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Deteco de Fumonisina B1

o Produo de Fumonisina B1

Meio Lquido

Inoculao de suspenso de condios (1 x 106 mL) do fungo testado em meio lquido Myro de acordo
com Farber; Sanders (1968): 1 g L-1 de (NH4)2HPO4; 3 g L-1 de KH2PO4; 2 g L-1 de MgSO4.7H20, 5 g
L-1 de NaCl, 40 g L-1 de sucrose e 10 g L-1 de glicerol e incubao no escuro por 21 dias a 28 C. A
amostra dever ser preparada conforme metodologia de derivatizao. Manter amostras em frascos
ambarinos.

Interessante realizar os ensaios em triplicata, garantindo confiabilidade ao teste


realizado.

o Quantificao da Fumonisina B1

Preparao e derivatizao da amostra

Uma amostra (1000 L) de cada cultura lquida das triplicatas ser centrifugada por 15 minutos a
9000g. Os sobrenadantes obtidos devem ser diludos com acetonitrila (1:1). Uma alquota de cada
amostra (50 L) derivatizada com 200 L de uma soluo de preparada pela adio de 5 mL de
tretaborato de sdio (0,1 M) e 50 L de 2-mercaptoetanol a 1 mL de metanol contento 40 mg de o-
ftaldialdedo (OPA).

Anlise em HPLC

Fase Mvel: Metanol + NaH2PO4 (0,1 M) na proporo de 75:25, com pH ajustado para 3,35 0,2
com cido ortofosfrico;

Coluna: C18;

Fluxo: 1,5 mL min-1;

Detector: Fluorescncia;

Comprimentos de onda: 335 e 440 nm de excitao e emisso, respectivamente;

Padres: 10,5, 5,25 e 2,625 g mL-1.

Resultados

A quantificao da fumonisina B1 ser realizada por comparao entre as reas de picos das
amostras e quelas correspondentes s reas dos picos dos padres.

o Referncias
DAMBOLENA, J. S.; LPEZ, A. G.; RUBINSTEIN, H. R.; ZYGADLO, J. A. Effects of menthol stereoisomers on the
growth, sporulation and fumonisin B1 production of Fusarium verticillioides. Food Chemistry, v. 123, p. 165-170, 2010.

FARBER, J. M.; SANDERS, G. W. Fusarin C Production by North American Isolates of Fusarium moniliforme. Applied
and Environmetal Microbiology, v. 51, p. 381-384, 1986.

PROTOCOLO DE DETECO DE FUMONISINA | Alana Emilia