RATA

Medicin de la
Toxicidad por
diclofenaco en Mus
musculus (Ratn
albino), efectos a
nivel renal
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE INGENIERIA GEOGRAFICA, AMBIENTAL Y ECOTURISMO
ESCUELA PROFESONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL
FACULTAD DE INGENIERA GEOGRFICA, AMBIENTAL Y ECOTURISMO
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL
Medicin de la toxicidad por diclofenaco en Mus

musculus (Ratn albino), efectos a nivel renal.
CURSO: TOXICOLOGA.
DOCENTE: CESAR ZAA
ESTUDIANTE: HUAMAN COVARRUBIAS MOLLY 2014002543

PAUCA ROSADO ROSA 2014009959
ORTEGA BECERRA LUCIANO 2015500198
ROJAS BARILLAS AIME 2014004831
VICUA RIVERA GIANELLA 2014000175
VILLANUEVA VALLES XIOMARA 2014234239
HORARIO: 1:50 6:00 pm Martes
CICLO
SEXTO CICLO.
ACADMICO:
FECHA DE
03/01/2017.
ENTREGA:
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MEDICIN DE LA TOXICIDAD POR DICLOFENACO 2 musculus (RATN
EN Mus
ALBINO), EFECTOS A NIVEL RENAL.
NDICE DE CONTENIDO
I. INTRODUCCION........................................................................5
II. METODOS Y MATERIALES..........................................................8
1. Mtodos................................................................................................... 8
2. Materiales............................................................................................... 8
III. RESULTADOS..........................................................................23
1. La histologa con Hematoxilina - eosina (H-E):........................................23
2. Peroxidacin lipdica................................................................................ 25
IV. DISCUSIN.............................................................................27
V. CONCLUSIONES......................................................................27
VI. BICLIOGRAFIA........................................................................28
INDICE DE ILUSTRACION
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EN Mus
Ilustracin 1...................................................................................................... 11
Ilustracin 2 ..................................................................................................... 12
Ilustracin 3...................................................................................................... 13
Ilustracin 4...................................................................................................... 13
Ilustracin 5...................................................................................................... 14
Ilustracin 6...................................................................................................... 14
Ilustracin 7...................................................................................................... 14
Ilustracin 8...................................................................................................... 15
Ilustracin 9...................................................................................................... 15
Ilustracin 10.................................................................................................... 16
Ilustracin 11.................................................................................................... 16
Ilustracin 12.................................................................................................... 17
Ilustracin 13 ................................................................................................... 18
Ilustracin 14.................................................................................................... 19
Ilustracin 15.................................................................................................... 19
Ilustracin 16.................................................................................................... 21
Ilustracin 18.................................................................................................... 21
Ilustracin 17.................................................................................................... 22
Ilustracin 19.................................................................................................... 22
Ilustracin 20.................................................................................................... 23
Ilustracin 21. .................................................................................................. 24
Ilustracin 22.................................................................................................... 26
NDICE DE TABLASY
Tabla 1..........................................................................................21
Tabla 2..........................................................................................25
Tabla 3..........................................................................................25
Tabla 4..........................................................................................26
I. INTRODUCCION
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EN Mus
Los antiinflamatorios no esteroides se encuentran entre los medicamentos ms
prescriptos en todo el mundo. Se utilizan principalmente en el tratamiento de
la inflamacin, dolor y edema. Esta clase heterognea de frmacos incluye el
diclofenaco un frmaco anti-inflamatorio no esteroideo que exhibe anti-
inflamatorias, analgsicas, antipirticas y actividades en modelos animales.
Si bien la incidencia de toxicidad nefrtica por diclofenaco es baja, su
diseminado uso clnico y su fcil acceso hacen de ella un verdadero problema,
sin embargo, la incidencia de nefrotoxicidad global oscila entre 1 a 10 casos
cada 100.000 personas expuestas. Debido a que los riones son un blanco
frecuente en el cual muchos de los medicamentos que se usan en la prctica
clnica pueden ejercer un dao significativo en su estructura y por lo tanto en
su funcin. Otros medicamentos, por su parte, pueden generar una
nefrotoxicidad de carcter funcional. Es importante resaltar que al ser la
funcin renal uno de los mecanismos ms importantes de eliminacin de
frmacos, los riones son particularmente susceptibles a la lesin inducida por
medicamentos. Por esta razn, se deben conocer ms a fondo los mecanismos
por los cuales estos funcionan y alteran la estructura renal, con el fin de
prevenir la aparicin de efectos adversos.1
Los lpidos constituyen un grupo heterogneo de compuestos con funciones
muy importantes en el organismo tales como provisin de energa,
constituyentes de membranas celulares y tejidos nerviosos, aislantes trmicos
1 Antiinflamatorios No Esteroides: Efectos Cardiovasculares, Cerebrovasculares

