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INSTRUCCIONES para la PREPARACIN de medios de cultivo MICROBIOLGICOS ................................. 3
1. Buscar el nombre del medio que se va a preparar en la LISTA DE MEDIOS DE CULTIVO EN ORDEN
ALFABETICO.
2. Leer cuidadosamente las instrucciones del fabricante para la preparacin del medio de cultivo, est
informacin se localiza en el frasco.
3. Determinar el volumen de medio de cultivo a preparar, esto depende del nmero de tubos o
Erlenmeyers y del volumen de medio en cada uno.
Ejemplo:
Preparar 20 tubos con 10 ml de caldo TSB
Nmero de tubos: 20
Volumen de medio por tubo: 10 ml
4. Clculo: Todos los clculos deben hacerse en el cuaderno de laboratorio. NO se aceptar el uso
de hojas sueltas.
5. Calcular la cantidad de medio de cultivo a pesar, esto depende del volumen de medio a preparar y de
la relacin peso-volumen del medio.
La relacin peso-volumen es propia de cada medio de cultivo, est dada por el fabricante y se encuentra
detallada en el frasco que contiene el medio en la PREPARACIN (instrucciones del fabricante). Esta
relacin por lo general es a un litro.
Ejemplo:
Preparar 20 tubos con 10 ml TSB
Volumen de medio de cultivo a preparase: 200 ml
La relacin peso-volumen del medio TSB indicada en el frasco es: 30g/L o 30g/1000 ml.
Clculo (se realiza un regla de tres simple):
Si para preparar 1000 ml de medio se necesita 30 g de medio slido para preparar 200 ml cuntos g
necesitamos:
1000 ml de medio 30 g medio en polvo
200 ml de medio Xg
4. Calcular la cantidad de medio de cultivo a pesar, esto depende del volumen de medio a prepararse y
de la relacin peso-volumen del medio.
La relacin peso-volumen es propia de cada medio de cultivo, est dada por el fabricante y se encuentra
detallada en el frasco. Esta relacin por lo general es a un litro.
Continuando con el ejemplo anterior:
La relacin peso-volumen del medio TSA indicada en el frasco es: 40g/L o 40g/1000 ml.
Clculo (se realiza un regla de tres simple):
5. Si para preparar 1000 ml de medio se necesita 40 g de medio slido para preparar 500 ml cuntos g
necesitamos:
1000 ml de medio 40 g medio slido
500 ml de medio Xg
7. ETIQUETAR un Matraz de Erlenmeyer con el nombre del medio, el nmero de cajas a preparar y el
cdigo de la persona o grupo responsable. La capacidad del Matraz de Erlenmeyer debe ser mayor al
volumen de medio de cultivo a preparar, de lo contrario el medio se regar en el autoclavado. En este
ejemplo para los 500ml deber usar un matraz de 1000ml.
8. Al matraz aadir la mitad del volumen de agua destilada y el medio pesado.
9. Disolver los 20g del medio en 250ml de agua destilada en un matraz de 1000 ml, una vez disuelto
completar el volumen con los 250 ml restantes.
10. Tapar el matraz con papel aluminio con pequeos agujeros y calentar hasta disolucin total en la
cocineta, para ello agitar repetidamente y evitar que el medio de cultivo se derrame.
11. Para autoclavar el medio, se reemplaza el papel aluminio por un tapn de gasa que se cubre con papel
empaque y se sujeta con piola. Escribir en el papel del tapn el nombre del medio de cultivo, nmero
de cajas y cdigo del alumno que prepara el medio.
Una vez que el medio sale del autoclave, se procede a la reparticin en cajas para lo cual se trabaja en el
interior de la cabina.
12. Limpiar la cabina con alcohol etlico y encender el mechero.
13. Sacar las cajas Petri estriles de su empaque cuidando de no destaparlas.
14. Etiquetar cada caja en la BASE SOLO CON EL NOMBRE DEL MEDIO EN SIGLAS.
15. Antes de distribuir el agar en cajas Petri, se debe esperar a que el medio tenga una temperatura de 45-
50C. Si la temperatura es ms alta, habr excesivo vapor de agua en las cajas, lo cual puede afectar
la calidad de los cultivos.
