Você está na página 1de 161

UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS


Programa de Ps-Graduao em
Toxicologia e Anlises Toxicolgicas

DETERMINAO DE ETANOL EM SALIVA ATRAVS


DO SISTEMA ENZIMTICO Q.E.D. E DA
CROMATOGRAFIA EM FASE GASOSA

NDIA TAWIL

Dissertao para obteno do grau de


MESTRE

Orientador:
Prof. Dr. OVANDIR ALVES SILVA

So Paulo
2004
NDIA TAWIL

DETERMINAO DE ETANOL EM SALIVA ATRAVS DO


SISTEMA ENZIMTICO Q.E.D. E DA CROMATOGRAFIA EM
FASE GASOSA

Comisso Julgadora da Dissertao


para obteno do grau de Mestre

Prof. Dr. Ovandir Alves Silva


Orientador/presidente

1. examinador

2. examinador

So Paulo,_________de_____.
Aquele que nada sabe, e no
sabe que no sabe, tolo
evita-o.

Aquele que nada sabe, e sabe que


nada sabe, simples ensina-o

Aquele que sabe, e no sabe que


sabe desperta-o.

Aquele que sabe, e sabe que


sabe, sbio segue-o."

(Provrbio rabe)
A Deus, que essa luz maior e inigualvel,
por ter me dado a fora para finalizar esse trabalho,
acompanhando-me a todo o momento.
Ao Santo Expedito por ter me
auxiliado nas situaes que
pareciam impossveis.
Aos meus pais Younan e Alidis pela excelente
educao que me proporcionaram, muito importante
para minha formao.E tambm pelo amor, incentivo,
fora e compreenso.
Aos meus queridos irmos Cristiane e Alessandro
pelo amor, amizade e companheirismo.
Ao Professor Ovandir Alves Silva,
pela orientao e oportunidade.
E por ter acreditado no meu trabalho,
dando-me os incentivos necessrios
para que eu pudesse finalizar esse
trabalho.
AGRADECIMENTOS

minha av Genoefa pelo carinho e pela constante torcida nessa etapa da


minha vida.

As minhas tias Adelina e Maria pelo carinho, apoio e torcida.

minha amiga Simone, grande companheira de graduao e de ps-


graduao, pelo apoio, amizade e por toda a assistncia dispensada nos
momentos em que mais necessitei.

Ao amigo Maurcio Yonamine, que desde o incio da minha jornada no LAT,


compartilhou seus sbios ensinamentos que foram bastante importantes para a
concretizao desta dissertao.

Ao Fernando Santos pelo carinho, apoio, incentivo e amizade.

s minhas amigas superpoderosas, Michela, Eliane e Cludia pela


convivncia, carinho e experincias compartilhadas.

s amigas Vanessa, Patrcia, Isa Rita e Danielle, companheiras de Ps


Graduao, pela convivncia e incentivo para a realizao desse trabalho.

A todos os meus amigos do curso de ps-graduao em Toxicologia e


Anlises Toxicolgicas pelo carinho e pela troca de conhecimentos.

Aos funcionrios do LAT e de todo bloco 13B da Farmcia pela ajuda e


colaborao.
bibliotecria Leila Bonadio pelas explicaes e correes das referncias
bibliogrficas.

Ao Dr. Anthony Wong e a Carla M. C. Hess Von Gabriel pela assistncia,


apoio e incentivo ao meu trabalho.

A todos os meus colegas de trabalho do Laboratrio Maxilab, pelo convvio,


amizade e constante colaborao.

Aos professores da UNESP pelos ensinamentos passados, contribuindo para a


minha formao profissional na graduao.

Ao Comit em tica e Pesquisa pela aprovao do meu trabalho.

Ao Dr. Andr Malbergier e a Dra. Cristiana Leslie Corra, membros da


minha banca de qualificao, pelas correes e sugestes fornecidas,
contribuindo para o enriquecimento do meu trabalho.

Aos voluntrios que destinaram uma parte do seu tempo, contribuindo e


ajudando para a finalizao desse estudo.

A todos que de maneira direta ou indireta contriburam positivamente para a


concluso desse desafio que parecia impossvel.
CONTEDO

1. INTRODUO........................................................................................... 01
2. ASPECTOS TOXICOLGICOS................................................................ 05
2.1. Consumo de Bebidas alcolicas....................................................... 05
2.2. Abuso e Dependncia ao lcool........................................................ 16
2.3. Toxicocintica do Etanol.................................................................... 24
2.4. Efeitos do Etanol............................................................................... 29
2.4.1. No Sistema Nervoso Central (SNC)........................................ 31
2.4.2. No Sistema Cardiovascular..................................................... 34
2.4.3. No Sistema Hematolgico ...................................................... 35
2.4.4. No Sistema Endcrino............................................................. 36
2.4.5. No Sistema Geniturinrio.......................................................... 36
2.4.6. No Sistema Gastrintestinal........................................................ 37
2.4.7. No Desenvolvimento Fetal........................................................ 39
2.5. Interao do Etanol com Frmacos................................................... 41
3. ASPECTOS ANALTICOS......................................................................... 48
4. OBJETIVO E PLANO DE TRABALHO...................................................... 65
5. MATERIAL E MTODOS.......................................................................... 66
5.1 Material............................................................................................... 66
5.1.1. Solues padro................................................................... 66
5.1.2. Equipamentos e acessrios..................................................... 67
5.1.3. Outros materiais....................................................................... 68
5.1.4. Amostras de saliva................................................................... 69
5.1.4.1. Referncia negativa (Grupo I A) ................................ 69
5.1.4.2. Referncia positiva (Grupo II B).................................. 69
5.1.4.3. Amostras de Voluntrios............................................. 69
Grupo II A.................................................................... 69
Grupo II B................................................................... 70
5.2 Mtodos............................................................................................. 71
5.2.1. Seleo do tempo de coleta para determinao de etanol
atravs do sistema Q.E.D. A 150........................................... 71
5.2.2. Padronizao e validao do mtodo para determinao
de etanol em amostras de saliva pela cromatografia
gasosa, aps separao por headspace............................... 71
5.2.2.1. Padronizao do mtodo............................................. 71
5.2.2.2.Curvas de calibrao..................................................... 73
5.2.3. Validao do mtodo.............................................................. 74
Linearidade da tcnica............................................................ 74
Limite de quantificao (LOQ)................................................ 74
Limite de deteco (LOD)....................................................... 75
Preciso intra e interensaio.................................................... 75
5.2.4. Determinao de etanol em amostras de saliva de
voluntrios, Grupo II B aps a ingesto de bebida
alcolica................................................................................. 76
5.2.4.1 Mtodo enzimtico (Q.E.D. A 150)............................. 77
5.2.4.2 Cromatografia gasosa, aps separao por
headspace.................................................................. 77
5.2.5. Determinao de etanol por Q.E.D A 150 e GC/HS em
amostras de voluntrios (Grupo II A) coletadas com Salivette
com e sem cido ctrico........................................................... 78
5.2.6. Estudo para verificar a estabilidade do etanol atravs do
sistema Q.E.D. A 150............................................................. 79
6. RESULTADOS.......................................................................................... 80
6.1 Seleo do tempo de coleta para determinao de etanol atravs do
sistema Q.E.D. A 150........................................................................ 80
6.2 Padronizao e validao do mtodo para determinao de etanol
pela cromatografia gasosa, aps separao por headspace.............. 80
6.2.1. Padronizao do mtodo.......................................................... 80
6.2.2. Validao do mtodo................................................................ 82
Linearidade da tcnica............................................................ 82
Limite de quantificao (LOQ)................................................. 84
Limite de deteco (LOD)........................................................ 85
Preciso intra e interensaio...................................................... 86
6.3. Determinao de etanol em amostras de saliva dos voluntrios do
Grupo II B........................................................................................... 88
6.3.1.Mtodo enzimtico (Q.E.D. A 150)........................................... 88
6.3.2 Cromatografia gasosa aps separao por headspace........... 89
6.4. Determinao de etanol por Q.E.D A 150 e GC/HS por amostras
de voluntrios (Grupo II A) coletadas com Salivette com e sem
cido ctrico......................................................................................... 92
6.5 Estudo para verificar a estabilidade do etanol atravs do sistema
Q.E.D. A 150..................................................................................... 95
7. DISCUSSO................................................................................................ 96
8.CONCLUSO................................................................................................ 108
9. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS............................................................ 109
10. ANEXOS.................................................................................................... 129
LISTA DE TABELAS

TABELA 1. Teores alcolicos das principais cervejas produzidas no


Brasil....................................................................................................................... 07

TABELA 2. Faixa de teor alcolico dos principais destilados consumidos


no Brasil..................................................................................... 08

TABELA 3. Comparao de valores entre as doses de bebidas


consumidas nos pases europeus com o lanche da rede
mundial de fast food.................................................................. 10

TABELA 4. Consumo de bebidas alcolicas por pessoa no Brasil, no


perodo de 1961 at o ano de 2000.......................................... 11

TABELA 5. Classificao do consumidor de bebidas alcolicas, de acordo


com a quantidade em determinados
perodos..................................................................................... 14

TABELA 6. Concentrao sangunea obtida por kilograma, aps meia


hora de ingesto das quantidades de bebidas alcolicas
observadas em indivduos de diferentes pesos corpreos....... 15

TABELA 7. Os critrios para diagnstico do uso abusivo de lcool,


conforme DSM IV................................................................. 17

TABELA 8. Critrios para diagnstico da dependncia de lcool,


conforme a DSM-IV.................................................................. 21

TABELA 9. Parmetros qumicos-toxicolgicos do etanol........................... 28

TABELA 10. Efeitos do consumo de lcool, apresentado por dois autores


de acordo com a alcoolemia..................................................... 30
TABELA 11. Interaes entre o lcool e vrias classes de
medicamentos............................................................................ 42

TABELA 12. Medicamentos e antisspticos bucais e suas respectivas


concentraes de etanol ........................................................... 46

TABELA 13. Os resultados obtidos em mg/dL de etanol, aps ingesto


controlada de bebida alcolica.................................................. 80

TABELA 14. Valores da relao das reas (etanol/n-propanol) obtidos no


experimento, para padronizao da tcnica.............................. 80

TABELA 15. Resultados obtidos em mg/dL, aps ingesto controlada de


etanol....................................................................................... 82

TABELA 16. Valores obtidos nos experimentos para verificar a linearidade


da tcnica................................................................................. 83

TABELA 17. Resultados obtidos para o valor do limite de quantificao


(LOQ)....................................................................................... 84

TABELA 18. Valores obtidos na determinao do limite de deteco


(LOD)......................................................................................... 85

TABELA 19. Coeficientes de variao intra e interensaio do etanol, na


concentrao de 0,03 g/L.......................................................... 86

TABELA 20. Coeficientes de variao intra e interensaio do etanol, na


concentrao de 0,3 g/L............................................................ 87

TABELA 21. Coeficientes de variao intra e interensaio do etanol, na


concentrao de 1,2 g/L............................................................ 87
TABELA 22. Resultados das concentraes de etanol obtidos nas
amostras de saliva dos voluntrios, atravs do Q.E.D. A 150... 88

TABELA 23. Resultados obtidos nas amostras de saliva de voluntrios por


CG/FID, aps tcnica de headspace......................................... 89

TABELA 24. Resultados obtidos em mg/dL, na tcnica enzimtica (Q.E.D.


A-150) e cromatogrfica (CG/HS), nas amostras coletadas
com a utilizao de Salivettes com e sem cido ctrico........... 92

TABELA 25. Mdia das concentraes de etanol para verificar a


estabilidade do etanol na amostra obtida com o sistema
Q.E.D. A-150.............................................................................. 95
LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1. Processos de biotransformao do etanol............ 27

FIGURA 2. Foto ilustrada do coletor de saliva, e de seus


compartimentos dispostos separadamente........... 61

FIGURA 3. Foto ilustrada do coletor de apresentao do teste


rpido Q.E.D A 150...................................... 62

FIGURA 4. Fotos ilustradas do procedimento de coleta de


fluido oral atravs do Q.E.D A 150........................ 62

FIGURA 5. Reaes qumicas desenvolvidas, aps a


utilizao do Q.E.D A 150..................................... 63

FIGURA 6. Fluxograma da tcnica de separao por


Headspace para determinao de etanol em
fluido oral............................................................... 72

FIGURA 7. Perfil cromatogrfico dos vapores da amostra de


fluido oral, adicionada de soluo de etanol e n
propanol................................................................. 81

FIGURA 8. Representao grfica da linearidade da tcnica


entre a concentrao de etanol e as mdias das
reas (etanol/n-propanol)...................................... 61

FIGURA 9. Grficos obtidos individuais, comparando os


resultados com as duas tcnicas empregadas..... 91
FIGURA 10. Grfico das mdias dos resultados das duas
tcnicas empregadas............................................ 91

FIGURA 11. Grfico das mdias obtidas na determinao de


etanol realizada com Q.E.D A-150 e na
determinao cromatogrfica nos mesmos
tempos, utilizando o coletor de saliva com cido
ctrico...................................................................... 93

FIGURA 12. Grfico das mdias obtidas na determinao de


etanol realizada com Q.E.D A-150 e na
determinao cromatogrfica nos mesmos
tempos, utilizando o coletor de saliva sem cido
ctrico....................................................................... 93

FIGURA 13. Grfico das mdias obtidas na determinao de


etanol realizada com Q.E.D A-150 no Salivette
sem cido ctrico e na determinao
cromatogrfica..................................................... 94

FIGURA 14. Grfico das mdias obtidas na determinao de


etanol realizada com Q.E.D A-150 no Salivette
com cido ctrico e na determinao
cromatogrfica...................................................... 94
LISTA DE ABREVIATURAS

ACTH Hormnio adrenocorticotrfico

ADH lcool desidrogenase

AMP Monofosfato de adenosina

AMPA amino- 3 hidroxi 3 metil isocozal

ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

CAS Concentrao de lcool no sangue

CEBRID Centro Brasileiro de Investigaes


Domiciliares

CONTRAN Conselho Nacional de Trnsito

CV Coeficiente de variao

Dp Desvio padro

EAA Aminocidos excitatrios

EMIT Tcnica de enzimoimunoensaio


homogneo

f.o fluid once

FRAT Free Radical Assay Technique

GABA cido gama aminobutrico

GC/FID Cromatografia gasosa com detector de


ionizao em chama

HDL Lipoprotena de alta eficincia

HPLC Cromatografia lquida de alta eficincia

HS Headspace
Kcal Quilocaloria

LDL Lipoprotena de baixa eficincia

LOD Limite de deteco

LOQ Limite de quantificao

MEOS Sistema de oxidao microssomal do etanol

NADH nicotinamida adenina dinucleotdeo

NADPH nicotinamida dinucleotdeo fosfato

NCADD National Council on Alcoholism and Drug


Dependence

NIAA National Institute on Alcohol Abuse and


Alcoholism

NMDA n- metil-d-aspartato

OMS Organizao Mundial de Sade

PM Peso molecular

Q.E.D A - 150 Detector quantitativo de etanol

R2 Coeficiente de determinao

SAF Sndrome alcolica fetal

SENAD Secretaria Nacional Antidrogas

SNC Sistema nervoso central

TDX (FPIA) Fluorescncia polarizada

VCM Volume corpuscular mdio


Resumo

O uso nocivo do lcool acarreta problemas de sade para o usurio e prejuzos


na sociedade. Vrios espcimes biolgicos podem ser utilizados para verificar
a exposio a bebidas alcolicas. No trabalho foi investigada a utilizao da
saliva na determinao de etanol atravs das tcnicas: enzimtica Q.E.D. A-
150 de triagem - e cromatografia em fase gasosa, aps separao por
aquecimento, Headspace de confirmao. O mtodo foi padronizado,
validado e aplicado em amostras de saliva provenientes de voluntrios que
ingeriram de maneira controlada bebida alcolica. Em todas as amostras
analisadas foi possvel detectar a concentrao de etanol, observando a
existncia de uma diferena entre os respectivos resultados das duas tcnicas.
Os resultados interindividuais apresentaram grande variabilidade nos mesmos
tempos de coleta, apesar da ingesta equivalente de etanol. No estudo foi
verificado que a saliva uma matriz alternativa adequada para verificar a
concentrao de etanol em indivduos expostos s bebidas alcolicas.
Summary

The abuse of alcohol leads to health injury and causes damage to the society.
Several biological matrices can be used to monitor exposure to alcoholic
beverages. In this work, saliva was used in the determination of ethanol for both
techniques: enzymatic Q.E.D. A-150 screening test -, and headspace-gas
chromatography - confirmation test -. The method was developed, validated and
used for the analysis of saliva samples from volunteers who ingested alcoholic
beverages in a controlled schedule. Ethanol was detected and in all samples,
noticing a difference between the results of both techniques. Inter-volunteers
results showed high variability for the same collection times, although the
amount of ethanol ingested was equivalent. These results suggest that saliva is
a good option for the in field determination of ethanol in exposed individuals to
alcoholic beverages.
1. INTRODUO

O lcool uma droga psicoativa, cujo consumo excessivo resulta em efeitos


nocivos para o usurio e para a sociedade. uma droga legalizada, tolerada
scio-culturalmente por todos os povos, sendo seu uso incentivado na
sociedade (OLIVEIRA, 1999).

a droga que provoca maior nmero de danos sade da populao:


responsvel por 90% das internaes psiquitricas e a cerveja - bebida
alcolica mais consumida no Brasil - classificada pela Organizao Mundial
de Sade como produto responsvel pela mais alta taxa de mortalidade e de
morbidade do mundo (NOTO, 1999; EPIDEMIOLOGIA, 2000; WHO, 2000).

Entre as conseqncias scio-econmicas decorrentes de seu abuso


responsvel por 60% dos acidentes de trnsito e est presente em 75% dos
acidentes de trnsito com vtimas fatais (MOURO, et al., 2000; CARVALHO et
al., 2002) No ambiente de trabalho o alcoolismo responsvel por 50% das
faltas ao trabalho, aumenta trs vezes o risco de acidentes e a oitava causa
de concesso do auxlio doena pela Previdncia Social (SO PAULO, s.d.).

O consumo de bebidas alcolicas tem se tornado cada vez mais abusivo pela
populao e a faixa etria do incio de sua utilizao tem diminudo causando
grande preocupao nas reas de sade e segurana pblica (HADFIELD;
MERCER & PARR, 2001; CARLINI, et al., 2002).

Na rea da segurana pblica citado em 70% dos laudos cadavricos por


mortes violentas na Grande So Paulo, 92% dos homicdios ocorrem prximos
a bares ou com pessoas alcoolizadas e est relacionado em 39% das
ocorrncias policiais por ano (NOTO, 1999; MOURO, et al., 2000).

1
Em termos de consumo s perde para a cafena, gerando um grande
contingente de dependentes, que no Brasil de 11,2% da populao
(CARLINI, et al., 2002). O alcoolismo foi responsvel por 3.621 bitos em
indivduos com idade inferior aos 40 anos , sendo destes 89% do sexo
masculino (OLIVEIRA, 1999; PESSINI, 1999; BITTENCOURT, 2000).

Devido a esse contexto preocupante, medidas de preveno, controle e


reduo do seu consumo tm sido adotadas, principalmente no trnsito e no
ambiente de trabalho.

O Cdigo Brasileiro de Trnsito, que entrou em vigor em 1997 (Lei n 9.503, de


23 de setembro de 1997) apresenta na rea de substncias psicoativas o
seguinte: probe dirigir sobre a influncia de lcool ou de qualquer substncia
entorpecente; define o grau de alcoolemia que impede os motoristas de dirigir
veculos automotores; permite a realizao de anlises para identificar os
indivduos infratores; e refere as penalidades para aqueles que infringirem o
Cdigo (BRASIL, 1997).

Um novo projeto de lei PL 0735-03 - mais rgido sobre o assunto est em


tramitao no Congresso Nacional, onde diminui o ndice que comprova que o
condutor se acha impedido de dirigir, de 0,6g/L para 0,3g/L.

No ambiente de trabalho a aplicao de Programas de preveno e controle do


uso de lcool e outras drogas, est bem estabelecida em muitos pases,
inclusive no Brasil (SILVA, 1999).

Uma das medidas eficazes para alcanar xito na aplicao destes programas
a utilizao das anlises toxicolgicas, que considerada um importante
instrumento para verificar o consumo de substncias psicoativas. Diversas
matrizes podem ser utilizadas para tal finalidade: urina, sangue, ar expirado e
outras (CHROUCH, 1998; SILVA; YONAMINE & ODO, 1999).

2
As anlises toxicolgicas utilizadas para verificar a exposio a drogas so
divididas em dois tipos: uma de resposta imediata (triagem) e a outra de
confirmao do resultado, considerada imprescindvel para este tipo de
finalidade.

Atualmente, para determinao de etanol na fase de triagem geralmente


utilizado o etilmetro, que mede a concentrao no ar expirado e para a
confirmao da alcoolemia realizada a anlise em sangue atravs da
cromatografia em fase gasosa, aps separao por aquecimento - headspace.

O uso do etilmetro possvel atravs da aplicao de um fator de converso


para estimar a concentrao sangunea. Esses equipamentos para terem
assegurado a validade de seus resultados devem ser homologados pelo rgo
competente de cada pas e calibrados de acordo com normas estabelecidas
pelo fabricante. Infelizmente, essa conduta no tem sido rotineiramente
adotada no pas (CARVALHO & LEYTON, 2000).

O sangue, embora seja considerada uma amostra de referncia para


verificao de intoxicao alcolica do indivduo apresenta algumas restries
para a sua ampla utilizao coleta invasiva e riscos de contaminao para o
doador e para responsvel pela coleta (SCHRAMM; SMITH & CRAIG, 1992;
KIDWELL; HOLLAND & ATHANASELIS, 1998).

Recentemente, a saliva tem sido recomendada como matriz alternativa para


anlise de agentes teraputicos, qumicos e drogas de abuso como o lcool,
devido s vantagens que apresenta com relao s amostras convencionais:
coleta no invasiva e facilidade para aplicao em campo (DROBITCH &
SVENSSON, 1992; JONES, 1995).

3
Na quase totalidade dos trabalhos encontrados na literatura os objetivos foram
dirigidos para analisar possveis correlaes entre as concentraes de etanol
existentes no sangue, ar expirado e/ou saliva. Os resultados demonstraram
uma boa correlao entre a concentrao no sangue e saliva (JONES, 1979a
1993; BATES & MARTIN, 1997; BENDTSEN, et al., 1999; GUBALA & ZUBA,
2003).

No estudo foi investigada a utilizao da saliva para verificar a exposio a


bebidas alcolicas atravs do desenvolvimento de um mtodo analtico que
englobasse as duas fases da anlise: triagem e confirmao.

Na fase de triagem foi utilizado um sistema enzimtico denominado de Q.E.D.


A 150, que consiste em um teste rpido para etanol, onde a leitura feita
diretamente na escala do dispositivo em miligramas por decilitro ou em
porcentagem. Na fase de confirmao a tcnica escolhida foi cromatografia
em fase gasosa, aps separao por aquecimento, conhecida por headspace.
Esta tcnica considerada de referncia para anlise de substncias volteis
em materiais biolgicos (MACCHIA et al., 1995; CORRA & PEDROSO, 2000;
GUBALA & ZUBA, 2002).

O sistema enzimtico foi adotado por alguns autores na literatura cientfica


como mtodo de deteco de etanol em saliva em comparao com os
resultados encontrados na utilizao de outras tcnicas em matrizes como o
sangue e ar expirado (JONES, 1995; BATES & MARTIN, 1997; BENDTSEN et
al., 1999; BIWASAKA et al., 2001).

Em levantamento bibliogrfico realizado foi encontrado um nmero reduzido de


trabalhos, onde se utilizou a cromatografia gasosa, aps separao por
headspace para determinar a concentrao de lcool em saliva (MACCHIA et
al., 1995; GUBALA & ZUBA, 2002). Assim, foi desenvolvido este estudo para
avaliar o uso da saliva como amostra para verificar a exposio a bebidas
alcolicas.

4
2. ASPECTOS TOXICOLGICOS

2.1. Consumo de bebidas alcolicas

Registros arqueolgicos revelam que os primeiros indcios sobre o consumo


de lcool pelo ser humano datam de aproximadamente 6.000 a.C., sendo,
portanto um costume extremamente antigo e que tem persistido por
milhares de anos (AHMED, 1995).

Nas primeiras civilizaes, as bebidas alcolicas eram consideradas


nutritivas, medicinais ou sagradas. A palavra usque, originria do antigo
gauls usquebaugh, significa gua da vida (HADFIELD; MERCER &
PARR, 2001).

Na Idade Mdia os rabes introduziram na Europa a tcnica de destilao


para aumentar a concentrao de etanol nas bebidas alcolicas. Nesta
poca os alquimistas acreditavam que era o elixir da longa vida, e
empregavam a palavra al - kuhul para a substncia, significando tambm
gua da vida (HADFIELD; MERCER & PARR, 2001; FLEMING; MIHIC &
HARRIS, 2001; LIMA, 2003).

No Brasil, os ndios antes da chegada dos portugueses produziam o cauim


- do tupi ka wi -, que era uma bebida fermentada obtida da mandioca
cozida ou do suco de frutos como o caju ou milho. Com a chegada dos
portugueses foram introduzidos outros tipos de bebidas como os vinhos, as
cervejas, as aguardentes e outros destilados, de alto teor alcolico (ACIOLI,
1999; SCIVOLETTO & MALBERGIER, 2003).

5
As bebidas alcolicas so misturas geralmente constitudas de etanol, gua,
cereais, vegetais ou frutas e de outras substncias: cidos orgnicos,
sters, leos essenciais e acetaldedo. So classificadas de acordo com o
processo de fabricao - fermentao e destilao - e de seu teor alcolico
(ABEL, 1983; OSBORN, 1994).

Entre as bebidas fermentadas as mais consumidas so cerveja, vinhos e


entre os destilados a cachaa, gim, rum, vodka, usque, conhaque e outros.

A concentrao de lcool varia muito de acordo com o tipo bebida. As


cervejas tm graduao alcolica em geral de 4 a 5%, mas apresentam
outros tipos como light ou forte e ainda as denominadas ice ou dry com
maior teor alcolico (WILLIANS, et al., 1997). No Brasil, as cervejas tm
graduao que variam de 3,0% a 6,2% (TABELA 1).

