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MINISTRIO DA EDUCAO

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-RIDO

GABRIELA COUSANDIER

PESQUISA DE Giardia sp. EM EXAMES COPROPARASITOLGICOS DE


CES NA CIDADE DE BENTO GONALVES - RS
13

PORTO ALEGRE-RS

2012

GABRIELA COUSANDIER
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PESQUISA DE Giardia sp. EM EXAMES COPROPARASITOLGICOS DE


CES NA CIDADE DE BENTO GONALVES - RS

Monografia apresentada a Universidade Federal Rural


do Semi-rido - UFERSA, Departamento de Cincias
Animais para obteno do ttulo de especializao em
Clnica Mdica de Pequenos Animais.

Orientadora: MSc Cristine Dossin Bastos Fischer


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Porto Alegre - RS

2012

GABRIELA COUSANDIER

Monografia apresentada ao Departamento de Cincias


Animais para obteno do ttulo de especialista em
Clnica Mdica de Pequenos Animais.

Orientadora: MSc Cristine Dossin Bastos Fischer.


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APROVADA EM: ........../........../...........

BANCA EXAMINADORA:

.......................................................................
Professor (a) (UFERSA)
Presidente

.......................................................................
Professor (a) (UFERSA)
Primeiro Membro

.......................................................................
Professor (a) (UFERSA)
Segundo Membro
17

AGRADECIMENTOS

A meus pais que sempre me apoiaram em todas as etapas da minha vida.

Aos professores do curso de clnica mdica e cirrgica de pequenos animais da Equalis pelos
conhecimentos compartilhados durante o curso.

A minha Professora Orientadora pela pacincia e pelo auxilio na realizao do trabalho.

A equipe da clnica veterinria Sade Animal por toda a ajuda e pacincia durante a realizao deste
trabalho.

As minhas colegas Lica, Mari, Daiane, Gabi, Aline e Camile pela amizade e companherismo durante
todo o curso.

Ao meu namorado Renan que me ajudou e me apoiou durante todo o curso, e no desenvolvimento
deste trabalho.

Em fim, a todas as pessoas que de alguma forma me auxiliaram e me apoiaram em mais uma etapa
da minha vida.
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A compaixo pelos animais est intimamente ligada a bondade de carter, e


pode ser seguramente afirmado que quem cruel com os animais no pode ser
um homem bom

(Arthur Schopenhauer)
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RESUMO

Giardia lamblia (Giardia duodenalis, Giardia intestinalis, Giardia canis) um protozorio


que comumente acomete ces principalmente filhotes causando sintomas gastrintestinais
como diarria com odor ftido, podendo ser aguda, intermitente ou crnica. Devido ausncia
de estudo sobre a casustica de gardiase na cidade de Bento Gonalves, e a alta frequncia
desta doena na rotina clnica em todo o pas, sendo uma zoonose de importncia mundial,
este trabalho visou estudar a prevalncia de casos positivos em fezes coletadas de ces de
diversas idades, raas e sexo de clnicas veterinrias, criadouros e abrigo de ces. Foram
realizadas duas tcnicas de exames parasitolgicos de fezes para diagnosticar a presena de
cistos do parasita nas fezes: tcnica de flutuao (tcnica de Faust) e tcnica de sedimentao
(mtodo de Hoffmann, Pons e Janer ou Lutz). Das 100 amostras analisadas no perodo de
agosto a novembro de 2011, 16 (16%) amostras foram positivas para cistos de girdia. A
porcentagem de animais parasitados por esse protozorio foi baixa provavelmente por ter sido
analisada apenas uma amostra de fezes de cada animal, e quanto maior o nmero de colheita
de fezes de cada animal (no mnimo trs colheitas) maior a chance de encontrar amostras
positivas. No houve diferena nos resultados entre as duas tcnicas utilizadas.

Palavras Chave: Giardia lamblia, giardase, ces.


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ABSTRACT

Giardia lamblia (Giardia duodenalis, Giardia intestinales, Giardia canis), is a protozoan that usually
attacks dogs, specially puppies causing gastric and enteric symptoms such diahrrea with a stench
smell, which can be acute, intermitent and chronic. Due to the absence of studies about the of
Giardiasis in Bento Gonalves city and the high frequency of this disease all over the contry, being a
world-wide zoonosis, this paper aimed to study the predominance of positive cases in collected
excrements in dogs of several ages, races and sex from vet clinics, breedings and dog shelters. Two
excremental parasitological tests techniques were carried out to diagnose the parasitos cyst
existence in excrements: floating technique (Fausts technique) and sedimentation technique
(Hoffmann, Pons e Janer or Lutz method). A hundred samples dogs excrements were analysed from
August to November 2011. Sixteen percent of the samples were positive for Giardiasis cysts. The
percentage of infested animals by this protozoan was low probably due to only one sample from
each animal was analysed and, the bigger the number of excrements samples from asch animal (at
least three samples), bigger the chance of finding positive samples. There was no difference in results
between the two techniques used.

Key words: Giardia lamblia, giardiasis, dogs.


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LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

Clin.Vet- Clnica Veterinria

ELISA - Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay

EPF - exame parasitolgico de fezes

ex. - exemplo
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HACCP - Hazard Analysis Critical Control Point

HPJ - Lutz ou Hoffman, Pons e Janer

p.ex. - por exemplo

PCR - reaco em cadeia pela polimerase

X - vezes
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LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Trofozota de Giardia lamblia, retirada das pranchas para o diagnstico de parasitas
intestinais da Organizao Mundial da Sade..........................................................................12

Figura 2 - Cisto de Giardia lamblia .........................................................................................13

Figura 3 Ciclo evolutivo da Giardia lamblia.........................................................................14

Figura 4 - Demontrao geral das amostras positivas para cistos de Giardia na cidade de Bento
Gonalves-RS.................................................................................................................27

Figura 5 - Demonstrao de amostras positivas para cistos de Giardia em criatrios


de ces da cidade de Bento Gonalves-RS...............................................................................27

Figura 6 - Demonstrao de amostras coletadas de ces de clientes de


clnicas veterinrias particulares de Bento Gonalves-RS...................................................28
25

Figura 7 - Cistos de Giardia (objetiva 100 X), observado em microscpio ptico pela tcnica de HPJ
.......................................................................................................................................29

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Resultados do EPF (tcnica de Faust e HPJ) da pesquisa de Giardia sp. em ces da cidade de
Bento Gonalves RS............................................................................................. 36
26
27

