FACULDADES INTEGRADAS APARCIO CARVALHO

APOSTILA DE MICOLOGIA CLNICA

( Luiz A. Tagliani Farmacutico)

INTRODUO
Fungos
Os fungos so organismos eucariotas e os seus ncleos esto dispersos por
um conjunto de hifas contnuas ou septadas os miclios.Podem ser encontrados
em praticamente qualquer ambiente e tm grande importncia na degradao de
matria orgnica. Para alm disso tm grande relevncia para a medicina, pois
algumas espcies produzem substncias como antibiticos, esterides, cidos
orgnicos etc. Tambm tm aplicaes industriais na rea alimentar (alguns
fungos so comestveis cogumelos - e outros funcionam como fermentadores
de vinho,cerveja, po, queijo, etc).

Embora a maioria dos fungos no seja patognica para o Homem, quando o ,

o seu tratamento mais complicado do que se se tratassem de organismos
procariotas como as bactrias. Isto acontece por serem organismos eucariotas o
que implica uma organizao celular semelhante da espcie Humana. Assim o
tratamento deve ter em conta este aspecto e ser mais direccionado s
caractersticas exclusivas das clulas dos fungos, a fim de no prejudicar
tambm as clulas Humanas.

A figura esquerda (Penicillium)

pertence a um gnero responsvel
pela produo da penicilina. A
figura direita (Aspergillius) a um
gnero de fungos oportunistas que
se podem desenvolver em pessoas
com baixa resistncia imunolgica
(como doentes com leucemia ou
sida).

Durante muitos anos a Micologia teve pouca expresso na rea mdica, possivelmente
pela falta de diagnstico adequado. Ultimamente, onmero de pacientes suscetveis aos
mais variados tipos de infeces tem aumentado significantemente. Com esse
crescimento, as infeces fngicas vm se tornando mais freqentes.
Com o aparecimento da antibioticoterapia, utilizao de mtodos imunossupressores,
surgimento da AIDS e melhora nos mtodos diagnsticos, observamos o aumento no
nmero de casos de infeces fngicas.
O diagnstico de uma infeco fngica tem por base a combinao de dados clnicos
e laboratoriais. O processo laboratorial inclui:
 1. Demonstrao do fungo no material examinado por microscopia e cultura;
2. Deteco de anticorpos especficos;
3. Deteco de antgenos e metablitos liberados pelo fungo nos lquidos corpreos
ou tecidos.
.
Tendo em vista a importncia do diagnstico micolgico, a disciplina objetiva
desenvolver no aluno a capacidade de identificao de fungos filamentosos e
leveduriformes assim como introduzir os principais aspectos da Micologia Mdica.
Portanto, torna-se imprescindvel o bom conhecimento das principais estruturas
fngicas e das tcnicas utilizadas em sua identificao.
As micoses podem ser divididas em:

Superficiais:
Pitirase versicolor
Piedra branca
Piedra negra

Cutneas:
Dermatofitoses
Candidase

Subcutneas:
Cromomicose,
Esporotricose
Micetoma (eumicetoma e actinomicetoma)
Zigomicose
Rinosporidiose
Doena de Jorge Lobo
Feo-hifomicose
Hialo-hifomicose

Sistmicas:
Paracoccidioidomicose
Histoplasmose

Oportunistas:
Criptococose
Aspergilose

PARTE I

MICOSES SUPERFICIAIS
Micoses que desenvolvem alteraes apenas na camada mais superficial do estrato
crneo e no induz, na maioria das vezes, qualquer resposta inflamatria no hospedeiro.
Principais Doenas e agentes etiolgicos:
Pitirase versicolor Malassezia furfur
Piedra negra Piedraia hortae
Piedra branca Trichosporon beiguele

- Pitirase versicolor:
Infeco geralmente assintomtica, mas, em raras ocasies, pode ser relatado pelo
paciente um discreto prurido. Apresenta-se como manchas hipo ou hiperpigmentada,
descamativas geralmente no trax, pescoo e braos em adultos jovens, sem distino
de sexo. Os principais fatores endgenos para o aparecimento das leses so: Pele
gordurosa, elevada sudorese, fatores hereditrios e uso de terapia imunossupressora.
Ag. Etiolgico: Malassezia furfur

Diagnstico:
Raspado de pele clareado com KOH.
Escamas de Pele com Malassezia Furfur Coradas pelo P.A.S: Leveduras
arredondadas, formando aglomerados em forma de cachos de uva ou
mosaico; hifas curtas e grossas, em forma de Y ou L, de cor vermelha.
Isolamento: Para isolamento primrio de fungo de material clnico, com suspeita de
petirase versicolor, devemos utilizar um meio especialmente preparado para o
isolamento dessas leveduras, visto que so lipodependente.

- Piedra Negra
Micose que se caracteriza clinicamente pelo aparecimento, nos cabelos e raramente
em outros plos do corpo humano de ndulos endurecidos e de colorao escura.
Doena benigna, baixo contgio, carter crnico, freqentemente recidivante que afeta
ambos os sexos.
Ag. Etiolgico: Piedraia hortae

Diagnstico:

Piedraia hortae
Em plo: Produz a piedra negra. Nmero varivel de ndulos duros, escuros
(marrons e negros), localizados ao longo do plo.
Microscopicamente observam-se hifas, formando um pseudo-tecido (ou
pseudoparnquima), devido a justaposio das mesmas. O aspecto de mosaico, com
reas mais claras, onde se localizam os ascos contendo ascosporos, s visveis aps
esmagamento e clareamento com KOH.
- Piedra Branca:
Ndulos fracamente aderidos aos cabelos ou plos de cor branca amarelado. Doena de
distribuio geogrfica com predileo por climas tropicais e temperados, de carter
assintomtico, benigno e de baixo contgio, que acomete indistintamente cabelos e
plos das regies axilares, pubianos, perianal, barba e bigode.
Agente etiolgico: Trichosporon beigelli
Diagnstico:

Trichosporon beigelii
Em plo: Produz a piedra branca, geralmente localizada na extremidade do pelo. A
superfcie homognea, devido massa de leveduras. A cor varia de branco a amarelo.

