M ICROSCOPIA

IDEA BOOKS, S.A.

www.FreeLibros.me
Ttulo de la coleccin
ATLAS TEMTICOS

Texto e ilustracin
1996 IDEA BOOKS, S.A.

Barcelona - Espaa

Redaccin / F.J. Bernis Mateu. Licenciado en

Farmacia

Ilustraciones / Santiago Prevosti Pelegrn,

Martn Martnez Navarro

Fotografas / Enosa

Diseo de la cubierta / Lluis Llad Teixid

Printed in Spain by
Emege, Industria Grfica, Barcelona

EDICIN 1997

www.FreeLibros.me
La M icroscopa es una ciencia que va adquiriendo, da a da,
mayor importancia. Se sirven de ella las principales ramas de la
actividad humana: arte, ciencia, agricultura, industria... El
m icroscopio es el principal elemento en todos los laboratorios de
investigacin. Es un instrumento indispensable.
Ello nos ha inducido a redactar este Atlas, con el que pretende
mos iniciar a estudiantes, aficionados y, en general, a cuantos se
sientan inclinados hacia esta ciencia, en el conocim iento y mane
jo del m icroscopio.
Una parte de este trabajo est consagrada al instrumento en s:
historia, funcionamiento, empleo. En captulos sucesivos pasamos
revista a las aplicaciones del m icroscopio, a s com o a la forma de
preparar los materiales de estudio para ser observados en las
mejores condiciones posibles.
Confiamos en haber conseguido nuestro propsito, que, repeti
mos, solamente es iniciar e interesar. Por ello no hemos querido
hacer demasiado ardua la lectura de esta obra y hemos evitado
sobrecargarla con la exposicin de tcnicas que el estudioso, una
vez iniciado en la materia, encontrar en obras ms especializa
das.
Expreso mi agradecimiento al doctor don Benito O liver Su,
eminente bacterilogo, que, con sus enseanzas y consejos, ha
hecho posible la aparicin de este Atlas. M i agradecimiento tam
bin a editores, ilustradores y a todos los que han contribuido a
su realizacin.

EL A U TO R

www.FreeLibros.me
 Fundamentos
e h ist or ia del m i c r o s c o p i o
FUNDAMENTOS PTICOS
El microscopio es un instrumento que permite
observar objetos no perceptibles a simple vista.
Ello se consigue mediante un sistema ptico com
puesto por lentes de cristal que, al ser atravesadas
por la imagen del objeto, la amplifican.
No creemos necesario extendernos en conside
raciones acerca de las propiedades y compor
tamiento de las lentes, que el lector podr con
sultar en cualquier tratado elemental de Fsica
y cuyo estudio no entra en los lmites que
hemos dado a esta obra. Solamente indicare
mos que, segn el nmero y posicin de las
lentes, distinguiremos entre microscopio sim
ple y microscopio compuesto.
M ICRO SCO PIO SIMPLE
Damos el nombre de microscopio simple a
todas aquellas lentes con montura o sin ella,
gruesas o pequeas, biconvexas o plano-con
vexas, que nos am plifiquen los objetos.
Corrientemente se les llama lupas. Existen
numerosos modelos y variedades.
Podemos, pues, decir que cualquier lente con
vergente utilizada de manera que d una ima
gen virtual, y, por lo tanto, directa y mayor que
el objeto, es un microscopio simple (figs. 1, 2 y
3). Las lupas solamente se diferencian en la
montura. Su manejo es muy sencillo, y se lim i
ta a orientar la lente de manera que su cara
plana o menos curvada quede dirigida hacia el
objeto y colocarla a tal distancia que ste
quede situado entre el foco y el vrtice y tanto
ms prximo a aqul cuanto mayor se quiera la
imagen. (Flg. 4.)
El aumento que se obtiene con estas lentes es
del orden de los 50 dimetros. Para conseguir
aumentos un poco mayores, se aproximan ms
o menos, unas a otras, dos o tres lentes. Se
emplea este sistema para la observacin y
diseccin de tejidos, para la observacin de
mezclas, y se logran con l aumentos hasta de
100 dimetros.
M ICRO SCO PIO COM PUESTO
Est constituido por la combinacin de dos sis
temas de lentes convergentes: uno, prximo al
ojo del observador, por lo cual se llama ocular,
y que acta como microscopio simple; otro,
prximo al objeto, y denominado objetivo.
(Fig. 5.) ste es el verdadero microscopio, el
que estamos acostumbrados a ver en todos los
laboratorios.
ATLAS DE M IC R O SC O PIA
www.FreeLibros.me
No se crea que con los modelos sencillos no es
posible obtener buenos aumentos y realizar
excelentes observaciones, pues, salvo para estu
dios muy especializados, que requieren grandes
aumentos, un microscopio corriente nos bastar
para pasar horas muy agradables y nos permitir
observar toda clase de materiales. Y anotemos
bien que, por muchas y variadas que sean sus
lentes, cualquiera que sea su potencia, el princi
pio siempre es el mismo: basta colocar el objeti
vo de manera que el objeto se encuentre ms all
del foco, pero lo ms cerca posible de l, para
que la imagen que nos d sea real y del mayor
tamao posible; si el ocular se coloca de manera
que la imagen real obtenida por el objetivo
quede situada entre el vrtice y el foco del ocu
lar, se obtendr una imagen virtual directa de la
obtenida por el objetivo y mayor que ella. Se
ver, pues, una imagen virtual invertida y suma
mente aumentada del objeto. (Figs. 6 y 7.)
Cuanto mayores sean la curvatura de las lentes
y la distancia entre el sistema objetivo y el sis
tema ocular (longitud ptica), mayor ser el
aumento total.
As, pues, vemos que el microscopio compues
to tiene dos sistemas de aumentos: el ocular y
el objetivo. Para calcular el aumento total de un
microscopio, tendremos que multiplicar, pues,
el aumento propio del objetivo por el aumento
del ocular.
Los aumentos obtenidos con los microscopios
compuestos son del orden de los 1.000 a los
3.000 dimetros, aunque esto depende casi
exclusivamente de la potencia de los objetivos.
Con objetivos en seco para observaciones his
tolgicas, bastarn aumentos de 500 a 1.000
dimetros.
HISTORIA
El nombre microscopio (mikrs, pequeo, y
skopoo, observar) se debe a Jean Faber, miem
bro de la antigua Academia de los Lincei
(1624). Este trmino designa un microscopio
compuesto por un objetivo y un ocular, aunque
en la prctica se haya hecho extensivo a todos
los instrumentos amplificantes simples y com
puestos.
El uso de las lupas se remonta, en sus orgenes
conocidos, a la civilizacin asira. En las ruinas
de Nnive se encontr un cristal de roca tallado
en forma de lente plano-convexa.
Los romanos conocan ya el poder amplificador
de las lentes biconvexas. En las ruinas de Pompe-
ya y de Herculano se hallaron cristales convexos.
 Fundamentos
pticos I

Fig. 1 - Lupa llamada "cuen

tahilos"

Lente

Objeto^
D istancia focal
Fig. 3 - Lupa de mano.

Fig. 2 - Lupa binocular.

Imagen del objeto

O c u la r
Fig. 4 - Esquema de la
marcha d e los rayos 1 -8
luminosos en el micros Lente o cu lar <3 "o
copio simple.
O c u la r
Foco o cular
Imagen real
del objetivo
Lente objetivo

O b jetivos Foco objetivo

O b jetivo

O b jeto

Imagen
virtual del t O bjeto
objeto

Fig.-6 - Esquema de la m archa de los

Platina rayos luminosos en el m icroscopio
compuesto.
Imagen del
objeto
C ondensadc

Espejo

Fig. 5 - M icroscopio compuesto. Fig. 7 - Corte esquemtico de un microscopio

compuesto.

B M

www.FreeLibros.me
 Fundamentos
I e historia del m ic ro s c o p io
Sneca y Plinio cuentan que Nern contempla-
ba a travs de una esmeralda tallada los com-
bates de los gladiadores: ero princeps gla-
diatorum pugnas spectabat n smaragdo.
Suponemos, pues, que les era conocido su
empleo para corregir la miopa.
Segn Sneca y Aristfanes, los mdicos grie
gos y romanos utilizaban, por su poder de
ampliacin, bolas de vidrio llenas de agua para
observar los tejidos enfermos.
Es preciso llegar al siglo XI para hallar, en los
libros del rabe Alhazen ben Alzahen, referen
cias a las lentes convexas. En el siglo XIII, Roger
Bacon seala las propiedades de las lentes bicon
vexas. Con el concurso de lentes, Georges Haef-
nagel (1546-1617) estudia los insectos y publica
un trabajo ilustrado con sus observaciones.
El verdadero impulsor de la Microscopa fue,
sin duda, el holands Antn van Leeuwenhoek
(1632-1723) (flg. 2), nacido y muerto en Delft.
Construa microscopios con lentes muy conve
xas que l mismo pula y con las cuales realiz
observaciones muy diversas, adquiriendo gran
renombre como anatomista y fisilogo. Estudi
la composicin de la sangre y complet los
estudios de Harvey acerca de la circulacin
capilar. Fue el primero que observ y dibuj los
protozoos (1674). Dos aos ms tarde descu
bri las bacterias, y sus primeros dibujos fueron
reproducidos en las Transacciones filosficas
de la Real Sociedad de Londres, en 1683.
Los primeros microscopios simples construidos
durante estos aos por Hartsoeker, en 1662;
Leeuwenhoek (fig. 3), en 1664; W ilson, en
1702; Joblot, en 1716, constaban solamente de
una lente que se sostena con la mano y se dlri-
ga hacia la fuente de luz para que sta atrave
sara la lente y el objeto.
Como dato curioso, citaremos los ensayos rea
lizados por Brewster y por Goring, en Inglate
rra, con diamantes y zafiros tallados en forma
de lente. En Francia, Charles Chevalier tallaba
topacios y granates. Todos estos cristales, con
fuerte refraccin, dispersin reducida y ligera
curvatura, daban ampliaciones notables, pero
tuvieron que ser abandonados por dificultades
de talla y su elevado precio.
Como las difracciones y las aberraciones de las
imgenes eran muy acentuadas, el examen de
un ocular astronmico dio a W. de Hyde
Wollastone (1 766-1826) la dea de aplicarlo al
microscopio. Consiste este ocular en dos lentes
ms o menos separadas, en algunas ocasiones
con lquidos entre ambas, que permiten reducir
las aberraciones al mismo tiempo que dan
ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
) mejores ampliaciones. Este sistema se llama
\ doblete. (Flg. 7.)
Varias modificaciones de dobletes, debidas a
Brewster, Charles, Lord Stanhope, D ivini, etc.,
obtuvieron relativo xito, logrndose con ellas
notables ampliaciones de 40 a 100 dimetros.
Los dobletes pueden montarse en un estativo
( especial; esta disposicin, imaginada por W il
son en 1 702, y ms o menos modificada por
obra de Joblot y Swammerdan, persistir hasta
los alrededores del ao 1910.
) El descubrimiento del microscopio compuesto
es contemporneo del de las lupas y tuvo un
precedente en las mencionadas bolas llenas de
agua amplificadoras. Los ms antiguos conoci
( dos se deben a Galileo y a Jansen, aunque hay
unanimidad en considerar a Zacaras Jansen
(fig. 1) como el primer constructor, en 1590,
del microscopio compuesto. Jansen naci en
'} Middelburg (Pases Bajos) y era hijo de un talla
dor de cristales.
Es a partir de principios del siglo XVII cuando
el microscopio sufre modificaciones interesan
tes, no slo en lo que concierne a la ptica,
sino tambin en lo que se refiere a la mecni
ca: el microscopio de Hooke (1667), con bola
de vidrio condensadora de los rayos luminosos
(fig. 6); el de trpode, de Griendl von Asch
(1687) (fig. 5); el de Bonnani (1691), de colum
na; el de Joblot (1716) (fig. 4), con cristal de
campo, etc. son otros tantos modelos de los
muchos que por aquellos aos se construyeron.
Q uiz sera interesante citar el microscopio de
Cuff-Baker (1744), aparato de columna con
movimiento rpido y movimiento micromtri-
( co, adems de espejo fijo para concentrar la
luz.
Todos estos aparatos, a pesar de lograr buenas
ampliaciones, daban imgenes muy defectuo
sas a causa de las aberraciones cromticas y
esfricas, y as muchos investigadores volvieron
al microscopio simple.
Se debe a Dolland, ptico de Londres, el inven
to del objetivo apocromtico (fig. 8), consisten
te en dos lentes superpuestas, una convergente
y otra divergente, el cual corrige las aberracio
nes, logrando mejorar de tal modo las observa
ciones, que desde este momento hasta nuestros
das el microscopio compuesto no ha cesado
de perfeccionarse, gracias a los constructores
de Alemania, Inglaterra y Francia, quienes han
aportado mejoras y nuevos accesorios: visin
binocular, ultramicroscopio, revlver portaob-
jetivos, microscopio polarizante, etc., hasta lle
gar al microscopio electrnico actual.
 Hi stori a del S gggg
microscopio F

Fig. 1 - Z acaras Jansen, que en 1590 con* Fig. 2 - Antn van Leeuwenhoek (1632- simple
truy el prim er m icroscopio compuesto. 1723), que, construyendo sus propias lentes, de Leeuwenhoek.
lleg a obtener aumentos de 270 dimetros.

Condensadores

de

Fig. 5 - M icroscopio de trpode, de Fig. 6 - M icroscopio de Hooke, con ilum inacin y con-
Von Asch. densador de luz.

Fig. 4 - M icroscopio de joblot Fig. 8 - Lentes apo-

(1716). crom ticos.

FUNDAMENTOS E HISTORIA
www.FreeLibros.me
9
 Tcnicas
de observacin
DESCRIPCION DEL M ICROSCOPIO La lente Inferior del objetivo denomnase lente
frontal. De ella depende principalmente la
PARTE M ECNICA mayor o menor ampliacin. Es siempre plano
convexa, de foco muy corto y de dimetro
Est compuesta por el pie, la platina y el tubo.
tanto menor cuanto mayor sea el aumento.
El pie. Es una pieza maciza y pesada, para ase
Detrs de esta lente hay otras, que son las que
gurar la estabilidad del aparato y servir de
corrigen las aberraciones cromticas y esfri
soporte a sus dems partes. Suele estar provista
cas.
de charnela, que permite la inclinacin de la
Objetivos en seco. Son los que se emplean ms
parte superior.
corrientemente. Entre la lente frontal y el
La platina. Es una pieza metlica, redonda o
cubreobjetos slo hay aire. A este grupo perte
cuadrada, donde se colocan las preparaciones;
necen los objetivos de menores aumentos. Las
tiene en el centro una abertura circular por la
lentes frontales tienen de 3 a 10 milmetros de
que pasarn los rayos luminosos procedentes
dimetro. Poseen gran profundidad de foco, lo
del sistema de iluminacin. En los microsco
cual permite observar diferentes planos parale
pios corrientes puede ser fija o estar adosada a
los del objeto. (Fig. 2, A.)
un carro con dos tornillos de cremallera que
Objetivos de inmersin. Se llama as a aquellos
permitan dos movimientos de traslacin, para
en los cuales, para la observacin, debe inter
centrarla, y tambin, si los tomillos estn gra
ponerse entre a lente frontal y la preparacin
duados, para medir sus desplazamientos.
un lquido que, por su ndice de refraccin
La preparacin se sujeta, en las platinas fijas,
apropiado, permita una mayor luminosidad.
con dos palanquitas mviles, y en las platinas
Este lquido puede ser agua, aceite, monobro-
de carrro, por un reborde, en forma de escua-
muro de naftaleno, etc. Son, estos objetivos, de
dara y pestillo, que le impide cualquier movi
gran aumento y de gran poder definidor. Se
miento imprevisto. (Fig. 1.)
em plean en Bacteriologa y Parasitologa.
El pie se prolonga por encima de la platina, en
Requieren gran luminosidad y empleo de con
arco ms o menos curvo. La parte superior de este
densador. (Fig. 2, B y C.)
arco es la que sostiene el tubo y su mecanismo de
Objetivos apocromticos. Todos los objetivos,
traslacin vertical. sta tiene suma importancia,
secos o de inmersin, estn acromatizados slo
pues permite enfocar el objetivo mediante dos
para dos rayos del espectro, el rojo y el azul.
movimientos: uno rpido, gracias a una cremalle
Son los llamados cromticos, pero si consegui
ra, y otro lento, con un tornillo mlcromtrico.
mos corregir este defecto para tres rayos, se eli
El tubo. En l est instalado el sistema ptico.
mina casi completamente el llamado espectro
Est constituido por dos tubos o cuerpos. Uno de
secundario, y tenemos los objetivos apocrom
ellos, externo, en el que se encuentran la crema
ticos.
llera y el ocular, y otro, interno, adosado al ante
Cualidades de los objetivos. Los objetivos
rior, donde est el objetivo. En la parte superior
deben poseer tres cualidades, a saber: poder
hay una divisin milimtrica que permite modi
definidor, poder penetrante y poder resolvente.
ficar la distancia entre objetivo y ocular. Son
El primero consiste en la propiedad de presen
corrientes en los aparatos modernos los binocu
tar con limpieza y correccin los contornos de
lares, que facilitan la visin con los dos ojos, y
la imagen. El poder penetrante es la propiedad
los revlveres portaobjetivos, con los cuales se
de presentar, sin variar el enfoque, perfecta
pueden cambiar los objetivos instantneamente,
mente detallados varios planos del espesor de
sin desenfocar la preparacin. (Fig. 1.)
una preparacin. El poder resolvente permite
apreciar delicados detalles de estructura.
PARTE PTICA
El microscopio se ensaya, para tratar de com
probar sus poderes amplificante, resolutivo,
Objetivos etc., mediante unos tests o preparaciones de
Son los elementos ms importantes del micros prueba en que deben observarse sutiles minu
copio. Estn formados por la reunin de varias cias estructurales.
lentes para corregir las aberraciones. Deben
tratarse con mucho cuidado, pues cualquier Oculares
golpe puede variar la posicin de las lentes y Los forman dos lentes separadas por un diafrag
averiarlas. Se atornillan a la parte inferior del ma, y van montados en la extremidad superior
tubo o revlver portaobjetivos. del tubo. La lente superior se llama lente

www.FreeLibros.me
 D e s c r i p c i n del | H
microscopio I

O cular

Tubo ocular

Platina con desplazamiento

M ando de enfoque rpido

Condensador ABBE

Diafragma iris con portafiltros

lando de enfoque lento

Mando regulador
de iluminacin

Mandos para el desplazamiento de

la platina
Iluminacin baja

Fig. 1 - M icroscopio compuesto, con sus partes componentes.

Fig. 2 - Objetivos. A, de observacin en seco; B, de inmersin Fig. 3 - D iversos tipos de oculares. A, negativo; B y C ,
en agua; C , de inmersin en aceite. positivos.

TCN ICAS DE OBSERVACIN

www.FreeLibros.me
11
 T c n i c a s de o b s e r v a c i n

ocular; la inferior, lente de campo. Hay dos ) rayos en el sistema ptico, o sea se vara el valor
tipos de oculares; los positivos, o de Ramsden, \ de la fase en los rayos con que se ilumina.
que tienen dos lentes plano-convexas, y cuyas / En la prctica cualquier microscopio puede
convexidades se oponen una a la otra (Im. B/1, equiparse con este dispositivo, que proporcio-
fig. 3, B y C), y los negativos, o de Huyghens, nan las casas constructoras (fig. 4). Se emplea
que se llaman tambin de compensacin, por / para observaciones en fresco sin teir, en Cito-
tener compensadas las desigualdades de \ logia, Bacteriologa y Parasitologa.
aumento para los diferentes colores del espectro
y en los que las curvaturas de las lentes se diri Microscopio de polarizacin
gen al objetivo (Im. B/1, fig. 3, A). Tanto el
) En ocasiones, para la observacin de sustancias
microscopio simple como el compuesto pueden
( birrefringentes es indispensable el examen con
ser binoculares; stos dan mejor calidad a la
) luz polarizada; para ello se adapta al microsco-
imagen y ms cmoda visin. El tubo se bifur
\ pi ordinario, bajo la platina, un nicol polari-
ca, con los correspondientes prismas de refle
/ zador, y sobre el ocular otro, analizador.
xin total, y termina en dos oculares guales.
Haciendo girar el analizador hasta que el
campo aparezca oscuro, se destacarn en ste
Sistema de iluminacin
aquellas sustancias que presenten el fenmeno
Se encuentra situado bajo la platina (fig. 1) y \ de la birrefringencia con caracteres especiales
tiene la misin de iluminar los objetos por / de luminosidad o coloracin.
medio de luz transmitida, a causa de que la ) Se emplean estos microscopios en Petrografa y
mayora de las observaciones se realizan por Mineraloga. (Fig. 7.)
transparencia. Consta de un espejo y de un dia
fragma. El espejo, redondo y adaptable a las . Ultramicroscopio
ms variadas posiciones, tiene una superficie Permite observar los objetos sobre fondo oscu-
plana y otra cncava, que pueden intercam i ro, aprovechando tan slo aquellos rayos que
biarse a voluntad. El espejo plano, para objeti j son reflejados por las partculas u objetos sobre
vos de escaso aumento, y el cncavo, para ( los que recae la observacin y desechando, en
grandes aumentos. La fuente luminosa puede cambio, los que penetran directamente.
ser natural o artificial. Esta ltima es idnea En la prctica, esto se consigue mediante el
cuando proviene de una lmpara de 50 W opa empleo de condensadores especiales y con una
lina. Algunos microscopios llevan acoplada a , fuerte luminosidad. Los objetos a observar se
su pie una lmpara especial para estos apara montan en agua o aceite entre un porta y un
tos. (Figs. 5 y 6.) / cubre de escaso espesor.
El diafragma va montado bajo la platina. Es de . A menudo se hacen sinnimos examen sobre
sistema Iris, y permite, por medio de una ( fondo oscuro y ultramicroscopio. El primero es
palanca, obtener a voluntad conos luminosos ) habitualmente utilizado en microscopa clni-
de distinto tamao (fig. 3) y, mediante conden \ ca; el segundo se reserva para exmenes de
sadores, conos luminosos muy grandes. Los objetos realmente ultramicroscpicos.
condensadores (fig. 2) constan de un sistema de
lentes de gran abertura sujetos a una montura y Microscopio electrnico
colocados entre la platina y el espejo; pueden
subirse y bajarse a voluntad y tienen un diaTiene el mismo fundamento terico que el
fragma unido al conjunto. microscopio ptico, pero en l se trabaja, no con
rayos luminosos, sino con rayos electrnicos
propagados en el vaco, que, concentrados y
CLASES DE MICROSCOPIOS
S refractados por campos magnticos, se proyec
Adems de los microscopios simples y com tan sobre una preparacin y se recogen en un
puestos normales, se construyen otros para / foco donde proyectan una imagen no visible,
observaciones especiales. pero que puede fotografiarse o revelarse en una
pantalla especial. Con l se alcanzan aumentos
Microscopio de contraste de fases j de 30.000 a 100.000 dimetros. (Fig. 8.)
Se debe al holands Zernicke. Tiene por objeto
M ICRO SCO PIOS ESPECIALES
facilitar el estudio de elementos transparentes y
no coloreados. ) En la industria y en la investigacin se emplean
El contraste de fases se propone hacer variar los numerosos m icroscopios adaptados a una
contrastes de la imagen, y para lograrlo se utilizan determinada observacin, y acerca de ellos
las diferencias de absorcin y de marcha de los hablaremos en otros lugares de esta obra.

ATLAS DE M IC RO SC O PIA
www.FreeLibros.me
 D e s c r i p c i n del
microscopio B H H

Fig. 3 - Diafragna tipo iris.

Condensador

To rnillo
d esplazado r del
D iafragm a ,
condensador
Portafiltros

Fig. 2 - Condensadores.

Espejo
Sistema de ilum inacin.

Fig. 4 - Equipo de contraste de fase.

Fig. 5 - Lmpara acoplable al m icroscopio.

Fig. 6 - Lmpara puntiforme para

microscopio.

Platina giratoria,
con nonio para
m edir el giro

Fig. 7 - M icroscopio de polarizacin. Fig. 8 - M icroscopio electrnico.

TCN ICAS DE OBSERVACIN

www.FreeLibros.me
13
 T c n i c a s de o b s e r v a c i n
REGLAS GENERALES DE OBSERVACIN
Iluminacin. Puede utilizarse luz natural o artifi
cial elctrica. En general, basta cualquier lmpa
ra potente, de filamento y esmerilada. Si no se
dispone de lmpara esmerilada, se intercalar en
el sitio correspondiente un vidrio deslustrado o
azul, o un sencillo matraz lleno de agua con sul
fato de cobre y unas gotas de amonaco, que fil
tre los rayos amarillos. Si se utiliza luz natural,
no debe ser nunca la directa del sol, sino luz
difusa: una excesiva iluminacin en la mesa de
trabajo perturba la observacin. (Figs. 1 y 2.)
Enfoque. Es regla general enfocar la prepara
cin de abajo arriba: se aproxima el objetivo a
la preparacin de modo que la distancia entre
ambos sea menor que la distancia focal. Se
mira por el ocular y se hace retroceder el tubo
lentamente mediante el tornillo rpido, hasta
conseguir ver la preparacin ms o menos
enfocada. Seguidamente, lgrase el enfoque
exacto con el tornillo micromtrico.
Es conveniente efectuar la observacin mono
cular con los dos ojos abiertos, pero mirando
slo con uno. Es fcil de conseguir cuanto
menos iluminada est la mesa.
El objetivo de inmersin requiere ms cuidado:
depositada ya la gota de lquido sobre la pre
paracin, bjese el objetivo hasta que la toque.
Para enfocar se utiliza el tornillo micromtrico,
pero sin perder contacto con la gota y sin tocar
la preparacin.
Limpieza. Una vez terminada la observacin
debe limpiarse el objetivo con un pao de hilo
usado, pero limpio, empapado de xilol o de
tolueno. Se guarda el aparato en una caja de
madera o se tapa con una campana de cristal o
de plstico. (Fig. 3.)
MEDICIN DE OBJETOS M ICROSCPICOS
El procedimiento ms sencillo es el del ocular
micromtrico. Es ste un ocular corriente que,
en el sitio correspondiente al diafragma, lleva
un retculo graduado cuyas divisiones abarcan
0,10 mm. (Fig. 5.) Para cada objetivo hay que
establecer el valor en mieras de una divisin de
la escala, utilizando un micrmetro objetivo.
ste consiste en una escala grabada en un
vidrio semejante a un portaobjetos, que com
prende 100 divisiones de 0,01 mm. (Fig. 4.)
Colocando el micrmetro objetivo sobre la pla
tina del microscopio, y enfocando con el obje
tivo con el cual tratamos de medir, se busca,
ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
14
superponiendo las imgenes de ambas gradua
ciones, cuntas divisiones del micrmetro
objetivo son cubiertas exactamente por una o
varias del micrmetro ocular. Establecido este
dato, se determina la frmula o coeficiente
micromtrico. As, de cubrir la divisin 10 del
ocular cuatro trazos del objetivo, 10 divisiones
oculares representarn 10 veces 0,01 mm, y
una divisin ocular representar
0,04 mm
-----------= 0,004 mm = 4 mieras.
10
Cada divisin del micrmetro ocular vale, por
tanto, cuatro mieras para la combinacin pti
ca con que trabajamos. No queda sino colocar
la preparacin que se ha de medir, en lugar del
micrmetro objetivo, observar a cuntas divi
siones oculares corresponde y multiplicar por
4. El valor total nos ser dado en mieras.
Otro procedimiento consiste en emplear el
ocular micromtrico sin ayuda del micrmetro
objetivo. Si no conocemos el aumento de la
combinacin ptica con la que estamos traba
jando, lo obtendremos sabiendo los aumentos
propios de ocular y objetivo; multiplicando
ambos, nos darn el aumento total. Podemos,
pues, calcular fcilmente el tamao de un obje
to superponiendo su imagen a la escala ocular
y dividiendo el nmero de divisiones que abar
ca por la cifra de aumento del microscopio. La
cifra resultante es, en milmetros, el tamao
real del objeto.
DIBUJO DE OBJETOS MICROSCPICOS
Cmara clara. Cuando interese conservar el
dibujo de la preparacin, ste puede hacerse
de memoria, alternando las observaciones
visuales con la ejecucin a lpiz del dibujo o
empleando la cmara clara. sta es un peque
o aparato que se coloca sobre el ocular del
microscopio, el cual, por medio de unos pris
mas y espejos, refleja la luz y presenta, a la vez,
a la observacin, las imgenes superpuestas de
la preparacin y el papel situado encima de la
mesa de trabajo.
Las cmaras claras ms corrientes son las de
Abbe, Nachet y Malassez. La iluminacin del
papel y la de la preparacin deben tener la
misma intensidad, y el papel, estar a unos 25
cm del ojo del observador.
Es utilizable tambin, para dibujar preparacio
nes, el ocular de proyeccin.
 Reglas g e nerales
de o b s e r v a c i n P '

Fig. 1 - M icroscopio en la mesa de trabajo.

