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REF P1-50FRT
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USO PREVISTO
El kit Toxoplasma gondii Real-TM es un test in vitro de amplificacin de cidos
nucleicos para la deteccin cualitativa del ADN de Toxoplasma gondii en la muestra
(sangre perifrica, sangre de cordn umbilical, leucocitos de sangre perifrica o de
cordn umbilical, piezas de biopsia o autopsia, lquido cefalorraqudeo y lquido
amnitico) mediante la deteccin de hibridacin-fluorescencia en tiempo real.
Los resultados del PCR se tomarn en cuenta dentro del complejo diagnstico de
la enfermedad.
Pos Control DNA T. gondii /STI (+) Lquido incoloro claro 0.1 1 tubo
CONTROL DE CALIDAD
De acuerdo al Sistema de Gestin de Calidad ISO 13485 de Sacace, cada lote es
probado con especificaciones predeterminadas para asegurar la calidad del producto.
Algunos componentes del kit contienen azida de sodio como conservador. No utilice tubos
metlicos para la transferencia de reactivos.
El muestreo de materiales biolgicos para anlisis de PCR, transporte y almacenamiento
se describe en detalle en el manual del fabricante. Se recomienda que lea este manual
antes de comenzar el trabajo.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
Todos los componentes del kit Toxoplasma gondii Real-TM (excepto la polimerasa
TaqF, PCR-mix-2-FRT, y PCR-mix-1-FRT Toxoplasma gondii) se almacenarn de 2
8 C. Todos los componentes del kit Toxoplasma gondii Real-TM son tiles hasta la
fecha de caducidad en la etiqueta. La vida til de los reactivos antes y despus del primer
uso es la misma, a menos que se indique lo contrario.
AISLAMIENTO DE ADN
Se podr utilizar cualquier kit comercial de aislamiento de ARN/ADN, siempre y cuando
haya sido validado por IVD-CE para los tipos de muestra indicados en el prrafo
RECOLECCIN, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS de este
manual.
AJUSTE DE INSTRUMENTOS
Instrumentos tipo rotor (RotorGene 3000/6000, RotorGene Q)
Ms ajustes/
Eliminacin de Pendiente
Canal Umbral
valores atpicos correcta
(Outlier)
FAM/Green 0.03 10 % On
JOE/Yellow 0.03 10 % On
1
Por ejemplo Rotor-Gene 3000/6000/Q (Corbett Research, Qiagen)
2 Por ejemplo, SaCycler-96 (Sacace), CFX/iQ5 (BioRad); Mx3005P (Agilent), ABI 7300/7500/StepOne Real Time
PCR (Applied Biosystems), SmartCycler (Cepheid), LineGeneK (Bioer)
ANLISIS DE DATOS
El producto de amplificacin de ADN de Toxoplasma gondii se detecta en el canal
JOE/Yellow/HEX, el producto de amplificacin del control interno se detecta en el canal
FAM/Green. Los resultados son interpretados por el software del instrumento de PCR
por el cruce (o el no cruce) de la curva de fluorescencia en la lnea del umbral.
Los resultados del anlisis se consideran vlidos slo si los resultados de las muestras
de control cumplen con lo siguiente:
Resultados de control
Canal de control
CARACTERSTICAS DE PRESENTACIN
Sensibilidad
La sensibilidad analtica del kit Toxoplasma gondii Real-TM es de 400 copias de ADN
de Toxoplasma gondii / ml.
Las caractersticas analticas del k it Toxoplasma gondii Real-TM estn garantizadas slo
cuando se utiliza un k it de reactivos adicional (DNA/RNA-prep o DNA-sorb-C).
Especificidad
La especificidad analtica del kit Toxoplasma gondii Real-TM se asegura mediante la
seleccin de cebadores y sondas especficas probadas bajo estric tas condiciones de
reaccin.
Los cebadores y sondas se verificaron para detectar posibles homologas a todas las
secuencias publicadas en bancos de genes mediante anlisis de comparacin de
secuencias. La especificidad clnica del kit Toxoplasma gondii Real-TM se confirm en
pruebas clnicas de laboratorio.
SOLUCIN DE PROBLEMAS
1. Seal dbil o ausente del control interno (Fam/Green): requiere el re-anlisis de la
muestra.
Se inhibi la PCR.
Asegrese de utilizar un mtodo de extraccin de ADN recomendado
y siga las instrucciones del fabricante.
Recentrifugar todos los tubos, durante 2 min a velocidad mxima
(12000 16000 g), antes de pipetear el ADN extrado y tomar el
sobrenadante cuidadosamente. No altere el centrifugado (pellet),
puede inhibir la reaccin.
Las condiciones de almacenamiento de los reactivos no cumplen con las
instrucciones.
Compruebe las condiciones de almacenamiento.
Las condiciones de la PCR no cumplan con las instrucciones.
Compruebe las condiciones de la PCR y para la deteccin del control
interno seleccione el canal de fluorescencia reportado en el protocolo.
Extraccin inapropiada del ADN.
Repita el anlisis a partir de la etapa de extraccin de ADN
El control interno no se aadi a la muestra durante el pipeteado de
los reactivos.
Preste atencin durante el procedimiento de extraccin de
ADN
Diagnstico y tratamiento de parasitemia por Toxoplasma en pacientes con SIDA por deteccin de
gen posterior a amplificacin y PCR. Filice, GA. et al. Revista Microbiologa Clnica 1993; 31:2327-
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Deteccin de Toxoplasma gondii en liquido cefalorraqudeo en pacientes con SIDA por PCR. S F
Parmley, F D Goebel y J S Remington Revista de Microbiologa Clnica, 1992. Noviembre; 30(11):
30003002
Precaucin!
Nmero de Lista
Control negativo de la
Fabricante C
extraccin
IC Control interno
Fecha de
caducidad