Outra bebida bastante consumida em nosso pas so os diversos tipos de


chopp, cujo teor de lcool de aproximadamente 5%. Os vinhos bebida
tambm fermentada apresentam concentrao de etanol de 11 a 14% e
do tipo light de aproximadamente 7%.

Os destilados so tipos de bebidas com teor alcolico superior as bebidas


fermentadas de 35 a 54% - devido ao seu processo de obteno
(TABELA 2).

6
TABELA 1. Teores alcolicos das principais cervejas produzidas no Brasil

TEOR MARCA DA TEOR MARCA DA


ALCOLICO CERVEJA ALCOLICO CERVEJA

< 0,5 BAVARIA (SEM LCOOL) 4,7 NOVA SCHIN PILSEN


KRONENBIER SKOL PILSEN
CINTRA
3,0 BRAHMA LIGHT NOVA SCHIN MUNICH

5,0 ANTARTICA PILSEN


3,7 MALZBIER (BRAHMA) BOHEMIA PILSEN
BRAHMA PILSEN
ORIGINAL
XINGU EXTRA
4,0 MALZBIER (ANTARCTICA)
5,07 POLAR EXPORT

4,3 BAVRIA 5,2 SKOL BEATS


NOVA SCHIN MALZBIER CARACU

4,4 XINGU
5,3 CERPA

4,5 CRYSTAL 5,5 BAVARIA PREMIUM


ITAIPAVA BRAHMA EXTRA
KAISER SUMMER DRAFT POLAR
SERRA MALTE

4,6 KAISER PILSEN 5,6 BOHEMIA WEISS

4,7 PRIMUS 6,2 KAISER BOCK

Fonte: Levantamento efetuado nas embalagens originais dos produtos.

7
TABELA 2. Faixa de teor alcolico dos principais destilados consumidos
no Brasil.

DESTILADO TEOR ALCOLICO

USQUE 39 40%
CONHAQUE 38 39%
RUM 35 38%
GIM 43,5 45,3%
AGUARDENTE DE CANA 39 40%
CACHAA 39 43%
Fonte: Levantamento efetuado nas embalagens originais dos
produtos.

A aguardente de cana surgiu no Brasil no perodo colonial, a partir das


impurezas retiradas durante a fervura do caldo de cana, no processo de
produo do acar (FERRAZ, 2003).

Na legislao - decreto n 4.072 de 3 de janeiro de 2002 definida como


produto alcolico, obtido a partir da destilao do caldo de cana fermentado,
podendo ser adicionada de acares at 6 gramas por litro e com teor
alcolico entre 38 e 54 GL. J a cachaa a denominao tpica e
exclusiva da aguardente de cana produzida no Brasil com graduao
alcolica de 38 a 48 GL, a 20C e com caractersticas sensoriais
peculiares (BRASIL, 2002a; FERRAZ, 2003).

A cachaa a segunda bebida alcolica mais consumida no pas - mais de


70 milhes de doses diariamente -, perdendo apenas para a cerveja. A sua
produo segundo dados apresentados pelo Programa de Desenvolvimento
da Aguardente de Cana, Caninha e Cachaa tem representado cerca de 1,3
bilhes de litros com previso para 2003 de 1,5 bilhes, faturando mais de
600 milhes de dlares (OLIVEIRA et al., 2001).

8
Desde 1997, este destilado vem recebendo incentivo do Governo Federal,
sendo includa no Programa Especial de Exportao PEE - com
estimativas de exportao de 30 milhes de litros, ultrapassando os 14,5
milhes do ano de 2002 (OLIVEIRA et al., 2001).

No Brasil grande consumo de bebidas alcolicas tambm est associado ao


fator econmico, por exemplo, uma garrafa de pinga pode custar menos
que um litro de leite. A Organizao Mundial de Sade apresenta uma
tabela de preos de bebidas alcolicas em diversos pases europeus
comparando os com o preo do lanche da principal rede mundial de fast
food. Esses dados so apresentados na TABELA 3 (WHO, 2003b).

Como a Organizao Mundial de Sade no apresenta o perfil de preos no


Brasil, foi verificado que o preo do lanche em questo de
aproximadamente 1,30 euros.

9
TABELA 3. Comparao de valores entre as doses de bebidas alcolicas
consumidas nos pases europeus com o lanche da principal rede mundial
de fast food.

PAS DESCRIO DA DOSE PREO EUROS*

PORTUGAL 500 mL cerveja 0,53


750 mL vinho 1,50
700 mL destilado 4,67
lanche 2,50

ITLIA 500 mL cerveja 1,66


750 mL vinho 3,00
700 mL destilado 14,85
lanche 2,80

FRANA 500 mL cerveja 0,66


750 mL vinho 2,29
700 mL destilado 11,00
lanche 3,00

ALEMANHA 500 mL cerveja 0,80


750 mL vinho 2,20
700 mL destilado 5,00
lanche 2,65

IRLANDA 500 mL cerveja 2,10


750 mL vinho 9,07
700 mL destilado 13,09
lanche 3,00

FINLNDIA 500 mL cerveja 1,87


750 mL vinho 5,00
700 mL destilado 20,09
lanche 3,20
Fonte: WHO, 2003a.
* Euro = R$3,54 (cotao em 02/12/2003).

10
A TABELA 4 apresenta o consumo de bebidas alcolicas em litros por
pessoa no Brasil, de 1961 at 2000.

TABELA 4. Consumo de bebidas alcolicas - cerveja, vinho e destilados


- em litros por pessoa no Brasil, no perodo de 1961 at o ano
de 2000.

ANO CONSUMO TOTAL (L) CERVEJA VINHO DESTILADOS


POR PESSOA
2000 4.79 2.40 0.36 2.03
1999 5.03 2.56 0.39 2.07
1998 5.07 2.62 0.31 2.14
1997 5.15 2.64 0.32 2.19
1996 4.91 2.61 0.29 2.01
1995 5.27 2.82 0.41 2.04
1990 4.35 2.04 0.42 1.89
1985 3.79 1.42 0.44 1.93
1980 3.45 1.37 0.46 1.63
1975 2.97 0.87 0.44 1.66
1970 2.82 0.83 0.46 1.61
1965 2.62 0.72 0.44 1.46
1961 1.88 0.67 0.45 0.76

Fonte: WHO, 2003c

No Brasil, devido ao consumo crescente de bebidas alcolicas, legislaes


especficas foram elaboradas como a lei n 9.294 de 15 de julho de 1996,
que dispe sobre as restries ao uso e propaganda de produtos
fumgeros, bebidas alcolicas, medicamentos, terapias e defensivos
agrcolas (BRASIL, 1996). Esta teve alguns dispositivos alterados, pela lei
10.167 de 27 de dezembro de 2000, que por sua vez foi recentemente
modificada pela lei 10.702 de 14 de julho de 2003 (BRASIL, 1996; 2000b;
2003b).

11
Todos estes dispositivos legais regulamentam a propaganda sobre lcool
no rdio e televiso em certos horrios, restringe a incluso de jovens e
adolescentes vinculados a essas propagandas, alm da proibio de venda
de bebidas alcolicas a menores de 18 anos (BRASIL, 2000b; 2003b).

Apesar dessas restries, um nmero preocupante de adolescentes entre


10 e 12 anos consome em excesso bebidas alcolicas (GALDUROZ &
NOTO, 2000).

O Conselho Superior do CONAR, no dia 12 de setembro de 2003 aprovou


uma completa reviso das normas ticas que regulamentam a publicidade
de bebidas alcolicas, no sentido de proibir a utilizao de indivduos
menores de 25 anos em peas publicitrias e restringir o uso das figuras
que possam ser associadas ao erotismo ou ao pblico infanto - juvenil
nesse tipo de propaganda (CONSELHO NACIONAL DE AUTO
REGULAMENTAO PUBLICITRIA, 2003 a,b,c).

Este Cdigo estabelece a distino entre 3 categorias de bebidas: as


normalmente consumidas nas refeies - cervejas e vinhos -; as demais
bebidas alcolicas, fermentadas ou destiladas (servida por doses) e a da
categoria das ice, coolers apresentadas misturadas com gua, suco ou
refrigerante (CONSELHO NACIONAL DE AUTO REGULAMENTAO
PUBLICITRIA, 2003 a,b,c).

Apesar dessas leis, de campanhas de educao e advertncia e at mesmo


de restries ao seu uso, o consumo tem aumentado de maneira
preocupante e a dependncia ao lcool um problema que afeta milhes
de indivduos no Mundo. No Brasil o contingente de consumidores
excessivos de aproximadamente 10 milhes, representando um grave
problema de sade pblica (LIMA, 2003).

12
Os critrios utilizados para determinar os conceitos de uso, abuso e
dependncia so complexos, sendo influenciados pela cultura, sociedade e
variaes individuais (CAETANO, 2002).

Segundo Glantz, (1992) o uso definido como consumo controlado em


termos de freqncia e quantidade, sem que sejam observados efeitos
adversos para o usurio, ao contrrio do uso abusivo.

Geralmente, os conceitos sobre os consumidores de bebidas alcolicas so


classificados de acordo com a quantidade drinques - ingerida por dia ou
por semana. A denominao de drinque e respectiva concentrao de
etanol so bastante variveis entre os pases. Na Inglaterra um drinque
padro equivale a 8g de etanol, no Japo a 19,75g e nos Estados Unidos a
12 g - 0,5 fluid once ou 11,61 mL. Contudo, na Inglaterra 1 once equivale a
28,41mL ou 22,30g de etanol (UNITED STATES, 1995; DUFOUR, 1999).

No Brasil, segundo a Secretaria Nacional Anti Droga (SENAD), um drinque


padro representado por uma lata de cerveja - 300 mL -; ou uma taa
de vinho - 120 mL -; ou 36 mL de usque, pinga ou vodka - um pouco menos
que uma dose comum no Brasil, que de 50 mL - (BRASIL, 2000a).

Dawson, (1995) criou uma escala para diferenciar os consumidores de


lcool, tendo por base o consumo de drinques em determinados perodos.

13
TABELA 5. Classificao do consumidor de bebidas alcolicas de acordo
com a quantidade ingerida em determinados perodos.

DENOMINAAO DO QUANTIDADE DE LCOOL


CONSUMIDOR INGERIDA

ABSTMIO Menos que 12 doses/ano

LEVE 1-13 doses/ms

MODERADO 4 14 doses/semana

PESADO Mais de 2 doses/dia

Fonte: DAWSON, 1995.

O padro de consumo de lcool tambm pode ser medido por unidades de


bebida UB -. Uma unidade de bebida equivale a 10 gramas de lcool
puro. A obteno das unidades-equivalentes de uma determinada bebida
feita multiplicando-se a quantidade da mesma por seu teor alcolico, que
expresso em porcentagem ou em GL - Gay Lussac -. Obtido esse valor faz-
se converso das unidades de bebida em gramas de etanol (MARQUES
& RIBEIRO, 2002).

Entretanto, este tipo de abordagem no correlaciona a quantidade ingerida


com a alcoolemia. A concentrao sangunea varivel, dependendo de
vrios fatores entre estes o metabolismo individual, raa e sexo. Por
exemplo, nas populaes asiticas - chinesas e japonesas -, ocorre uma
variao na ALDH genes modificados que codificam a ALDH para ALDH2
-, sendo estes deficientes dessa enzima e dessa forma demonstram uma
reao de sensibilidade ao lcool. Nas mulheres essa concentrao
geralmente maior devido diminuio do metabolismo de primeira
passagem no estmago e da quantidade de partio de gua ser menor
que a do homem (JULIEN, 1998; RAMCHANDANI ; BOSRON & LI, 2001).

14
A tabela 6 apresenta a concentrao sangunea obtida de acordo com a
quantidade e respectiva dose de bebida alcolica ingerida.

TABELA 6. Concentrao sangunea de etanol, aps meia hora da ingesto


de quantidades variveis de bebidas alcolicas observadas em indivduos
com diferentes pesos corpreos.

PESO CORPORAL

QUANTIDADE 60 Kg 70 Kg 80 Kg
INGERIDA
g/ L

1 lata de cerveja 0,27 0,22 0,19


1 copo de vinho tinto
1 dose de usque

2 latas de cerveja 0,54 0,44 0,38


2 copos de vinho
2 doses de usque

3 latas de cerveja 0,81 0,66 0,57


3 copos de vinho
3 doses de usque
Fonte: Extrada de Marques & Ribeiro, 2002

15
2.2 Abuso e dependncia ao lcool

O lcool apresenta a capacidade de desenvolver um padro de


comportamento de uso abusivo devido aos seus efeitos farmacolgicos
agradveis - reforo primrio -, da averso sndrome de abstinncia, do
desenvolvimento de tolerncia e de fatores individuais, ambientais e sociais
- reforos secundrios (MDIO, 1992).

Estima-se que 90% da populao adulta dos pases civilizados consomem


lcool com periodicidade, sendo que aproximadamente 50% possuem
problemas temporrios e 10 a 12% so dependentes (MARQUES &
RIBEIRO, 2002).

Segundo levantamento domiciliar realizado em 107 cidades do pas, 11,2%


da populao pesquisada dependente de lcool, sendo responsvel por
mais de 90% dos casos de internaes por dependncia de drogas nos
hospitais. O lcool a droga que mais prejuzos trazem a sociedade,
ocasionando 6,5 vezes mais mortes do que outras drogas ilcitas
(UNIVERSIDADE DE SO PAULO, 1999; CARLINI, et al., 2002).

Os problemas relacionados ao consumo de lcool no esto restritos ao


uso crnico, pois qualquer padro de consumo pode trazer complicaes
para o indivduo. Mesmo os que bebem eventualmente podem abusar,
levando a problemas sociais, fsicos e psicolgicos (MARQUES & RIBEIRO,
2002).

A Associao Psiquitrica Americana apresenta os critrios para


diagnosticar o uso abusivo de lcool (TABELA 7).

16
TABELA 7. Critrios para o diagnstico de uso abusivo de lcool, conforme
o DSM IV.
A. Preenchimento de pelo menos 1 dos critrios, ocorrendo em um
perodo de 12 meses
1. Uso recorrente da substncia resultando em problemas no
trabalho, escola (Ex: ausncias, suspenses, indisciplina, ou
expulso); ou no lar (negligncia dos deveres domsticos).

2. Uso recorrente de substncias em situaes em que h risco


fsico (dirigir veculos, operar mquinas).

3. Problemas legais pelo uso de drogas.

4. Uso persistente apesar de problemas interpessoais ou sociais


causados ou exacerbados pelo uso de drogas.

B. Nunca ter preenchido os critrios para o diagnstico de dependncia.


Tabela baseada em American Psychiatric Association Diagnostics and
Statistical Manual of Mental Disorders, Fourth Edition, Washington, DC,
1994. Fonte: Scivoletto & Malbergier, 2003.

Existem variaes individuais qualitativas e quantitativas quanto


quantidade para causar a sensao de prazer, bem como no tempo de
consumo para ocorrer dependncia. A experincia clnica sugere que so
necessrios 10 anos ou mais para o desenvolvimento da dependncia ao
lcool. O nmero de anos varia de paciente a paciente e est relacionado
como outros fatores: quantidade consumida, ambiente sciocultural e
histrico familiar de problemas com o lcool (CAETANO, 2002).

Os critrios para definir a dependncia a substncias psicoativas so


apresentados pela DSM IV e por diversos autores e Instituies
governamentais.

17
O conceito de dependncia apresentado na DSM-IIIR como: sintomas
comportamentais e fisiolgicos que indica que uma pessoa tem prejuzo do
controle do uso de uma substncia psicoativa ou o uso contnuo dessa
substncia a leva para conseqncias adversas. Este termo utilizado
alternadamente com o vcio e com o alcoolismo (WHO, 1994).

A Organizao Mundial de Sade no Cdigo Internacional de Doenas,


designado - CID-10 - define a dependncia como: Conjunto de fenmenos
comportamentais, cognitivos e fisiolgicos que se desenvolvem, aps
repetido consumo de uma substncia psicoativa, associados ao desejo
incontrolvel de usar a droga, dificuldade de controlar o consumo,
utilizao persistente apesar das suas conseqncias negativas, a uma
maior prioridade dada ao uso da droga em detrimento de outras atividades
e obrigaes, a um aumento da tolerncia pela droga e por vezes, a um
estado de abstinncia fsica (ORGANIZAO MUNDIAL DA SADE, 1993).

Segundo a mesma Organizao outra terminologia utilizada a adico ao


lcool - ou outra droga -, que caracterizada pelo uso freqente desta
substncia de maneira que o usurio - denominado adicto -
periodicamente ou cronicamente intoxicado, apresenta compulso ao uso
da substncia, tem grande dificuldade em cessar ou modificar o seu
consumo e apresenta determinao em obter a droga atravs de qualquer
meio. Tipicamente, h desenvolvimento da tolerncia e quando h
interrupo do uso observada a sndrome de abstinncia (WHO, 1994).

Os termos dependncia fsica ou fisiolgica e dependncia psquica ou


psicolgica so tambm, freqentemente referidos, o primeiro est
associado a o desenvolvimento de tolerncia e sndrome de abstinncia e o
segundo aos fenmenos de desejo intenso e a compulso (WHO, 1994).

18
D-se preferncia ao uso do termo neuroadaptao, que a alterao
observada no sistema nervoso central devido a presena de uma
substncia psicoativa, aps exposio nica ou repetida, que se manifesta
pelo aparecimento de transtornos fsicos intensos quando o uso
interrompido - sndrome de abstinncia - ou pela resposta diminuda para
uma mesma concentrao no sito de ao - tolerncia farmacodinmica
(MDIO, 1992).

Em resumo a essncia da dependncia a incontrolvel procura e uso


compulsivo da droga, mesmo na presena de conseqncias negativas,
sociais e sade do usurio (LESHNER, 2001).

O termo alcoolismo foi originariamente utilizado por Magnus Huss, em 1849


e foi reconhecido como doena psiquitrica h 38 anos 1965 - pela
Associao Psiquitrica Americana. Em meados de 1970, foi definido como
doena crnica, progressiva e potencialmente fatal (JULIEN, 1998; UNITED
STATES, 2002). Pela Organizao Mundial de Sade (OMS), como
consumo de bebida alcolica de forma continuada, causando prejuzos
emocionais, sociais e fsicos ao indivduo (WHO, 1994).

Segundo o National Council on Alcoholism and Drug Dependence (NCADD)


e a American Society of Addiction Medicine (ASAM), o alcoolismo uma
doena primria - no sintoma de outras doenas -, crnica cuja
manifestao e desenvolvimento so influenciados por fatores genticos,
psicossociais e ambientais (NCADD, 1990).

De acordo com Manual Diagnstico e Estatstico da Associao Psiquitrica


Americana, 4 edio - DSM IV - o estabelecimento do diagnstico da
dependncia ao lcool requer a presena de pelo menos 3 dos 7 sintomas,
em um perodo de um ano. Esses sintomas so apresentados na TABELA 8
(DESHMUKH, et al., 2003).

19
A reduo ou suspenso da ingesto de lcool em usurios crnicos, leva
ao aparecimento de um conjunto de sinais e sintomas definidos como
sndrome de abstinncia do lcool. (MASTERS, 2003).

Os sintomas e severidades dessa sndrome so determinados pela


quantidade e durao do consumo de lcool, sendo que no primeiro estgio
ocorre tremores, nuseas, diarria, sudorese, febre, insnia, irritabilidade,
hipertenso e pupila dilatada. Essa fase pode ser acompanhada por
convulses tnico-clnicas e em casos severos por derrame cerebral, cerca
de 12 a 48 horas aps a ltima ingesto da bebida (CAETANO, 1996;
BRIEN, 2001; FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001; RANG, et al., 2001a;
DESHMUKH, et al., 2003).

Nas primeiras 48 horas, aps a abstinncia ao lcool, alguns indivduos


podem apresentar sndrome de abstinncia com delirium - delirium tremens
-, que um estado neuropatolgico caracterizado por confuso, alucinaes
- tipicamente visual ou tctil, menos comumente olfativa ou auditiva -,
agitao, tremores, delrio, febre, taquicardia e hipertenso (FLEMING;
MIHIC & HARRIS, 2001; RANG, et al., 2001a).

Esses sintomas podem no aparecem isoladamente no dependente,


ocorrendo em conjuno com infeces, traumas e desnutrio (BRIEN,
2001).

20
TABELA 8. Critrios para diagnstico da dependncia de lcool, conforme
o DSM IV.

Ocorrncia de 3 ou mais critrios, em um perodo de 12 meses:

1. Tolerncia caracterizada por uma das seguintes situaes:


a) Necessidade de aumentar a quantidade da substncia utilizada
para a obteno dos mesmos efeitos.
b) Diminuio do efeito, devido ao uso contnuo de mesma
quantidade da substncia.

2. Abstinncia:
a) Sndrome de Abstinncia.
b) Utilizao da substncia para aliviar ou evitar os sintomas de
abstinncia

3. A substncia utilizada freqentemente em quantidades maiores ou


por perodos maiores do que o indivduo deseja.

4. Desejo persistente ou tentativas malsucedidas para diminuir ou


controlar o uso.

5. O indivduo gasta grande parte do seu tempo em atividades para a


obteno da substncia, para us-la ou recuperar-se de seus efeitos.

6. As atividades sociais, profissionais ou recreativas anteriormente


importantes so abandonadas ou reduzidas devido ao uso da droga.

7. O uso da substncia mantido, apesar de problemas fsicos e


psicolgicos recorrentes, sabidamente causados ou exacerbados pela
droga.
Tabela baseada em American Psychiatric Association Diagnostics and
Statistical Manual of Mental Disorders, Fourth Edition, Washington, DC,
1994. Fonte: Scivoletto & Malbergier, 2003.

21
O consumo excessivo de lcool por um extenso perodo de tempo leva ao
desenvolvimento de tolerncia (DRUMMER, 2001; MASTERS, 2003). Os
consumidores crnicos no somente podem adquirem tolerncia, mas
tambm desenvolver a dependncia, o que explicaria o intenso desejo de
consumir a bebida pela manh, devido diminuio dos nveis de etanol no
organismo durante a noite (BRIEN, 2001).

A tolerncia definida pela adaptao do sistema biolgico a um agente


qumico que resulta na necessidade de doses maiores deste agente para
obteno de efeitos de mesma intensidade e durao que os obtidos
originariamente Existem diversos tipos de tolerncia: metablica,
farmacodinmica, cruzada, aguda, crnica e reversa (KOSTEN &
HOLLISTER, 2003; MDIO, 1992).

Segundo Julien, (1998) o desenvolvimento da tolerncia ao lcool depende


da quantidade consumida, do tipo de bebida e do tempo de consumo. Essa
pode ser classificada em 2 tipos: tolerncia metablica, responsvel por
25% dos casos e a tolerncia farmacodinmica - Tecidual ou Funcional -,
sendo o tipo mais comum.

A tolerncia cruzada observada com o lcool e outras substncias de


mesma estrutura qumica e mecanismos de ao como os barbitricos de
baixa solubilidade lipdica e os benzodiazepnicos (KHANNA; CHAU &
SHAH, 1996).

A tolerncia crnica desenvolvida depois da administrao repetida de


lcool por um perodo de dias ou semanas (HILTUNEN, 1996).

Alm desses tipos referida a existncia de tolerncia aguda, que seria


dependente da dose e da experincia anterior no consumo de lcool.
Moskowitz e Coworkers concluram que a ocorrncia da tolerncia aguda
independe da existncia da tolerncia crnica em consumidores crnicos
(HILTUNEN, 1996).

22
Outra forma de tolerncia, que difere das anteriores a tolerncia rpida,
observada em resposta a segunda dose, ou seja, 8-24 horas, depois da
exposio prvia a 1a dose (KHANNA; CHAU & SHAH, 1996).

Brust, (1999) relata a existncia de tolerncia reversa, pois o organismo se


encontra mais sensvel a alguns efeitos do lcool e a experincia positiva
causada por ela - memrias emocionais -, levaria o indivduo ao uso
contnuo ou at mesmo as recadas. Este tipo de tolerncia caracterizado
por uma hipersusceptibilidade adquirida pela utilizao contnua de uma
droga ou frmaco, quando os efeitos obtidos so de maior intensidade que
os originalmente obtidos, nas mesmas condies de exposio.

Segundo Brien, (2001) outro tipo de tolerncia observada a inata,


determinada geneticamente, podendo ocorrer no primeiro momento que a
droga utilizada, representando uma caracterstica biolgica que contribui
para o desenvolvimento do alcoolismo.

23
2.3. Toxicocintica do etanol

O etanol uma pequena molcula - <100 dalton -, solvel em gua e em


gordura. Dessa forma rapidamente permevel em todos os rgos do
corpo e afeta muito de suas funes vitais (LIEBER,1999; JONES &
POUNDER, 1998; PIANO, 2002; MASTERS, 2003).

O etanol rapidamente absorvido atravs do estmago - 20% - e do


intestino delgado - 80% -, atingindo a concentrao mxima sangunea
entre 30 e 90 minutos (JULIEN, 1998; SCIVOLETTO & MALBERGIER,
2003; LIEBER, 1999; RAMCHANDANI; BOSRON & LI, 2001).

Entre os fatores que podem influenciar na absoro so citados a presena


de alimento no trato gastrintestinal e o teor alcolico ingerido. A absoro
mais rpida quando nas concentraes de 15 a 30% de etanol e
comprometida em concentraes maiores que 30% devido reduo da
motilidade gstrica, estimulao do suco gstrico e prejuzo da mucosa
gstrica (ABEL, 1983).

Devido as suas caractersticas qumicas e fsico-qumicas, o etanol


rapidamente distribudo por todos os fluidos corpreos e tecidos. A
quantidade de etanol nos tecidos pode variar, dependendo da massa
corprea e da quantidade de gua entre os diferentes indivduos (ABEL,
1983).

As barreiras hematenceflica e hematoplacentria so livremente


permeveis ao lcool. Os nveis de etanol no feto so semelhantes aos da
me (JULIEN, 1998; PARKINSON, 2001; SCIVOLETTO & MALBERGIER,
2003;).