SUMRIO

1 INTRODUO........................................................................................................... 11

2 REVISO DE LITERATURA...................................................................................12

2.1 ETIOLOGIA................................................................................................................. 12
2.2 CICLO EVOLUTIVO.................................................................................................. 13
2.3 EPIDEMIOLOGIA.......................................................................................................15

2.4 PATOGENIA................................................................................................................16
2.5 SINAIS CLNICOS...................................................................................................... 17
2.6 DIAGNSTICO............................................................................................................ 17
2.7 TRATAMENTO.......................................................................................................... 20
2.8 CONTROLE E PROFILAXIA..................................................................................... 21
2.9 POTENCIAL ZOONTICO........................................................................................ 22
2.10 PROGNSTICO..........................................................................................................23
28

3 MATERIAIS E MTODOS.......................................................................................24
3.1 LOCAL E DATA DE EXECUO.......................................................................... 24

3.2 SELEO DOS ANIMAIS.........................................................................................24

3.3 MTODOS................................................................................................................... 24

3.3.1 Centrfugo flutuao em soluo de sulfato de zinco tcnica de...........................25

Faust e Cols (1938)

3.3.2 Sedimentao espontnea-tcnica de Lutz ou de Hoffman, Pons........................ 26

e Janer (HPJ)

4 RESULTADOS E DISCUSSO................................................................................27

5 CONCLUSES...........................................................................................................32

REFERNCIAS ...............................................................................................................33

ANEXOS........................................................................................................................... 36
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1 INTRODUO

A giardase uma zoonose que ocorre com frequncia em nosso meio. Esta doena
causa uma diarria intermitente, de colorao clara, com odor ftido, de consistncia pastosa a
aquosa, possui recidivas, e muito comum em filhotes (ALMEIDA et al., 2007;
JARVINEN, 2008).

uma doena causada pelo protozorio Giardia duodenalis (Giardia intestinalis ou


Giardia lamblia), que acomete animais domsticos, silvestres e o homem. Sua transmisso
acontece pelos cistos do protozorio que podem ser ingeridos pela gua e alimentos
contaminados. A transmisso direta tambm possvel, principalmente onde h animais
aglomerados, como por exemplo, em criatrios de ces (BECK et al., 2004).

A giardase uma doena muito comum na rotina da clnica veterinria e uma causa
comum de diarria em ces, principalmente em animais aglomerados (canis e pet shops).

Este trabalho teve como objetivo relatar a prevalncia de casos positivos de Giardia
em Bento Gonalves RS, sendo este o primeiro trabalho sobre a prevalncia deste parasita
em ces na cidade.
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2 REVISO DE LITERARURA

2.1 ETIOLOGIA

Conforme Silva et al. (2008), Giardia lamblia um protozorio entrico pertencente


ordem Diplomonadida que tem motilidade ativa, multiplica-se no intestino e possui um cisto
resistente, presente no meio ambiente. Segundo Taylor et al. (2010), o trofozota tem corpo
piriforme a elipside, simtrico bilateralmente e com 12-15 x 5-9 m. O lado dorsal
convexo e h um grande disco de fixao, como ventosa, no lado ventral. Existem dois
ncleos anteriores, dois axstilos delgados, oito flagelos em quatro pares e um par de
corpsculos medianos que se coram em escuro e so barras curvas que lembram as garras de
um martelo. A Figura 1 demonstra um trofozota de Giardia lamblia em colorao tricrmica.

Figura 1: Trofozota de G. lamblia, retirada


das pranchas para o diagnstico de parasitas
intestinais da Organizao Mundial da Sade.

De acordo com Fortes (2004), os cistos (Figura 2) so ovalados com 9 a 13 de


comprimento por 7 a 9 de largura; contem dois a quatro ncleos e fibrilas remanescentes
das organelas do trofozota. Conforme o autor, a transmisso ocorre pela ingesto de cistos de
Giardia contidos em alimentos e gua.
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Figura 2: Cisto de Giardia lamblia (FORTES, 2004)

Segundo Taylor et al. (2010), ainda h controvrsia sobre a classificao das espcies
de Giardia. A classificao molecular atual enquadra os isolados em oito grupos distintos.
Alguns autores do nomes especficos separados a organismos isolados de diferente
hospedeiros, embora a especificidade por espcies de muitos isolados seja desconhecida.
Dados filogenticos sugerem que G. intestinalis uma espcie complexa composta de vrias
espcies especficas do hospedeiro.

2.2 CICLO EVOLUTIVO

A transmisso do protozorio feita atravs da ingesto de alimento ou de gua contendo


cistos. Vetores no so importantes na transmisso da infeco. O excistamento ocorre nas
criptas do duodeno, sendo que cada cisto origina dois trofozotos por um processo complicado
de cissiparidade simples longitudonal (FORTES, 2004). Segundo Voss; Santos (2003), o
estgio de cisto a forma mais comumente excretada nas fezes e cada um desses novos cistos
poder romper-se no prprio hospedeiro liberando novos trofozotos, ou, ento, ser eliminado
pelas fezes, aps um perodo de pr-patncia de uma a duas semanas. Uma vez no ambiente,
os cistos podem ser novamente ingeridos pelo hospedeiro completando o ciclo.

Conforme Almeida et al. (2007), o ciclo dos protozorios do gnero Giardia direto.
Trofozotas so encontrados no intestino delgado dos animais infectados, onde permanecem
aderidos mucosa. Cistos (formas infectantes) so eliminados juntamente com as fezes e
podem permanecer viveis por vrios meses em ambientes midos. A transmisso fecal-oral
e a infeco de um hospedeiro em potencial pode ocorrer pela ingesto de gua, alimentos ou
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fezes contendo cistos. Mas, de acordo com Silva et al. (2008), a transmisso direta tambm
possvel, especialmente em reas de canis e gatis nas quais animais se encontram
aglomerados.

Voss; Santos (2002) citam que os trofozotos so mveis e podem ser observados na
diarria, mas no so comuns nas fezes. O trofozoto pouco resistente no meio ambiente,
mas responsvel pela enfermidade no hospedeiro.

A variao de temperatura interfere no ciclo biolgico dos protozorios ( Figura 3), sendo
que estes parasitas tm uma maior incidncia em estaes do ano com temperaturas frias.
Variaes sazonais so um dos fatores mais comuns para a prevalncia de parasitas em ces
(SILVA et al., 2008).

Figura 3: Ciclo da Giardia lamblia, retirada do site


http://www.petsuper.com.br/giardiase.htm.