Fig. 2 - M archa de los rayos de luz al

ser reflejados por un espejo. En A,
espejo plano; en B, cncavo.

Fig. 3 - Cam pana de cristal para la proteccin del m icroscopio. Fig. 4 - M icrm etros; A, objetivo; B, ocular.

Fig. 5 - M archa de los rayos luminosos en las cmaras claras de Abb (A), de Nachet (B) y de M alassez (C).

TCN ICAS DE OBSERVACIN

www.FreeLibros.me
15
 T c n i c a s de o b s e r v a c i n
TCNICA DE LAS PREPARACIONES
En general, una preparacin microscpica es
resultado de una serie de operaciones destina
das a disponer el material de observacin en
una capa de poco espesor, lo ms pequea y
representativa posible, en seco, en lquido, en
vivo o en partes, encima de una plaquita de
vidrio transparente (portaobjetos o porta) y
tapada, algunas veces, con otra mucho menor
y ms delgada (cubreobjetos o cubre).
Portaobjetos. Deben ser de vidrio lo ms trans
parente posible, de un espesor aproximado de
dos milmetros y de unas medidas standard:
76 x 26 milmetros; los bordes pueden ser o no
esmerilados. (Fig. 1, A.) Algunos tienen una
concavidad circular en su centro, destinada a
recibir gotas de lquido con elementos para su
estudio (gota pendiente). (Fig. 1, B.)
Cubreobjetos. Los hay de muchos tamaos: los
habituales son 18 x 18, 20 x 20 y 22 x 32 mm
y de diversas formas: los ms son cu a d ra n g la
res. (Fig. 1, C.) Su espesor es aproximadamente
de 0,25 milmetros.
Tanto los portas como los cubres deben lim
piarse, antes de su empleo, con alcohol, para
eliminar la grasa y el polvo. Despus de utili
zados y limpios, conviene dejarlos en un frasco
de boca ancha con alcohol. (Fig. 2.)
Es muy conveniente emplear los cubres para
dar mayor uniformidad a las preparaciones.
Solamente se prescindir de ellos en las obser
vaciones secas con objetivo de inmersin.
Otros accesorios para la confeccin de prepa
raciones se pueden ver en la figura 4.
1.a Preparaciones opacas. Pueden cubrirse o
no, segn el espesor del objeto. Como rara
mente se pueden iluminar por transparencia, se
emplea luz lateral o central, iluminando la pre
paracin por encima con una lmpara y un
condensador, o con lmpara y lupa para con
centrar los rayos.
2.a Preparaciones transparentes delgadas. La
luz axial blanca, el condensador levantado y el
iris con 3/4 de abertura permiten el examen de
preparaciones delgadas de objetos coloreados:
hongos, bacterias, organismos del plancton,
etc. La interposicin de un filtro, de color com
plementario del objeto que se observa, da una
imagen ms fina y detallada. Se emplean obje
tivos fuertes y de inmersin.
3.a Preparaciones transparentes espesas, a) Se
baja el condensador y se disminuye la abertura
del iris tanto como sea posible. La luz axial redu
cida disminuye la abertura y aumenta la profun
didad. Con un objetivo de mediano aumento y
un ocular fuerte puede observarse la prepara
cin en su base y en sus diferentes planos, b) Se
ATLAS DE MIC R O SCO PIA
www.FreeLibros.me
16
sube el condensador y se abre todo lo posible el
diafragma. Se utiliza un objetivo fuerte y un ocu
lar dbil. Y se estudia la preparacin en sus dife
rentes planos, separadamente.
PREPARACIONES ENTRE PORTA Y CUBRE
Para observar organismos acuticos microscpi
cos (algas, cortes transparentes, gusanos, larvas,
etc.), basta poner encima del porta una gota del
lquido que los contenga. Se coge el cubre con
dos dedos, se pone en contacto uno de los bor
des con la gota y se deja caer por su propio peso,
para que el aire no forme burbujas. Se observa
con poca luz y objetivo dbil. (Fig. 3.)
GOTA PENDIENTE
Es un mtodo parecido al anterior, con la dife
rencia de que en l se emplean portas excava
dos (fig. 5). Se pone en el centro del cubre una
gotita del lquido que se va a observar. Se
invierte el cubre y se coloca encima del porta
de modo que la gota no toque el fondo de la
excavacin. Antes, se humedecen los bordes
con vaselina, evitando as la evaporacin.
LQ U ID O S PARA EL EXAMEN EN FRESCO
Diluentes del material a examinar.
a) Lquidos fisiolgicos. Para conservar los
organismos vivos en las condiciones ms pare
cidas a las naturales.
Solucin fisiolgica:
Cloruro s d ic o .......................................... 9 g
Agua destilada ....................................... 1.000 mi
Y la solucin Ringer.
b) Lquidos de adicin. Aclaran los objetos
poco transparentes que precisan un tratamien
to que los haga visibles; por ejemplo, pequeos
insectos, pelos, fragmentos vegetales, etc.
Lactofenol:
cido fnico crista liza d o 1 g
cido lctico 1
Glicerina ..................................................................2
Agua destilada 1 mi
Basta sumergir en una gota de lactofenol el
objeto, colocado en una porta y tapado des
pus con el cubre. Se puede acelerar el aclara
do calentando todo ligeramente a la llama de
alcohol.
De mayor poder aclarante es el
Clorofenol:
Hidrato de doral cristalizado ............... 2 partes
cido fnico cristalizado ........ 1 parte
 T c n i c a de l a s
preparaciones

Fig. 1 - A, portaobjetos normal; B, portaobjetos excavado, y, C , cubreobjetos.

Pipeta d e v id rio
V a rilla de cristal

Fig. 2 - Frasco de boca ancha

para guardar los portaobjetos.

Fig. 3 - Forma correcta de colocar el cubre

objetos sobre el portaobjetos normal.

U
A sa de Tijeras C rista liza d o r
p latino

C ubeta

e l
Fig. 4 - Instrumental y recipientes utilizados en las preparaciones. Fig. 5 - Manera de colocar el cubreobjetos
sobre el portaobjetos excavado.

TCN ICAS DE OBSERVACIN

www.FreeLibros.me
17
 T c n i c a s de o b s e r v a c i n
DISO CIACI N
La disociacin consiste en dividir en pedazos
tan pequeos como sea posible, con ayuda de
agujas y lancetas, un fragmento de rgano o de
tejido colocado en una pequea porcin de
lquido (agua, lquidos fisiolgicos o aclaran-
tes). Se sujeta el fragmento valindose de la
mano izquierda con ayuda de una aguja, mien-
tras con ia derecha, mediante una lanceta (fig.
1) se van separando los fragmentos, teniendo
en cuenta su estructura.
CORTES
Se emplean para lograr porciones de tejidos u
rganos en fragmentos lo suficientemente del-
gados que comprendan un nmero reducido
de clulas y puedan ser observados por trans-
parencia. Corrientemente se hacen varios cor-
tes de una misma porcin y, si es posible, en
dos secciones perpendiculares. Pueden conse-
gulrse mediante una hoja de afeitar afilada, con
bistures o, cosa ms corriente, con aparatos
especiales llamados micrtomos.
Para la observacin de minerales tambin se
emplean cortes o lminas finas, logradas con
aparatos especiales.
Antes de efectuar los cortes deben prepararse
los materiales recurriendo a operaciones ten-
dentes a endurecerlos. El endurecim iento
puede lograrse con sustancias qumicas, como
el alcohol, el formol, el cido crmico.
Indudablemente lo que mejores resultados pro-
porciona es la inclusin. Consiste sta en hacer
penetrar ntimamente en los objetos, previa-
mente fijados, una masa plstica que d al
material la dureza deseada para poderlo cortar
sin dificultad. Existen varias materias para ello.
Las ms usadas son la mdula de saco, el cor-
cho, la parafina y el colodin. (Fig. 2.)
Inclusin en parafina
Su tcnica, a grandes rasgos, incluye:
1. Fijar en lquido de Bouin o formol durante
tres das.
2. Lavar con alcohol de 90.
3. Deshidratar durante 24 horas por pases suce-
sivos en alcoholes de diferentes graduado-
nes, finalizando en el alcohol absoluto.
4 Introducir en una mezcla de alcohol butlico,
tolueno o xilol y parafina durante varias horas.
5. Introducir y dejar durante 24 horas en para-
fina fundida.
Inclusin en colodin
Aconsejable cuando en el material existen
muchas cavidades que, si se llenan de colo-
ATLAS DE MICROSCOPIA
www.FreeLibros.me
18
) din, no perturban, gracias a su transparencia,
) la observacin.
\ 1 .S e fija y deshidrata al mismo tiempo el
/ material, tratndolo durante 12 horas en
S una mezcla de alcohol absoluto y ter.
/ 2. Se baa el material en soluciones, cada vez
) ms concentradas, de colodin en ter y
\ alcohol. Estos baos pueden prolongarse
/ varios das, segn el grueso del objeto.
) Generalmente, con tres das basta. En vez
( de colodin puede utilizarse celoidina.
Preparado el objeto, podemos obtener los cor
S
tes, incluso a mano, con una hoja de afeitar
bien afilada, sujetando el material con la
\ izquierda y atacndolo oblicuamente con la
/ derecha armada de la hoja. Se corta lo ms
\ finamente posible. Con cierta prctica es fcil
( de conseguir.
)
\ M ICRTOM OS
/
) El micrtomo de mano es un aparato muy sen
cillo. Consiste en un tubo en cuyo interior se
(
) coloca la inclusin. En la parte superior, una
S platina sostiene la hoja, que es corredera. Con
un tornillo milimtrico, situado en la parte infe
/
rior, se hace subir la incftjsin y se grada el
)
( espesor a que deseemos cortar. (Fig. 3.)
Esencialmente, los micrtomos constan de pla
)
tina, hoja y tornillo. En el mercado hay varios
S
modelos, como el de Minot (fig. 4).
(
Se emplean los cortes por congelacin cuando
el material debe ser observado con rapidez. El
\
sistema refrigerador es habitualmente el anh
/
drido carbnico por descompresin rpida.
)
Una vez obtenidos los cortes, si no fueron
(
incluidos, pueden colocarse directamente en
/
un porta con un lquido a eleccin -agua,
\
suero, glicerina, e t c - , taparse con un cubre y
/
observarse. Previamente pueden haber sido
)
coloreados, como veremos ms adelante. Los
incluidos en parafina se colocan en un porta
con una gota de agua albuminosa y, sin dar
lugar a que se funda la parafina, se calientan
\ ligeramente, a fin de que queden pegados al
/ porta. Se recoge el agua sobrante con un papel
j de filtro y se disuelve la parafina con toluol. Se
( tapan o montan y pueden observarse.
/
\ FIJACIN
/
La mayora de las preparaciones, especial
)
mente las bacteriolgicas, histolgicas y para
(
sitolgicas, antes de observadas deben ser
)
fijadas, para que no sufran alteraciones en las
operaciones siguientes (coloreado, montaje).
(
Con m anipulaciones adecuadas y lquidos
/ especiales se logra el efecto deseado, aunque
) no con la perfeccin que quisiramos. Se
 T c n i c a de l o s g H
preparaciones w S

Englobacin

En m dula
En co rcho de saco

En parafina

Fig. 2 - Inclusin de la muestra en diversos materiales para facilitar los Fig. 3 - M icrtom o de mano
cortes m icrotm icos. (de Ranvier).

Portabloques

M anivela

Regulador de m ieras

Fig. 4 - M icrtom o de Minot para obtener cortes seriados.

TCNICAS DE OBSERVACIN
www.FreeLibros.me
14
emplean fijadores fsicos: calor, fro, deseca
cin, y fijadores qumicos: alcohol, ter, cido
pcrico, formol, mezclas, etc. Nos dar muy
buenos resultados el formol, ya que, adems de
fijar, conserva losmateriales, o el lquido de
Bouin.
Lquido de Bouin:
Formol ................................................... 1 parte
Agua ................................................... 3 partes
cido pcrico a saturacin
En el momento de emplearlo se aade un 5%
de cido actico cristal izable. Tanto en Botni
ca como en Zoologa, fija los organismos en
muy poco tiempo.
Para fijar al calor, una vez extendido en el
porta, el material que se va a observar se
calienta a la llama hasta secarlo, procurando
que el calor no resulte muy intenso. Debe com
probarse con el dorso de la mano el calor del
porta, que no ha de dar la sensacin de que
madura.
Para fijar al alcohol se ponen, por medio de
una pipeta, unas gotas encima de la prepara
cin, cubrindola totalmente. Las dejamos que
acten unos minutos y desechamos el sobrante
inclinndola. Hay un mtodo intermedio:
cubrir la preparacin con alcohol, dejarlo
actuar y despus de desechar el sobrante, fla
mear el resto; se apaga la llama rpidamente,
soplando con una pera de goma.
CO LO RACIO N ES
Los mtodos de coloracin estn destinados a
poner de manifiesto los diferentes constituyen
tes de las clulas y de los tejidos que no seran
observables, o lo seran deficientemente, sin
esta operacin. En la mayora de los casos no se
colorea el material uniformemente, sino que se
selecciona o da preferencia a una determinada
estructura de los elementos celulares.
Unos colorantes se fijan en los ncleos y otros
en los citoplasmas, y as se logra, segn el uso
que de ellos se haga, teir uno solo o ambos
constituyentes a la vez. Tambin pueden con
seguirse coloraciones combinadas, dobles o tri
ples, que den preparaciones con los constitu
yentes celulares teidos con uno o dos colores
a la vez.
ATLAS DE M ICRO SCO PIA
www.FreeLibros.me
20
Las soluciones colorantes sern elaboradas con
sustancias tan puras como sea posible y mez
cladas exactamente al ttulo indicado. Una vez
preparadas, se conservarn en frascos cuenta
gotas de color topacio. (Fig. 1.)
El procedimiento ms cmodo y limpio para
teir preparaciones es colocar sobre un cristali
zador dos varillas de vidrio paralelas, sujetas en
sus extremos como indica la figura 3, que cons
tituyen el puente sobre el cual se depositan las
preparaciones que se han de teir. Sobre ellas se
pone el colorante, que se deja actuar el tiempo
necesario. Es conveniente hacer varias prepara
ciones para colorearlas con diversos colorantes
o todas con el mismo, por si alguna de ellas se
inutilizase y se tuviera que empezar de nuevo.
Para lavarlas no es preciso tocar las preparacio
nes, sino arrastrar el colorante sobrante
mediante un chorro de agua. Si no se indica
otra cosa, puede emplearse agua del grifo. Lo
corriente es tener un frasco lavador en la mesa
de trabajo. (Fig. 2.)
Coloraciones vitales
Pueden considerarse como un procedimiento
intermedio entre el examen en fresco y la tin
cin despus de la fijacin. Tienen por objeto
poner de relieve detalles estructurales sin cau
sar la muerte al organismo sometido a observa
cin. Se emplean colorantes de escasa toxici
dad en diluciones elevadas. Por ejemplo:
Azul de metileno en solucin acuosa al 1/500,
1/1.000 o 1/10.000.
Verde Janus en solucin fisiolgica al 1/500.
Tambin se pueden emplear colorantes indica
dores: rojo neutro, rojo Congo, Orange I, II y IV,
etctera, que permiten determinar las reaccio
nes de ciertos elementos.
Tcnica. Se pone sobre la preparacin en fres
co, entre porta y cubre, y en la parte media del
borde de ste, una gota de colorante, que, por
capilaridad, penetrar entre las dos lminas de
vidrio y teir la preparacin. (Fig. 4.)
Para conseguir una tincin ms uniforme, la
tcnica ms utilizada es colocar sobre el porta
una gota del material que se va a examinar y al
lado otra de colorante y mezclarlas completa
mente con el asa de platino o con el borde del
cubreobjetos, colocando ste encima una vez
coloreado. (Fig. 5.)
 T c n i c a de l a s ^ ^ H
preparaciones

Tapn cuentagotas de
cristal

Cuentagotas
adosado al tapn

Fig. 1 - Botellas de colorantes. En A, con safranina al 0,2 % ;

en B, con azul de metileno al 0,5 % .

Fig. 2 - Frasco lavador.

Fig. 3 - Modo de colocar las preparaciones

sobre el cristalizador.

Tapn de ca u cho

C o ta d e colorante

M uestra

Fig. 4 - Tincin de la preparacin por difusin del colo- Fig. 5 - Tincin por m ezcla del colorante con la prepara-
rante entre el porta- y el cubreobjetos. cin, mediante el asa de platino.

TCN ICAS DE OBSERVACIN

www.FreeLibros.me
21
 T c n i c a s de o b s e r v a c i n
Coloraciones simples
Slo dan una orientacin acerca de la morfolo
ga y la cantidad. Se emplean la tionina, el azul
de metlleno, la fucsina fenicada, etc.
Tcnica. Se extiende sobre el porta, lo ms
finamente posible, el material que se ha de exa
minar, el cual se fija ya al calor, ya al alcohol,
etctera. Se deposita encima de las varillas, en
el cristalizador. Se baa con el colorante el
tiempo necesario. Se lava al chorro con agua y
se deja secar a calor suave. Se pone encima
una gota de aceite de cedro y se observa con
objetivo de inmersin. (Fig. 1.)
Los tiempos de coloracin son muy variables.
He aqu una pauta a seguir:
Fucsina diluida ....................................... 1 minuto
Violeta genciana .................................... 1/2
Azul de metilo fe n ic a d o ..................... 1
Azul de metilo a lc a lin o ..................... 2
Tincin negativa
Este procedimiento de examen de bacterias y
protozoos da buenos resultados por destacar
sobre fondo oscuro detalles (cilios, flagelados)
que no se pondran de manifiesto por los mto
dos corrientes. Da imgenes muy semejantes a
las que se obtienen con el ultramicroscopio.
(Fig. 2.)
Puede hacerse en fresco, al igual que la tincin
en vivo, o bien en extensin seca y fijada,
como en la coloracin simple. Se emplea como
colorante tinta especial (R.A .L. - Pelikan 541).
La observacin es por inmersin.
Hay quien emplea, en lugar de tinta, rojo
Congo al 2 por 100, colargol o nigrosina.
Coloraciones diferenciales
Tienen por objeto realizar la tincin de deter
minados elementos por contraste con el fondo.
Existen infinidad de ellas y se emplean en Bac
teriologa, Protozoologa, Histologa, etc. En
cada caso, citaremos ms adelante el mtodo y
la tcnica apropiados.
Colorantes bsicos
Tambin llamados colorantes del ncleo. Son
muy abundantes. Citaremos los ms corrientes.
Hematoxilina - hematena
La hematoxilina es un colorante muy corriente
(fig. 4), utiIizable despus de cualquier fijador.
Por oxidacin se transforma en hematena, que
I ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
22
es el princio activo. Solas, ni la hematoxilina ni
la hematena dan coloracin. Asociadas a una
base (laca), producen la coloracin por mor
diente. Son solubles en alcohol y glicerina.
Existen muchas tcnicas de coloracin con la
hematoxilina.
Hemalum de Mayer
H e m aten a ] g
Alcohol de 9 0 .......................................... 50 mi
Alumbre al 5% en agua ..................... 1.000 mi
En lugar de la hematena puede usarse la
hematoxilina, aadiendo a la frmula anterior
0,2 gramos de yodato potsico, que transforma
la hematoxilina en hematena.
Hematoxilina frrica de Heidenhain
Procedimiento muy empleado en Citologa y
Parasitologa. Los elementos a teir se introdu
cen en:
a) Agua destilada ..........................................100 mi
Alumbre de h ie r r o ................................. 3 g
Despus se lavan y se sumergen en otra solu
cin, a la cual se habr aadido antes doble
cantidad de agua:
b) Agua destilada .......................................90 mi
Alcohol absoluto .......................................10
Hematoxilina 1
Se deja actuar durante 24 horas.
Los ncleos y centrosomas se colorean de
negro, y el protoplasma, en gris claro.
Fucsina bsica
Se mezclan en un mortero, y en la proporcin
que se indica:
F u c s in a 1 g
cido fnico c ris ta liza d o ........................... 5
Alcohol de 95 ................................................... 10 mi
Agua destilada ...................................................90
Una vez reposado todo, se deja 24 horas y se
filtra.
Es un colorante muy rpido y comnmente
usado en Bacteriologa.
Violeta de genciana
Se emplea, en soluciones hidroalcohlicas,
fnicas o formoladas, en Bacteriologa. (Fig. 3.)
Una frmula corriente es sta:
Solucin alcohlica saturada de violeta
de g e n c ia n a ...................................................25 mi
Solucin de formol al 5% ...........................75
(Concluye en la lmina D/5)
 T c n i c a de l a s *
preparaciones

Espiroqueto de
los dientes
Esp irilo de
Vin cen t

O b jetivo
G ota de
aceite de
^ Portaobjetos
cedro

Fig. 1 - O bjetivo de inmersin dispuesto para la observacin.

Espiroqueto Treponem a
refringente plido

. v Fig. 2 - Varios microorganismos observados en tincin negativa.

Fig. 3 - C o libacilos. Tincin por violeta de genciana.

Fig. 4 - Co rte de la arteria aorta. Ticin por hematoxilina

frrica y eosina.

Fig. 5 - Bacteria carbuncosa, en bastoncitos. Tincin por Fig. 6 - Bacteria carbuncosa, en cadenas de cocos. Tincin
azul de metileno. p0 r cido pcrico.

TCN ICAS DE OBSERVACIN

23
www.FreeLibros.me
 T c n i c a s de o b s e r v a c i n
MONTAJE
Si se desea conservarlas, las preparaciones
deben hacerse de tal manera que no se alteren
ni se decoloren. Rara conseguirlo ha de recu-
rrlrse al montaje. Son en gran nmero los mto
dos para hacerlo. Su eleccin depende del
material que se trate de montar.
Montaje en gelatina glicerinada
Los objetos que deben ser montados por este
medio se preparan hmedos. Antes del monta
je se les puede macerar en lactofenol, o bien en
lquido glicerinado o acetificado, pero nunca
en alcohol.
Tcnica. Con una aguja o lanceta se pone una
porcin de gelatina glicerinada encima del
porta. Se calienta suavemente, hasta que la
gelatina se funde, pero sin que llegue a hervir.
Se Introduce el material de estudio en el centro
de esta masa, se tapa con un cubre calentado
de antemano suavemente y se deja enfriar. (Fig.
1, A.) Se pone encima del cubre un pequeo
peso para uniformizar la preparacin y eliminar
la gelatina glicerinada sobrante. Para evitar eva
poraciones, se pasa por los bordes del cubre,
con un pincel fino, barniz, resina o colodin.
(Fig. 1, B.)
Montaje en resina
Puede efectuarse en fro o en caliente, segn la
naturaleza del material. Como las resinas son
insolubles en el agua, todos los materiales des
tinados a ser montados deben ser previamente
deshidratados, pasndolos a travs de diversos
alcoholes concentrados, de menos a ms, sien
do el ltimo el alcohol absoluto, y despus se
pasan asimismo por aceites esenciales (berga
mota, canela, cedro, lavanda, girasol, etc.).
Actualmente se encuentran en el mercado
muchas resinas que dan buenos resultados para
el montaje: resina de Sammar, cumarone,
hyrax, colofonia, terebentlna de Venecia, resi
nas acrllcas, etc.
El procedimiento es casi idntico al que se
sigue con la gelatina glicerinada: se pone una
gota en el centro de la preparacin, la cual se
calienta, y seguidamente se tapa.
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
^24
www.FreeLibros.me
Montaje en blsamo de Canad
Su nombre no es el apropiado, pues no se trata
de un blsamo, sino de una resina que se extrae
de unas coniferas americanas (Abres canaden-
sis, Abies balsamea).
Es muy refringente y transparente: de aqu su
gran aceptacin en Microscopa. En el comer
cio se halla en forma de blsamo natural siru
poso, blsamo seco y blsamo disuelto en xllol.
Recomendamos esta ltima forma.
Tcnica. Se pone una gota de blsamo encima
de un porta bien seco. El objeto que se ha de
montar, impregnado en xilol, se introduce en la
gota y, con las precauciones necesarias, se tapa
con el cubre, haciendo con l ligera presin
para lograr un espesor uniforme. Cuando es
preciso montar diatomeas, frotis secos, han de
eliminarse totalmente el aire y la humedad
mediante una gota de xilol. Una vez hecho
esto, se pone el blsamo, debiendo tenerse en
cuenta que la cantidad de ste debe estar en
consonancia con el tamao del cubre y el espe
sor del objeto. Es conveniente dejar secar la
preparacin durante 24 o 48 horas antes de
guardarla, para evitar que cualquier movimien
to del cubre la altere.
Montaje de objetos en seco
Ciertos objetos, como escamas de mariposas,
radlolarios, etc., que pueden ser observados con
luz reflejada, se ponen en el interior de una clu
la ms o menos profunda confeccionada con bar
niz. Con un pincel empapado en barniz se dibu
ja encima del portaobjetos un crculo o cuadro
cuyo espesor ser mayor o menor, segn el nme
ro de capas que se le den. Se coloca el objeto en
el centro de esta clula, Inmovilizndolo con un
poco de agua albuminosa o de goma arbiga.
Antes de taparlos se calientan ligeramente el porta
y el cubre. Los bordes de ste se barnizarn tam
bin, para lograr un mejor ensamblaje. (Fig. 2.)
ETIQUETAJE
Toda preparacin que haya de guardarse (fig. 4)
debe ser etiquetada con su nombre y lugar,
fecha y mtodo empleado para su tincin, y
montaje. (Fig. 3.) Ello, con el mayor cuidado.
 T c n i c a de l a s m m
preparaciones

l J
Fig. 1 - M ontaje de una preparacin. En A, colocacin del cubreobjetos; en B, prensado mediante una pesa.

Fig. 2 - Montaje de objetos en seco mostrando la cma

ra con la preparacin. En A, barnizado; en B, corte trans
versal de la misma.