MICOSES CUTNEAS
Dermatofitose
Candidase

Dermatfitos:
Pertencem ao grupo dos fungos denominados de dermatfitos os fungos filamentosos,
hialinos, septados, algumas vezes artroconidiados, queratinoflicos, passveis de
colonizar e causar leses clnicas em plos e/ou extrato crneo de homens e animais.
So divididos em trs gneros:
Trichophyton, Microsporum e Epidermophyton. Em relao ao seu habitat
podem ser divididos em geoflicos- vivem em solos, zooflicos vivem em animais e
antropoflicos vivem no homem.
Os aspectos clnicos das leses dermatofticas so bastante variados e resultam da
combinao de destruio da queratina associada a uma resposta inflamatria, mais ou
menos intensa, na dependncia do binmio parasito/hospedeiro. Na classificao clnica
das dermatofitoses so utilizadas as denominaes Tinea seguidas do stio anatmico
das leses, exemplo: Tinea capitis (couro cabeludo).
Descrio das principais dermatofitoses e seus agentes mais frequentes:
Tinea pedis (tinha do p): T. rubrum, T. mentagrophytes, E.floccosum
Tinea ungueum (tinha da unha, onicomicose) : T. rubrum, T. mentagrophytes
Tinea corporis, Tinea circinada (tinha de pele glaba): T. rubrum,
T.mentagrophytes, M. canis
Tinea barbae (tinha da barba): T. verrucosum, M. canis, T. violaceum
Tinea cruris (tinha da regio inguino-crural): T. rubrum, E. floccosum
Tinea fvica (tinha alopeciante): T. schoenleinni
Tinea capitis (tinha do couro cabeludo): endotrix: T. mentagrophytes, T.
violaceum, T. tonsurans ectotrix: M. canis, M. gypseum
Obs.: endotrix: parasitismo no interior dos plos ectotrix: parasitismo fora do plo.
Descrevemos as principais caractersticas diferenciais dos gneros e espcies mais
comuns encontradas parasitando o homem:

Gnero Trichophyton;
Gnero mais freqentemente isolado de material clnico, acometendo tanto a pele glaba
como os cabelos e unhas.
T. rubrum;
 Espcie antropoflica cosmopolita. Sua transmisso exclusivamente inter-humana ou
por fmites contaminados.
Crescimento em 12-16 dias em agar Sabouraud. Colnias com textura algodonosa,
apresentam tonalidade branca que, com o passar do tempo, pode tornar-se avermelhada
e reverso avermelhado. Apresenta grande quantidade de microcondeos, regulares e
piriformess. Os macroconideos, quando presentes, podem apresentar-se como clavas
alongadas, quase com um aspecto cilndrico e com duas a nove septaes.

T.tonsurans:
Parasita antropoflico. Apresentam crescimento intermedirio, com maturao 12-16
dias aps semeadura primria, colnias bastante variveis que pode variar do
algodonoso ao veludoso. Verso com colorao branco e reverso apresenta tons variados
de castanho-avermelhado. Apresenta numerosos microcondeos dispostos em acldio e
de formas variadas.

T. mentagrophytes:
Pode apresentar variedades : T. mentagrophytes var. mentagrophytes
espcie zooflica em agar Sabourad apresenta textura pulverulenta de colorao que
pode variar do branco-amarelado ao castanho-avermelhado reverso avermelhado e T.
mentagrophytes var. interdigitale espcie antropoflica colnia veludosa ao
algodonosa, de colorao brancoamarelado, reverso acastanhado ou avermelhado. A
diferenciao das variedades no evidente.
Microscopicamente, as colnias apresentam grande quantidade de microcondeos
arredondados e agrupados, o que lhes confere o aspecto em cacho. Os macrocondeos,
quando presentes, mostram um aspecto semelhante a um charuto, som um a seis septos
transversais. Com freqncia observam-se estruturas de ornamentao, tais com hifas
em espiral.

T. verrucosum:
Trata-se de um fungo cosmopolita que parasita principalmente bovinos, podendo
esporadicamente causar leses em humanos.
Clinicamente pode causar leses bastante inflamatrias do couro cabeludo, pele
glaba, barba e bigode. Crescimento lento que varia de 13-25 dias.
Macroscopicamente, a colnia caracteriza-se por uma textura veludoso, pigmentao
do verso que varia do branco ao amarelo ocre. O reverso apresenta-se em de amarelo
com pigmento no difusvel pelo meio. A microscopia ptica, de material proveniente
de Agar Sabouraud no apresenta microcondeos nem macrocondeos. O que chama a
ateno e a quantidade de cadeias formadas por clamidoconideos grandes.

T. schoenleinii:
Crescimento lento que varia de 14 a 30 dias. Colnias com textura veludosa e
pigmentao que varia do bege ao castanho escuro. O reverso segue o mesmo tom do
verso no se observa pigmento difusvel no meio.
Na microscopia geralmente no so observados macrocondeos nem microconseos;
entretanto, vem-se numerosas hifas septadas e em bifurcao, associadas a hifas em
forma de candelabro e a hifas em forma de cabea de prego.
Gnero Microsporum:

M.canis:
um dermatfito zooflico transmitido ao homem por diversos animais domsticos
principalmente felinos jovens. Clinicamente, responsvel por leses do couro
cabeludo, caracterizada por grandes placas de alopcia, principalmente em crianas.
Crescimento rpido de 6-10 dias. Textura algodonosa de tonalidade branca. O reverso
apresenta-se de colorao amarelo-limo. A microscopia direta da colnia mostra na
maioria das vezes grande quantidade de macrocondeos fusiformes verrucosos, de
paredes grossas e com numerosas septaes, que variam de 5 a 7. Os microcondeos
sem em quantidade variadas e sem nenhum valor diagnstico.

M. gypseum:
Espcie geoflica, que infecta o homem atravs do contato com o solo contaminado.
Colnia de crescimento rpido 3-5 dias.
Macroscopicamente a colnia possui textura pulverulenta com pigmentao amarelo-
acastanhado. O reverso pode apresentar variaes de cores que vo do alaranjado ao
marrom. Microscopicamente apresentam macrocondeos simtricos, com 3-7 septos de
paredes finas, extremidade arredondada e superfcie levemente rugosa.

Gnero Epidermophyton;

E. floccosum:
Dermatfito antropoflico. Crescimento rpido 7-10 dias.
Macroscopicamente essas colnias apresentam textura algodonosa. A colorao dos
bordos e do verso amarelo-esverdeada. O reverso da colnia tende a acompanhar a
colorao do verso. Pigmento difusvel no meio. Microscopicamente, caracteriza-se pela
presena de macrocondeos de parede fina, com 2 a 5 septos e agrupados em cachos.
-Candidases:
Nome de conotao genrica para denominar doenas causadas por Cndida
albicans e outras espcies. O habitat da Candida bastante amplo, no homem essa
levedura habita a mucosa digestiva e por contigidade a mucosa vaginal. A infeco
pode atingir mucosas, tecido cutneo e em alguns casos pode ser sistmica. As
manifestaes clnicas apresentam grande diversidade de quadros, podendo ser
divididas em trs grandes grupos: Candidase cutneo-mucosa, Candidase sistmica e
candidase alrgica. As principais espcies patognicas so:
C. albicans
C. tropicalis
C. pseudotropicalis
C. guilliermondi
C. parapsilosis
C. krusei
MICOSES SUBUTNEAS
Micoses subcutneas so infeces causadas por um grupo
diversificados de fungos que ataca o homem e os animais . As
leses aparecem inicialmente a partir de um ponto de
inoculao de estruturas fngicas, atravs de traumatismos
diversos. Podem permanecer localizados ou se espalhar pelos
tecidos adjacentes, por via linftica ou hematognica.
As maiorias dos fungos envolvidas so saprbios habituais do
solo e egetais em decomposio. As principais micoses
subcutneas so; Cromoblastomicose, esporotricose, micetoma
(eumicetoma e actinomicetoma), zigomicose, rinosporidiose,
doena de Jorge Lobo, feo-hifomicose e hialo-hifomicose.