A Figura 3 demonstra o ciclo evolutivo da Giardia lamblia que direto. O hospedeiro


ingere os cistos (ambiente, alimento ou gua). No intestino delgado os cistos originam novos
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trofozotos. Os cistos so eliminados nas fezes, e uma vez no ambiente so ingeridos pelo
hospedeiro, completando o ciclo.

2.3 EPIDEMIOLOGIA

A prevalncia de Giardia apresenta ndices variveis, dependendo da localizao


geogrfica, do mtodo utilizado para o diagnstico e da populao estudada (CAVALINI;
ZAPPA, 2011). Segundo Castro (2001), as fezes dos animais contaminados podem conter
cistos, que so infecciosos para o homem. Os cistos de Giardia podem sobreviver na gua por
cerca de dois meses. A concentrao de cloro habitualmente para purificar a gua no , por si
s, suficiente para os destruirem. Apenas a filtrao ou fervura eliminam os cistos da gua no
tratada.

Taylor et al. (2010), citam que estudos epidemiolgicos limitados, sugerem que, em
isolados de animais, contato direto entre animais e a presena de fezes no solo so os mtodos
mais provveis de transmisso, embora contaminao da gua possa ser considerada uma
fonte possvel. Mas, Brinker et al. (2009) dizem que a ingesto de gua contaminada com
cistos a maior causa de giardase nos animais e no homem, o que a caracteriza como uma
doena de veiculao hdrica.

Conforme Cavalini; Zappa (2011), no existe migrao extra-intestinal e nem ocorre


infeces transplacentrias e transmamrias. Uma vez ingeridos, os cistos de Giardia podem
ser eliminados nas fezes em cinco a 16 dias mais tarde, podendo permanecer subsistentes na
gua de rios ou de lagos por at 84 dias.

A Giardia possui distribuio geogrfica mundial (TAYLOR et al., 2010). Um estudo


realizado por Mundim et al. (2003), em Uberlndia, Minas Gerais relatou que ces
procedentes de canis da cidade apresentavam elevada frequncia de cistos de Giardia nas
fezes (64,4%) principalmente nos animais com at 12 meses de idade, no havendo diferenas
de ocorrncia entre raas e sexos. Porm, em um estudo realizado em Caxias do Sul-RS por
Brinker et al. (2009), das 100 amostras de fezes analisadas de ces e gatos apenas sete (7%)
foram positivas para a presena de cistos ou trofozotos de Giardia.
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Beck et al. (2005) observaram uma frequncia de 34,04% de amostras de fezes positivas
para cistos de Giardia em ces no municpio de Canoas-RS. Em Porto Alegre-RS, um estudo
realizado por Bartmann; Arajo (2004) relataram uma frequncia de 37,64% de amostras de
fezes de animais positivas para cistos de Giardia. J em Santa Maria RS, Silva et al. (2008)
observaram uma frequncia de 40,3% de amostras fecais de ces positivas para Giardia.

De acordo com Castro (2001), a prevalncia de Giardia em vrias partes do mundo varia
de 0,5 a 50%. Segundo Voss e Santos (2002), a G. duodenalis o parasito intestinal mais
comum em humanos nos pases subdesenvolvidos. Na sia, frica e Amrica Latina, cerca
de 200 milhes de pessoas so sintomticas para giardase com 500.000 novos casos por ano.
No Brasil, na cidade de Pradpolis (So Paulo), foram pesquisados os aspectos
epidemiolgicos da G. lamblia em crianas de 60 famlias, relacionando-os presena de ces
domiciliados. Detectou-se o parasitismo pela Giardia em 40% das famlias e em 20,5% das
crianas examinadas. A prevalncia em ces domiciliados foi de 11,6%. A frequncia de
infeces foi maior nas famlias com at trs filhos.

2.4 PATOGENIA

O mecanismo de m absoro e a diarria provocada pela infeco por Giardia no esto


bem esclarecidos. Os trofozotos que permanecem na mucosa intestinal, fisicamente impedem
a absoro de gorduras que ocorrem neste local. H evidncia que a irritao devido
atividade dos discos suctoriais. possvel que o funcionamento das enzimas do intestino
delgado possa ser alterado pela presena dos trofozotos, por mecanismo direto ou por
mudana de pH. reas de baixo pH favorecem o crescimento de Giardia (FORTES, 2004).

Segundo Taylor et al. (2010), embora os cistos de Giardia sejam comumente excretados
nas fezes de ces e gatos, no h uma relao consistente com diarria ou outros sinais de
problemas gastrointestinais. Porm, Voss; Santos (2002) relatam que a diarria ocorre em
consequncia da fixao do trofozoto na bordadura em escova dos vilos da mucosa intestinal.
Neste caso, verifica-se uma leso das estruturas dos vilos e microvilos, reduzindo a rea de
absoro em at 50%, interferncia na digesto e diminuio da absoro dos nutrientes,
incluindo os dissacardeos, gorduras e as vitaminas. Por esse motivo, a diarria observada na
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giardase ter as mesmas caractersticas de uma diarria por m absoro: fezes amolecidas e
plidas (esteatorrias) com odor forte.

Segundo Fortes (2004), a necropsia revela as mucosas estomacal e intestinal intumescidas


e com pontos hemorrgicos.

2.5 SINAIS CLNICOS

A infeco por Giardia lamblia pode causar doena clnica moderada a severa, ou
permanecer assintomtica. A influncia de fatores como a cepa do parasita, a durao da
infeco, a dieta ou a imunidade podem ser importantes para explicar a diversidade de
sintomas associados infeco (BECK et al., 2004).

Os sinais variam de diarria discreta a grave, que pode ser persistente, intermitente ou
autolimitante (WILLARD, 2006). Segundo Taylor et al. (2010), quando ocorre doena, os
sinais em geral incluem diarria pastosa crnica, perda de peso, letargia e desenvolvimento
insuficiente. De acordo com Jarvinen (2008), a diarria mole espumosa, em geral com odor
de rano e a persistncia pode acarretar debilitao crnica.

Mundim et al. (2003) citam que h maior sensibilidade de animais menores de um ano de
idade do que adultos, sugerindo o desenvolvimento de certo grau de resistncia com o
aumento da idade. Os animais de rua ou aqueles densamente abrigados (canis e lojas) esto
mais expostos, devido maior contato com gua, alimentos e fezes de animais ou de pessoas
contaminadas.

