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LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

I. INTRODUCCIN

El laboratorio de microbiologa es un lugar convenientemente habilitado donde


se puede manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser
llevado a cabo con una buena tcnica higinica y por tanto se requiere un
ambiente limpio y ordenado.

El trabajo en el laboratorio de microbiologa requiere del uso de una gran


cantidad de materiales y equipos, son muy variados y su conocimiento es
importante en la realizacin de experimentos y prcticas de los diferentes
procesos, ya sea qumico o biolgico, por lo tanto es importante comprender su
uso y cuidados en general.

Los laboratorios de microbiologa constituyen ambientes de trabajo especiales,


que pueden presentar riesgos de enfermedades infecciosas para las personas
que se encuentren en o cerca de ellos.

Es por ello que antes de comenzar con las actividades prcticas, todas las
personas involucradas (estudiantes y profesores) tenemos la obligacin de
conocer cules son las normas de seguridad para que el trabajo se realice con
un riesgo mnimo de exposicin, tanto para las personas que lo ejecutan como
para el medio ambiente.

En la presente prctica se describir detalladamente algunos materiales y


equipos fundamentales, como tambin tener una gua de normas que
contribuya a lograr un ambiente de trabajo adecuado y seguro, durante la
ejecucin de las actividades prcticas en el Laboratorio de Microbiologa.

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II. OBJETIVOS

Reconocer e identificar los materiales, equipos e instrumentos que se


usaran en el laboratorio de microbiologa, y su uso de cada uno de ellos.

Conocer las medidas de seguridad que se deben tener en cuenta al


realizar experiencias en el laboratorio de microbiologa.

Conocer conceptos claves de un laboratorio de microbiologa como


asepsia, limpieza, desinfeccin, tipos de esterilizacin y tipos de
desinfectantes.

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III. CUESTIONARIO

1. Cules son las medidas de seguridad que se deben tener en cuenta


en un laboratorio de microbiologa?

Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros


objetos personales en el lugar que se les indique para tal fin.
Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe
permanecer completamente cerrada.
Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al
finalizar la sesin prctica.
Lavar las manos con agua y jabn
antes de realizar las actividades
programadas, antes de salir del
laboratorio y siempre despus de
manejar materiales que se sabe o
se sospecha que son
contaminantes.
Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando
fsicamente cmodo.
Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela
antideslizante en las reas de laboratorio.
Evitar llevar en el laboratorio, accesorios que podran ser fuente de
contaminacin (por ejemplo joyas).
Recoger el cabello largo.
Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar slo
lo indispensable.
No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o
utensilios, aplicarse cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto
en ningn rea del laboratorio.

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Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de


iniciar las actividades indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna
duda, dirjase al profesor.
Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u
objetos personales, exceptuando aquellos equipos y materiales
necesarios para la realizacin del trabajo prctico.
Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe
dejar ste desatendido.
Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero,
etc.), limpios y de manera ordenada a su respectivo lugar una vez
finalizada la actividad. Reporte cualquier dao de los mismos al profesor.
Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes
dispuestos para tal fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y
placas de Petri en las ollas de desecho, etc.
No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar
las etiquetas de los mismos y estar seguro de cmo emplearlo.
No devolver sustancias a sus envases originales.
Emplear la propipeta al medir lquidos. Est rigurosamente prohibido
pipetear con la boca. De igual manera las pipetas tendrn tapones de
algodn para reducir la contaminacin de estos dispositivos de pipeteo.
Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no
llevar a cabo experimentos no autorizados.
Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de
material contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser
catalogado como menor.

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Reducir al mnimo la formacin de aerosoles durante la realizacin de


cualquier trabajo prctico.
Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para
evitar la inoculacin accidental y la generacin de aerosoles durante su
manipulacin y desecho.

Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de


microorganismos.
El acceso al laboratorio de prcticas slo se permite a los alumnos que
estn realizando las prcticas. No se admiten visitas por razones de
seguridad.
Cualquier estudiante que sufra de alguna deficiencia en sus defensas
ante la infeccin debe comunicarlo previamente al profesor.

