de membrana; I representa as correntes; g so


condutncias e E, os potenciais de equilbrio de cada on, como denotado
pelos subscritos.

A equao da condutncia pode ser derivada do potencial eletroqumico


ou simplesmente da Lei de Ohm. Como visto, se a voltagem transmembrana
for igual ao potencial de equilbrio de um determinado on, no haver fluxo
efetivo desse on atravs da membrana. Se o potencial de membrana no for
igual ao potencial de equilbrio de qualquer on, a diferena entre o potencial
de membrana e o potencial de equilbrio desse on a fora propulsora para
esse on. Dado que os ons tm carga, o fluxo inico equivalente corrente
eltrica, ento podemos aplicar a Lei de Ohm.
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+ + -
Caso se admita que K , Na e Cl so os ons mais importantes, em
condies de estado estacionrio (equilbrio dinmico), a corrente total
transmembrana igual a zero.

IK + INa + ICl = 0
ou
g K (Vm E K ) g Na (Vm E Na ) g Cl (Vm ECl ) 0
Deste modo, o potencial de repouso pode ser escrito como:
gK g g
Vm E K Na E Na Cl ECl
g g g
onde g g K g Na g Cl
A equao postula que o potencial de membrana uma mdia
ponderada dos potenciais de equilbrio de todos os ons a que a
membrana permevel, neste caso K+ , Na+ e Cl-. O peso atribudo a cada
on a condutncia da membrana para aquela espcie de on, dividida pela
condutncia inica total da membrana.

As equaes de Goldman, de Nernst e da condutncia, so


freqentemente utilizadas na anlise do potencial transmembrana
celular.
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Potenciais de Propagao: Potenciais locais e Potencial de ao.

Analisando os sinais eltricos dos tecidos excitveis, encontramos dois


tipos bsicos de potenciais: o potencial local e o potencial de ao.

Os potenciais de ao so empregados para enviar mensagens


rapidamente a longas distncias. (msculos e nervos) com velocidade
constante e nenhuma perda de amplitude.

Ao contrrio dos potenciais de ao, os potenciais locais propagam-se


em distncias pequenas e so responsveis por mecanismos de transduo
altamente localizados; so graduados em amplitude e durao. No
apresentam limiar e sofrem somao temporal e espacial.

Potencial de Ao.
Limiar. Existe um limiar para
estimulao artificial do potencial de
ao com um eletrodo de corrente.
eltrica.
Um estmulo hiperpolarizante
normalmente no excita; Um
estmulo despolarizante sublimiar
tambm no produz nenhuma
resposta propagada; e todos os
estmulos supralimiar geram o
mesmo esteritipo de onda que
trafega com a mesma velocidade.
O potencial de ao dido como
tudo ou nada, em termos de
resposta.
Um breve estmulo de corrente
precisa ser mais intenso que um
estmulo longo.

Resposta de voltagem do axnio


ao estmulo de corrente.
Os nmeros indicam a intensidade
relativa da corrente aplicada. O
estmulo indutor do potencial de
ao considerado como 1.
Refratariedade. Para um breve estmulo aps um potencial de ao, por maior
que seja o estmulo, no eliciar um segundo potencial de ao, isto o perodo
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refratrio absoluto, ou seja, a clula est inexcitvel. Logo em seguida temos um
curto intervalo, chamado perodo refratrio relativo quando o estmulo limiar est
acima do normal. A refratoriedade permanece at que os canais inicos na
membrana retornem a condio de repouso. O perodo refratrio absoluto
estabelece um limite superior na taxa mxima de disparos repetitivos de um
axnio. A refratariedade exerce a maior importncia em garantir que os impulsos
no revertam sua direo espontaneamente.

Circuitos locais de corrente e a propagao do potencial de ao.

Como uma regio excitada de um axnio coloca uma regio ainda no


excitada em atividade durante a propagao normal do potencial de ao?

1. A propagao basicamente um evento mecnico ou qumico com


substncias excitantes colocadas em cada local, causando
secundariamente um evento eltrico mensurvel.

2. O prprio potencial de ao funciona como estmulo eltrico que se


espalha pelas propriedades de cabo do axnio, colocando em atividade
regies de membranas na vizinhana.
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A base molecular desses efeitos so os canais inicos.

