FARMACIA Y BIOQUMICA BIOQUMICA I

DEMOSTRACIN DE LA DISTRIBUCIN INTRACELULAR DE LAS ENZIMAS DE XIDO-

REDUCCIN BIOLGICA

I. INTRODUCCIN

Existen sistemas enzimticos capaces de realizar oxidaciones en el organismo, siendo sus sustratos
carbohidratos, cidos grasos, aminocidos y algunas otras sustancias orgnicas.

Los sistemas antes mencionados estn constituidos por protenas, fosfolpidos, grupos prostticos
adems de iones metlicos. De acuerdo a su estructura y funcin las enzimas que intervienen es esos
procesos se encuentran clasificadas en diversos grupos y tienen denominaciones especiales dentro de
la literatura enzimolgica.

Las enzimas de xido-reduccin, tienen una distribucin caracterstica intracelular, encontrndose de

modo fundamental en una subestructura celular en donde la energa derivada de las oxidaciones es
captada en forma de trifosfato de adenosina (ATP).

La finalidad de la presente experiencia es evidenciar la distribucin intracelular de las enzimas de

xido-reduccin usando los indicadores rdox 2,6-diclorofenolindofenol y p-fenilendiamina, adems de
los componentes celulares de un homogenizado de hgado de rata obtenidos por centrifugacin
diferencial.

II. OBJETIVOS

Dispuestas varias fracciones celulares de un homogenizado de hgado de rata en un sistema

buferado, los participantes sern capaces de determinar la distribucin de las enzimas de xido
reduccin:
- Al identificar los cambios de coloracin del indicador rdox 2,6-diclorofenolindofenol
(2,6-DFIF).
- Al identificar los cambios de coloracin del indicador redox p-fenilendiamina (p-FDA).
Luego de lograr el objetivo anterior, los participantes graficarn en una cadena de xido-
reduccin el lugar y accin de los indicadores rdox 2,6-DFIF y p-FDA.

III. MATERIALES Y REACIVOS

- Hgado de rata - Fraccin nuclear

- Buffer fosfato de sodio 0,1M pH 7,4 - Fraccin mitocondrial
- 2,6-diclorofenolindofenol 0,02% - Fraccin microsomal-soluble
- Succinato de sodio 0,1M - Tubos de ensayo 13x100 mm
- p-fenilendiamina 1% - Gradilla porta tubos
- Homogenizado de hgado de rata en - Pipeta de 1 mL
sucrosa al 0,25M - Pipeta de 0,5 mL

IV. DIAGRAMA EXPERIMENTAL

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- Utilizando 2,6-diclorofenolindofenol
- Armar el siguiente sistema:

TUBOS (mL)
COMPONENTES
I II III IV V
Buffer fosfato de sodio 0,1M pH 7,4 1 0,5 0,5 0,5 0,5
2,6-diclorofenolindofenol 0,02% 1 1 1 1 1
Succinato de sodio 0,1M 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Fraccin nuclear - 0,5 - - -
Fraccin mitocondrial - - 0,5 - -
Fraccin microsomal-soluble - - - 0,5 -
Homogenizado total - - - - 0,5

- Mezclar
- Dejar en reposo a temperatura ambiente.
- Observar constantemente los cambios de color del indicador rdox.
- Interpretar los resultados.

- Utilizando la p-fenilendiamina

- Armar el siguiente sistema:

TUBOS (mL)
COMPONENTES
I II III IV V
Buffer fosfato de sodio 0,1M pH 7,4 1,5 1 1 1 1
p-fenilendiamina 1% 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Succinato de sodio 0,1M 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Fraccin nuclear - 0,5 - - -
Fraccin mitocondrial - - 0,5 - -
Fraccin microsomal-soluble - - - 0,5 -
Homogenizado total - - - - 0,5

- Mezclar
- Dejar en reposo a temperatura ambiente.
- Observar constantemente los cambios de color del indicador rdox.
- Interpretar los resultados.

V. RESULTADOS

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VI. DISCUSIN

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VII. CONCLUSIONES

VIII. BIBLIOGRAFA

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ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA

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