y Renales, Michel Batlouni Instituto Dante Pazzanese de Cardiologa, Junio de
2012
Pgina
EN Mus
y elctricos, funcin hormonal local, etc. La reaccin directa entre una molcula
de lpido poli-no-saturado y oxgeno molecular se conoce como Peroxidacin
Lipdica. Esta reaccin de deterioro es catalizada por radicales libres
(peroxidacin no enzimtica) o sistemas enzimticos (peroxidacin enzimtica).
Se produce por oxidacin de los enlaces -metilnicos de los cidos grasos no
saturados que resulta en la formacin de lipoperxidos e hidroperxidos y,
finalmente, fragmentacin de la molcula lipdica. Los radicales libres estn
implicados en el desarrollo de muchas enfermedades tales como aterosclerosis,
diabetes, cncer, enfermedades inflamatorias crnicas y enfermedades
neurodegenerativas como as tambin en el proceso de envejecimiento. 2
Una de las tcnicas ms utilizadas en la histologa animal es la tincin de
hematoxilina y eosina. Las caractersticas de los compuestos que la componen
hacen posible observar al microscopio ptico las clulas individualizadas y sus
ncleos, que se tien de forma diferenciada. Gracias a esta tcnica se han
podido observar gran cantidad de tejidos animales. Se han descrito, bajo esta
tincin, la gran mayora de tejidos musculares y glandulares del cuerpo.
Aportando con ella la morfologa de las clulas que forman el tejido y la
posicin relativa y la forma del ncleo dentro de ellas. El mtodo supone la
aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica o bsica, tie
estructuras cidas (basfilas) en tonos azul y prpura, como por ejemplo los
ncleos celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos (acidfilos)
en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aninica o cida, como el
citoplasma.3
OBJETIVO
2 Peroxidacin de diferentes especies lipdicas: Efecto de antioxidantes trabajo

de tesis doctoral, Bqca. Natalia Soledad Fagali, Julio de 2011.
Pgina
EN Mus
Comprobar los efectos txicos agudos del diclofenaco a una concentracin de
50mg/Kg a nivel del tejido renal.
Identificar los efectos morfolgicos histolgicos en el tejido renal.
ANTECEDENTES
Acevedo, Acha y colaboradores (2012), en su trabajo Intoxicacin aguda por
diclofenaco en ratas, efectos lesivos a nivel gastrointestinal, heptico y renal,
se realiz un estudio experimental utilizando 14 ratas procedentes del
Bioterio de la Fundacin para el Desarrollo Agrario de la UNA, de la misma
camada, con pesos entre 150-200g, la dosis diaria de Diclofenaco aplicado fue
de 125mg/Kg por espacio de 3 das. Al cuarto da se extrajo: rin, estmago e
hgado para el estudio anatamopatolgico macro y microscpico; los cortes
histolgicos se realizaron seleccionando las zonas que macroscpicamente
evidenciaron mayor dao y se us la coloracin con hematoxilina-eosina.
En esta investigacin se obtuvo como resultado que el 100% de los animales
present algn tipo de lesin a nivel gstrico y renal, adems en un 90% se
observ dao heptico, y concluy que el Diclofenaco posee efectos txicos
agudos que se evidencian a nivel gstrico, heptico y renal.
3 Tcnica Histolgica, Csar Eduardo Montalvo Arenas, Agosto de 2010
Pgina
EN Mus
II. METODOS Y MATERIALES

1. Mtodos
Los mtodos que se utilizara son:
Tincin hematoxilina eosina H-E: para observar la morfologa de las
clulas luego de aplicar diclofenaco.

Peroxidacin lipdica: para determinar si el toxico ha alterado o a
causado algn dao.