24
A biotransformao do etanol ocorre primeiramente no fgado, e uma
pequena quantidade ocorre nos pulmes, rins e intestino (ABEL, 1983;
BRUCKNER & WARREN, 2001).

Aproximadamente de 90 a 98% do lcool ingerido biotransformado no


fgado pela ao da enzima lcool desidrogenase. Essa biotransformao
relativamente constante na taxa de 15 18 mg/dL por hora (CONE, 1993;
PARKINSON, 2001; PIANO, 2002; SCIVOLETTO & MALBERGIER, 2003).

A quantidade de etanol oxidada em um certo intervalo de tempo


proporcional ao peso corpreo do indivduo. Entretanto, uma pequena
quantidade de etanol - 15% - biotransformado pela enzima lcool
desidrogenase gstrica responsvel pelo metabolismo de primeira
passagem do etanol. Esse metabolismo gstrico reduz a concentrao de
etanol no sangue. As mulheres apresentam menor nvel da enzima lcool
desidrogenase gstrica e conseqentemente maiores nveis de etanol no
sangue (JULIEN, 1998; JONES & POUNDER, 1998; WEATHERMON &
CRABB, 1999).

Frezza et al., em 1990 para comprovar esse fato realizaram um estudo


comparativo entre homens e mulheres, que consumiram as mesmas
quantidades de etanol. As mulheres apresentaram maior concentrao de
lcool no sangue do que os homens. Isso ocorre nas mulheres devido a
menor quantidade de gua no organismo e menor metabolismo de primeira
passagem por apresentarem quantidades diminudas da enzima lcool
desidrogenase gstrica.

O metabolismo do etanol ocorre por 3 vias de ao: lcool desidrogenase


ADH -, no sistema de oxidao microssomal do etanol MEOS - e no
sistema da catalase. A principal via de biotransformao do etanol envolve
a lcool desidrogenase, enzima que contm zinco e que catalisa a
converso do etanol para acetaldedo (OSBORN, 1994; AHMED, 1995;
MOSLEN, 2001; PARKINSON, 2001; SCIVOLETTO & MALBERGIER,
2003; MASTERS, 2003).

25
O etanol em concentraes maiores tambm sofre biotransformao pela
ao do citocromo P450, principalmente a isoforma CYP2E1, do sistema de
oxidao microssomal MEOS - utilizando o NADPH como cofator. A
CYP2E1 tambm tem uma alta capacidade para biotransformar algumas
drogas conhecidas, como o paracetamol, para seu metablico txico que
pode promover a carcinognese. Por outro lado a ingesto aguda de etanol
pode inibir a biotransformao de algumas drogas por competio atravs
de uma pequena parcela da via microssomal. As interaes do lcool com
outros medicamentos sero abordados mais a diante (OSBORN, 1994;
AHMED, 1995; LIEBER, 1999; MOSLEN, 2001; PARKINSON, 2001;
SCIVOLETTO & MALBERGIER, 2003; MASTERS, 2003).

A terceira via do metabolismo do etanol, a catalase, contribui com 10% da


biotransformao do etanol. No interior dos peroxissomas, o etanol
oxidado com formao de acetaldedo, sendo necessrio o consumo de
perxido de hidrognio que transformado em gua (LIEBER & ABITTAN,
1999).

O acetaldedo resultante das 3 vias de biotransformao do etanol


convertido em cido actico pela enzima aldedo desidrogenase, utilizando
o NADH como cofator. Grande parte desse cido actico entra como acetil
coA no ciclo de Krebs, oxidando totalmente o CO2 e a H2O. Durante esse
processo ocorre o desprendimento de 7,2 calorias por grama de lcool. Os
processos de biotransformao so mostrados na FIGURA 1 (OSBORN,
1994; AHMED, 1995; ABBOTT, 1996 MOSLEN, 2001; PARKINSON, 2001;
SCIVOLETTO & MALBERGIER, 2003; MASTERS, 2003).

26
Microssomos
+
NADP . H2O H 2O A

OH
CH3CH
OH
+
NADPH + H
CYP 2E1
Mitocndria
+ O2
D
Citosol NADH + H
+
B

ADH O
O
CH3CH2OH CH3C CH3C
H ALDH H
etanol
acetaldedo cido actico
NAD+
+ +
NAD NADH + H

Peroxissomos
C

CATALASE

H2O2 H 2O

FIGURA 1. Processos de biotransformao do etanol: A - Sistema de


oxidao microssmica MEOS -, B Enzima lcool desidrogenase ADH
-, C Sistema de catalase e D Enzima aldedo desidrogenase
(PARKINSON, 2001).

A biotransformao do etanol pode ser afetada por diversos fatores como o


aumento da enzima lcool desidrogenase, aps o consumo crnico. Outro
fator que afeta a biotransformao a dieta. A frutose, por exemplo,
estimula a oxidao do lcool e a deficincia de protenas causa a
diminuio de ADH - lcool desidrogenase - (ABEL,1983; MASTERS,
2003).

27
Aproximadamente, 2% do lcool ingerido so excretados inalterados
principalmente atravs dos rins e pulmes. Quando grandes quantidades de
etanol so ingeridas cerca de 10% no so oxidados. Pequenas
quantidades de etanol podem ser encontradas no suor, lgrima, bile, suco
gstrico, na saliva e outras secrees (LARINI & SALGADO,1997; HOBBS;
RALL & VERDOORN, 1996; RAMCHANDANI; BOSRON & LI, 2001).

Na TABELA 9 so apresentados os parmetros qumicos - toxicolgicos do


etanol (ABBOTT, 1996).

TABELA 9. Parmetros qumico-toxicolgicos do etanol.

peso molecular 46,07


solubilidade em gua SOLVEL
estrutura C2H6O
vias de administrao ORAL
durao do efeito (h) 2-6
meia vida plasmtica (h) 2-14
volume de distribuio (l/kg) 0,6
clearence (ml/min/kg) DEPENDE DA DOSE
% excretada 2-10%
dose txica (mg/dl) 100
nveis sanguneos txicos (mg/dl) 100-400
Fonte: MOFFAT, et al., 1986

28
2.4. Efeitos do etanol

O lcool pode provocar intoxicaes agudas e crnicas. A expectativa de


vida para os dependentes menor em 10 a 12 anos em comparao com a
populao geral (LIMA,2003).

Os sinais e sintomas da intoxicao alcolica ocorrem por nveis crescentes


de depresso do sistema nervoso central. Inicialmente h um estado de
excitao e euforia leve, evoluindo para tontura, ataxia e incoordenao
motora. Depois, para confuso e desorientao, atingindo graus variveis
de anestesia, com dificuldades de respirao, estupor e finalmente o coma
alcolico (MARQUES & RIBEIRO, 2002)

Os efeitos psicolgicos e comportamentais dos vrios nveis de alcoolemia


so apresentados na TABELA 10, de acordo com dois autores diferentes.

29
TABELA 10. Efeitos do consumo de lcool apresentado por dois autores de
acordo com a alcoolemia.
Sinais e Sintomas
Concentrao
de lcool no MILHORN, 1990 MARQUES & RIBEIRO,2003
sangue (g/L)
0,2 Sensao de calor e relaxamento
0,3 Excitao e euforia
0,4 Relaxamento e pele ruborizada

0,5 Vertigem, desinibio, diminuio do Incoordenao motora discreta,


autocontrole e da capacidade de alterao do humor,
julgamento, coordenao levemente personalidade e comportamento
comprometida

0,6 Julgamento e crtica prejudicados,


processos de tomada de decises
afetados como dirigir-

0,8 Coordenao motora comprometida,


diminuio dos reflexos, sensao de
dormncia na face e extremidades do
corpo

1,0 Dificuldades nas articulaes das Incoordenao motora


palavras, lentificao dos reflexos, pronunciada com ataxia, piora
deteriorao do controle dos dos reflexos e do humor
movimentos voluntrios

1,5 Prejuzo do equilbrio e movimento

2,0 Fala pastosa, perda do equilbrio, viso Piora da ataxia, nuseas,


dupla vmitos
3,0 Confuso, estupor, pode ocorrer perda Amnsia, hipotermia, anestesia
da conscincia

4,0 Inconscincia, pele fria e mida Coma morte (bloqueio


respiratrio central)
4,5 Freqncia respiratria diminuda

5,0 Morte por depresso do centro


respiratrio
Fonte: Adaptada de MILHORN, 1999 e MARQUES & RIBEIRO, 2003.

30
2.4.1. No Sistema Nervoso Central (SNC)

Os principais efeitos agudos do etanol ocorrem no sistema nervoso


central, onde suas aes depressoras assemelham-se s dos
anestsicos volteis (MASTERS, 2003). O seu consumo crnico afeta
negativamente o crebro, podendo causar leses de origem mltipla e
multifatorial (NEIMAN, 1998).

Na clula, o efeito do etanol puramente depressor, embora ele


aumente a atividade dos impulsos por desinibio em algumas partes do
SNC, principalmente nos neurnios dopaminrgicos mesolmbicos
envolvidos nas vias de gratificao (RANG et al., 2001a).

As principais teorias sobre a ativao do etanol so:

exacerbao da inibio mediada pelo GABA, semelhante ao dos


benzodiazepnicos;

inibio do ingresso de clcio atravs dos canais de clcio controlados


por voltagem;

inibio da funo dos receptores de glutamato (HOBBS; RALL &


VERDOORN, 1996; FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001).

O lcool potencializa a ao do GABA - cido gama-aminobutrico - por


atuar sobre os receptores GABAA semelhante ao dos
benzodiazepnicos, que mimetizam ou intensificam muitos dos efeitos
agudos causados por ele (OSBORN, 1994; JONES & POUNDER, 1998;
MORROW et al., 2001).

31
O etanol aumenta a inibio sinptica mediada pelo GABA e pelo fluxo
de cloreto, sendo esta ao tambm considerada como mecanismo de
ao. Esse efeito e outras aes sedativas e motoras so inibidos pela
bicuculina, um antagonista especfico dos receptores GABArgicos. No
uso crnico, foi constatada nos nveis plasmticos uma diminuio da
funo dos receptores GABAA, resultando na sndrome de abstinncia
(OSBORN, 1994; HOBBS; RALL & VERDOORN, 1996; BITTENCOURT,
2000; FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001; MORROW et al., 2001).

O etanol inibe a liberao de transmissores que ocorre como resposta


despolarizao da terminao nervosa, sem afetar a liberao
provocada pelos ionforos do clcio. Em consonncia, com esta ao
verificou-se que o etanol inibe nos neurnios abertura dos canais de Ca +
- elemento importante na funo de neurotransmisso -, sensveis
voltagem (HOFFMAN & TABAKOFF, 1993; LITTLE, 1995; DIAMOND,
1994).

Na privao do etanol, ocorre um excesso de canais e aumento do fluxo


de Ca+, resultando em uma situao excessiva de transmisso, que
contribui para a Sndrome de Abstinncia (NUTT & PETERS, 1994).

Os efeitos excitatrios do glutamato so inibidos pelo etanol em


concentraes semelhantes aquelas que produzem efeitos no SNC. A
ativao do receptor NMDA - N-metil-D-aspartato - inibida por
concentraes menores de etanol do que aquelas necessrias para
afetar os receptores AMPA - amino-3-hidroxi-3-metil-isoxazol -. Esses
receptores fazem parte dos subtipos dos aminocidos excitatrios
denominados EAA, ou seja, transmissores que medeiam respostas
sinpticas excitatrias rpidas do SNC (HOFFMAN & TABAKOFF, 1993;
FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001; HADFIELD; MERCER & PARR,
2001).

32
Esses efeitos possivelmente contribuem para as suas aes
depressoras, inclusive, para os distrbios de memria, pois os
receptores do NMDA desempenham importante papel no tipo de
plasticidade sinptica ao longo prazo, responsvel pela memria
(JULIEN, 1998).

Outros efeitos do etanol atuantes sobre diversos sistemas de


neurotransmissores e neuroreceptores:

Sistema adrenrgico: o uso crnico de lcool aumenta a sntese e


liberao de noradrenalina, com isso ocorre uma diminuio da
sensibilidade ps-sinptica, evidenciada pela diminuio da resposta de
AMPcclico noradrenalina.

Serotonina: elevao dos nveis de serotonina atravs do uso de


inibidores seletivos da recaptura da serotonina diminui a preferncia e o
consumo de lcool nos animais.

Acetilcolina: em uso agudo, o lcool diminui a atividade colinrgica, no


uso crnico ocorre tolerncia (RANG et al., 2001a; SCIVOLETTO &
MALBERGIER, 2003).

Alm dos efeitos agudos do etanol sobre o sistema nervoso, a


administrao crnica tambm gera diversas sndromes neurolgicas
irreversveis como o quadro de encefalopatia de Wernicke caracterizada
por paralisia do msculo ocular externo, ataxia, distrbio na locomoo e
confuso e/ou Sndrome de Korsakoff, que constitui em uma desordem
permanente do crebro decorrente de anormalidades nas funes
cognitivas e emocionais, com incapacidade de aprendizado, de
memorizao e de reconhecimento de emoes (AHMED, 1995;
THERAPONDOS; DELAHOOKE & HAYES, 1999; DRUMMER, 2001;
HADFIELD; MERCER & PARR, 2001; MASTERS, 2003).

33
Essas sndromes podem ser devidas ao prprio etanol ou a seus
produtos de biotransformao como o acetaldedo ou os steres de
cidos graxos - metabolismo no oxidativo -. A maioria dos dependentes
evidencia um grau de demncia, tornando-se apticos e com
pensamentos empobrecidos. Tambm se observa ocorrncia de
degenerao cerebelar que leva a incoordenao motora, neuropatias
perifricas e miopatia. Algumas dessas alteraes no so devidas ao
lcool propriamente, mas a uma deficincia concomitante de tiamina,
associado a traumas freqentes, a deficincia de vitaminas e a
desnutrio (THERAPONDOS; DELAHOOKE & HAYES, 1999;
DRUMMER, 2001; HADFIELD; MERCER & PARR, 2001; MASTERS,
2003).

2.4.2. No Sistema Cardiovascular

O lcool age no sistema cardiovascular produzindo uma vasodilatao


cutnea, de origem central, diminuindo a temperatura corprea
hipotermia -. Tambm causa depresso da atividade celular, podendo
ocasionar arritmias cardacas, fibrilao atrial, inflamao do msculo
cardaco miocardite -, semelhante aos sintomas da doena congestiva
cardaca, depresso da contratilidade do miocrdio, hipertenso e
elevao do colesterol srico. O uso crnico est associado a doenas
do corao que pode resultar em fibrose miocrdica (LORIMIER, 2000;
DRUMMER, 2001; RANG et al., 2001b; BRUCKNER & WARREN, 2001;
RAMOS, et al., 2001; PIANO, 2002; MASTERS, 2003; MUKAMAL;
CONIGRAVE & MITTLEMAN, 2003).

34
Em contrapartida vrios estudos tm relatado que o consumo moderado
de bebida alcolica, doses pequenas de etanol consumidas diariamente,
poderia reduzir o risco de problemas cardacos, arteriosclerose e certos
tipos de doenas, bem como, a reduo do risco de osteoporose em
mulheres na fase de menopausa. Esse efeito protetor ocorre porque o
lcool induz o aumento de HDL no sangue com correspondente
decrscimo da LDL (JULIEN, 1998; DUFOUR, 1999; LORIMIER, 2000;
MUKAMAL; CONIGRAVE & MITTLEMAN, 2003).

A HDL um fator de proteo do organismo contra a formao de


placas de ateroma, e conseqentemente reduz a probabilidade de
doenas cardiovasculares. E tambm porque ele age sobre as
lipoprotenas plasmticas, que so molculas transportadoras de
colesterol e outros lipdios na corrente sangunea (THERAPONDOS;
DELAHOOKE & HAYES, 1999; RANG, et al., 2001b; SCIVOLETTO &
MALBERGIER, 2003).

possvel que o etanol tenha um efeito protetor em relao


cardiopatia isqumica por inibir a agregao plaquetria. No homem a
magnitude desse efeito depende crucialmente da ingesta de gordura na
dieta, e a extenso de sua importncia clnica ainda no foi esclarecida
(THERAPONDOS; DELAHOOKE & HAYES, 1999; RANG, et al., 2001b).

2.4.3. No Sistema Hematolgico

No uso crnico de etanol pode ocorrer elevao do volume corpuscular


mdio VCM - devido deficincia de cido flico, levando em muitos
casos a anemia megaloblstica, plaquetopenia e leucopenia. A
intoxicao pode predispor para trombocitopenia e a disfuno
plaquetria (THERAPONDOS; DELAHOOKE & HAYES, 1999;
FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001; MASTERS, 2003).

35
2.4.4. No Sistema Endcrino

O uso crnico de lcool pode provocar diminuio da libido, impotncia,


esterilidade e hipoglicemia. Aumenta o dbito de hormnios esteroides
suprarrenais por estimular a hipfise anterior a secretar ACTH. Contudo,
o aumento da hidrocortisona plasmtica observada nos dependentes
deve-se parcialmente a inibio do metabolismo heptico da
hidrocortisona pelo etanol (AHMED, 1995; HOBBS; RALL &
VERDOORN, 1996).

Os dependentes crnicos do sexo masculino costumam evidenciar


sinais de feminizao, associados a uma disfuno da sntese testicular
de esteroides. Contudo, a induo das enzimas microssmicas
hepticas pelo etanol e conseqentes aumento da taxa de inativao da
testosterona tambm contribui para a feminizao (RANG, et al., 2001a;
HOBBS; RALL & VERDOORN, 1996).

2.4.5. No Sistema Geniturinrio

O lcool exerce um efeito diurtico, bastante peculiar no corpo por


aumentar a excreo de fluidos como resultado de um efeito da funo
renal por decrscimo de reabsoro tubular de gua e decrscimo da
secreo de vasopressina, ou seja, do hormnio antidiurtico. Essa
diurese no persistente, desenvolvendo rapidamente tolerncia a esse
efeito (DRUMMER, 2001; FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001).

36
2.4.6. No Sistema Gastrintestinal

O etanol aumenta a secrees de saliva e gstrica. Isso ocorre,


parcialmente devido a um efeito reflexo produzido pelo paladar e pela
sua ao irritante. Tambm pode provocar secreo gstrica por ao
indireta sobre o estmago que inclui possivelmente a liberao de
gastrina (OSBORN, 1994).

O consumo intenso gera uma leso direta da mucosa gstrica que pode
resultar em gastrite; lceras de estmago, duodeno e pancreatite aguda
e crnica. Tambm apresentam diarrias crnicas, decorrentes da m
absoro de alimentos no intestino delgado (ABBOTT, 1996; FLEMING;
MIHIC & HARRIS, 2001; RANG et al., 2001a).

Existem relatos que o consumo de bebidas alcolicas pode estar


associado a cnceres de boca, faringe, laringe e esfago, especialmente
em tabagistas (LORIMIER, 2000; BUCKENER & WARREN, 2001;
DRUMMER, 2001; FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001).

Para o fgado as conseqncias mais comuns do consumo excessivo de


lcool so: esteatose heptica; hepatite alcolica e cirrose, sendo essa
ltima de carter irreversvel. Aproximadamente de 15 a 20% dos
dependentes crnicos desenvolvem cirrose no perodo de 20 a 30 anos
e destes cerca de 20% podem apresentar infeco de hepatite C ,
devido ao fato destes estarem mais expostos a fatores de risco, como
uso de drogas injetveis e necessidade de transfuses sanguneas
(DRUMMER, 2001; FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001; JAMAL &
MORGAN, 2003; MASTERS, 2003).

37
No fgado ocorre um aumento do acmulo de gordura - fgado gorduroso
-, que progride para uma hepatite - inflamao do fgado - e termina por
conduzir a necrose e fibroses hepticas irreversveis, que constitui a
cirrose, onde ocorre uma deposio de fibras ao redor das veias centrais
- esclerose hialina central - (FLEMING; MIHIC & HARRIS, 2001;
MOSLEN, 2001).

Segundo, Rang et al., (2001a), os principais fatores para o acmulo de


gordura no fgado so:

aumento da liberao de cidos graxos pelo tecido adiposo decorrente


do aumento da tenso, gerando uma descarga simptica.

disfuno da oxidao dos cidos graxos em virtude da carga


metablica imposta pelo prprio etanol.

O desvio de fluxo sanguneo do sistema porta pode gerar o


desenvolvimento de varizes esofagianas, que podem sangrar de
maneira sbita e catastrfica.

Outros fatores podem contribuir para a leso heptica, como a


desnutrio, pois um dependente supre suas necessidades calricas
com o prprio etanol. Duzentos gramas de etanol - 1 garrafa de usque -
produzem cerca de 1400 Kcal. Contudo, ao contrrio de uma dieta
normal, no fornecem vitaminas, aminocidos ou cidos graxos (RANG
et al., 2001a).

A insuficincia heptica pode provocar um quadro de encefalopatia


grave e potencialmente letal, alm de outros efeitos sistmicos de
falncia heptica. A incidncia global de hepatopatia crnica parece ser
uma funo do consumo cumulativo de etanol com o passar dos anos
(SCIVOLETTO & MALBERGIER, 2003).

38
2.4.7. No Desenvolvimento Fetal

No incio da dcada de 70, ficou demonstrado que o etanol e seus


metablitos apresentavam mltiplos efeitos bioqumicos e
fisiopatolgicos, com potencial de causar alteraes no desenvolvimento
fetal nos vrios estgios da gravidez (ROSETT, 1979).

Em 1973, o termo Sndrome Alcolica Fetal SAF- foi elaborado para


designar um padro especfico de dimorfismos e retardo do crescimento
em crianas de mes dependentes (JULIEN, 1998; DRUMMER, 2001).

A sndrome caracterizada por combinaes de vrios componentes,


incluindo mtiplos abortos espontneos e alguns aspectos
caractersticos como:

Desenvolvimento anormal da face, com olhos afastados,


fissuras palpebrais encurtadas, lbio leporino e malares
pequenos.

Reduo da circunferncia craniana microencefalia -.

Retardo na taxa de crescimento corpreo.

Retardo mental de gravidade varivel e anormalidades


comportamentais como hiperatividade e dificuldade de integrao
social.

outras anormalidades anatmicas como, por exemplo,


anormalidades cardacas congnitas - defeito do septo ventricular
-, mal formao dos olhos, ouvidos, ps e mos (BRIEN, 2001;
DRUMMER, 2001; SCIVOLETTO & MALBERGIER, 2003).

39
Estima-se que a incidncia global de SAF, seja de 1 a 2 por 1000
nascimentos vivos. Essa incidncia correlaciona-se fortemente com
consumo materno de lcool durante a gravidez e de cerca de 19% em
mes que bebem em mdia - um mnimo de 4 unidades dirias de
bebidas durante a gestao (RANG et al., 2001a).

40
2.5. Interao do Etanol com Frmacos

Numerosos medicamentos interagem com o etanol podendo ocasionar


alteraes no metabolismo ou nos efeitos do lcool e/ou dos frmacos,
resultando em srias conseqncias para a sade do indivduo. O uso
concomitante de lcool e medicamentos pode causar nusea, vmitos,
cefalias, perda da coordenao motora, problemas cardacos, dificuldades
respiratrias e outros sintomas (DEITRICH & PETERSEN, 1979; UNITED
STATES, 2002).

As interaes lcool-medicamentos podem ser classificadas em 2


categorias gerais: farmacocintica e farmacodinmica. A interao
farmacocintica ocorre quando o lcool interfere diretamente com o
metabolismo normal da medicao de 2 formas: diminuindo a excreo do
medicamento por competio com a enzima P 450 ou acelerando o
metabolismo do medicamento, porque o lcool aumenta a atividade do
citocromo P450 (ADAMS, 1995; WEATHERMON & CRABB, 1999).

A interao farmacodinmica no envolve a ativao ou inibio da enzima,


mas se refere aos efeitos aditivos do lcool e de certos medicamentos.
Nesse tipo de interao, que ocorre mais comumente no Sistema Nervoso
Central, o lcool altera os efeitos do medicamento sem alterar a
concentrao desse no sangue. Por exemplo, os efeitos depressores
causados pelo consumo moderado de lcool, como comprometimento da
oordenao motora e da capacidade de julgamento, so potencializados
pela ingesto de sedativos-hipnticos, anticonvulsivantes, antidepressivos,
ansiolticos ou narcticos. As vrias interaes entre o lcool eos
medicamentos so mostrados na TABELA 6 (ADAMS, 1995;
WEATHERMON & CRABB, 1999; SCIVOLETTO& MALBERGIER, 2003).

41
TABELA 11. Interaes entre o lcool e vrias classes de medicamento.

Classe de Princpio
medicamentos Ativo Especialidade Tipo de interao

Antihistamnicos Difenidramina Benadryl * O lcool aumenta os efeitos


desses medicamentos no
Clorfeniramina Benegrip SNC, como sonolncia,
sedao e diminuio da
Hidroxizina Hidroxine coordenao motora.
Prometazina Fenergan * As interaes so mais
pronunciadas em idosos.

Antidiabtico Clorpropamida Diabinese * O consumo de lcool por


diabticos que tomam esses
Glipizida Glipgen medicamentos pode aumentar
o risco de hipoglicemia.
Metformina Glifage * A metformina pode causar
aumento dos nveis de cido
ltico no sangue depois do
consumo de lcool.

Anticonvulsivante Fenobarbital Gardenal * Consumo crnico de lcool


aumenta a biotransformao
(Barbitricos) do barbitrico pelo citrocromo
P450.
* O lcool aumenta os efeitos
sedativo e hipntico no SNC.

Hipnticos- Clordiazepxido Menotensil * O lcool aumenta os efeitos


desses medicamentos no
sedativos Clonazepam Rivotril SNC, como, sonolncia,
sedao e diminuio da
(Benzodiazepnicos) Diazepam Valium coordenao motora.
Lorazepam Lorax
Midazolam Dormonid

42
Continuao da Tabela 11.

Histamnicos H2 Cimetidina Tagamet * Esses medicamentos inibem a


ADH gstrica, dessa forma
Ranitidina Antak reduzem o metabolismo de
primeira passagem para o
Logat lcool. Como resultado h
maior nvel de lcool no sangue
para aquela determinada dose.