2.6 DIAGNSTICO

Fortes (2004) relata que o diagnstico clnico pelos sinais, e o laboratorial realizado
pela identificao de trofozotos ou cistos nas fezes. Segundo Brito; Bastos (2006), o exame
de fezes constitui a forma clssica de diagnstico laboratorial de giardase e em fezes
liquefeitas os mtodos de diagnstico mais utilizados so o mtodo direto, que permite a
observao do movimento da forma trofozotica, e a hematoxilina frrica, que evidencia as
estruturas citoplasmticas e nucleares de ambas as formas de G. lamblia, enquanto que em
material de consistncia slida o mtodo de concentrao de Faust e colaboradores o mais
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indicado. Porm, Bica et al. (2011) citam que o exame de sedimentao espontnea em gua
ou Lutz (1919), Hoffman, Pons e Janer (HPJ) (1934) tambm pode ser utilizado no
diagnstico de giardase.

O mtodo de Lutz/Hoffman, Pons e Janer, descrito por Lutz (1919) e aperfeioado por
Hoffman, Pons e Janer (1934), tambm conhecido como mtodo de sedimentao espontnea,
ou HPJ, comumente aplicado na rotina laboratorial ou inquritos coproparasitolgicos, visto
que possui complexidade e custo baixos na execuo. Este mtodo amplamente utilizado no
diagnstico das enteroparasitoses mais comuns como: ascaridase, ancilostomase, oxiurase,
tricocefalase, giardase, amebase entre outras (TIBIRI et al., 2009).

A tcnica de centrfugo flutuao com sulfato de zinco (Tcnica de Faust) a tcnica de


escolha na deteco de estruturas leves, podendo tambm ser usada na deteco de ovos
pesados, o que sugere ser uma tcnica com boa sensibilidade diagnstica (DANTAS, 2007).
Silva et al. (2007) relataram que o mtodo de centrfugo-flutuao a maneira mais segura e
eficaz de diagnosticar helmintos e protozorios em pequenos animais em relao tcnica de
HPJ.

As desvantagens da tcnica de Faust incluem a demora na execuo e o maior custo,


entretanto, tal fato pode ser compensado pela sua maior sensibilidade. Em estudos
epidemiolgicos de G. lamblia o emprego da tcnica deve ser recomendado como tcnica
complementar tcnica de HPJ, uma vez que apresenta maior sensibilidade para protozorios
e ovos de helmintos de baixa densidade (ex. larvas de Strongyloides stercolaris, muitas vezes
no so detectadas pela tcnica de Faust) (BICA et al., 2011).

Segundo Bartmann; Arajo (2004), em geral, a tcnica de Faust a melhor tcnica para
identificao, e a que apresenta maior positividade para cistos de Giardia spp. permitindo ser
utilizada na rotina laboratorial. A repetio de amostras importante, uma vez que, uma das
limitaes da tcnica de flutuao em sulfato de zinco a sensibilidade que varia de 50% a
70% para o exame de apenas uma amostra. Essa sensibilidade aumenta para 95% se caso duas
ou trs amostras de fezes forem analisadas, com coletas em dias alternados. Conforme Willard
(2006), pelo menos trs exames coproparasitolgicos devem ser realizados durante o curso de
sete a dez dias, antes de descartar o diagnstico de giardase. De acordo com os primeiros
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autores citados, na rotina da clnica veterinria, alguns fatores como disponibilidade de tempo
do proprietrio e at o custo, podem inviabilizar a realizao de duas ou trs amostras como
indicado. Porm, o mtodo de Faust deve ser mantido entre as tcnicas utilizadas na rotina
laboratorial para o diagnstico especfico de Giardia spp. mesmo com a utilizao de apenas
uma amostra fecal.

Quanto maior o numero de amostras de colheitas efetuadas, maior a chance de se obter


amostras positivas, pois os cistos so excretados de forma intermitente, evitando assim os
falsos negativos. Alm disso, existem animais considerados baixo excretores, estes podem
passar por um perodo de at 21 dias sem eliminar cistos. Em funo desta variao, alguns
autores recomendam o protocolo com trs colheitas de fezes com intervalo de sete dias entre
elas (BRINKER et al., 2009).

O diagnstico pode ser realizado pelo achado de protenas de Giardia nas fezes,
utilizando-se ELISA (WILLARD, 2006). Segundo Brito; Bastos (2006), a deteco de
antgenos do organismo por ELISA, fornece um mtodo alternativo para o estabelecimento de
um diagnstico com alta sensibilidade e especificidade. Utilizando este mtodo numerosas
amostras podem ser testadas rapidamente e objetivamente, e o procedimento menos
trabalhoso quando comparado aos mtodos de microscopia. Porm os autores citam que para
a prtica diria, recomenda-se o mtodo microscpico, que tem custo muito menor e pode
detectar outros parasitas na mesma amostra.

Brinker et al. (2009) citam que tcnicas de diagnstico como a imunofluorescncia e a


PCR tem sido estudadas, mas no esto disponveis para diagnstico de rotina.

Por causa da ocasional dificuldade em encontrar os organismos Giardia (especialmente


nos animais que foram tratados por diversas vezes com medicamentos antidiarricos
sintomticos), a resposta ao tratamento serve como base para o diagnstico retrospectivo
(WILLARD, 2006). Porm, o autor relata que nenhum dos medicamentos utilizados no
tratamento da giardase eficaz em 100% dos casos, o que significa que a falha na resposta ao
tratamento com a droga no exclui o diagnstico de giardase.
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2.7 TRATAMENTO

Vrios anti-helmnticos benzimidazlicos (p.ex., albendazol, fenbendazol) e frmacos


base de nitroimidazol (metronidazol, tinidazol) so efetivos e podem mostrar-se benficos no
tratamento de infeces por Giardia em animais (TAYLOR et al., 2010). Willard et al.
(2006) citam que a furazolidona (cinco dias de tratamento) provavelmente to eficaz quanto
o metronidazol.

Segundo Jarvinen (2008), o albendazol na dose de 25 mg/Kg por via oral a cada 12 horas
por dois dias, tem 90% de eficcia, sendo 50 vezes mais eficaz que o metronidazol; podendo
ser necessrio um segundo esquema de cinco dias. O Fenbendazol, 50 mg/Kg por via oral a
cada 24 horas por trs dias eficaz podendo tambm ser necessrio um segundo esquema de
cinco dias. De acordo com o autor, pode-se utilizar o metronidazol na dose de 25 mg/kg por
via oral a cada 12 horas por cinco dias em ces, sendo que o metronidazol s tem 67 % de
eficcia em ces, possui sabor amargo e pode causar anorexia e vmitos. Tambm pode ser
utilizado o cloridrato de quinacrina, 6,6 mg/Kg a cada 12 horas, por cinco dias. Este ltimo
medicamento pode causar letargia e febre e no deve-se usar em cadelas e gatas prenhes. O
albendazol pode causar mielossupresso, anorexia, depresso, ataxia, vmitos ou diarria,
sendo ele um medicamento teratognico e que pode causar aborto.