Cromoblastomicose:
Infeco crnica, granulomatosa, caracterizada por leses nodulares, verrucosas,
papilomatosas, por vezes ulceradas, localizadas, preferencialmente nos membros
inferiores, tendo como agente etiolgico fungos de colorao escura (demaciceos),
distribudos por diversas espcies. Os principais so: Fonsecaea pedrosoi, F.
compacta, Phialophora verrucosa, Clodophialophora carrionii e
Rhinocladiella aquaspersa.
A principal via de contgio se faz atravs de soluo de continuidade produzida na
pele por fragmentos de vegetais ou madeira contaminados.
Diagnstico:
Exame direto: Material proveniente das leses (escamas, crostas ou pus) ou
pequeno fragmento de bipsias clarificado com KOH. Observam-se clulas
arredondadas de contornos bem ntidos, acastanhados, algumas se mostrando em
processo de reproduo binria (clulas esclerticas).
Cultura: Em gar Sabouraud crescimento em torno de 7 a 15 dias de colnias
escuras. O aspecto microscpico da cultura no o mesmo em todos os casos, sofrendo
variaes na morfologia, fato que leva a identificao das espcies.

Esporotricose:
A esporotricose uma infeco de evoluo sub-aguda ou crnica, caracterizada por
pequenos tumores subcutneos (gomas), que tendem supurao e ulcerao. O agente
etiolgico o Sporothrix schenckii, fungo dimrfico, que se introduz nos tecidos
orgnicos atravs de traumatismo ou, raramente, por inalao. Esse fungo encontrado
em vida saproftica em vegetais, solo, guas contaminadas e animais. A forma clnica
mais freqente da micose a linfangite nodular ascendente, que se inicia pela
inoculao do agente, geralmente nas extremidades (cancro de inoculao), atingindo os
glnglios linfticos.
Diagnstico:
Exame direto: A fresco no revela nenhuma forma conclusiva do S. schenckii.
Esfregaos de pus corados pelo Gram, PAS ou Gomori, raramente permitem a
visualizao do fungo. As clulas fngicas observadas nas leses so raras, e quando
presentes so vistas pequenas leveduras com ou sem brotamento em forma de navete, ou
sob a forma de corpo asteride.
Cultura:
Macromorfologia: Culturas de crescimento rpido (4 dias). Apresentam
dimorfismo trmico. A 25-30 C, colnias inicialmente lisas e brancas, que se tornam
midas, enrugadas ou aveludadas, e, com frequncia, escurecem apresentando colorao
marrom ou preta. Alguns isolados so inicialmente escuros. A 35- 37C colnias de cor
creme ou bronzeada, lisas, macias e leveduriformes.
Micromorfologia: 25-30C - Hifas septadas, delgadas, conidiforo verticilado,
sessil ou pedunculado, com condios alongados, afilados nas duas extremidades,
pequenos e unicelulares. Fracamente ligados s hifas, tendo uma disposio com
aspecto de margarida.
Micetomas:
Definio: Micetoma uma sndrome clnica, de evoluo
crnica, caracterizada pelo aumento de volume de uma regio
ou rgo, com a presena ou no de fstulas que drenam um
material seroso ou seropurulento no qual podem ser
encontrados gros. A trade de tumefao, fstulas que
drenam e a presena de gros usada no sentido restrito para
definir o termo micetoma. O Gro um aglomerado de
microrganismos.
O micetoma pode ser provocado tanto por bactrias como
por fungo verdadeiro.
Os micetomas so classificados em dois grupos:
actinomicticos ou actinomicose e maduromicticos ou
maduromicose. O primeiro grupo, mais numeroso, esto os
micetomas produzidos por bactrias, os actinomicetos. No
segundo esto os micetomas provocados por fungos
verdadeiros, ou eumicetos.
Ainda os micetomas actinomicticos (de origem bacteriana)
podem ser divididos em dois grupos, segundo a origem
endgena ou exgena do agente:
- Actinomicose, de origem endgena, provocada por
actinomicetos anaerbicos, sendo os mais freqentes o
Actinomyces israelli, e Arachnia propionica.
- Nocardiose, de origem exgena, provocada por actinomicetos
aerbios, sendo os mais freqentes a Nocardia asterides, N.
brasiliensis e vrias espcies do gnero Streptomyces,
principalmente o S. somaliensis.
Os micetomas maduromicticos, causados pelos eumicetos
so provocados principalmente pelo Madurella grisea, M.
mycetomatis e Pyrenochaeta romeroi.