2. Materiales
2.1. MATERIALES
MATERIALES UTILIZADOS
PICETA CON
PLACA PETRI AGUA
DESTILADA
MICROPIPETA TIPS
PORTA TIPS BARILLA
PORTA OBJETO CUBRE OBJETO
PLACA DE 96
Pgina
EN Mus
CENTRIFUGADO
POSILLOS
RA
3. EQUIPOS
EQUIPOS UTILIZADOS
BALANZA
MICROSCOPIO
ANALTICA
LSECTOR DE
TIPS
ELISA
HORNO
4. REACTIVOS
REACTIVOS UTILIZADOS
DICLOFENACO EOSINA
BALSAMO DE
HEMATOXILINA
CANADA
XILOL CIDO ACTICO
Pgina
EN Mus
CIDO TIOBAR
BUTANOL
BITURICO
SDS
CENTRIFUGADO
RA
II.2. METODOLOGIA
A) FASE : SOLUCIN PARA LAS RATAS

Utilizamos 7 ratas procedentes del Bioterio de la Universidad
Nacional Mayor de san Marcos, de la misma camada, con pesos entre
20-30g. La dosis diaria de Diclofenaco fue de 125mg/Kg por espacio
de 15 das. Al termino de la aplicacin de la dosis se extrajo: rin,
para el estudio anatamopatolgico macro y microscpico. Los cortes
histolgicos se realizaron seleccionando las zonas que
macroscpicamente evidenciaron mayor dao. Se us la coloracin
con hematoxilina-eosina
La concentracin de Diclofenaco sdico es 50mg/Kg de rata.
El peso de cada ratn en promedio es 25g:
50mg
1000mg
x mg
Pgina
EN Mus
Aplicando regla de tres simple se determina que se debe aplicar
1.25mg por cada ratoncito esta cantidad se debe diluir en 0.5ml de
agua destilada. Esto se aplicara para un ratn y para un da
B)
Ilustracin 1: Remarcado de los ratones para aplicar la dosis
FASE 2: TINCIN HISTOLGICA

La mayora de las clulas y matrices extracelulares no poseen un color
propio por lo que su observacin directa al microscopio ptico no permite
observar sus caractersticas morfolgicas. Para poder observarlos se
emplean colorantes, sustancias dotadas de color que se unen de manera
ms o menos especfica a determinadas estructuras del tejido.

Las tinciones generales se usan habitualmente en los laboratorios de
histologa para obtener una visin general de las muestras de tejido.
Normalmente combinan ms de un colorante. La tincin ms comn es
la que combina una sustancia como la hematoxilina y el colorante cido
eosina.
o Hacer tincin mediante el protocolo usado
o Colocar en las placas Petri el xilol durante 4 min.
Verter el xilol
Pgina
EN Mus hasta sumergir
ALBINO), EFECTOS A NIVEL RENAL. la placa
Ilustracin 2 se
vierte el xilol en la
placa Petri
Al momento de echar el xilol durante el tiempo requerido nos retiramos,
ya que el olor es muy fuerte y puede causar desventajas en nuestra
salud ms adelante.
Usamos otra placa de Petri con alcohol a 100% durante 3 min.
Para culminar este primer proceso sumergimos ahora con agua durante
3 min para hidratar
Ilustracin 3. Colocando alcohol sobre la

muestra
Pgina
EN Mus
Tincin para ncleos

celulares
Ilustracin 4 muestra sumergida en agua destilada
Tincin para
citoplasmas
Ilustracin 5 Osina y hematoxilina
En esta fase se coloca sobre la placa hematoxilina durante 8 min y
luego se enjuaga con agua destilada.
Pgina
EN Mus
Ilustracin
Ilustracin
6 hematoxilina
7 Muestras
sobre
secando
la despus de
muestraenjuagar con agua destilada
se coloca la eosina durante 5 min y al culminar el tiempo requerido se
enjuaga con agua destilada
Se debe
colocar la
osina sobre
Ilustracin 8 colocando osina sobre la todo la
Luego que muestra hemos muestra
hidratado las
muestras, colocando
hematoxilina, eosina y enjuagarlas
respectivamente. Se
utilizara un medio de montaje llamado el blsamo de Canad donde lo
deshidrataremos con respectivas concentraciones de alcohol en
pendientes diferentes, pero antes se diluir el alcohol de 100 a
diferentes concentraciones (70 y 90) con agua destilada.
Pgina
EN Mus
Ilustracin 9 placas petri para las concentraciones obtenidas de alcohol
para las muestras

