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NORMAS E ROTINAS OPERACIONAIS DO LABORATORIO DE NALISES

CLNICAS

Setor de Coleta e Recepo

Procedimento Operacionais Padres (POP)

1. CADASTRO E INFORMAES

1.1. Identificar o paciente

A chegar recepo do laboratrio, o paciente devera estar, portanto requisio


medica com os exames solicitados pelo seu medico, a recepcionista ento ir
cadastra-lo, dando nfase ao nome, idade, sexo, endereo e/ou telefone. O cadastro
do paciente acompanha a identificao numrico controle do laboratrio.

1.2. Identificao de amostra

Cada cadastrado possui um numero de identificao, utilizando para etiquetas os


recipientes de coleta. importante identificar sempre a parte lateral do frasco, e nunca
a tampa, principalmente em frascos de urina e fezes para evitar trocas de material.

1.3. Identificaes dos exames a serem realizados

No laboratrio as amostras so registradas em fichas internas de seus respectivos


setores, nestas fichas constam a identificao numrica, o nome e a idade do
paciente; em seguida as amostras e as fichas sero encaminhadas para os devidos
setores.

1.4. Informaes ao paciente

Na recepo do laboratrio o paciente ir receber as instrues de como deve


proceder para coleta das amostras. Para dosagem bioqumica o paciente orientado
sobre o perodo de jejum, sendo tambm necessrio o conhecimento dos
medicamentos que o paciente possivelmente esteja tomando. Quando a coleta de
sangue, orienta-se o paciente quanto ao esforo fsico, o paciente deve vir ao
laboratrio totalmente descansado para evitar qualquer alteraes nos resultados de
seus exames.

2 COLETA DE SANGUE

O sangue colhido com o objetivo de estudar as frequncias alteraes dos seus


componentes quando o organismo acometido pr doenas. No laboratrio so
executados exames de vrios paciente ao mesmo tempo, torna-se imprescindvel que
uma sistematizao bem organizada de trabalho seja seguida, evitando-se os erros
deum modo geral, a perda de tempo e, especialmente, a troca dos resultados.
Cuidados tcnicos e de assepsia so tambm necessrios a fim de evitar a
contaminao do paciente, do operador e do sangue colhido. A coleta feita de
preferencia pela manha, com o paciente em jejum. Muitos so os meios para obteno
do sangue usado para o exame hematolgico, como pr exemplo, sangue o veneno,
capilar, arterial, puno da medula ssea de ossos como o externo, tbia, ilaco e
usado na maioria das vezes o venoso e o capilar.
2.1 Sangue Venoso

A sua obteno feita pela funo das veias mais acessveis. As que so mais
facilmente funcionadas localizam-se nas regies do antebrao (veia mediana, ceflica
e baslica), do pescoo (jugulares internas e externas) e inguinais (femural). Na
criana, tambm se realiza na regio da fontanela frontal (seio longitudinal). A veia a
preferida nos exames rotineiros, pois apresenta frequentemente bom calibre e sua
funo pouco dolorosa. Antes da puno, avalia-se a orientao do vaso pela
visualizao ou pela palpao digital e fazer a agulha penetrar e aprofundar nessa
direo.

2.2 Sangues capilares

frequente usado em crianas quando se empregam micro mtodos ou em adultos


para alguns exames como estudos de plaquetas, citologia e cito qumica celular. A
coleta se faz aps puno da polpa digital dos dedos ou dos grande artelho, na
criana. Pode-se ainda utilizar a regies laterais do calcanhar, nos recm nascidos.

3. RECEPO AO PACIENTE

O paciente recebido com cortesia e cordialidade; explicando os procedimentos aos


quais ele vai ser submetido, de modo a transmitir-lhe tranquilidade e segurana. A
coleta chama o paciente para a coleta de sangue, e de acordo com seu cadastro,
confirma o nome, a idade e os exames a sem realizados pelo paciente. A mesmas e
para e identifica, na frente do paciente os tubos que sero utilizados para o material.