TCN ICAS DE OBSERVACIN

25
www.FreeLibros.me
 Bacteriologa
BACTERIAS
Organismos unicelulares microscpicos, inclui
dos en la Clase Esquizomicetos por sus analo
gas con los hongos inferiores. Tienen estructura
muy sencilla, membrana evidente, protoplasma
en el que se observan granulaciones metacro-
mticas y vacuolas, y ncleo poco o nada dife
renciado. Algunas especies tienen la propiedad
de encapsularse (clulas fagocitarias) cuando las
condiciones ambientales les son adversas.
Son de forma coccea, bacilar y espirilcea. Se
reproducen por esquizogonia. Segn la forma en
que se escinden y la direccin en que lo hacen,
crean agrupaciones celulares que tienen impor
tancia en sistemtica para la identificacin de la
especie: diplococos, estafilococos, estreptococos,
tetradas y srcinas, etc. Algunas especies forman
esporas muy resistentes a los agentes fsicos y qu
micos, y permanecen en estado de vida latente
por tiempo indefinido. Cuando las circunstancias
les son favorables, regeneran nuevas bacterias.
Ciertas especies se mueven por impulso de
cilios y flagelos, polares o repartidos por toda
su superficie. (Fig. 1.)
RECO LECCI N DE MUESTRAS
Las bacterias son los organismos que ms abun
dan en la Naturaleza. Las encontraremos en cual
quier lugar: tierra, aire, hielos, aguas marinas y
fluviales, aguas termales, fondos marinos, en los
charcos de agua estancada, en las aguas residua
les, etc., y en mayor nmero all donde se acu
mulen detritos orgnicos. Esto tiene mucho inte
rs para la observacin microscpica, pues, dado
su pequeo tamao, si la muestra no es muy rica
en bacterias, ser muy difcil observarlas.
Se emplean diversos sistemas para concentrarlas
en nmero suficiente. Uno de ellos consiste en
centrifugar el lquido que las contenga median
te una centrifugadora (fig. 2) y recoger el sedi
mento con una pipeta. Es mtodo para observa
ciones rpidas; casi siempre, el mejor es el de
los cultivos en medios lquidos o slidos.
En los medios lquidos invaden todo el medio y,
por ser sumamente abundantes, se depositan en el
fondo del recipiente. En los medios slidos, cada
bacteria desarrolla una colonia, perfectamente
visible, aislada y tpica de cada especie. Son, pues,
aconsejables los medios slidos. (Figs. 3 y 4.)
ESTUDIO EN VIVO
Se utiliza el mtodo de la gota pendiente. (Fig.
5.) Se emplea preferentemente para observar la
I ^ H
www.FreeLibros.me
motilidad bacteriana. Su observacin requiere
objetivos fuertes e intensa ilum inacin. Su
transparencia dificulta su visin.
Para el estudio de la morfologa bacteriana es
ms aconsejable servirse de preparaciones tei
das. Rara ello tenemos que extender las prepa
raciones, fijarlas, secarlas y teirlas encima de
un portaobjetos. La toma y extensin del mate
rial, proceda de cultivos slidos o lquidos,
debe efectuarse con un asa de platino, que
habr de ser flameada hasta el rojo sombra des
pus de cada manipulacin.
Extensin
Se pone una gota del lquido que se ha de exa
minar en un extremo del porta, y con el asa se
extiende lo ms fina y ampliamente posible.
(Fig. 6.) Si el lquido que debe extenderse pro
cede de un medio de cultivo, ser preciso rea
lizar diluciones con agua o suero fisiolgico
estril, y ello puede hacerse directamente enci
ma del porta, poniendo las dos gotas, suero y
material, una al lado de otra y mezclndolas
totalmente con el asa.
Desecacin
Se logra agitando la preparacin al aire o por el
calor suave de una llama.
Fijacin
Puede obtenerse por el calor, al mismo tiempo
que se seca, o tambin, y es lo ms aconseja
ble, con alcohol-ter (mezclados en partes
iguales). Se vierten algunas gotas encima de la
preparacin, las suficientes para cubrirla total
mente, y se deja secar. Se pueden combinar
ambos mtodos, cubriendo la preparacin con
alcohol y pasndolo por una llama. (Fig. 7.)
Coloracin
Los exmenes de frotis bacterianos reclaman el
mtodo de coloracin por dos razones. En pri
mer lugar, porque aumenta la visibilidad de
algunos elementos que no seran visibles sin la
tincin; en segundo lugar, porque al tener, una
vez teidos, diferentes afinidades de coloran
tes, pueden diferenciarse algunos elementos
que, sin colorear, pareceran guales.
Se dispone de gran nmero de colorantes y hay
numerosas tcnicas de coloracin. Su valor, sen
siblemente igual, no se presta a una clasifica
cin. Ahora bien, basta un pequeo nmero de
colorantes para dominar la tcnica de la tincin
c ROSCOPIA
 Bacterias
C/l

//
:: V
V l
1
1 * jr
Ttradas _
M c t o c o c o s D ip lo co co s Estreptococos

S re i as

Estafilococos
& B a cilo s

C ) Bacterias m o n t r ic a s '^ ^
Vibriones E sp irilo s B acterias p oltricas

Fig. 1 - Morfologa de las bacterias.

Fig. 2 - Centrifugafora. En A, tubo de centrifugadora con el
Siem bra norm al
contenido que se va a centrifugar.

Siem bras in clin ad as

Fig. 3 - Tubos para siembras Fig. 4 - Cpsula de Petrri con agar com o medio de
ras en gelatina o agar. cultivo, en el que se han desarrollado colonias de
bacterias.

Fig. 5 - Co locacin de una preparacin a gota pendiente en

portaobjetos excavado.

Fig. 6 - Extensin de una preparacin sobre el portaobjetos Fig. 7 - Posicin correcta para el secado o
sim ple mediante la varilla de cristal. fijado de las preparaciones.

B A C T E R j^ ^ ^ l
www.FreeLibros.me
 Bacteriologa
de bacterias. Salvo casos excepcionales, la rela
cin que damos a continuacin ser suficiente.
Pueden adquirirse en pequeos frascos de solu
cin ya preparada para su uso o bien en solu
ciones concentradas, en polvo y en comprimi
dos para ser preparados en el momento en que
hayan de emplearse. Es conveniente anotar en el
frasco del colorante la fecha de la preparacin,
pues con el tiempo son fcilmente alterables.
Violeta de genciana fenicada
Solucin saturada de violeta de genciana
en alcohol 10 mi
Agua fnica al 1 % ............................................. 90
M odo de empleo.Fijada la preparacin con
alcohol-ter, se cubre de colorante durante un
minuto, se lava con agua destilada y se seca.
Objetivo de inmersin.
Tionina fenicada
Tionina 0,50
Alcohol absoluto ....................................... 10
Efectuada la solucin, adase lentamente:
Agua fenicada al 1% ..................................100 mi
M odo de empleo. Se fija, se colorea durante
cinco minutos, se lava y se deja secar. Es un
excelente colorante tanto para microbios como
para parsitos y clulas. Las bacterias se tien
en color azul oscuro; los otros elementos, en
color azul claro. (Figs. 1, 4, 5, y 6.)
A zu l de metileno fenicado
Azul de metileno .......................................... 1 g
Acido fnico cristaliza d o ........................... 1
Alcohol absoluto ..............................................10 mi
Se disuelve, y se aade poco a poco:
Agua destilada ...................................................90 mi
M odo de empleo. Igual que con los anteriores.
Se deja actuar durante dos minutos.
Mtodo de Gram
Es un mtodo de diferenciacin que permite
clasificar gran nmero de bacterias en grampo-
sitivas y gramnegativas, segn tomen o no el
colorante.
Se emplean tres soluciones:
a) Violeta de genciana fenicada.
b) Solucin Lugol:
Yoduro p o tsico ....................................... 2 g
Yodo 1 el contrario, no aparece, una vez lavada se deja
Agua destilada ..........................................100 mi
c) Alcohol-acetona:
Alcohol absoluto ....................................
Acetona ......................................................
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
iL8
www.FreeLibros.me
M odo de empleo. Se fija la preparacin median
te calor o alcohol-ter y se cubre con unas gotas
de solucin de violeta de genciana durante dos
minutos. Se vierte el exceso de colorante por
inclinacin. Sin lavar la preparacin se le aa
den unas gotas de Lugol hasta que se vuelve de
color pardo. Se deja escurrir el resto de Lugol y
se aade alcohol-acetona hasta que la prepara
cin se decolora. Se lava y, seguidamente, se
colorea con fucsina o safranina durante dos
minutos. Se vuelve a lavar con agua y se seca.
Los microbios grampositivos quedan teidos en
violeta. Los gramnegativos aparecen en color
rojo. (Fig. 2.)
Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen
Se emplea para teir los bacilos acidorresisten-
tes, como el Koch y el de Hansen.
Este mtodo se funda en el hecho de que, si se
fuerza su coloracin, las bacterias a las que, en
g condiciones ordinarias, tien difcilmente los
colores bsicos de la anilina retienen la mate
ria colorante de tal modo que no consiguen
decolorarlas decolorantes enrgicos como el
alcohol y los cidos diluidos. Por tanto, los gr
menes corrientes no retienen el color, y slo los
acidorresistentes persisten teidos.
Se emplean las siguientes soluciones:
a) F u c s in a 1 g
cido fnico c ristaliza d o ..................... 5
Alcohol absoluto .................................... 10
Agua destilada ............................................100
ti) cido ntrico 25
Agua ................................................................ 50
c) Azul de metileno fenicado.
M odo de empleo. Se fija al calor o con alcohol-
ter. Se cubre de colorante (solucin a), y se
calienta en platinas calentadoras o a la llama,
hasta que se desprenden vapores, pero evitando
llegar a la ebullicin. Si tiende a secarse, se
cubre nuevamente de colorante. Al cabo de
unos cinco minutos se decanta para dar salida al
colorante sobrante y, sin previo lavado, se cubre
la preparacin con el decolorante (solucin b).
Se repite varias veces la operacin hasta que la
decoloracin es casi total. Si quedasen sin des
teir algunos puntos de mayor grosor, no debe
insistirse demasiado, para evitar desteir total
mente el resto de la preparacin. Se lava con
mucha agua. Si este lavado hiciera reaparecer el
color rojo, se aade nuevo decolorante. Si, por
secar. Finalmente se tie con el colorante de
fondo, azul de metileno fenicado. Los bacilos
90 mi acidorresistentes aparecern en rojo, y los
30 dems elementos y el fondo, en azul. (Fig. 3.)
 Bacterias
C/2

3 3 ' " ' ' O 3 \

\ y y
V ^ 1
$ '/

*\ 0
3 V 15 J _%%
- '

Fig. 1 - Tincin por la tionina de un preparado de sangre con Fig. 2 - Tincin por el Gram . En A, gonococos, no se tien; por
protozoos. lo tanto, son gramnegativos. En B, estafilococos, se tien:
grampositivos.

*" / ' v , \ t I
'

' ' x 4 f
7
8A \ \| \ X .s
- A
^
v j V

% V

Fig. 3 - Tincin por el mtodo Ziehl para bacilos

> V rA , Fig. 4 - Preparaciones teidas por la tionina.
%
acidorresistentes. En A, bacilo de Koch; en B,
bacilo de Hansen.

V Nl \ v

lv W )

V \S s = s . *

v nY 4
Fig. 5 - Bacilo de Eberth. Tincin mediante la tionina.
iw
Fig. 6 - Neumococos. Tincin por la tionina.

BACTERIOLOGA
www.FreeLibros.me
29
BACTERIAS MS FRECUENTES
Son de mencionar cuando menos, constituyen \
do un buen material de estudio: Bacterium /
coli, Bacillus subtilis, M icro co ccu s tetragenes, )
Staphilococcus aureus, Streptococcus pyoge- (
nes, Clostridium, Streptococcus lactis, M yco-
bacterium tuberculosis. (Lm. C/2, fig. 3, A.)
Esto aparte nos detendremos mayormente en
las que siguen, no menos frecuentes.
Espiroquetos
Son organismos en forma espirilada, flexibles y
mviles, con movimientos de reptacin y rota
cin y violentos latigazos. (Figs. 1, 3 y 4.) No se
les observa ncleo preciso ni contienen pig
mentos. Se reproducen por divisin transversal.
Se les incluye entre las bacterias, aunque mues
tran sensibles diferencias con respecto a stas
por cuanto no son cultivables en los medios
propios para ellas y responden a la quimiotera
pia, como los protozoos. Algunos autores los
consideran filtrables por su propiedad de frag
mentarse en grnulos que atraviesan los filtros.
Estos grnulos, en condiciones ptimas, rege
neran la especie.
Existen tres grupos muy interesantes desde el
punto de vista patolgico: Espironema, Trepo-
nema y Leptospira.
Espironema. Tienen la forma de espiras flexi
bles, anchas, en nmero de tres a cinco. Espe
cie tipo: Spirochaeta recurrentis o Borrelia
recurrentis (lm. C/4, flgs. 1-4), que es el agen
te productor de la fiebre recurrente. Tamao
aproximado, 8 a 18 mieras de largo por 0,25 de
ancho. Se colorea por el mtodo de Ciem sa o
por el de Fontana-Tribondeau. Se cultiva en
medios que contengan suero.
Treponema. Tiene forma de espiras apretadas y
terminadas en extremos afilados. Especie tipo:
el Treponema pallidum. Agente productor de la
sfilis. (Figs. 2 y 5.) Mide de 4 a 14 mieras de
largo, tiene los extremos muy afilados y, con
ayuda del microscopio electrnico, se han
observado en l haces de flagelos en ambos
polos. Es muy difcil de teir, el mejor procedi
miento es el de Tribondeau, y tambin es
bueno el de May-Grunwald-Giemsa. Se cultiva
en medios que contengan suero.
Leptospira. La especie tipo es la Leptospira icte-
rohemorragica. (Fig. 3.) Posee una serie de espi-
ras primarias, muy apretadas, cuyos extremos ter-
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
www.FreeLibros.me
30
) minan en forma de gancho. Mide de 6 a 9 mieras
de largo. Tiene movimientos de traslacin y de
rotacin. Produce la enfermedad de W eil, carac-
terlzada por ictericia, fiebre y hemorragia.
Se tie siguiendo los mismos procedimientos
que con los anteriores.
>
Colorante de Tribondeau
Es una m ezcla de eosinato de azul Borrell (azul
de metileno con plata) y eosinato de azul ordi
nario disuelta en alcohol etlico absoluto gllce-
rinado, que se encuentra ya preparado en el
comercio.
{ M todo. El colorante de Tribondeau fija y tie
) al mismo tiempo. Una vez extendida en el
( porta, la preparacin que debe teirse se deja
y secar al aire libre. No debe calentarse ni fijar-
S se. Se opera en dos tiempos:
/ 1, Se pone la preparacin, horizontal, encima
) de las varillas del cristalizador, se cubre con 5
C a 10 gotas de colorante, que se deja actuar
/ durante dos minutos, y se tapa todo con una
\ campana para evitar una excesiva evaporacin
( del alcohol.
2. Se aade, al colorante empleado, agua des
tilada, en proporcin de una gota de agua por
/ cada dos del colorante. Mediante un movi
miento de vaivn se logra que se mezclen el
( colorante y el agua. Se mantiene esta mezcla
) 10 minutos, si se trata de elementos que se
\ tien con rapidez, o 20 minutos si se trata de
( Treponemas y Leptospiras, que tardan ms en
) teirse. Transcurrido este tiempo, se lava la pre-
\ paracin con agua destilada y se seca, agltn-
/ dola o insuflando en ella aire con una pera de
S goma. Puede ocurrir que sobre la preparacin
( aparezca un fino precipitado que perjudicara
) la observacin; se elimina dejando actuar unos
\ segundos alcohol de 70 y lavndola seguida-
/ mente con agua, aunque lo ms prctico es
) empezar nuevamente.
( Con esta coloracin se pueden ver las bacterias
/ en azul o viloleta; los parsitos, en detalle, y
\ tambin en color violeta, y, por ltimo, los espi-
/ roquetas y los espiritas en color rojo. Las clu-
) las, la sangre, el pus, etc., aparecen con sus
( diferentes granulaciones e inclusiones teidas.
) Una modificacin de este mtodo, y que da
\ muy buenos resultados para la observacin de
( Treponemas, es -vase a continuacin- el de
/ Fontana-Tribondeau.
 Bacterios
C/3

Fig. 2 - Treponema pallidum. Tincin con el Giem sa.

Fig. 1 - U n espiroqueto "visto" con el m icroscopio elec

trnico.

^ \

Fig. 5 - Treponema pallidum. Tincin por el mtodo Fontaha->Tri-

bondeau.

BACTERIOLOGA
www.FreeLibros.me
31
 Bacteriologa
Mtodo de Fontana-Tribondeau
Se funda en la eliminacin de las clulas san
guneas y la impregnacin completa del Trepo-
nema.
Son necesarios los siguientes reactivos:
1. Solucin de Ruge:
cido a c tic o 1 mi
Formol al 4 0 % 2 tana, hasta que toma color castao. Se deja
Agua d e s tila d a ..........................................100
2 Alcohol absoluto o de 96.
3. Solucin tnica:
cido tnico (ta n in o )............................. 1 g
Agua destilada caliente ........................ 20 mi
4. Solucin de nitrato de plata:
Nitrato de p la t a ......................................... 1 g
Agua d e stila d a.............................................. 20 mi
Se vierte casi toda esta solucin en un vaso
bien limpio y se conserva la cantidad restante.
Se aade con una pipeta un poco de amonaco
puro y, agitando con una varilla de cristal, se
formar un precipitado oscuro que se redisuel-
ve al aadir amonaco. A partir de este momen
to se pone lentamente amonaco hasta que
aparece una ligera opalescencia; si se vuelve
totalmente transparente, se aade el resto de la
solucin, que se ha reservado hasta que apare
ce la opalescencia deseada.
Tcnica. 1. D eshem oglobinizacin. Se hume
dece la preparacin con lquido de Ruge, repi
tiendo la operacin hasta que el lquido quede
incoloro.
Se elim ina el lquido sobrante. (No es preciso
secar.)
2. Lavado y fijacin. Se vierte el alcohol sobre
la preparacin, que se tendr inclinada. Se
seca, quemando el alcohol sobrante, que se
apaga rpidamente, soplando. De este modo,
el calor moderado completa la fijacin.
3. M ordiente. Se recubre la preparacin con
solucin de tanino y se pasa por la llama hasta
que aqulla despide vapor, pero sin llegar a la
ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
12
ebullicin. Se retira de la llama y se espera 30
segundos para verter la solucin sobrante.
4. Lavado. Se lava con agua corriente durante
un minuto y se aclara con agua destilada. No es
preciso secar.
5. Impregnacin. Es conveniente practicarla
primero en fro, despus en caliente. Se recubre
la preparacin con abundante lquido de Fon
escurrir el lquido. Se aade ms solucin de
Fontana y se calienta suavemente hasta que
despide vapor. Se espera 15 segundos y se
escurre el sobrante.
6. Lavado y secado. Se lava con agua destila
da. Se seca por agitacin o calor suave.
Se examina con objetivo de inmersin.
Resultado: Treponemas teidos en color oscuro
sobre fondo claro. (Lm. C/3, fig. 5.)
Colorante de Ciemsa
Se puede adquirir ya preparado en el comercio,
y puede emplearse con fijacin previa o sin ella
para teir clulas, pero si se trata de teir Tre
ponemas se emplea una tcnica algo diferente.
El frotis, practicado cuidadosamente y con la
mayor uniformidad, se deja secar al aire, y se
fija posteriormente con alcohol absoluto duran
te media hora. En el momento de teir, se mez
clan en un recipiente:
Agua destilada ............................................. 10 mi
Solucin de carbonato
sdico al 1 % .......................................... 10 gotas
Lquido de C ie m s a .................................... 10
Al aadir estas ltimas se agita la preparacin.
La preparacin ser sumergida en esta mezcla
durante 45 a 60 minutos.
Se lava rpidamente con agua; se seca, tambin
rpidamente, agitando; el examen se hace con
objetivo de inmersin.
Los Treponemas se vern de color violeta o roji
zo plido; los glbulos rojos, caso de haberlos,
rosados, y los leucocitos aparecern parduscos
con ncleo rojo oscuro y, a veces, azul. (Lm.
C/3, figs. 2, 3 y 4.)
 Bacterias
C/4

Fig. 1 - Spirochaeta recurrentis. Tincin por la tionina. Fig. 2 - Spirochaeta recurrents en un exudado. Tincin por
la tionina.

Fig. 3 - Spirochaeta recurrentis. Angina fusoespirilar de Vin- Fig. 4 - Spirochaeta recurrentis en sangre, vista sobre fondo
cer,t- nsrurn.

BACTERI|IO LO G A

www.FreeLibros.me
 Botnica
ALCAS M ICROSCPICAS
Engloban una gran variedad de Clases, Familias y
Gneros. En general, estn abundantemente pig
mentadas por clorofila, cianina, erltroclna y otros
pigmentos, que permiten su observacin sin nece
sidad de teirlas. (Fig. 1.) Otras veces ser necesa
rio conservarlas en preparaciones montadas, y
entonces habr que fijarlas, colorearlas y montar
las segn tcnicas apropiadas para cada grupo.
Observacin en fresco. Pueden observarse Diato-
meas, Desmldlceas, Cloroffceas, etc., poniendo
entre porta y cubre unas gotas del lquido que las
contiene. En caso de ser muy escasas se puede
centrifugar a pequea velocidad, para no alterar
sus estructuras, y observar el sedimento obtenido.
Para conservarlas un tiempo determinado, se
emplean lquidos que evitan su descomposi
cin en el frasco.
Lquido cuproactico:
Acetato de cobre .................................... 0,10 g Las muestras frescas o preservadas en lquidos
Acetato potsico 2 conservadores sern examinadas en una cpsula
A g u a ...................................................................50
Clicerina fenicada:
Glicerina ................................................................10 g
Agua .........................................................................90 mi
cido f n ic o ....................................................... 1 g
Fijacin. Las algas microscpicas pueden fijarse
por Inmersin en una solucin de qulnona al 2 o
4 por 100 recin preparada. Tambin pueden
fijarse con lquido cromo-actico (de muy buenos
resultados en algas y organismos planctnicos).
cido crmico al 1% .....................................70 mi
cido actico g la c ia l.................................... 3 mi
Agua destilada ....................................................90 mi
Otro fijador muy utilizado: el cido pcrico en
solucin acuosa o alcohlica.
Lavado. Las algas fijadas con lquido cromo-ac
tico o cido pcrico deben lavarse abundante
mente con agua durante varias horas. Se puede
emplear un Erlenmeyer con tapn atravesado por
dos tubos; el agua entra por uno y sale por otro.
Antes se tapa el extremo del tubo de salida con un
papel de filtro para evitar que salgan las algas.
Deshidratacin. Es preciso deshidratar las prepa
raciones, para utilizar ciertos procedimientos de
coloracin, o para montarlas en resinas. Como el
empleo del alcohol provoca fuertes contraccio
nes de las membranas, hay que tratar primero las
algas con una mezcla de glicerina y agua:
A g u a ...................................................................100 mi
Glicerina ............................................... 10 g
Se deja que el lquido se concentre en un seca
dor que contenga cloruro clcico o cido sul
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
34
www.FreeLibros.me
frico. Una vez las algas empapadas de gliceri
na, se pueden tratar con los diferentes alcoho
les sin temor a perjudicarlas.
Cianofceas
Estas algas se distinguen de las dems por care
cer de ncleo diferenciado y por el color verde
azulado propio de la cianina y distinto del
verde claro de la clorofila. (Fig. 2.)
Las Cianofceas abundan en la tierra hmeda,
sobre las rocas, en las aguas dulces y marinas,
en las aguas termales, etc. Muchas especies for
man parte del plancton vegetal. Las Oscilatorias
filamentosas (fig. 3) forman tapices oscuros en
el suelo hmedo, al pie de los muros sombrea
dos, en el tronco de los rboles, y en otros sitios
hmedos. Algunas especies comunican al agua
color, sabor y olor caractersticos. Examinadas
en una gota de agua, se ve como sus filamentos
oscilan lenta y continuamente. (Fig. 4.)
con un poco de agua destilada. Se separan unos
de otros los filamentos. Se montan las muestras
en agua formolada o en gelatina glicerinada. Las
algas desecadas sern examinadas despus de
tratadas mediante agua con Lactofenol.
Coloracin. Una vez fijadas, podemos teirlas
con carmn o, mejor, con hematoxllina de
Erlich; fija y tie a la vez y se compone de:
Agua destilada ...................................................50 mi
Alcohol absoluto .............................................50
G licerina ...............................................................50 g
cido a c t ic o .................................................... 5
H e m a to x ilin a 1 g
Alumbre, a saturacin.
Ya coloreadas, toman color marrn. Luego de
lavarlas, ste tira a azul. La hematoxllina de
Erlich puede emplearse para coloracin en
masa de algas.
Coloracin al azul de metileno. Se fijan las algas
con alcohol. Se colorean con azul de metileno
disuelto en cido clorhdrico al 0,5 por 100.
La cromatina se colorea de azul.
Coloracin del protoplasma y el ncleo. Se
fijan al plcroformol, se lavan y se colorean con
safranina verde luz:
Alcohol de 70 100 mi
cido actico ............................................. 3
Verde lu m in o so .......................................... 0,1 g
S a fran in a ......................................................... 0,15
Este mtodo de coloracin vara en tiempo (de
20 minutos a 12 horas).
Se lavan las algas con alcohol de 70 y se mon
tan en gelatina glicerinada.
 Higas
0 / 1= 1

(C onyugadas)

C osm ariu m conn atu m

(D iatom ea) (Conyugadas)

Tetrastrum heterracam
(Clocoficeas) C lo e o c y stis am pia (C lo rofceas)
P ediastrum tetras
(C lo ro fic e

r!i
(C lo rofceas) Spirogyra s p . (Conyugadas)

Fig. 1 - Algas m icroscpicas (Diatomeas, Conyugdas y Clorofceas) acuticas.

M e rism o p e d ia p unctata
M ic ro c y s tis flos-aquae

Spiru lina je n n e ri S y n e c h o c o c c u s aeru gin o su s O scilla to ria lim osa Stigonem a ocellatu m

Fig. 2 - Algas unicelulares (Cianofceas) acuticas.

Fig. 3 - Aspecto de Oscillatoria (Cianofcea) que vive sobre Fig. 4 - Algunas Cianofceas ms frecuentes que forman
tierra hmeda. parte del plancton.

BOTANICA
35
www.FreeLibros.me
 Botnica
Clorofceas
Comprenden todas las algas que poseen cloro-
fila. Para simplificar, las dividiremos en:
a) Clorofceas unicelulares. Clulas aisladas,
pocas veces en colonias, muy excepcional-
mente en filamentos.
b) Clorofceas filamentosas. De largo variable,
pluricelulares.
c) Protococales. Algas verdes unicelulares
(Tetraedron) (lm. D/1, fig. 1) o en colonias
ms o menos globulosas (Cleocystis) (lm.
D/1, fig. 1) en serie lineal (Scenedesm us) (fig.
1) o planas (Pediastrum) (lm. D/1, fig. 1).
Recoleccin. Se encuentran en todas las aguas:
plancton de estanques, lagos y fuentes, sobre
los musgos, etc.
Mtodo de observacin. Se fijan por el formol
o el lquido de Bouin, aadidos en la propor-
cin del 10 o del 20 por 100 al lquido que las
contenga. Para conservar el color verde se
emplea el lquido cupro-actico.
Se pasan al lquido glicerinado y se montan en
gelatina glicerinada. Tambin se pueden mon-
tar en blsamo del Canad. La tincin con
nigrosina permite ver fcilmente los apndices.
Clorofceas filamentosas
Algas verdes que forman filamentos de longitud
variable. Pertenecen a varias Familias. Las ms
importantes de ellas son:
Microsporales: M icrospora.
Ulotricales: Ulothrix.
Slfonales: Vaucheria.
Recoleccin. Estas algas son muy fciles de
encontrar y de recoger, pues son muy abun
dantes en la superficie y en el fondo de las 1
aguas de los ros, lagos, estanques, pantanos,
etctera. Se pueden introducir en frascos de boca
ancha con agua, a la que se adiciona lquido
conservador en la prrporcin de 10 por 100.
Mtodo de observacin. La observacin en
fresco entre porta y cubre es la ms sencilla,
pues, por la fuerte coloracin de estas algas, no
es preciso hacer ninguna operacin encamina
da a hacerlas ms visibles. Para conservarlas se (.
procede igual que para las Desmidiceas.
Un mtodo muy apropiado y sencillo es el de
fijarlas durante 24 horas en el lquido cromo-
actico, lavarlas con agua durante otras 24
horas, teirlas con hematoxilina al 0,5 por 100 \
ATLAS DE M IC R O SC O PIA
www.FreeLibros.me
) durante 12 horas, lavarlas de nuevo con agua,
) pasarlas por glicerina al 10 por 100 en alcohol
y dejarlas tres o cuatro das en este lquido.
) Transcurrido este tiempo se procede a montar
S las en gelatina glicerinada.
Conyugadas
Las Conyugadas son algas verdes unicelulares,
, algunas veces filamentosas, que raramente for
\ man colonias. Sus clulas se dividen en dos
mitades simtricas marcadas por un estrangula-
} miento o cintura ms o menos aparente. (Fig.
1.) Tienen cromatforos de formas diversas con
/ pirenoides.
) Recoleccin. Se encuentran en aguas poco
mineralizadas, oligotrficas, cidas, y en turbe
} ras, estanques y pantanos en terrenos silceos.
, Son muy raras en terrenos calcreos.
Mtodo de observacin. Pueden observarse en
vivo entre porta y cubre. Se conservan como las
del grupo anterior. Para teirlas debe seguirse el
/ siguiente mtodo: se fija la preparacin con la
; mezcla cromo-actica, se lava abundantemen
( te, se colorea con hematoxilina o, mejor, con
hemalumeosina, y se deshidrata y monta en el
blsamo de Canad.
Heterocontas
Son algas muy parecidas a las Clorofceas.
Su color es verdoso amarillento. (Fig. 2.) No son
tan abundantes como las Clorofceas. Son unice
lulares (Characiopsis), se agrupan en colonias
(Botryococcus) o son filamentosas (Tribonema).
Recoleccin. Se encuentran junto a otras algas,
sobre todo en aguas cidas.
Mtodos de observacin. Los mismos que para
las Clorofceas.
Rodofceas y Feofceas
Se distinguen por tener en sus cromatforos
pigmentos rojizos o pardos. Son algas filamen
tosas. (Figs. J y 4.)
Recoleccin. Flabitan en aguas corrientes, donde
forman masas de color marrn bien visibles.
Mtodos de observacin. Se emplean los mis
mos que para las anteriores. Los Batrachosper-
mum se fijan en el lquido cromo-actico, se
colorean con hematoxilina, se disocian con
una aguja y se montan en glicerina.
 Alnas /B

Tribonem a gayanum
Oosfera

S ce n e d e sm u s q u adrica ud a

Zygnema
Fig. 2 - Algas Heterocontas.
Fig. 1 - Algas Conyugadas.