Tipos de canais inicos

Como a corrente eltrica afeta o potencial de repouso das clulas?


As correntes eltricas pequenas normalmente fluem das regies excitadas
(despolarizadas) para regies vizinhas ainda no excitadas, despolarizando-aS.

Os circuitos locais de corrente fluem de dentro do axnio, onde a


membrana est despolarizada para a membrana em repouso, ou seja, saindo
atravs da membrana em repouso, e fechando o circuito para a regio da
membrana ativa, atravs do espao extracelular, seguindo as regras de fluxo de
corrente em resistores e capacitores, resultando num espalhamento
passivo da despolarizao a frente do potencial de ao.

A propagao unidirecional por causa da refratariedade.


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A propagao do potencial de ao apresenta no mnimo quatro
propriedades fundamentais.

Constncia na forma e no tamanho durante a propagao.


A condutncia eltrica da membrana aumenta transitoriamente durante a
propagao.
A velocidade de conduo e curso temporal do potencial de ao
diminuem, quando a clula resfriada.
A amplitude, a taxa de subida e a velocidade de conduo diminuem
reversivelmente quando a concentrao de sdio externo reduzida.

Constncia na forma e amplitude.


Aumento transitrio da condutncia
eltrica da membrana (mensurada pela
permeabilidade inica.

Diminuio na durao e na velocidade Diminuio de amplitude, taxa de


de conduo com o resfriamento. subida e velocidade de conduo com
a concentrao do sdio.
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A CONSTANTE DE ESPAO UM PARMETRO DAS CLULAS


ALONGADAS.

Como em um cabo eltrico, uma


parte da corrente flui
longitudinalmente ao longo do eixo
da fibra, para reas mais distantes do
local de aplicao de corrente
(estmulo), o decurso espacial de Vm
decai exponencialmente a medida
que a distncia aumenta,
dependendo das propriedades da
membrana.
Montagem do experimento.

O grfico mostra que Vm decai


exponencialmente a medida que a
distncia aumenta, com uma constante
de espao, , de ~1.2 mm na fibra
muscular.

A teoria do cabo prediz que a constante de espao (Constante de


comprimento) depende das resistncias de membrana (rm) e da citoplasmtica (ri),
ou seja:

= (rm/ri)]
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VELOCIDADE DE CONDUO E O DIMETRO DA FIBRA NERVOSA.


Para axnios mielinizados de
mamferos a 370C, cada m de
dimetro externo, aumenta em
6 m/s a velocidade de conduo.

A 20oC 10-m de uma fibra de


axnio de r apresenta a mesma
velocidade de conduo que, uma
fibra de axnio gigante de Lula 500-
m.
Uma fibra nervosa de axnio
tpica de mamfero, com 1 mm de
dimetro, contm 1000 fibras de 10-
20 m . Uma fibra nervosa
composta de axnios no
mielinizados, precisaria ter 38 mm
de dimetro para apresentar a
mesma velocidade de conduo.

Conduo saltatria.

As alteraes da bainha de mielina esto presentes em doenas como a


esclerose mltipla.
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Simulao computacional da propagao do potencial de ao em fibras nervosas


parcialmente desmielinizadas. O clculo utiliza o modelo de Hodgkin-Huxley para
membrana nodal excitvel e as equaes do cabo para as regies internodais
mielinizadas.
A mielina internodal entre os ndulos 4 e 5 considerada ser 2.7% ou 2.5% da
espessura normal. Adaptado de Koles ZJ, Rasminsky M.J.Physiol.(Lond) 227:351-364,
1972. A Desmielinizao aumenta a capacitncia efetiva prximo ao nodo 4.

MODELO DE HODGKIN-HUXLEY (H-H).


Para descrever o curso temporal do potencial de ao, Hodgkin e Huxley
desenvolveram equaes cinticas para mimetizar a voltagem mensurada e a
dependncia temporal de gNa e gK. Eles escolheram um modelo cintico equivalente a
presena de quatro gates (portes, comportas) operando de maneira independente e
serial para controlar a permeabilidade de cada canal.