3.1 Condies para a coleta

Sala bem iluminada e ventilada; Pia; Cadeira reta com braadeira regulvel ou maca;
Garrote; Algodo hidrfilo; lcool etlico a 70% ou lcool iodado a 1%; Agulhas e
lancetas descartveis; Sistemas a vcuo: suporte, tubo e agulhas descartveis; Tubo
de ensaio com tampa; Etiquetas para identificao de amostras; Caneta; Caixa
descarpack; Jaleco e mascara; Luvas descartveis; Estantes para tubos.

3.2 Identificaes da amostra

Identificam-se os tubos para colocao da amostra. Escreva na etiqueta os dados do


paciente: nome, numero do registro, data da coleta.

3.3 Tcnica para Coleta de Amostra do Sangue Venoso

Coloca-se a agulha na seringa sem retirar a capa protetora. No tocando na parte


inferior da agulha; Movimenta o embolo e pressione-o para retirar o ar; Ajusta o
garrote e escolha a veia; Faz a antissepsia do local da coleta com algodo umedecido
em lcool a 70%ou lcool iodado a 1%. No tocando mais o local desinfetado; Retira a
capa da agulha e faz a puno; Introduz a agulha na veia mediana, baslica ou
ceflica, atingida a veia, aspira o sangue; Coleta-se aproximadamente 10 ml de
sangue. Em crianas coleta 2 A 5 ML; Retira o garote e em seguida a agulha;
Comprime o local puncionado com algodo embebido em lcool; Retira a agulha da
seringa e transfere o sangue para os tubos, quando for transferido para um tubo
contendo anticoagulante. Agita suavemente para facilitar a mistura do sangue como
anticoagulante; Ao transferir o sangue para um tubo de ensaio sem anticoagulante.
Escorrer delicadamente o sangue pela parede do tubo. Este procedimento evita a
hemlise da amostra. Descarta as agulhas e seringas nas caixas de descarpack;
Orienta o paciente a pressionar com algodo a parte puncionada, mantendo o brao
estendido, sem dobr-lo;

3.4Tecnica para coleta de amostra do sangue capilar

Faz assepsia da poupa digital com lcool iodado.


Deixar secar.
Puncionar com lanceta ou agulha descartvel, desprezando-se a primeira gota
de sangue e absorvendo-a com papel de filtro ou algodo seco;
Sangue deve fluir espontaneamente, exercendo-se leve presso somente
quando necessrio;
Direciona o tubo de capilar na gota para que o sangue flua por capilaridade;
Limpar o dedo com algodo e aplicar antissptico.
Anticoagulantes.
O sangue coletado com a proporo correta de Anticoagulantes utilizados.
EDTA; 1 a 2 mg para cada ml de sangue.
Heparina; 1 gota (5.000 U/ml) para cada ml de sangue.
Oxalato de K; 1 a 2 mg para cada ml de sangue.
Citrato de sdio; 0,5 ml para 4,5 ml de sangue.

3.6 Biossegurana na coleta

Todo cuidado pouco na manipulao de materiais biolgicos, tais como soro,


sangue, secrees, fluidos orgnicos, tecidos, etc. Redobra-se as precaues, pois
esses materiais so potencialmente infectantes e muitas vezes esto contaminados
com agentes etiolgicos diferentes do que se esta pesquisando, ou ainda
desconhecidos. Usa-se sempre Equipamento de Proteo Individual (EPI): jaleco
longo de mangas compridas e punho retrtil, luvas descartveis evita a formao e
disperses de aerossis so micro partculas solidas e liquidas com dimenses
aproximadas entre0,1 e 0,5 micra que podem, no caso de conter microrganismos,
permanecer em suspenso e plenamente viveis pr varias horas. Jamais reencapa-
se agulhas. Esse procedimento uma das principais causas da contaminao de
profissionais de sade por microrganismos, existentes no sangue e em outros fluidos
orgnicos, como por exemplo, o vrus da Hepatite B e o HIV. Aps a coleta
descartado esse material diretamente em caixas descarpack. Reduz ao mximo o
manuseio de resduos, em especial os pefurocortantes. Descarta o rejeito
perfurocortante diretamente em caixas descarpack.