El primer paso es obtener alcohol de 70 y luego tener las muestras
sumergidos en el durante 2 min.
Lo cual se hace los siguientes clculos qumicos cualitativos para su
dilucin ya que tenemos alcohol a 100 y diluirlo a la concentracin de
70
OH 100
70
70
H2O 0
10 k = 20 ml 14 ml---- OH
K = 2ml 6 ml ------ Agua destilada
Ilustracin 10 muestra sumergida en Alcohol a 70
Pgina
EN Mus
Las placas
retirarlas con las
pinzas con suma
cautela y cuidado
despus del
tiempo requerido
Ilustracin 11 retirando las placas despus del tiempo

necesario
El siguiente paso es obtener alcohol de 90 y luego tener las muestras

sumergidos en el durante 2 min.
Lo cual se hace los siguientes clculos qumicos cualitativos para su
dilucin ya que tenemos alcohol a 100 y diluirlo a la concentracin de
90
OH 100
90
90
H2O 0
10 k = 20 ml 18 ml---- OH
K = 2ml 2ml ------ Agua destilada
Luego sumergirlo durante 2 min.
Ilustracin 12 muestra sumergida en Alcohol de 90
Pgina
EN Mus
El ltimo paso es alcohol de 100 no necesita dilucin y se vierte de frente a la

placa petri
Ilustracin 13 muestra sumergida en alcohol de 100
Para finalizar se coloca el blsamo de Canad sobre la muestra
respectivamente seca y despus se sella coloca el cubre objeto para que
la muestra quede definidamente permanente.
Pgina
EN Mus
Ilustracin 14. Colocar el cubre objeto para que quede

permanente.
C) FASE 3: PEROXIDACIN LIPDICA
Se recolectaron los riones de los ratoncitos (Mus musculus) criados
en el laboratorio de toxicologa donde se le suministro diclofenaco
1.25mg a cada uno.
Muestra
del rin
de los
ratones
que se le
suministro
diclofenac
o
Ilustracin 15: fotografa general de todas las muestras, hgado, rin y cerebro y
los controles
Productos qumicos
Sulfato ferroso, cido actico, cido tiobarbitrico

(TBA),
Para
obtener
dodecilsulfato sdico (SDS), cido tricloroactico (TCA), butanol.
las
soluciones,
primero se
diluyo el
acido
Pgina 18 musculus (RATN actico al
MEDICIN DE LA TOXICIDAD POR DICLOFENACO EN Mus
ALBINO), EFECTOS A NIVEL RENAL. 20% y la
preparaci
n de TBA
Ilustracin 16: Preparacin de las dems soluciones
Inhibicin de la peroxidacin lipdica

Una especie reactiva al cido tiobarbitrico modificada (TBARS) se
utiliz para medir el perxido de lpido formado con rin
Homogeneizados como medios ricos en lpidos, como se describe por
Ruberto et al., (15).

Para empezar se prepara el extracto del rin, que consiste tomar
una muestra de 10 uL. del tejido y agregar 90ul de buffer obteniendo
un homogenizado de rin. Brevemente, 0,5 ml de rin
homogeneizado (10% v / v) se agrega agua destilada hasta 1ml la
mezcla se incub a 37C durante 30 min.

Despus, se aadieron 1,5 ml de cido actico de concentracin
3.48M seguido de 1,5 ml de TBA en SDS. La mezcla resultante se
mezcl en vrtice y se calent a 95C durante 1 hora. Despus de
enfriar, se aadieron 5 ml de butanol. Para la mezcla de TBA (0.8%
m/v) en SDS (1.1% m/v), se pesa 1.6mg de TBA Y 2.2mg de SDS y
se mezclan en 0.2ml de agua destilada. Se aadi y la mezcla se
Pgina
EN Mus
centrifug a 3000 rpm Durante 10 min. La absorbancia de La capa
orgnica superior se midi a 532 nm.