Diagnstico:
 O diagnstico laboratorial dos micetomas baseado na observao dos gros, que
drenam espontaneamente das leses, ou que so extrados atravs de puno ou biopsia.
Gro de actinomiceto
Em corte de tecido: O gro aparece no meio de uma rea com grande infiltrao
linfocitria, sem forma regular e sem estrutura interna bem definida. constitudo de
massas de finssimos filamentos. Nas bordas freqentemente formam-se massas
irregulares ou expanses com forma de clava . A cor varia muito devido diversidade
dos agentes causais (desde azul a vermelho claro), variando tambm conforme a tcnica
de colorao.
Gro maduromictico
Em corte de tecido: Gros grandes, de forma irregular, contorno bem ntido,
com estrutura interna constituda de hifas cortadas em diversas posies, dando um
aspecto do mosaico irregular. No apresentam clavas e a colorao varia de marrom a
preto.
Zigomicose:
Zigomicose so infeces causadas por fungos pertencentes classe dos
Zygomycetes. Em sua maioria, esses organismos so saprofticos, vivendo no solo,
gua e nos vegetais em decomposio. So fungos filamentosos constitudos de hifas
largas e sem septo. A zigomicose dividida em duas entidades clnicas distintas: a
mucormicose, tambm conhecida apenas como zigomicose; e a entomoftoromicose,
cujos agentes etiolgicos pertencem s ordens dos Mucorales e Entomophtorales,
respectivamente.
A mucormicose uma infeco, em geral, de evoluo rpida e fulminante.
Os agentes etiolgicos mais freqentemente isolados nos quadros de mucormicose
so os seguintes: Mucor sp., Rhizopus sp. Rhizomucor sp. e Absidia sp.. As
principais formas clnicas dessa doena so: Zigomicose cutnea (trauma mecnico),
zigomicose pulmonar (bola fngica), zigomicose rinocerebral (forma clnica mais
comum- inicia-se nos seios paranasais e evolui para o celebro) e zigomicose sistmica
(est relacionada com a forma primria pulmonar).
Diagnstico:
Exame direto: KOH, observam-se hifas largas, no septadas, irregulares.
Cultura: Meio Sabouraud No usar meio com cicloeximida pois impede o
crescimento do fungo.
Rhizopus sp
Macromorfologia: Colnia de crescimento rpido, cotonosa, inicialmente branca,
passando para acinzentada ou amarronzada, recoberta de pontos negros.
Micromorfologia: Hifas vegetativas largas, cenocticas (septos ausentes), hialinas.
Esporangiforos ligados por estolones que conectam as bases das estipes (hastes) nos
pontos de fixao sobre a superfcie. As estipes podem ser nicas ou faciculadas
(formando feixes), sem ramificao, tendo na base os rizides ou rizomorfas que so
rgos com aspecto de raiz e tm por funo fixar sobre superfcies e absorver
alimentos. A extremidade da estipe alarga-se como guarda chuva(columela) de onde
sai a membrana formadora do esporngio. Este globoso, inicialmente incolor,
passando a preto com a idade da cultura. No interior do esporngio formam-se os
esporangisporos que , quando maduros, so liberados em grande nmero aps a
ruptura da membrana.
Entomoftoromicose:
uma infeco crnica do tecido subcutneo e mucosa, causada por fungos que
vivem saprofiticamente no solo , vegetais em decomposio e fezes de rpteis e
anfbios. A infeco ocorre com maior freqncia atravs da inalao ou inoculao de
esporos. Os principais agentes etiolgicos so; Delacroixia coronata e o
Basidiobolus ranarum.
Feo-hifomicose:
A designao feo-hifomicose foi proposta por Ajello, em 1974, para denominar
infeces cutneas, subcutneas e profundas, agudas ou crnicas, causadas por uma
grande variedade de fungos escuros com exceo dos agentes da cromoblastomicose. Os
principais agentes etiolgicos so; Bipolaris oregonensis, Cladosporium
bantianum e Exophiala jeanselmei. Exophiala jeanselmei. Bipolaris
oregonensis Cladosporium bantianum
Hialo-hifomicose:
Esse termo foi proposto por Ajello, 1982, para agrupar as infeces ocasionadas por
fungos filamentosos hialinos, septados, no formadores de estruturas especficas (como
os gros dos eumicetomas) e que, at ento, no eram patgenos clssicos. A maioria
dos fungos produtores dessa micose so saprofticas habituais do solo, parasitas de
vegetais e degradadores de materiais orgnicos. Grande parte desses fungos
oportunista, com limitado poder patognico. Os principais so: Acremonium
falciforme, Penicillium marneffei, Scedosporim apiospermum e
Scopulariopsis brevicaulis. Penicillium sp, Scopulariopsis Scedosporium,
Acremonium. Rinosporidiose:
uma infeco mictica submucosa, crnica, de evoluo lenta e granulomatosa,
causada pelo Rinosporidium seeberii. Essa infeco caracterizada pela formao
de plipos vegetantes localizados, principalmente nas mucosas nasal e conjuntival. O
fungo um provvel habitante de guas estagnadas, poos e audes, sendo uma das
possveis vias de aquisio da infeco.
Diagnstico:
Exame direto: KOH do material biolgico (plipos) observa-se clulas
arredondadas (esporngio) de parede espessura variando de 10 a 100 m de dimetro.
Nos cortes histolgicos corado por HE PAS e Gomori observa-se grande quantidade de
esporngio com numerosos ndosporos em seu interior.

-Doena de Jorge Lobo

uma doena crnica, localizada, caracterizada pela presena de leses semelhantes
a um queloide, leses verrucosas ou vegetantes, nodulares ou tumorais. O agente
etiolgico da micose o fungo denominado de Loboa loboi. A contaminao acredita-
se que seja atravs da inoculao acidental do parasita por traumatismo.
Diagnstico:
 realizado basicamente pelo exame direto e histopatolgico. No exame direto com
KOH observa-se clula globosa leveduriforme de tamanho uniforme com incluses
lipdicas em seu citoplasma e com parede espessa. No exame histopatolgico observa-se
clulas arredondadas, de parede espessa, isoladas em cadeias com intensa reao
inflamatria.
No possvel cultivar o fungo.

MICOSES PROFUNDAS
Paracoccidioidomicose (PCM):
Trata-se de infeco granulomatosa de evoluo crnica, com grande polimorfismo
crlnico, onde as formas pulmonares e cutneo-mucosas predominam, seguindo-se
outros rgos, como gnglios linfticos, suprarenal, bao fgado, intestinos, ossos, etc.
Na grande maioria dos casos, os pulmes esto comprometidos e, em geral, tal
localizao acompanhada de leses em outros locais. A paracoccidioidomicose de
distribuio geogrfica restrita aos pases latino-americanos. Atinge freqentemente
indivduos do sexo masculino entre 30-40 anos. Quanto ao modo de contgio da doena,
admite-se, atualmente, que adquirida pela inalao de esporos que vivem na natureza,
no solo, vegetais ou na gua, determinando leses primrias pulmonares.
A classificao clnica na paracoccidioidomicose pode ser:
PCM-infeco: estgios assintomticos e subclnicos. Contatos com o fungo sem
desenvolver sintomas. Testes intradermico positivos.
PCM-doena; Doena clnica sintomtica
Aguda ou juvenil: Evoluo rpida, dissemina-se para rgos e sistemas
Crnica: Origina-se da PCM-infeco, leva muitos anos para se manifestar.
Pode disseminar para outros rgos.
Agente etiolgico: Paracoccidioides brasiliensis. Fungo dimrfico trmico a
25oC forma micelial 37 oC forma de levedura.
Diagnstico laboratorial;
realizado pela pesquisa direta do agente em escarro, biopsia de leso, pus de
linfonodos ou pesquisa de anticorpos no soro.
Exame direto: Material da leso ou escarro com KOH. So encontradas formas
caractersticas de leveduras com parede dupla e mltiplos brotamentos (em roda de
leme).
Em pus: Clulas arredondadas (na sua maioria), ovaladas, com parede grossa bem
refringente. Tamanho varivel. Formao de brotos nicos, duplos ou mltiplos (em
roda de leme). Disposio catenulada ou aglomerada. Pequenos vacolos aparecem no
citoplasma.
Em material corado pela hematoxilina-eosina: Apresenta-se como
formas arredondadas, de 1 a 20 m, com parede grossa e refringente, isoladas ou
agrupadas, com brotamento nico ou mltiplo (em roda de leme). A colorao do
citoplasma varia de levemente azulada e levemente avermelhada, podendo ser incolor.
Com frequncia, aparecem fagocitadas por clulas gigantes (Langhans).
Em material corado pela prata: O aspecto o mesmo da preparao
anterior, mas a colorao das clulas fngicas varia de amarelo claro passando pelo
marrom, at preto. Observa-se com maior nitidez as formas com brotamentos mltiplos.
Cultura: Cultivo em agar Sabouraud e agar Mycosel a 25oC. Aps 20-30 dias,
crescimento de colnias brancas que anlise micromorfolgica apresentam
clamidsporos intercalados ou terminais nas hifas. O diagnstico pode ser feito se
observado a converso da forma micelial para leveduriforme cultivando-se a 37oC.
Histoplasmose:
uma doena granulomatosa, tendo como agente etiolgico o fungo Histoplasma
capsulatum, que apresenta especial afinidade pelo sistema retculo endotelial,
produzindo diversas manifestaes clnicas.
Classificao das formas clnicas:
Assintomtica: Indivduos que entram em contato com o fungo mais no desenvolvem
sintomas. Algumas vezes podem aparecer sintomas que se assemelham desde uma
tuberculose a um resfriado. Os glnglios mediastinais podem estar envolvidos. Quando
no ocorre a cura espontnea, evolui para a forma generalizada.
Generalizada: Ocorre por disseminao pulmonar apresentando sintomas de acordo
com o rgo afetado principalmente os que fazem parte do sistema retculo endotelial
como fgado, bao e linfonodos. O contgio atravs da inalao de esporos do fungo.
O Histoplasma capsulatum tambm um fungo dimrfico trmico.
Diagnstico;
Exame direto: Material biolgico com KOH as formas de leveduras dificilmente
so encontradas por este mtodo.
Em corte de tecido corado pela H.E.: Clulas parasitrias arredondadas,
aparecendo como elementos intracelulares, de parede grossa e citoplasma retrado.
Observa-se uma zona clara entre a parede e o citoplasma, o que simula uma cpsula.