Bangia atropurprea

hosperm u m m on iU form e
C o nceptcu lo s m a scu lin o s con anteridios

d ico tm ica C o nce ptcu lo s fem eninos co n oogonios

F,g- 3 - Algas rojas o Rodofceas.

Fig. 4 Un alga parda o Feoficea: Fucus vesiculosus.

BOT/fNICA
www.FreeLibros.me

 Botnica

Diatomeas se aade agua destilada; se decanta y se aade

de nuevo agua hasta la total desaparicin del
Son algas microscpicas unicelulares, provistas
cido ntrico. El sedimento hmedo obtenido
de cromatforos de color marrn dorado. Su
se trata con una mezcla de cido sulfrico con
cuerpo es protoplasmtico con ncleo y cro
centrado y cido crmico cristalizado, que se
matforos envueltos por un caparazn silceo
calienta con mucha prudencia hasta que se
que consta de dos valvas, como una caja, y
desprende vapor. Se saca del fuego y se deja
denominado frstulo.
actuar durante dos o tres das. Transcurrido este
Su distribucin es tan extensa que solamente
tiempo, se vierte todo el contenido en agua
la de las bacterias la supera. Estn presentes en
destilada y se dejan sedimentar las Diatomeas.
todos los mares (fig. 2); en las aguas dulces
Se decantan y se llena el pocilio de agua; esta
(fig. 1), fras o clidas, en la tierra, en los mus
operacin se repite hasta que desaparece el
gos, en los lugares hmedos, etc. Un poco de
cido sulfrico. Se recoge el sedimento y se
luz es suficiente para que se desarrollen. En
monta en blsamo.
tiempos pasados fue tal su abundancia en los
Como este mtodo es demasiado fuerte para
mares, que hay rocas formadas totalmente por
determinadas Diatomeas planctnicas, puede
Diatomeas fsiles (diatomita, tierra de Trpoli,
emplearse el
de un espesor de varios centenares de metros).
M todo del agua de ave!. Es el lquido que
Provienen de depsitos marinos. El estudio
resulta de mezclar cloro con hidrxido sdico,
microscpico de estos depsitos fsiles tiene
mezcla que forma cloruro e hipoclorito sdico.
mucha importancia desde el punto de vista
Se cubre la muestra con agua de Javel, que se
paleontolgico. En G/1, sobre Micropaleon-
cambia varias veces y se deja actuar corriente
tologa, se exponen sus mtodos de estudio.
mente unas 24 horas. Se lava y decanta.
Se clasifican en:
Por uno u otro mtodo se obtiene finalmente un
1 Cntricas. Frstulo ms o menos cilindrico
depsito blanco grisceo constituido por frs
y ornamentacin radiada, simtrica para con
tulos de Diatomeas de todas dimensiones.
un punto central.
Tamizando stas con cedazos de mallas finas
2. Pennales. Frstulo no cilindrico, con sime
de diferente paso se logra clasificarlos por
tra axial. A todo lo largo de la Diatomea se
tamaos. Se deshidrata una parte de esta masa,
observa la rafe.
pasndola sucesivamente por alcohol, desde
Recoleccin. En las aguas dulces se aplican los
70 a 90 y absoluto, y por xilol, y se monta en
mtodos generales. Se visitan todas las estacio
blsamo. El resto de la masa puede guardarse
nes: aguas estancadas, aguas corrientes, ria
en tubo de ensayo, cerrado y etiquetado para
chuelos, lagos, pantanos, etc., donde forman a
sucesivas preparaciones.
veces un sedimento pardusco que se reconoce
Los detalles de ornamentacin del frstulo de
fcilmente luego de observado una vez. Algu
algunas Diatomeas sirven de test para com
nas especies forman filamentos ms o menos
probar (fig. 3) el poder resolutivo de los micros
largos adosados a las piedras y objetos sumer
copios.
gidos. Con una red de niln muy fina es facti
ble recoger Diatomeas del plancton de lagos y
Distribucin de las algas marinas
estanques. En el mar se pueden recoger con
redes finas Diatomeas planctnicas, que son Su distribucin vara con la naturaleza del pig
muy numerosas. Otras viven epfitas en las mento que contienen. En la superficie viven
algas verdes y pardas. todos los grupos.
Mtodos de observacin. Rara el estudio del A partir de los 30 metros de profundidad ya no
plasma, del ncleo, de los cromatforos, etc., hay algas verdes ni azules. A 100 metros, no las
se aplican los mtodos generales: se fijan en hay pardas. Y a 300 metros tampoco rojas, por
Bouin, se tien con hematoxilina frrica y se carencia de luz.
montan en blsamo, pero para estudiar sus Recoleccin. Se encuentran en primavera y en
frstulos con todo detalle a efectos de clasifica otoo, durante las mareas bajas, sobre las
cin, son precisos mtodos destinados a elim i rocas.
nar por completo la materia orgnica y dejar el Conservacin. En alcohol de 90 o en una solu
frstulo completamente limpio. cin pcrica; nunca en formol.
M todo de los cidos fuertes. Se pone la mues Mtodo de observacin. Se fijan en cido pcri-
tra en un pocilio de porcelana y se recubre con co saturado o en solucin de quinona al 2 o al
cido ntrico. Se calienta suavemente bajo una 4 por 100. Se montan en Iactofenol o en gela
campana y se aade cido a medida que se va tina glicerinada. Se colorean con fucsina,
evaporando el anterior. Se separa de la llama y calentndolas ligeramente.

ATLAS DE M IC R O SC O PIA
www.FreeLibros.me
 Diatomeas g ^ 2

Fig. 1 - Algunas Diatomeas de agua dulce. 1 Attheya zacharasi; 2, Cyrosigmatattenuatum; 3, Surirella spiralis; 4, Cocconeis
placentula; 5, copulacin de dos Diatom eas; 6, Asterionella gracilima; 1, Cymbella cuspidata, y 8, Synedra ulna, en a, vista por
su cara valvar; en b, por su cara conectiva.

Fig. 2 - Algunas Diatomeas marinas. 1, C o scin o discus oculus-iridis; 2, N itzschia granlala; 3, Corethron hystrix; 4, Surirella
elongata; 5, N itzschia trybionella, y 6, Surirella trgida.

Fig. 3 - Diatom eas empleadas como "tests". 1, Pleurosigma angulalum, fragmento de la valva; 2, Amphipleura pellucida, y 3,
Surirella gemma.

BOTANICA
www.FreeLibros.me
 Botnica
M ICOLO GA
Tcnica de observacin
Hongos libres. Se dilaceran en unas gotas de lac-
tofenol o bien en lactofenol con azul de cotn
(lactofenol 100, azul de cotn 0,5). Se montan
en lactofenol o en gelatina glicerinada.
Hongos parsitos. Se hacen cortes de rganos
parasltados (fig. 1) con el micrtomo, y se pro
cede como para los anteriores.
Las esporas pueden montarse en lactofenol y
observarse en gota pendiente. (Figs. 2 y 3 A.)
Preparacin de mohos
Se toma con una pinza una porcin de creci
miento reciente, procurando cogerla por la
base, y se deposita encima de un portaobjetos,
al lado de una gota de alcohol amoniacal; se
provoca el contacto: el alcohol mojar las
hlfas, y as, los lquidos empleados despus,
penetrarn en los tejidos.
Se deja actuar el lquido de Fleming.
Liquido de Fleming:
cido smico al 2% 4 mi
cido crmico al 1 % 15
cido a c t ic o ...................................................... 1
Se lava la preparacin con agua, se reemplaza
el agua por gllcerina y se monta en gelatina gli
cerinada.
LEVADURAS
Las levaduras se encuentran en lguidos azuca
rados y en frutas en fermentacin. Son muy
abundantes en la Naturaleza. Industrialmente,
son fciles de obtener las levaduras de cerveza
(Saccharom yces cerevisiae) y la levadura del
vino (Saccharom yces eipsoideus), de uso
corriente. (Fig. 4.)
Tcnicas de observacin. Se recogern las leva
duras en los medios de cultivo: lquidos azuca
rados, mostos, etc., con una pipeta o con el asa
de platino, y se pondrn una o dos gotas en un
porta.
Se hace un frotis y se fija por calor o en alcohol
de 96. Puede fijarse tambin en sublimado,
aunque es recomendable hacerlo en una solu
cin de cido pcrlco saturado.
Se colorea con hematoxillna, eosina o por el
mtodo del azul policromo, segn la siguiente
tcnica:
1. Se colorea durante 15 minutos o 12 horas,
segn los casos, con azul policromo puro.
2. Se lava abundantemente para elim inar el
exceso de colorante.
3. Se diferencia por medio de ter glicrlco.
ATLAS DE M ICR O SC O PIA
www.FreeLibros.me
Tb
4 . Se lava durante largo tiempo con agua
corriente.
5. Se deshidrata con alcohol absoluto y se seca.
6. Se observa con objetivo de inmersin en
aceite de cedro.
TIAS
Son Gimnoascceas. Se les llama tias, favus,
trlcofticos, etc. Son parsitos que producen
enfermedades en la piel y atacan los pelos, los
cabellos y la epidermis. (Figs. 5-8.)
Tcnica de observacin. Los objetos parasita
rios (cabellos, fragmentos de epidermis) se
sumergen en una solucin de potasa al 40 por
100 y se calientan suavemente hasta llegar a la
ebullicin. La sustancia propia del cabello o de
la epidermis se aclara, conservndose, no obs
tante, sin menoscabo los filamentos y las espo
ras del hongo.
Se montan en la misma solucin de potasa.
Tambin podemos utilizar, en lugar de potasa,
una solucin de clorofenol solo o clorofenol
sallclico (al 10 por 100); se callenta la prepa
racin y se monta en goma tragacanto. Se dia
fragma para la observacin.
Las descamaciones se aclaran en una solucin
acuosa de potasa custica al 10 por 100. Se
lavan con agua.
Se prepara:
Lquido de Glemsa 2 a 3 partes
G lic e rin a 3 a 10
Se colorea la preparacin con una o dos gotas
de esta mezcla.
El epitelio corniflcado queda coloreado en
rosa, el micelio y las esporas, en azul oscuro.
Los cortes de tejidos fijados en alcohol o los frotis
secados al aire y fijados en alcohol de 70 se tien
durante diez o doce horas con el colorante Glem-
sa-glicerina; se deshidratan con acetona, se acla
ran con xilol y se montan en aceite de cedro.
Los hongos y microorganismos quedan colo
reados en rojo.
DERMATOMICOSIS
Las producen unos hongos parsitos que pro
vocan descamaciones y erupciones en la piel.
Para observar el hongo causante de estas lesio
nes se toma con unas pinzas una descamacin
y se pone en el centro de una gota de cido
actico glacial, encima de un porta, disocin
dola con la ayuda de una aguja. Se deja secar.
Se fija con alcohol absoluto. Se colorea, calen
tndola, con azul de tolidina al 1 por 100. Se
diferencia con esencia de girasol. Se tie el
fondo con eosina. El micelio parsito queda
teido en azul violceo; el fondo, en rosa claro.
Fig. 1 - H oja de rosal con hongos parstitos (Phragmidium
subcorticium ).

Fig. 3 - Peritecios A, de hifas B, de Penicillium sp.

Fig. 2 - Uredsporas A y telisporas B, de Phragmidium Fig. 4 - Sacrom icetceas. En A, ascos con ascsporas; en B
subcorticium . y C Saccharom yces cerevisiae y S. ellipsoideus.

^ , v^
i."
y
' X \ '
\ ___
v V ,/ /

Fig. 5 - Actinom yces bovis, sin tincin y teido por el Gram. Fig. 6 - Esporidios de Ustilaginales teidos por la
tionina.
o

Fig. 7 - Aspergillus teido por la tionina (x 300) y sin teir (x 800). Fig. 8 - Pitiviosis teido por la eosina.

b o t n ic a
www.FreeLibros.me
41
EQUISETNEAS, FILICINAS
Y BRIFITAS
Son plantas terrestres de color verde que se
reproducen por fecundacin de los arquego-
nlos, produciendo embriones que, segn los
grupos, se desarrollan posteriormente de muy
diferente manera, dando lugar a alternancia de
generaciones.
Las Equisetneas y las Filicinas son dos Clases del
grupo de las Arquegoniadas. Los equisetos (fig.
1), o cola de caballo viven en parajes hume-
dos y de suelo arenoso de las zonas templadas y
subtropicales. Las Filicinas o helchos (fig. 2)
cubren grandes extensiones del sotobosque de
las regiones templadas y subtropicales. Las Bri-
fitas comprenden dos Clases perfectamente dis-
tintas: Hepticas y Musgos. Tanto las Hepticas
como los Musgos (flgs. 3 y 4) se encuentran,
principalmente en otoo, en los lugares hume-
dos despus de perodos lluviosos.
El estudio se hace en fresco, montando las mus-
tras en una gota de agua o de glicerina, o bien,
(Viene de la lmina B/7)
A zu l de metileno
Se emplea en solucin hidroalcohlica, alco
hlica o acuosa. Es til para la coloracin de
fondo, la de protozoos y las coloraciones
dobles. Acta con slo unos minutos. (Fig. 5.)
Si se produce sobrecoloracin, la preparacin
se lava con agua o alcohol.
Safranina
Se emplea en solucin alcohlica:
Safranina
Alcohol de 9 0 .................................................100
Se disuelve y se aade:
Agua destilada .................................................100 mi
F o rm o l
Es un colorante bastante rpido; slo se necesi
ta de unos minutos a una hora. Tie en rojo.
) en el caso de que deseemos conservarlas, en
gelatina glicerinada o en blsamo del Canad.
Las especies o muestras muy espesas se aclaran
s.
con agua de Javel durante cuatro o cinco minu
/
tos. Para aclarar brifitas se emplea agua de
S
Javel en lugar de potasa, pues sta disocia
(
demasiado los tejidos.
)
Se lavan con abundante agua corriente.
\
Se tien durante cinco minutos con una solu
/
cin de verde yodo. Se lavan, y se observan sir
)
vindose de un objetivo dbil.
(
Se emplea mucho, para montar Musgos, Hep
/
ticas, hojas, polen, esporangios, esporas de
S
helchos y otras epidermis vegetales, el
(
siguiente lquido:
J
\ A g u a ...................................................................... 10 mi
/ Com a arbiga ................................................ 10 g
S G lu c o s a 5
( A l se aaden unos granitos de tlmol.
Las esporas pueden montarse en aceite de vase
K lina, en parafina o bien en blsamo del Canad
/ muy diluido.
) Colorantes cidos
) Se les llama tambin colorantes plasmticos.
\ Los ms corrientes son:
v Fucsina acida
. Se utiliza en cortes vegetales. Acta como fija-
) dor y colorante. Es poco estable. Se emplea en
^ solucin acuosa al 1/500 o al 1/1.000. El lava-
' do con agua decolora rpidamente las prepara-
) dones teidas con este colorante.
) Eosina
1 g ) Es el ms utilizado de los colorantes plasmti-
. eos. (Fig. 4.) Se emplea en solucin acuosa al 1
/ por 100.
} cid o pcrico
2 g )
En solucin acuosa saturada colorea el plasma
en am arillo. (Fig. 6.) Se emplea antes del car-
/ mn (picrocarmn) o tambin con l.
ATLAS DE M IC R O SC O PIA
www.FreeLibros.me
 Equisetneas, filicinas
q brifitas
0/5

Extrem o vegetativo d e un tallo con la c lu la a p ical

A n terid io Vaso esp iralad o s

Arquegonio

C lu la del hipoderm o

$ Arquegonio
S ecci n de una hoja

Espora Espora co n los hapterios

desenrollados
C lu la pareffffdf^Stica
Fig. 1 - Equisetneas. Reproduccin y desarrollo de Equise-
Fig. 2 - Histologa de las Filicinas o Helchos.
tum arvense.
C lu la s esperm ticas

Tallo entero

C o rte transversal
de un tallo

Fig. 3 - Morfologa e histologa de las Brifitas (Musgos). D esarro llo del esporofita Esporofita Protonema
Fig. 4 - Reproduccin y desarrollo de un Musgo.

BOTNICA
www.FreeLibros.me
 Botnica
ARQUEGONIADAS Y EMBRIFITAS
Son los vegetales ms conocidos: hierbas,
arbustos, rboles. Estn constituidos por races,
tallo, hojas (fig. 5), polen (flgs. 1, 2), semillas
(fig. 3), pelos (fig. 4), etc.
Su estudio microscpico nos muestra sus ele
mentos constituyentes: las clulas, que forman
tejidos; vasos, estomas (fig. 5), fibras de sostn
(lber, leo, cambium) (lm. D/7, fig. 1), as
como sus elementos de sntesis: almidn, esen
cias contenidas en glndulas y otras Inclusiones
protoplasmticas.
A causa de su tamao han de observarse en
pequeas porciones, que se obtienen realizan
do cortes, los cuales se disocian y tien segn
veremos al estudiar los mtodos de observa
cin.
Siempre que sea posible se har su estudio en
fresco. De no poder hacerlo as, se conservarn
las muestras en alcohol de 70, en formol al 2
o 3 por 100, o en una mezcla a partes iguales
de agua, glicerina y alcohol. Las porciones des
tinadas al estudio otolgico o histolgico se
fijarn en alcohol absoluto o en la mezcla
siguiente:
Alcohol ..................................................................96 mi
Formol
cido actico ................................................... 2
Se pueden emplear tambin los lquidos de
Bouin o de Fleming.
Una vez fijadas, las muestras se conservan en
alcohol de 70 o se montan en parafina.
El lquido de Bouin cprico conserva indefini
damente el color verde de las hojas. Se prepa
ra aadiendo un 1 por 100 de sulfato de cobre
al lquido de Bouin.
(Viene de la lmina C /l)
FLAGELADOS
Tcnica. Los Silicoflagelados, Dlnoflagelados
(fig. 4), etc., acompaan a las Diatomeas en las
formaciones fsilferas. Se encuentran en las
ltimas porciones del tamizado. Se pueden
montar en blsamo del Canad. La mayora de
los Flagelados pueden observarse con objetivos
de mediano aumento; sin embargo, para buscar
Ebriceos y Crisomonadinos son necesarios
objetivos de inmersin.
Algunos microfsiles pueden colorearse de la
siguiente manera: se pone una gota de solucin
concentrada de colorante (fucsina, azul de metile
no, violeta de genciana) y se deja actuar durante
24 horas. Se lavan con agua o alcohol, se secan,
se pone una gota de aceite y se observan.
www.FreeLibros.me
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
44
Aclarado
Los cortes destinados a los estudios anatmicos
se aclararn por medio de una solucin de
hipoclorito sdico o potsico (nunca con agua
dejavel), a la que se dejar actuar durante unos
minutos, en fro o en caliente, segn el grosor
de la muestra que se va a estudiar. La accin
del hipoclorito no debe exceder de varios
minutos, especialmente en los tejidos tiernos.
Se lavan los cortes con agua acidulada con ac
tico, o con bisulfito sdico diluido, y se secan.
Ciertos tejidos requieren el empleo de solucio
nes alcohlicas de sodio o potasio.
Colorantes
Rara estudiarlos, el protoplasma y el ncleo de
las clulas vegetales se teirn con colorantes
nucleares y plasmticos y con coloraciones
combinadas. Los colorantes nucleares pueden
ser progresivos o regresivos; los progresivos
(verde de metileno, vesubina, etc.) tien ciertos
elementos celulares, y su accin puede detener
se por lavado con agua, quedando teidos slo
algunos de ellos. Los regresivos (azul policromo,
fucsina, safranina, violeta de genciana) colorean
todos los elementos de la clula, que pueden ser
2
decolorados por ciertas manipulaciones, de
modo que slo quedan coloreadas aquellas par
tes que presentan afinidad para el colorante.
Los colorantes plasmticos (azul de metileno,
eoslna, fucsina cida, verde brillante) se em
plean combinados con los colorantes nucleares
y se hacen actuar durante 10 o 20 minutos.
La preparacin se lava y se deshidrata. En cuan
to al montaje, se efecta en resina o bien en
blsamo.
) Una vez secos, los fsiles quedarn pegados al
\ porta por la gelatina insolubilizada mediante el
/ formol; entonces puede teirse el frotis o tratar-
) se como otra preparacin cualquiera.
/ M ICROFSILES DIVERSOS
Tcnica. Para las espculas silceas se em
plean, en general, los mismos mtodos que
/ para los microfsiles silceos. Las espculas
) calcreas se disgregan, lavan y tamizan. Con
( los Ostrcodos se sigue la misma tcnica que
) para los Foraminferos. En los conodontes, se
observa en las secciones finas. Las mandbulas
de Gusanos se extraen por lavado y se tami-
) zan.
( Todas estas muestras pueden montarse en bl-
/ samo y observarse con objetivos medianos.
S (F'g- 5.)
 flrquegoniadas n .
q embrifitasi ' b

G ra n o s de polen

Granos de polen

i
Fig. 1 - Varios granos de polen del pino (Pinus pinnea).

Extrem o em b rio nal

Filam ento

Fig. 2 - Antera del clavel con sus tecas abier

tas lanzando granos de polen.

Fig. 3 - Grano (cariopsis) de trigo, aumentado 11 veces.

Fig. 4 - Algunos pelos vegetales: A, de ortiga; B, de malvarrosa; C,

de lavanda; D de Alyssum. dea O phiys.

www.FreeLibros.me
Colorantes combinados. Las coloraciones com
binadas renen los colorantes nucleares y los
plasmticos (fig. 1, derecha e izquierda). Se uti
lizan muchas combinaciones, por ejemplo:
azul policromo-tanino orange; safranina-viole-
ta de genciana-orange C ; safranina-azul de
metileno; safranina-verde brillante; safranina-
hemalum; verde malaquita-rojo Congo, etc.
Colorantes vitales. Es ms fcil la observacin
de elementos vivos en los vegetales que en los
animales. (Figs. 2 y 3.)
Ciertos vegetales (tulipanes, iris) presentan
grandes clulas epidrmicas y estomas que
pueden observarse, con coloracin o sin ella,
entre porta y cubre.
Los colorantes vitales son bsicos y de escasa
toxicidad: rojo neutro, azul de cresol o azul de
metileno. El rojo neutro se emplea en concen
traciones al 1 por 1.000, por 5.000 o por
10.000; el azul de cresol, al 1 por 1.000, y el
azul de metileno, al 1 por 100.000.
D ISO CIACIN DE TEJIDOS
La disociacin puede efectuarse por medios
mecnicos o bien por medios qumicos.
Si se emplean medios mecnicos, se opera con
una aguja o lanceta sobre la platina de un
microscopio simple binocular. Si se recurre a
medios qumicos, se macera el objeto con
reactivos que le darn la consistencia adecua
da para poder proceder a disociarlo.
Uno de los mtodos empleados es el Schulze,
que permite aislar los elementos duros: made
ras, nudos, races, etc. El cuerpo que ha de
disociarse se trata con cido ntrico caliente
con algunos cristales de clorato potsico. El
objeto adquiere con este tratamiento un color
blancuzco. Una vez que se ha dejado enfriar se
lleva a un cristalizador con agua y se disocia
con agujas. Este tratamiento es muy fuerte: des
truye numerosas sustancias y modifica conside
rablemente las propiedades microqumicas de
los tejidos. Por esto podemos emplear otro
mtodo ms suave. Se pone la pieza que se va
a disociar en alcohol de 90. Se lava con agua
destilada y se introduce el objeto en un tubo
con potasa custica al 15 o al 20 por 100. Al
ATLAS DE M IC R O SC O PIA
46
www.FreeLibros.me
) cabo de un tiempo prudencial, para no destruir
\ excesivamente algunos tejidos delicados, se
' saca, se lava y se trata con una solucin de
cido actico al 20 por 100.
Todos los elementos obtenidos con estos mto
dos, para ser observados al microscopio, se
pasarn por alcohol, primero de 70 y luego de
90, despus por esencia de lavanda, y final
mente se montarn en blsamo del Canad.
CORTES
En la mayora de los casos se podrn hacer a
mano o con micrtomo de mano. Las muestras
( frescas se cortarn entre corcho seco. Las
) muestras conservadas en lquidos, entre corcho
( conservado en alcohol.
/ Las muestras duras se seccionan con una hoja
) plana en pequeos fragmentos. Las superficies
; de la hoja y del objeto se humedecern con
) alcohol o glicerina. Se procurar que los cortes
\ sean lo ms finos posible, y se atacar la inclu-
/ sin o la pieza sirvindose de la hoja colocada
) en posicin oblicua. (Fig. 4.)
Los vegetales secos impregnados de alcohol y
/ lavados con agua corriente se tratarn con una
\ solucin acuosa muy diluida de amonaco, de
/ leja de sosa o de potasa y se cortarn entre cor-
) cho humedecido. En lugar de corcho podemos
( emplear mdula de saco. Los tejidos vegetales
/ en que la lignificacin no sea muy profunda,
pueden incluirse en parafina y cortarse en serie.
( Los tejidos frescos se deshidratarn progresiva-
) mente en alcohol, desde 25 a 96, y luego se
incluirn en parafina y se cortarn.
/ Las muestras muy lignificadas han de ser some-
S tidas a un tratamiento preliminar: primero se
introducen en un bao de agua; despus, en
j acetona, y, ltimamente, en acetato de celulo-
\ sa al 12 por 100, que se deja actuar de 6 a 10
horas, segn el grosor de la muestra.
' Todos los cortes conseguidos los introduciremos,
( a medida que se vayan obteniendo, en un crista-
: lizador lleno de agua o alcohol (fig. 5). Para su
\ posterior montado con cualquiera de los mto-
/ dos que comnmente se emplean, resina, blsa-
) mo o colodin, se habrn de manipular con una
L aguja o un pincel, nunca con pinzas.
 firquegonifldas n . 7
q embrifitas ^

Fig. 1 - A la izquierda: corje de la parte central del tallo de una

la derecha: corte de un tallo de murdago con tincin doble de carm n de alumbre y verde yodo.

Lber p rim ario Feloderm is

Lb er secund ario

E xoderm is

H a ces liberoleosos co ln q uim a

M edula
Fig. 2 - Seccin transversal de una hoja de D icotilednea. Fig. 3 - Corte transversal de un tallo de estructura secundaria.