Los valores que se observan en la tabla son de operaciones
matemticas:
Consiste en sumar el volumen total 9ml esto se divide sobre 200ul
dando un factor de 45, este valor se aplica a cada uno de los
volmenes un ejemplo 0.5ml/45ul dando como resultado 11.11 uL,
esto se aplicara para cada uno de los valores.
Tabla 1: Volmenes para preparacin de soluciones
COMPUESTO VOLUME Volumen en Volumen para

N uL por pocillo seis pocillos
en un
eppendorf
Tejido del rin 0.5ml 11.11ul 66.66 ul
Acido actico 1.5ml 33.33ul 199.98ul
TBA en SDS 1.5ml 33.33ul 199.98ul
Butanol 5ml 111.11ul 666.66ul
Esquemas de inhibicin de peroxidacin lipdica.
se tritura la
muestra con un
punzn se coge
10ul y se
combinan con 90
ul de buffer, de
esta mezcla se
cogen 66.66ul y
se colocan a un
eppendorf
agregando
Ilustracin 17:133.33ul mas
Preparacin del tejido
de agua
destilada e
Pgina
EN Mus
El siguiente
procedimiento
consiste en
agregar 200ul
de Acido
actico y
200ul de TBA
Y 667ul de
butanol
Ilustracin 18: Preparando la solucin de acuerdo al protocolo
Pgina
EN Mus
luego el mix se
calienta a 95 C
por una hora , en
este
procedimiento
cuando se llega a
la temperatura
para mantenerla
se debe agregar
agua de poco a
poco para
mantener la
temperatura
,esperar que
enfri y llevar ala
Ilustracin 19: Ebullicin de la muestra a 95C
Luego de
centrifugar la
muestra se llena
en los pocillos de
la placa de 96
pocillos y se lleva
al lector de Elisa
y se obtendr la
absorbancia
Ilustracin 20: Final del proceso en el Lector de Elisa
III. RESULTADOS
Pgina
EN Mus
1. La histologa con Hematoxilina - eosina (H-E):
Esta tincin nos permite contrastar el ncleo del citoplasma, tiendo as el
ncleo de un color azul y el citoplasma de un color rosado.
A B
Ilustracin 21. Comparacin histolgica con aumento 40x entre el rion del
grupo experimental y el grupo control. (A) Grupo experimental, (B) Grupo
control.
Para cada cuadrante se logra observar menor cantidad de clulas y muy
separadas unas de otras en la imagen del grupo experimental en comparacin
con el grupo control que muestra mayor cantidad de clulas.
Pgina
EN Mus
D E
Ilustracin 22. Comparacin histolgica con aumento 100x entre el rin del
grupo experimental y el grupo control. (C y D) Grupo experimental, (E) Grupo
control.
Se observa en la primera imagen corpsculo renal, dentro y fuera de ella se
puede observar a los eritrocitos (puntos de color rojo) tanto en C, D y E. en la
imagen C se muestra ncleos pequeos, uniformes, sin nuclolos visibles.
En la imagen D, se muestra nuclolos visibles y en la imagen E, se muestra
ncleos ms grandes e irregulares con nuclolos prominentes.
En algunas clulas no se logra ver el nuclolo sino un espacio prominente
dentro de la clula dando una forma esfrica u ovalada lo cual se observa de
color blanco, por lo cual podramos decir que las clulas tienen una notoria
hinchazn, ya que segn investigaciones anteriores el diclofenaco produce una
ligera hinchazn en las clulas,
Pgina
EN Mus
2. Peroxidacin lipdica
*NOTA: de las absorbancias validas (0.243, 0.03) diferentes a los nmeros
negativos y del inf, se observa que el valor 0.03 es un valor muy pequeo
cercano al cero en comparacin del 0.243, por lo tanto el 0.03 no se
considerara para el presente informe ya que este afectara al momento de
hallar la media aritmtica, obtenindose un resultado no confiable.
Tabla 2. Absorbancias del grupo experimental y grupo control
GRUPO GRUPO
EXPERIMENTAL CONTROL
ABSORBAN
CIA ABSORBANCIA
C2 0.243 F7 0.301
E3 0.03* F9 0.192
F11 0.204
Tabla 3. Parmetros Estadsticos de la Peroxidacin Lipdica
GRUPO EXPERIMENTAL GRUPO CONTROL