MICOSES OPORTUNISTAS
Criptococose:
Infeco subaguda ou crnica, de comprometimento pulmonar, sistmico e do
sistema nervoso central, causado pelo Cryptococcus neoformans. A
infeco primria no homem sempre pulmonar, devido a inalao do fungo da
natureza. A infeco pulmonar quase sempre subclnica e transitria;
entretanto, pode emergir ao lado de outras doenas que debilitem o indivduo,
tornar-se rapidamente sistmica e fatal. Portanto conhecida como infeco
oportunista. O fungo possui forte neurotropismo.

Diagnstico:
Materiais biolgicos: lquor, escarro, pus ganglionar, exudatos de leses cutneas e
mucosas, urina e sangue.
Exame direto: A fresco com tinta nanquim. O fungo visualizado como uma clula
arredondada.
Macromorfologia: Culturas de crescimento rpido (3 dias). Colnia plana ou
levemente elevada, brilhante, mida, com frequncia mucide. Cor inicialmente creme
tornando-se bronzeada.
Micromorfologia: Clulas arredondadas ou ovalada, isoladas ou com brotamento
nico; parede grossa, bem refringente e vacolos no citoplasma. Cpsula bem ntida em
preparaes com tinta nanquim.
Aspergilose:
A arpergilose no seu sentido amplo definida como um grupo de doenas na qual
fungos do gnero Aspergillus esto envolvidos. Esses fungos so cosmopolitas e
extremamente presentes na natureza, sendo encontrados em restos orgnicos, no solo,
no ar e sobre a superfcie de seres vivos, etc. Por essas razes, representa no laboratrio
de micologia, uma fonte freqente de contaminao dos meios de cultura e de
espcimes clnicos a serem analisados. No homem a doena depende do estado
fisiolgico geral ou local do hospedeiro.
As principais manifestaes clnicas so:
Aspergilose pulmonar: Aspergiloma (bola fngica), Aspergilose invasiva, Aspergilose
alrgica, Aspergilose bronco-pulmonar, Aspergilose disseminada, Otomicose,
Onicomicose.
Diagnstico:
Exame direto: Em KOH hifas hialinas
Cultura:
Macromorfologia: Colnia de crescimento rpido, inicialmente branca, passando
a azul, verde, amarela ou preta. Reverso incolor, amarelo ou preto. Pulvurulenta ou
granulosa, com borda franjada e contorno circular ou lobado, mas limitado.
Micromorfologia: Hifas vegetativas, ramificadas, septadas, incolores e
refringentes. Conidiforo, com haste simples, saindo de uma clula base, e extremidade
globlosa (vescula). Da superfcie da vescula saem filides ou esterigmas, em forma de
garrafas e disposio radiada no seu conjunto. Na extremidade de cada filide forma-se
uma cadeia de esporos basipetos (condio ou fialosporo), globosos, de cor varivel.

PARTE II
Tcnicas para identificao de fungos
Tcnicas para identificao de fungos filamentosos
1- Tcnica de esgaramento:
Utilizada como primeira tentativa (mais rpida) para identificao de colnias
filamentosas. As estruturas fngicas so quebradas, tornando-se mais difcil a
identificao.
Com ala de platina em L, retirar um pedao da colnia de bolor crescida no gar.
Colocar 1 a 2 gotas de Lactofenol azul-algodo. Cobrir com lamnula, comprimindo
levemente. Observar em microscpio com aumento de 400X.
2- Microcultivo em lmina:
No microcultivo em lmina, as estruturas permanecem ntegras alm de ser utilizado um
meio de cultura (gar batata), que estimula a produo de macro e microcondeos, que
na maioria das vezes identificam o fungo. Estimula, tambm, a formao de pigmento.
Esterilizar placas de Petri com 3 lminas no interior (duas servem para suporte e a
outra para realizar o microcultivo).
Preparar gar batata em placa
Cortar em quadradinhos
Colocar um pedao de gar batata no centro da lmina do microcultivo
Com a ala em L, cortar pedaos bem pequenos da colnia do bolor, crescidos no
gar e colocar nos quatro lados do pedao de gar batata
Cobrir com lamnula estril, pressionando levemente
Colocar um pouco de gua destilada estril e deixar a 25oC, repondo a gua estril,
sempre que necessrio. Deixar por 10-15 dias, dependendo da velocidade do
crescimento do fungo.
Para montar, retirar a lamnula com pina estril. Fixar o fungo na lamnula colocando
1 a 2 gotas de lcool e esperar secar. Montar essa lamnula em lmina limpa, com 1 gota
de Lactofenol azulalgodo.
A lamnula pode ser vedada com esmalte de unha ou Entellan para conservar por mais
tempo.
Reagentes e meios de cultura:
Lactofenol azul-algodo:
Fenol cristalizado 20g
cido lctico 20ml
Glicerina 40ml
gua destilada 20ml
Azul-algodo 0,05g
Fundir o fenol separadamente. Misturar o cido lctico, glicerina e gua com o fenol.
Colocar o corante e filtrar em papel.
gar Batata:
Batata 10g
Glicose 5g
gar 10g
gua 500ml
Ferver bem a batata cortada em pedacinhos e descascadas. Amassar bem e completar o
volume para 500ml. Adicionar a glicose e o gar e deixar em Banho-Maria at dissolver
completamente.
Colocar em frascos com aproximadamente 20ml. Autoclavar a 121oC por 15 minutos.