Voss; Santos (2002) relatam que a combinao de pamoato de pirantel (14,4 mg/Kg de
peso corporal), praziquantel (5 mg/kg de peso corporal) e febantel ( 15 mg/Kg de peso
corporal) altamente eficaz contra cistos de Giardia, quando administrado por, pelo menos 3
dias consecutivos, segundo a dosagem recomendada para ces.

De acordo com Sequeira et al. (2008), a administrao prvia de probiticos se revelou


capaz de reduzir a taxa de infeco de animais e a excreo de antgenos de Giardia nas fezes,
sendo que h uma evidncia cientfica de que os probiticos podem constituir uma alternativa
na preveno dessa parasitose. Os autores relatam que o uso do probitico Saccharomyces
boulardii associado ao metronidazol mais eficaz que o uso do metronidazol isolado no
tratamento da giardase.

Atualmente, estudos moleculares tm permitido observar a grande variabilidade gentica


do gnero Giardia. Esta variao pode explicar as diferentes respostas aos tratamentos
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convencionais, bem como suas diferenas de virulncia e de especificidade para hospedeiros


(BRINKER et al., 2009).

Como a infeco transmitida pela via fecal-oral, so essenciais boa higiene e preveno
de contaminao fecal de alimentos e gua (TAYLOR et al., 2010). Segundo Willard (2006),
fcil a reinfeco porque os cistos de Giardia so resistentes s influncias do meio
ambiente e necessrio um nmero relativamente pequeno para a reinfeco humana ou
canina. Os compostos de amnia quartenria e o alcatro de pinho so desinfetantes eficazes
para o ambiente.

2.8 CONTROLE E PROFILAXIA

A profilaxia de giardase deve ser baseada nas seguintes medidas: no tratamento dos ces
parasitados e na desinfeco das fezes dos ces positivos, para prevenir a disseminao dos
cistos de Giardia e no permitir que as fezes de ces positivos fiquem expostas, pois
constituem um timo meio de disseminao de cistos (FORTES, 2004). Segundo Cavalini;
Zappa (2011), deve-se lavar o local onde o animal defecou com gua e desinfetante, e evitar
que o local fique mido, pois o cisto da Giardia sobrevive bem em lugares assim.

De acordo com Bica et al. (2011), a giardase uma enteroparasitose de difcil erradicao
dadas as suas mltiplas fontes de transmisso, elevada infectividade e resistncia da forma
cstica. Por isso, Cavalini; Zappa (2011) recomendam sempre repetir o exame de fezes a cada
15 dias nos animais positivos, para ter certeza que o tratamento foi eficaz.

Existe vacina (GiardiaVax) contra Giardia, para preveno de surtos clnicos e


consequentemente, para a reduo da excreo de cistos em ces. Essa vacina desenvolvida
com antgenos de trofozotas, induzindo a imunidade protetora (VOSS; SANTOS, 2002).

GiardiaVax a primeira e nica vacina que auxilia na preveno da doena e na


diminuio da eliminao de cistos de Giardia em ces. Alm disso, a vacina apresenta
algumas vantagens em relao aos tratamentos usuais: melhor custo benefcio para os
proprietrios; animais vacinados permanecem protegidos durante um ano; a contaminao
ambiental reduzida drasticamente e o potencial de transmisso para outros animais e seres
humanos tambm diminui (FORT DODGE, 2012)
40

Stein et al. (2003) testaram a eficcia da vacina em gatos previamente infectados. Como
resultado, cinco gatos de oito infectados e sete de oito animais controle, apresentaram a
infeco por G. duodenalis na 28 semana. Portanto, os pesquisadores concluram que a
vacina no eliminou efetivamente o parasita.

A prtica higinica de coleta de fezes em reas pblicas concorre positivamente na


reduo da contaminao ambiental. A maioria dos proprietrios de ces tem informaes
sobre verminoses. Campanhas informativas e a realizao peridica de exames
parasitolgicos, com determinao de espcies e cargas parasitrias mais prevalentes, so
necessrias para o controle dessas enfermidades (PINTO et al., 2007).

2.9 POTENCIAL ZOONTICO

O potencial zoontico desse protozorio ainda no est totalmente elucidado. Na


realidade, persistem dvidas sobre os reservatrios animais de Giardia spp. pela dificuldade
de distino de organismos espcie especficos (DIAS et al., 2008). De acordo com Beck et al.
(2005), humanos podem ser o principal reservatrio para G. lamblia e a transmisso direta de
pessoa para pessoa mais importante que a transmisso zoontica. No entanto, ces e gatos
podem carrear espcies de Giardia as quais so potencialmente infectivas para seres humanos,
e cujo potencial zoontico deve ser considerado, especialmente para pessoas
imunocomprometidas. Segundo Carvalho (2009), a questo que a contaminao direta por
defecao na gua, mas a maioria dos animais silvestres evita defecar na gua e outros
mamferos no tem acesso aos sistemas de distribuio de gua. A contaminao indireta
ocorre por distribuio do gado, do esterco (adubo) e as chuvas fortes.

Um fato que merece ateno o risco biolgico representado por Giardia em alimentos
congelados, pois atualmente apenas as bactrias so consideradas como potenciais riscos de
contaminao. A Tailndia um dos maiores exportadores de frutos do mar para as regies do
mundo, por isso estava sendo considerada a incluso de Giardia na lista da HACCP (Hazard
Analysis Critical Control Point) para as indstrias de alimentos congelados. Em Palermo,
Itlia, apesar de um estudo de 40 amostras de saladas para consumo ter detectado em apenas
uma amostra cistos de Giardia, tambm estava sendo sugerido que esse parasito fosse
includo na HACCP de indstrias ou setores que usam produtos vegetais frescos pronto para
consumo (CARVALHO, 2009).
41

A incidncia de zoonoses maior em pases em desenvolvimento, pois, aspectos


econmicos e sociais so praticamente determinantes para sua manuteno e disseminao. O
meio ambiente e a falta de saneamento bsico contribuem para ocorrncia, sendo o controle
destas zoonoses dificultado pela fcil disseminao dos agentes etiolgicos (SILVA et al.,
2007). Porm Voss; Santos (2002) afirmam que a girdia o parasito mais comum nos seres
humanos na Amrica do Norte, especialmente prevalente em bebs e crianas que esto em
creches, e que o crescente nmero de animais de companhia, principalmente nos grandes
centros, tem estreitado o contato entre esses e o homem, aumentando a exposio humana a
agentes de zoonoses.

