TRANSPOSICIN

Genmica Grupo A 2017-1

Dra. Evelia Leal Ugarte
Equipo 6:
Sandoval, Veyra Margarita; Bautista Jackelin; Bolaos Ezequiel; Ortiz
Anglica; Casanova Katia

La transposicin es un mecanismo que ayuda a dar mayor variedad al genoma,

puede ser replicativa o conservadora (no replicativa) y estos dos mecanismos
fueron descritos por primera vez por Shapiro en 1979.
Transposones simples y compuestos
Transposicin: proceso por el cual un segmento de DNA puede desplazar su
posicin en el genoma.
Transposones: segmentos mviles, elementos transponibles.
Transposasa: enzima que cataliza la transposicin de un elemento gentico
transponible.
Transposon de DNA: no interviene RNA intermediario.
Transposon de tipo Tn3: No presenta secuencias de insercin en los flancos.
Retrotransposones: se transponen por el RNA intermediario transcrito de la
copia del transposon, el DNA bicatenario es copiado y el retroelemento se
reinserta en el genoma.
Transposon compuesto: transposon de DNA que comprende un par de
Secuencias de Insercin (SI) que flanquean el segmento de DNA, este puede
contener uno o ms genes.
Las SI son un par de secuencias de repeticiones directas cortas que se forman
durante el proceso de transposicin, estas son inversas entre ellas.

Mecanismo de transposicin
Algunos elementos transponibles se movilizan en forma de DNA y se
denominan transposones de DNA tambin conocidos como transposones de
clase I. Otros elementos transponibles se movilizan en forma de un
intermediario de RNA. En este caso el elemento transponible (DNA) se
transcribe a RNA y luego se vuelve a copiar a DNA usando una enzima
especial denominada transcriptasa inversa y se denominan retrotrasnposones
Los transposones de DNA pueden sufrir una transposicin replicativa o no
replicativa.
Existen 3 mecanismo de replicacin
*La transposicin replicativa consiste en la introduccin de una copia nueva del
elemento transponible en un sitio nuevo mientras que la copia vieja permanece
en el sitio original, lo que determina el aumento de nmero de copias del
elemento transponible. Est a menudo denominada transposicin copia y pega,
puede involucrar dos molculas de DNA diferentes o dos partes de la misma
molcula del DNA
El primer paso se unen las molculas de DNA y se replica el elemento
transponible para producir la estructura de integracin compuesta por las
molculas fusionadas. Despus de la formacin, el entrecruzamiento de
regiones dentro de las copias del elemento transponible produce dos
molculas. La resolucin origina las dos copias del elemento transponible. El
paso de la resolucin depende de las enzimas resolvasas que actan en la
recombinacin homloga.
*La transposicin no replicativa consiste en la escisin del elemento
transponible del sitio donde se hallaba y su insercin en un sitio nuevo sin
aumentar la cantidad de copias.
Aqu, el elemento transponible se mueve de un sitio a otro SIN replicarse en su
totalidad, aunque si se replican secuencias cortas en el DNA en el que se
produce la insercin que determina la produccin de repeticiones directas
flanqueantes.
La transposicin no replicativa solo requiere el corte y la readhesin del
elemento transponible en el DNA en el que se producir la insercin.

Retrotransposones
Los genomas eucariticos tienen tres tipos de retrotransposones

La superfamilia vrica
LINES
SINES
LINES (autnomos)
Promotor de RNA polimerasa II
RNA transcripto polyA, bicistrnico
6-8 kb
L1 (genoma humano)
Seal de poly A dbil
SINES (no autnomos)
Promotor RNA polimerasa III
RNA transcripto con corrida de U
PolyA codificado en DNA
90-300pb Derivados de tRNA y
7SL RNA
No codificantes