A continuacin mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso


de que ocurran los siguientes accidentes:
Derrame de material biolgico sobre el cuerpo:
Remover la ropa inmediatamente.
Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua y jabn por un
minuto.
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica si es necesario.
La ropa contaminada debe ser colocada en una solucin
desinfectante antes de ser lavada.

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Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos:


Lavar inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del
prpado con abundante agua durante 15 minutos aproximadamente.
Abrir el ojo para asegurar efectivamente el lavado, comenzando por
los prpados.
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
Cortadas menores y heridas por pinchazo:
Lavar vigorosamente la herida con agua y jabn por varios minutos.
Aplicar un antisptico adecuado
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
En el caso de derrames:
Reportar el incidente al profesor.
Colocarse guantes y cubrir con papel absorbente el rea del
derrame.
Verter un desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo
necesario.
Retirar el material absorbente junto al material roto y colocarlos en un
recipiente para residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual
debe esterilizarse junto con los guantes utilizados.
Limpiar y desinfectar nuevamente el rea empleando nuevas toallas
de papel y desinfectante.
Lavarse las manos con abundante agua y jabn.

2. Cules son los equipos que se tienen en un laboratorio de


microbiologa y su uso?

Incluye aparatos bsicos; como incubadoras; frigorficos; baos de agua;


autoclaves y centrifugas a instrumentales ms modernos; sistemas de
electroforesis en gel y placas multipocillos(o microtituladores); lectores de
placas; termocicladores para la reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR). A ms pequea escala pueden citarse mecheros bunsen; asas de
platino; termmetros; microscopios y portaobjetos.

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Listado de equipos ms usados en laboratorio:

Microscopio ptico: Un microscopio es un instrumento que nos


permite observar entes demasiado pequeos para ser vistos a simple
vista, los microrganismos, entre otros.

Autoclave: Es el equipo ms utilizado para la esterilizacin mediante


calor hmedo. Es un sistema cerrado donde se forma vapor de agua
que se somete a una presin elevada, una atmsfera, lo que hace
que el agua alcance una temperatura de 121C causando la
desnaturalizacin de enzimas lo que conlleva a la muerte de los
microorganismos y la destruccin de las esporas. Habitualmente, se
esteriliza a 121C durante 20 minutos.
En el laboratorio de Microbiologa es imprescindible trabajar con
material y soluciones estriles con objeto de que los resultados que
se obtengan correspondan al microorganismo o microorganismos que
estn presentes en la muestra en estudio y no a contaminantes que
procedentes del medio o los materiales, puedan desarrollarse y
falsear las pruebas. Para ello antes de comenzar el trabajo prctico se
esterilizar, junto con los medios de cultivo, el material que
posteriormente va a ser utilizado. Se entiende por esterilizacin los
procedimientos por los cuales se eliminan todas las formas vivas de
microorganismos, sean patgenos o no, que se hallen en un material.

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Horno Pasteur: Emplea altas temperaturas (160-180C) durante un


tiempo prolongado (1.5-3 horas). Debido a su poca capacidad de
penetraciones usa para esterilizar vidrio y metales. Acta
principalmente desnaturalizando las protenas y secundariamente
oxidando los compuestos celulares.

Estufa o incubadora: Es una cmara de temperatura controlada para


cultivos de microorganismos. Se utiliza para facilitar el desarrollo de
los microorganismos a su temperatura ptima de crecimiento
(generalmente 35-37).

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Refrigeradora: En microbiologa, los cientficos utilizan refrigeradores


para crear un entorno para replicar clulas y para llevar a cabo
experimentos en algunas de stas para determinar cmo es que las
afectan las bacterias u otros microorganismos. Los tipos de clulas
generalmente dirigidas para refrigeracin son microorganismos
llamados "mesfilos" y "psicotrpicos". Los cientficos normalmente
tienen tres usos para las clulas de refrigeracin los cuales son, el
almacenamiento para su uso posterior, evitar el crecimiento excesivo
de stas y reducir la tasa de actividad celular para evitar que
aparezcan mutaciones y microorganismos bacteriales adicionales.

Centrifuga: Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrfuga
lo que permite la separacin de los distintos componentes de la
muestra mediante la precipitacin en el fondo del tubo de las
partculas en suspensin.