4.EMISSAO DOS LAUDOS DOS EXAMES LABORATORIAIS

Os laudos esto disponveis no prazo acertado com o paciente, se por algum motivo
isto no for possvel, h uma justificativa e, sempre que possvel, o paciente
informado no mais curto prazo possvel.

Em caso de laudo que possa oferecer perigo iminente vida do paciente, o laboratrio
informa ao mdico assistente e/ou ao responsvel pelo paciente. O laudo datado e
assinado por profissional legalmente habilitado com o seu nome completo e legvel, e
o nmero do registro no conselho profissional.

4.1 Exames

Nome do exame;
Material utilizado;
Mtodo;
Intervalo de referencia com as respectivas unidades e valores de alerta;
Informaes necessrias interpretao dos resultados, quando indicada;
Concluses, quando indicadas.

EXAMES DE SANGUE

Acido rico
Capac. Total de lig. do ferro
Albumina
Cetonemia
Colesterol fracionado: HDL, LDL,VLDL.
Aldolase
Cloretos
Ferro colher pela amanh
Amilase
Creatinina
Triglicrides
Bilirrubinas
Eletroforese de protenas
Uria
Clcio
Fosfatase acida
Colesterol ( sem fracionamento)
Fosfatase alcalina
CPK total
Fsforo
CK MB
Frutosamina
Gama GT
Glicose
Hemoglobina
Glicosilada
Lipase
Potssio
Magnsio
Sdio
Mucoproteinas
Transaminases: TGO/AST; TGP/ALT
Velocidade de hemossedimentao (VHS)
HemogramaCurva de fragilidade osmtica
Plaquetas
Tempo de protrombina
Tempo de tromboplastina parcial ativada PTTa
Reticulocitos
Eletroforese de hemoglobina
Pesquisa de drepancitos
Alfa 1 Glicoprotena acida
Fator reumatoide
Grupo sangneo e fator Rh
VDRL
Protenas C reativa
Anti HBsAnticorpos antireoidianos:

antireoglobulina

antimicrossomalAntiestreptolisina O

- Monoteste

- Paul Bunnell Davidsohn

- Epstein Baar (IFI ou ELISA)

- Anti VCA IgG e/ou IgMFanHbeAgToxoplasmose IgG/IgM - ELISA - IFI HAIHbsAg


(Antigeno australia)Chagas (T. Cruzii): - IFI HAI ELISAHAV IgG/ IgMAnti
HbeCitomegalovrus IgG/IgMHIV 1 e 2

EXAMES DE URINA ROTINA

1)Entrega ao paciente um frasco etiquetado com o nmero de registro do mesmo.2)Da


as seguintes instrues ao paciente:

2.1 - Colher a primeira urina da manh

2.2 - Antes de colher a urina, fazer um asseio com gua e sabo na genitlia externa.

2.3 Desprezar as primeiras pores da urina e colher o restante no frasco coletor


recebido do Laboratrio.

2.4 - Trazer imediatamente para o Laboratrio dentro do laboratrio dentro do horrio


previsto para recebimento de material ( 7:30 s 10:00 hs, manh ).

Obs: Paciente do sexo feminino no devem colher urina no perodo menstrual.

3) - Paciente feminino no deve coletar a urina no dia em que fizer Exame de


Contedo vaginal, pois a paciente dever estar sem asseio e para a coleta de urina
ter que asseia-se antes.

EXAMES PARASITOLGICO FEZES

1)Entrega ao paciente um frasco etiquetado com o numero de registro do mesmo.


2)Colher o material e trazer para o Laboratrio no horrio estipulado( 7:30 s 10:00
hs).

3)Se houver dificuldade de colher o material pela manha no dia do exame marcado,
pode colher na vspera e colocar na geladeira o frasco coletor.

EXAMES DE SECREO VAGINAL E SECREO URETRAL

1)Se a paciente tambm tiver que realizar exame de URINA, o exame de Secreo
devera ser realizado no outro dia.