Relaxantes Carisoprodol Tandrilax * O consumo de lcool aumenta


o prejuzo das abilidades fsicas
musculares Ciclobenzaprina Miosan como dirigir e aumenta a
sedao.
* O Carisoprodol produz um
efeito semelhante aos opiides
quando tomado com lcool.
Utilizado algumas vezes como
uma droga de rua street drug

iinflamatrios no- Ibuprofeno Reuplex * O consumo de lcool


associado a esses
esterides Naproxeno Flanax medicamentos aumenta o risco
de sangramento gastrintestinal.
Diclofenaco Voltaren

Opiides Codena Tylex * O lcool aumenta os efeitos


Morfina Dimorf desses medicamentos no
SNC, como sonolncia,
Meperidina Dolantina sedao e diminuio da
Fentanila Durogesic coordenao motora.

Sedativos e Meprobamato Equanil * O lcool inibe o


hipnticos Hidrato de Noctec metabolismo desses
medicamentos e produz
Cloral um efeito depressor no
SNC que inclui sonolncia,
desorientao e confuso
.
Antidepressivos Amitriptilina Anafranil * O consumo de lcool
tricclicos Imipramina Tofranil aumenta o risco de
sedao e queda abrupta
Nortriptilina Pamelor de presso quando a
pessoa est de p.

Medicamentos Camomila * O lcool pode acentuar a


Vrias sonolncia, associado com
fitoterpicos Echinacea essas preparaes
preparaes
purprea fitoterpicas.

Fonte: Adaptada de WEATHERMON & CRABB, 1999 e DEF 2002/03.

43
Existem no mercado alguns medicamentos e solues orais antisspticas
que contm etanol em suas composies, estes no deveriam ser
administrados ou utilizados por pessoas com distrbios hepticos ou at
mesmo nas populaes asiticas - japoneses e chineses - com variaes
no gene da enzima ALDH, apresentando reaes desagradveis na
presena de etanol (LIEBER & ABITTAN, 1999; RAMCHANDANI; BOSRON
& LI, 2001).

Com a finalidade de identificar medicamentos que contm lcool em sua


formulao, sendo vendidos livremente e sem prescrio mdica foi
realizada uma pesquisa em farmcias de So Paulo, apresentando os
seguintes resultados:
- A maioria das bulas e embalagens no fornecia informaes precisas
sobre a presena de lcool em sua formulao.

- Biotnico Fontoura, gua Inglesa e Tnico Blumen especialidades


farmacuticas indicadas como estimulantes do apetite relatam apenas a
utilizao de tintura, que um veculo com teor alcolico na faixa de 50 a
70%, sendo posteriormente diludo na preparao das especialidades. O
Biotnico Fontoura apresentou durante dcadas em sua formulao a
presena de lcool em concentraes apreciveis.

- A gua de Melissa utilizada como calmante e antiflatlulento apresenta em


sua embalagem a seguinte informao:
A cada 5 mL: lcool.........................3,750 mL
excipiente..................5 mL
O produto apresenta um volume total de 50 mL e a posologia para diluir 1
colher de ch - 5 mL - em gua. A quantidade de gua para a diluio no
mencionada.

44
- Tambm foram encontradas as especialidades indicadas como calmantes
Maracugina, Pasalix e Calman - que apresentam em sua composio
extratos fluidos ou alcoolato, com teores alcolicos semelhantes s tinturas.

- Nos medicamentos homeopticos, o lcool etlico est presente na tintura


me, na qual utilizada para as suas manipulaes. Os Florais de Bach
so exemplos desse tipo de medicamento, onde h associaes de
essncias de flores e conhaque.

- Os fitoterpicos tambm utilizam solues alcolicas para extrair o


princpio ativo das ervas medicinais empregadas em sua formulao,
recebendo a denominao de alcoolato.

Zago, et al., (2003) relata um caso clnico de reincidncia de abuso de


lcool por uso de especialidade farmacutica. O paciente do sexo
masculino, com antecedentes de alcoolismo, abstinente h 4 anos e 7
meses e que comeou a se automedicar com um produto fitoterpico
alcoolato a base de camomila para aliviar sintomas digestivos. Com o
decorrer do tempo foi aumentando a freqncia e quantidade de consumo,
chegando a ingerir 600 mL por dia do produto. Neste perodo apresentou
comportamentos agressivos semelhantes poca em que bebia.

Estes fatos alertam para a necessidade de um cuidado especial ao se


indicar o uso de determinados produtos para indivduos com antecedentes
de alcoolismo.

Weathermon & Crabb, (1999) relacionaram medicamentos e antisspticos


bucais, encontrados no mercado dos Estados Unidos, que contm etanol
em suas composies. No mercado brasileiro foram encontrados alguns
desses produtos.

45
TABELA 12. Medicamentos e antisspticos bucais e suas respectivas
concentraes de etanol - em porcentagem -.
CONCENTRAO
PRODUTO DE ETANOL (%)

Soluo Oral de Cimetidina (GlaxoSmithKline) 2,8


Soluo Oral de Ciclosporina (Abbott) * 9,5-12,5
Elixir de Digoxina (GlaxoSmithKline) 10,0
Elixir de Fenobarbital (Neovita) 14,0
Xarope de Ranitidina (Leofarma) 7,5
Cepacol (Aventis) * 14,0
Listerine (Pfizer) * 26,9
Listerine Cool Mint ou Freshburst (Pfizer) * 21,6
Plax Advanced (Colgate) * 8,7
Oral B Anti placas * 8,0
Fonte: WEATHERMON & CRABB, 1999;
* Produtos encontrados no mercado brasileiro.

Outro tipo de interao observada a combinao de lcool e cocana,


prtica muito comum entre os usurios dessa ltima droga (CHASIN, 1998).
Segundo Farre et al., (1993) a administrao conjunta aumenta a
concentrao plasmtica da cocana, possivelmente porque a ingesto
aguda de lcool inibiria o metabolismo da mesma.

No fgado, na presena de etanol, uma parte da cocana presente sofre uma


reao de transesterificao mediada por uma carboxilesterase heptica.
Isso resulta em alguns metablitos: etilbenzoilecgonina, cocana etilster,
etilcocana e no mais conhecido cocaetileno (DEAN, et al., 1992;
SCHECHTER & MEEHAN, 1995).

46
O cocaetileno tem propriedades farmacolgicas semelhantes s da cocana,
mas com meia vida plasmtica de 3 a 5 vezes maior. Tem maior
seletividade com transportador dopaminrgico e menor afinidade com a
serotonina, o que justifica o seu intenso efeito euforizante. Tambm est
associado com isquemias, infartos, hipertenso e arritmias, apresentando
graves conseqncias para o indivduo (HEARN et al., 1991).

47
3. ASPECTOS ANALTICOS

A disposio dos frmacos no organismo dependente de suas


propriedades fsico-qumicas, da via de administrao, dos processos
metablicos e da durao e freqncia da exposio. A concentrao do
frmaco nos tecidos influenciada pelo grau de ligao s protenas
plasmticas, pois somente a frao livre pode ser transferida do sangue
para os tecidos (HUESTIS & CONE, 1998).

O etanol uma substncia psicoativa rapidamente absorvida no estmago


e intestino delgado, tem baixo PM - < 100 Dalton - muito solvel na gua e
no se liga s protenas plasmticas, sendo amplamente distribudo por
todos os tecidos do corpo. Essa distribuio no organismo proporcional
quantidade de gua existente nos tecidos. Esses fatores o tornam um
composto favorvel para anlise em fluidos corporais (MACCHIA et al.,
1995; BATES & MARTIN, 1997; GUBALA & ZUBA, 2002).

O sangue e o ar expirado so conhecidos como matrizes convencionais e a


saliva, humor vtreo, o cabelo e o suor como alternativas para determinao
de etanol.

Anlise utilizada em espcimes biolgicos alternativos requer uma


tecnologia tradicional, mas que seja adaptada para as necessidades e
limitaes impostas por essas matrizes. Espcimes alternativos
normalmente so obtidos em pequenos volumes, alm das substncias
serem encontradas em baixas concentraes, dificultando a realizao das
anlises (CONE, 2001).

A escolha da matriz biolgica para determinao de etanol pode ser feita


baseada na aplicabilidade ou no objetivo da determinao (MACCHIA et al.,
1995).

48
SANGUE

A determinao da concentrao de etanol no sangue total considerada o


parmetro de referncia no campo forense e na legislao de trnsito
(MACCHIA et al., 1995). A concentrao que define o estado de embriaguez do
motorista tem sido estabelecida em legislaes de trnsito especficas de cada
pas. Os limites so derivados de estudos controlados e de dados
epidemiolgicos a respeito dos sinais e sintomas da intoxicao por lcool
etlico versus a concentrao de etanol no sangue (MOSKOWITZ; BURNS &
FERGURSON 1999; HADFIELD; MERCER & PARR, 2001).

O Cdigo de Trnsito Brasileiro de 23/09/97, no seu artigo 276, estabelece que:


a concentrao de seis decigramas de lcool por litro de sangue comprova que
o condutor se acha impedido de dirigir veculo automotor. Na mesma
legislao, no artigo 277, est determinado que todo condutor de veculo
automotor, envolvido em acidente de trnsito ou que tenha excedido os limites
previstos no artigo anterior, ser submetido a testes de alcoolemia, exames
clnicos, percia ou outro exame que, por meios tcnicos ou cientficos, em
aparelhos homologados pelo Contran, permitam certificar seu estado (BRASIL,
1997).

A Cmara dos Deputados aprovou um projeto de lei que se encontra em


tramitao no Congresso Nacional para reduzir a concentrao mxima de
lcool no sangue de 0,6g/L para 0,3g/L. Essa medida de reduzir o limite
mximo permitido para os condutores de veculos automotores tem como
finalidade diminuir os acidentes e os ndices de mortalidade ocorridos no
trnsito.

49
Na Europa limite mximo permitido de alcoolemia varia entre os pases. A
Frana, Itlia e Portugal tm seus limites estabelecidos em 50 mg/dL. Na
Espanha o limite o mesmo, mas difere para aqueles que acabaram de retirar
a carta de habilitao, sendo de 30 mg/dL. Na Polnia o limite de 20 mg/dL e
em Luxemburgo de 80 mg/dL. Alguns pases, principalmente do leste
europeu so bastantes rigorosos, pois no admitem nenhuma concentrao
alcolica no sangue de motoristas (WHO, 2003b).

O sangue embora, seja um excelente material para verificar o estado de


intoxicao do indivduo, apresenta algumas restries para a sua utilizao: a
coleta invasiva, h riscos de contaminao para o responsvel pela coleta e
para o doador da amostra; exige local e pessoal treinado, tornando invivel sua
aplicao em testes de rotina em campo aberto. uma matriz complexa que
necessita de agentes conservantes no momento da coleta e de
desproteinizao para a realizao da anlise (SCHRAMM; SMITH & CRAIG,
1992; KIDWELL; HOLLAND & ATHANASELIS, 1998).

O primeiro mtodo quantitativo de anlise de etanol em sangue aceita pela


cincia forense e pela Toxicologia foi publicado em 1922, conhecido como o
micromtodo de Widmarks, que consistia em uma oxidao qumica com
mistura de dicromato de potssio e cido sulfrico em excesso. Aps 1950,
mtodos qumicos foram modificados com o uso de determinao fotomtrica
(ABBOTT Cientifica, 1996; JONES & POUNDER, 1998).

A necessidade de desenvolvimento de sistemas que permitissem a anlise de


um grande nmero de amostras para verificar a exposio s drogas aumentou
consideravelmente na dcada de 70, devido guerra entre os Estados Unidos
e o Vietnam (SUNSHINE, 1998).

50
Uma das tcnicas pioneiras denominadas Free Radical Assay Technique
FRAT -, foi amplamente empregada nas foras armadas americanas em 1971.
Em 1972, um novo mtodo imunolgico foi introduzido no mercado o
enzimaimunoensaio - homogeneous enzyme-multiplied immunoassay EMIT -.
Em seguida foi desenvolvido o imunoensaio por fluorescncia polarizada -
Florescence Polarization Immunoassay TDX - (SUNSHINE, 1998).

Estes mtodos possibilitaram um grande avano das anlises toxicolgicas na


rea da Toxicologia Social, incluindo a determinao do lcool no sangue e na
urina.

Tambm foram reportados outros mtodos para medir a concentrao de


etanol em sangue, aps separao por aquecimento - headspace - com sensor
eletroqumico ou dispositivo semicondutor de xido de metal. Esses mtodos
no so suficientemente seletivos quando substncias interferentes podem
estar presentes (JONES, 1978; JONES & POUNDER, 1998).

Existem marcadores de abuso crnico de lcool que podem ser facilmente


detectados no sangue por imunoensaio: gama glutamil transpeptidade GGT -,
transaminase glutmica pirvica - TGP -, transaminase glutmica oxalactica
TGO - e transferrina deficiente em carbohidrato. Contudo, a maioria desses so
inespecficos e poucos sensveis. A porcentagem de isoformas da transferrina
deficiente em carbohidrato um dos mais especficos, pois permite a deteco
do consumo excessivo de lcool - de pelo menos 60g de etanol/por dia - por
um perodo de vrias semanas - pelo menos 14 dias -. A abstinncia ao lcool
leva a normalizao da porcentagem dessa enzima (GOLDBERGER et al.,
1997; MUSSHOFF & DALDRUP, 1998; BREWER, 1999; DEGUTI &
GONALVES, 2000).

51
AR EXPIRADO

A exposio ao etanol tambm pode ser verificada atravs de medies no ar


expirado com o uso de equipamentos denominados etilmetros bafmetros -
(JONES, 1992a; JONES, 1992b; JONES, 1993; JONES, 1995; BENDTSEN, et
al., 1999; MOSKOWITZ; BURNS & FERGUSON, 1999; SILVA, 1999;
CARVALHO & LEYTON, 2000).

A substituio da anlise de etanol em sangue pelo ar expirado foi proposta por


Harger em 1938, quando desenvolveu um equipamento denominado
Drunkometer. Alguns anos aps foram apresentados o Alcometer e o
Intoximeter, que apresentavam resultados insatisfatrios (BORKENSTEIN,
1998).

Em 1954, Borkenstein desenvolveu o Breathalyzer considerado um instrumento


adequado para a finalidade proposta. O fundamento da tcnica era a
passagem de 52,5 mL de ar expirado numa ampola de vidro que continha uma
soluo de dicromato de potssio e cido sulfrico que sofria uma mudana de
cor pela oxidao do etanol que passava por essa.

Devido a sua aplicabilidade em campo os etilmetros rapidamente passaram a


ser amplamente utilizado na rea de segurana pblica e no trnsito para
verificar o grau de consumo de bebidas alcolicas por condutores de veculos.
Este equipamento tambm utilizado por empresas preocupadas com o
consumo de lcool no ambiente de trabalho evitando que seus funcionrios
exeram suas funes embriagados (SILVA, 1999; CARVALHO & LEYTON,
2000).

Os resultados das determinaes pelo etilmetros podem ser expressos


diretamente pelas concentraes de lcool no ar ou, indiretamente, pelas
concentraes no sangue, nesse caso, um fator de converso -2.100:1-
determinado por meio de vrias pesquisas experimentais deve ser aplicado.

52
Esse fator significa que 2.100 partes de ar alveolar contm a mesma
quantidade de lcool que uma parte de sangue (SCHRAMM; SMITH & CRAIG,
1992; BRASIL, 1997; CHURCH & WITTING, 1997; CARVALHO & LEYTON,
2000).

H vrias marcas no mercado como o Intoxilyzer 5000S, o Alcotest 7410 plus da


Drger, etiloteste descartvel da Contralco, entre outras (JONES &
ANDERSON, 2003).

O Intoxilyzer 5000S um etilmetro infravermelho quantitativo originrio dos


Estados Unidos, com seu uso aprovado pela justia Sueca para verificar a
alcoolemia em motoristas de trnsito desde, 1989. Embora, esse equipamento
tenha finalidade comprobatria, apresenta alguns problemas que devem ser
analisados. Dependendo do comprimento de onda utilizado, podem ser
sensveis a outras substncias que no o lcool, por exemplo, instrumentos de
onda nica, podem detectar acetona, se presente. A acetona pode advir da
diabette mellitus, de um jejum prolongado e de dietas pobres em carbohidratos
(CARVALHO & LEYTON, 2000; JONES & ANDERSON, 2003).

Tambm se verificou em um estudo realizado por Jones & Anderson, (2003)


que o Intoxilyzer 5000S quase sempre apresentou leituras mais baixas quando
comparado com as concentraes de etanol no sangue venoso, dando
vantagens para o indivduo que estava sendo analisado.

A anlise de ar expirado embora aceitvel para a rotina de triagem apresenta


algumas restries para o seu uso devido possvel interferncia de outros
solventes orgnicos, da erupo de gases do estmago eructao -, da
grande variao na taxa dos nveis de lcool no sangue e ar expirado e por ser
de difcil obteno em casos de pacientes febris e hipotrmicos, em vtimas
inconscientes ou em pacientes com doenas broncopulmonares
(CHRISTOPHER & ZECCARDI, 1992; GUILBAULT & PALLESCHI, 1995).

53
URINA

A urina utilizada em Programas para verificar exposio a drogas pelo


Correctional Service of Canada que uma agncia federal responsvel pelo
acompanhamento de indivduos condenados pela justia. A determinao de
etanol nesse Programa realizada somente quando h requisio (FRASER,
et al., 2001).

Tambm um espcime biolgico proposto como fluido alternativo na


determinao de etanol em funcionrios nos Programas de Controle e
Preveno do Uso de Drogas no ambiente de trabalho e em usurios em
clnicas de tratamento e reabilitao, sendo bastante utilizado em alguns
pases como Inglaterra e Estados Unidos (JONES, 1992a)

Esse tipo de amostra apresenta algumas vantagens e limitaes para a


deteco de etanol. As vantagens incluem maior concentrao da droga, maior
perodo de deteco e sua coleta menos invasiva que a do sangue, embora
deva ser realizada sob observao direta do responsvel pela coleta a fim de
evitar adulteraes e substituies da amostra. Sua coleta em campo
dificultada pela necessidade de um local adequado que inclui existncia de
gua para higiene e vaso sanitrio (WINECKER & GOLDBERGER, 1998).

Tambm apresenta como desvantagem um possvel erro para estimar a


alcoolemia. Isso explicado devido a presena de urina remanescente na
bexiga que pode super ou subestimar a concentrao de etanol. Para tal dever
ser exigido duas coletas de urina, uma primeira para o esvaziamento total da
bexiga e uma segunda coleta, aps 20 a 60 minutos da primeira (CORRA &
PEDROSO, 2000).

Para a utilizao desse espcime um fator de correo de aproximadamente


1,35 deve ser aplicado para avaliar a alcoolemia nos indivduos (JONES,
1992a; CORRA, 1997).

54
SUOR

O suor secretado naturalmente, na taxa de 20 mL/hora, quantidade que pode


ser aumentada, por exemplo, em prticas de exerccios fsicos. composto por
soluo aquosa hipotnica - 99% -, lactato, uria, ons de amnio e enzimas. A
sudorese verificada no tronco - aproximadamente 50% -, nas pernas - 20% -
e na cabea e extremidades superiores - 30% - (HUESTIS & CONE, 1998;
UNDCP, 2001).

uma amostra utilizada para verificar a exposio recente ao etanol, com


aplicabilidade no controle de indivduos em clnicas e hospitais; em prisioneiros
em liberdade condicional; em motoristas ou em empregados no ambiente de
trabalho (KIDWELL; HOLLAND & ATHANASELIS, 1998).

Apresenta boa correlao com os nveis sanguneos e sua coleta realizada


atravs de adesivos aderidos na pele, no sendo invasiva. Como
desvantagens: concentrao e perodo de deteco do etanol menor que na
urina e a anlise quantitativa prejudicada devido quantidade de suor
coletada ser desconhecida (INOUE; SETA & GOLDBERGER, 1995).

CABELO

O cabelo outro tipo de espcime utilizado para identificar uso crnico de


drogas de abuso. Desde 1979 tem sido utilizado para verificar exposio a
drogas por semanas a meses, dependendo do seu comprimento (UNDCP,
2001).

Em alguns pases como Alemanha, Irlanda e Estados Unidos tm


regulamentos que permitem a utilizao do cabelo como amostra biolgica
para determinao de drogas. Essa matriz pode ser utilizada no ambiente de
trabalho, investigaes criminais, custdia de crianas e em casos de divrcio
(CONE, 2001).

55
O etanol e seus metablitos desaparecem rapidamente do corpo e outros
tecidos, sendo difcil a sua monitorao, requerendo tcnicas indiretas de
deteco. Contudo existem marcadores provenientes de seu metabolismo no
oxidativo, que podem ser utilizados para verificar o seu consumo crnico.
Como marcadores desse tipo de consumo tm-se os steres de cidos graxos
e o etil glicurondeo que so detectados no sangue somente aps 24 horas da
ltima exposio ao lcool e depois se depositam no cabelo. Devido a essa
caracterstica, essa matriz pode ser utilizada para verificar o consumo de etanol
por perodos mais extensos, como no caso de dependentes (BREWER, 1999;
WURST et al., 1999; PRAGST et al., 2001).

O cabelo apresenta algumas dificuldades para sua utilizao: desconhecimento


dos mecanismos de incorporao das drogas e necessidade de uma demorada
preparao prvia, como os processos de descontaminao e digesto,
anterior fase de extrao (TOLEDO, 1999).

HUMOR VTREO

O etanol tambm pode ser detectado postmortem, atravs da anlise do humor


vtreo. Essa amostra muito til para detectar uma intoxicao que ocorreu
antes do bito, permitindo distinguir uma possvel produo de lcool no
postmortem. Tambm pode ser utilizada como uma matriz alternativa em
casos, onde o sangue for insuficiente para anlise ou se estiver contaminado
(ENGELHART & JENKINS, 2001).

O humor vtreo um fluido srico que no contm glicose ou microorganismos


que possam levar a proliferao microbiana. lmpido e fcil de trabalhar
analiticamente, sendo anatomicamente isolado, protegido de putrefao
bacteriana e de traumas (POUNDER & JONES, 1998).

56
SALIVA

A saliva um espcime biolgico alternativo atualmente recomendado para


anlise de drogas de abuso, agentes teraputicos, qumicos encontrados no
ambiente e substncias endgenas (DROBITCH & SVENSSON, 1992; JONES,
1995).

No caso do etanol a saliva tem sido usada com uma variedade de propsitos
incluindo testes em motoristas, servindo como suporte para as evidncias
clnicas e para diagnsticos mdico-legais da intoxicao alcolica (JONES,
1979a; CONE, 2001).

Essa matriz apresenta vantagens sobre as matrizes convencionais, pois a sua


coleta no invasiva, pode ser obtida sem o potencial de risco de infeco
para os envolvidos - responsvel pela coleta e o doador da amostra -, no
causa constrangimento, assim pode ser feita sob superviso direta, impedindo
recursos de adulteraes ou at mesmo de substituies da amostra. Essas
caractersticas so de extrema importncia para a aceitao em exames de
rotina (SCHRAMM; SMITH & CRAIG, 1992; KIDWELL; HOLLAND &
ATHANASELIS, 1998; SPIEHLER; BALDWIN & HAND, 2002).

A saliva uma mistura complexa, de aspecto incolor excretado dentro da


cavidade oral por trs principais glndulas: a partida - 25% -, existente na
parte superior da boca que secreta saliva derivada do sangue plasmtico -
fluido de soro -; a sublingual - 4% -, existente nas laterais da boca que secreta
ambos fluidos sricos e mucina e a submandibular - 71% -, existente na base
da lngua, tambm secreta fluido srico e mucina (GUILBAULT & PALLESCHI,
1995; INOUE, SETA & GOLDBERGER, 1995; KIDWELL et al., 1998).

57
A saliva produzida cerca de 500-1500 mL/dia, sendo seu fluxo controlado
pelo Sistema Nervoso Parassimptico. Efeitos colaterais de medicamentos
como os anticolinrgicos, anticonvulsivantes, anti-parkinsonianos, drogas
ilcitas como a maconha, doenas como a diabetes Mellitus, o alcoolismo e a
doena sistmica de supresso de saliva em idosos provoca a xerostomia
boca seca , dificultando a coleta de saliva (DUBOWSKY, 2002).

Sua composio de aproximadamente 99% de gua, 0,3% de protenas -


principalmente enzimas - e 0,3% de mucinas com um balano de sais.
Tambm contm bactrias, leuccitos, hormnios e clulas epiteliais
modificadas. (GUILBAULT & PALLESCHI, 1995; INOUE; SETA &
GOLDBERGER, 1995; KIDWELL; HOLLAND & ATHANASELIS, 1998).

O transporte de substncias para a saliva feito atravs de membranas


biolgicas por transporte ativo secreo -, difuso atravs dos poros de
membrana ou difuso passiva atravs da membrana devido ao gradiente de
concentrao (CONE, 1993; KIDWELL; HOLLAND & ATHANASELIS, 1998).

Uma fina camada de clulas epiteliais separa os ductos salivares do sistema


circulatrio. A membrana lipdica dessas clulas que determinam a
transferncia de molculas do plasma para a saliva. A passagem atravs
dessas membranas limitada para as molculas de PM acima de 500 e sua
entrada influenciada pela ligao s protenas plasmticas. O etanol tem
baixo PM - < 100 dalton -, o que favorece sua passagem por ultrafiltrao,
alm da difuso passiva que aparentemente o mecanismo dominante
(HUESTIS & CONE, 1998; UNDCP 2001).

A concentrao das drogas ou metablitos lipoflicos na saliva so


influenciados pelo pka da droga ou pelo pH do plasma e saliva. Para verificar a
relao das concentraes saliva/plasma aplicacada a equao de
Henderson-Hasselbalch: pH= pka + log [A-]/ [H], onde o [A-] a concentrao
da droga na forma aninica e [H] a concentrao na forma no ionizada
para as drogas cidas (KIDWELL; HOLLAND & ATHANASELIS, 1998).