2.10 PROGNSTICO

As varias cepas de Giardia possuem grau variado de patogenicidade. Os sinais clnicos


podem ser autolimitantes em alguns pacientes e a doena grave ocorre em filhotes e em
animais com doenas concomitantes ou debilitados. O papel da imunidade no curso da
infeco requer maiores esclarecimentos, e o que se observa uma maior sensibilidade de
animais jovens por apresentar, possivelmente, sistema imunolgico no totalmente
amadurecido (MUNDIM et al, 2003).

De acordo com Lujn (2006), o mecanismo pelo qual os trofozotos mudam a sua
superfcie de cobertura no conhecida, mas acredita-se que a variao antignica permite a
Giardia evadir a resposta imune do hospedeiro e, assim, produzir infeces crnicas e
recorrentes.

O prognstico quanto recuperao em geral bom, embora em alguns casos seja difcil
erradicar os microorganismos (WILLARD, 2006). Segundo Cavalini e Zappa (2011),
ocasionalmente difcil debelar as infeces, havendo necessidade de terapia prolongada,
porm mesmo assim o prognstico excelente.
42

3. MATERIAL E MTODOS

3.1 LOCAL E DATA DE EXECUO

A pesquisa foi realizada no perodo de setembro dezembro de 2011 com ces de trs
clnicas particulares, dois criadouros e um abrigo de ces da cidade de Bento Gonalves-RS.

Os exames parasitolgicos de fezes foram realizados no Laboratrio de Anlises


Clnicas Veterinrias Sade Animal, em Bento Gonalves-RS.

3.2 SELEO DOS ANIMAIS

Neste trabalho foram analisadas 33 amostras de fezes de dois criatrios, quatro


amostras de ces de um abrigo e 63 amostras de trs clnicas particulares de ces de diversas
raas, sexo e idade.

Foram coletadas fezes de ces atendidos nos consultrios, banho e tosa e hospedagens
das clnicas veterinrias, independente se os animais apresentavam sintomas gastrointestinais
ou no.

Nos criatrios foram coletadas as amostras aleatoriamente, sendo as fezes diarricas


ou no.

A pessoa responsvel pelo abrigo coletou as fezes dos animais, porm pelo difcil
acesso aos ces isoladamente (gatos e ces dividiam o mesmo espao) foram coletadas apenas
quatro amostras sendo estas no diarricas.

3.3 MTODOS

As fezes recm eliminadas foram coletadas diretamente do cho com auxilio de luvas
para procedimento e armazenadas sob refrigerao (2-8C) em potes de plstico limpos e
devidamente identificados. Foram realizados dois mtodos de exame parasitolgico de fezes:
Tcnica de Faust (tcnica de flutuao) e HPJ (tcnica de sedimentao).
43

3.3.1 Centrfugo-flutuao em soluo de sulfato de zinco-tcnica de Faust e Cols (1938)

Fundamento: centrfugo-flutuao em sulfato de zinco (pesquisa de cistos de protozorios e


ovos leves de helmintos). uma tcnica qualitativa de flutuao indicada para pesquisa e
identificao de Giardia sp. Nas fezes se utiliza como soluo hipersaturada,o sulfato de
zinco a 33%.

Material: balana simples para pesar fezes, soluo hipersaturada de sulfato de zinco (33%),
tamis de 80 malhas por polegada, copos plsticos, esptula de madeira, pipeta de Pasteur,
tubos de ensaio, lmina e lamnula, soluo de lugol, centrfuga e microscpio tico.

Tcnica:

- Pesar um grama de fezes.

-Colocar num copo plstico com 10 ml de gua destilada e homogeinizar.

-Tamisar para outro copo plstico e preencher os tubos de ensaio.

-Centrifugar a 2500 rpm durante 1 minuto.

- Desprezar o sobrenadante retendo o sedimento. Completar o volume do tubo de ensaio com


gua destilada, homogeneizar e repetir o processo de centrifugao.

- Repetir o processo duas ou trs vezes, at que o lquido sobrenadante fique claro.

- Aps a ltima centrifugao, desprezar o sobrenadante, completar o volume com soluo de


sulfato de zinco a 33%, homogeinizar e centrifugar a 2500 rpm durante 1 minuto.

- Deixar repousar na centrfuga por cinco minutos.

- Retirar com o auxilio de uma pipeta algumas gotas da pelcula superficial e colocar numa
lmina de vidro. Adicionar uma gota de soluo de lugol e cobrir com lamnula.
- Examinar em microscpio tico em aumento de 400 X.
44

3.3.2 Sedimentao espontnea-tcnica de Lutz ou de Hoffman, Pons e Janer ( HPJ)

Fundamento: Sedimentao espontnea em gua (ovos leves e pesados de helmintos e cistos


de protozorios).

Material: Copo de plstico, gaze, esptula de madeira, canudo de plstico, clice para
sedimentao e gua destilada, soluo de lugol, lmina, lamnula e microscpio tico.

Tcnica:
- Misturar 10 gramas de fezes com gua destilada num copo plstico

- Filtrar contedo com auxlio de gaze em um clice de sedimentao.

- Aguardar 2 a 24 horas.

- coletar material no fundo do clice de sedimentao com auxlio de um canudo de plstico.

- colocar 3 gotas em uma lmina de vidro separadamente, adicionar 3 gotas de lugol, e cobrir
as 3 gotas com lamnulas.

-Examinar em microscpio tico em aumento de 400 X.


45

4. RESULTADOS E DISCUSSO

Das 100 amostras analisadas, 16 (16%) foram positivas para a presena de cistos de
Giardia (Figura 4). Das 33 amostras analisadas de criatrios de ces de diversas raas (shih
tzu, pug, pequins, spitz alemo, pinscher e chiwawa) trs foram positivas (9%), como
demonstra a Figura 5. Das 63 amostras analisadas de ces de clientes de trs clnicas
veterinrias, 13 foram positivas (21%), como mostra a Figura 6. As amostras analisadas das
clinicas foram coletadas de ces de diversas raas, entre elas: pequins, pinscher, galgo
italiano, poodle, shih tzu, lhasa apso, boxer, beagle, cocker, schnauzer e ces de raas
indefinidas.