IDENTIFICAO DE LEVEDURAS 1- PROVA DO TUBO GERMINATIVO:

A prova do tubo germinativo um teste que caracteriza rpida e presuntivamente a
levedura da espcie Candida albicans.
A tcnica muito simples e baseia-se, fundamentalmente, na semeadura de um
pequeno inculo dessa levedura em soro, que pode ser de vrias espcies animais. Os
soros recomendados so o humano, o fetal bovino ou de cavalo, podendo-se, ainda,
utilizar albumina de ovo.
Tcnica:
a. Com a ponta de uma pipeta Pasteur estril, ou ainda, com uma ala de platina
calibrada (0,001ml), retirar uma pequena poro de uma colnia de levedura e
emulsion-la de forma assptica em 0,5 ml de soro. Evitar, se possvel, o uso de soro
humano, que pode ter anticorpos ou ainda antifngicos.
b. Incubar a 37oC por um perodo de 1,5-2 horas, em banho-maria, ou at 3 horas em
estufa bacteriolgica.
c. Findo este perodo, deve-se remover uma gota da suspenso e montar uma preparao
do tipo lmina-lamnula, para observao microscpica. O tubo germinativo, quando o
teste for positivo, aparecer como filamento fino e cilndrico, originado do
blastocondio da levedura, no qual no se observa nenhuma zona de constrico, quer na
base ou ao longo de sua extenso.
2- MICROCULTIVO DE LEVEDURAS
Esta tcnica baseia-se no princpio de que leveduras, quando incubadas num meio
com Tween-80 apresentam a capacidade de filamentar, formando pseudo-hifas e/ou
hifas verdadeiras. Assim, pelas caractersticas morfolgicas diferenciadas das estruturas
filamentosas, pode-se sugerir a espcie de levedura implicada na identificao.
Tcnica:
Preparar gar Fub e colocar 3 ml de meio, ainda lquido, sobre a lmina do
microcultivo, com pipeta estril. Esperar solidificar. Com ala de platina, pegar um
pouco da colnia de levedura crescida no agar e semear em estria no gar Fub. Cobrir
com lamnula estril. Deixar 2 a 3 dias 25 oC e observar a preparao, da forma como
est, em microscpio com aumento de 400x.
Material:
gar Fub:
Farinha de milho amarela 6,25g
gua 150 ml
gar 1,9 g
Tween 80 1,5 ml
Aquecer em banho-maria 60oC por 1 hora a farinha de milho e a gua. Filtrar.
Completar o volume, com gua, para 150 ml. Acrescentar o gar e o Tween e deixar em
banho-maria fervendo at dissolver. Colocar em frascos com aproximadamente 3-5 ml.
Autoclavar 121oC por 15 minutos.
Filamentao de Candida sp em gar fub com Tween-80:
3- Auxanograma (Assimilao de Carboidratos e Nitrognio)
Assimilao de Carbiodratos:
Esta tcnica baseia-se na capacidade que as leveduras apresentam de utilizar
determinado carboidrato como nica fonte de carbono, para sua viabilidade celular.
Desta forma utiliza-se, nesta tcnica, um meio basal destitudo de qualquer fonte de
carbono (sem o qual a clula fngica no pode crescer), onde ser semeada a levedura
que se deseja identificar.
Aps a semeadura, adiciona-se ao cultivo um carboidrato e observa-se a capacidade de
utilizao deste como fonte de carbono. Quando o carboidrato assimilado pela
levedura, observa-se crescimento desta ao redor da fonte de carbono.
Tcnica:
Preparar o meio Yeast Nitrogen Base de acordo com as normas preconizadas pelo
fabricante.
Simultaneamente, preparar uma suspenso de leveduras com turvao equivalente ao
tubo nmero 5 da escala de MacFarland
Toma-se uma alquota de 1 ml da suspenso de leveduras e adiciona-se a 20 ml de
meio basal fundido e resfriado. Transfere-se esta suspenso para uma placa de Petri
homogeneizando suavemente.
Aguarda-se a solidificao do meio e adiciona-se pequenas quantidades de acares
em posies previamente demarcadas.
Incubar as placas a 30oC por 24-48 horas.
Observar regies opacas ao redor dos acares adicionados
Assimilao de Nitrognio:
A assimilao de nitrognio demonstra a capacidade que algumas leveduras apresentam
de assimilar nitrato de potssio (nitrognio inorgnico), como nica fonte de nitrognio
utilizado na sua viabilidade biolgica.
Tcnica:
Prepara-se o meio Yeast Carbon Base, de acordo com as indicaes do fabricante.
Aps a preparao e autoclavao, o meio deve ser estocado em
No momento do uso, fundem-se 20 ml do meio, e aps resfriar a uma temperatura de
45-50 oC acrescenta-se a este 1 ml da suspenso de levedura previamente preparada
(com uma turvao correspondente ao tubo 5 da escala de MacFarland)
Aps movimentos no muito bruscos de agitao para homogeneizar o inculo,
despeja-se o meio numa placa de Petri
Aps solidificao do meio, distribuir pequenas quantidades de compostos
nitrogenados (nitrato de potssio e peptona)
A peptona aqui empregada como controle da viabilidade do inculo, visto que todas
as leveduras a utilizam como fonte nitrogenada.

4- FERMENTAO DE CARBOIDRATOS:
A capacidade de uma levedura fermentar determinado carboidrato est diretamente
ligada habilidade desta de possuir sistemas enzimticos eficientes, capazes de permitir,
em baixas tenses de oxignio, degradar acares para produo de energia, formando,
entre outros metablitos, etanol e gs carbnico.
Assim, utiliza-se tambm na identificao das leveduras essa caracterstica fenotpica,
onde se investiga a habilidade que uma determinada levedura possui de fermentar um
acar, atravs da demonstrao da produo de CO2.
Tcnica:
Prepara-se o meio basal para fermentao e distribudos em tubos de ensaio, contendo
um tubo de Durham invertido em seu interior, em alquotas de 3 ml.
Os tubos so autoclavados e estocados na geladeira por at um ms.
No momento da execuo do teste, adiciona-se ao meio basal, 1,5 ml da soluo de
acares (6% em gua destilada), mantendo sempre a relao de da soluo de
acares para meio basal.
Adiciona-se 0,2 ml da suspenso de levedura (escala 5 MacFarland), no meio basal e
incubam-se os tubos a 37oC por 10-14 dias.
Material:
Meio de cultura
Azul de bromotimol 0,03 g
Extrato de levedura 2,7 g
Peptona 4,5 g
gua destilada 600 ml
Etanol a 95% 1,8 ml
Dissolver o extrato de levedura e a peptona em gua destilada.

