ACCION DE AGENTES FSICOS Y QUMICOS SOBRE LOS

MICROORGANISMOS
I. MARCO TEORICO
Las actividades de los microorganismos se ven muy afectadas por las
condiciones qumicas y fsicas del medio. El conocimiento de los efectos
ambientales nos permite explicar la distribucin de los microorganismos en la
naturaleza y hace posible disear mtodos que controlen o potencien las
actividades microbianas. A este respecto se pueden considerar muchos
factores ambientales, pero hay cuatro factores que tienen una funcin
destacada en el control del crecimiento microbiano: la temperatura, el pH, la
disponibilidad de agua y el oxgeno. Los microorganismos pueden ser
eliminados, inhibidos o muertos por agentes fsicos, procesos fsicos o agentes
qumicos. Es unos de los factores fsicos ambientales ms importantes, que
influyen en el crecimiento.

Un agente fsico es una condicin fsica o propiedad fsica que causa un

cambio. La temperatura, la presin y la radiacin son ejemplos de agentes
fsicos que actan sobre los microorganismos. Los filtros los retienen. Mediante
los procesos fsicos se causan cambios en los microorganismos, por ejemplo la
esterilizacin y la incineracin que los conducen a la muerte. En la
higienizacin, por ejemplo el lavado, los desprende de los materiales. La
temperatura es uno de los factores fsicos ambientales ms importantes, que
influyen en el crecimiento y afecta la sobrevivencia de los microorganismos en
dos formas.

Primero, si aumentamos la temperatura, las reacciones qumicas y enzimticas

en la clula se realizan ms rpidamente y por lo tanto el crecimiento es ms
rpido.

Segundo, tanto las protenas como los cidos nucleicos y otros componentes
celulares son sensibles a altas temperaturas y pueden ser irreversiblemente
inactivos.

Generalmente al aumentar la temperatura dentro un lmite dado, el

crecimiento y las funciones metablicas aumentan hasta un punto en que se
inactivan y entonces las funciones cesan.

Cada organismo tiene sus temperaturas cardinales que se refieren a la mnima,

ptima y mxima a la cual crecen. La temperatura ptima generalmente est
ms cerca de la mxima que de la mnima.

En base a lo anterior, los microorganismos se clasifican de acuerdo a su

temperatura optima de crecimiento en: psicrfilos, mesfilos y termfilos.
Un agente qumico es una sustancia (slido, lquido o gas) que se caracteriza
por una composicin molecular definida y que causa una reaccin en los
microorganismos, por ejemplo los compuestos fenlicos, los alcoholes, el cloro,
el yodo y el xido de etileno. Dependiendo de la concentracin y del tiempo de
exposicin, los daa o los mata.. El pH y la salinidad, son factores qumicos que
afectan el crecimiento de los microorganismos.

Cada microorganismo tiene un intervalo de pH, dentro del cual el crecimiento

es posible, generalmente hay un pH optimo bien definido.

La mayora de ambientes naturales tienen valores de pH entre 5 y 9, pocas

especies pueden crecer en pH menores de 2 o mayor de 10.

De acuerdo a su pH ptimo de crecimiento los microorganismos se clasifican

en: Acidfilos, neutrfilos y alcalfilos.

Todos los organismos requieren de agua para vivir, la adicin de un soluto en

un medio puede influir en la disponibilidad de agua para los microorganismos.
As, podemos tener organismos que requieren de altas concentraciones de
sales para desarrollar llamados halfilos y los que pueden crecer en altas
concentraciones de sales pero que no las requieren necesariamente, llamados
halfilos facultativos.

Otros organismos son capaces de desarrollarse en altas concentraciones de

azcar y se les llama sacarofilicos.

A los haloflicos y sacaroilicos se les puede considerar tipos de

microorganismos no habituales comprendidos dentro de los organismos
osmoflicos.

II. OBJETIVO:
-
-
- Observar el efecto de algunos agentes fsicos y qumicos utilizados como
germicidas para el control de los microorganismos.

