Cuantificacin Colorimtrica de la Concentracin.
Daniela Guevara, madguevaragu@unal.edu.co (TIUN 2131317723) 1
Natali Torres, cntorresc@unal.edu.co (TIUN 2131611099) 1
Fabian Lopez, quimicagenunal@gmail.com 2
.
RESUMEN: En el presente informe se
presentan los resultados obtenidos a partir de la
prctica de colorimetra para determinar la
concentracin de una solucin problema de Azul de
Metileno. Primero, se obtiene una curva de
calibracin de las mediciones de absorbancia con el
uso de un espectrofotmetro, luego se determina la
concentracin de una dilucin de la muestra
problema por interpolacin de datos en la curva de
calibracin, para finalmente determinar la
concentracin real de la muestra (AM). Se obtuvo
un porcentaje de error de 39,8%, mediante el
clculo de la exactitud. Se evidencia que la
concentracin es directamente proporcional a la
absorbancia, como se plantea en la Ley de Beer.
PALABRAS CLAVE: Absorbancia, colorimetra,
curva de calibracin, diluciones, disoluciones, Ley
de Beer-Lambert, transmitancia.
ABSTRACT. In this report the results
obtained from the practice of colorimetry to
determine the concentration of a problem solution
are presented. First, a calibration curve of
absorbance using a spectrophotometer is obtained,
then the concentration of a dilution of the test
sample by interpolation of data in the calibration
curve is determined and finally the actual
concentration of the sample is determined. an error
rate of 39,8% was obtained, by calculating
accuracy. Is evidence that the concentration is
directly proportional to the absorbance, as outlined
in Beer's Law.
Keywords. Absorbance, colorimetry,
calibration curve, dilutions, solutions, Beer-Lambert
law, transmittance.
1 INTRODUCCIN
La colorimetra se usa para medir la longitud de
onda y la intensidad de la radiacin electromagntica en
la regin visible del espectro, es usada extensivamente
para la identificacin y la determinacin de las
concentraciones de sustancias y soluciones que
absorben la luz.
1
Estudiantes del Departamento de Biologa, Ciencias, UN.
2
Docente a cargo de la materia Laboratorio de Tcnicas Bsicas en Qumica, Departamento de Qumica, Ciencias, UN.
1
Existe una ley fundamental en la colorimetra: la Ley
de Lambert - Beer, la cual relaciona la concentracin de
una molcula en disolucin y su capacidad de absorcin,
estas dos variables son directamente proporcionales. [1]
Para medir la absorbancia se utiliza un instrumento
llamado colormetro y si se quiere trabajar no solo con la
luz visible sino tambin en otras regiones del espectro
electromagntico como lo son el infrarrojo o el ultravioleta
se utiliza un espectrofotmetro. [2]
Todas las molculas absorben energa radiante en
una longitud de onda u otra. La cantidad retenida se
denomina absorbancia (A) de la muestra, la cual depende
de la concentracin de la especie que absorbe; y a la
cantidad que sale se le llama transmitancia (T).
Usualmente se usa el porcentaje de transmitancia,
tomando como 100% la intensidad de la radiacin
incidente y comparndola con la radiacin de salida. [3]
A (Absorbancia) = -log10 T (transmitancia)
Al existir una relacin directa entre la concentracin
de las especies en una solucin coloreada y la
absorbancia de la misma, es posible establecer una curva
de calibracin a partir de una serie de soluciones de
diferente concentracin de la muestra. [4]
De aqu que se pueda establecer la concentracin
de una muestra diluida, teniendo en cuenta la
absorbancia en determinada longitud de onda, y entonces
determinar la concentracin de la muestra problema de
metileno de la cual se obtuvo dicha dilucin, interpolando
los datos de la curva de calibracin obtenida con el
espectrofotmetro.
1.1 OBJETIVOS
Afianzar los conocimientos en preparacin de
diluciones.
Determinar la concentracin de una solucin
empleando colorimetra.
Interpretar la ecuacin de la recta y el coeficiente
de correlacin de una curva de calibracin.
2 METOLOGA
En el laboratorio se utiliz una solucin patrn de la cual
se obtuvieron todas las diluciones grupales. Cada grupo
se encarg de determinar la absorbancia en una dilucin
especfica para tabular los datos y obtener una curva de
calibracin grupal.
2.1 Preparacin de Solucin estndar para 3 DATOS Y OBSERVACIONES
Curva de Calibracin.
3.1 Preparacin de Solucin estndar para
Curva de Calibracin.