Separadamente dissolver completamente o azul de bromotimol em etanol. Adicionar o

azul de bromotimol dissolvido mistura inicial e homogeneizar. Distribuir 3 ml do meio
em tubos de ensaio com tampa roscvel contendo um tubo de Durhan na posio
invertida. Autoclavar a 121oC, por 15 minutos. Deixar resfriar. Adicionar a cada tudo,
1,5 ml de uma das solues de acares. Estocar a 4oC.
IMPORTANTE: Observar na Parte IV desta apostila o
Protocolo para identificao de leveduras.
ISOLAMENTO DE FUNGOS DO AR
A. Finalidade: O isolamento de fungos anemfilos importante na determinao
da flora do ar de uma rea, nos estudos sobre alergia a fungos, na determinao do grau
de contaminao de ambientes, para obteno de amostras de interesse industrial, etc.
B. Fundamento: Usando-se a tcnica de exposio de placas com meio de cultura
durante tempos pr-fixados, os esporos em flutuao no ar sedimentam sobre o meio e
ai germinam.
C. Material:
a. Placa com gar Sabouraud ou gar batata dextrose.
b. Lactofenol azul algodo
c. Lminas, lamnulas, alas, etc.
d. Tubos com gar-Sabouraud ou gar batata inclinado.
D.Execuo da tcnica:
1. Abrir a placa e expor durante 20 minutos
2. Fechar, identificar e incubar temperatura ambiente
3. Acompanhar o desenvolvimento das culturas
4. Examinar ao microscpio
5. Repicar em tubos
E. Resultado
PESQUISA MICROSCPICA DE DERMATFITOS EM PLO
A.Finalidade: Diagnstico das tinhas do couro cabeludo.
B.Fundamento: O diagnstico laboratorial das tinhas do couro cabeludo baseia-se
no exame microscpico de plos e cultura dos mesmos em agar Sabouraud. Os plos
com microsporia apresentam esporos ectotrix na base e os plos com tricofcia
apresentam parasitismo endotrix e/ou ectotrix em formas artrosporadas.
C. Material:
1. Lmina, pina, microscpio, etc.
2. Soluo de KOH a 20%
D. Execuo:
1. Colher, com uma pina de ponta chata (pina de depilao), plos danificados das
bordas da leso.
2. Colocar os plos entre 2 lminas de vidro bem limpas (ou em placa esterilizada
em caso de transporte).
3. Pingar uma gota de soluo de KOH sobre os plos em uma lmina e cobrir com
lamnula.
4. Aquecer levemente, passando a lmina vrias vezes sobre a chama, evitando-se
rigorosamente a fervura do lquido.
5. Examinar ao microscpio.
a. Os plos parasitados por Microsporum apresentam bainha externa de
esporos pequenos ao redor do mesmo na regio do folculo.
b. Os plos parasitados por Trichophyton apresentam formas filamentosas e
artrosporadas externa e internamente.
E. Resultado
A. Exame direto
B. Cultura

PESQUISA MICROSCPICA DE DERMATFITOS EM PELE E UNHA

A.Finalidade: Diagnstico de dermatofitoses de pele e unha: tinea corporis, tinea
cruris, tinea manum, tinea ungueum e tinea imbricata.
B.Fundamento: O exame microscpico baseia-se no encontro de filamentos
septados e ramificados, muitas vezes artrosporados, em escamas de pele e unha
clareados com KOH.
C. Material:
1. Escamas de pele
2. Lminas, lamnulas, ala, etc.
3. Soluo de KOH a 20%
4. Bisturi ou lmina de barbear
5. gar Sabouraud-cloranfenicol
D. Execuo:
1. Raspar a pele ou a unha com bisturi ou lmina.
2. Misturar uma parte das escamas com KOH sobre uma lmina de microscpio e
cobrir com lamnula.
3. Aquecer levemente evitando a fervura.
4. Comprimir levemente a lamnula.
5. Retirar o excesso de KOH.
6. Examinar ao microscpio.
E. Resultado:
DEMONSTRAO DO DIMORFISMO DOS FUNGOS
(Transformao M - Y)
A.Finalidade: caracterstica de alguns fungos patognicos, servindo para sua
identificao e para estudos morfolgicos ou de atividade antignica, bioqumica etc.
B.Fundamento: A transformao M - Y ocorre com a mudana na composio do
meio e na temperatura (ou apenas na temperatura).
C. Material:
1. gar Sabouraud e gar BHI
2. Cultura de Sporothrix schenckii ou Paracoccidioides brasiliensis
3. Ala de platina, lmina e lamnula etc.
D. Execuo:
1. Repicar a cultura filamentosa no meio gar BHI
2. Incubar a 37C, durante perodo suficiente para crescimento, mantendo mido o
meio com pequeno volume de caldo Sabouraud (ou colocar vasilha com gua na
estufa).
3. Examinar ao microscpio.
4. Repicar, em gar Sabouraud, a cultura da fase levedufirorme
5. Incubar temperatura ambiente por perodo suficiente para crescimento
6. Examinar macro e microscopicamente.

PESQUISA DE LEVEDURAS EM PELE E UNHA

A.Finalidade: Diagnstico das leveduroses de pele e unha.
B.Fundamento: O exame microscpico realizado pesquisando-se em escamas de
pele e unha, clareadas com KOH, as formas arredondadas ou ovaladas, formando, s
vezes, aglomerados e filamentos. Isola-se o agente em gar Sabouraud.
C. Material:
1. Escamas de pele e unha
2. Soluo de KOH a 20 ou 30%
3. Lminas, lamnulas, etc.
4. gar Sabouraud-cloranfenicol
D. Execuo:
1. Raspar a pele ou a unha para obter escamas
2. Colocar uma gota de KOH sobre a lmina
3. Misturar uma parte das escamas com KOH
4. Cobrir com lamnula
5. Aquecer levemente
6. Examinar ao microscpio
7. Cultivar a outra parte do material em gar Sabouraud-cloranfenicol.
8. Fazer as provas de tubo germinativo, clamidosporo (clamidocondio) e
bioqumicas.