III. MATERIAL Y EQUIPO

o Tubos de ensayo
o Caldo nutritivo, pH 1, 3, 5, 7, 9,
o Caldo nutritivo normal
o Pipetas Pasteur o pipetas de 1mL
 o Discos con antibiticos o impregnados con desinfectantes comunes
(cloro, iodo, violeta de genciana, merthiolate)
o Cajas Petri con agar nutritivo o agar cuenta estndar

IV. PROCEDIMIENTO

Factores Fsicos

Temperatura.

1 En un tubo con 2 gotas de caldo nutritivo

2 Inocular con 0.1 ml 2 gotas cada uno de los tubos que se incubaran a las
diferentes temperaturas. Marcar cada tubo.

Factores Qumicos

Efecto del pH

1 En un tubo con 3 ml de caldo nutritivo, re suspender varias asadas de su

cultivo de 24 h.
2 Inocular con 2 gotas a cada uno de los tubos con los diferentes pH.
3 Incubar a 37C por 24 horas.

Antibiticos
1 En una caja Petri con agar nutritivo, adicionar cinco gotas de la suspensin
del microorganismo en el centro.
2 Realizar la dispersin con una varilla acodada.
3 Con unas pinzas estriles colocar en la superficie de la caja el multidisco
impregnado con antibiticos, tratando de que quede colocado en el centro
de la misma, presionar suavemente.
4 Despus de 15min de haber colocado el disco, invertir la caja y pasar a la
incubadora de 3537C por 18 a 24 Has.
5 Observar el crecimiento obtenido en la placa.
6 La medicin de los halos de inhibicin se hace con una regla, por el fondo
de la caja la cual se ilumina con luz reflejada.
7 En el caso de utilizar discos de papel filtro impregnados con desinfectantes
comunes, colocar los discos de tal manera que estn bien distribuidos en la
caja y que no queden cerca de los extremos de la misma.

V. Resultados

Lectura de los resultados para identifica la sensibilidad de la bacteria

escheriachia coli ante:

1. ANTIBITICOS:

Se logr observar en la placa Petri que alrededor de las placas de

algunos antibiticos unos alos de divisin, algunos ms grandes
medianos pequeos y otros no presentaban alos de divisin, es
decir que se vea una circunferencia donde no haba presencia de
crecimiento bacteriano; se deduce la sensibilidad de lo la bacteria
y la efectividad de los antibiticos ante esta misma bacteria de
acurdo a los alos de divisin; los resultados se resumen en el
siguiente cuadro:

N Antibitic mgr Ab Di Grado de Efectividad de

os re metr sensibilidad antibiticos
 vi
o de de la bacteria
at
los Escherichia
ur
Alos coli
a
efectividad del
antibitico alto,
Amoxicili 30mg 0.6 Sensibilidad
1 observndose un alo de
na r cm alta
divisin alrededor del
antibitico
efectividad del
Clindamic 0.7c Sensibilidad antibitico alto, ya que
2 2mgr CC
ina m muy alta se observa una gran alo
de divisin
efectividad del
antibitico alto
Norfloxac 10mg 1.4c Sensibilidad
3 NX observndose un gran
ina r m muy alta
alo de divisin incluso
ms que el de CC
Se junt con el A pesar del error se
antibitico n 7 puede observar una lo
Tetracicli 90mg pero se pudo de divisin por lo que
4 T Error
na r medir un alo decimos que es efectivo
aprox de 0.5 cualquiera o ambos
cm antibiticos.
efectividad del
Entromici 15mg 0.3c Sensibilidad antibitico bajo ya que
5 E
na r m bajo se no se presenta un
gran alo de divisin
efectividad del
antibitico alto
Amikarin 30mg AM 0.6c Sensibilidad
6 observndose un alo de
a r C m alta
divisin alrededor del
antibitico
Se junt con el A pesar del error se
antibitico n 4 puede observar una lo
Ac. 30mg pero se pudo de divisin por lo que
7 NA Error
Nalidixio r medir un alo decimos que es efectivo
aprox de 0.5 cualquiera o ambos
cm antibiticos.
Efectividad del
Cefalotin 30mg 0.3c Sensibilidad antibitico baja ya que
8 CF
a r m baja se no se presenta un
gran alo de divisin
 2. AGENTES:

Se logr observar en la placa Petri que alrededor de las placas empapadas en

diferentes agentes unos alos de divisin, algunos ms grandes medianos
pequeos y otros no presentaban alos de divisin, es decir que se vea una
circunferencia donde no haba presencia de crecimiento bacteriano; se deduce
la sensibilidad de lo la bacteria; una sensibilidad muy alta significa que la
bacteria no podra desarrollarse en un ambiente con este agente; una

Dim
N etro Grado de sensibilidad de la
Antibiticos %
de los bacteria Escherichia coli
Alos
Azul de
1 0.2 cm Sensibilidad baja
metileno
1 0.05c
2 NaOH Sensibilidad muy baja
% m
No es sensible, ante este agente la
Cloruro 2
3 0. cm bacteria puede crecer
Frrico %
normalmente
Verde
4 0.7 cm Sensibilidad muy alta
malaquita
1
5 Formol 0 0.7cm Sensibilidad muy alta
%
Cristal
6 0.5cm Sensibilidad alta
violeta
1
7 AgNO3 0.9cm Sensibilidad muy alta
%
1
8 fenol 0.3cm Sensibilidad baja
%
sensibilidad muy baja es que podra llegar a desarrollase pero en casi nulas
cantidades; los resultados se resumen en el siguiente cuadro:

3. CRECIMIENTO ANTE DISTINTOS NIVELES DE PH

Resultados del nivel de crecimiento de la bacteria escheriachia coli

sometidos en un caldo con diferentes pHs durante 15 min y luego
pasados a la placa Petri en condiciones favorables para su
crecimiento.

pH pH 2: acido pH 7 : neutro pH 9 : alcalino

Crecimiento Poco Mayor Poco
crecimiento crecimiento crecimiento
Interpretaci La bacteria no La bacteria se La bacteria no
n: puede crecer desarrolla puede crecer
plenamente en mucho mejor en plenamente en
condiciones condiciones de condiciones
acidas pH neutro alcalinas
4. EBULLICIN:
 condiciones interpretacin
temperat 100 Es logra observar que a pesar de haberla
ura C sometido a tales condiciones en donde se
tiempo 5 min supone las bacterias deban morir y
posteriormente como prueba no debera de
haber crecido bacterias o almenos, crecer en
pocas cantidades.
Sin embargo se observa un gran crecimiento de
bacterias.
Como conclusin podemos decir que la bacteria
siendo vegetativa es resistente a los 100C por
5min.

VI. cuestionario
1. Temperaturas cardinales y clasificacin de los microorganismos segn
su temperatura optima de crecimiento
Temperaturas cardinales son 3: una temperatura mnima por debajo
de la cual no es posible el crecimiento, una temperatura ptima, a la
que se produce el crecimiento ms rpido, y finalmente una
temperatura mxima por encima de la cul es imposible que se d el
crecimiento

Segn la temperatura los microorganismos se pueden clasificar en:

 - Psicrfilos: con temperaturas ptimas bajas
- Mesfilos: con temperaturas ptimas moderadas
- Termfilos: con altas temperaturas ptimas
- Hipertermfilos: con temperaturas ptimas muy elevadas

2. Cmo influye el pH en el crecimiento de hongos y bacterias?

Los efectos del pH adverso afectan por lo menos dos aspectos de la
clula microbiana: el funcionamiento de sus enzimas y el transporte
de nutrimentos hacia la clula. La membrana citoplsmica de los
microorganismos es relativamente impermeable a los iones H + y OH;
su concentracin en el citoplasma permanece razonablemente
constante a pesar de amplias variaciones que pueden ocurrir en el pH
del medio circundante.
 Qu diferencias se observaron en los medios de cultivos
amortiguados y sin amortiguar??
Un medio adecuado para la indicacin del crecimiento y posterior
desarrollo de una poblacin del crecimiento, el posterior desarrollo de
una poblacin bacteriana puede estar severamente limitado por los
cambios qumicos que se producen por el crecimiento y metabolismo
de los propios organismos.
Para prevenir estos cambios excesivos se aade un amortiguador
(nuffer) o bien carbonatos insolubles.
Entonces podemos decir que los amortiguadores contribuyen a un
mejor crecimiento y desarrollo de los microorganismos y por ende
estos de desarrollaran mejor en un medio de cultivo ms estable y
favorable que en un medio de cultivo que cambiara poco a poco y no
ser favorable para el crecimiento de los microorganismos.