58
Devido as caractersticas fsico qumicas do etanol, a sua concentrao em
saliva no influenciada por esses fatores (JONES, 1993).

Estudos recentes demonstraram que muitos frmacos so transferidos


rapidamente do plasma para a saliva, sendo a concentrao da droga na saliva
proporcional a do plasma. Como a velocidade do fluxo sanguneo nos tecidos
das glndulas muito alta, a quantidade de etanol que alcana a saliva deve
refletir a concentrao encontrada no sangue arterial (GUBALA & ZUBA, 2002).

Gubala e Zuba, (2003) realizaram um trabalho farmacocintico, comparando a


concentrao de etanol em sangue e saliva, aps a ingesto de lcool e
verificaram que a concentrao de etanol maior na saliva no perodo de
absoro e distribuio e significativamente menor na fase de eliminao.

O Coeficiente de correlao entre concentrao de etanol na saliva/


concentrao de etanol no sangue varia de 1,04 a 1,14 (JONES, 1979a, 1993;
MCCOLL et al., 1979; HAECKEL & PEIFFER, 1992; KIESOW; SIMONS &
LONG, 1993 BATES & MARTIN, 1997).

Somente a frao livre da droga no plasma transportada para a saliva, e


essa frao livre responsvel pelo efeito farmacolgico. Dessa forma o
material biolgico mais indicado para avaliar o estado de intoxicao, entre 12
e 24 horas, embora o perodo de deteco e a concentrao da droga na saliva
serem freqentemente menores em relao urina (SCHRAMM; SMITH &
CRAIG, 1992; GUILBAULT & PALLESCHI, 1995; KIDWELL; HOLLAND &
ATHANASELIS, 1998).

Os primeiros trabalhos de pesquisa de lcool em saliva so de Nicloux


(S,1969). Embora, suas vantagens tenham sido reconhecidas j na dcada
de 30, sua utilizao no despertou interesse, pois os mtodos inicialmente
desenvolvidos - de oxidao qumica - necessitavam grande volume de
amostra para sua aplicao. A partir da dcada de 70 foram desenvolvidos
mtodos enzimticos que requeriam apenas 10 L de amostra (JONES, 1995).

59
A coleta de saliva pode ser efetuada atravs dos seguintes mtodos:

Drenagem a amostra drenada do lbio inferior para um tubo de


ensaio pr-pesado;

Lanamento a saliva acumulada na boca e depois lanada


em um tubo de ensaio;

Suco a amostra continuamente aspirada da boca atravs de um


sistema apropriado;

Absoro a saliva absorvida atravs de um swab ou material


absorvente similar durante um perodo adequado
(DUBOWSKI, 2002).

Antes da coleta necessrio verificar se a cavidade oral encontra-se livre de


resduos de alimentos ou outros materiais, que possam interferir na anlise ou
apresentar um resultado falso-positivo (UNDCP, 2001). De acordo com Jones,
(1993) os indivduos no devem fumar, beber ou se alimentar nos minutos que
precedem a coleta - de 10 a 30 min -.

No mercado esto disponveis coletores que estimulam a formao de saliva e


facilitam a coleta: Salivette, Orasure , Saliva Sampler e Saliva Lollipop
(UNDCP, 2001).

A figura 2 mostra uma foto ilustrada do coletor de saliva - Salivette - que


apresenta como caracterstica um chumao de algodo impregnado de cido
ctrico para estimular a salivao.

60
FIGURA 2. Foto ilustrada do coletor de saliva, com seus compartimentos
dispostos de maneira separada para a sua melhor visualizao.

Em estudo realizado por Haeckel e Buckltsch as concentraes de etanol


encontradas em amostras de saliva obtidas com e sem estmulo de cido
ctrico foram semelhantes (HUESTIS & CONE, 1998).

A saliva pode ser armazenada a 4C por 7 dias ou a -20C por meses, sem
perda da quantidade de etanol. Aps a coleta recomendada a centrifugao
das amostras para obteno de um homogeneizado (MACCHIA et al., 1995).

A determinao de etanol na saliva geralmente tem sido efetuada atravs de


mtodos de triagem, apesar da constatao que o valor da concentrao
dessa substncia nesse espcime ser semelhante aos encontrados no
sangue (SCHRAMM; SMITH & CRAIG, 1992; BATES & MARTIN, 1997).

No mercado esto disponveis vrios testes rpidos de fcil aplicao - Q.E.D.


A 150, Alcoscan, Alo-Screen 02 e On-Site Alcohol - para identificao de
etanol em saliva (DUBOWSKI, 2002).

61
O Q.E.D. A 150 - Orasure Technologies, Inc - um teste rpido para anlise
quantitativa de etanol em saliva, segundo seu fabricante e apresenta-se como
o mais recomendado em trabalhos da literatura. Tem como princpio de
operao a oxidao enzimtica com o lcool desidrogenase, ocorrendo
vrias reaes, tendo como ponto final o aparecimento da cor prpura -
figuras 3; 4 e 5 - (CHRISTOPHER & ZECCARDI, 1992; JONES, 1995; BATES
& MARTIN, 1997; BENDTSEN et al., 1999; BIWASAKA et al., 2001).

FIGURA 3. Foto ilustrada do teste rpido Q.E.D. A 150

FIGURA 4. Fotos ilustradas do procedimento de utilizao do teste rpido


.Q.E.D. A 150, com aparecimento de cor prpura para verificar a concentrao
de etanol.

Na Figura 5 so apresentadas as reaes qumicas desenvolvidas, aps a


utilizao do Q.E.D. A 150.

62
FIGURA 5. Reaes qumicas que ocorrem no Q.E.D A 150, na presena de
etanol.

ETANOL + NAD lcool desidrogenase ACETALDEDO + NADH

pH alcalino
ACETALDEDO + TRAPPING AGENT COMPLEXO

diaforese
NADH + AGENTE OXIDANTE NAD + REDUZIDO

NADH + TS* diaforese NAD + [COMPLEXO COLORIDO]

Ts* = Sal de Tetrazolina


Fonte: Christopher & Zeccardi, 1992

O Q.E.D. A 150 consiste de um dispositivo, onde h uma escala quantitativa de


medio de etanol - em mg ou porcentagem - e de um coletor de algodo
swab -, hermeticamente embalados - FIGURA 3 -. O coletor deve ser inserido
na cavidade oral em movimentos circulares por cerca de um minuto, at que
fique saturado com a saliva - FIGURA 4 -. Aps esse procedimento, o mesmo
inserido no local indicado no dispositivo do teste, sendo necessrio que a saliva
atinja o controle de qualidade do teste, denominado de QA Spot. Se saliva
contiver etanol, uma cor prpura aparecer no dispositivo capilar, cerca de 2
minutos, podendo ser lido diretamente na escala quantitativa (BIWASAKA et
al., 2001).

O limite de concentrao alcolica para uso do Q.E.D. A 150 de


aproximadamente 10-15 mg/dL (JONES, 1995). Este teste pode ser utilizado
para determinao de etanol por outras matrizes como: soro, urina, fluido
cerebroespinhal e humor vtreo.

63
As variaes individuais encontradas na composio da saliva - viscosidade e
quantidade de material particulado - podem influenciar o preenchimento do
tubo capilar do Q.E.D. A 150 e conseqentemente no resultado. Segundo
Jones, (1995) o controle existente no teste indicar esta ocorrncia devido ao
no aparecimento da cor. A presena de bolhas no tubo capilar, devido
entrada de ar, tambm pode dificultar interpretao do resultado.

Outro teste comercial utilizado como triagem o Alcoscan, que apresenta


metodologia colorimtrica, sendo til para verificar intoxicao em casos de
urgncia (BUCHWAD & SMITH, 1990).

Na anlise confirmatria de etanol so utilizados mtodos cromatogrficos. Em


1960 mtodos fsico-qumicos foram aplicados para anlise de lcool nos
fluidos corpreos como o espectrmetro de infravermelho, oxidao
eletroqumica, ensaios enzimticos e cromatografia gs-lquido GLC -
(JONES & POUNDER, 1998; RODIONOV; KEPPEN & SUKHACHEVA, 2002).

A separao do etanol da matriz por aquecimento em recipiente fechado,


denominada Headspace, tm sido recomendada como tcnica de escolha para
determinao posterior de etanol e outras substncias volteis por
cromatografia em fase gasosa. De acordo com Macchia et al., (1995) a
determinao eficiente nas diversas amostras biolgicas, obtendo uma boa
linearidade, reprodutibilidade e praticidade.

Alguns trabalhos encontrados na literatura relatam a utilizao deste mtodo


para determinao de etanol em saliva, obtendo bons resultados, pois as
concentraes encontradas mostraram excelente correlao com a alcoolemia
(MACCHIA et al.,1995; GUBALA & ZULA, 2002)

64
4- OBJETIVO E PLANO DE TRABALHO

O objetivo da pesquisa foi investigar a utilizao de amostras de saliva na


determinao de etanol para verificar a exposio a bebidas alcolicas.

Para atingir essa finalidade foram elaboradas as seguintes diretrizes:

Pesquisa bibliogrfica referente s tcnicas de triagem e confirmao


em saliva;

Padronizao e validao das tcnicas selecionadas;

Aplicao dos mtodos em amostras de saliva provenientes de


voluntrios aps ingesto controlada de bebidas alcolicas;

Com base nos resultados da pesquisa verificar a possibilidade de


aplicao de um mtodo para determinao de etanol em saliva que
compreenda a fase de triagem, passvel de aplicao em campo, e
posterior confirmao dos resultados em laboratrio.

65
5. MATERIAL E MTODOS

5.1. Material

5.1.1. Solues -padro

Soluo de referncia certificada de etanol a 10,3% v/v (Sigma)

Solues de referncia certificadas de etanol nas concentraes


de 25, 50 e 100mg (Radian)

n - propanol 99,5% grau HPLC (Aldrich)

Soluo aquosa de etanol a 15g/L obtida a partir da soluo de


referncia certificada a 10,3% v/v

Soluo aquosa de n propanol a 15g/L obtida a partir da


soluo padro

Solues-padro de etanol em saliva nas concentraes de


0,01g/L; 0,03g/L; 0,06g/L; 0,15g/L; 0,3g/L; 0,6g/L; 1,2g/L;
1,5g/L e 3,0g/L preparadas a partir da soluo aquosa de 15g/L

Soluo aquosa de n propanol a 0,6g/L preparada a partir da


soluo estoque de 15g/L

66
5.1.2. Equipamentos e acessrios

Cromatgrafo a gs modelo 6890N (Agilent) com injetor


split/spliteless equipado com detector de ionizao em chama
GC/FID (Hewlett Packard, Wilmington, EUA)

Coluna Capilar de slica fundida Poraplot Q, com as dimenses


de 10 m de comprimento x 0,32 mm de dimetro interno
(Chrompack, Holanda)

Sistema enzimtico de determinao de etanol em saliva Q.E.D. A


150 (OraSure Technologies, Inc)

Dispositivo para coleta de saliva Salivette (Sarsted)

Centrfuga (Tecnal)

Estufas (tica Equipamentos Cientficos)

Destilador deionizador de gua Milli Q (Milliporel)

67
5.1.3. Outros materiais

gua destilada

Gases especiais para cromatografia em fase gasosa: nitrognio,


ar sinttico e hidrognio (Air Liquide)

Microsseringa gas tight 250L (Scientific Glass Engineering)

Pipetas automticas com volumes regulveis (Labsystems)

Pipetas volumtricas

Vidrarias

Frascos de vidro, capacidade para 10mL (Hewlett Packard)

Tampas de borracha, lacre de alumnio e lacrador (Hewlett


Packard)

68
5.1.4. Amostras de saliva

5.1.4.1 Amostras de referncia negativa (Grupo I - A)

Amostras de saliva obtidas atravs do coletor de saliva


impregnado de cido ctrico para estimular a salivao - de
indivduos saudveis que no consumiram bebidas alcolicas
nas 24 horas que precederam as coletas. Aps a centrifugao
dos coletores, as amostras foram reunidas para a formao de
um pool.

5.1.4.2 Amostras de referncia positiva (Grupo I - B)

Amostras obtidas a partir da adio da soluo-padro de


etanol (15g/L) em quantidades necessrias de saliva de
referncia negativa - pool (Grupo I-A) para obteno das
concentraes de: 0,01g/L; 0,03g/L; 0,06g/L; 0,15g/L; 0,3g/L;
0,6g/L; 1,2g/L; 1,5g/L e 3,0g/L, utilizadas na padronizao e
validao do mtodo.

5.1.4.3 Amostras de voluntrios

Grupo II - A

Amostras obtidas de voluntrios (n=5), colegas de trabalho, que


foram utilizadas nos experimentos prvios realizados nesse
trabalho. Os voluntrios receberam bebida alcolica usque-
administrada de maneira controlada, para que todos
obtivessem a mesma concentrao alcolica (0,68g/Kg). Foi
aplicado o sistema enzimtico Q.E.D e o coletor de saliva
(Salivette) para posteriores anlises do CG/DIC, na qual pode-
se estabelecer alguns parmetros e padronizar os mtodos.

69
Grupo II - B

Amostras de saliva (n=50) foram obtidas de voluntrios (n=10)


de ambos os sexos, faixa etria entre 21 e 40 anos, alunos do
curso de Ps-Graduao da Faculdade de Cincias
Farmacuticas USP selecionados por no apresentarem
problemas de consumo abusivo de bebidas alcolicas. Estes
ingeriram de forma controlada, usque, aps abstinncia de
lcool pelo menos nas 24 horas que precederam a coleta. Foi
realizada uma anamnese para verificar possvel histrico de
alcoolismo na famlia.

Antes do incio do experimento os indivduos responderam um


questionrio e assinaram um termo de consentimento ps
informao.Todos os procedimentos foram aprovados pelo
Comit de tica em Pesquisa da Faculdade de Cincias
Farmacuticas USP (anexo).

70
5.2. MTODOS

5.2.1 Seleo do tempo de coleta para determinao de etanol


atravs do sistema Q.E.D. A 150

Foi realizado um estudo piloto com a finalidade de selecionar os


tempos de coleta mais adequados para verificar a presena de etanol
em saliva, aps ingesto controlada de bebida alcolica. Foram obtidas
amostras de saliva (n=16) de voluntrios do Grupo II - A (n=3) que
ingeriram no prazo mximo de 20 minutos, usque ou cerveja. Aps a
ingesto da bebida alcolica foram coletadas amostras nos tempos de
10, 60 e 90 minutos para aplicao dos testes de Q.E.D. A 150.

5.2.2 Padronizao e validao do mtodo para determinao de


etanol em amostras de saliva pela cromatografia gasosa aps
extrao por headspace

5.2.2.1 Padronizao do mtodo

Foi investigada a possibilidade de aplicao do mtodo proposto


por CORRA (1997) e CORRA (2001) para determinao de
etanol em sangue e urina na matriz saliva.

Foram realizados experimentos com soluo aquosa de etanol


para verificar os melhores parmetros cromatogrficos.

Para atingir esta finalidade foram realizados inicialmente


experimentos com amostras de saliva (Grupo I-A) preparadas nas
concentraes de: 0,15g/L; 0,60g/L e 1,50g/L, em 3 replicatas, a
partir da adio de volumes apropriados da soluo aquosa de
15g/L em amostras de saliva de referncia negativa.

71
Um mL das amostras e 1 mL da soluo aquosa de n-propanol a
0,6g/L foram transferidos para frascos especficos (10 mL) para a
separao do etanol por aquecimento - headspace. Estes foram
devidamente lacrados com septo de borracha e tampa de
alumnio e colocados em estufa a 70C por 30 minutos.

Os vapores formados na parte superior do frasco foram retirados


atravs de uma seringa do tipo gas tight mantida na
temperatura de 40C em outra estufa. Foram realizados 3
punes na camada de vapor como forma de homogenizao da
amostra antes de injetar a quantidade de 250L do vapor no
cromatgrafo a gs. O fluxograma da tcnica descrito na figura
6.

SALIVA
1mL

1 mL soluo aquosa de
n-propanol a 0,6g/L

estufa a 70C 30 min

RESDUO VAPOR

INJETAR 250l
DESPREZAR
GC/FID

FIGURA 6 Fluxograma da tcnica de separao por aquecimento -


headspace para determinao de etanol em saliva, atravs da
cromatografia em fase gasosa por ionizao em chama.

72
Em fase posterior, amostras de saliva (n=15) provenientes de
voluntrios (n=3 do Grupo I-C) que ingeriram no prazo mximo de
20 minutos, usque foram obtidas atravs do coletor denominado
Salivette, nos seguintes tempos, aps a ingesto de etanol: 20;
50; 80; 110 e 130 minutos. O coletor permaneceu na cavidade
bucal at a completa saturao de saliva, sendo colocado
novamente no recipiente do Salivette. No momento da anlise
este foi levado centrifugao a 700g por 10 minutos. Foram
obtidos cerca de 3 mL de saliva submetidos ao procedimento
descrito acima.

5.2.2.2 Curvas de calibrao

Foram obtidas a partir da anlise de amostras de saliva do Grupo


I-B, as concentraes de 0,15; 0,6 e 1,5 g/L. As amostras foram
submetidas ao procedimento descrito em 5.2.2.1 em 3 replicatas.
A curva foi construda atravs da mdia dos valores encontrados
para cada concentrao, utilizando a relao de diviso das reas
absolutas do etanol pelo padro interno n propanol. O desvio
padro foi calculado, obtendo a equao da reta e o coeficiente
de determinao. Outras curvas de calibrao foram igualmente
obtidas durante o desenvolvimento do trabalho nas mesmas
concentraes acima referidas.

73
5.2.3 Validao do mtodo

Linearidade da tcnica

Foi feito o estudo da linearidade da tcnica para se verificar o


intervalo de concentrao, onde a intensidade da resposta do
detector diretamente proporcional concentrao de etanol.

Para tal foram utilizadas amostras de referncia positiva como


referido em 5.1.4.2 para se obter concentraes (0,01g/L;
0,06g/L; 0,15g/L; 0,6g/L; 1,5g/L e 3,0g/L), juntamente com o
padro interno de n propanol a 0,6g/L.

As anlises foram realizadas em trs replicatas atravs do


procedimento descrito no item 5.2.2.2. A curva foi obtida pela
diviso da rea absoluta de cada concentrao de etanol pela
rea do padro interno n - propanol. Com os valores das reas
foram efetuados a mdia, o desvio padro, o coeficiente de
variao e a equao da reta.

Limite de Quantificao (LOQ)

O limite de quantificao definido como a menor quantidade do


analito em uma amostra que pode ser quantitativamente
determinada com aceitvel preciso, ou seja, com o coeficiente
de variao menor e/ou igual a 10% e que apresente
reprodutibilidade na resposta.

A determinao do limite de quantificao foi feita atravs de


concentraes variadas da soluo aquosa de etanol de 15g/L,
em amostras de saliva de referncia negativa. Cada
concentrao testada foi feita em seis replicatas.

74
Limite de Deteco (LOD)

O limite de deteco referido como a menor concentrao de


um analito, na qual o processo bioanaltico pode diferenciar da
linha de base gerada pelo rudo de detector.

A determinao do limite de deteco tambm foi feita


realizando-se diluies progressivas de vrias concentraes de
etanol da soluo aquosa de 15g/L na matriz biolgica. O
processo ocorreu em seis replicatas como no limite de
quantificao.

Preciso intra e interensaio

A preciso de um mtodo analtico descreve a proximidade de


medidas individuais de um analito quando o procedimento
aplicado repetidamente a mltiplas alquotas de um nico
volume homogneo de uma matriz biolgica.

Para avaliar a preciso intra ensaio foram adicionadas nas


amostras de saliva, soluo de etanol para se obter 3
concentraes diferentes: 0,03g/L; 0,3g/L e 1,2g/L, escolhidas
atravs do estudo da linearidade que foi realizado em seis
replicatas no mesmo dia.

A preciso interensaio foi direcionada nas mesmas condies da


preciso intraensaio, porm realizadas em 3 dias diferentes. A
impreciso foi medida pelo coeficiente de variao (CV).

75
5.2.4 Determinao de etanol em amostras de saliva de
voluntrios, Grupo II - B aps ingesto de bebida alcolica

Participaram do estudo voluntrios do Grupo II - B (n=10) que


foram previamente instrudos a no ingerir bebidas alcolicas nas
24 horas que precederam o experimento e a no consumir
alimentos por no mnimo nas 3 horas anteriores experincia.

Os voluntrios ingeriram usque na quantidade necessria para


se obter concentrao de 0,68g de etanol por quilograma de
peso corpreo, no prazo mximo de 20 minutos. As amostras
foram obtidas aps o perodo de ingesto nos seguintes tempos:
20, 50, 80, 110 e 130 minutos.

Aps o estudo, foi fornecido lanche aos voluntrios e os mesmos


permaneceram no local por mais 1 hora ou at que a
concentrao de etanol no sangue tenha sido 0 mg/L, avaliada
atravs da aplicao do teste rpido Q.E.D A 150.

Os voluntrios, aps terem sido informados sobre os objetivos,


riscos, e o procedimento do teste assinaram um termo de
consentimento ps-informao (anexos I e II). O projeto de
pesquisa foi aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa da
Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So
Paulo.

76
5.2.4.1 Mtodo Enzimtico (Q.E.D. A 150)

A coleta foi feita de acordo com a orientao tcnica do


fornecedor e os voluntrios foram instrudos a no comer e nem
beber por pelo menos 10 minutos antes da coleta.

A validade do resultado do Q.E.D. A 150 comprovada atravs


de um sistema de controle de qualidade denominado Q A spot,
que deve desenvolver a cor prpura em at 2 minutos da
realizao do teste.

O resultado colorimtrico com o teste rpido Q.E.D. A 150 foi


visualizado no perodo de 2 minutos aps ter sido inserido o
basto de algodo no dispositivo Q.E.D. A 150 com escala de
10-150mg/dL .

5.2.4.2 Cromatografia gasosa aps extrao por headspace

A coleta de saliva nos voluntrios foi realizada atravs do coletor


denominado Salivette aps ter sido utilizado o teste rpido
Q.E.D. A 150.

O coletor Salivette consiste de um algodo impregnado de cido


ctrico, onde deve permanecer na cavidade oral at a sua
completa saturao, sendo colocado novamente no recipiente do
coletor (Figura 2).

Os coletores foram mantidos refrigerados a 4C at o momento


da anlise. Para a anlise os tubos coletores foram centrifugados
a 700g por 10 minutos e foram submetidos ao procedimento
descrito na figura 6 (5.2.2.1).

77
5.2.5 Determinao de etanol por Q.E.D. A-150 e GC/HS em
amostras de voluntrios (Grupo II A) coletadas com
Salivette, com e sem cido ctrico.

Para investigar uma possvel interferncia nos resultados das


amostras coletadas foi realizado um experimento com
voluntrios, aps a ingesto controlada de bebida alcolicas, nos
mesmos moldes das anlises anteriores.

Nos tempos de 20; 50; 80; 110 e 130 minutos foi aplicado o
seguinte esquema de coleta em cada voluntrio:
a) coleta e respectiva determinao de etanol atravs do
sistema enzimtico Q.E.D A-150.
b) Imediatamente, aps a coleta para aplicao do Q.E.D
foram realizadas duas coletas em srie com o Salivette ,
com e sem cido ctrico

As amostras de saliva coletadas com o Salivette foram


armazenadas em refrigerador, para anlise posterior (24 horas).
Aps esse perodo os Salivettes foram submetidos
centrifugao de 700g por 10 minutos. As amostras obtidas
(cerca de 3 mL) foram divididas, sendo 1 mL utilizado para
determinao de etanol no GC/FID e na saliva remanescente foi
aplicado o sistema enzimtico Q.E.D.

78
5.2.6 Estudo para verificar a estabilidade do etanol atravs do
sistema Q.E.D. A 150

Foi realizado um estudo in vitro para verificar a estabilidade do


etanol na saliva, atravs da utilizao do sistema enzimtico
Q.E.D A 150 aps 24 e 48 horas.

Inicialmente foi obtido um pool de saliva de voluntrios (Grupo II


- A), atravs do coletor Salivette contendo cido ctrico. Estes
coletores foram imediatamente centrifugados para a obteno do
homogeneizado de saliva. Aps, esse procedimento o pool de
saliva foi dividido em alquotas nas quais foram adicionados a
soluo padro de etanol a 15g/L para a obteno das
concentraes de 30; 60; 90 e 120 mg/dL.

Essas solues foram mantidas em frasco mbar, sob-


refrigerao. Foi realizada a medio em trs replicatas nos
tempos 0, 24 e 48 horas. Os swabs do Q.E.D foram colocados
nas amostras adicionadas de etanol at a absoro adequada e
depois inseridos no canal onde ocorre a reao qumica do teste,
sendo realizada a leitura aps 2 minutos da insero.

79
6. RESULTADOS

6.1 Seleo do tempo de coleta para determinao de etanol atravs


do sistema Q.E.D. A 150

Os resultados do estudo piloto para a seleo do tempo ideal de coleta de


saliva, aps a ingesto de etanol so mostrados na tabela 13.

TABELA 13. Os resultados obtidos em mg/dL de etanol, aps a ingesto


controlada de bebida alcolica.

Tempo (min)

VOLUNTRIO 10 60 90
1 70 90 80
2 45 65 50
3 50 85 70
4 40 50 42

6.2 Padronizao e validao do mtodo de determinao de etanol


por cromatografia gasosa aps extrao por headspace

6.2.1 Padronizao do mtodo

Foram verificadas melhores condies cromatogrficas para anlise


de etanol em saliva. Os parmetros adotados foram:

temperatura do injetor: 250C;


temperatura da coluna: 130C (isoterma);
temperatura do injetor: 250C;
fluxo do gs de arraste - hidrognio: 2,6 mL/min;
modo split: 1/10.

80
A figura 7 mostra o cromatograma obtido na determinao de etanol
em saliva, utilizando o n propanol como padro interno. O tempo de
reteno do etanol foi 2.284 e do n - propanol de 5.311.

ETANOL n - PROPANOL

FIGURA 7. Perfil cromatogrfico dos vapores da amostra de


saliva, adicionada de soluo de etanol e de n propanol.