Los SINE (Short Interspersed Nuclear Elements, elementos nucleares

dispersos cortos) suponen un 13 por ciento del genoma humano. Son
secuencias cortas repetidas miles de veces en el genoma humano de
forma dispersa. El principal SINE es la familia de elementos Alu,
que es especfica de primates y constituye un 10 por ciento de
nuestro genoma.
Un elemento Alu est formado por una secuencia de 250-280
nucletidos, con unas 1 500 000 copias por genoma y una repeticin
cada cuatro kb como promedio.
 Es un elemento relativamente rico en guaninas+citosinas (56 por
ciento de contenido en CG, mientras que el contenido promedio del
genoma humano es del 41 por ciento).
Se localiza predominantemente en la bandas R de los cromosomas
humanos. Est flanqueado por pequeas repeticiones directas (en la
misma orientacin). Su estructura es la de un dmero no idntico, ya
que el segundo monmero es 30 nucletidos mayor que el primero.
Contiene colas poli-A al final de cada monmero, y se transcribe por
la ARN polimerasa III a partir de un promotor interno, pero no codifica
ninguna protena. Acta como un retrotransposn, ya que puede
copiarse e insertarse en otras regiones del genoma.

LINE
LINE El ADN humano contiene tres familias principales de secuencias LINE
que son similares en su mecanismo de transposicin, pero difieren en sus
secuencias: L1, L2 y L3.

Slo los miembros de la familia L1 se transponen en el genoma

humano contemporneo
LINE secuencias estn presentes en 900.000 sitios en el genoma humano,
lo que representa un 21% del total de ADN humano.

DESCUBRIMIENTO DE LINE
La evidencia de la movilidad de los elementos L1 vino primero del anlisis de ADN
clonado de humanos con ciertas enfermedades genticas.
Se encontr que el ADN de estos pacientes portaba mutaciones resultantes de la
insercin de un elemento L1 en un gen, mientras que ningn elemento de este tipo se
encontraba dentro de este gen en cualquiera de los dos progenitores.

Aproximadamente 1 de cada 600 mutaciones que causan una enfermedad

significativa en los seres humanos se deben a transposiciones L1 o
transposiciones SINE que son catalizadas por protenas codificadas por L1.
Experimentos posteriores similares a los elementos Ty de levadura confirmaron
que los elementos L1 se transponen a travs de un intermedio de ARN.

En estos experimentos, se introdujo un intrn en un elemento L1 de ratn clonado, y el

elemento L1 recombinante se transform establemente en clulas de hmster
cultivadas.

Despus de varias duplicaciones de clulas, se detect en las clulas un

fragmento amplificado por PCR correspondiente al elemento L1 pero que careca
del intrn insertado.

Este hallazgo sugiere fuertemente que con el tiempo el elemento L1 recombinante que
contiene el intrn insertado se ha transpuesto a nuevos sitios en el genoma del hmster
La familia de secuencias repetitivas dispersas L1 representa una clase de
DNA repetido que puede ser transcrito a un RNA que, cuando se produce
una trasncripcion inversa, genera una secuencia de DNA que puede
insertarse en diferentes lugares del genoma.
Cerca de 5-12% del genoma humano est conformado por LINE.

Localizadas en las bandas G (positivas o coloreadas) y por

consiguiente tienen una localizacin inversa a las de Alu.

El ms comn es la familia LINE 1 o L1:

Consiste de 200 000 a 500 000 copias de una secuencia de DNA de

casi 6.1 kb, sin embargo, existe un nmero considerable de
secuencias truncadas en el extremo 5 .

ESTRUCTURA:
Las lneas generalmente estn flanqueadas por repeticiones directas cortas,
el sello distintivo de elementos mviles, y contienen dos marcos de lectura
abiertos largos (ORFs).

ORF1, 1 kb de largo, codifica una protena de unin a ARN.

ORF2, de 4 kb de largo, codifica una protena que tiene una regin
larga de homologa con las
transcriptasas inversas de
retrovirus y
retrotransposones virales,
pero tambin exhibe
actividad de endonucleasa
de ADN

Los LINE contienen dos marcos de lectura abierta (ORF, del ingls open
readingframe).

El ORFl se ubica hacia el extremo 5 y codifica para una protena de

funcin desconocida llamada p40.

El 0RF2 codifica para una protena con un dominio de endonucleasa y

otro dominio de transcriptasa inversa.