Figura 4: Demontrao geral das amostras positivas para cistos de Giardia na


cidade de Bento Gonalves-RS.

Figura 5: Demonstrao de amostras positivas para cistos de Giardia em criatrios


de ces da cidade de Bento Gonalves-RS
46

Figura 6: Demonstrao de amostras coletadas de ces de clientes


de clnicas veterinrias particulares de Bento Gonalves-RS.

De acordo com Voss; Santos (2002), o diagnstico que confirma a giardase de


maneira mais segura, pelo achado de cistos nos exames de fezes a tcnica de flutuao,
sendo o sulfato de zinco o melhor meio para demonstrar os cistos (Figura 7), principalmente
quando se realiza centrifugao do material em flutuao. Bica et al. (2011) compararam as
duas tcnicas e observaram que a tcnica de Faust foi mais sensvel para a observao de
cistos de Giardia, podendo ser uma tcnica complementar ao HPJ no diagnstico deste
parasita. Porm, neste trabalho, todas as amostras que foram positivas pela tcnica de Faust
foram tambm positivas pela tcnica de sedimentao (HPJ), concluindo que as duas tcnicas
foram sensveis para a deteco de cistos de Giardia nas fezes. H escassos relatos
comparando as duas tcnicas para o diagnstico de giardase, tanto na literatura humana como
na veterinria.
47

Figura 7: Cisto de Giardia (objetiva 100 X), observado em


microscpio ptico pela tcnica de HPJ.

Cisto de
Oocisto de Giardia
Isospora

Nesta pesquisa, o percentual de ces parasitados por esse protozorio foi de 16%,
considerando que foi analisada apenas uma amostra fecal de cada animal, e conforme Taylor
et al. (2010) recomendvel examinar trs amostras consecutivas, pois os cistos so
excretados de forma intermitente. E, segundo Mundim et al. (2003), quanto maior o nmero
de colheitas de fezes para anlise, maior a chance de se obter amostras positivas. Podendo
assim, ser explicada a baixa frequncia de casos positivos de Giardia neste trabalho,
comparando com estudos realizados em outras cidades do mesmo estado, como Porto Alegre,
Canoas e Santa Maria que apresentaram frequncias de 37,04%, 34,04% e 40,3%
respectivamente. No entanto, comparando com o estudo realizado por Brinker et al. (2009)
sobre a prevalncia de Giardia em Caxias do sul (7%) a frequncia de Giardia em Bento
Gonalves (16%) se mostrou superior.

A maior prevalncia de casos positivos foi de amostras coletadas de ces de clientes de


clnicas veterinrias particulares que frequentavam os hotis para animais e estavam
apresentando sintomas gastrointestinais. Concordando com Almeida et al. (2007), que relatam
que a aglomerao de animais num mesmo ambiente favorece a disseminao de parasitos,
principalmente os que apresentam formas parasitrias (de resistncia) eliminadas junto s
fezes e, portanto, de difcil controle ambiental.
48

Dos 16 animais positivos nove eram jovens (cinco amostras positivas eram de animais
com dois meses de idade, duas amostras positivas eram de animais com um ano de idade, uma
amostra era de um animal com seis meses de idade e uma amostra positiva era de um animal
com 30 dias de idade), concordando com a literatura que diz que h maior sensibilidade de
animais menores de um ano do que adultos. De acordo com Brinker et al. (2009), em animais
adultos, a infeco costuma ser assintomtica, e raramente detectada, sendo estes animais os
provveis disseminadores no ambiente. Neste trabalho, dois ces adultos positivos eram
assintomticos.

Das 100 amostras colhidas 26 (26%) eram diarricas, entre as 25 amostras diarricas,
54% (14/26) eram positivas para cistos de Giardia e 46% (12/26) eram negativas para os
cistos. E dentre as amostras positivas, 87,5% (14/16) eram pastosas com colorao amarelada
e odor ftido.

Considerando que foram 16 amostras positivas, 54% (54/100) das amostras eram de
fmeas e 46% (46/100) das amostras eram de machos. Dentre as amostras positivas 69%
(11/16) eram fmeas e 31% (5/16) eram machos. O nmero de amostras coletadas neste
trabalho, com relao ao sexo, insuficiente para afirmar que houve maior prevalncia em
fmeas. Segundo Beck et al. (2004), no ocorre diferena na infeco entre machos e fmeas
para o protozorio.

Segundo a empresa fabricante da vacina GiardiaVax, um estudo comprovou que a


vacina ofereceu aos ces 100% de proteo contra a doena clnica, alm da significativa
reduo na eliminao dos cistos. Portanto um dos animais positivos deste trabalho era
vacinado e apresentou sinais clnicos compatveis com a doena. Neste trabalho, apenas trs
animais possuam vacina contra a Giardia.

Os casos negativos de giardase em um abrigo de animais se deram por causa do difcil


acesso ao local, e aglomerao de animais de espcies diferentes (caninos e felinos),
impossibilitando a coleta adequada das fezes, interferindo em um diagnstico correto.

Neste trabalho foram observados outros parasitas nas amostras de fezes alm de cistos
de Giardia. Em diversas amostras foram observados ovos de Toxocara canis, em uma
49

amostra foi encontrado um ovo de Trichuris spp. e, em trs amostras foram encontrados
oocistos de Isospora spp ( Figura 7).
50

5. CONCLUSES

A Giardase uma zoonoze de importncia mundial, sendo uma doena que ocorre
com frequncia na rotina da clnica veterinria. Este foi o primeiro estudo sobre a prevalncia
de casos positivos de giardase na cidade de Bento Gonalves-RS

Observou-se neste estudo uma baixa frequncia de casos positivos para Giardia na
cidade, sendo que a maioria dos animais positivos apresentavam sintomas clnicos. E as duas
tncicas de exames parasitolgico de fezes utilizadas foram sensveis para detectar os cistos
do protozorio.

A Giardia uma doena de difcil erradicao devido a alta contaminao ambiental.