Os resultados obtidos atravs da anlise das amostras nas


concentraes de 0,15; 0,60 e 1,50 por GC/HS so apresentados na
tabela 14.

TABELA 14. Valores de relao das reas (etanol/n propanol)


obtidos no experimento, aps preparao de concentraes pr-
estabelecidas de etanol para a padronizao da tcnica.

Concentraes Replicatas
etanol (g/L) 1 2 3 Mdia
0,15 0,14 0,13 0,14 0,137
0,6 0,48 0,46 0,48 0,473
1,5 1,37 1,38 1,33 1,36

81
Os resultados obtidos atravs da anlise das amostras de voluntrios
(Grupo II A) por GC/HS so mostrados na tabela 15.

TABELA 15. Os resultados obtidos em mg/dL, aps a ingesto


controlada de etanol.

Tempo (min)
VOLUNTRIO 20 50 80 110 130

1 169 120 102 82 76


2 75 78 88 80 75
3 76 83 97 89 84

6.2.2 Validao do mtodo

Linearidade da tcnica

A linearidade da tcnica foi obtida utilizando seis concentraes


diferentes (0,01; 0,06; 0,15; 0,6; 1,5 e 3g/L) realizadas em trs
replicatas.

A tabela abaixo apresenta os valores obtidos no estudo: mdia,


desvio, padro e coeficiente de variao. Os resultados demonstraram
uma relao linear proporcional entre o sinal gerado no equipamento e
as concentraes de etanol.

82
TABELA 16. Valores obtidos nos experimentos para verificar a
linearidade da tcnica, a partir das concentraes estabelecidas. Os
valores so apresentados pela razo das reas absolutas de etanol
pela do padro interno (n propanol).

Concentraes Replicatas
etanol (g/L) 1 2 3 Mdia Dp CV

0,01 0,031 0,029 0,03 0,03 0,001 3,33


0,06 0,061 0,064 0,066 0,064 0,003 4,69
0,15 0,14 0,14 0,14 0,14 0 0
0,6 0,43 0,43 0,45 0,437 0,012 2,75
1,5 1,09 1,11 1,12 1,107 0,015 1,36
3,0 2,31 2,37 2,38 2,353 0,038 1,61

A equao da reta e o coeficiente de correlao (R2) so mostrados na


figura 10.

Linearidade y = 0,7724x + 0,0037


2
R = 0,9986
mdia das reas

2,5
2
1,5
1
0,5
0
0 1 2 3 4
conc (g/L)

FIGURA 8. Representao grfica da linearidade da tcnica entre a


concentrao de etanol e as mdias das reas (etanol/n propanol).

83
Limite de Quantificao (LOQ)

O limite de quantificao do mtodo para determinao de etanol em


saliva foi de 0,010g/L.

A tabela abaixo mostra os valores obtidos: mdia; desvio padro (Dp)


e coeficiente de variao (CV) para o etanol.

TABELA 17. Apresentao dos resultados obtidos para o valor do


limite de quantificao (0,010g/L): mdia; desvio padro e
coeficiente de variao.

REPLICATAS Razo entre as reas


etanol/n - propanol

1 0,023
2 0,027
3 0,028
4 0,027
5 0,025
6 0,027

MDIA 0,026
Dp 0,002
CV (%) 7,69

84
Limite de Deteco (LOD)

O limite de deteco do mtodo para o etanol foi de 0,006g/L.

A tabela abaixo apresenta os valores obtidos: a mdia, o desvio


padro (Dp) e o coeficiente de variao (CV), para o etanol.

TABELA 18. Os valores obtidos na determinao do limite de


deteco do etanol (0,006g/L): mdia, desvio padro e coeficiente de
variao.

REPLICATAS Razo entre as reas


Etanol/ n - propanol

1 0,017
2 0,027
3 0,022
4 0,023
5 0,025
6 0,022

MDIA 0,023
Dp 0,003
CV (%) 13,04

85
Preciso intra e interensaio

As tabelas abaixo apresentam os coeficientes de variao intra e


interensaio, para cada concentrao escolhida. Os valores obtidos em
cada dia expressam a relao de reas absolutas do etanol/ n
propanol.

TABELA 19. Coeficientes de variao intra e interensaio do etanol, na


concentrao de 0,03g/L .

DIAS
REPLICATAS 1 2 3

1 0,044 0,057 0,057


2 0,04 0,05 0,042
3 0,044 0,042 0,046
4 0,046 0,043 0,047
5 0,046 0,043 0,043
6 0,044 0,043 0,043

CV1 (inter) 3,2%


CV2 (intraensaio) 10,7%

86
TABELA 20. Coeficientes de variao intra e interensaio do etanol, na
concentrao de 0,3g/L .

DIAS
REPLICATAS 1 2 3

1 0,31 0,29 0,30


2 0,30 0,28 0,30
3 0,30 0,28 0,31
4 0,30 0,27 0,30
5 0,30 0,29 0,31
6 0,28 0,27 0,30

CV1 (inter) 4,0%


CV2 (intraensaio) 2,8%

TABELA 21. Coeficientes de variao intra e interensaio do etanol, na


concentrao de 1,2g/L .

DIAS
REPLICATAS 1 2 3
1 1,10 1,08 1,13
2 1,10 1,09 1,18
3 1,14 1,10 1,18
4 1,09 1,11 1,16
5 1,09 1,13 1,16
6 1,09 1,11 1,16

CV1 (inter) 3,1%


CV2 (intraensaio) 1,7%

87
6.3. Determinao de etanol em amostras de saliva dos
voluntrios do Grupo II - B

6.3.1. Mtodo Enzimtico (Q.E.D. A 150)

Os resultados obtidos nas amostras de saliva dos voluntrios do


Grupo II - B em diferentes tempos, aps o trmino da ingesto
de bebidas alcolicas so mostrados na tabela 22.

TABELA 22. Resultados das concentraes de etanol obtidos


nas amostras de saliva dos voluntrios, atravs da aplicao do
QED A 150.

TEMPO DE COLETA (min)

VOLUNTRIO 20 50 80 110 130

CONCENTRAES (mg/mL)

A 50 75 90 70 80

B 110 80 70 65 45

C 50 60 55 35 40

D 60 90 80 70 70

E 45 50 50 50 40

F 70 65 60 55 50

G 80 110 100 80 90

H 45 50 65 70 60

I 50 60 50 45 35

J 95 100 70 60 50

88
6.3.2. Cromatografia gasosa aps separao por
headspace

Os resultados obtidos nas amostras de saliva dos voluntrios


atravs da aplicao de GC/FID, em diferentes tempos, aps o
trmino da ingesto de bebidas alcolicas so mostrados na
TABELA 23.

TABELA 23. Resultados obtidos nas amostras de saliva dos


voluntrios por CG/FID aps headspace.

TEMPO DE COLETA (min)

VOLUNTRIO 20 50 80 110 130

CONCENTRAES (mg/mL)

A 108 123 133 106 105

B 113 105 94 83 77

C 113 80 69 57 52

D 84 104 103 87 83

E 65 67 66 67 61

F 78 78 68 56 42

G 111 135 132 107 114

H 53 74 89 83 80

I 72 78 52 47 30

J 107 99 79 75 69

89
Na figura 9 so apresentados os grficos com os resultados das anlises
enzimticas (Q.E.D. A 150) e cromatogrficas (GC/HS) das amostras
dos voluntrios do Grupo II B.

Voluntrio A QED QED


Voluntrio B
CG/HS CG/HS
150 150

100 100

50 50

0 0
20 50 80 110 130 20 50 80 110 130

QED Voluntrio D QED


Voluntrio C
CG/ HS CG/HS

150 150
130
110
100 90
70
50 50
30
0 10
20 50 80 110 130 -10
20 50 80 110 130

QED QED
Voluntrio E Voluntrio F
CG/HS CG/HS

150 150
130 130
110 110
90 90
70 70
50 50
30 30
10 10
-10 -10
20 50 80 110 130 20 50 80 110 130

90
QED QED
Voluntrio G CG/HS
Voluntrio H CG/HS

150 150
130 130
110 110
90 90
70 70
50 50
30 30
10 10
-10 -10
20 50 80 110 130 20 50 80 110 130

QED QED
Voluntrio I CG/HS Voluntrio J CG/ HS
150 150
130
110
100
90
70
50 50
30
10 0
-10 20 50 80 110 130
20 50 80 110 130

FIGURA 9. Grficos obtidos individuais, comparando os resultados com


as duas tcnicas empregadas.

Na figura 10 so apresentados os perfis das mdias das concentraes


pelo tempo do etanol nas amostras analisadas por Q.E.D. A 150 e
GC/HS.

120

100

80
QED
60
Hs
40

20

0
20 50 80 110 130

FIGURA 10. Grfico das mdias dos resultados das duas tcnicas
empregadas.

91
6.4 Determinao de etanol por Q.E.D. A-150 e GC/HS em
amostras de voluntrios (Grupo II A) coletadas com Salivette ,
com e sem cido ctrico.

Os resultados obtidos nesse experimento so mostrados na tabela 24.

TABELA 24. Resultados obtidos em mg/dL imediatamente aps a


coleta e/ou em 24 horas na tcnica enzimtica (Q.E.D. A 150) e
cromatogrfica (CG/HS), nas amostras coletadas com a utilizao de
Salivettes , com e sem cido ctrico.
.
Voluntrio A Voluntrio B
tempo Q.E.D A - 150 CG/HS Q.E.D A - 150 CG/HS
de I 24 h 24 h I 24 h 24 h
coleta
(min) S/E C/E S/E C/E S/E C/E S/E C/E

20 70 AI 75 77 90 65 78 81 83 91

50 70 77 80 88 91 60 72 81 82 81

80 68 75 78 78 82 60 67 70 73 78

110 58 60 65 73 76 58 62 61 65 67

130 55 60 62 66 72 48 51 53 61 62

I = imediatamente aps coleta S/E = sem estimulao C/E = com estimulao


AI = amostra insuficiente

Os grficos relacionando os valores encontrados na determinao de etanol na


saliva, utilizando as tcnicas: enzimtica e cromatogrfica so apresentados.,
nas figuras 11 e 12. Os resultados so mostrados no grfico atravs da mdia
obtida na quantificao das amostras pelas duas tcnicas.

92
100

concentrao
80
60 QED
40 HS
20
0
20 50 80 110 130
minutos

FIGURA 11. Grfico das mdias obtidas na determinao de etanol realizada


com Q.E.D A-150, imediatamente aps a coleta, e na determinao
cromatogrfica aps 24 horas -, nos mesmos tempos, utilizando o coletor de
saliva com cido ctrico.

Relao-Mdia

100
80
60 QED
40 HS
20
0
20 50 80 110 130

FIGURA 12. Grfico das mdias obtidas na determinao de etanol realizada


com Q.E.D A-150, imediatamente aps a coleta, e na determinao
cromatogrfica aps 24 horas -, nos mesmos tempos, utilizando o coletor de
saliva sem cido ctrico.

93
100

concentrao
80
60 QED
40 HS
20
0
20 50 80 110 130
minutos

FIGURA 13. Grfico das mdias obtidas na determinao de etanol realizada


com Q.E.D A-150, aps sua insero na saliva remanescente do Salivette
sem cido ctrico aps 24 horas -, e na determinao cromatogrfica, nos
mesmos tempos, utilizando o mesmo coletor.

100
concentrao

80
60 QED
40 HS
20
0
20 50 80 110 130
minutos

FIGURA 14. Grfico das mdias obtidas na determinao de etanol realizada


com Q.E.D A-150, aps sua insero na saliva remanescente do Salivette
com cido ctrico aps 24 horas -, e na determinao cromatogrfica, nos
mesmos tempos, utilizando o mesmo coletor.

94
6.5 Estudo para verificar a estabilidade do etanol atravs do sistema
Q.E.D. A 150

Os resultados (mdia das concentraes) obtidos em trs replicatas, nos


tempos de 0; 24 e 48 horas para verificar a estabilidade da concentrao de
etanol na saliva so apresentados na TABELA 25.

TABELA 25. Mdia das concentraes de etanol para verificar a


estabilidade do etanol na amostra obtida com o sistema Q.E.D A-150.

CONCENTRAO Tempo de coleta


DE 0h 24 h 48 h
ETANOL(mg/dL)
30 30,67 30 26,67

60 58,33 57 56,33

90 82,33 80 79,66

120 110 110,66 109,33

95
7. DISCUSSO

Nas anlises toxicolgicas realizadas para verificar o consumo de bebidas


alcolicas o sangue e o ar expirado so as matrizes biolgicas mais
empregadas, principalmente em condies nas quais h necessidade de
verificar a alcoolemia em trabalhadores, motoristas e indivduos envolvidos em
acidentes.

A utilizao da saliva tem sido recentemente recomendada, pois muitas


substncias so transferidas rapidamente do plasma para essa matriz,
existindo uma estreita correlao nas concentraes encontradas
simultaneamente nesses meios (GUBALA & ZUBA, 2000).

A partir dessas premissas foi desenvolvida esta pesquisa para investigar a


utilizao de amostras de saliva para determinao de etanol em duas fases
triagem e confirmao com a finalidade de verificar a exposio a bebidas
alcolicas.

Na fase de triagem foi aplicada uma tcnica enzimtica sistema Q.E.D. A


150 e na fase de confirmao a cromatografia em fase gasosa, aps
separao do etanol da matriz por aquecimento Headspace , tcnica
considerada de referncia para determinao de etanol em fluidos biolgicos.

O sistema Q.E.D. A 150 foi selecionado devido existncia na literatura


especializada de recomendaes de pesquisadores que realizaram estudos
com esta tcnica e por ter a aprovao do Departamento de Transportes dos
Estados Unidos (DOT - USA). Essa instituio governamental responsvel
nos EUA, pelo estabelecimento de matrizes biolgicas e tcnicas analticas que
podem ser utilizadas para determinao da alcoolemia em motoristas
profissionais.

96
O sistema escolhido se enquadra nas condies do DOT, que define uma
tcnica de triagem para determinao de lcool como um sistema para
detectar a presena de 20 mg/dL ou mais de lcool no sangue, podendo ser
utilizado para esta finalidade qualquer fluido biolgico, porm o resultado deve
expressar a alcoolemia (DUBOWSKI, 2002).

Durante o desenvolvimento do trabalho foi verificado que o Q.E.D. A 150


permitiu uma coleta simples e rpida. A sua forma de apresentao, em
embalagens individuais e hermeticamente fechadas, alm da praticidade em
sua utilizao, tambm transmitiu uma sensao de segurana ao doador da
amostra em termos de uso absolutamente nico e individual e, portanto, isento
de contaminao.

A coleta foi efetuada pelos prprios doadores que foram instrudos para inserir
na cavidade oral os swabs do sistema Q.E.D., mantendo-os em movimentos
circulares durante um minuto. No geral, esse procedimento foi adequado para a
completa saturao do algodo e tambm garantiu a obteno de um
homogeneizado de saliva provenientes das secrees das glndulas
existentes na cavidade oral.

Em alguns casos foi verificado que este tempo no foi suficiente para a
obteno da quantidade de saliva necessria para a realizao da anlise.
Nestes, uma nova coleta foi efetuada com a orientao de que os doadores da
amostra deveriam permanecer com o basto coletor swab na boca por
um perodo maior. O controle de qualidade do Q.E.D. A 150 permitiu evidenciar
com segurana quando o volume de amostra fornecido era insuficiente.

Na realizao das anlises atravs do sistema Q.E.D. A 150 foi observado


em algumas anlises uma certa dificuldade no preenchimento do tubo capilar
do teste com a saliva coletada. Segundo JONES, (1995) esse fato reflete as
variaes interindividuais na composio da saliva, devido as diferenas na
viscosidade e a presena de material particulado.

97
As leituras foram realizadas exatamente aps 2 minutos da insero do swab
no canal onde ocorre a reao qumica, pois findo esse tempo poderia haver
uma retrao no volume da amostra na coluna que indica a concentrao de
etanol, levando a uma leitura abaixo do valor real.

Durante o intervalo de tempo entre a insero do swab no local determinado do


Q.E.D. e a leitura do resultado final foi observado em alguns casos o
aparecimento de bolhas de ar no sistema, dificultando a interpretao do
resultado. O critrio adotado foi a leitura do ponto mais alto da coluna,
independentemente da presena de bolhas.

Os experimentos iniciais foram realizados com a finalidade de selecionar os


tempos de coleta adequados para verificar a presena de etanol em saliva. O
tempo inicial de 10 minutos foi adotado de acordo com a orientao tcnica que
acompanha o sistema Q.E.D A 150. O tempo final foi estabelecido tendo por
base a concentrao plasmtica mxima que varia de 30 - 60 minutos (JONES,
1993; 1995) e ao provvel tempo que um indivduo poderia ser submetido a um
controle do uso de bebidas alcolicas em algumas situaes, como no trnsito
ou no ambiente de trabalho.

Nos tempos selecionados todos os voluntrios apresentaram concentraes de


etanol bem acima do limite de deteco do teste (10 mg/dL). Assim, com base
nesses resultados e devido aos tempos recomendados por Dubowsky, (2002)
15 minutos e Jones, (1995) 20 minutos entre a ingesto de bebida e
o incio da coleta, foi adotado o tempo maior a fim de evitar a possibilidade da
presena de qualquer resqucio de lcool na cavidade oral. Nos experimentos
posteriores o tempo final foi estendido para 130 minutos para uma melhor
avaliao do perodo de deteco do etanol nessa matriz.

98
Os estudos de otimizao das condies cromatogrficas foram iniciados com
a aplicao dos parmetros propostos por Corra, (1997; 2001). A temperatura
selecionada para a operao da coluna foi a de 130C e a razo da diviso split
foi alterada para 1/10. O modo split foi adotado prevendo a possibilidade da
ocorrncia nas anlises de elevadas concentraes de etanol, devido a sua
facilidade de volatilizao. Assim, a diviso da amostra impediria uma possvel
saturao da coluna capilar e permitiria uma melhor resoluo cromatogrfica,
tendo como conseqncia a obteno de picos mais adequados.

Os tempos de reteno obtidos, 2.28 min para o etanol e 5.31 min para o
padro interno foram adequados finalidade. O uso do n-propanol, como
padro interno, foi apropriado por ser da mesma funo qumica do etanol. Nos
experimentos realizados a sua concentrao de referncia foi fixada em 0,6
g/L, por apresentar como resultado uma rea apropriada aos clculos da
concentrao de etanol.

As concentraes utilizadas para obteno das curvas da calibrao 0,15; 0,6


1,5 foram selecionados de acordo com a faixa de linearidade e o ponto mdio
foi adotado tendo por base a concentrao que qualifica a incapacidade do
indivduo em conduzir um veculo automotor, segundo o Cdigo de Trnsito
Brasileiro.

A separao do etanol da saliva, atravs do aquecimento da matriz, foi um


procedimento analtico simples e rpido conforme relatado na literatura
especializada para outras matrizes biolgicas.

Em todas as anlises realizadas no foi observado nenhum tipo de


interferncia nos resultados cromatogrficos devido s substncias
normalmente presentes na saliva, que poderiam eventualmente ser separadas
da matriz durante a fase de aquecimento e/ou coeluirem com os lcoois.

99
Na fase de padronizao tambm foram realizados experimentos in vivo com a
utilizao de salivas coletadas em diferentes tempos 20, 50, 80, 110 e 130
minutos aps a ingesto controlada de bebidas alcolicas pelos voluntrios
(Grupo II A).

A coleta das amostras foi efetuada atravs da utilizao do coletor de saliva


Salivette com cido ctrico, para estimular a salivao. Esse tipo de coletor
indicado em casos de xerostomia, observada em pessoas com diabetes
Mellitus, alcoolismo, portadores de doena sistmica de supresso de saliva
comum em idosos ou em usurios de drogas ilcitas como a maconha.

Durante a coleta com o Salivette alguns indivduos relataram um pequeno


desconforto quando ocorria a liberao do cido ctrico, devido ao sabor
caracterstico dessa substncia.

O procedimento de coleta apresentou praticidade, rapidez 1 minuto de


durao e facilidade na obteno da amostra em quantidade necessria para
anlise. Outras vantagens foram a impossibilidade de adulterao durante a
coleta e risco mnimo de perda na manipulao, pois o tubo utilizado para
armazenamento do material coletado levado diretamente para centrifugao
no momento da anlise.

Os Salivettes com as respectivas amostras foram mantidos sob-refrigerao


desde a coleta at o incio da anlise, realizada aps 24 horas. Aps esse
perodo, os coletores foram submetidos centrifugao, sendo obtido um
volume de aproximadamente 3 mL, quantidade suficiente para aplicao do
mtodo e realizao de uma nova anlise, se necessrio.

100
Em todas as amostras coletadas nos diferentes tempos foi possvel determinar
a concentrao de etanol, no foi observado a presena de interferentes devido
as substncias presentes na saliva, mostrando a aplicabilidade do mtodo
padronizado e os valores de relao das reas (etanol / n-propanol) obtidos
nos experimentos in vitro (5.2.2.1) e in vivo foram satisfatrios demonstrando
que o mtodo para determinao de etanol proposto por Correa, 1997 para
sangue e urina pode ser aplicado em saliva.

No processo de validao do mtodo para determinao de etanol em


amostras de saliva por GC/HS foram verificados os seguintes parmetros:
linearidade da tcnica, limite de quantificao, limite de deteco e preciso
intra e interensaio (perodo de 3 dias) de acordo com o Guia para Validao de
Mtodos Analticos da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (BRASIL,
2002b; BRASIL, 2003a).

O mtodo se mostrou linear nas concentraes de 0,01 a 3,0 g/L (TABELA 18);
a concentrao inicial foi escolhida por ser o limite de quantificao do mtodo
e a final por ser uma concentrao bem acima das concentraes passveis de
serem encontradas em anlises realizadas com essa finalidade. O coeficiente
de variao (CV) obtido foi menor que 5% e o coeficiente de determinao (R 2)
foi de 0,9986 (FIGURA 10).

O limite de quantificao do analito foi de 0,01g/L, com coeficiente de variao


de 7,69%. Esse valor est muito abaixo dos 0,6g/L preconizado pela legislao
brasileira como concentrao sangunea mxima de etanol permitida para
dirigir veculos automotores.

O estudo do limite de deteco foi realizado em seis replicatas com o objetivo


de encontrar a menor concentrao detectvel do analito. Esse limite foi de
0,006g/L com o coeficiente de variao de 13,04%, valor adequado para o
mtodo.

101
A preciso do mtodo foi avaliada, segundo seus coeficientes de variao,
atravs da anlise de 3 nveis de concentraes 0,03; 0,3 e 1,5 g/L, que
apresentaram os seguintes valores, respectivamente intraensaio 1,7; 2,8 e
10,7% e interensaio 3,1; 3,2 e 4,0%. Os valores encontrados foram adequados
a finalidade de anlise.

Com a concluso do processo de validao do mtodo cromatogrfico, o


mesmo foi aplicado em voluntrios - Grupo II B -, aps o consumo de bebidas
alcolicas. Os voluntrios selecionados constituram um grupo relativamente
homogneo: quatro do sexo feminino e seis do sexo masculino; idade entre 24
e 41 anos (mdia de 30,6); todos com formao universitria.

Aos voluntrios foram apresentados dois esquemas de consumo de bebida


alcolica (usque): ingesto da quantidade necessria para obteno de 0,5
gramas de etanol por quilograma corpreo (0,5g/Kg) escolhida por quatro
voluntrios ou a ingesto para se alcanar 0,68g/Kg escolhida por seis
voluntrios. A concentrao maior foi selecionada por ter sido utilizada em
estudos anteriores (JONES, 1995; CORRA, 1997) e a de 0,5g/Kg para
possibilitar a participao dos voluntrios menos afeitos s bebidas alcolicas.

Durante o desenvolvimento do estudo no foi observada no Grupo de


voluntrios nenhuma dificuldade em consumir no tempo determinado 20
minutos a quantidade escolhida da bebida alcolica.

Na comparao dos resultados obtidos nas duas tcnicas estudadas foi


observado que no geral as concentraes interindividuais, obtidas no mesmo
tempo de coleta, foram aproximadamente 30% maiores pela tcnica
cromatogrfica (GC/HS). Contudo, foi observado que as curvas obtidas pelas
concentraes de etanol x tempo (minutos), em ambas as tcnicas,
apresentaram perfil semelhante. Este fato foi evidenciado com a utilizao das
mdias dos resultados dos voluntrios nos respectivos tempos de coleta
(FIGURA 11).

102
Considerando o esquema de tempo adotado para a coleta foi observado que a
concentrao mxima de etanol na saliva foi atingida aos 70 minutos aps o
incio do consumo da bebida, leituras efetuadas aos 50 min , resultado
prximo dos relatados em estudos anteriores.(JONES, 1995; GUBALA &
ZUBA, 2002).

Analisando os resultados obtidos atravs da cromatografia em fase gasosa das


amostras coletadas aos 50 min, aps o trmino da ingesto de bebidas
alcolicas foi verificado que a faixa dos valores esteve entre 67 a 135 mg/dL
com CV de 23%. Esses resultados esto prximos dos obtidos por Jones,
(1993) de 57 a 135 mg/dL e CV de 20% em trabalho realizado com as
mesmas caractersticas de ingesta obteno de concentrao de etanol de
0,68gKg de peso corpreo .

Os resultados interindividuais obtidos nas amostras dos voluntrios pelas


tcnicas aplicadas foram bastante dispersos, apesar da homogeneidade do
grupo, das condies prandiais semelhantes e da proporcionalidade da
quantidade ingerida de bebida alcolica, estando de acordo com resultados
interindividuais de estudo encontrado na literatura (JONES, 1979b; JONES,
1995).

Esta observao pode ser constatada na comparao dos resultados de 2


voluntrios - G e H - que ingeriram quantidade de usque equivalente aos seus
respectivos pesos corpreos: o voluntrio G peso 60 Kg, do sexo feminino,
ingesta de 126 mL de usque apresentou resultados de 107 a 135 mg/dL,
mdia de 119,8 mg/dL e CV de 11%; o voluntrio H peso de 92 kg, sexo
masculino, ingesta de 193 mL de bebida apresentou resultados de 53 a 89
mg/dL, mdia de 75,8 mg/dL e CV de 18%.