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Bao mara: Es un mtodo empleado en el laboratorio para conferir


temperatura uniforme a una sustancia lquida o slida o para
calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene en
otro mayor con agua que se lleva o est en ebullicin.
El concepto fundamental es el de bao que implica el calentamiento
indirecto, por conveccin trmica del medio (agua del bao) y por
conduccin trmica del medio (agua del bao) y por conduccin
trmica de la sustancia; ese medio (bao) puede ser de aceite
mineral, de agua pura o soluciones salinas de agua de
concentraciones y solutos diferentes, etc., segn la temperatura a que
se requiera llevar la sustancia.

Balanza: Las Balanzas se emplean para


medir el peso o la masa de una
sustancia. si se efecta la comparacin
entre dos objetos, uno conocido y otro
desconocido entonces el elemento
medido es la masa, si la medicin.
Sirve para realizar las pesadas delos
reactivos , muestra o medios de cultivo a usar ,hay de diferentes
tipo, segn su aplicacin y sensibilidad aquellas balanzas de gran
sensibilidad se llaman balanzas de precisin.

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Potencimetros: Equipo de se utiliza para medir el pH de los


reactivos, medio de cultivo etc.

Bomba de vaco: Las aplicaciones de vaco tanto en la industria


como en los laboratorios de investigacin son numerosas y variadas.
Una bomba de vaco es un dispositivo empleado para extraer los
gases y sustancias no deseados en un proceso, producto o sistema.
Las bombas de vaco trabajan solamente en un rango de presiones
limitado, por ello la evacuacin de los sistemas de vaco se realiza en
varias etapas, usndose para cada una de ellas una clase de bomba
diferente.

Cmara de siembra: Equipo que se utiliza para realizar la siembra de


los microorganismos en condiciones de esterilizacin.

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Homogeneizadoras o bortex: Sirve para homogenizar las


diluciones.

Bactocinerador o incinerador elctrico: Sirve para esterilizar las


asas de siembra, se usa dentro de cmara o cabina de siembra.

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3. Diferencia entre limpieza y desinfeccin.

LIMPIEZA:

Conjunto de operaciones que permiten eliminar la suciedad visible en


una superficie. Estas operaciones se realizan mediante productos
detergentes elegidos en funcin del tipo de suciedad y las superficies
donde se asienta. Los elementos bsicos del proceso son el agua, el
jabn o detergente. No se necesitan clorados o lejas.

DESINFECCION:

La desinfeccin es el mtodo por el cual se eliminan y suprimen todos


los microorganismos patgenos que puedan existir en las distintas
superficies. El proceso de desinfeccin comenzar siempre por la
utilizacin de un producto qumico especfico con accin desinfectante y
con un poder germicida, fungicida y bactericida que nos ayude a eliminar
grmenes, hongos y bacterias.

Tiene como objetivo la reduccin temporal del nmero de


microorganismos vivos y la destruccin de los patgenos y alterantes.
Sin embargo, nicamente con la esterilizacin se obtendr un medio
completamente exento de grmenes. Para una mejor desinfeccin
necesitamos un buen desinfectante que es aquel que tiene un amplio

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espectro (posibilidad de eliminar el mayor nmero de agentes


patgenos), que no es txico ni corrosivo, que tenga un olor agradable,
que se pueda usar diluido y que sea en su mayor medida lo ms
biodegradable posible.

4. Qu es asepsia?

Ausencia total de microorganismos y esporas patgenos que causan


enfermedades. Conjunto de procedimientos que impiden la llegada de
microorganismos a un medio.

5. Tipos de esterilizacin.

La esterilizacin es la accin de eliminar toda posible vida de microbios, de


bacterias, de hongos o de virus de alguna herramienta para algn uso
determinado. Es un proceso que se utiliza en la industria de los alimentos,
en los laboratorios qumicos, en la industria farmacutica y en todos los
mbitos de la medicina. Existen diferentes tipos de esterilizacin, aunque a
grandes rasgos hay existen tres definiciones mayoritarias:

Esterilizacin por mtodos fsicos:


Es aquella que se lleva a cabo usando calor o radiaciones que son
capaces de eliminar todo rasgo contaminante de una superficie
cualesquiera. Dentro de los mtodos con calor existen los que se sirven
del calor hmedo, utilizando el vapor de agua como agente esterilizante,