Fig. 4 - Modo de practicar los cortes en un m aterial Fig. 5 - Preparacin de cortes en un cristalizador, depositndolos en l
englobado en corcho. mediante un pincel.

b o t 4 n ic a
47
www.FreeLibros.me
HISTOQUMICA
Almidn
La solucin de yoduro potsico yodado, solu
cin Lugol, permite descubrir en cortes y mues
tras la existencia de granos de almidn.
Glucosa
Se corta la muestra que se va a examinar, de
manera que tenga un espesor de dos o tres
capas de clulas y se trata con lquido de Feh-
ling:
a) Sulfato de cobre ................................. 0,75 g
Agua destilada 25 mi
b) Tartrato de sodio y potasio
(sal de Seig nette)........................... 4
Agua destilada ...................................... 25
c) Sosa custica ....................................... 4
Agua destilada .......................................25
En el momento en que van a emplearse se
toman cinco mililitros de cada una de las solu
ciones a), b) y c), a los que se aaden diez
m ililitros de agua destilada; se hierve esta
m ezcla y se introducen los cortes en ella. En
pocos segundos tomarn stos un color rojo a
causa de la reduccin del sulfato de cobre. Se
montan en algunas gotas de licor de Fehling.
La preparacin pone de manifiesto los cristales
de xido de cobre. La levulosa, lactosa, gluco
sa y algunos glucsidos reducen el lquido de
Fehling.
Prtidos
La accin del cido ntrico da coloracin amari
lla a las sustancias proteicas. Esta coloracin
puede lograrse tambin adicionando a la prepa
racin leja alcalina, amonaco o potasa. Gene
ralmente se utiliza el reactivo Milln.
Reactivo M illn
Mercurio
cido n tric o ....................................................... 9
Agua destilada ................................................... 10
Al cabo de unas horas, generalmente seis, los
prtidos toman coloracin rosa o rojiza.
Grasas
Se introducen los cortes durante diez minutos
en una solucin alcohlica saturada de rojo
Sudn, que se filtra seguidamente. Se lavan con
agua y se montan en glicerina o en gelatina gli
cerinada. Los cuerpos grasos se colorean de
rojo vivo.
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
www.FreeLibros.me
El rojo Sudn colorea ciertas esencias, las resinas
y ceras y el ltex. Una solucin de cianina al 1
por 100 colorea los aceites en azul. Una disolu
cin de cido smico al 1 por 100 colorea los
cuerpos grasos y las esencias en marrn oscuro.
Celulosa
Se introducen los cortes, aclarados por la accin
del hipoclorito de sodio, en solucin Lugol
durante varios minutos. Se montan entre porta y
cubre. Se pone en el borde del cubre una gota
de cido sulfrico al tercio. La celulosa toma
una coloracin azul. Si tarda sta en aparecer, se
aumenta la dosis de cido sulfrico.
Puede emplearse otro mtodo: introducir los
cortes en una solucin acuosa de rojo Congo al
g 1 por 100, que se deja actuar durante varios
mi minutos. La celulosa aparece en color rojo.
g Cristales de oxalato calcico
mi
En las clulas se encuentra cido oxlico en
forma de oxalato potsico o clcico. Este lti
mo es muy corriente en las clulas vegetales.
Para observarlo, es suficiente hacer cortes de
los tejidos y examinarlos. El oxalato de calcio
se reconoce en la forma cristalina. (Fig. 2.) A
diferencia de los cristales de carbonato clcico,
es insoluble en cido actico. Es soluble en los
cidos clorhdrico y sulfrico.
Almidones, harinas y fculas
Se pueden reconocer examinndolos sobre un
porta en una gota de agua, a la que se aade
una gota de solucin Lugol. Este licor penetra
por capilaridad en los granos de almidn y los
colorea de azul violceo, lo cual permite dife
renciarlos de otros elementos que pudieran
contener las harinas.
El microscopio polarizante permite reconocer
sin preparacin los diferentes granos de almi
dn de la fcula del arroz, de la alubia, de la
patata, y otros. (Fig. 3.)
I mi Polvos de hojas. Fbra el estudio de los polvos
vegetales (fig. 1), generalmente medicinales, se
puede recurrir al sistema ms sencillo, que con
siste en impregnar de agua destilada una porcin
de polvo. Al cabo de unos minutos se toma un
poco de esta masa, se deposita encima de un
portaobjetos y se cubre con un cubreobjetos
sobre el que se hace ligera presin para disociar
los elementos. Si el polvo no se empapa fcil
mente, se emplea, en vez de agua, este lquido:
Cloral 5 partes
A g u a ................................................................. 5 *
G lic e r in a 10
48
 Histoqumica
D / 8

Fig. 1 - Polvos vegetales. En A, polvos de azafrn (Crocus satvus); en B, polvos de hojas de belladona (Atropa belladona); en
C , harina de trigo (Triticum satvum), y en D , polvo de pimienta negra.
N ico le s p aralelo s N ico le s o b licu o s N ico le s cruzados

Begonia

Fig. 2 - Varios cristales de oxa- Fig. 3 - G ranos de almidn vistos con luz polarizada. 1, almidn de arroz; 2, almidn
lato calcico. de alubia, y en 3, almidn de patata.

BOTNICA
www.FreeLibros.me
49
 Zoologa
FLAGELADOS
Este grupo puede ser incluido en la Zoologa y
en la Botnica, puesto que, por sus especiales
caractersticas, participa de las de ambas y no
est bien determinado su lugar en la clasifica
cin. (Fig. 1.)
Nosotros los distinguiremos en Zooflagelados
y Fitoflagelados. Los primeros son incoloros y
saprozoicos. Los segundos tienen pigmentos y
hacen vida hetertrofa.
Tanto unos como otros se caracterizan por
tener flagelos y vivir en medios lquidos. Unos
son parsitos; otros, marinos, y el resto, dulce-
acucolas. Grupos importantes de Flagelados
son las Leishmanias (fig. 3) y los Tripanosomas.
(Flgs. 2 y 4.) Hay entre los Flagelados y los
Rizpodos grupos intermedios que tienen algu
nas caractersticas comunes, pues poseen flage
los y emiten seudpodos. Algunos autores for
man con ellos un solo grupo, el de los
Rizofl age lados.
Como desde el punto de vista prctico que
orienta nuestra labor solamente nos interesan
los mtodos de observacin de los Flagelados
prescindiendo de su posicin en la sistemtica,
vamos a dar las reglas generales para su prepa
racin y examen.
FITOFLAGELADOS
Preparacin de los Fitoflagelados. La fijacin y
coloracin de los Flagelados, de los que pre
sentamos varias especies en la lmina, puede
efectuarse entre porta y cubre, o bien en la cen
trfuga, concentrando la masa de Flagelados.
Podemos incluirlos en agar-agar-parafina y lograr
cortes muy finos del bloque as obtenido.
Generalmente se fijan en lquido de Fleming
modificado, citado por Grass;
cido smico al 0,5%
cido crmico al 0 , 5 % ............................
cido actico, alrededor
de 5 gotas p o r ..........................................100 mi
Se recomiendan tambin la quinona, el subli
mado alcohlico, el lquido de Sachaudin, las
mezclas picro-formol actico de Bouin, etc.
La fijacin dura de 10 minutos a 24 horas.
Coloracin. Para teir protoplasma y ncleos se
emplea habitualmente la hematoxilina o el car
mn. Para poner de manifiesto los flagelos se
recurre a la tincin negativa con tinta china o
con nigrosina.
ATLAS DE MICROSCOPIA
www.FreeLibros.me
Z O OFLAGELADOS
Preparacin de los Zooflagelados intestinales.
Pueden examinarse en fresco, en fondo oscuro,
con las mucosidades, heces o lquidos que los
contengan. Los parsitos se ponen en un porta,
y si el lquido es muy espeso, se aclarar con
unas gotas de solucin fisiolgica diluida. Se
extiende la preparacin finalmente y se fija en
el lquido de Bouin o en el picro-formol. Para
los Trichomonas se emplea el lquido siguiente:
Solucin acuosa saturada
de sublimado 100 vol.
cido tricloroactico 0,5 a 1 g
Se calientan con este lquido durante unos diez
minutos a la temperatura de 40 a 45 C.
Una vez fijados, se colorean segn el mtodo
que exponemos a continuacin.
Hematoxilina frrica de Heidenhain:
I. Solucin al 3% de alumbre de hierro.
II. Solucin al 1% de alumbre de hierro.
III. Solucin acuosa de hematoxilina al 1%,
que se prepara as:
Agua d e stila d a ....................................................90 mi
Alcohol absoluto ..............................................10
H e m ato xilin a 1 g
Se deja reposar durante 24 horas y se procede
de la manera siguiente:
1 Se cubre el frotis con la solucin mordiente de
alumbre de hierro (I) durante 12 o 24 horas.
2. Se lava con agua destilada.
3. Se colorea con la solucin de hematoxilina
(III) durante 30 minutos a 24 horas, segn el
espesor.
4. Se lava con agua destilada.
5. Se diferencia con la solucin de alumbre (II).
6. Se lava con agua destilada.
El ncleo y los centrosomas quedan teidos en
1 vol. negro: el protoplasma en gris claro.
3 Preparacin de Flagelados, parsitos en la san
gre. Pueden observarse en fresco. Se pone una
gotita de sangre entre porta y cubre. Se observa
con objetivo potente: los Tripanosomas se reco
nocen por su movimiento y por los desplaza
mientos que provocan en los hemates.
Para observar en frotis teido, una vez efectua
do el frotis, y ya seco, se colorea por el mtodo
de Tribondeau, que fija y tie al mismo tiempo,
y se procede igual que para los Treponemas.
Los parsitos quedarn teidos en rosa, diferen
cindose perfectamente de las clulas sanguneas.
 Flagelados
E/l

Fig. 1 - Algunos Flagelados: 1, Englena viridis; 2, Bodo caudatus; 3, Mastigamoeba aspera, y 4, Volvox aureus.

Fig. 2 - Flagelados del grupo de los Tripanosomas: 1, Trypanosoma avium; 2, Trypanosoma solea; 3, 4 ,5 y 6 Jrypanosom a gra-
nulosum-, 7, Trypanosoma hylae; 8, Trypanosoma rotatorum, y 9, Trypanosoma rajae. Tinciones diversas (eosina, safranina y tio-
nina).

Fig. 3 - Leishmania trpica. Flagelado parsito, y su mosqui- Fig. 4 - Flagelados parsitos: 1, Trypanosoma rhodesiense; 2, T.
to transmisor, Phlebotomus papatasi. gam biense y la mosca tse-ts (Glossina palpalis).

ZO O LO G A
www.FreeLibros.me
51
RIZOPODOS
Son protozoos desprovistos de pelcula superfi
cial rgida, lo cual Ies permite emitir seudpo-
dos, que utilizan para la captacin de alimen
tos y para la locomocin. Los seudpodos son
lobosos, filiformes, ramificados o reticulados.
Algunas familias estn provistas de exoesquele-
to o endoesqueleto, y ste es unas veces calc
reo y otras silceo o quitinoso. Su nutricin es
hetertrofa, y muchos de ellos son parsitos.
Los clasificam os en Protomixinoideos, Mice-
tozoos, Am ebinos, Testceos, Foraminferos,
Heliozoos y Radiolarios.
Protomixinoideos
Grupo pequeo con seudpodos reticulados y
flagelos. Parsitos de algas ( Vampirella sobre
Spyrogira). (Fig. 1.)
Micetozoos
Tienen formas plasmodiales plurinucleadas y
son de notable tamao, con coloraciones diver
sas, ricas en granulaciones. Sus esporas produ
cen estados ameboides y estados flagelados. Se
enquistan, y de cada quiste nace luego una
mixameba.
De la fusin de varias de estas mixamebas se
forma finalmente un nuevo plasmodio. Se consi
dera este grupo afn al de los hongos. Se les llama
tambin Mixomicetes. Es un grupo numeroso.
Ejemplo: Plasmodiophora brassicae. (Fig. 2.)
Amebinos
De cuerpo desnudo, diferenciado en ectoplas-
ma y endoplasma. Forma seudpodos lobados.
Comprende este grupo todas las amebas par
sitas y acuticas: Amoeba proteus, de aguas
dulces. Trichamoeba pallida, marina (fig. 3);
Entamoeba histolytica, que vive parsita en el
intestino humano y produce la disentera ame-
biana, y Entamoeba cot, parsita, pero no
patgena.
Testceos
Amebas recubiertas por una teca generalmente (
provista de abertura. A menudo est formada
ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
por materiales diversos cementados entre s.
Como gneros ms corrientes cabe citar Arce-
lia (fig. 4), Difflugia, etc.
Heliozoos
Son de forma ms o menos esfrica, y estn
provistos de axopodios radiantes. Espculas sil
ceas. Viven en aguas dulces: Actinosphaericum
eichhom i, Actinophrys sol. (Fig. 5.)
Foraminferos
Estn provistos de caparazn calcreo formado
por una o por diversas cmaras con una o con
varias aberturas, por las cuales emiten los seu
dpodos. Suelen tener vacuolado el ectoplas-
ma. Son casi exclusivamente marinos y sus
caparazones forman sedimentos en los fondos.
Son muy importantes las especies fsiles Num-
mulites y Globigerinas. Las actuales son muy
numerosas: Globigerinas, Textularia Polystome-
lla, Rotaba, etc. (Lm. E/3, fig. 1.)
Radiolarios
Rizpodos pelgicos con simetra homoaxona
o monoaxona. Parecidos a los Fleliozoos. El
citoplasma est dividido en dos partes, la extra-
capsular y la intracapsular, separadas por una
cpsula central. Tienen una o ms aberturas y
un elegante esqueleto silceo o de sulfato de
estroncio, formado por diversas agujas orienta
das en todas direcciones, con una cpsula cri
bada concntrica. (Lm. E/3, fig. 2.) En algunos
casos sus esqueletos, usualmente de espculas
silceas, son muy reducidos. Algunos carecen
totalmente de ellos. Los Radiolarios integran a
veces colonias, y contribuyen no poco a formar
sedimentos ocenicos (barros de Radiolarios,
estratos rocosos: trpoli, harina fsil).
Se subdividen en Acantarios, con esqueleto
homoaxnico de sulfato de estroncio; Espume-
larios, con esqueleto silceo homoaxnico y
cpsula interna uniformemente perforada;
Naselarios, con esqueleto silceo monoaxnico
y cpsula interna perforada por un solo poro, y
Feodarios, con esqueleto silceo homoaxnico
y cpsula interior perforada por una abertura
principal y otra secundaria.
 Rizpodos
E/2

Fig. 1 - Protomixinoideos. Vam-

pirelia laten tica.
Fig. 2 - M icetozoos. Plasmo-
diophora brassicae.

Fig. 3 - Amebinos. En 1, Amoeba proteus;

en 2, Trichamoeba pallida.

Fig. 4 - Testceos. En 1, Grom ia oviformis; en 2, Euglypha tuberculata, y en 3, Arcella dentkta.

Fig. 5 - Heliozoos. En 1, Actinosphaericum eichhorni; en 2, Actinophrys sol.

ZO O LO G A
www.FreeLibros.me
53
Recoleccin de Rizpodos
Para hacer una buena recolecta de estos orga
nismos hay que buscarlos en estanques, pan
tanos o aguas encharcadas que contengan
hojas y detritos vegetales en descomposicin.
Esto es fcil de conseguir con ayuda de un
tubo de vidrio de unos 60 centmetros de largo
y con un dimetro aproximado de un cent
metro. Se tapa un extremo del tubo con un
dedo y se introduce el otro extremo hasta el
fondo o las hojas que se desea recoger. Se reti
ra el dedo del extremo superior, y el agua, por
presin, llena el tubo, arrastrando aquellos
materiales que interesan. Se vierte el conteni
do del tubo en una cpsula, donde, una vez
sedimentados los materiales, se recogern con
una pipeta los fragmentos ms interesantes y
que parezca que pueden contener rizpodos.
Tambin pueden encontrarse encim a de las
hojas sumergidas de rannculos, nenfares y
musgos de las rocas hmedas. Las amebas
parsitas las encontraremos en las mucosida-
des o en las heces.
Preparacin de la amebas y Heliozoos
Pueden observarse en vivo. Para ello se pone
entre porta y cubre una gota de agua o de solu
cin fisiolgica y, en ella, restos de hojas o
sedimentos de la muestra recogida.
Para verlas con ms detalle han de fijarse y
teirse encima de un porta.
Se fijan con el lquido de Bouin y se colorean
con hematoxilina frrica o por el mtodo de las
coloraciones panpticas.
El mtodo de Pnard consiste en aislar encima
de un porta una gota de agua que contenga
amebas, extraer con un papel secante el agua,
sin absorberla toda y aadir bruscamente alco
hol absoluto, quedando as los seudpodos
fijados. Se desecha el alcohol sobrante y se
colorea la preparacin con carmn al brax. Se
lava con agua, se pasa por alcoholes y se monta
con blsamo del Canad.
ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
34
Preparacin de los Foraminferos
Se los encuentra en el limo del fondo o sobre los
organismos marinos. Algunas formas son pelgi
cas, como las Globigerinas. Pueden recogerse
en las playas con los detritos de algas, Briozoa-
rios o Hidrarios arrojados por el mar. Los Fora
minferos vivos se encuentran en los puertos, en
los criaderos de moluscos y sobre el limo en la
desembocadura de los ros. Los residuos recogi
dos, tamizados y separados de las partculas
grandes, se conservan en tubos etiquetados.
Hay un mtodo para separar los Foraminferos del
resto de los organismos y partculas que contenga
la muestra: consiste en hacerlos flotar llenando sus
caparazones de aire o gas, haciendo burbujear gas
en el fondo del recipiente que los contiene. Los
Foraminferos flotarn y se irn acumulando en la
superficie, junto a las orillas. Las especies grandes
no subirn, pero pueden ser recogidas del fondo
con facilidad. Estos caparazones se mojan en alco
hol y se decantan varias veces, aadiendo un poco
de sosa custica. Se deja secar todo el sedimento
obtenido y se procede a montarlo. Se emplea el
mtodo del doctor Lacroix. Este procedimiento
permite llenar las cavidades de los caparazones
poniendo de relieve su estructura laberntica.
Se deshidrata con alcohol de 96 y se seca con
precaucin encima de una platina caliente.
Una vez seca, la preparacin se pone en una
gota de glicerina caliente y, despus de dese
char la glicerina sobrante, se cubre con una
gota de gelatina glicerinada fundida. Se enfra
bruscamente y, por descompresin, el lquido
penetrar en el interior de las cavidades.
Preparacin de los Radiolarios
Se recogen por medio de sondeos o pescas pel
gicas, igual que las diatomeas marinas. Los
Radiolarios vivientes deben fijarse con cido
smico, formol, lquido de Fleming, etc. Se con
servan en alcohol o agua formolada al 5 por
100. Se pueden teir con picrocarmn o con tin
turas de hematoxilina. Se montan con blsamo.
 izpodos
E/3

Fig. 1 - Forami'nferos. En 1, Astrorhiza Umicola; en 2, Rotalia; en 3, Biloculina depressa; en 4, Cornuspira folicea, y en 5,

Nortionina asterzans.

Fig. 2 - Radiolarios. 1, Heliospora; 2, H exaloncbe; 3, Aulacantha; 4, Collozoum inerme, radiolario colonial sin esqueleto, y 5 y
6, esqueletos silceos, 5 de Tympaniscus, y 6 de Acanthodesmia.

Z O O LO G A
www.FreeLibros.me
55
INFUSORIOS
Los infusorios o ciliados son organismos unice
lulares cuyo cuerpo est provisto de cilios.
Se les llama infusorios por su facilidad para
desarrollarse en lquidos procedentes de infu
siones vegetales. Poseen membrana bien defi
nida, citstoma con vestbulo y peristoma para
atraer el alimento. Poseen un macroncleo y
uno o dos microncleos. Viven en las aguas
dulces y en las saladas; algunos son parsitos;
hay especies fijas y pedunculadas. Raramente
forman colonias. Su tamao oscila entre las 12
mieras y los 3 milmetros.
Citemos entre los que ms llaman la atencin:
Paramecium caudatum (fig. 1), Opalina rana-
rum (fig. 2), Stentor polym orphus (fig. 3), Vorti-
cella nebulifera (fig. 4), Stylonichia mytilus (fig.
5) y Didinium (fig. 6).
Recoleccin
Se encuentran en las aguas dulces ricas en
materia orgnica, en infusiones vegetales anti
guas, en los musgos, plantas acuticas, parsi
tos de vertebrados, etc. Los productos de cada
pesca se pueden conservar en acuario, donde
habitualmente se desarrollan bien. Un buen
sistema de recoleccin es el de los portas
sumergidos, del profesor Faur-Fremiet: los
ciliados se pegan a todos los objetos sumergi
dos. Igualmente lo hacen otros protozoos, por
lo que este mtodo puede emplearse para los
protozoos en general.
Observacin y preparacin
Podemos observarlos in vivo en una gota de
agua sin cubre, para evitar deformaciones, o
por el mtodo de la gota pendiente. La adicin
a la gota de partculas de rojo neutro, polvo tor
nasol o rojo Congo permite observar fenme
nos de digestin.
Estos organismos se mueven muy rpidamente,
y ello dificulta su observacin. Para hacer ms
lentos sus movimientos se puede emplear una
solucin de goma arbiga, de la que se aade
una o dos gotas al lquido que se va a observar;
y, al aumentar la viscosidad de ste, los infuso
rios se mueven ms lentamente o casi se inmo
vilizan, segn la cantidad de goma arbiga aa
dida. Si aadimos a la goma arbiga una
pequea porcin de colorante, por ejemplo,
azul de metileno, obtendremos ventajas desde el
punto de vista ptico. Otro sistema para obser
varlos en fresco consiste en narcotizarlos con
unas gotas de agua cloroformada o con ter.
ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
Para fijar y colorear los infusorios se emplea el
mtodo de Cray.
Se prepara la solucin madre siguiente:
cido p c r ic o ................................................... 1 g
Bicloruro de m e rc u rio .............................. 1
Alcohol de 9 6 .................................................. 1 0 0 mi
Para fijarlos se utiliza la siguiente mezcla:
Solucin madre .......................................... X gotas
ter ......................................................................|||
cido a c t ic o .................................................. ||
F o r m o l................................................................. V
Se deja actuar esta mezcla durante 10 minutos.
Se lava la preparacin con alcohol hasta que
desaparece el color amarillo y se tie con una
gota de hematoxilina con alumbre, la cual se
pone encima el tiempo justo para colorear los
ncleos.
Se vuelve a lavar con alcohol clorhdrico:
cido clorhdrico ........................................0,25 mi
Alcohol ......................................................... 70
Se lava con agua. Despus de que aparece la
coloracin azul, se tie durante algunos segun
dos con una solucin alcohlica de eosina al
0,5 por 100 en alcohol de 50.
Se lava con alcohol absoluto. Se aclara con ter-
plneol y se monta con blsamo del Canad.
Otro mtodo consiste en colorear con una
solucin de picrocarmn, por ejemplo, el lqui
do de Certes:
Glicerina ................................................................1 mi
Agua ........................................................................ 1
Picrocarmn ......................................................... 1
Se pone una gota de este lquido en el borde
del cubreobjetos. Porel lado opuesto se absor
be el lquido con un poco de papel secante.
La corriente de lquido as provocada permiti
r la introduccin del colorante entre las dos
lminas de vidrio, tindose as los elementos
que stas contienen. Puede sellarse la prepa
racin para conservarla un tiempo determi
nado.
Un mtodo bastante empleado es el de la
nigrosina. (Figs. 5 y 6.)
Se pone sobre el porta una gota de agua que
contega la mayor cantidad posible de infuso
rios.
Se le aade una gota de nigrosina en agua al 10
por 100. Se mezclan los dos lquidos. Se seca
la mezcla al aire y se monta con blsamo des
pus de desecada completamente. Algunas
especies no soportan la desecacin y estallan
cuando ello ocurre.
 Infusorios
E/4

Fig. 1 - Paramecium caudatum, en preparacin teida. Fig. 2 - Opalina ranarum.

Fig. 5 Varios individuos de Stylonichia mytilus. Tincin por Fig. 6 - Didinium. Tincin por la nigrosina.
la nigrpsina.

ZO O LO G A
57
www.FreeLibros.me
 Zoologa
ROTFEROS
Animales acuticos con simetra bilateral, no
metamricos, de forma alargada, corta o redon
deada.
Cuerpo cubierto por un revestimiento cuticular
y, en algunas especies, rgido (loriga). La cabe
za no est diferenciada del cuerpo. Algunas
especies tienen pie (dedos) o disco adhesivo.
Recoleccin. Se emplea una red de doble malla
(fig. 1), la primera ms ancha que la segunda, y
terminada sta en un frasco para la recogida de
los Rotferos planctnicos. Entre las algas y los
musgos es muy fcil hallarlos viviendo casi ep
fitos; por ejemplo, Philodina. (Fig. 2.)
Tcnica de observacin
Pueden observarse en vivo por el mtodo de la
gota pendiente o, simplemente, entre porta y
cubre.
Para efectuar una preparacin duradera de los
Rotferos, se la debe fijar y teir, aunque previa
mente ser preciso narcotizarlos con una solu
cin adecuada, para evitar que se contraigan,
pues estos organismos son muy contrctiles y
delicados. Lquido narcotizador de Beauchamp:
Clorhidrato de cocana 1 g
Alcohol etlico ...................................................10 mi
Agua destilada ...................................................10
La cantidad de lquido que ha de aadirse
depende de la de lquido que contenga los
Rotferos. Deben hacerse varias pruebas: si se
contraen, se diluye el lquido narcotizador.
Una vez inmviles, se aade fijador, que puede
ser el lquido de Fleming.
Una vez fijados, se pueden conservar en una
solucin de formol al 5 por 100, o bien montar
en gelatina glicerinada, utilizando un porta en
el cual se habr previamente colocado un
recuadro de papel de filtro empapado en glice-
rina. ste constituir una cmara, que se relle
nar con la gelatina glicerinada que contiene
los Rotferos. Se tapar la preparacin con el
cubre y se barnizarn sus bordes para que
quede hermticamente cerrada.
O LICO Q U ETO S
Son gusanos cilindricos metamerizados, de
tamao variable, de un milmetro a varios cen
tmetros. Hay especies acuticas, que viven en
el limo del fondo (Tubifcidos), de donde pue
den recogerse con un tubo apropiado. Los
Tubifcidos son gusanos que miden de 1 a 20
centmetros, de color rosado, muy transparen
ATLAS DE M IC R O SC O PIA
www.FreeLibros.me
58
tes y frgiles. Se estropean fcilmente al tapar
los con el cubre, por lo cual es preferible fijar
) los con alcohol diluido o alcohol sublimado y
teirlos con carmn brico. Se montan en gela
tina glicerinada o en blsamo.
La lombriz de tierra, Lumbricus terrestris (fig.
3), abunda en los huertos y lugares hmedos.
Para el estudio de sus tejidos y rganos se dejan
los gusanos, durante unos das, en un cristali
zador con papel filtro humedecido, a fin de que
<
vacen su contenido intestinal. Se cortan des
pus en fragmentos, que se fijan durante 12
horas en alcohol sublimado y se lavan y pasan
por alcohol de diversos grados, hasta alcohol
absoluto, dejndolos una hora en cada uno de
ellos.
Inmediatamente despus se tratan, durante una
hora, con esta mezcla:
C loroform o.........................................................................3
Alcohol absoluto ..........................................................1
Transcurrido este tiempo, se pasan los fragmen
tos a una cpsula con cloroformo puro, donde
se dejan otra hora. Luego se sumergen en una
solucin de cloroformo saturado de parafina y
se dejan 48 horas en estufa a 58 C. El cloro
formo, evaporado, deja la parafina, que empa
pa los tejidos.
Se cortan a 12 mieras de ancho y se tien con
la hematoxilina frrica. Otra especie muy inte
resante de gusanos oligoquetos son los Nais
(fig. 4), muy abundantes en aguas dulces. Su
tamao oscila entre 1 y 10 milmetros.
Podemos recogerlos del fondo de charcas y
estanques por medio de una pipeta. Como son
muy transparentes se les puede estudiar inme
diatamente, encima de una gota de agua, en un
porta. Son muy frgiles; por ello, al cubrirlos
con el cubre, pueden romperse. Se pueden fijar
con alcohol diluido. El zumo de limn los mata
instantneamente. Rara fijarlos se recomienda
el alcohol sublimado en caliente.
Sublimado ....................................................... 10 g
Alcohol absoluto ...........................................100 mi
Agua destilada .................................................100
cido actico 2
Una vez fijados, se lavan y se colocan con el
carmn brico. Se montan en blsamo.
Las especies que se hayan de incluir en parafi
na se fijarn en alcohol sublimado fro y se
colorearn con hematoxilina frrica.
Las espculas, una vez montados los Nais en
blsamo, quedan transparentes. Deben ser,
pues, observadas y dibujadas con el gusano
entre porta y cubre, ligeramente comprimido.
 Rotferos
q oligoquetosLPi

Fig. 1 - Red para

la recoleccin del Fig. 2 - Algunas especies de Rotferos: 1, Brachionus pala; 2, Philodina rosola, y 3,
plancton. Rotifer vulgaris.