A maior prevalncia de ces positivos foi em clnicas veterinrias devido a contaminao do
ambiente pela introduo de um animal contaminado. Deve-se tomar medidas de controle
para no disseminar a doena, no deixando as fezes expostas no ambiente, mantendo o
ambiente limpo, isolar o animal suspeito de outros ces e realizar a vermifugao dos animais
com frequncia.
51

REFERNCIAS

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54

ANEXOS

Resultados do EPF (tcnica de Faust e HPJ) (Tabela 1).

AMOSTRA SEXO IDADE TCNICA DE HPJ Sintomas


FAUST (diarria)
1 Clin. Vet Fmea 2 meses positivo positivo sim
2 Clin. Vet Fmea 3 meses negativo negativo no
3 Clin. Vet Fmea 1 ano negativo negativo no
4 Clin. Vet Fmea 3 anos negativo negativo sim
5 Clin. Vet Macho 3 meses negativo negativo no
6 Clin. Vet Macho 3 meses negativo negativo no
7 canil Macho 4 meses negativo negativo no
8 canil Fmea 2 anos negativo negativo no
9 canil Fmea 30 dias negativo negativo no
10 canil Macho 2 meses negativo negativo no
11 canil Macho 40 dias negativo negativo sim
12 Clin. Vet Macho 1 ano positivo positivo sim
13 Clin. Vet Fmea 2 anos negativo negativo no
14 Clin. Vet Macho 5 meses negativo negativo no
15 Clin. Vet Fmea 45 dias negativo negativo no
16 Clin. Vet macho 8 meses negativo negativo no
17 Clin. Vet Macho 4 anos negativo negativo no
18 Clin. Vet Macho 10 meses negativo negativo no
19 Clin. Vet Macho 1 ano negativo negativo no
20 Clin. Vet Fmea 10 meses negativo negativo sim
21 Clin. Vet Fmea 5 anos negativo negativo no
22 Clin. Vet Macho 6 meses negativo negativo no
23 Clin. Vet Fmea 8 anos negativo negativo no
24 Clin. Vet Macho 3 meses negativo negativo no
25 Clin. Vet Macho 8 anos negativo negativo no
26 Clin. Vet Macho 13 anos negativo negativo sim
27 Clin. Vet Macho 2 anos negativo negativo no
55

28 Clin. vet Macho 7 anos negativo negativo No


29 Clin. Vet Fmea 2 anos negativo negativo No
30 Clin. Vet Macho 3 anos negativo negativo No
31 canil macho 50 dias negativo negativo No
32 canil Fmea 43 dias negativo negativo No
33 canil Fmea 1 ano negativo negativo Sim
34 canil Fmea 2 anos negativo negativo No
35 canil Macho 1 ano negativo negativo No
36 canil Macho 45 dias negativo negativo No
37 canil Fmea 38 dias negativo negativo No
38 canil Fmea 38 dias negativo negativo No
39 Clin. Vet Fmea 5 anos negativo negativo No
40 Clin. Vet Fmea 8 anos negativo negativo No
41 Clin. Vet Fmea 8 anos negativo negativo No
42 Clin. Vet Fmea 3 anos negativo negativo No
43 Clin. Vet Fmea 3 anos negativo negativo Sim
44 Clin. Vet Macho 50 dias negativo negativo No
45 Clin. Vet Fmea 4 anos negativo negativo No
46 Clin. Vet. Macho 2 meses negativo negativo No
47 Clin. Vet Fmea 3 anos negativo negativo No
48 Clin. Vet Macho 11 anos negativo negativo No
49 Clin. Vet Fmea 8 anos negativo negativo Sim
50 Clin. Vet Macho 6 anos negativo negativo No
51 Clin. Vet Fmea 3 anos negativo negativo No
52 Clin. Vet Fmea 1 ano negativo negativo Sim
53 Clin. Vet Macho 9 anos negativo negativo No
54 Clin. Vet Fmea 10 anos positivo positivo Sim
55 Clin. Vet Fmea 4 anos positivo positivo No
56 Clin. Vet Macho 1 ano positivo positivo Sim
57 abrigo Macho 5 anos negativo negativo No
58 abrigo Fmea 2 anos negativo negativo No
59 abrigo Fmea 3 anos negativo negativo No
56

60 abrigo Fmea 2 anos negativo negativo No


61 Clin. Vet Fmea 1 ano negativo negativo No
62 Clin. Vet Macho 60 dias negativo negativo No
63 Clin. Vet Fmea 2 anos negativo negativo Sim
64 Clin. Vet Fmea 2 meses positivo positivo Sim
65 Clin. Vet Macho 1 ano negativo negativo No
66 Clin. Vet Fmea 2 anos negativo negativo No
67 Clin. Vet Macho 2 anos negativo negativo No
68 Clin. Vet Macho 3 anos positivo positivo No
69 Clin. Vet Fmea 6 meses positivo positivo Sim
70 Clin. Vet Macho 2 anos negativo negativo No
71 Clin. Vet Macho 9 anos negativo negativo No
72 Clin. Vet Macho 2 anos positivo positivo Sim
73 Clin. Vet Macho 12 anos negativo negativo No
74 Clin. Vet Fmea 1 ano negativo negativo No
75 canil Fmea 40 dias negativo negativo No
76 canil Fmea 40 dias negativo negativo No
77 canil Fmea 40 dias negativo negativo Sim
78 canil Fmea 1 ano 6 negativo negativo No
meses
79 canil Macho 2 anos negativo negativo No
80 canil Fmea 30 dias negativo negativo No
81 canil Fmea 2 meses negativo negativo No
82 canil Macho 2 meses negativo negativo No
83 canil Fmea 50 dias positivo positivo Sim
84 Clin. Vet Fmea 11 anos negativo negativo No
85 Clin. Vet Fmea 2 meses positivo positivo Sim
86 Clin. Vet Fmea 2 anos positivo positivo Sim
87 Clin. Vet Fmea 1 ano 5 positivo positivo Sim
meses
88 Clin. Vet Fmea 3 anos negativo negativo Sim
89 Clin. Vet Fmea 3 anos positivo positivo Sim
57

90 canil Macho 55 dias negativo negativo No


91 canil Macho 55 dias negativo negativo No
92 canil Macho 55 dias negativo negativo No
93 canil Fmea 2 meses negativo negativo No
94 canil Macho 2 meses positivo positivo Sim
95 canil Macho 1 ano negativo negativo No
96 canil Fmea 30 dias positivo positivo Sim
97 canil Macho 30 dias negativo negativo No
98 canil Fmea 30 dias negativo negativo No
99 canil Macho 1 ano negativo negativo No
100 canil Fmea 1 ano negativo negativo Sim

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