103
Diversos fatores contribuem para explicar essas diferenas interindividuais
como o sexo; volume de distribuio e raa. Outro fator a ser considerado a
diferena na velocidade de eliminao do etanol entre bebedores no habituais
de 12 a 15 mg/dL por hora e bebedores contumazes de 30 a 50 mg/dL
por hora.

Estes resultados levam ao questionamento da existncia de tabelas que


correlacionam consumo de uma determinada quantidade de bebidas alcolicas
com obteno de uma determinada concentrao alcolica no sangue.

Devido as diferenas observadas foram investigados alguns fatores que


poderiam estar contribuindo para obteno desses resultados: a presena de
cido ctrico na coleta realizada com estmulo da salivao e a influncia do
tempo decorrido entre as anlises realizadas atravs do Q.E.D. e da
cromatografia em fase gasosa.

Um experimento foi delineado para se verificar a influncia dos fatores


mencionados acima. Voluntrios do Grupo II A ingeriram bebida alcolica e
posteriormente forneceram amostras de saliva nos tempos de 20, 50, 80, 110 e
130 min. As coletas foram realizadas de acordo com o procedimento descrito
em 5.2.4: primeiramente a amostra foi coletada com o swab para anlise com
o Q.E.D.; em seguida foram coletadas imediatamente duas amostras do
mesmo voluntrio com a utilizao do Salivette a primeira sem cido ctrico
e a segunda com a presena do cido .

Esses coletores foram mantidos sob-refrigerao durante aproximadamente 24


horas. Decorrido esse tempo foram submetidos centrifugao sendo obtidas
aproximadamente 3 mL de saliva, que foram divididas em duas alquotas para
anlise nas tcnicas enzimtica e cromatogrfica .

104
Os resultados obtidos nas amostras coletadas com cido ctrico foram
semelhantes ao experimento realizado com voluntrios do Grupo II B, pois a
diferena entre as tcnicas - cromatogrfica e sistema Q.E.D. A 150 -, foi de
29% maior. Contudo, essa diferena diminuiu para 22% quando se utilizou o
Salivette sem o cido ctrico.

As diferenas dos resultados obtidos com o Q.E.D. A 150 aps 24 horas, e os


respectivos resultados obtidos com a tcnica cromatogrfica foram: de
aproximadamente 13% no coletor sem cido ctrico e com a saliva obtida sob
estimulao essa porcentagem foi 14%, sendo uma diferena de 15% com a
saliva obtida no momento da coleta.

Tambm foram observados alguns resultados distintos entre as leituras obtidas


com o Q.E.D. A 150 no momento da coleta e aps 24 horas. A leitura do
Q.E.D. aps 24 h foi aproximadamente 14% maior no coletor com cido ctrico
e cerca de 9% maior no coletor sem cido ctrico.

Os fatos acima discutidos levam a inferir que o tempo decorrido entre a coleta e
a anlise e a presena do cido ctrico seriam fatores que influenciariam nas
diferenas observadas nos resultados, sendo que aproximadamente 9% estaria
relacionado ao tempo e 6% presena do cido ctrico. Com base nessas
consideraes a diferena real entre os resultados das duas tcnicas seria
cerca de 14%. Este nvel de diferena encontra-se dentro do padro aceitvel
de anlise, considerando que uma tcnica de triagem e a outra de referncia.

Para dirimir a dvida relativa ao fator do tempo foi realizado um experimento in


vitro para verificar a estabilidade do etanol na saliva em 24 e 48 horas,
utilizando o Q.E.D. A 150. Os resultados mostraram que no houve diferena
entre as concentraes observadas nos tempos 0, 24 e 48 horas, ou seja, no
foi verificado aumento de etanol. A anlise destes resultados levaria a
suposio que o fator principal que explicaria as diferenas observadas seria o
tempo de permanncia da amostra no coletor antes da centrifugao.

105
No experimento para verificar a estabilidade, os coletores utilizados para a
obteno do pool de saliva foram imediatamente centrifugados aps a coleta,
o que no acontecia nos experimentos anteriores, j que estes eram
centrifugados no momento da anlise, realizada aps 24 horas. Provavelmente
o procedimento de centrifugao promove um rompimento das paredes das
bactrias encontradas na cavidade oral e assim impediria que estes
microorganismos interferissem na concentrao de etanol pelo processo de
fermentao devido a presena de acares existentes nessa amostra.

Durante a permanncia da amostra no coletor - Salivette - foi constatado um


aumento na concentrao de etanol aps as 24 horas, mostrando uma
desvantagem desse tipo de coletor. Na literatura especializada consultada no
foi encontrado nenhum estudo realizado com esse tipo de coletor, assim novos
trabalhos devero ser realizados para equacionar esse problema,
principalmente para aplicao no trnsito. Uma possvel soluo seria a
utilizao de um coletor de saliva contendo um agente conservante, que
impossibilitaria a proliferao de bactrias e conseqentemente o aumento da
concentrao de etanol na amostra, pois a centrifugao logo aps a coleta
impraticvel em campo.

Para verificar o consumo de bebidas alcolicas por motoristas de trnsito, essa


metodologia poderia ser aplicada com restries, pois nesse setor h um ndice
que caracteriza perante a lei se houve ou no uma infrao gravssima. O
sistema Q.E.D. poderia ser aplicado como tcnica de triagem, assim como so
utilizados os etilmetros, com algumas vantagens, pois possui algumas
caractersticas desejveis: embalagem hermeticamente embalada; data de
validade; um controle QA spot - que garante a qualidade dos resultados;
facilidade de obteno da amostra e por no causar constrangimento ao
doador.

106
A anlise dos resultados obtidos demonstra o quanto complicado estabelecer
uma legislao com aplicaes de sanes tendo por base a alcoolemia.
Contudo, em todas as amostras coletadas nos diferentes tempos foi possvel
determinar a concentrao de etanol, mostrando a aplicabilidade do mtodo
padronizado.

O projeto de lei aprovado pela Cmara dos Deputados, que se encontra em


tramitao no Congresso Nacional, para reduzir o limite mximo de 0,6g/L para
0,3g/L provavelmente ser eficaz na reduo dos acidentes e mortalidade no
trnsito. Com essa nova legislao todos os voluntrios do estudo poderiam
sofre sanes, pois os mesmos tiveram leituras superiores a esse novo ndice.
Entretanto, para surtir os efeitos desejados essa legislao deve ser colocada
em prtica atravs da fiscalizao por rgos competentes com a utilizao
das anlises toxicolgicas para comprovar o grau de alcoolemia.

De acordo com Gubala & Zuba, (2002) a determinao de etanol em saliva era
at o presente utilizada como mtodo de triagem, apesar do valor da
concentrao de etanol nessa matriz ser amplamente correlacionada com os
encontrados no sangue. Na opinio desses autores a saliva constitui de uma
matriz adequada para verificar a sobriedade com propsitos forenses.

O mtodo estudado pode ser utilizado para diferentes finalidades, a fim de


comprovar a sobriedade de indivduos expostos ao lcool, como por exemplo
no ambiente de trabalho, em clnicas de tratamento e recuperao de usurios
de drogas e em casos emergenciais, inclusive de pacientes inconscientes.

No presente estudo foi possvel determinar a concentrao de etanol em


amostras de saliva de indivduos para verificar a sua exposio a bebidas
alcolicas..

107
8. CONCLUSES

O sistema enzimtico Q.E.D A 150 pode ser utilizado em campo, como um


indicativo da alcoolemia e para estimar a exposio de indivduos expostos s
bebidas alcolicas.

A cromatografia em fase gasosa, aps separao do etanol por aquecimento


- Headspace - foi eficaz para determinao dessa substncia na saliva.

No foi observado na anlise cromatogrfico nenhum tipo de interferncia


devido s substncias normalmente presentes na amostra de saliva.

O mtodo validado se mostrou linear e preciso, com limites de deteco e


quantificao bem inferiores aos valores necessrios para verificar a exposio
a bebidas alcolicas.

O coletor de saliva denominado Salivette foi de fcil aplicao, sendo obtida


a quantidade suficiente de saliva para a anlise. A presena de cido ctrico
como agente de estimulao da salivao, bem como a permanncia da
amostra no coletor interferiram nos resultados.

Os respectivos resultados interindividuais nos experimentos realizados com


voluntrios, que ingeriram bebidas alcolicas nas duas tcnicas foram bastante
dispersas, mas com o perfil de eliminao semelhante.

O mtodo proposto com as duas tcnicas de triagem e confirmao


demonstrou praticidade e permitiu identificar o etanol em todas as amostras de
saliva provenientes de voluntrios que ingeriram bebidas alcolicas.

A saliva uma amostra alternativa que poderia ser utilizada para verificar a
exposio de indivduos a bebidas alcolicas.

108
9. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABBOTT CIENTFICA. Drogas de abuso. In:_____. Drogas de abuso. Madri,

1996, cap.4, p.43-131.

ABEL, E.L. Pharmacology of alcohol. In: _____, ed. Marihuana, tobacco,

alcohol and reproduction. Boca Raton: CRS Press, 1983. cap.10, p.113-117.

ACIOLI, M. Alcoolismo e o universo feminino: uma leitura na perspectiva da

antropologia mdica. lcool e Drogas Rev. ABEAD, So Paulo, n.1, p.61-

71, 1999.

ADAMS, W.L. Interactions between alcohol and other drugs. Int. J. Addict., New

York, v.30, p.1903-1923, 1995.

AHMED, F.E. Toxicologial effects of ethanol on human health. Crit. Rev.

Toxicol., Lauderdale, v.25, p.347-367, 1995.

BATES,M.E.; MARTIN, C.S. Immediate quantitative estimation of blood alcohol

concentration from saliva. J. Stud. Alcohol, Piscataway, v.58, n.5, p.531-538,

1997.

BENDTSEN, P.; HUHBERG, J.; CARLSSON, M.; JONES, A.W. Monitoring


ethanol exposure in a clinical setting by analysis of blood, breath, saliva, and
urine. Alcohol.: Clin. Exp. Res., Baltimore, v.23, n.9, p.1446-1451, 1999.

109
BITTENCOURT, A.L. Mecanismo de ao do etanol: envolvimento de
glutamato, gaba e dopamina. Rev. Psiquiatr. Clin., So Paulo, v.27, n.1,
2000. Disponvel em: http://www.hcnet.usp.br/ipq/revista/index.html. Acesso
em: 15 nov. 2003.

BIWASAKA, H.; TOKTA, T.; SASAKI, Y.; NIITSU, H.; KUMAGAI, R.; AOKI, Y.
Application of quantitative ethanol detector (QED) test kit to measure ethanol
concentration in blood samples. Forensic Sci. Int., Amsterdam, v. 124, p.124-
129, 2001.

BORKENSTEIN, R.F. The Breathalyzer. In: SUNSHINE, I. Was it a poisoning?


S.I. American Academy of Forensic Sciences, 1998. p.155-156.

BRASIL. Lei n 9.294, 15 de julho de 1996. Dispe sobre as restries ao uso e


propaganda de produtos fumgeros, bebidas alcolicas, medicamentos,
terapias e defensivos agrcolas. Disponvel em:
http;//www.cremesp.org.br/legislao/codame/lei_9.294_integra.htm. Acesso
em: 18 jul. 2003.

BRASIL. Departamento Nacional de Trnsito. Cdigo de Trnsito Brasileiro


institudo pela Lei n 9.503, 23 de setembro de 1997. In: _____. Trnsito
livre vida. Braslia: Imprensa Nacional, 1997. 189 p.

BRASIL. Presidncia da Repblica. Gabinete de Segurana Institucional.


Secretaria Nacional Antidrogas. Publicaes. lcool: o que voc precisa
saber. As coisas boas da vida. 2000a. Disponvel em:
http://www.senad.gov.br. Acesso em: 20 de mar. 2003.

110
BRASIL. Lei n.10.167, de 27 de dezembro de 2000. Altera dispositivos da Lei
n 9.294, de 15 de julho de 1996, que dispe sobre as restries ao uso e
propaganda de produtos fumgenos, bebidas alcolicas, medicamentos,
terapias e defensivos agrcolas. Dirio Oficial da Unio, Braslia, 2000b.
Disponvel em: http://www.anvisa.gov.br/legis/leis/10167_00.htm. Acesso
em: 05 set. 2003.

BRASIL. Decreto n.4.072, de 03 de janeiro de 2002. D nova redao aos arts.


81, 91 e 93 do decreto n.2.314, de 4 de setembro de 1997, que dispem
sobre a padronizao, a classificao, o registro, a inspeo, a produo e
a fiscalizao de bebidas. Dirio Oficial da Unio, Braslia. 2002a Disponvel
em: http://207.21.196.110/decretos/d-004072-03-01-2002.htm. Acesso em:
17 set. 2003.

BRASIL. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.


Legislao. Resoluo n.475, de 19 de maro de 2002. Disponvel em:
http://www.anvisa.gov.br/legis/resol/475_02.htm. Acesso em: 12 de jul.
2002b.

BRASIL. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.


Legislao. Resoluo n.899, de 29 de maio de 2003. Disponvel em:
http://www.anvisa.gov.br/legis/resol/899_03.htm. Acesso em: 16 set. 2003a.

BRASIL. Presidncia da Repblica. Casa Civil. Subchefia para Assuntos


Jurdicos. Lei n 10.702, de 14 julho de 2003. Dirio Oficial da Unio,
Braslia, 2003b. Disponvel em:
http://www.presidncia.gov.br/ccivil_03/leis/2003/l10.702.htm. Acesso
em: 02 set. 2003.

BREWER, C. Novel biological and mechanical analysis techiques for alcohol


and other drug of abuse: their role in addiction management and psychiatric
treatment. In: MIECZKOWSKI, T., ed. Drug testing technology sssessment
of field applications. New York: CRC Press, 1999. cap.2, p.33-47.

111
BRIEN, C.P.O. Drug addiction and drug abuse. In: HARDMAN, J.G.; LIMBIRD,
L.E., eds. Goodman & Gilmans the pharmacological basis of therapeutics.
10. ed. New York: McGraw Hill, 2001. cap.24, p.621-644.

BRUCKENER, J.V.; WARREN, D.A. Toxic effects of solvents and vapors. In:
KLASSEN, C.D., ed. Casarett & Doulls Toxicology: the basis science of
poisons. 6. ed. New York: MacGraw Hill, 2001. cap.24, p.869-916.

BRUST, J.C.M. Substance abuse, neurobiologic, and ideology. Arch. Neurol.,


Chicago, v.56, p.1528-1531, 1999.

BUCHWAD, A.; SMITH, J. Saliva teststrips for alcohol testing. Ann. Emerg.
Med., Irving, v. 19, n.3, p.342-343, 1990.

CAETANO, R. Recent thinking about the concept of alcohol dependence. Ann.


Epidemiol., New York, v.6, p.458-462, 1996.

CAETANO, R. A identificao de critrios para dependncia de lcool na


populao geral. J. Bras. Dep. Quim., So Paulo, v.3, n.1, p.4-16, 2002.

CARLINI, E.A.; GALDUROZ, J.C.F.; NOTO,A.R.; NAPPO, S. I Levantamento


domiciliar sobre o uso de drogas psicotrpicas no Brasil-2001. So Paulo:
CEBRID, 2002.

CARVALHO, C.G.; COTRIM, B.C.; SILVA, O.A.; SAVAIA, N. Prevalncia de


alcoolemia em vtimas de causas externas admitidas em centro urbano de
ateno ao trauma. Rev. Sade Pblica, So Paulo, v.36, p.47-54, 2002.

CARVALHO, D.G.; LEYTON, V. Avaliao das concentraes de lcool no ar


exalado: consideraes gerais. Rev. Psiquiatr. Clin., So Paulo, v.27, n.2,
2000. Disponvel em: http://www.hcnet.usp.br/ipq/revista/index.html.
Acesso em: 4 jun. 2003.

112
CHASIN, A.M.; LIMA, I.V. Deteco de cocaine, cocaetileno e
benzoilecgonina em urina por tcnicas cromatogrficas (HPTLC, GC-FID
e GC-MS). Rev. Bras. Toxicol., v.11, supl.2, p.45-49, 1998.

CHRISTOPHER, T.A.; ZECCARDI, J.A. Evaluation of the QED saliva alcohol


test a new, rapid, accurate device for measuring ethanol in saliva. Ann.
Emerg. Med., Irving, v.21, n.9, p.1135-37, 1992.

CHROUCH, D. Alternative drugs, specimens and approaches for non-


regulated drug testing. In: KARCH, S.B., ed. Drug Abuse Handbook. Boca
Raton: CRC Press, 1998, p.776-793.

CHURCH, A.S.; WITTING, M.D. Laboratory testing in ethanol, methanol,


ethylene glycol, and isopropanol toxicities. J. Emerg. Med., New York,
v.15, n.5, p.687-692, 1997.

CONSELHO NACIONAL DE AUTO-REGULAMENTAO PUBLICITRIA.


tica na Prtica. Cd. AutoReg. Public. Cdigo e anexos. Anexo A
Bebidas alcolicas. S.I.: CONAR, 2003. Disponvel em:
http://www.conar.org.br/adCmsDocumentoShow.aspx?documento=274.
Acesso em: 22 set. 2003.

CONSELHO NACIONAL DE AUTO-REGULAMENTAO PUBLICITRIA.


tica na Prtica. Cd. AutoReg. Public. Cdigo e anexos. Anexo P
Vinhos e cervejas. S.I.: CONAR, 2003. Disponvel em:
http://www.conar.org.br/adCmsDocumentoShow.aspx?documento=289.
Acesso em: 22 set. 2003.

CONSELHO NACIONAL DE AUTO-REGULAMENTAO PUBLICITRIA.


tica na Prtica. Cd. AutoReg. Public. Cdigo e anexos. Anexo T
Ices e bebidas assemelhadas. S.I.: CONAR, 2003. Disponvel em:
http://www.conar.org.br/adCmsDocumentoShow.aspx?documento=707.
Acesso em: 22 set. 2003.

113
CONE, E.J. Saliva testing for drugs of abuse. Ann. N. Y. Acad. Sci., New
York, v.694, p.91-127, 1993.

CONE, E. J. Legal, workplace, and treatment drug testing with alternative


biological matrices on global scale. Forensic Sci. Int,, Amsterdam, v.121,
p. 7-15, 2001.

CORRA, C.L. Validao da urina para anlise toxicolgica de etanol em


programas de controle e preveno do uso de lcool e drogas no local de
trabalho. So Paulo, 1997. 97p. Dissertao de Mestrado - Faculdade de
Cincias Farmacuticas Universidade de So Paulo.

CORRA, C.L. Influncia do gnero e da variao dos hormnios femininos


(estrgeno e progesterona) na farmacocintica do etanol. So Paulo,
2001. 107p. Tese de Doutorado - Faculdade de Cincias Farmacuticas
Universidade de So Paulo.

CORRA, C.L.; PEDROSO, R.C. Vantagens e limitaes do uso da urina


como amostra biolgica na dosagem alcolica. Rev. Psiq. Cln., So
Paulo, v.27, n.1, 2000. Disponvel em:
http://www.hcnet.usp.br/ipq/revista/27(1)/artigo27(22).htm. Acesso
em: 12 Nov. 2003.

DAWSON, D.A.; GRANT, B.F.; CHOU, P.S. Gender differences in alcohol


intake. In: HUNT, W.A.; ZAKHARI, S., eds. Stress, gender, and alcohol-
seeking behavior. National Institute on Alcohol, 1995. p. 1-21. (Abuse and
Alcoholism Research Monograph, n.29).

DEAN, R.A.; HARPER, E.T.; DUMAUAL, N.; STOECKEL, D.A.; BOSRON,


W.F. Effects of ethanol on cocaine metabolism: formation of cocaethylene
and norcocaethylene. Toxicol. Appl. Pharmacol., Orlando, v.117, p. 1-8,
1992.

114
DEITRICH, R.A.; PETERSEN, D.R. Interaction of ethanol with other drugs. In:
MAJCHOROWICZ, E.; NOBLE, E.P., eds. Biochemistry and
pharmacology of ethanol. New York: Plenum Press, New York, 1979.
cap.17, p.283-323.

DEGUTI, M.M.; GONALVES, L.L. Marcadores biolgicos do alcoolismo.


Rev. Psiq. Cln., So Paulo, v.27, n.1, 2000. Disponvel em:
http://www.hcnet.usp.br/ipq/revista/27(1)/artigo27(5).htm. Acesso em: 16
Nov. 2003.

DIAMOND, I.; MESSING, R.O. Neurologic effects of alcoholism. West. J.


Med., San Francisco, v.161, p.279-287, 1994.

DEF 2002/2003: Dicionrio de especialidades farmacuticas. 31 .ed.


Rio de Janeiro: Publicaes Cientficas, 2002. 1224p.

DESHMUKH, A.; ROSENBLOOM, M.J.; SASSOON, S.; OREILLY, A.;


PFEFFERBAUM, A.; SULLIVAN, E.V. Alcoholic men endorse more DSM
IV withdrawal symptoms than alcoholic women matched in drinking
history. J. Stud. Alcohol, Piscataway, v.64, p.375-379, 2003.

DROBITCH, R.K.; SVENSSON, C.K. Therapeutic drug monitoring in saliva:


an update. Clin. Pharmacokinet., Auckland, v. 23, p.365-379, 1992.

DRUMMER, O.H.; ODELL, M. Ethanol. In:_____, eds. The forensic


pharmacology of drugs of abuse. London: Arnold, 2001. cap.6, p.274-320.

DUBOWSKI, K.M. Analysis of ethanol in saliva. In: JENKINS, A.J.;


GOLDBERGER, B.A., eds. On site drug testing. Totowa: Humana
Press, 2002. cap.7, p.77-93.

DUFOUR, M.C. What is moderate drinking? Defining drinks and drinking


levels. Alcohol Res. Health, Rockville, v.23, n.1, p.5-14, 1999.

115
ENGELHART, D.A.; JENKINS, A.J. Evaluation of an onsite alcohol testing
device for use in postmortem forensic toxicology. J. Anal. Toxicol., Niles,
v. 25, p. 612-615, 2001.

EPIDEMIOLOGIA: internaes por problemas com drogas psicotrpicas no

Brasil: O lcool ainda o grande vilo. Bol. CEBRID, So Paulo, n.41,

2000. Disponvel em:http://www.unifesp.br/dpsicobio/boletim/ed41/14.htm.

Acesso em: 16 Jan. 2003.

FARRE, M.; DELATORRE, R., LLORENTE, M.; LAMAS, X.; UGENA, B.;
SEGURA, J.; CAMI, J. Alcohol and cocaine interactions in humans. J.
Pharmacol. Exp. Ther., Bethesda, v. 266, n.3, p.1364-73, 1993.

FERRAZ, H. Aguardente de cana. Rev. Eletron. Cienc., So Carlos, n.19,


2003. Disponvel em:
http://www.cdcc.sc.usp.br/ciencia/artigos/aguardente.html. Acesso em: 13
nov. 2003.

FLEMING, M.; MIHIC, S.J.; HARRIS, R.A. Ethanol. In: HARDMAN, J.G.;
LIMBIRD., L.E., eds. Goodman & Gilmans the pharmacological basis of
therapeutics. 10.ed. New York: McGraw Hill, 2001, cap.18, p.429-445.

FRASER, A.D.; ZAMECNIK, J.; KERAVEL, J.; McGRATH, L.; WELLS, J.


Experience with urine drug testing by the Correctional Service of Canada.
Forensic Science Int., Amsterdam, v.121, p.16-22, 2001.

FREZZA, M.; PADOVA, C.; POZZATO, G.; TERPIN, M.; BARAONA, E.;
LIEBER, C.S. High blood alcohol levels in women: the role of decreased
gastric alcohol dehydrogenase activity and first pass metabolism. N.
Engl. J. Med., Waltham, v.322, p.95-99, 1990.

116
GALDUROZ, J.C.; NOTO, A.R. Uso pesado de lcool entre estudantes de 1
e 2 graus da rede pblica de ensino em dez capitais brasileiras. J. Bras.
Dep. Quim., So Paulo, v.1, n.1, p.25-32, 2000.

GLANTZ, M.D. A developmental psychopathology model of drug abuse


vulnerability. In: GLANTZ, M.; PICKENS, R.W., eds. Vulnerability to drug
abuse. Washington: American Psychological Association, 1992. p.398-
418.

GOLDBERGER, B.A.; ROPERO-MILLER, J.O.; ZAWTA, B.; JACKSON, R.


Drug of abuse testing. Mannheim: Roche Diagnostics, 1997. 70p.

GUBALA, W.; ZUBA, D. Saliva as an alternative specimen for alcohol


determination in the human body. Pol. J. Pharmacol., Warsaw, v.54,
p.161-165, 2002.

GUBALA, W.; ZUBA, D. Gender differences in the pharmacokinetics of


ethanol in saliva and blood after oral ingestion. Pol. J. Pharmacol.,
Warsaw, v.55, n.4, p.639-644, 2003.

GUILBAULT, G.G.; PALLESCHI, G. Non-invasive biosensors in clinical


analysis. Biosens. Bioelectron., Amsterdam, v. 10, p. 379-392, 1995.

HADFIELD, R.J.H.; MERCER, M.; PARR, M.J.A. Alcohol and drug abuse in
trauma. Resuscitation., Amsterdam, v.48, p.25-36, 2001.

HAECKEL, R.; PEIFFER, U. Comparison of ethanol concentration in saliva


and blood from police controlled persons. Blutakohol, Hamburg, v.29,
p.342-349, 1992.

HEARN, W.L.; FLYNN, D.D.; HIME, G.W.; ROSE, S., CONFINO, J.C.;
MANTERO-ATIENZA, E.; WELTI, C.V.; MASH, D.C. Cocaethylene: a
unique cocaine metabolite displays high affinity for the dopamine
transporter. J. Neurochem., Oxford, v.52, p.698-701, 1991.

117
HILTUNEN, A.J. Acute alcohol tolerance in socialdrinkers: changes in
subjective effects dependent on the alcohol dose and prior alcohol
experience. Alcohol, New York, v.14, n.4, p.373-378, 1996.