Faringe
N efridios
cerebral

Prostomio

Intestino

Fig. 3 - Corte sagital del extremo oral de una lom briz de tierra (Lum bricus terrestris).

Z O O ljp G A
www.FreeLibros.me
59
 Zoologa
ARTROPODOS
Caracterstica comn: exoesqueleto quitinoso
articulado. Su tamao es muy variado, desde
los Crustceos microscpicos, Coppodos (fig.
1), Cladceros, Ostrcodos e Hidrocridos, a
los casi gigantes Colepteros (fig. 3), que pasan
de los 10 centmetros.
Los mtodos de estudio han de adaptarse al tama
o del objeto que se va a estudiar; cuando se trata
de insectos y otros animales de gran tamao ser
preciso trocearlos y efectuar unas manipulacio
nes destinadas a hacer visibles sus tegumentos
por transparencia o por iluminacin lateral con
lupas episcpicas, especiales para insectos clava
dos en alfiler. (Fig. 4.) Para los de tamao muy
pequeo se pueden utilizar los mtodos genera
les de observacin microscpica.
Los Artrpodos poseen, como hemos indicado,
un exoesqueleto quitinoso que requiere un tra
tamiento especial para hacerlo transparente. Si
con el clorofenol y las lejas sdicas y potsicas
no se consigue aclararlo suficientemente, se
puede emplear el permanganato potsico al 1 o
2 por 1.000 durante 24 horas. Se lava la prepa
racin durante unas horas con cido oxlico al
1 por 300. El permanganato es un macerador
enrgico que, empleado solo o en combina
cin con el alumbre, es un buen disociador de
fibras crneas.
Los Insectos o fragmentos de ellos se sumergen
en alcohol de 90. Una vez, bien empapados,
han descendido al fondo del recipiente, se reti
ran e introducen seguidamente en una solucin
acuosa de potasa custica al 10 por 100, donde
se dejan varias horas o varios das, segn el
tamao del insecto. Pasado este tiempo, se reti
ra de la potasa el objeto y se baa en una solu
cin de cido actico al 30 por 100.
Cuando cesa el desprendimiento de burbujas,
se saca el material y se sumerge unos minutos
en cido actico puro y, finalmente, en alcohol
absoluto.
Puesto el insecto en la platina de una lupa
binocular, haciendo presin con una aguja se
logra que salga al exterior todo el contenido del
cuerpo, en forma de un fluido grisceo, que
dando el tegumento limpio y transparente.
Si, a pesar de la presin, no se logra vaciarlo, se
deja unas horas en la solucin potsica. Si se
calienta la solucin potsica, el tiempo de
accin se acorta considerablemente.
Algunos Artrpodos de tegumentos frgiles
pueden tratarse con cido actico, que tiene
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
60
www.FreeLibros.me
, una accin aclarante muy suave. La operacin
\ puede llevarse a cabo con cido ms o menos
diluido, y ya en fro, ya en caliente.
Limpios y aclarados ya los tegumentos, se
pasan por xilol fnico y se montan en blsamo.
/ Una vez montados, y tapados con el cubre, se
ejerce sobre ste, durante varias horas, una pre
sin uniforme hasta que quedan totalmente
secos. Con una hoja de afeitar se quita el bl
samo que desborda el cubre; ste se limpia con
/ xilol.
Los Coppodos, Ostrcodos, Anfpodos, Ispo-
dos y Cirrpodos y los estados larvarios de
Crustceos pueden tratarse con formol al 5 por
100 y pasarse por alcohol de 70. La colora-
/ cin se har con mucha prudencia, pues estas
^ especies se sobrecolorean con facilidad. Gene
ralmente se emplea una solucin alcohlica de
picrocarmn. Se aclaran con terpineol, se lavan
\ con benzol y se montan en blsamo.
Para preparar pequeos artrpodos de tegu-
) mentos dbiles, como pulgones, pequeos ca-
ros (fig. 2), pequeas moscas, ciertas larvas de
, malfagos, etc., los mataremos introducindo-
: los en una gota de alcohol. No es necesario
pasarlos por el bao de potasa. Se tapan con el
) cubre; el peso de ste es suficiente para mante
nerlos sujetos. Hay que procurar que la prepa-
, racin no se seque.
Para observarlos mejor se pueden colorear con
solucin alcohlica de eosina. Para conservar-
/ los, estos insectos se pueden montar en blsa
mo o en gelatina glicerinada, siguiendo las tc
nicas generales.
Los pequeos pulgones, muy corrientes en
ciertas plantas, se preparan matndolos con
alcohol de 70, pasndolos por alcohol absolu
to y luego por ter sulfrico, e intoducindolos
inmediatamente en la mezcla alcohol-cido
actico en fro. Cuando el animal est suficien
temente transparente, se monta en gelatina gli
cerinada.
Una vez terminada, la preparacin debe eti
quetarse para evitar confusiones con otras pre-
' paraciones.
En Entomologa es necesario estudiar el insecto
entero (fig. 3), ya que, una vez estudiado, va a
Y engrosar la coleccin, por lo cual no es nece
sario trocearlo. Para ello, una vez disecado,
1 introducindolo en vapor de cianuro o en un
frasco con fragmentos de corcho empapados
en acetato de etilo, se clava el insecto en una
aguja de entomlogo, de acero o de plstico.
(Fig. 4, nms. 1 y 2.)
 Artrpodos
E/G

Fig. 1 - Crustceos coppodos: 1, C yclops fuscus (dul-

ceacucola); 2, Colacalanus pavo (marino).
Fig. 2 - caros: 1, D em odex folliculo-
rum ; 2, Dem odex phylloides; 3, Ereyne-
tes limaceum.

Fig. 3 - Insectos. Un Coleptero. Cro cers Hli,

y detalle, en A, de un litro.

/ . . tMOA

Fifr 4 - Aparatos para el estudio de insectos desecados. 1, aparato de Sergent; 2, abejorro negro en un alfiler; 3, estereomi-
croscopio, y 4, cabeza de mosca, aumentada, vista de frente.

ZC)Ok()CA
www.FreeLibros.me
61
HISTOLOGA
Es la ciencia que estudia los tejidos de animales
y plantas. En Histologa es de suma importancia /
el microscopio, que pone de manifiesto los )
constituyentes de los diversos tejidos. Todos los
elementos que se han de estudiar necesitan
manipulaciones que los hagan ms aptos para la
observacin y tornen visibles estructuras y deta
lles que no podran ser apreciados sin realizar
aqullas. Es preciso, primero, reducir los tejidos
a pedazos lo suficientemente pequeos para
permitir fijarlos, incluirlos o teirlos antes de ser
montados para su observacin. (Figs. 1-6.)
Veamos algunos casos.
TEJIDO M USCULAR
Se cortan los msculos en pequeos fragmen
tos de un centmetro de grosor aproximada
mente, que se sumergen, durante 48 horas, en
una cpsula con lquido de Bouin.
Se lavan durante largo tiempo, usando un fras
co que permita pasar el agua continuamente
sin que los fragmentos del msculo se salgan
de l. Este lavado durar de 6 a 12 horas.
Se introduce el fragmento de msculo, durante
48 horas, en una solucin de goma arbiga. Fsa-
do este tiempo, se saca el msculo de la goma y
se sumerge en alcohol absoluto por espacio de
24 horas. La goma se coagula y confiere al frag
mento de msculo una consistencia crnea.
El msculo as preparado se incluye entre dos
pedazos de corcho y seguidamente se procede
a obtener los cortes. stos podrn ser en senti
do longitudinal o transversal. (Figs. 1 y 2.) Es
conveniente practicar cortes en ambos sentidos
para obtener mejor informacin sobre su
estructura. Los cortes se pueden practicar con
un micrtomo de mano o simplemente con una
hoja de afeitar.
Los cortes as obtenidos se ponen en un crista
lizador con agua, a fin de que suelten la goma
que los empapaba. Una vez libres de la goma,
se ponen en un porta, con una gota de agua o
glicerina y se tapan con un cubreobjetos.
Pueden teirse con picrocarmn, depositando
en el cubre una gota de colorante, que se intro
duce por capilaridad. Otros cortes se tien,
encima del porta, con hematoxilina acuosa;
otros, en una cpsula, con hematoxilina-eosl-
na. Todos los cortes se montan en glicerina,
obteniendo as toda una serie de ellos que per
mitirn hacer un buen estudio del tejido.
ATLAS DE M IC R O SCO PIA
www.FreeLibros.me
62
) Puede completarse este estudio aislando una
\ fibra muscular. Se disocian con una aguja
varias fibras, que se tratan con cido saliclico
durante tres o cuatro das, se lavan durante
( largo tiempo, se colocan encima de un porta y
/ se colorean con hematoxilina eosina, segn la
tcnica ordinaria. Se montan en glicerina.
Si se desea montarlos en blsamo, los cortes se
colocan encima del porta, fijndolos en l con
agua gelatinada. Se colorean con hematoxilina
eosina. Se lavan y deshidratan con alcoholes
^ de 50, 70, 90 y absoluto. Se aclaran con
esencia de lavanda, eliminando el exceso de
esencia; se aade el blsamo y se cubren.
TEJIDO NERVIOSO
/ Como objeto de estudio podemos usar el ner-
\ vio citico de una rana.
( Fibrillas. Se separa totalmente el nervio del
cuerpo de la rana. Se trata durante tres o cuatro
horas con una solucin de cido smico al 0,5
/ por 100, la cual lo fijar. Se lava durante cua-
} tro horas en agua destilada, se mete en una
( cpsula y se deja en alcohol de 90 durante 24
/ horas. Se disocia en fragmentos de cinco mil-
\ metros aproximadamente, que se tien, duran
te 12 horas, con una solucin saturada de fuc
sina cida en agua. Se incluyen en parafina y se
hacen cortes de unas tres mieras. Al observar
los al microscopio se ven las fibrillas en color
rojo, y el plasma interfibrilar, incoloro.
( Nervio. Se trata un fragmento de nervio como
) hemos indicado anteriormente, hasta el
( momento de teirlo, reemplazando la tincin
/ por una impregnacin, durante 24 horas y en la
\ oscuridad, de solucin de nitrato de plata al 1
( por 1.000.
) Transcurrido este tiempo, se lava con agua des-
\ tilada y se expone a la luz. Para observarla en
/ el microscopio, se trata la preparacin con gli-
) cerina y alcohol, y despus con esencia de
{ girasol, y se monta en blsamo. Los nervios
/ aparecern como en negativo, muy visibles.
Disociacin de la sustancia gris de la mdula
Los fragmentos de mdula fresca de cordero se
S ponen en una solucin de alcohol al tercio
( durante 24 horas. Transcurridas stas, se deposi-
) ta un fragmento de mdula encima de un porta
\ y se tie con picrocarmn o bien con hemalu-
/ meosina, y se cubre. Las clulas mostrarn sus
} prolongaciones ramificadas. (Figs. 3 y 4.)
 Histologa

Fig. 1 - Seccin longitudinal de un tejido m uscular estriado. Fig. 2 - Seccin transversal de un tejido m uscular liso.

Fig. 3 - Clula nerviosa del carnero. En A, tincin por la Fig. 4 - C o rte de la mdula espinal de un perro recin nacido.
hem aalum eosina , y en B, tincin por el azul policrom o.

F,g- ^ Tejido epitelial pavimentoso de la Fig. 6 - Seccin longitudinal de una raz joven de cebolla. Se observan varias
engua del hombre. clulas en divisin m ittica.

ZO O LO G A
www.FreeLibros.me
63
HEMATOLOGIA ) y eosinfilos, o en la relacin antes indicada,
hay una alteracin patolgica.
EXAMEN DE SANGRE El nmero de leucocitos en sangre se mide
El examen microscpico de la sangre se hace ) tomando por unidad la cantidad de ellos con
habitualmente por dos razones principales: tenidos en un milmetro cbico, que es en un
hombre adulto normal de 6.000 a 8.000. Esta
para observar o contar los elementos celulares
cantidad puede alterarse con la edad o por
que la constituyen o para buscar elementos u
enfermedad.
organismos patgenos que no le sean propios.
) En cuanto a los glbulos rojos, su nmero nor
Para ambos casos puede examinarse la sangre
mal en un hombre adulto es de 5.000.000 por
en fresco, recin tomada, en gota pendiente o
milmetro cbico.
en extensin, o realizar una serie de manipula
Al igual que la de los leucocitos esta cifra
ciones para hacer evidente la existencia de
puede alterarse por la edad o por causas pato
clulas que, sin tincin, no seran distintas de
lgicas.
otras en apariencia iguales.
La frmula leucocitaria se establece con objeti
Se empieza por hacer un frotis por extensin. Se
vo de inmersin en la extensin teida con
deposita una gota de sangre en un extremo de un
hem alum eosina o Giem sa, recorriendo el
portaobjetos bien limpio y desengrasado. Con el
nmero de campos necesario y haciendo el
borde del cubre, con una varilla de vidrio o con
recuento de cada variedad de elementos.
otro porta se toca la gota, que por capilaridad se
Cuando se llega a un total de 100, se mira la
correr a todo lo largo del borde. Con la rapidez
cifra que corresponde a cada variedad y queda
que se adquiere por la prctica, se extiende la
establecida la frmula. Es evidente que si con
sangre a lo largo del porta, procurando obtener
tamos varios centenares y determinamos el tr
una pelcula lo ms fina posible.
mino medio, el resultado ser ms exacto.
Una vez extendida, la sangre se seca al aire agi
Para el recuento de los glbulos rojos se utilizan
tando el porta, nunca a la llama. Se fija con
unos aparatos llamados hematmetros, que, en
alcohol absoluto durante un minuto y se dese
esencia, consisten en un porta con un retculo

cha el alcohol sobrante. Se seca, agitando el
muy finamente dividido y tapado con un cubre,
porta, y se tie mediante el mtodo de Giemsa
en el que, en un recuadro, queda dentro del
o por el de hemalumeosina. (Fig. 1.)
retculo una cantidad de sangre igual a una cen
Los gbulos rojos, o hemates, aparecen en
tsima de milmetro cbico. (Figs. 3 y 4.) Existen
color rosa plido. Los leucocitos, o glbulos
muchas variedades de retculos: los de Malas-
blancos, con el ncleo azul oscuro. Entre los
sez, Hayem, Agasse-Lafont, etc., que, con lige-
leucocitos distinguiremos unos poco o nada
/ ras variaciones, tienen el mismo fundamento.
coloreados, otros teidos ms o menos unifor
Tanto para la conservacin como para la dilucin,
memente de color violeta rosado y otros con el
si es necesaria, de los glbulos rojos y de los leu-
protoplasma francamente rojo.
) codtos sirve el lquido de Hayem (lquido A):
Si observamos ms atentamente, veremos que
esta coloracin fuerte es debida a gran nmero Cloruro sdico a n h id ro ............................ 1 g
de granulaciones de color rojo intenso, redon Sulfato sdico ............................................. 5
deadas y muy prximas entre s. Se trata de un Bicloruro de mercurio ............................ 0,5
leucocito eosinfilo, as designado porque su Agua destilada 200 mi
protoplasma es muy sensible a la eosina. En la \ El lquido de Hayem B) hemoliza los glbulos
sangre normal este elemento es siempre poli , rojos y se emplea para el examen y recuento de
nuclear, a diferencia de aquellos que poseen los leucocitos, a los cuales, adems, tie:
un ncleo redondeado, oval, alargado, y que Est compuesto por:
son los mononucleares. En realidad, los polinu
cido a c t ic o .......................................... 0,50 g
cleares tienen un solo ncleo, pero ste, a con
Solucin alcohlica de
secuencia de las estrangulaciones, toma en
azul de metileno 1 mi
apariencia el aspecto de pluralidad. (Fig. 2.)
Agua destilada ...........................................100
Los leucocitos que no toman bien el colorante
se llaman neutrfilos. Para la investigacin de elementos anormales
La proporcin entre leucocitos y glbulos rojos en la sangre, bacterias, parsitos, etc., se
es de uno de los primeros por 600 u 800 de los emplean los mtodos de tincin ya descritos
segundos. Siempre que las cifras se alteren en anteriormente. Tambin pueden emplearse los
la proporcin de mononucleares, polinucleares mtodos en fresco, de gota pendiente, etc.

ATLAS DE M ICRO SC O PIA

www.FreeLibros.me
64
 Hematologa
E/8

0 D

Fig. 1 - Elementos figurados de la sangre humana: 1 y 2, hemates; 3 y 4 , linfocitos; del 5 al 10, polinucleares, siendo el 5 neu-
trfilo, el 6 eosinfilo y el 7 basfiio; 11, leucocito eosinfilo; 12, m onocito. Tinciones: 1, hem alumeosina; 2, 5-7, azul poli
cromo; 3, 4, 8-12, Giem sa.

Fig. 2 - Sangre normal. D oble tincin por la Fig. 3 - Clula de Agasse-Lafont. Cuadrcula central: 1/1000
hemalumeosina. de mm3; cuadrcula perifrica: 1/10 de mm3

Fig. 4 Cuentaglbulos de Thoma. A, pipeta para toma y m ezcla de los glbulos; B, clula, y C , retculo grabado en el fondo de
la clula.

ZO O LO G A
www.FreeLibros.me
 Pe Tro g rafia
PETROGRAFA M ICROSCPICA
En Petrografa son indispensables, para el estu
dio completo de una roca, secciones delgadas
(figs. 3-5), aunque no siempre puedan propor
cionarnos toda la informacin necesaria.
Las secciones delgadas no son adecuadas
cuando las rocas son de grano muy grueso y de
composicin variable, como sucede con los
conglomerados, brechas y pegmatitas.
Para la preparacin de una seccin delgada,
normalmente los ejemplares se cortan con una
sierra circular provista de diamantes, emplean
do como lubricante agua y petrleo. (Fig. 1.) Se
traza el contorno de un portaobjetos sobre una
placa de la roca, que se corta con la sierra por
dentro de la lneas marcadas.
La superficie que ha de ser montada sobre el por
taobjetos debe ser completamente plana; para
lograrlo se la desgasta frotndola sobre un disco
giratorio de fundicin y empleando una suspen
sin en petrleo de carborundo de silicio.
Una vez plana, se lava para quitar los restos de
abrasivo. Con un poco de prctica se pueden
lograr secciones de 0,08 milmetros de espesor.
Para pegar la seccin al porta se puede emplear
el cemento termoplstico Lakeside nmero 70,
que rene una serie de condiciones: ser insolu-
ble en lubricantes que contengan petrleo y
fcil de desgastar y aplicar, tener gran resisten
cia, y fundir a 140 C. Se vende en barras, y slo
es necesario frotar una de ellas contra el porta
objetos y la seccin de roca y calentar ambos a
140 C en placa caliente, evitando el sobreca
lentamiento y la formacin de burbujas. Si no
llegara a esta temperatura, su viscosidad sera
demasiado pequea, no se lograra una pelcu
la uniforme y, en este caso, no seran paralelas
las caras del vidrio y la seccin de roca.
Una vez pegada, se desgasta la seccin, por fro
tamiento en disco de fundicin o de vidrio con
un abrasivo en suspensin en petrleo, hasta
lograr secciones de 0,03 milmetros. (Fig. 2.)
Una vez preparada, la seccin se monta en bl
samo, y se calienta ste a 110 C para no fun
dir el Lakeside. Se calienta tambin el cubre
objetos. Se deposita una gota de blsamo
caliente encima del cubreobjetos, que se apoya
en un borde del porta y se deja caer por su pro
pio peso. Se coloca un peso encima del cubre
para expulsar el blsamo sobrante.
Los ejemplares deleznables deben impregnarse,
antes de ser cortados, con sustancias apropiadas
que les confieran dureza y agregacin suficien
tes para permitir las manipulaciones antedichas.
Estas sustancias pueden ser monmeros de la
ATLAS DE M IC RO SCO PIA
www.FreeLibros.me
^ 0 6
lucita (metacrilato de metilo) blsamo del Cana
d, calolita, baquelita con n = 1,64, aunque
estas ltimas son muy viscosas y necesitan
disolventes cuya evaporacin produce burbujas
dentro del ejemplar. La mejor sustancia es,
pues, la lucita impregnada al vaco. Otra sus
tancia muy empleada es el aroclor 4.465, de
baja viscosidad, que impregna rpidamente los
materiales deleznables, por capilaridad y sin
disolventes.
Las secciones de rocas que contengan yeso no
pueden calentarse demasiado; de hacerlo, se for
mara sulfato clcico semihidratado. Las seccio
nes de roca que contengan sales solubles en agua
deben cortarse en seco. Los minerales delicues
centes se han de conservar en cloruro clcico.
Tincin
Cuando una roca contiene dos o ms especies
minerales que pticamente parecen similares,
puede ser conveniente teir las secciones del
gadas antes de cubrirlas; en la prctica, sola
mente se hace la tincin en unos pocos casos
concretos.
Procedimiento para nefelina-plagioclasa
Se extiende durante cuatro minutos cido clorh
drico sobre la seccin. Se lava con agua, por
inmersin. Se extiende con pipeta una solucin de
verde malaquita durante un minuto y se seca al
aire. Se somete durante 45 segundos a la accin
del cido fluorhdrico. Se introduce la seccin en
una solucin de cobaltonitrito sdico (1:2) duran
te dos o tres minutos y se lava con agua.
El feldespato queda teido en amarillo; la pla-
gioclasa, sin teir, y la nefelina, en verde.
Procedimiento para brucina-serpentina
y dolomita-calcita
Se sumerge durante tiempo ms o menos largo
la seccin en cido clorhdrico diluido, en el
cual se habrn disuelto unos cristales de ferro-
cianuro potsico. La brucita se tie de azul, y la
serpentina, de verde plido.
Se lava con cuidado y se sumerge en solucin
Lemberg por un minuto.
Solucin Lemberg:
Extracto de campeche 6 g
Cloruro de a lu m in io .................................... 4
A g u a ...................................................................... 60
Se lava bien. La calcita se tie de lila, y la dolo
mita no se altera.
 Petrografa j j y h
microscpica I

Fig. 1 - Sierra de diam ante para obtener secciones del Fig. 2 - M quina de Winkel para cortar rocas.
gadas de rocas.

Fig. 3 - Micrografa de un basalto. Luz polarizada.

Fig. 4 M icrografa de un gabro. Luz polarizada. Fig. 5 - Micrografa de un neis. Luz polarizada.

p e t r o < 8 |\ f a
www.FreeLibros.me
67
ANLISIS M ICROM TRICO M IN ERALGICO
Para examinar y determinar la composicin
mineralgica de una roca se emplea el mtodo
lineal de anlisis micromtrico, conocido tam
bin por mtodo de Rosiwal, con arreglo al
cual se coloca la preparacin sobre la platina
de un micrmetro registrador fijado en la plati
na del microscopio. El micrmetro est provis
to de cinco o seis tornillos, a cada uno de los
cuales se asigna un mineral o grupo de minera
les. El carro que contiene la preparacin se
mueve a travs del campo visual, haciendo
girar cada uno de los tornillos cuando el mine
ral o el grupo de minerales que se le ha asigna
do atraviesa la lnea observada. Los tornillos
tienen cabezas micromtricas, de modo que,
una vez observada toda una lnea transversal
de la preparacin, se puede leer directamente y
anotar la distancia total examinada al ir cru
zando el campo visual los granos de cada espe
cie o grupo mineral. Los tornillos micromtri-
cos se vuelven a su posicin cero, se desplaza
la preparacin una distancia determinada y se
repite la operacin con la lnea siguiente.
El anlisis completo consiste en una serie de
lneas transversales paralelas en cuyo recorrido
se ha totalizado la longitud de las lneas cruza
das por los granos minerales de las diferentes
especies para cada una de dichas especies o
grupos.
El micrmetro registrador de Hunt-Wentworth
(fig. 1, A) es uno de los ms utilizados; est
dotado de cinco tornillos micromtricos, todos
a un mismo lado.
Otro instrumento, construido por Leitz, tiene
seis tornillos, tres a cada lado. (Fig. 1, B.)
M TO DO DE INMERSIN
Puede aplicarse al estudio de especies en agre
gados formados por un solo mineral y a la
medida de sus constantes pticas, y tambin al
estudio microscpico de rocas y agregados
poliminerales. Para determinar sus constituyen
tes esenciales, las rocas y los agregados se tri
turarn, lo cual permitir estudiar con xito la
mezcla pulverulenta. El estudio de los fragmen
tos triturados ayuda no slo a identificar los
minerales y las rocas, sino a medir sus ndices
de refraccin, operacin que no puede llevarse
a cabo en una seccin delgada. Para ser obser
vados al microscopio, se introducen estos frag
mentos en agua o en aceites o esencias. Igual
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
www.FreeLibros.me
68
mente pueden ser montados en blsamo, siem
pre que as se prefiera.
Una variante de este mtodo es el empleado
para determinar los residuos insolubles de cal
citas y rocas carbonatadas y salinas.
Se tratan stas previamente con cido clorh
drico a una disolucin de 50. por 100. No obs
tante, si se pretende conservar estructuras fosi-
lferas, es preciso emplear cido actico. En
general, basta con dos o tres ataques, lavando y
decantando para recoger el residuo, que se
examinar en inmersin.
EXAMEN CO N EL M ICRO SCO PIO BINOCULAR
Con este microscopio, llamado tambin este
reoscpico (fig. 1, C), pueden observarse los
cortes o minerales en luz incidente u oblicua
en relieve.
Bsicamente se trata de dos microscopios uni
dos, inclinados, con pie soporte, espejo de ilu
minacin o lmpara platina y tubo binocular
de enfoque comn. La platina consta de un ori
ficio circular para las placas portaobjetos, y sus
partes laterales van provistas de ganchos en los
que se fijan apoyos para los brazos.
Con este aparato podemos obtener informacin
sobre el color, caractersticas texturales, calibre
y tamao, forma y rodadura de los granos, e
identificar rocas y fsiles.
OTROS M TODOS
Podemos tambin emplear un microscopio
petrogrfico y metalogrfico provisto de dispo
sitivo de polarizacin. El polarizador va coloca
do debajo del condensador para observaciones
por transparencia, y en el iluminador vertical, si
se observa por incidencia.
El analizador va colocado debajo de los tubos
portaoculares. (Fig. 2.)
Las secciones observadas con luz polarizada
ponen de manifiesto detalles de estructura y
diferencian elementos que con luz normal no
son diferenciables. Se emplea en Metalografa
para el estudio de aleaciones y metales.
En estos microscopios la platina y el nicol anali
zador deben ser mviles alrededor de su eje;
este ltimo debe tener un cuadrante graduado.
Ha de emplearse luz intensa de 1.000 a 1.500
bujas. Por rotacin de la platina, los fenme
nos cromticos aparecen muy patentes. Las
secciones deben estar exactamente perpendi
culares al eje del microscopio.
 Petrografa p .p
microscpica l /

Fig. 1 - En A , m icrmetro registrador de Hunt-Wentworth. En B, platina integradora de Leitz. En C , m icroscopio estereoscpico.

Fig. 2 - M icroscopio metalogrfico.