PROMEDIO 0.243 PROMEDIO 0.232333333
MEDIANA 0.243 MEDIANA 0.204
EROR EROR
ESTANDAR 0.243 ESTANDAR DE 0.034507648
DE LA MEDIA LA MEDIA
DESVIACION DESVIACION
*----- 0.059769
ESTANDAR ESTANDAR
CV *----- CV 18.19070231
Se observa los valores de los parmetros estadsticos, para el grupo
experimental
MEDICIN soloPOR
DE LA TOXICIDAD se DICLOFENACO
trabajPgina
conEN
una
25 absorbancia
Mus musculus (RATN tal y como se
explica al principio.
0.24 0.24
0.24
0.24
0.24
0.24
0.23
0.23
0.23
0.23
0.23
GRUPO0.23
CONTROL
Ilustracin 23. Comparacin de la media entre el grupo control y grupo

experimental, teniendo en cuenta al grupo control como 100%.
Ya que el grupo control es el 100% y el grupo experimental tiene 105%, su diferencia es
de 5% lo cual indica que hay una ligera alteracin de las clulas.
Tabla 4. Pesos (g) de los ratones del primer y segundo control
GRUPO EXPERIMENTAL GRUPO CONTROL

PESO PRIMER SEGUNDO PRIMER SEGUNDO
S CONTROL CONTROL CONTROL CONTROL
1 31 35 28 31
2 33 32 25 30
3 29 32 26 32
4 30 33 26 30
5 28 30 25 30
6 30 34 24 30
7 27 28 24 25
Se observa que ms del 85% del grupo experimental presenta un aumento
de pesos entre 1 a 4 g, lo mismo sucede con el grupo control aumento de
pesos entre 1 a 6 g.
Pgina
EN Mus
IV. DISCUSIN
Contrastando nuestros resultados de investigacin con la investigacin
realizada por Acevedo, Acha y colaboradores (2012), en su trabajo
Intoxicacin aguda por diclofenaco en ratas, efectos lesivos a nivel
gastrointestinal, heptico y renal, estas difieren debido a la concentracin
utilizada de diclofenaco suministrado ya que los efectos causados por el
diclofenaco a concentracin 50 mg/kg en nuestra investigacin solo caus
daos leves y reversibles en los riones de las ratas a diferencia de la
concentracin de 125 mg/kg utilizada en la investigacin realizada por
Acevedo, Acha y colaboradores (2012) que presenta un dao renal agudo y
a su vez el 100% de animales analizados presentaron algn tipo de lesin
renal.
V. CONCLUSIONES
Se puede concluir de los resultados del presente estudio que la
administracin del diclofenaco sdico a una concentracin de 50mg/Kg a los
ratones conduce a cambios histopatolgicos en el tejido del rin ya que se
observ una ligera hinchazn y degeneracin hdrica en las clulas
epiteliales tubulares. As mismo se concluye que no se evidencia daos
celulares agudos, sino ms bien daos leves y reversibles, debido a que la
degradacin de las clulas, segn la ilustracin 22 muestra un porcentaje
del 5% una cifra no tan representativa para considerarlo como letal.

Se sugiere estudios adicionales a diferentes concentraciones del
diclofenaco sdico para determinar con ms precisin los efectos a nivel del
tejido renal.
Pgina
EN Mus
VI. BICLIOGRAFIA
- Ela C. y Castillo J. (1999). La peroxidacin lipdica en el diagnstico del
estrs oxidativo del paciente hipertenso. Realidad o mito? Ciudad de la
Habana, Cuba.
- ESTEPA V., RDENAS S. y MARTN M. (2001). Optimizacin de un mtodo
para la determinacin de la peroxidacin lipdica en suero humano.
Madrid,Espaa.
- AYDIN G, GKMEN A, NC M, KARAHAN N, GKALP O. (2003)
Histopathologic Changes in Liver and Renal Tissues Induced by Different
Doses of Diclofenac Sodium in Rats. Isparta TURKEY.

- ESTEPA V., RDENAS S. y MARTN M. (2001). Optimizacin de un mtodo
para la determinacin de la peroxidacin lipdica en suero humano. Madrid,
Espaa.
- FAGALI, NATALIA (2011). Peroxidacin de diferentes especies lipdicas:
Efecto deantioxidantes // TESIS DOCTORAL BIOQUMICA

- MONTALVO A, CSAR EDUARDO (2010) Tcnica Histolgica
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Medicin de la toxicidad por diclofenaco en Mus

DOCENTE: CESAR ZAA

ESTUDIANTE: HUAMAN COVARRUBIAS MOLLY 2014002543

II. METODOS Y MATERIALES..........................................................8

1. La histologa con Hematoxilina - eosina (H-E):........................................23

Los antiinflamatorios no esteroides se encuentran entre los medicamentos ms

prescriptos en todo el mundo. Se utilizan principalmente en el tratamiento de

la inflamacin, dolor y edema. Esta clase heterognea de frmacos incluye el

diclofenaco un frmaco anti-inflamatorio no esteroideo que exhibe anti-

inflamatorias, analgsicas, antipirticas y actividades en modelos animales.