16. Distribuir el medio en la cajas:
a. Destapar el medio en la cabina, agitarlo suavemente para homogenizar y flamear bien la boca
del Erlenmeyer para evitar contaminacin.
b. Levantar la tapa de la caja solamente lo suficiente para que penetre la boca del matraz
c. Verter lentamente el medio hasta ms de la mitad de la caja, evitando la formacin de burbujas.
Si se forman burbujas en la superficie del medio ya distribuido en la caja, flamear con ayuda de
un mechero hasta desaparecer las burbujas.
d. Cerrar la caja.
17. Dejar enfriar las cajas tapadas a temperatura ambiente, en una superficie horizontal y no moverlas
hasta que el medio se solidifique.
18. Una vez que el medio ha solidificado (aproximadamente 1 hora), guardar las cajas en posicin invertida
(la tapa hacia abajo) en una funda plstica y etiquetada con el nombre del medio y nmero de cajas
que contiene.
19. Guardar en refrigeracin.
Notas:
Si al momento de distribuir el medio en las cajas este empieza a solidificar hay que recalentarlo tapado hasta que est completamente
fundido. Este procedimiento no es recomendable porque el medio pierda calidad, de manera que hay que evitarlo.
No pipetear el agar fundido esto ocasiona que las pipetas se tapen.
4. Calcular la cantidad de medio de cultivo a pesar, esto depende del volumen de medio a preparar y de
la relacin peso-volumen del medio.
La relacin peso-volumen es propia de cada medio de cultivo, est dada por el fabricante y se encuentra
detallada en el frasco que contiene el medio en la PREPARACIN (instrucciones del fabricante). Esta
relacin por lo general es a un litro.
Ejemplo:
Preparar 20 tubos con 10 ml TSI (Triple Sugar Iron)
Volumen de medio de cultivo a preparase: 200 ml
La relacin peso-volumen del medio TSI indicada en el frasco es: 65g/L o 65g/1000 ml.
Clculo (se realiza un regla de tres simple):
Si para preparar 1000 ml de medio se necesita 65 g de medio slido para preparar 200 ml cuntos g
necesitamos:
1000 ml de medio 65 g medio slido
200 ml de medio Xg
12. Para autoclavar se debe colocar los tubos con el medio en latas destinadas para ello. Cada lata se
tapa con papel empaque en el que se especifica cuantos tubos, el medio que contienen, la fecha de
preparacin y el cdigo de la persona que los prepar.
Notas:
Una vez que los tubos salen del autoclave hay que considerar si deben solidificarse inclinados o en
posicin vertical. Estas especificaciones estn en el frasco del medio. FAVOR LEER CUIDADOSAMENTE
LAS INSTRUCCIONES.
13. Una vez solidificado el agar en los tubos, estos se dejan enfriar y se guardan en refrigeracin en la lata
con el papel en el que consta el nombre del medio y el cdigo de quien los prepar.
4. El agua para preparar este tipo de medios debe estar previamente esterilizada, para lo cual, se coloca
el volumen de agua destilada en el matraz, se tapa con el tapn de gasa y se sujeta con piola. Hay que
etiquetar el matraz con el nombre del medio de cultivo para el que se va usar el agua y el volumen.
5. Luego de que el agua ha salido del autoclave, se debe trabajar en una cabina.
6. Limpiar la cabina con alcohol etlico y encender el mechero.
7. Calcular la cantidad de medio de cultivo a pesar, esto depende del volumen de medio a preparar y de
la relacin peso-volumen del medio.
8. Pesar la cantidad exacta de medio de cultivo en la balanza que est dentro de la cabina con el
mechero encendido.
9. Destapar en la cabina, el matraz que contiene el agua previamente esterilizada y flamear bien la boca
del Erlenmeyer para evitar contaminacin.