Tabla 3.1. Datos para Curva de Calibracin

Volumen (mL) Absorbancia
Concentracin
Grupos
patrn (mg/L) Sln stock (Curva de (Muestra
Agua
(20ppm) Calibracin) Problema)

(stock) 20,00 10,00 0,00 2,08

1 19,00 9,50 0,50 1,99 0,613
2 18,00 9,00 1,00 1,94 0,613
3 16,00 8,00 2,00 2,00 0,675
4 15,00 7,50 2,50 1,94 0,660
5 14,00 7,00 3,00 1,86 0,675
6 13,00 6,50 3,50 1,82 0,672
7 12,00 6,00 4,00 1,75 0,613
8 10,00 5,00 5,00 1,66 0,613
9 8,00 4,00 6,00 1,34 0.683
10 6,00 3,00 7,00 1,10 0,671
11 5,00 0,78
12 4,00 2,00 8,00 0,66 0,671
13 3,00 0,49

14 0,25
2.2 Determinacin de concentracin
desconocida de azul de metileno en
muestra problema

Figura 3.1. Grfica de Absorbancia vs Longitud de Onda

de Curva de Calibracin determinada por el
espectrofotmetro y el LabQuest.

Se utiliz un espectrofotmetro que tiene incorporado el

programa LabQuest, el cual nos permiti determinar la
curva de calibracin para determinar la concentracin de
la muestra.

El rango de longitud de onda fue en acuerdo con el

grupo de 660nm.

2
3.2 Determinacin de concentracin 4.2 Curva de Calibracin.
desconocida de azul de metileno en
muestra problema

Figura 4.1. Registro de Absorbancia de Muestra

Figura 3.2. Grfica de Absorbancia vs Longitud de Onda
Problema determinada por el espectrofotmetro y el
de Muestra Problema determinada por el
LabQuest, en una longitud de onda de 660,00 nm.
espectrofotmetro y el LabQuest.
4.3 Determinacin de concentracin
4 CLCULOS Y RESULTADOS desconocida de azul de metileno en
muestra problema
4.1 Preparacin de Solucin estndar para
Curva de Calibracin. Se realiza una curva de calibracin para determinar
la ecuacin de la recta.
1 1 = 2 2

V1 = Volumen Alcuota
C1= Concentracin Muestra Patrn = 20 ppm
V2 = Volumen de Aforo = 10mL
C2 = Concentracin dilucin = 8 ppm

2 2 (10 )(8 )
1 = =
1 (20 )

1 = 4

Se toman 4mL de muestra patrn y se llevan a un

volumen final de 10mL en el baln aforado.
Grfica 4.1. Curva de Calibracin Muestra de Azul de
Metileno Absorbancia vs Concentracin.

Ecuacin de la recta:

Y=mx+b
Donde,
M = Pendiente = 0,09656
b = Interseccin eje y = 0,3883
x = Absorbancia (660 ) = 0,683
r = 0,9534

Reemplazando y despejando x, se tiene:

0,683 0,3883
=
0,09656

Figura 4.1. Muestra Preparada a 8ppm X = 3,0519 ppm

3
Se obtiene una concentracin de la muestra de Volumen (mL) Absorbancia
3,052ppm de azul de metileno segn la ecuacin de Grupos
Concentracin
patrn (mg/L) Sln stock (Curva de (Muestra
la recta de la curva de calibracin. (20ppm)
Agua
Calibracin) Problema)