Ambos transcritos provienen de un promotor interno en el extremo 5 no

traducido, 5 UTR (del ingls, untranslated regin), mientras que en el otro
extremo hay una secuencia (A)y(T)^ conocida como cola de poli A.
Los elementos L1 tambin estn flanqueados por secuencias cortas
duplicadas.
Al igual que las secuencias ALU no hay secuencias codificantes, aunque
pueden hallarse en secuencias no codificantes intragnicas (intrones).

Como resultado, pueden encontrarse en el RNA transcrito primario

pero ausentes en el mRNA maduro.

En unos pocos pacientes con hemofilia A se encontraron secuencias L1 de

varios kb de largo insertadas en un exon del gen del factor VIII, que
interrumpian la secuencia codificante e inactivaban el gen.
Este hallazgo sugiere, al menos, que algunas de las 850.000 copias que se
estima existen de la familia L1 en el genoma humano son capaces de
causar enfermedad por mutagenesis de insercion.

MECANISMO PROPUESTO DE TRANSCRIPCIN INVERSA E

INTEGRACIN DE LINE
Dado que LINEs no contienen LTRs, su mecanismo de transposicin a travs de un
ARN intermedio difiere de la de LTR retrotransposones.

Las protenas ORF1 y ORF2 se traducen a partir de un LINE RNA. Los estudios
in vitro indican que la transcripcin por RNA polimerasa II est dirigida por
secuencias promotoras en el extremo izquierdo del ADN LINE integrado.

LINE ARN es poliadenilado por el mismo mecanismo post-transcripcional que

poliadenilacion de otros mRNAs.

El LINE RNA entonces es transportado en el citoplasma, donde se traduce en ORF1 y

ORF2 protenas.

Mltiples copias de la protena ORF1 se unen al LINE ARN, y la protena ORF2

se une a la cola poli (A).

El LINE RNA es entonces transportado nuevamente al ncleo como un

complejo con ORF1 y ORF2.

La ORF2 hace entonces muescas escalonadas en el ADN cromosmico a

cada lado de cualquier secuencia A / Trich en el genoma.

La transcripcin inversa de LINE RNA por ORF2 se ceba por la secuencia de

cadena sencilla rica en T generada por el corte en la cadena inferior, que se
hibrida con la cola LINE poli (A) (etapa 2).

ORF2 transcribe entonces de forma inversa el ARN LINE (etapa 3) y luego

contina esta nueva cadena de ADN, cambiando a la regin monocatenaria
de la cadena cromosmica superior como plantilla (etapas 4 y 5).

Las enzimas celulares luego hidrolizan el ARN y extienden el extremo 3 de la

cadena superior de ADN cromosmico, reemplazando la cadena de ARN de
LNE con ADN.

Finalmente los extremos 5 y 3 de cadenas de ADN se ligan, completando la

insercin (etapa 7).
 Estas ltimas etapas (6 y 7) probablemente son catalizadas por las mismas
enzimas celulares que eliminan los cebadores de ARN y ligan los fragmentos
de Okazaki durante la replicacin del ADN.

El proceso completo resulta en la insercin de una copia del retrotransposn

LINE original en un nuevo sitio en ADN cromosmico. Se genera una
repeticin directa corta en el sitio de insercin debido a la escisin inicial
escalonada de las dos cadenas de ADN cromosmicas (etapa 1).

La gran mayora de LINEs en el genoma humano estn truncados en su

extremo 5, lo que sugiere que la transcripcin inversa termin antes de la
terminacin y los fragmentos resultantes extendiendo distancias variables
de la cola poli (A) se insertaron.

Debido a este acortamiento, el tamao promedio de los elementos de LINE

es slo de 900 pares de bases, mientras que la secuencia de longitud
completa es 6 kb de largo.

Adems, casi todos los elementos de longitud completa contienen codones

de parada y cambios de marco.

MUTACIONES EN ORF1 Y ORF2:

Estas mutaciones probablemente se han acumulado en la mayora de las
secuencias de LINE durante el tiempo evolutivo.
Como resultado del truncamiento y la mutacin, slo 0,01 por ciento de
las secuencias LINE en el genoma humano son de longitud completa con
marcos de lectura abiertos intactos para ORF1 y ORF2, 60-100 en total.