HOBBS, W.R.; RALL, T.W.; VERDOORN, T.A. Hypnotics and sedatives;


ethanol. In: HARDMAN, J.G.; LIMBIRD, L.E.; MOLINOFF, P.B.;
RUDDON, R.W.; GILMAN, A.G., eds. Goodman & Gilmans the
pharmacological basis of therapeutics. 9.ed. New York: McGraw Hill,
1996, cap.17, p.361-396.

HOFFMAN, P.L.; TABAKOFF, B. Ethanol, sedative hypnotics and


glutamate receptor function in brain and cultured cells. Alcohol and
Alcohol., Oxford, suppl.2, p.345-351, 1993.

HUESTIS, M.A.; CONE.E.J. Alternative testing matrices. In: KARCH, S.B.,


ed. Drug abuse handbook. Boca Raton: CRC Press, 1998. cap.11, p.799-
857.

INOUE, T.; SETA, S.; GOLDBERGER, B.A. Analysis of drugs in


unconventional samples. In: LIU, R.H.; GOLDBERGER, B. A., eds.
Handbook of workplace drug testing. Washington: AACC Press, 1995.
cap.5, p.131-158.

JAMAL, M.M.; MORGAN, T.R. Liver disease in alcohol and hepatitis C. Best
Pract. Res. Clin. Gastroenterol., Sidcup, v.17, n.4, p.649-662, 2003.

JONES, A.W. A rapid headspace method for ethyl alcohol determination in


saliva samples. Anal. Biochem., Orlando, v.86, p. 589-596, 1978.

JONES, A.W. Inter and intra-individual in the saliva blood alcohol ratio during
ethanol metabolism. Clin. Chem., Washington, v.25, n.8, p.1394-1398,
1979a.

118
JONES, A.W. Distribution of ethanol between saliva and blood in man.
Clin.Exp. Pharmacol. Phisiol., Carlton, v.6, p.53-59, 1979b.

JONES, A. W. Ethanol distribution ratios between urine and capillary blood in


controlled experiments and in apprehended drinking drives. J. Forensic
Sci.,. West Conshohocken, v.37, n.1, p.21-34, 1992a.

JONES, A.W. Blood and breath alcohol concentrations. Br. Med. J., London,
v.305, p.955-955, 1992b.

JONES, A.W. Pharmacokinetics of ethanol in saliva: comparison with and


breath alcohol profiles, subjective feelings of intoxication, and diminished
performance. Clin. Chem., Washington, v. 39, n.9, p.1837-1844, 1993.

JONES, A.W. Measuring ethanol in saliva with QED enzymatic test device:
comparison of results with blood and breath-alcohol concentrations. J.
Anal.Toxicol., Niles, v.19, p.169-174, 1995.

JONES, A.W.; POUNDER, D.J. Measuring blood alcohol concentration for


clinical and forensic purposes. In: KARCH, S.B., ed. Drug abuse
handbook. Boca Raton: CRC Press, 1998. p.327-355.

JONES, A.W.; ANDERSSON, L. Comparison of ethanol concentration in


venous blood and end-expired breath during a controlled drinking study.
Forensic Science Int., Amsterdam, v.132, p. 18-25, 2003.

JULIEN, R.M. A primer of drug action: a concise, nontechinal guide to the


actions, uses, and side effects of psychoactive drugs. 8.ed. New York:
W.H. Freeman, 1998. p. 64-92.

KHANNA, J.M.; CHAU, A.; SHAH, G., Characterization of the phenomenon of


rapid tolerance to ethanol. Alcohol, v.13, n.6, p.621-628, 1996.

119
KIDWELL, D.A.; HOLLAND, J.C.; ATHANASELIS, S. Testing on drugs of
abuse in saliva and sweat. J. Chromatogr., B: Biomed. Sci. Appl.,
Amsterdam, v. 713, n.1, p.111-135, 1998.

KIESOW, L.A.; SIMONS, C.T.; LONG, W.B. Quantitative determination and


comparison of ethanol in saliva samples of unknown volumes with blood
ethanol levels in human test subjects following ethanol ingestion. Ann.
N.Y. Acad. Sci., New York, v. 694, p.293-295, 1993.

KOSTEN, T.R.; HOLLISTER, L.E. Abuso de drogas. In: KATZUNG, B.G.,


Farmacologia: bsica & clnica. 8.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
2003, cap.32, p. 462-476.

LARINI, L.; SALGADO, P.E.T. Compostos volteis. In: LARINI, L.


Toxicologia. 3.ed. So Paulo: Manole, 1997. p.73-119.

LESHNER, A. I. The essence of drug addiction. National Institute on Drug


Abuse., Maryland, 2001. Disponvel em:
http://www.drugabuse.gov/Published_Articles/Essence.htm. Acesso em:
05 mar. 2003.

LIEBER, C.S.; ABITTAN, C.S. Pharmacology and metabolism of alcohol


including its metabolic effects and interactions with other drugs. Dermatol.
Clin., Orlando, v.17, p. 365-379, 1999.

LIEBER, C.S. Microssomal ethanol-oxidizing system (MEOS): the first 30


years (1968-1998) a review. Alcohol Clin. Exp. Res., Baltimore, v.23,
n.6, p.991-1007, 1999.

LIMA, D.R. Alcoolismo. In: _____. Manual de Farmacologia, teraputica e


toxicologia. Rio de Janeiro: Medsi, 2003. v.2, p.72-79.

LITTLE, H.J. The role of calcium channels in drug dependence. Drug Alcohol
Depend., Amsterdam, v.38, p.173-194, 1995.

120
LORIMIER, A.A. Alcohol, wine, and health. Am. J. Surg., Philadelphia, v.180,
n. 5, p.357-361, 2000.

MACCHIA, T.; MANCINELLI, R.; GENTILI, S.; LUGARESI, E.C.; RAPONI, A.;
TAGGI ,F. Ethanol in biological fluids: headspace G.C. measurement. J.
Anal. Toxicol., Niles, v.19, p.241-246, 1995.

MARQUES, A.C.P.R.; RIBEIRO, M. lcool. abuso e dependncia. In:


LARANJEIRA, R., Usurios de substncias psicoativas: abordagem,
diagnstico e tratamento. 2.ed. So Paulo: CREMESP/AMB, 2002. cap.2,
p.29-47.

MASTERS, S.B. Os lcoois. In: KATZUNG, B.G. Farmacologia: bsica &


clnica. 8.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2003, cap.23, p. 334-
345.

McCOLL, K.E.L.; WHITING, B.; MOORE, M.R.; GOLDBERGER, A.


Correlation of ethanol concentrations in blood and saliva. Clin. Sci.,
Colchester, v.56, p.283-286, 1979.

MDIO, A.F. coord. Glossrio de toxicologia, So Paulo: Roca, 1992, 95p.

MILHORN Jr, T.H. CNS Depressants: alcohol. In: Chemical Dependence


Diagnosis Treatment and Prevention, New York, p.124-148, 1990.

MOFFAT, A. C.; JACKSON, J.V.; MOSS, M.S.; WIDDOP, B., Part 2 :


monographs analytical and toxicological data. In:_____. eds. Clarkes
isolation and identification of drugs, 2a . ed. London: Pharmaceutical
Press, 1986. p.593-594.

MORROW, A. L.; VANDOREN, M.J.; PENLAND, S.N.; MATTHEWS, D. B.


The role for GABAergic neuroactive steroids in ethanol action, tolerance
and dependence. Brain Res. Rev., Amsterdam, v.37, p.98-109, 2001.

121
MOSKOWITZ, H.; BURNS, M.; FERGUSON, S. Police officers detection of
breath odors from alcohol ingestion. Accid. Anal. Prev., Oxford, v.31,
p.175-180, 1999.

MOSLEN, M.T. Toxic responses of the liver. In: KLASSEN, C.D.; AMDUR,
M.O.; DOULL, J. eds. Casarett & Doulls toxicology: the basis science of
poisons. 6. ed. New York: MacGraw Hill, 2001. cap.13, p.471-489.

MOURO, L.N.G.; MUOZ, D.R.; MOURO, T.T.G.; ANDRADE, A.G.


Aembriaguez e o trnsito: avaliao da nova lei de trnsito no que se
refere abordagem da embriaguez. Rev. Psiq. Cln., So Paulo, v.27(2),
2000, 10p. Disponvel em:
http://www.hcnet.usp.br/ipq/revista/r27(2)/art83.htm. Acesso em: 15 nov.
2003.

MUKAMAL, K.J.; CONIGRAVE, K.M.; MITTLEMAN, M.A., Roles of drinking


pattern and type of alcohol consumed in coronary heart disease in men.
N. Engl. J. Med., Watham, v.348, p.109-118, 2003.

MUSSHOFF, F.; DALDRUP, T. Determination of biological markers for


alcohol abuse. J. Chromatogr., B: Biomed. Sci. Appl., Amsterdam, v.713,
p.245-264, 1998.

NATIONAL COUNCIL ON ALCOHOLISM AND DRUG DEPENDENCE. The


disease of alcoholism. NCADD Publications. New York, 1990. Disponvel
em: http://www.ncadd.org/pubs/disease.html. Acesso em: 11 set. 2003.

NEIMAN, J. Alchol as a risk factor for brain damage: neurological aspects.


Alcohol Clin. Exp. Res., Baltimore, v.22, suppl.7, p.346-351, 1998.

NOTO, A.R. O uso das drogas psicotrpicas no Brasil: ltima dcada e


tendncias. Mundo Sade, So Paulo, v.23, n.1, p.5-9, 1999.

122
NUTT, D.J.; PETERS, T.J. Alcohol: the drug. Br. Med. Bull., Oxford, v.50, n.1,
p.5-17, 1994.

OLIVEIRA, L.A.C. Perfil do dependente qumico ontem e hoje. Rev. Mundo


Sade, So Paulo, v.23, n.1, p.24-27, 1999.

OLIVEIRA, A.F.; ANEFALOS, L.C.; GARCIA, L.A.F.; ISTAKE, M.;


BURNQUIST, H.L. Sistema agroindustrial da cachaa e potencialidades
de expanso das exportaes. Ribeiro Preto: FEARP/USP, 2001.
Disponvel em: www.fearp.usp.br/egna/resumos/Oliveira.pdf. Acesso em:
11 set. 2003.

ORGANIZAO MUNDIAL Da SADE. Classificao de transtornos mentais


e de comportamento da CID-10: descries clnicas e diretrizes
diagnsticas. Porto Alegre: Artes Mdicas; 1993. p.69-82.

OSBORN, H. Ethanol. In: GOLDFRANK, L.R.; FLOMENBAUM, N.A.L.;


LEWIN, N.A.; WEISMAN, R.; HOWLAND, M.A.; HOFFMAN, R.S., eds.
Goldfranks toxicologic emergencies. 5.ed. Norwalk: Appleton & Lange,
1994. cap.57, p.813-824.

PARKINSON, A. Biotransformation of xenobiotics. In: KLASSEN, C.D.;


AMDUR, M.O.; DOULL, J., eds. Casarett & Doulls toxicology: the basis
science of poisons. 6. ed. New York: MacGraw Hill, 2001. cap.6, p.131-
224.

PESSINI, L. Drogas: o holocausto silencioso. Rev. Mundo Sade, So Paulo,


v.23, n.1, p.3-4, 1999.

PIANO, M. R. Alcohol and heart failure. J. Card. Failure., Orlando, v.8, n.4,
p.239-246, 2002.

123
POUNDER, D.J.; JONES, A.W. Measuring alcohol post mortem. In: KARCH,
S.B., ed. Drug abuse handbook. Boca Raton: CRC Press, 1998. p.356-
374.

PRAGST, F.; AUWAERTER, V.; SPORKERT, F.; SPIEGEL, K. Analysis of


fatty acid ethyl esters in hair as possible markers of chronically elevated
alcohol consumption by head, space solid-phase microextraction (HS-
SPME) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Forensic
Science Int., Amsterdam, v.121, p. 76-88, 2001.

RAMCHANDANI, V.A.; BOSRON, W.F.; LI, T.K. Research advances in


ethanol metabolis. Pathol. Biol., Paris, v.49, p.676-682, 2001.

RAMOS, K.S.; MELCHERT, R.B.; CHACON, E.; JUNIOR, D.A. Toxic


responses of the heart and vascular systems In: KLASSEN, C.D.;
AMDUR, M.O.; DOULL, J. eds. Casarett & Doulls toxicology: the basis
science of poisons. 6. ed. New York: MacGraw Hill, 2001. cap.18,
p.597-651.

RANG H.P.; DALE, M.M.; RITTER, J.M. Dependncia e abuso de drogas.


In:_____. eds., Farmacologia. 4.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
2001a. cap.39, p.515-531.

RANG H.P.; DALE, M.M.; RITTER, J.M. Sistema vascular. In:_____. eds.
Farmacologia. 4.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001b, cap.15,
p.229-246.

RODIONOV, Y.V.; KEPPEN, O.I.; SUKHACHEVA, M.V. A photometric assay


for ethanol. Appl. Biochem. Microbiol., New York, v.38, n.4, p.395-396,
2002.

124
ROSETT, L.R. Clinical pharmacology of the fetal alcohol syndrome. In:
MAJCHOROWICZ, E.; NOBLE, E.P., eds. Biochemistry and
pharmacology of ethanol. New York: Plenum Press, 1979, cap.25, p.485-
509.

S, L.M. Identificao rpida do etanol na saliva humana para diagnstico de


embriaguez. So Paulo, 1969. 57p. Tese de Doutorado - Faculdade de
Cincias Farmacuticas Universidade de So Paulo.

SO PAULO (Estado). ASSEMBLIA LEGISLATIVA; UNIVERSIDADE DE


SO PAULO. FACULDADE DE MEDICINA. HOSPITAL DAS CLNICAS;
SO PAULO (Estado). SECRETARIA DE SEGURANA. Mais vida
menos lcool. So Paulo: Faculdade de Medicina, Fundao Zerbini,
Grupo Papaiz, s.d.

SCHECHTER, M.D.; MEEHAN, S.M. The letal effects of ethanol and cocaine
and their combination in mice: implications for cocaethylene formation.
Pharmacol. Biochem. Behav., New York, v.52, n.1, p. 245-248, 1995.

SCHRAMM, W.; SMITH, R.H.; CRAIG, P.A. Drugs of abuse in saliva. J. Anal.
Toxicol., Niles, v.16, p.1-9, 1992.

SCIVOLETTO, S.; MALBEGIER, A. Etanol. In: OGA, S. Fundamentos da


Toxicologia. 2.ed. So Paulo: Atheneu, 2003. p.284-296.

SILVA, O.A. Consumo de drogas de abuso no ambiente de trabalho no


Brasil. Rev. Bras. Toxicol., So Paulo, v.11, supl.1, p.7-10, 1999.

SILVA, O.A.; YONAMINE, M.; ODO, S. A. Drug abuse testing in the


workplace: the Brazilian experience. In: CONGRESS OF TOXICOLOGY
IN DEVELOPMENT COUNTRIES, 4, Antalya, 1999. Abstracts. Antalya:
Turkish Society of Toxicology, 1999. p.21

125
SPIEHLER, V.; BALDWIN, D.; HAND, C. Analysis of drugs in saliva. In:
JENKINS, A.J.; GOLDBERGER, B.A. eds. On site drug testing. Totowa:
Humana Press, 2002, cap.8, p.95-109.

SUNSHINE, I. Immunoassy. In: SUNSHINE, I. Was it a poisoning? S.I.


American Academy of Forensic Sciences, 1998, p.157-160.

THERAPONDOS, G.; DELAHOOKE, T.E.S.; HAYES, P.C. Health effects of


alcohol and alcoholism. Dermatol. Clin., Orlando, v.17, p.381-389, 1999.

TOLEDO, F.C.P. Identificao de benzoilecgonina por imunofluorescncia


polarizada em cabelo de usurios de cocana. So Paulo, 1999. 97p.
Dissertao de Mestrado - Faculdade de Cincias Farmacuticas
Universidade de So Paulo.

UNITED NATIONS OFFICE FOR DRUG CONTROL AND CRIME


PREVENTION. Guidelines for testing drugs under international control in
hair, sweat and saliva. Austria: United Nations Publications, 2001, 23p.

UNITED STATES. Department of Heath and Human Services. National


Institutes of Health. National Institute on Alcohol Abuse and
Alcoholism. Publicaes. 2002. Disponvel em:
http://www.niaaa.nih.gov/publications/harmsp.htm. Acesso em: 11
jul. 2003.

UNIVERSIDADE DE SO PAULO. Faculdade de Medicina. Hospital das

Clnicas. Instituto de Psiquiatria. Grupo Interdisciplinar de Estudos de

lcool e Drogas. Introduo problemtica do lcool., 1999. Disponvel

em: http://www.rc.unesp.br/conhecer/apostilas/problematica.html. Acesso

em 16 janeiro 2003.

126
UNITED STATES. Department of health and human services; UNITED
STATES. Department of agriculture. Nutrition and your health: guidelines
for Americans. 4.ed. Washington: USDA, 1995.

WEATHERMON, R.; CRABB, D.W. Alcohol and medication interactions.


Alcohol Res. Health, Rockville, v.23, n.1, p.40-51, 1999.

WILLIAMS, G.D.; STINSON, F.S.; SANCHEZ, L.L.; DUFOUR, M.C. Apparent


per capita alcohol consumption. Surveillance Report, Bethesda, n.43,
p.1977-1995, 1997.

WINECKER, R.E.; GOLDBERGER, B.A. Urine specimen suitabity for drug


testing. In: KARCH, S.B., ed. Drug abuse handbook. Boca raton: CRC
Press, 1998. p.764-793.

WORLD HEALTH ORGANIZATION. Lexicon of alcohol and drugs terms.


World Health Organization. Geneva, 1994, 65p.

WORLD HEALTH ORGANIZATION. International guide for monitoring


alcohol consumption and related harm. World Health Organization.
Geneva, 2000. Disponvel em:
http://www.who.int/substance_abuse/PDFfiles/guidemontr_alcoholconsum
.pdf. Acesso em: 22 dez. 2003.

WORLD HEALTH ORGANIZATION. search: alcohol country profile:


data.euro.who.int/?TabID=2422. table: price comparison. Disponvel em:
http://data.euro.who.int/Default.aspx?TabID=2422. Acesso em: 18 nov.
2003a.

WORLD HEALTH ORGANIZATION. search: alcohol country profile:


data.euro.who.int/?TabID=2422. table: drink drive. Disponvel em:
http://data.euro.who.int/Default.aspx?TabID=2422. Acesso em: 18 nov.
2003b.

127
WORLD HEALTH ORGANIZATION. global alcohol database. Alcohol
consumption. Adult per capita alcohol consumption. Brasil. Country: Brasil
Disponvel em: http://www3.who.int/whosis/menu. Acesso em: 23 jul.
2003c.

WURST, F.M.; KEMPTER, C.; SEIDL, S.; ALT, A. Ethyl glucuronide a marker
of alcohol consumption and a relapsed marker with clinical and forensic
implications. Alcohol Alcohol., Oxford, v. 34, n.1, p.71-77, 1999.

ZAGO, J.A.; SANTOS,S.A.M.; SALZANI, J.C.; ARAJO, J.A.S.M.


Dependncia de lcool por uso indevido de substncia fitoterpica. J.
Bras. Psiquiatr., So Paulo, 4p. Disponvel
em:http://www.unifesp.br/dpsiq/polbr/ppm/relato03.htm. Acesso em: 04
nov. 2003.

128
10. ANEXOS

ANEXO I

PROTOCOLO DE APROVAO DO COMIT DE TICA EM


PESQUISA DA FCF/USP

129
130
ANEXO II

QUESTIONRIO SUBMETIDO AOS VOLUNTRIOS QUE


PARTICIPARAM DO ESTUDO CONTROLADO DE INGESTO DE
BEBIDA ALCOLICA

131
Identificao da amostra: N...................

QUESTIONRIO

1. Dados pessoais:

Sexo:
( ) Masculino ( ) Feminino

Idade:.................anos

2. Medicamentos utilizados nos ltimos 5 dias (remdios para gripe, resfriados,


remdios para emagrecimento, etc).
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________

3. Voc usou recentemente:

( ) bebidas alcolicas (etanol)

Caso afirmativo, data (dia e hora) do ltimo uso:


_________________________

132
ANEXO III

MODELO DO TERMO DE AUTORIZAO E


CONSENTIMENTO PS - INFORMAO APLICADO AOS
VOLUNTRIOS DO ESTUDO CONTROLADO DE INGESTO
DE BEBIDA ALCOLICA

TERMO DE CONSENTIMENTO PS-INFORMAO

133
I DADOS DE IDENTIFICAO DO SUJEITO DA PESQUISA

1. Nome :
...............................................................................................................................
...............................................................................................................................

Documento de Identidade N :................................................Sexo: ( )M ( )F


Data de Nascimento:............/............/...........
Endereo:.........................................................................................N:.................
Apto:.........
Bairro:..............................................................Cidade:..........................................
CEP:...................................................Telefone:.....................................................

II DADOS SOBRE A PESQUISA

1.Ttulo do Protocolo de Pesquisa: Determinao de etanol em saliva

2.Pesquisadora: Ndia Tawil.


Cargo/Funo: Farmacutica-Bioqumica.
Inscrio Conselho Regional N 25. 412
Departamento FCF/USP: Anlises Clnicas e Toxicolgicas.

3.Avaliao do risco da pesquisa: Risco mnimo


Obteno de amostra de saliva considerada no invasiva.

4.Durao da Pesquisa: pesquisa considerada de curta durao, pois consta


de poucas coletas de amostra.

134
III - REGISTRO DAS EXPLICAES DO PESQUISADOR AO VOLUNTRIO
OU SEU REPRESENTANTE LEGAL SOBRE A PESQUISA CONSIGNANDO:

O voluntrio ir fornecer uma amostra de saliva, coletada por dois meios:


basto de algodo e um coletor especfico fornecido pelo pesquisador
responsvel - Salivette. Este tipo de coleta no apresenta risco para o
voluntrio, por se tratar de um procedimento seguro e no invasivo. A amostra
de saliva fornecida ser submetida ao teste rpido Q.E.D. A 150, e tcnica
chamada cromatografia em fase gasosa com separao por aquecimento
headspace - que ir determinar quantidade de etanol presente. Os resultados
obtidos sero analisados juntamente com as respostas dos questionrios.

IV ESCLARECIMENTOS FORNECIDOS PELO PESQUISADOR SOBRE


GARANTIAS DO SUJEITO DA PESQUISA

1. Acesso, a qualquer tempo, s informaes sobre procedimentos, riscos e


benefcios relacionados pesquisa, inclusive para dirimir eventuais dvidas.
2. Liberdade de retirar seu consentimento a qualquer momento e de deixar de
participar do estudo, sem que isto traga prejuzo continuidade da
assistncia.
3. Salvaguarda da confidencialidade, sigilo e privacidade.

135
V INFORMAES DE NOMES, ENDEREOS E TELEFONES DOS
RESPONSVEIS PELO ACOMPANHAMENTO DA PESQUISA:

Pesquisadores responsveis: Prof. Dr. Ovandir Alves Silva


Ndia Tawil
Endereo: Universidade de So Paulo
Faculdade de Cincias Farmacuticas
Av. Prof. Lineu Prestes, 580 Bloco 13B- So Paulo - SP
CEP: 05508-900
Fone: 3091-2194 / 3031-9055

VI OBSERVAES COMPLEMENTARES:

.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................

VII CONSENTIMENTO PS-ESCLARECIDO

136
Declaro que, aps convenientemente esclarecido pelo pesquisador e ter
entendido o que me foi explicado, consinto em participar do presente
Protocolo de Pesquisa.

So Paulo, __________ de _____________________de ___________.

Assinatura do sujeito de pesquisa Assinatura do Pesquisador


ou responsvel legal
(carimbo ou nome legvel)

Prezado participante

Meu nome Ndia Tawil, sou Farmacutica - Bioqumica e mestranda do


Programa de Ps Graduao em Toxicologia e Anlises Toxicolgicas da
Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo.

137
Estou desenvolvendo um estudo para a determinao de lcool (etanol) em
saliva e para tal necessito de sua participao.
Sendo o lcool uma droga de uso lcito e o alcoolismo uma doena
importante adoo de medidas que colaborem na reduo de seu consumo,
pois a ingesto de lcool est intimamente relacionada com: acidentes no
trnsito e ocorrncias no ambiente de trabalho e internaes em clnicas e
hospitais. Dessa forma necessrio desenvolver mtodos que permitam
verificar a concentrao de etanol no organismo, possibilitando que pessoas
(inclusive voc) bebam de acordo com seus limites biolgicos, evitando a
exposio a riscos desnecessrios.
O objetivo desse estudo investigar a possibilidade de utilizao da amostra
de saliva como matriz alternativa para determinao de etanol em campo
aberto, substituindo as matrizes convencionais atualmente utilizadas.
O estudo no oferece riscos para participante, pois as coletas de saliva so
feitas com coletores individuais e especficos, no tendo carter invasivo e no
transmitindo nenhum risco de contaminao para o participante.
Voc poder escolher entre as bebidas: cerveja e usque e a quantidade a ser
ingerida deve ser proporcional ao seu peso, no ultrapassando 0,68g/Kg de
etanol, concentrao que no ocasiona embriaguez. A ingesto da bebida
ocorrer em 20 (vinte) minutos e aps isso sero realizadas coletas de saliva
no intervalo de 50 (cinqenta) a 130 (cento e trinta) minutos.
O estudo annimo e a confidencialidade de sua participao ser preservada.
A identificao das amostras ser feita apenas atravs de uma numerao
impressa nos coletores de saliva e nos testes rpidos aplicados. As dvidas
podero ser esclarecidas pelo Prof. Dr. Ovandir Alves Silva ou por mim no
telefone (11) 3889-8960.

Se voc quiser participar do estudo, basta assinar a autorizao na pgina


seguinte.

138
TERMO DE AUTORIZAO

Eu............................................................Identidade n.......................................
autorizo a coleta de amostras de saliva aps ter sido esclarecido pelo
responsvel pela pesquisa e ter entendido os procedimentos de coleta.

Data......./........./........ ___________________________
Assinatura do doador
da amostra

139

Você também pode gostar