Si bien la incidencia de toxicidad nefrtica por diclofenaco es baja, su

diseminado uso clnico y su fcil acceso hacen de ella un verdadero problema,

sin embargo, la incidencia de nefrotoxicidad global oscila entre 1 a 10 casos

frecuente en el cual muchos de los medicamentos que se usan en la prctica

clnica pueden ejercer un dao significativo en su estructura y por lo tanto en

su funcin. Otros medicamentos, por su parte, pueden generar una

nefrotoxicidad de carcter funcional. Es importante resaltar que al ser la

funcin renal uno de los mecanismos ms importantes de eliminacin de

frmacos, los riones son particularmente susceptibles a la lesin inducida por

medicamentos. Por esta razn, se deben conocer ms a fondo los mecanismos

prevenir la aparicin de efectos adversos.1

Los lpidos constituyen un grupo heterogneo de compuestos con funciones

muy importantes en el organismo tales como provisin de energa,

constituyentes de membranas celulares y tejidos nerviosos, aislantes trmicos

1 Antiinflamatorios No Esteroides: Efectos Cardiovasculares, Cerebrovasculares

de lpido poli-no-saturado y oxgeno molecular se conoce como Peroxidacin

Lipdica. Esta reaccin de deterioro es catalizada por radicales libres

(peroxidacin no enzimtica) o sistemas enzimticos (peroxidacin enzimtica).

Se produce por oxidacin de los enlaces -metilnicos de los cidos grasos no

saturados que resulta en la formacin de lipoperxidos e hidroperxidos y,

finalmente, fragmentacin de la molcula lipdica. Los radicales libres estn

implicados en el desarrollo de muchas enfermedades tales como aterosclerosis,

diabetes, cncer, enfermedades inflamatorias crnicas y enfermedades

neurodegenerativas como as tambin en el proceso de envejecimiento. 2

Una de las tcnicas ms utilizadas en la histologa animal es la tincin de

hematoxilina y eosina. Las caractersticas de los compuestos que la componen

hacen posible observar al microscopio ptico las clulas individualizadas y sus

ncleos, que se tien de forma diferenciada. Gracias a esta tcnica se han

tincin, la gran mayora de tejidos musculares y glandulares del cuerpo.

Aportando con ella la morfologa de las clulas que forman el tejido y la

posicin relativa y la forma del ncleo dentro de ellas. El mtodo supone la

aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica o bsica, tie

ncleos celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos (acidfilos)

en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aninica o cida, como el

2 Peroxidacin de diferentes especies lipdicas: Efecto de antioxidantes trabajo

Comprobar los efectos txicos agudos del diclofenaco a una concentracin de

50mg/Kg a nivel del tejido renal.

Identificar los efectos morfolgicos histolgicos en el tejido renal.

Acevedo, Acha y colaboradores (2012), en su trabajo Intoxicacin aguda por

diclofenaco en ratas, efectos lesivos a nivel gastrointestinal, heptico y renal,

se realiz un estudio experimental utilizando 14 ratas procedentes del

Bioterio de la Fundacin para el Desarrollo Agrario de la UNA, de la misma

de 125mg/Kg por espacio de 3 das. Al cuarto da se extrajo: rin, estmago e

hgado para el estudio anatamopatolgico macro y microscpico; los cortes

histolgicos se realizaron seleccionando las zonas que macroscpicamente

evidenciaron mayor dao y se us la coloracin con hematoxilina-eosina.

En esta investigacin se obtuvo como resultado que el 100% de los animales

present algn tipo de lesin a nivel gstrico y renal, adems en un 90% se

observ dao heptico, y concluy que el Diclofenaco posee efectos txicos

agudos que se evidencian a nivel gstrico, heptico y renal.