PETROGRAFA
www.FreeLibros.me
69
 MicropoleonrologTa
PALEOZOOLOGA Y PALEOBOTNICA cuales se aade agua y un poco de jabn, y los
hervimos con precaucin. De vez en cuando se
Tcnicas observa al microscopio una pequea muestra
del tubo para determinar el momento en que
Aparte el mtodo clsico de las lminas finas,
los frstulos estn limpios. Cuando ya lo estn
empleado en Petrografa, no existe una tcnica
se llena el tubo de agua, se lavan y se dejan
general, sino que cada caso debe ser resuelto
reposar.
segn la composicin qumica, la dureza, el
Las tierras arcillosas se tratan con aguas no ci-
tamao, las rocas en las que est incluido, etc.
das, y el sedimento se coloca con amonaco en
Se emplear en todo caso el mtodo de la lmi
una probeta alta, donde se deja 24 horas, agi
na fina para obtener una primera informacin
tndolo de vez en cuando.
acerca de los detalles antes citados y de la
Se lava abundantemente, se decanta, se recoge
riqueza de la muestra en microfsiles.
el sedimento y se tamiza.
Lo ms cmodo es obtener el mayor nmero
Para efectuar la preparacin microscpica se
posible de fsiles, y esto, generalmente, slo se
coloca en el centro de un porta, por medio de
consigue separando los fsiles de la roca o
una pipeta, una gota de agua que contenga
material. Rara lograrlo disgregaremos la roca
Diatomeas en suspensin. Se las deja secar,
mediante cidos, mediante calor o con el
calentndolas o al aire,
mtodo de las soluciones concentradas, basado
Se pone una gota de xilol, benzol o tolueno
en el principio de que la cristalizacin de la sal
encima de las Diatomeas para expulsar el aire
disgrega la roca.
de los frstulos. Luego se aade una gota de
blsamo del Canad. Sin dejar que se seque
DIATOMEAS FSILES
demasiado, se pone la preparacin encima del
Si la roca en la que suponemos poder encontrar cubre, previamente calentado. Una vez fra,
Diatomeas es de naturaleza calcrea o tiene ele est en condiciones de ser observada. (Fig. 1.)
mentos calizos, la trataremos con cido clorh
drico, que la disgrega, y luego con abundante FORAMINFEROS
agua para eliminar el cloruro clcico formado; le
Los ms conocidos de los Foraminferos son los
aplicaremos despus el mtodo de los cidos
Numultidos, que forman extraordinarios espe
fuertes o la trataremos con mezcla sulfocrmica.
sores de calizas numulticas. Son tambin bas
Si las rocas no son calcreas se emplea el mto
tante importantes los sedimentos de Operculi-
do del agua hirviendo y el agua fra, o el de las
nas, Orbitoideos y Fusulinas.
soluciones concentradas. Se opera siempre en
Tcnica. Cuando estn incluidos en rocas
una cpsula de porcelana.
duras, pueden observarse en secciones delga
El producto, obtenido por uno u otro mtodo,
das y en fondo oscuro o con luz transmitida.
se lava sobre un filtro de mallas finas y se deja
Si las rocas son blandas, margas, arcillas, se
reposar; se trata luego con una solucin de
disgrega la roca con agua. Se montan los ejem
bicarbonato sdico al 10 por 100, y se traslada
plares en clula seca, y los pequeos, en blsa
a un Erlenmeyer, donde se le aade cido fos
mo del Canad, como las Diatomeas. (Fig. 2.)
frico en cantidad capaz de neutralizar el
bicarbonato.
RADIOLARIOS
El desprendimiento gaseoso y la accin detersi
va del fosfato sdico desembarazan los frstu- Ni son tan abundantes ni han sido tan estudia
los de partculas minerales. Se filtra la prepara dos como los anteriores. Se encuentran en rocas
cin tantas veces como sea necesario y se sedimentarias silceas. Hasta hace poco no se
activa, si es preciso, calentndola. les reconoca valor en Estratigrafa. Los encon
Si las Diatomeas estn contenidas en tierras no tramos fcilmente en rocas terciarias. Se disgre
arcillosas se emplea el mtodo del jabn. gan y montan exactamente igual que las Diato
Se colocan en un tubo de ensayo unos gramos meas y los Foraminferos. Tambin se pueden
de la tierra que contiene las Diatomeas, a ios observar n situ con luz reflejada. (Fig. 3.)

(Concluye en la lmina D/6)

ATLAS DE M IC RO SC O PIA
www.FreeLibros.me
70
 P aleozoologap .,
i| P a l e o b o r n i c a /

Fig. 2 - Foraminferos fsiles. 1, Den-

Fig. 1 - Diatom eas fsiles. 1, Biddulphia primordialis; 2, Triceratium talina m ulticostata, 2, Cristellaria
glandiferum. rotulata.

Fig. 3 - Radiolarios fsiles. 1, Podocyrtis papalis; 2, Zigocir-

cus A y Lychnocanium B.

Fig. 4 - Dinoflagelados fsiles. 1, Peridinites oamaruen-

sis; 2 y 3, Am m odochium ampulla.

Fig. 5 - Otros m icro fsiles diversos: 1, espculas de esponjas; 2 escolecodontos o piezas bucales de Poliquetos; 3, granos d^
polen; 4 oogonio de Chaia; 5, valva de un O strcodo, y 6, conodonto.

MICROPALEONTOLOGA
www.FreeLibros.me
71
 Lquid os o r g n i c o s
ORINA
Se recoge toda la orina emitida durante 24
horas en vasos cnicos apropiados, que se
tapan con un vidrio de reloj. Las partculas en
suspensin se depositan en el fondo. Se decan
ta con cuidado el lquido limpio. Se recoge el
depsito formado y se pone en un recipiente
cnico de pequeas dimensiones. Si se quiere
conservarlos para sucesivas observaciones se
aadirn unos cristales de timol.
Una centrifugacin de dos a cinco minutos ser
suficiente para reconocer los parsitos, los espi
los y los cilindros. Se toma una pequea por
cin del sedimento, se pone encima de un
porta, se tapa con un cubreobjetos y se obser
va con objetivo de mediano aumento.
Para conservar los elementos orgnicos se pone
una parte del sedimento en una cpsula y se
somete a la accin del lquido de Wendriner:
cido b r ic o ...................................................
Brax
Agua destilada callente ...........................
Este lquido disuelve los sedimentos ricos e
impide la precipitacin de los fosfatos. El trata
miento respeta la morfologa de los elementos
organizados, que pueden colorearse con unas
gotas de solucin acuosa de eosina.
Encima de un porta se pone una gota de sedi
mento, que se cubre con una gota de solucin
acuosa de eosina y se tapa con el cubre. El
colorante pone de manifiesto el pus, los glbu
los sanguneos, las clulas epiteliales, etc.
CONSERVACIN DE LOS SEDIMENTOS
Los sedimentos urinarios tambin podrn ser
conservados con el lquido fijador de Hayem:
Bicloruro de mercurio ........................
Cloruro de s o d io ....................................
Sulfato sdico ..........................................
Agua d e stila d a.......................................... 100
Se introduce el sedimento, en pequeas porcio
nes, en el fijador. Se agita ligeramente y se deja
reposar durante 24 horas. Se decanta y se lava
con agua destilada varias veces. Se examina en
una gota de glicerina. Se colorea con azul de
metileno. Se diafragma o se tamiza la luz.
Otro mtodo para reconocer los elementos nor
males y anormales, las clulas, los cilindros,
microbios, etc., consiste en poner encima de un
portaobjetos una gota de sedimento, que se fija
al calor, pasando el porta lentamente por la
llama. Se tie con tionina, al Cram o al Ziehl.
^ ^ ^ ^ p C R O S C O P IA
En el sedimento urinario podemos distinguir
tres clases de elementos: sedimentos organiza
dos; sedimentos orgnicos; sedimentos mine
rales.
Los sedimentos organizados (fig. 1, A) son las
clulas epiteliales atpicas que proceden del
tramo urinario: clulas de la vejiga, de la vagi
na, de la pelvis renal, del rin, etc.
Tambin encontraremos glbulos rojos, leuco
citos, glbulos de pus, espermatozoides; cilin
dros urinarios, que son moldes de los tubos
secretores del rin y de los cuales existen gran
variedad, y, por ltimo, filamentos urinarios,
que son agrupaciones de moco, clulas, glbu
los de pus, etc., que se disponen en forma ver
micular y flotan en la orina con mayor o menor
facilidad, segn su tamao.
Los sedimentos orgnicos (fig. 1, B) estn cons
tituidos por cristales romboidales de cido
rico, de oxalato clcico, urato sdico, urato
6 g amnico, leucina, tirosina, colesterina, etc.
6 Los sedimentos minerales son cristales de
SO mi base romboidal, de fosfato am nico magnsi
co; granulaciones amorfas de fosfato triclci-
co, pequeas, o de carbonato clcico ; agujas
largas e incoloras de sulfato clcico ; etc. (Fig.
1,C.)
C LCU LO S URINARIOS
Los clculos del rin (fig. 2) pueden observar
se por transparencia, practicando en ellos un
corte longitudinal y puliendo su cara con un
papel de vidrio muy fino, hasta lograr el espe
sor deseado.
El ncleo se puede diferenciar fcilmente por
estar rodeado por crculos concntricos clara
mente visibles. La superficie pulida se lava en
0,25 g seguida con agua, se seca y se monta en blsa
0,50 mo, con la parte pulida contra el vidrio. Se pre
2,50 siona ligeramente para expulsar el aire. Una
mi vez seco el blsamo, se pule la otra cara con
papel de vidrio fino.
Cuando la luz puede atravesar el clculo, se
seca y se tapa con un cubreobjetos.
EXAMEN DEL PUS
Se observa en fresco entre porta y cubre; si es
necesario, se diluye en una solucin fisiolgi
ca. Hay amebas, micosis y actinomicetos que
pueden tambin observarse as.
Tambin podemos hacer extensin del pus,
fijarlo con calor suave y colorearlo por el mto
do panptico.
www.FreeLibros.me
 Orina
H/l

Fig. 1 - Sedimentos urinarios constituidos por tres clases de elementos: en A, sedimentos organizados; en B, sedimentos
orgnicos, y en C , sedimentos minerales.

Fig. 2 - D iversos clculos renales: 1, de cido rico y uratos; 2 y 3, de oxalato clcico ; 4 y 5, de fosfatos.

LQ U ID O S ORGNICOS
www.FreeLibros.me
73
 Lquidos orgnicos
CO PRO LO GA
Las materias, recogidas en un vaso seco, pue
den prepararse en varias porciones para facili
tar su estudio. Puede atenuarse su olor desagra
dable con unas gotas de nitrobenzeno. Se
diluye una gota de materia fecal en unas gotas
de solucin fisiolgica, encima de un portaob
jetos, que se tapa con un cubre. La pelcula
entre porta y cubre debe ser escasa, para que
permita el paso de la luz a travs de ella.
Las materias en examen pueden tratarse con el
lquido de Lugol doble:
Yodo 1g
Yoduro p o t sic o 2 Coloracin de los Protozoos intestinales
Agua 100 mi
El lquido se mezcla suavemente con las mate
rias para evitar las aglutinaciones. En el micros
copio polarizante, ciertos elementos (cristales,
huevos de parsitos) aparecen muy claros entre
los nicoles cruzados.
Enriquecimiento. Mtodo de Teleman-Rivas
El examen despus de enriquecimiento se
emplea para hacer visibles los huevos de Hel
mintos y los quistes de Protozoarios.
En una copa cnica se pone un centmetro
cbico de materia, tomada de diversos puntos
de la masa que se va a examinar y se aaden
cinco miligramos de la m ezcla siguiente:
Agua 100 mi
cido actico 5 g
Con una esptula de madera se remueven la
materia y el lquido hasta que se obtiene un
lquido homogneo, que se filtra a travs de un
tamiz de cobre de mallas de un milmetro y se
decanta. Se ponen cinco milmetros en un tubo
de centrfuga, a los que se aaden cinco m il
metros de ter sulfrico. Se agita todo para
obtener una mezcla homognea y se centrifuga
durante medio minuto con la centrfuga de
mano. Se decanta rpidamente el lquido que
queda encima. Por medio de una pipeta se
recoge el sedimento y se pone encima de un
portaobjetos. El examen microscpico debe
hacerse diafragmando, con luz escasa, y
empleando primero el objetivo en seco y pos
teriormente, si es necesario, el objetivo de
inmersin, y veremos todos los elementos de la
figura 1. Entre los parsitos encontraremos Ces-
todos y Tremtodos y sus huevos. Los huevos
de Cestodos se aclararn con leja de sosa al
cuarto durante media hora. Los Rizpodos,
Esporozoarios, Flagelados e Infusorios intesti
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
www.FreeLibros.me
74
nales se observan, generalmente, en las muco-
sidades y partes estriadas de la sangre. Puede
hacerse con ellas un frotis, fijarlas con lquido
de Bouin y teirlas con hematoxilina frrica.
Los Hongos se estudiarn directamente. Ciertas
preparaciones pueden teirse con azul lctico
o con solucin Lugol.
Las bacterias se observan colorendolas por el
mtodo de Gram, el cual permite diferenciarlas
en gramnegativas, colibadlos, bacilos disent
ricos, etc. Los grampositivos, Staphilococcus,
Strepyococcus, Proteus, etc., aumentan en caso
de enteritis.
Se introduce un fragmento de materia fecal en
una solucin de cloruro sdico al 6 por 100, for
mando con ella una suspensin de consistencia
tal que permita poner una gota en un porta. Se
aaden unas gotas de la solucin siguiente:
Agua destilada ................................................... 10 mi
Yodo coloidal (4% de y o d o )..................... 6 g
Solucin acuosa de rojo de anilina
(eosina amarilla) 1 0 % 1 g
Se mezclan y se observa al microscopio. Los
parsitos aparecern teidos de color intenso,
sobre todo los quistes, muy refringentes.
Las bacterias y partculas fecales se tien en
rosa. Los granos de almidn, en color violeta
casi negro.
Descripcin de los huevos de parsitos ms
corrientes
Ascaris lumbricoides. Ovoides, de 40 x 60
mieras. Estn provistos de una gruesa cubierta
mamelonada y son fcilmente reconocibles,
salvo cuando esta cubierta desaparece. (Fig. 2)
Oxyurus vermicularis. Se encuentran con ms
frecuencia que en las heces en las uas de los
nios parasitados. Son ovoides, pero asimtri
cos, con una cara plana, y estn provistos de
una cubierta lisa; en su interior se encuentra un
embrin giriniforme; miden de 30 a 32 por 50
a 60 mieras.
Trichuris trichiura. Son muy frecuentes en las
heces fecales, y aun tpicos de ellas. Son de
color pardo am arillento; tienen forma de
limn, cubierta espesa y polos con botones
muy refringentes. Su interior es granuloso.
Miden 50 x 25 mieras. (Fig. 2.)
Ancylostoma duodenale. Son elpticos, con
una cubierta muy fina, lisa y transparente. Tie
nen en su interior dos, cuatro u ocho clulas.
Son sus dimensiones 60 x 40 mieras. (Fig. 2.)
 C o p r o l o g a |||jf g -1

C lulas vegetales

Bacterias

Oxiuros Cristales de grasa

Clulas foliares
con estomas
lbulos de
Tricocfalos jrasa
Gotas de sangre

Levaduras

Fibras musculares

Equinococos

lucus y pus Cristales de

Cristales d
colesterina
th a r c o t
Grano de polen
Fibras vegetales

Clulas cilindricas

; f ij Cristales de oxalato Clulas de fcula de

l u la s ptreas M jcrococos _ clcico patata

Fig. 1 - Coprologa. Algunos de los elementos y residuos ms frecuentes que suelen hallarse en las heces fecales humanas.

Taenia saginata

A n ylosto m a du o d en a le . . .
7 D ic ro c a e hum la n ce olatum
\scaris tu m b rico id es
.Quistes v
nterobius verm icu lars

"Huevo

Entam oeba d isen teria e

H y m e n o le p is nana Lam blia nstestnalis
Trchiu ris trichiura

Fig. 2 - Huevos y quistes de algunos parsitos intestinales en el hombre.

LQ U ID O S ORGNICOS
75
www.FreeLibros.me
 Observaciones
industriales
TEJIDOS
Los tejidos estn constituidos por fibras vegeta
les, animales o sintticas. El examen es muy
interesante, a la par que til. Su estudio micros
cpico nos permitir poner de manifiesto su
composicin y el nmero de mallas por cent
metro (figs. 3-5), as como las posibles adulte
raciones que presenten.
Las fibras pueden estudiarse a lo largo, o sea en
longitud, o a travs, cortadas. En algunos casos
ser conveniente decolorarlas para lograr una
mejor observacin.
Examen longitudinal. Las fibras, aisladas del
tejido que forman, se tratan con una solucin
de carbonato de sodio al 3 por 100. Se lavan y
se dejan secar. Se disocian con agujas apropia
das. Se examinan en glicerina con luz natural y
objetivos dbiles.
Decoloracin de tejidos. La muestra de tejido
que se ha de desteir se sumerge durante
media hora en leja jabonosa al 10 por 100
para elim inar el apresto. La muestra, todava
hmeda, se ata a un corcho (fig. 1) y se intro
duce en una campana que contiene un reci
piente con cloruro clcico, al que se aade,
con una pipeta, cido clorhdrico. El gas cloro
que se libera decolorar la muestra.
Cuando ya est suficientemente decolorada, se
saca la muestra y se aslan unas cuantas fibras
de la trama, que se disocian con agujas.
Se examinan en una gota de glicerina, evitando
emplear luz artificial.
Las fibras se tratan con la mezcla siguiente, pre
parada en el momento en que se va a emplear:
Yoduro p o tsico
Agua d e stila d a .......................................
Y o d o .............................................................a saturacin
Puestas las fibras, encima de un porta, se les
aade una gota de reactivo. El reactivo sobrante se
extrae mediante un pedazo de papel filtro. Sobre
el porta se pone un cubreobjetos. En el borde del
cubre se echa una gota de la solucin siguiente:
G lic e rin a .........................................................................
Agua d e stila d a .............................................................
cido sulfrico ..........................................................
Las fibras de algodn y el lino se colorean en
azul. El camo se tie en azul verdoso en el
interior y am arillo en el exterior. La seda natu
ral se tie de color pardo. (Fig. 2.)
La lana y la seda se disuelven en una solucin
de sosa custica al 10 por 100.
ATLAS DE M ICRO SC O PIA
www.FreeLibros.me
Cortes transversales. Con los hilos de la trama,
unidos por un hilo, se forman paquetes, de
unos dos centmetros de longitud, que se intro
ducen en una solucin de goma arbiga. Una
vez impregnados e incluidos en mdula de
saco se cortan con micrtomo de mano. Tam
bin pueden incluirse en parafina y cortarse
siguiendo los mtodos generales. Los de lana se
pueden incluir en parafina o celoidina y cortar
se con una hoja de afeitar, dando a los cortes
una inclinacin de 15o.
Preparacin. Se deshidratan las fibras en solu
ciones alcohlicas de concentracin creciente;
25, 50, 70 y absoluto. Se dejan dos horas en
los tres primeros alcoholes y cuatro en el abso
luto. Luego se aclaran los hilos en esencia de
girasol y xilol, aceite de cedro, m ezcla de esen
cia de bergamota, aceite de cedro y cido fni
co. Se montan en gelatina glicerinada.
Por su transparencia, puede ser ms fcil su
observacin si, por medio de filtros adecuados,
se reducen la abertura del iris del condensador
o la intensidad de luz.
Pra la preparacin de cortes transversales se
enrollan las fibras sobre un marco de alambre y
se sumergen durante media hora en una solu
cin de celoidina en ter alcohol a partes igua
les. Se dejan secar al aire o coagular con clo
roformo.
Tambin cabe impregnar las fibras con una
solucin de goma arbiga:
Goma arbiga...........................................47,5 partes
A g u a ....................................................47,5
Despus de disuelta la goma arbiga en el agua
1 g se aaden cinco partes de glicerina.
100 mi Se seca la preparacin en la estufa. Las fibras
as impregnadas se incluyen en corcho o mdu
la de saco y se cortan con la mano o con
micrtomo de mano.
Los tejidos pueden observarse con microsco
pios de comparacin, que son, fundamental
mente, dos microscopios unidos en un solo
ocular (fig. 6), en uno de cuyos objetivos se
2 enfoca la muestratestigo y en el otro, el pro
4 blema. Rinden buenos servicios para descubrir
6 los fraudes.
La lupa cuentahilos, como su nombre indica,
es muy til para averiguar el nmero de hilos
que componen la trama de un tejido, tomando
como unidad el centmetro o el milmetro cua
drado, segn sea la tcnica empleada. (Lm.
A/1, fig. 1.)
 Tejidos

Fig. 1 - Dispositivo para la decoloracin de teji

dos y fibras textiles.

Fig. 3 - Tejido de cinta barnizada.

Fig. 4 - Tejido de rayn al acetato.

Fig. 5 - Tejido de lino.

Fig. 6 - M icroscopio comparador. En A, com paracin de dos
hebras de lana.

O B SERV A C IO N ^ INDUSTRIALES
www.FreeLibros.me
 Observaciones industriales
PAPELES
Preparacin. Es preciso aislar las fibras de los
dems elementos que puedan acompaarlas en
la composicin del papel: encolado, materias
colorantes y de carga. (Fig. 2.)
Rara ello se hierve una muestra de papel en agua
destilada hasta obtener una pasta amorfa. Esta
pasta, una vez retirada del fuego y enfriada, se
disgrega con agujas. El examen microscpico
permitir descubrir fibras extraas a la composi
cin del papel. As, las de lana son inconfundi
bles por sus escamas imbricadas. (Fig. 4, A.)
La muestra se introducir en seguida en una
solucin de sosa custica al 1 o 2 por 100, her
vida. Se filtrar a travs de una tela metlica
fina. Para elim inar la sosa se lava el residuo
repetidamente con agua destilada. Una vez
exprimido para eliminar el agua, se deposita
este residuo encima de un porta. Se le aaden
unas gotas de alcohol, se deja secar, y se le
agrega una gotlta de solucin yodoyodurada:
Yodo ................................................................... 1,15
Yoduro p o t sic o ............................................ 2
C lic e r in a .......................................................... 2
Agua d e stila d a .............................................. 20
El reactivo sobrante se absorbe mediante un
pedazo de papel de filtro. Se tapa la prepara
cin con el cubre. El contacto con la solucin
antedicha tie las fibras de algodn, lino o
camo en marrn ms o menos oscuro; las de
trigo, m az o centeno, en gris.
Reactivo de Herzberg. El licor de Herzberg, o
cloruro de cinc yodado, resulta de mezclar dos
soluciones:
a) Cloruro de c i n c
Agua d e stilad a
La disolucin calienta el lquido. Una vez fro,
se le aade:
b) Y o d o ................................................................ 0,20 g
Yoduro potsico
Agua destilada ..........................................10
Se deja reposar. Se decanta a los varios das y
se conserva bien tapado.
Por la accin de este reactivo, la celulosa, el
algodn, el lino y el camo se tien de color
rojo violceo; la pasta qumica, el trigo, el maz
y el arroz, en azul violceo; la lana, el yute y la
paja molida, en amarillo. (Fig. 4.) Si los colores
son demasiado plidos, se aade una pequea
cantidad de yodo o de cloruro de cinc. En caso
contrario adase agua.
CELU LO SA DE MADERA
La madera de Coniferas y de rboles de hojas
caducas, disgregada qumicamente mediante
ATLAS DE M IC RO SCO PIA
www.FreeLibros.me
78
diversos procedimientos (sodio y sulfato por un
lado, sulfito por otro), da una pasta, conocida
con el nombre de celulosa, constituida por las
traqueidas bien conservadas de aquellos vege
tales. (Fig. 3, A.) En la celulosa de pino la pared
celular muestra las soluciones de continuidad
en forma de ventana.
PASTAS DE MADERA Y PASTAS QUM ICAS
Las partculas que provienen de la trituracin
de maderas de Coniferas y de otros rboles
constituyen, despus de varias manipulaciones
y extracciones, las pastas de madera. Fia de dis
tinguirse entre pastas de madera qumicas y
mecnicas. En las pastas de madera de Conife
ras (fig. 3, B y C), las fibras presentan aureolas
redondas, muy patentes en las pastas mecni
cas y ms atenuadas en las qumicas.
Pastas mecnicas
Se hace actuar:
g
Sulfato de a n ilin a ....................................... 1 g
A g u a ........................................................................ 10
cido sulfrico ............................................ 2 gotas
mi
El sulfato de anilina tie de am arillo los ele
mentos lignificados. Si una muestra queda uni
formemente teida, consta de fibras mecnicas.
De lo contrario, las fibras estn mezcladas.
PASTAS DE ALGO D N
El papel de filtro est constituido mayormente
por fibras de algodn (flg. 1, C y D), utlilizadas
para los tejidos, a las que se aaden fibras de
10 g lino.
5 Con luz reflejada se descubre la existencia de
algodn por el crepado de sus fibras. La fuerte
porosidad del papel de filtro se debe a los cana
les aerferos (2/3 del volumen total).
2 CAUCH O
Caucho manufacturado
El examen puede hacerse por transparencia.
Se disuelve la muestra en lquidos apropia
dos.
La solucin, convenientemente extendida, pre
senta diferentes caracteres segn est ms o
menos concentrada la preparacin.
El examen sin preparacin se hace tomando
pequeas partculas de caucho y montndolas
en resina. Se pueden hacer los cortes con un
micrtomo Lelong o con uno de congelacin,
con hoja seca o humedecida con una ligera
capa de glicerina. Se montan en resina y se
observan con objetivo de mediano aumento.
(Fig. 5.)
 Papeles
i/a

Fig. 1 - Diversas fibras de papel: A, de algodn; B de lino; C , de Fig. 2 - Fragmento de peridico que revela su estructura
algodn en el papel de filtro; D, algodn preparado para filtros. vegetal.

Fig. 3 - Pastas de madera: A, de celulosa; B, de madera de Conifera (x 200), y C , dem (x125).

Fig. 4 Anlisis de papeles. A, lana; B, algodn; F, hilo, teidos por el reactivo de Herz- Fig. 5 - Esponja de caucho vista a la
berg; C , abeto; D , pino; E, castao, teidos por el de Softon. lupa.