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ya que es capaz de superar una resistencia metlica que tienen los


materiales que se esterilizan, y el mtodo del calor seco, que se lleva
acabo propagando un aire que no tiene el alcance de calor hmedo pero
que esterilizado a temperaturas superiores a ciento veinte grados puede
lograr una eficacia similar. Para tener en cuenta una esterilizacin
adecuada es clave regular tanto el tiempo como la temperatura, ya que
algunos materiales requieren determinada cantidad de tiempo a
determinada temperatura y otros necesitan patrones diferentes.

Por otro lado tambin es posible esterilizar mediante la radiacin, que es


capaz de provocar la muerte de microorganismos de manera absoluta.
La radiacin puede ser ionizante, es decir, generando sustancias
venenosas para el metabolismo bacteriano; ultravioleta, que no es
demasiado penetrante pero ataca directamente a la superficie; o puede
ser gama, que al atravesar cualquier superficie es capaz de esterilizar
incluso productos cerrados de manera hermtica y segura. Este ltimo
mtodo es muy popular en la farmacutica y en la industria de los
alimentos.

Esterilizacin por mtodos qumicos:


Es uno de los sistemas ms efectivos, aunque su modus operandi
provoca que algunos materiales, como por ejemplo los alimentos, no
sean susceptibles de utilizarlo. Funcionando sirvindose de productos
micro-pesticidas que eliminan todo tipo de rastro de microorganismos
por envenenamiento independientemente de la intervencin o no del
calor. Algunos de los biocidas ms utilizados son, por ejemplo, la
lavandina, que est presenta en casi todos los desinfectantes de venta y
que a pesar de sus contraindicaciones sigue siendo uno de los
productos esterilizantes ms aplicados.

Esterilizacin por mtodos mecnicos:


Es la que se lleva a cabo utilizando filtros de mercado que son capaces
de retener los microorganismos. Algunos tambin combinan la filtracin

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con el mtodo de adsorcin, para que la efectividad del proceso sea an


mayor. La esterilizacin mecnica es un sistema a grandes rasgos poco
efectivo. Sin embargo, para esterilizar lquidos puede ser una solucin
viable, dado que un efectivo agente de filtrado posibilitara que las
bacterias contaminantes quedasen atrapadas en l y no prosiguieran el
camino del fluido.

6. Tipos de desinfectantes.

Los desinfectantes son sustancias qumicas o agentes fsicos que inactivan


la proliferacin o destruyen a microorganismos de objetos inanimados; no
son aplicables a los tejidos vivos por su toxicidad. Algunos desinfectantes,
a concentraciones elevadas y durante largo periodo de tiempo, poseen
actividad esporicida. Los desinfectantes pueden clasificarse en 3
categoras segn su potencia.

Desinfectantes de alto nivel

Inactivan todas las formas vegetativas de los microorganismos, pero no


destruyen toda forma de vida microbiana, puesto que no eliminan todas
las endosporas bacterianas. Inactivan algunas esporas bacterianas,
muchas esporas fngicas, todas las bacterias vegetativas, los bacilos
tuberculosos y todo tipo de virus (virus medianos y lipdicos e incluso
virus pequeos y no lipdicos).

La mayora requieren un tiempo de 20 minutos para ejercer una accin


desinfectante de alto nivel. Pueden tambin destruir las esporas
bacterianas si el tiempo de contacto es suficientemente prolongado
(entre 6 y 10 horas, segn el desinfectante), comportndose entonces
como esterilizantes qumicos. As pues, el tiempo de contacto es la nica
variable que difiere entre esterilizacin y desinfeccin de alto nivel
cuando se utiliza alguno de estos desinfectantes.

Se consideran de alto nivel los siguientes desinfectantes:

- Glutaraldehdo 2%
- Glutaraldehdo fenolado (glutaraldehdo 2% + fenol <10%)
- Orto-ftalaldehdo 0,55%
- cido peractico 1% (0,2%-0,35% son las concentraciones ms
utilizadas)
- Aminas terciarias asociadas a compuestos de amonio cuaternario
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- Perxido de hidrgeno 7,5%


- cido peractico 0,08% + Perxido de hidrgeno 1%
- Agua superoxidada

El hipoclorito sdico 1000 ppm (0.1%) es tambin un desinfectante de


alto nivel, aunque corrosivo y no apto para instrumental, objetos o
superficies metlicas.