Para os canais de Na --- 3 "m-gates", movem-se rapidamente (ativando o canal)


na despolarizao, e 1 "h-gate", move-se lentamente (inativando-o). A quantidade
3
de canais de Na abertos proporcional a m h, onde m a probabilidade variante no
tempo de que qualquer um m-gate esteja aberto, e h a probabilidade variante no
tempo de que um h-gate esteja na posio de inativao.
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Para os canais de K so 4 "n-gates" movendo-se lentamente, e a frao de canais
4
de K abertos proporcional a n .
Com estas definies, as taxas de abertura e fechamento dos m-, h-, e n-gates
hipotticos podem ser determinadas em cada voltagem, a partir da medida do
decurso temporal de gNa e gK.

INa = m3h gNaMax (Em - ENa).


IK = n4 gKMax (Em - EK).

Adicionalmente uma pequena permeabilidade basal (corrente de vazamento)


tambm foi considerada e definida como segue:

IL = gL (Em - EL)
Este modelo de Hodgkin e Huxley, juntamente com as equaes do cabo para
um axnio com capacitncia de membrana e resistncia interna, reproduz bem dos
fenmenos da excitabilidade.
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BASES INICAS DO POTENCIAL DE AO.

A corrente inica em resposta a potenciais Separao da corrente transmembrana em


hiperpolarizantes at -130 mV. duas componentes, a de Na+ e a de K+.
Ii a corrente total; Ii' a corrente aps a
troca de 90% do NaCl externo por, cloreto
de colina INa= Ii - Ii'.

Demonstrao farmacolgica de que as


correntes de Na+ e de K+ so
independentes. Registros obtidos de um
ndulo de Ranvier. Aps alguns minutos da adio de TEA a
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soluo banhante, IK bloqueada.

Mudanas nas condutncias de sdio e de


potssio, durante o potencial de ao.
gNa aumenta milhares de vezes durante o
estgio inicial do potencial de ao, enquanto
gK aumenta somente ~30 vezes, durante um
curto intervalo de tempo no final do P.A..

Tabela de distribuio dos picos de Na e Ca.


Propagao por picos de Na. Propagao por picos de Ca.
Em todos os msculos de invertebrados;
Axnios do reino animal; Nodos sinoatrial e atrioventricular
Do msculo de vertebrados; cardacos;
Msculo atrial e ventricular cardacos; Msculo liso de vertebrados;
Fibras de Purkinje cardacas. Dendritos de neurnios centrais.

CONCLUSO GERAL SOBRE O POTENCIAL DE AO.


A propagao do potencial de ao requer que cada regio excitada da fibra nervosa, coloque
a prxima em ao, em um ciclo que progride em alta velocidade ao longo do axnio. A
excitao envolve canais dependentes de voltagem, inicialmente os de Na+ e/ou Ca2+ e depois
de K+. Com a despolarizao inativam-se os canais de Na e se abrem mais canais de K, a
membrana repolariza, e o potencial finalizado.
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OS DIFERENTES TIPOS DE CANAIS PRESENTES NAS MEMBRANAS


BIOLGICAS.

Evidncia experimental da presena de canais


A tcnica de Patch-clamp
(clampear um pedacinho da membrana).

ALGUMAS FAMLIAS DE CANAIS.


Famlia Subfamlia representativa Efeito
Canais catinicos Canais de Na+ Basicamente
dependentes de Canais de K+ gerao do
voltagem. Canais de Ca2+ potencial de
ao.
Canais catinicos dependentes de ACh Excitatrio
Canais inicos Canais catinicos dependentes de serotonina Excitatrio
dependentes de Canais catinicos dependentes de glutamato Excitatrio
ligantes. Canais de cloreto dependentes de GABA Inibitrio
Canais de cloreto dependentes de glicina Inibitrio

DIVERSIDADE DO GATING NOS CANAIS DE K.


Tipo Abreviatura Caractersticas
Retificador IK Tipo do axnio gigante, abre tardiamente depois da
tardio despolarizao.
Dependente IK(Ca) O Ca interno e a despolarizao sinergicamente promovem
de Ca a sua abertura.
Corrente A IA Abre transitoriamente com a despolarizao e permanece
inativado at Em> -50 mV
Corrente M IM No inativado, lento, retificador tardio que desligado
por agonistas muscarnicos.
Retificador Iir Conduz uma corrente de K para dentro que rapidamente
para dentro desativada pela despolarizao.