(stock) 20,00 10,00 0,00 2,08

5 ANLISIS DE RESULTADOS
1 19,00 9,50 0,50 1,99 0,613
Se realizaron los clculos para preparar las 2 18,00 9,00 1,00 1,94 0,613
diluciones y posteriormente realizar la curva de
3 16,00 8,00 2,00 2,00 0,675
calibracin.
4 15,00 7,50 2,50 1,94 0,660
La tabla No. 3.1 muestra los datos recolectados de 5 14,00 7,00 3,00 1,86 0,675
los volmenes que se tomaron como alcuotas para
6 13,00 6,50 3,50 1,82 0,672
preparar cada una de las diluciones. En nuestro
caso, se prepar una dilucin de 8ppm y se tom 7 12,00 6,00 4,00 1,75 0,613
una alcuota de 4mL para llevarla a un volumen final 8 10,00 5,00 5,00 1,66 0,613
de 10mL.
9 8,00 4,00 6,00 1,34 0.683
La curva de calibracin obtenida por el LabQuest, 10 6,00 3,00 7,00 1,10 0,671
se muestra en la Figura 3.2. Esto disminuy las 11 5,00 0,78
labores adicionales de realizar una grfica de
calibracin de Absorbancia vs Longitud de Onda. 12 4,00 2,00 8,00 0,66 0,671
13 3,00 0,49
Con esta grfica y la tabla de datos obtenida por
14 0,25
LabQuest (Figura 4.1) se determina la absorbancia
Cabe mencionar que las Promedio (X) NOTA A
de la muestra problema diluida (8ppm) con un valor soluciones se llevan todas a un
0,651
de 0,683 en una longitud de onda definida, 660nm. Volumen de 10ml Desviacin
NOTA A. El promedio de determin Estndar (S) 3,04 x 10-2
con los valores dados, descartando
Teniendo los datos de las absorbancias y las los valores que faltaron por otorgar. % Precisin (CV) 4,68 %
concentraciones determinadas, se realiza una Tabla 5.1. Clculos Precisin de Datos.
segunda curva de Calibracin, pero esta vez de
Absorbancia vs Concentracin, Grfica 4,1, para
determinar la concentracin de la solucin Stock, es 5.2 Exactitud de Datos
decir, al solucin que manejan todos los grupos
para realizar las diluciones.
Error Absoluto (Ea) = | |
5.1 Precisin de Datos
Donde x = 5ppm, al concentracin real, y del dato
es de 3ppm al concentracin determinada de
( )
Desviacin estndar (s) = manera experimental. Entonces,
1
Ea = |5 3| = 1,99
Donde x (promedio) es = 0,651 y n - 1=10
1,99
9,27 103
Error Relativo (Er) = = = 0.39
(s) = = 5
10
%Error Relativo (Er) = Er * 100% = 0,39 * 100%
Ahora la precisin se calcula:
%Error Relativo (Er) = 39,89 %
3,045 102
CV = = =0,4677 El porcentaje de error absoluto nos revela la
0,651 exactitud de nuestro dato experimental. Es evidente
que fue muy alto, y probablemente se deba a dos

%CV = 100% = 4,68 % razones principales, entre otras:
Calibracin del Instrumento.

Preparacin de la Dilucin.
Lo que indica que los datos estuvieron desviados un
4,68% con respecto al promedio.