El tiempo mnimo necesario para eliminar completamente micobacterias


tuberculosas y no tuberculosas con glutaraldehdo al 2% es de 20
minutos (siempre que el proceso sea precedido por una buena limpieza).
Para algunos desinfectantes este tiempo puede ser menor; el orto-
ftalaldehdo al 0.5% puede alcanzar una desinfeccin de alto nivel en 10
minutos. La limpieza inicial del objeto es fundamental para que la
desinfeccin sea eficaz, ya que muchos desinfectantes pierden total o
parcialmente su actividad en presencia de materia orgnica.

Desinfectantes de nivel intermedio

No eliminan necesariamente las esporas bacterianas, pero inactivan


bacterias vegetativas, incluido Mycobacterium tuberculosis
(significativamente ms resistente). Tambin son eficaces contra los
hongos (incluidas las esporas asexuales, aunque no necesariamente las
esporas sexuales) y contra los virus.

Algunos desinfectantes de nivel intermedio pueden tener dificultades


para inactivar completamente algunos virus ms resistentes, como virus
no lipdicos o virus de pequeo tamao (poliovirus, coxsakievirus,
rinovirus).

Pertenecen a este grupo:

- Alcohol etlico 70%


- Alcohol isoproplico 70-90%
- Fenoles
- Asociaciones de aldehdos (glutaraldehdo + formol + glioxal)

El tiempo de contacto mnimo para una desinfeccin de nivel intermedio


con estos desinfectantes es de 10 minutos.

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Desinfectantes de bajo nivel

No son capaces de destruir en un periodo prctico de tiempo


endosporas bacterianas, micobacterias ni todos los hongos y/o virus no
lipdicos o de pequeo tamao.

Se consideran desinfectantes de bajo nivel:


- Hipoclorito sdico a 100 ppm.
- Compuestos de amonio cuaternario.

El tiempo de contacto mnimo para una desinfeccin de bajo nivel con


estos desinfectantes es de 10 minutos. Algunos desinfectantes de nivel
intermedio a una concentracin menor o con un menor tiempo de
contacto pueden comportarse como desinfectantes de bajo nivel.

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IV. CONCLUSIONES

Reconocemos ahora la mayora de los distintos materiales, equipos e


instrumentos del laboratorio de microbiologa, as como su uso
especfico de cada uno de ellos.

Aprendimos la mayora de normas de seguridad en el laboratorio de


microbiologa las cuales debemos seguir al pie de la letra para evitar
algn accidente para nosotros mismos o nuestros compaeros.

Conocemos conceptos bsicos del lenguaje en el laboratorio de


microbiologa que nos permitirn una mejor comunicacin.

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V. RECOMENDACIONES

Cumplir con las normas de seguridad antes de realizar cualquier


ejercicio prctico; que no solo garantiza la seguridad de nosotros sino
que conduzca al uso eficaz de los recursos de laboratorio.

Mantener el orden y la limpieza. Cada persona es responsable de la


zona que tiene asignada y todos lo somos de los lugares comunes.

Verificar, antes de retirarse, que el lugar de trabajo quede limpio.

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VI. BIBLIOGRAFIA

http://ocw.upm.es/tecnologia-de-alimentos/seguridad-
alimentaria/contenidos/Lecciones-y-Test/Lec-3.1..pdf
http://www.iztacala.unam.mx/rrivas/NOTAS/Notas13Microbiologia/aseco
nceptos.html
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part3/33.pdf
http://www.tipos.co/tipos-de-esterilizacion/#ixzz4d2SByqJA
http://www.tipos.co/tipos-de-esterilizacion/#ixzz4d2SByqJA
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part3/33.pdf
https://www.ucm.es/data/cont/docs/53-2013-04-11-
Normas%20de%20seguridad.pdf
http://www.chlaep.org.uy/pdf/normas_de_bioseguridad.pdf

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