E. Resultado
a. Exame direto b. Cultura
E. Resultado: anotar, conforme tabela:

PESQUISA DE Malassezia furfur

A.Finalidade: Diagnstico da pitirase versicolor
B.Fundamento: O diagnstico da pitirase versicolor realizado pela pesquisa
microscpica de aglomerados de esporos, em forma de cacho de uva, ao lado de
filamentos grossos, septados, curtos, com ramificaes tendo aspecto de Y ou L.
C. Material necessrio:
1. Fita adesiva transparente
2. Soluo de KOH a 20%
3. Lminas, lamnulas, microscpio, etc.
D. Execuo:
1. Pesquisa com fita adesiva:
a. Colocar a face colante da fita sobre a pele em descamao
b. Retirar e colar a face colante da fita sobre a lmina
c. Examinar ao microscpio, procurando retirar e colar principalmente os esporos
arredondados formando aglomerados em mosaico ou cacho de uvas.
2. Pesquisa aps clareamento com KOH:
a. Raspar a pele em rea com descamao, usando bisturi ou lmina de vidro.
b. Misturar parte das escamas com KOH e cobrir com lamnula.
c. Aquecer levemente a lmina, evitando fervura.
d. Examinar ao microscpio, procurando os esporos aglomerados em forma de
mosaico e os filamentos.
E. Resultado:

PRODUO DE UREASE
A. Finalidade: Identificao de C.neoformans.
B.Fundamento: Produzindo urease, C. neoformans decompe a uria com
formao de amnia que alcaliniza o meio, provocando a viragem do indicador.
C. Material:
1. Meio de Christensen
2. Amostra de levedura
D. Preparo do material:
Meio de Christensen:
Uria gar base (Difco).................... 29 g
gua destilada................................. 100 ml
Esterilizar por filtrao
gar............................................... 15 g
gua destilada................................ 900 ml
Autoclavar 115C - 15 minutos.
Esfriar at 50 - 55C, misturar a base e distribuir esterilmente em tubos.
Solidificar inclinado.
E. Execuo da tcnica:
1. Semear na superfcie
2. Incubar a 37C
3. Observar a viragem do indicador (hidrlise da uria= viragem para vermelho)
F. Resultado:

DIFERENCIAO DE Trichophyton rubrum e Trichophytom

 mentagrophytes PELO TESTE DA UREASE E PERFURAO EM
PELO
Meio de cultura utilizado:
Peptona 1g
NaCl 5g
KH2PO4 2g
Glicose 5g
Agar 15g
gua destilada 1000ml
Procedimento: Adicionar 6ml de soluo de vermelho de fenol (0,2% em etanol-50%).
Autoclavar a 115oC por 15 minutos. Esfriar a 50oC e adicionar 100ml de soluo aquosa
a 20% de uria esterilizada por filtrao e inclinar.
Resultado:
Trichophyton rubrum: Urease fraca ou ausente (no h mudana antes de 14 dias)
Trichophyton mentagrophytes: Pulverulento fortemente positivo (antes de 7
dias)
TESTE DE PERFURAO:
Usar cabelo pr-pbere e colocar em placas de Petri
Esterilizar o cabelo por autoclavegem a 120oC por 10 minutos
Colocar 25 ml de gua destilada estril
Adicionar 2 a 3 gotas de estrato de levedura
Fazer leitura em 4 semanas
Resultado:
O T. mentagrophytes penetra perpendicularmente dentro do pelo, formando
orifcios em forma de cunha. O T. rubrum no perfura o pelo.
MEIOS DE CULTURA E CORANTE MAIS COMUNS EM
MICOLOGIA
gar Sabouraud (AS)
Peptona......................................... 10 g
Dextrose....................................... 20 g
gar............................................. 15 g
gua destilada.............................. 1000 ml
Dissolver o gar em gua fervente e acrescentar os outros componentes .
Distribuir e autoclavar a 115C por 15 minutos.
gar Sabouraud + Antibiticos
Gentamicina.................................. 25 mg
Cloranfenicol................................. 140 mg
lcool........................................... 10 ml
AS ou ASD fundido..................... 1000 ml
Dissolver o cloranfenicol no lcool e depois misturar com AS ou ASD gar fundido.
Distribuir e autoclavar a 115C por 15 minutos.
Corante
Lactofenol azul algodo (Lactofenol de Aman)
Fenol............................................. 20 g
cido lctico................................. 20 ml
Glicerina....................................... 40 ml
gua destilada.............................. 20 ml
Cotton blue (azul algodo)........... 0,05 g
a. Misturar: cido lctico, glicerina e gua.
b.Acrescentar fenol e dissolver com calor uniforme.
c. Acrescentar azul algodo.
d. Filtrar em papel.
KOH
Hidrxido de Potssio diludo a 10 ou 20% em gua destilada
KOH + tinta
Hidrxido de Potssio 10 ou 20%, adicionado de Tinta Parker Permanente, na
proporo de 2:1.
PARTE III
FLUXOGRAMAS
PARTE IV
PROTOCOLO PARA IDENTIFICAO DE LEVEDURAS
No. de entrada da cepa:______________Data:_______________
Iniciais do paciente:_____________________
Material biolgico:_____________________________________
Exame direto:_________________________________________
Cultura:______________________________________________
1 MORFOLOGIA
a) Macroscpia:
ASD: Cor:_________________Textura:___________________
b) Microscpia:
Agar Fub: Data:____________________
Pseudomiclio ( ) Miclio verdadeiro ( ) Clamidsporo ( )
Arranjo dos Blastocomidios ( ) Artrocondios ( )
Tubo germinativo:____________________________
Outras caracteristicas:___________________________
2 PROVAS BIOQUMICAS
a)Auxonograma: Data:________________
1 G Glicose ( ) 16 RIB Ribitol ( )
2 GA Galactose ( ) 17 GAL Galactiol ou Ducitol ( )
3 SOR L Sorbose ( ) 18 MAN D Manitol ( )
4 SU Sacarose ( ) 19 GLU D Glucitol ou Sorbitol ( )
5 MA Maltose ( ) 20 LAC cido Ltico ( )
6 CE Celobiose ( ) 21 CIT cido Ctrico ( )
7 TR Trealose ( ) 22 SUC cido Succinico ( )
8 LA Lactose ( ) 23 I Inositol ( )
9 ME Melibiose ( ) 24 MZ Melezitose ( )
10 RA Rafinose ( ) 25 X L Arabinose ( )
11 ST Amido solvel ( ) 26 DAR D Arabinose ( )
12 LAR L Arabinose ( ) 27 RH Raminose ( )
13 RI D Ribose ( ) 28 AS Salicina ( )
14 GL Glicerol ( ) 29 Peptona ( )
15 ER Eritritol ( ) 30 NONitrato ( )
b)Zimograma: Data:________________
 Controle ( ) Sacarose ( )
Glicose ( ) Maltose ( )
Lactose ( ) Trealose ( )
Rafinose ( ) Celobiose ( )
Galactose ( ) Melibiose ( )

c) Provas complementares: Data:__________________

Presena de cpsula:_____________________________
Crescimento a 37 C _____________________________
Alta produo de cido:___________________________
Urease:_________________
Resistncia cicloheximida:______________________
Ascsporos ( Forma e Nmero):___________________
3 -Interpretao das provas do Zimograma e Auxonograma
Resultados Aspecto tubo de durhan Formao do halo
Forte Repleto de gs Rpida e halo forte
W Fraco Gs pela metade do tubo Halo fraco
VW Muito fraco Somente uma bolha gs Lento ou latente
S Lento Formao de gs aps 3 dias Negativo
- Negativo Sem gs Muitas cepas (+)
V Varivel Algumas cepas (+) e outras (-) Poucas (-)
+/- ----------------
4 A identificao deve ser feita de acordo com Kreger Van Rij, 1984.

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