OBSERVACIONES IN D U STRIA LES

www.FreeLibros.me
79
 O b s e r v a c i o n e s i n d u s t r i a l es
MICROQUM ICA
Est basada en el empleo de una pequesima
cantidad de materia. Podemos operar con can
tidades que oscilan entre centsimas y miisi-
mas de miligramo.
Se pueden emplear microscopios muy senci-
los, pues no son precisos grandes aumentos.
Pero s deben ser resistentes a los reactivos uti-
lizados durante la observacin.
Portaobjetos y cubreobjetos. Deben estar bien
construidos y preparados para resistir calenta-
mientos fuertes. Eventualmente servirn para
las reacciones, como si se tratase de tubos de
ensayo, y tambin se utilizarn como cpsulas
de evaporacin.
Resistirn temperaturas de 300 C. Necesitare-
mos tambin unos cuantos portaobjetos part-
dos en dos para realizar mezclas o hacer pre-
sin sobre las sustancias puestas en el porta.
Los cubreobjetos podrn ser normales o estar
preparados en forma de clula de Legendre (fig.
1); esto ltimo se consigue calentando los
ngulos del cubre a la llama, con lo cual se
doblarn lo suficiente para obtener, una vez
puestos encima del porta, una cmara de un
milmetro de altura, que en algunos casos de
cristalizacin lenta evitarn que la preparacin
se deseque.
Preparacin de los portaobjetos. Como algunas
reacciones con cidos y lcalis podran atacar el
cristal, se recubren algunos portas con blsamo
del Canad, que es muy resistente a los cidos,
ai amonaco, etc., y es fcilmente lavable. El pro-
cedimiento ms simple consiste en cubrir el
porta con una espesa capa de blsamo y calen-
tarlo suavemente hasta que gotee el blsamo
sobrante. Se seca en la estufa hasta que adquie-
ra una dureza tal que no se raye con la ua.
Calentamiento. Rara calentar las preparacio-
nes, la llama de los mecheros debe reducirse al
mnimo.
Para calentar y concentrar unas gotitas de reac-
tivo es excesiva una llama de un centmetro de
alto. Se debe, pues, usar un pico de mechero
Bunsen.
Volumen de las sustancias a utilizar. Para ope
rar con precisin se debe experimentar sobre
gotitas de un miligramo, que ocuparn una
superficie de dos milmetros aproximadamente
de dimetro. Para manipular con tan pequeas
cantidades se utilizan tubos capilares de
pequeo calibre, que tienen sobre las pipetas la
ventaja de poder reemplazarlos y la de no tener
que limpiarlos cada vez.
ATLAS DE M IC RO SCO PIA
www.FreeLibros.me
0
Utensilios. Los instrumentos necesarios son:
pinzas de extremos de platino, esptula y aguja
/ de platino, un pequeo mortero de gata, papel
fuerte para cubrir los granos que se han de
( moler y unas hojas de papel de filtro. Los reac
tivos se manejan con hilos de platino de 0,5
\ milmetros de dimetro montados en el extre
/ mo de varillas de vidrio o de hilos de vidrio de
; la misma seccin.
Filtraciones. Puede operarse sobre un porta
/ objetos inclinado. El lquido se filtrar a travs
S de una banda de papel de filtro de 1 por 10
/ milmetros, doblado en forma de V, mojado y
} aplicado sobre la lmina. Rara filtrarlo, la gota
\ se deposita entre las ramas de la V. Entre el fil
) tro y el vidrio se retendrn cinco miligramos
i de lquido; por lo tanto, se debe operar con
r gotas de menos de 0,01 miligramos y diluirlas.
) (Fig. 2.)
S Cristalizaciones. La cristalizacin de numero
/ sas sustancias se obtiene extendiendo encima
) del portaobjetos, bien limpio, una solucin
1 saturada y dejndola evaporar al aire, al abrigo
) del polvo. Para fijar los cristales se aaden unas
\ gotitas de solucin diluida de goma arbiga o
; en agua albuminosa.
i Cristales diversos. Numerosas sustancias que
( en estado cristalino presentan formas y colores
brillantes, observadas con luz polarizada
adquieren facetas diferentes y ms brillantes
( an. As ocurre, por ejemplo, con la asparragi-
) na, el acetato de cinc, los cidos brico, glico,
\ ctrico, tartrico y rico; el alumbre, la alizari
/ na, el arseniato sdico, el bicloruro de mercu
') rio, el clorato potsico, el cromato potsico, los
( sulfatos de cobre, de hierro, potsico, de cinc,
) etctera. (Figs. 3-6.)
\ Ciertos cristales pueden observarse en su
/ misma agua a saturacin. La sustancia que ha
) de examinarse se coloca en una probeta y se le
\ aade agua, que se calienta hasta la concentra
) cin necesaria para que, al enfriarse, se formen
\ cristales. Se calientan el porta y el cubre duran
te unos minutos.
) En el centro de la clula se vierten unas gotas
t de lquido hirviendo contenido en la probeta.
Se tapa con el cubre, haciendo ligera presin.
S Se absorbe el lquido sobrante con un papel de
( filtro. Se sella con barniz. La clula debe con
) tener el lquido lmpido, que, al enfriarse, for
\ mar los cristales. Se observa con luz polariza
/ da. Al cabo de cierto tiempo los cristales
) pierden su limpieza. Se ios reaviva calentndo
( los para disolverlos y obtener con ellos nuevas
combinaciones.
 MicroquTmica
1/3

Cubreobjetos

Pinzas

Clula montada

Cubreobjetos

M echero Bunsen
Fig. 1 - Preparacin de la clula de Legendre. Fig. 2 - Filtracin m icroqum ica.

Fig. 3 - Cristales de tetrafluoruro de xenn. Fig. 4 - Cristales de clorato potsico vistos con luz polarizada.

Fig. 5 - Cristales de ditartrato potsico vistos con luz polari- Fig. 6 - Reaccin m icroqum ica, con luz polarizada, que nos
zada. descubre pequeas cantidades de plata.

O B S E R V A C IO N ^ IN D U STRIA LES
www.FreeLibros.me
 Observaciones industriales
METALOGRAFIA
El examen microscpico de los metales permi
te estudiar su constitucin qumica, la combi
nacin y disposicin de sus elementos, sus
defectos, su comportamiento, etc.
La opacidad de los metales no permite obser
varlos en secciones delgadas ni con luz trans
mitida, como las rocas y los minerales. En
Metalografa deben observarse las muestras
con luz reflejada. La talla de estos objetos, su
forma y espesor pueden ser variables. Hay gran
nmero de aparatos de observacin, aunque se
haya adoptado comnmente el microscopio
metalogrfico. Cualquiera que sea la forma del
microscopio empleado, la muestra metlica
que se haya de observar debe tener una super
ficie pulida como un espejo, sin rayaduras.
El pulido de los metales tiene una influencia
considerable en el resultado del anlisis. Su
preparacin es larga y delicada, y debe efec
tuarse con mucho cuidado. (Fig. 1.)
Microscopio metalogrfico
Se emplean aparatos metalogrficos especiales
(fig. 2) o aparatos normales en los que se ha
mejorado el sistema de iluminacin.
Preparacin
De la masa a estudiar se toma una porcin de
unos dos centmetros cbicos, poco ms o
menos, lo suficientemente grande para que el
operador pueda tenerla entre los dedos.
Los bordes de esta muestra se cortarn en sen
tido oblicuo para que, al pulirlas con papel de
vidrio, las caras que se van a observar no se
estropeen rpidamente.
Pulimento
Se emplea una muela de gres o de carborundo.
La cara que ha de examinarse se dirige hacia la
muela y se procede a desgastarla. Se evita el
calentamiento, que podra ser perjudicial para la
muestra por producir contracciones o movimien
tos moleculares, mediante la vaporizacin con
agua. Fbra los metales dulces (cobre, latn) se
emplea, en lugar de agua, aceite. Durante cada
fase del pulimento debemos tomar las precau
ciones necesarias para evitar el calentamiento.
Para terminar la operacin del pulimento se tra
tar la pieza con esmeril nmero 0000. El puli
mento definitivo se hace encima de un disco de
trapo empapado con una papilla de aluminio
ATLAS DE M IC RO SC O PIA
www.FreeLibros.me
82
calcinado y jabn, y movido por un motor
elctrico. El grado de finura del aluminio
depende de la dureza del metal en observa
cin. Es til tener varios discos de trapo empa
pados con diferentes aluminios ms o menos
finos. Estos trapos pueden lavarse con agua
destilada despus de cada pulimento y ponerse
a secar, al abrigo del polvo, pues cualquier par
tcula silcea que recogieran sera suficiente
para producir rayas en las superficies que se
han de pulir.
Una vez pulida, la pieza se limpia con un cho
rro de aire. Nunca se deben emplear lienzos.
ATAQUE Q U M IC O O GRABADURA
Esta operacin permite poner de manifiesto la
estructura de una muestra y conocer los efectos
de determinados reactivos.
La superficie pulida de la muestra se sumerge
enteramente en reactivo durante unos segun
dos. Se arrastra luego el reactivo mediante un
chorro de agua tibia. No debe frotarse ni tocar
con los dedos o con un objeto cualquiera. La
muestra se secar con aire comprimido.
Cuando se trata la superficie pulida con reacti
vos de ataque (cidos concentrados, cianuro
potsico, permanganato potsico), el pulido
desaparece y son visibles las rayaduras que no
lo eran. La causa de este fenmeno es que la
pelcula producida por el pulido, de unas mil
simas de milmetro, rellena las rayaduras, pero
al desaparecer por el reactivo, queda la estruc
tura subyacente. Si el ataque es prolongado, la
mayora de las rayaduras desaparecen.
Hay varios reactivos apropiados: cidos dbi
les, sobre todo los cidos clorhdrico y ntrico
en solucin acuosa o alcohlica (1 mililitro de
cido clorhdrico de densidad 1,22 por 199
mililitros de agua destilada; 1 mililitro de cido
clorhdrico de densidad 1,19 en 100 mililitros
de alcohol etlico); soluciones de sosa, potasa o
amonaco, a las cuales se aade, en caliente,
en el momento que van a emplearse, unas
gotas de agua oxigenada. La sosa y el amona
co colorean los constituyentes heterogneos
del cobre; la potasa se emplea en aleaciones de
aluminio. La tintura de yodo pone de manifies
to los diferentes aspectos de aceros que contie
nen fsforo.
Otro mtodo consiste en dejar que las superfi
cies muy pulidas y brillantes se oxiden y tomen
los colores tpicos de los xidos metlicos.
Cohn ha empleado este mtodo en la obser-
vacin de los meteoritos.
 Metalografa
1/4

Fig. 1 - Aparato para el pulimento de metales.

Fig. 2 - M icroscopio m etalogrfico de taller con proteccin contra el polvo y las vibraciones.

O BSERVACIO N ES IN D U STRIA LES

83
www.FreeLibros.me
 IObservaciones industriales

REACTIVOS Y COLORANTES dadas por el micrtomo. Los espesores de las

a) Constitucin de los aceros:
Alcohol e t lic o .............................................100
cido pcrico p u r o 4
b) Coloracin de ciertos aceros:
Alcohol e t lic o ................................. 100 g
cido p c r ic o ...................................... a saturacin
c) Cementita de los aceros; ciertos carburos ) parafina fundida encima de estos platos calenta-
com plejos que se encuentran en aceros dos a 100 C, y es retenida por un anillo o banda
especiales:
cido p c r ic o .............................................. 2 g ; solidifique. Cuando se ha endurecido, la mezcla
Sosa (36 B a u m )..................................... 25
Agua d e stila d a .............................................100 mi : ciados con una pasta acuosa. Para terminar el
El cido pcrico se disuelve en agua caliente, a
la que se aade lentamente la sosa.
d) Reactivo para descubrir los carburos com- )
piejos de los aceros especiales con alto con
tenido de elementos extraos (aceros al
crom o y aI tungsteno).
cido crmico 2 g
cido sulfr. (68 Baum) 25 mi
Se emplea en caliente.
e) Granos de aceros y aleaciones de cobre.
Se utiliza con xito en el cobre amoniacal.
Se precipita con amonaco una solucin de
sulfato de cobre. Se aade una pequea canti / amarillo dominante se interpondrn filtros azu
dad de amonaco hasta que se disuelve el pre
cipitado.
Aleacin antifriccin:
Nitrato de p la t a 2 g
Agua destilada ............................................. 100
Se forma en la superficie de la aleacin que se
S polarizacin (fig. 3): nicol polarizador, que se
va a estudiar un acopio negro, que luego es
preciso elim inar con un chorro de agua.
M TODO H ISTO L G ICO
Los metales pueden estudiarse tambin por el
mtodo de los cortes en serie. La pieza que se
va a estudiar se fija en un portaobjetos y se colo
ca en una platina provista de un tornillo micro-
mtrico que permita medir los diferentes planos
que el pulimento sucesivo nos ir mostrando.
Para ello ha de colocarse la pieza siempre exac
tamente en el mismo punto del estativo del
microscopio, lo cual permitir reexaminarla
tantas veces como se haya aumentado el espe-
sor de la preparacin con arreglo a las cifras
capas rebajadas sucesivamente por los pulimen
tos se determinan por medio del micrmetro
g ) objetivo.
EXAMEN DE POLVOS METLICOS
La parafina se emplea como soporte para pulir
estos polvos. Los discos empleados para el puli
mento tienen estriada su cara plana. Se vierte la
mvil. Las partculas que se van a examinar se
incorporan a la parafina antes de que sta se
i se pule con esmeriles de diferente grosor mez-
pulimento se emplea rojo de Inglaterra.
Se necesita un poco de agua durante el puli
mento, para evitar calentamientos.
APARATOS DE OBSERVACIN
Los minerales metlicos pulidos (fig. 1) se exa
minan por medio de microscopios metalogrfi-
cos. Las muestras, fijadas encima de un porta
objetos metlico mediante cera o plasticina, se
colocan en la platina de un microscopio ordina
rio provisto de un iluminador vertical. La super
ficie pulida que examinamos debe ser paralela
al plano de la platina del microscopio.
Si se utiliza luz elctrica, para corregir el color
les, que pueden ser lminas de vidrio o frascos
llenos de soluciones coloreadas.
DISPOSITIVOS PARA EL EXAMEN
C O N LUZ POLARIZADA
Se emplearn los dispositivos normales de
adapta al tubo iluminador, y nicol analizador,
que se adapta al tubo ocular.
Es preciso emplear lmparas de 1.000 o 1.500
bujas. Es necesario, adems, seguir exacta
mente las normas establecidas.
Las secciones deben ser exactamente perpendi
culares al eje del microscopio. El pulimento
debe ser uniforme; las estras o rayaduras pro
ducen efectos de polarizacin del todo insos
pechados que dificultan la observacin. Las
preparaciones fuertemente atacadas por los
reactivos son inutilizables. El pulimento forma
una pelcula superficial cuya influencia en los
fenmenos de polarizacin permanece hasta
hoy desconocida. (Fig. 2.)

ATLAS DE M IC RO SCO PIA

84
www.FreeLibros.me
 Metalografa
l /S

Fig. 1 - Preparaciones de minerales m etlicos. En A, el mineral azul es sulfuro de cobre, y el blanco, pirita. En B, desplazamiento
de sulfuro de cobre (calcosina) por la covelita. En C , blenda con finas inclusiones de calcopirita.

F'g- 2 Aleaciones m etlicas: plata y antimonio. En A, Fig. 3 - M icroscopio polarizante.

con luz natural; en B, con luz polarizada.

O BSERVACIO N ES IN D U STRIA LES

www.FreeLibros.me
85
 Observaciones industriales

PRODUCTOS ANIMALES )
Los bacilos acidorresistentes, el de Koch y el de
Hansen, as como los paratuberculosos, se
LPIDOS
tien de rojo; los dems elementos celulares
Reaccin de las grasas. Los objetos que con que no sean acidorresistentes se tien de azul.
tengan grasas animales se fijan en formol al 10 Otro mtodo muy interesante es la tincin con
por 100, y los cortes, efectuados mediante un nigrosina. Se pone en un porta una gota del
m icrtomo de congelacin, se sumergen lquido que se va a examinar, se mezcla con
durante cinco o diez minutos en una solucin una gota de nigrosina, se deja secar y se exa
acuosa de crisoidina al 1 por 100. Despus de mina en inmersin.
lavados, los cortes se introducen en cido cr \ Si la cantidad de nigrosina fuera excesiva, no
mico al 10 por 100 o en bicromato potsico. Se / se vera nada; por el contrario, si es la ade-
lavan y finalmente se procede a su montaje. ; cuada, entre las gotitas de grasa y las de suero
Otro sistema consiste en teir los cortes con ( se observan puntos oscuros, que son las bac
Sudn III en alcohol de 70. Se montan en gli terias.
cerina. Los glbulos grasos se tien de rojo
anaranjado. EXAMEN M ICRO SC PICO DEL Q U ESO

: Se pone en un mortero de porcelana esteri I iza-

ANLISIS B A CTERIO L GICO DE LA LECHE
Recuento de bacterias. Con ayuda de una pipe
ta graduada, de 0 a 0,01 mililitros, se toma esta
misma cantidad de leche y se extiende en una
lmina de vidrio de un centmetro de lado. Se
seca suavemente y se tie por medio de azul de
metileno de Breed-Newman:
Alcohol de 96
Tetracloretano
Se calienta con precaucin a 70 C y se aade:
Azul de m e tile n o ................................................ 1,2
Se agita hasta que se disuelve el colorante. Se
deja enfriar y se aade:
cido actico glacial
Se filtra.
Se observa con objetivo de inmersin. Se cuentan
las bacterias en un cierto nmero de campos. Se
calcula la superficie de los campos y la cantidad
de leche que corresponde a esta superficie.
El recuento directo permite conocer rpidamen
te la causa de un aumento microbiano. (Fig. 1.)
Bacterias
Se toman 25 mililitros de leche, a los cuales se
aaden 50 mililitros de agua destilada. Se pone
todo en un tubo de centrfuga y se centrifuga a
5.000 revoluciones por minuto. Se separan la
crema y el suero, y se extienden separadamen
te en dos portas. Se tien por el mtodo de
Ziehl-Neelsen.
; do, previamente calentado a 45 C, un gramo
de queso. Se muele con cuidado. Tambin con
cuidado se aade, gota a gota, un centmetro
de solucin al 20 por 100 de citrato sdico,
esterilizada, a la que se agregan luego ocho
mililitros de agua esterilizada, a la temperatura
de 45 C. Se obtiene un lquido cremoso, sin
grumos, en el cual est emulsionada la materia
54 mi
grasa del queso. Se diluye esta emulsin en
40
diez partes de alcohol de 50 ligeramente alca
lino, al cual se adiciona fenolftalena, que vira
g r al rojo (pH 8,5 aproximadamente). De esta
solucin se toma 0,01 miligramos y se extiende
en una superficie de un centmetro cuadrado.
Se seca y se fija en una solucin de cloruro cl
6 mi cico al 2 por 100.
\ Se tie con azul de metileno de Breed-New
man al 1 por 100.
1 Este procedimiento permite observar la flora
microbiana de la leche y del queso (fig. 2) y
determinar la morfologa de las especies en
ellos presentes.
En la leche y en sus productos se encuentra
gran variedad de bacterias (fig. 1). Citaremos
las ms corrientes: Streptococcus lactis, gram-
positivo; Lactobacillus acidophilus, grampositi-
vo; Lactobacillus bulgaricus, grampositivo; Lac
tobacillus casei, tambin de carcter gram
positivo; M ycobacterium tuberculosis, acido-
rresistente; Serratia marcescens, gramnegativo;
Bacillus subtilis, grampositivo; Bacillus cereus,
grampositivo; Bacillus mesentericus, igualmen
te de carcter grampositivo.

ATLAS DE M IC RO SCO PIA

www.FreeLibros.me
~ 6
 Productos . . p
animales

o * 3* /V
v ,
I , V // ,
A ' r ~ r y

\
Io V 0 \
O ' / 0 / ^
j. jffle Q o
y o ^ v
/ lio \

' ^ / \ 0
' 0 / r
: /* 0 /
Fig. 1 - Anlisis bacteriolgico de la leche. A, glbulos de grasa; B, Lactobacillus bulgaricus y S trepto coccus lacticus; C , Lacto-
bacillus acidiophilus; D, Lactobacillus casei; E, Strepto coccus crem oris; F, Lactobacillus caucasicus; G , Bacillus subtilis; H, Toru-
la amara; I, Strepto coccus mastitidis.

Fig. 2 - Q ueso de Roquefort, aumentado, en el que se observan las hifas del hongo Penicillium rocheforti en medio de las m an
chas oscuras.

O BSERVACIO N ES IN D U STRIA LES

www.FreeLibros.me
 Observaciones industriales
MICROFLUORESCENC1A
Se construyen microscopios especiales de fluo
rescencia, aunque tambin es posible emplear
microscopios normales con iluminacin por
transmisin. Deschense los objetivos a la fluo
rina, pues las lentes son de por s fluorescentes
y alteraran el resultado.
El ocular debe estar provisto de un filtro que impi
da el paso de los rayos ultravioletas a travs del
microscopio, pues stos podran daar la vista.
(Fig. 1.) La preparacin se monta en un lquido no
fluorescente, agua o glicerina, sobre portas per
fectamente limpios, de vidrio impermeable a los
rayos ultravioletas, y, adems, no rayados.
Debe utilizarse un aceite de inmersin espe
cial, pues el aceite de cedro es fluorescente.
Hay dos clases de fluorescencia: la que es pro (
pia de ciertos objetos o de determinados lqui
dos, fluorescencia primaria, y la que adquieren
los objetos por impregnacin con sustancias
fluorescentes.
La fluorescencia primaria puede poner de
manifiesto las diferencias de coloracin entre
diversos tejidos. Los objetos que se han de
observar no deben sufrir ninguna manipula
cin, salvo la fijacin en formol (vapor o lqui
do). El material se cortar directamente sin
inclusin o por el mtodo de congelacin.
Los tejidos vegetales ofrecen coloraciones muy
contrastadas, sobre todo las cutculas y los
haces vasculares de los tejidos esclerificados.
(Figs. 2 y 3.)
La clorofila y la carotina son patentes en alto
grado.
La fluorescencia secundaria aparece cuando
los objetos han sido tratados con soluciones de
sustancias fluorescentes o fluorocromas.
Se someten las preparaciones a la accin de
soluciones muy diluidas (1 por 1.000 a 1 por
5.000.000), al igual que para las coloraciones
histolgicas (figs. 2-4), las cuales provocan
fluorescencias selectivas.
^ ^ ^ ^ jC R O S C O P IA
www.FreeLibros.me
No deben emplearse a la vez dos o ms fluoro-
cromos. La accin dura de algunos minutos a
varias horas, segn la dilucin empleada. Las
soluciones fluoroscpicas se conservan, al abri
go de la luz, en frascos de color topacio bien
cerrados.
Para el estudio de las preparaciones vegetales
se emplean soluciones concentradas (1 por
1.000 al 1 por 100.000), a las cuales se deja
actuar durante el breve tiempo de cinco a quin
ce minutos.
Los ncleos se tratan con extracto de ruibarbo,
rojo escarlata o sulfato de berber na. Los tejidos
quitinizados y suberificados se tratan con una
tintura de clorofila.
Se emplean soluciones frescas. No es conve
niente conservar las preparaciones, pues la
fluorescencia se altera con el tiempo.
Las imgenes obtenidas con el microscopio
fluorescente son mucho ms brillantes que las
logradas con luz ordinaria.
Hasta el presente no se han utilizado todas las
posibilidades de microscopio fluorescente por
que exige el empleo de rayos luminosos de
gran potencia para iluminar debidamente las
preparaciones. Algunos investigadores emplean
lmparas de arco que producen radiaciones
particularmente ricas entre los 3.000 y los
4.000 . Las potencias luminosas empleadas
permiten las ms fuertes ampliaciones, incluso
las obtenidas con objetivos de inmersin.
Este mtodo permite examinar preparaciones y
estructuras, as como determinaciones qumi
cas, sin manipulaciones y coloraciones previas
o, en ciertos casos, con preparaciones muy
simplificadas.
Ello permite abreviar el tiempo de preparacin
y la observacin, y, sobre todo, poner de mani
fiesto detalles estructurales que escaparan a la
observacin practicada con los mtodos clsi
cos.
Las coloraciones son caractersticas de determi
nados cuerpos.
 Microfluorescenca
1/7

Fig. 1 - M icroscopio Reichert con dispositivo especial de ilum inacin para la observacin de la m icrofluorescencia.

Fig- 2 - Corte de un tallo de Berbers Fig. 3 - Corte de una hoja de pino Fig. 4 - Tejido de la base de la lengua
con fluorescencia. con fluorescencia azul. humana.

O BSERVACIO N ES IN D U STRIA LES

www.FreeLibros.me
 CUADRO
DE MATERIAS
E NDICE

www.FreeLibros.me
 M AT E R IA S

FUNDAMENTOS E HISTORIA ) Disociacin de tejidos, y cortes.........................D/7

Microscopio simple. Microscopio \ Histoqum ica.................................................................D/8
compuesto. Historia...................................................A/2 )
Z O O LO G A
TCNICAS DE OBSERVACIN ( Flagelados........................................................................ E/1
Descripcin del m icroscopio............................... B/1 Rizpodos.........................................................................E/2
Clases de m icroscopios............................................ B/2 Recoleccin y preparacin.....................................E/3
Reglas generales de observacin. / Infusorios........................................................................... E/4
Medicin de objetos microscpicos. ) Rotferos y Oligoquetos............................................E/5
Dibujo de objetos m icroscpicos.......................B/3 Artrpodos....................................................................... E/6
Tcnica de las preparaciones............................... B/4 7 Histologa..........................................................................E/7
D isociacin, cortes, micrtomos y fijacin B/5 \ Hematologa....................................................................E/8
Coloraciones................................................................... B/6
Coloraciones simples y diferenciales. PETRO G RAFA
Colorantes bsico s...................................................... B/7 \ Petrografa m icroscpica.........................................F/1
Montaje y etiquetaje..................................................B/8 / Anlisis micromtrico. Mtodo de
) inmersin. Examen con el microscopio
BACTERIOLOGA ( binocular........................................................................... F/2
Bacterias. Recoleccin de muestras. )
Estudio en vivo .............................................................. C/1 M IC RO PA LEO N TO LO G A
Mtodo de Gram . Mtodo de Ziehl- / Diatomeas, Foraminferos, Radiolarios y
N eelsen............................................................................. C/2 ) Flagelados fsiles.........................................................G/1
Bacterias ms frecuentes.........................................C/3
Mtodo de Fontana-Tribondeau y L Q U ID O S O R G N IC O S
colorante de G iem sa..................................................C/4 \ O rina. Clculos. Examen del p u s....................H/1
/ Coprologa.................................................................... H/2
BOTNICA
Algas microscpicas: Cianofceas..................... D/1 O BSERVACIO N ES IN D USTRIALES
Clorofceas, Conyugadas, Heterocontas, Tejidos...................................................................................1/1
Rodofceas y Feofceas............................................ D/2 j Papeles y caucho...........................................................I/2
Diatomeas. Distribucin de las algas ( M icroqum ica..................................................................I/3
m arin as............................................................................. D/3 ) Metalografa: ataque qum ico............................... I/4
Micologa: levaduras y tias. Reactivos y colorantes. Examen de polvos
Derm atom icosis.......................................................... D/4 / m etlicos............................................................................I/5
Equisetneas, Filicinas y Brifitas.......................D/5 i Productos animales: grasas, leche y queso......... 1/6
Arquegoniadas y Embrifitas............................... D/6 ( M icrofluorescencia...................................................... 1/7

www.FreeLibros.me
 N D I C E

SERIE A SERIE E

A/1. - Fundamentos e historia ) E/1. Zoologa

( E/2. -
A/2. -
s E/3. -
SERIE B j E/4. -
( E/5. -
B/1. - Tcnicas de observacin ) E/6. -
B/2. - E/7. -
B/3. - ) E/8. -
B/4. -
B/5. - SERIE F
B/6. -
B/7. - F/1. - Petrografa
B/8. - ) F/2. -

SERIE C SERIE G

C/1. - Bacteriologa ) C/1. - Micropaleontologa

C/2. -
C/3. - SERIE H
C/4. H/1. - Lquidos orgnicos
H/2. -
SERIE D
SERIE 1
D/1. - Botnica
D/2. - 1/1. - Observaciones industriales
D/3. - f 1/2. -
D/4. - j 1/3. -
D/5. - ( 1/4. -
D/6. - ) 1/5.
D/7. -
D/8. -


) 1/6.
1/7. -

www.FreeLibros.me
 A T L A S

T E M T I C O S
R E L A C I N D E T T U L O S

CIENCIAS EXACTAS
A tla s d e M a te m tic a s (A n lis is + E je rcicio s)
A tla s d e M a te m tic a s ( lg e b ra + G e o m e tra )
A tla s de F sic a
A tla s de Q u m ic a
A tla s de P r c tic a s d e F sic a y Q u m ica

CIENCIAS COSMOLGICAS
A tla s d e G e o lo g a
A tla s de M in e ra lo g a
A tla s de la N a tu ra le z a
A tla s de los F s ile s
A tla s d e la A rq u e o lo g a

CIENCIAS NATURALES
A tla s de Z o o lo g a (In v e rte b ra d o s )
A tla s d e Z o o lo g a (V e rte b ra d o s)
A tla s de P a ra s ito lo g a
A tla s de B io lo g a
A tla s d e B o t n ic a

CIENCIAS PURAS
A tla s d el to m o
A tla s de la A s tro n o m a
A tla s de la M e te o ro lo g a
A tla s d e la M ic ro s c o p a
A tla s de la In fo rm tic a

ANATOMA
A tla s d e A n a to m a A n im a l
A tla s de A n a to m a H u m a n a
A tla s d el C u e rp o H u m a n o
A tla s d el H o m b re
A tla s de la C iru g a

www.FreeLibros.me