10. Adicionar el medio pesado.
11. Volver a tapar el matraz y calentar el medio hasta disolucin total, para ello agitar repetidamente y
evitar que el medio de cultivo se derrame. No quitar el tapn durante en calentamiento, recuerde que el
medio est ESTERIL.
12. Sacar las cajas Petri estriles de su empaque cuidando de no destaparlas.
13. Etiquetar cada caja en la BASE SOLO CON EL NOMBRE DEL MEDIO EN SIGLAS.
14. Antes de distribuir el agar en cajas Petri, se debe esperar a que el medio tenga una temperatura de 45-
50C. Si la temperatura es ms alta, habr excesivo vapor de agua en las cajas, lo cual puede afectar
la calidad de los cultivos.
15. Distribuir el medio en la cajas:
a. Destapar el medio en la cabina, agitarlo suavemente para homogenizar y flamear bien la boca del
Erlenmeyer para evitar contaminacin.
b. Levantar la tapa de la caja solamente lo suficiente para que penetre la boca del matraz
c. Verter lentamente el medio hasta ms de la mitad de la caja, evitando la formacin de burbujas. Si
se forman burbujas en la superficie del medio ya distribuido en la caja, flamear con ayuda de un
mechero hasta desaparecer las burbujas.
d. Cerrar la caja.
16. Dejar enfriar las cajas tapadas a temperatura ambiente, en una superficie horizontal y no moverlas
hasta que el medio se solidifique.
17. Una vez que el medio ha solidificado (aproximadamente 1 hora), guardar las cajas en posicin invertida
(la tapa hacia abajo) en una funda plstica y etiquetada con el nombre del medio y nmero de cajas
que contiene.
18. Guardar en refrigeracin.
Si para preparar 1000 ml de medio se necesita 40 g de medio slido para preparar 500 ml cuntos g
necesitamos:
1000 ml de medio 40 g medio slido
500 ml de medio Xg
4. Disolver los 20g del medio en 250ml de agua destilada en un matraz de 1000 ml, una vez disuelto
completar el volumen con los 250 ml restantes.
5. Tapar el matraz con papel aluminio con pequeos agujeros y calentar hasta disolucin total en la
cocineta, para ello agitar repetidamente y evitar que el medio de cultivo se derrame.
6. Para autoclavar el medio, se reemplaza el papel aluminio por un tapn de gasa que se cubre con
papel empaque y se sujeta con piola. Escribir en el papel del tapn el nombre del medio de cultivo,
nmero de cajas y cdigo del alumno que lo prepar.
7. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Urea Agar
PREPARACION DE LA BASE:
1. Buscar el nombre del medio que se va a preparar en la LISTA DE MEDIOS DE CULTIVO EN
ORDEN ALFABETICO
2. Leer cuidadosamente la PREPARACIN (instrucciones del fabricante) del medio de cultivo, est
informacin se localiza en el frasco del medio.
3. Determinar el volumen de medio de cultivo a preparar, esto depende del nmero de tubos y del
volumen de medio por tubo (10 ml).
4. Calcular la cantidad de medio de cultivo a pesar, esto depende del volumen de medio a prepararse
y de la relacin peso-volumen del medio
5. Suspender X g del polvo en agua destilada. Mezclar para obtener una suspensin homognea.
Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto.
6. Esterilizar el medio en autoclave a 121C durante 15 minutos.
7. Para la preparacin de este medio debe tambin esterilizar:
a. Latas que contengan el nmero de tubos VACIOS etiquetados que necesita preparar. Cada
lata se tapa con papel empaque en el que se especifica el nmero de tubos vacos, el medio
y el cdigo de la persona que prepara el medio.
b. 50 ml agua destilada en un matraz, etiquetado como agua para urea"
c. Un frasco de vidrio Gatorade vaco.
d. Una pipeta de 10 ml.
2. Calcular los gramos de urea necesarios para preparar una solucin al 40%.
Ejemplo (continuacin del ejemplo anterior):