3. Explique brevemente cuales son los mecanismos celulares

que los microorganismos termfilos extremos y psicrfilos
han desarrollado para adaptarse a condiciones extremas de
temperatura y pH.
TERMFILOS EXTREMOS
Los hbitats naturales con temperaturas permanentemente altas
(por encima de 45-50C) estn restringidas a unas pocas zonas de la
biosfera, normalmente relacionadas con fenmenos volcnicos:
enzimas termorresistentes. Algunas de ellas tienen un interior
molecular muy hidrfobo
ribosomas termorresistentes;
membranas ricas en cidos grasos saturados, que permiten
enlaces hidrofbicos ms fuertes.
En Arqueas hipertermfilas los lpidos son muy especiales: en vez
de basarse en steres de cidos grasos con el glicerol, se trata
 de teres de hidrocarburos unidos al glicerol (el enlace ter es
ms resistente). Algunas, adems, en vez de la tpica bicapa
lpdica, exhiben una monocapa bioqumica de C40-bifitanil-
tetrateres (resultado de unirse cola con cola dos C 20-fitanil-
diteres), que condicionan una extrema resistencia a agentes
ambientales.

PSICRFILOS
Las principales adaptaciones bioqumicas a medios fros
exhibidas por estos microorganismos psicrfilos son:
enzimas ms resistentes al fro
sistemas de transporte adaptados a bajas temperaturas;
los fosfolpidos de la membrana celular aumentan la proporcin de
cidos grasos insaturados (y en algunas bacterias,
poliinsaturados, con entre 4 y 9 dobles enlaces); ello supone que
la membrana sigue en su estado semifluido, evitndose su
congelacin.

4. Explique cul es la relacin que existe entre condiciones ptimas de

crecimiento en el laboratorio y las condiciones del hbitat de origen
de las poblaciones microbianas.
El medio en el que se desarrolla una poblacin microbiana se
denomina hbitat, en este la diversidad y abundancia de
microorganismos est controlada por los recursos (alimentos) y por
las condiciones (temperatura, H, concentracin de oxgeno, etc.) que
existen en el medio de manera natural, en un laboratorio de trabajo
microbacteriano, se intenta mediante medios fsicos y qumicos
asimilar las condiciones naturales de las bacterias, esto apoyado
tambin de diferentes tipos de equipos que proporcionarn,
temperatura, pH, oxgeno, nutrientes (medios de cultivo) necesarios
para los microorganismos y su desarrollo.
Tanto en el laboratorio como en el habitad natural de los
microorganismos se presentan condiciones favorables para el
desarrollo ptimo de los microorganismos.

VII. COMENTARIO
- las reacciones qumicas son dos o ms sustancias que mezclan para formar
una sustancia nueva
- El mtodo del tanteo consiste en un balance de elementos que se efectan
en una ecuacin qumica en el cual el mismo nmero de elementos debe
ser en productos y reactantes
- Tambin exctenlos factores fsicos y los factores qumicos que intervienen
en una reaccin qumica como la temperatura, el pH etc.

VIII. Referencias bibliogrficas:

Madigan, M. T., J.M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock Biologa de los

microorganismos. Madrid, Espaa. 10a edicin. Editorial Pearson-
Prentice-Hall.
Prescott, L. M., J. P. Harley. , y D. A. Klein. 2004.Microbiologa.5a
Ed.McGraw Hill Interamericana de Espaa, S. A. U.
Biogenmol La ciencia de la vida, la biologa SBADO, 20 DE DICIEMBRE
DE 2008
Efecto de la temperatura sobre el crecimiento
microbiano /Michael T. Madigan, John M. Martinko. 2004. Brock Biologa
de los Microorganismos 10ed.
NUTRICION PERSONALIZADA Conocimiento avanzado
transformando vidas
https://nutricionpersonalizada.files.wordpress.com/2011/01/banner950a3
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Lez Enrique microbiologa general Actualizado el lunes, 09 de mayo
de 2005
Licenciatura de Biologa, Universidad de Granada
Sitio web para la consulta de Microbiologa general:
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/_derived/13agfisicos.htm_cmp_c
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