4
Para la obtencin de la curva de calibracin, se
representan grficamente las absorbancias de
las muestras de concentracin de Acetato de Metilo
a la longitud de onda de mxima absorbancia,
660nm, frente a la concentracin de dichas
muestras. La longitud de onda de 660nm se lleg a
comn acuerdo, ya que era la curva espectral con
el pico ms alto y podra tener un mejor rango de
absorbancia, y por consecuencia al obtener al curva
de cumple la Ley de Beer demostrando un
comportamiento lineal.
Aunque la tendencia de la Grfica 4.1 no es una
lnea recta, se aproxima bastante variando la
absorbancia de manera lineal con la concentracin
de la muestra. Este tipo de errores pueden deberse
a errores durante la preparacin de la muestra o la
lectura del material, como se demostr antes.
6 PREGUNTAS DE REFLEXIN
A. Frmula de Dilucin.
La dilucin es el proceso por el cual se reduce el
nivel de concentracin de una solucin. Por
ejemplo, en el rea de qumica se diluyen
soluciones a partir de sus formas concentradas para
crear soluciones nuevas que se pueden utilizar en
experimentos evitando todo el gasto de la muestra
original.
La frmula formal para calcular una dilucin es
C1V1 = C2V2, donde C1 y C2 representan las
concentraciones de las soluciones iniciales y finales
respectivamente y V1 y V2 representan sus
volmenes.
B. Factor de Dilucin [5]
En muchos casos se necesita preparar disoluciones
con concentraciones extremadamente bajas de un
soluto, hasta un punto que es difcil o imposible en
la prctica medir la cantidad necesaria de producto
slido o el volumen de solucin madre. En esas
situaciones es necesario preparar una solucin de
mayor concentracin (solucin de stock o solucin
madre) y hacer diluciones sucesivas a partir de sta
hasta alcanzar la concentracin deseada.
La primera ventaja de un banco de diluciones
seriadas es que todo el clculo es muy sencillo. Slo
hay que tener en cuenta la concentracin inicial, el
volumen que se quiere conseguir de cada
concentracin y el factor de dilucin.
5
El volumen necesario se asume que es el mismo
para todas las concentraciones y depende de cada
experimento. Es fcil ver que el volumen final que
se consigue de cada concentracin es exactamente
igual al volumen fijo de solvente con que se cargan
todos los tubos del banco.
El factor de dilucin se calcula o aproxima sabiendo
las concentraciones mxima y mnima que se
quieren estudiar y el nmero de concentraciones
distintas que se quieren hacer.
El clculo de las concentraciones en los tubos
sucesivos es tan sencillo como multiplicar la
concentracin del anterior por el factor de dilucin
(1/2, 1/10 u otro).
Figura 6.1. Factor de Dilucin
C. Concentraciones ideales segn la Ley
de Beer [6]
La ley de Beer solo se cumple en disoluciones
diluidas, a concentraciones del orden de 10 ^ -2 M,
por encima de este valor la recta se curva debido a
que a medida que aumenta la concentracin de
especies absorbentes, estas se van aproximando
entre ellas hasta que se pone en marcha las
interacciones electrostticas, alterando la
capacidad de las especies a absorber a unas
determinadas longitudes de onda. No vamos a
obtener por lo tanto una relacin lineal entre A y C.
Los niveles de energa en los que se mueven los
electrones son distintos. Lo mismo ocurre en
disoluciones de baja concentracin de especies
absorbente, pero con concentraciones elevadas de
otras especies (sales interferentes).
1 1
CM = 20ppm (mg/Lsln) ( )( )
1000 319,8
CM = 6,25 x 10-5 Molar
Por ende los valores aplican de manera ideal segn
la Ley de Beer.
 D. Calibracin de equipos
Es importante calibrar para establecer con exactitud
que los resultados que arroja un instrumento de
medida sean los mismos que la magnitud que se
mide con l. Esto se logra con un patrn de
referencia que sea reconocido y tenga trazabilidad
ante la entidad correspondiente.
De no calibrarse, como se evidenci, pueden existir
valores de un error muy alto de exactitud y en
precisin.
7 CONCLUSIONES
Para determinar qu volumen tomar de una
alcuota de una solucin Stock es til la
frmula de dilucin V1C1=V2C2.
La preparacin de una solucin debe
llevarse a cabo con mucha rigurosidad para
no generar errores consecutivos y disminuir
los valores de exactitud y precisin.
Las curvas de calibracin de Absorbancia
son una herramienta muy til para
procedimientos cuantitativos en
colorimetra, como por ejemplo la
cuantificacin e identificacin de
sustancias a partir de sus espectros de
absorcin.
Cuando se identifica un sustancia por la
interpolacin en la curva de calibracin a
partir de su espectro, es necesario que su
concentracin se encuentre en el
intervalo de linealidad de la curva de
calibracin, ya que valores por encima
(muy concentra da) o por debajo (muy
diluida) no sern cuantificados de manera
confiable.
La eleccin de la longitud de onda
ptima para la elaboracin de la curva
de calibracin es fundamental a la hora
de cuantificar una muestra por
colorimetra.
La longitud de onda determinada , es
donde la relacin entre Absorbancia y
concentracin es ms marcada (mayor
dependencia).
La absorbancia y transmitancia son
caractersticas de las sustancias y permiten
cuantificar sus concentraciones.
Una forma de evaluar la concentraciones
las soluciones es a travs de los colores de
las soluciones diluidas, permite identificar
cual tiene mayor o menor concentracin.
La colorimetra tiene una gran aplicacin en
campos como alimentos, farmacia,
industria del papel y celulosa, cuantificacin
de protenas, entre otros.
Al calcular la concentracin de soluto de las
sustancias que absorben luz en
determinados intervalos de longitud de
onda, se pueden graficar en una curva.
La absorbancia y la concentracin son
directamente proporcionales.
8 BIBLIOGRAFA
[1] Atkins, R.C. Journal of Chemical Education
1975, 52, 550.
[2] X. Fuentes Arderiu, M.J Castieiras, J.M.
Queralt (1998): Bioqumica clnica y patologa
molecular, volumen 1, segunda edicin. Editorial
Revert, Espaa. Pp 220-227
[3] Captulo 4. Colorimetra y espectrofotometra,
encontrado en:
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plu
mmer/Chp04.pdf. Consultado el 26 de Septiembre
de 2016
[4] Palomeque F., L.A.; Faras C., D.M. (2006).
Guas para el trabajo en el laboratorio de qumica
general para ingeniera qumica. Notas de Clase,
Facultad de Ciencias Universidad Nacional de
Colombia. Colombia. Pp 72 -76
[5] Diluciones seriadas Blog, 11 marzo de 2014,
encontrado en:
http://www3.uah.es/cuadernolab/p/index.php/diluci
ones-seriadas/. Consultado el 26 de Septiembre de
2016.
[6] Limitaciones Ley de Beer. Encontrado den:
https://es.scribd.com/doc/155980553/Limitaciones-de-
La-Ley-de-Lambert. Consultado el 26 de Septiembre de
2016.