2)Para fazer exame de Secreo Vaginal a paciente deve vir ao Laboratrio sem
tomar banho ou sem realizar qualquer tipo de asseio.

3)No manter relao sexual 24 hs antes da realizao do exame, abstinncia sexual


de 24 hs.

5.ENTREGA DE RESULTADO

1)Os exames de paciente particulares e SUS ficam no arquivo colocado sem ordem
alfabtica.

2)Os exames de paciente atendidos pelo hospital so entregues ao mesmo colocados


no pronturio.

3)Observa-se o nome completo, idade do paciente.4)Confere se o nome do paciente


no exame com o nome que est narequisio.5)Retira-se o resultado e entrega ao
paciente

6.EXAMES INCOMPLETOS

1)O exame s ser liberado quando o paciente trouxer o restante do material para
complementar os tipos de exames que constam da requisio mdica.

2)Solicitamos ao paciente que traga no mximo ate 48 hs. Aps as analises efetuadas,
o exame liberado normalmente.

Setor de Lavagem e Esterilizao

PROCEDIMENTO OPERACIONAIS PADRES (POP)

A importncia de uma boa descontaminao de materiais (ESTERILIZAO)

pea imprescindvel para um melhor desempenho dos trabalhos a serem executados


em um laboratrio de analises clinicas. O processo de esterilizao o comeo de tudo,
sem a mesma os resultados no sero satisfatrios. Faremos uma descrio dos
mtodos que so utilizados para a esterilizao dos materiais do laboratrio.

1 OBJETIVOS

1.1Gerais

Tomar conhecimento dos cuidados na manipulao de materiais contaminados.


Devemos tambm ter o conhecimento de lavagem, secagem empacotamento e
esterilizao de materiais reaproveitveis.
1.2 Especficos

Uns dos objetivos mais importantes o conhecimento de como se deve usar as


maquinas, como:

AUTOCLAVE, ESTUFA DE SECAGEM E ESTERILIZAO ETAMBM O


DEIONIZADOR.

2.EQUIPAMENTO BSICOS

Autoclave
Estufa de secagem
Estufa de esterilizao
Deionizador

OBS: H de se destacar tambm os materiais usados no processo de lavagem.

So estes:

Sabo
Hipoclorito 1%3

METODO PARA ESTERILIZAR MATERIAIS:

1. O 1 passo colocar o material contaminado (cogulos e urina) so colocados em


frascos plsticos contendo hipoclorito a 1%, pr duas horas vida mdia
dohipoclorito.2.2 passo os materiais reutilizveis ex: vidrarias so colocados no
hipoclorito a1% pr 30 minutos,3.3 passo sabo dextran pr mais 30 minutos,4.4
passo lava-se em gua corrente pr 30 minutos,5.5 passo mais 30 minutos de molho
em gua deionizada,6.6 passo so colocados na estufa de secagem.

Matrias da microbiologia1.

Os materiais contaminados so colocados na autoclave pr 45 minutos 121C

2. Depois que sair do autoclave, devemos seguir os mesmos passos a partir do


3descrito acima;

3. Aps a secagem, leva o material para o balco de empacotamento e l,


definitivamente separado. Ex: plstico, vidro, etc.

4. Depois de separado, o material colocado na estufa de auto preciso para


esterilizao com fita teste. Deve-se salientar que materiais plsticos no devem ir
para a estufa de esterilizao, pois a mesma os danificar, devido sua alta
temperatura que gira em torno de 180C. O temo que o material deve ficar na estufa
de esterilizao de 2 hs. E com relao ao material plstico este e embalado e
colocado na autoclave de 15 a 20 minutos.

OBS: Para identificarmos um material auto clavado devemos verificar a fita teste, esta
deve estar com listras queimadas. Com todos esses passos, ns faremos uma boa
esterilizao, pois a mesma os danificar, devido sua alta temperatura que girar em
torno de 180C. O tempo que o material deve ficar na estufa de esterilizao de 2 hs.
E com relao ao material plstico este e embalado e colocado na autoclavede 15 a
20 minutos.

importante compreender a importncia da esterilizao em todo o processo de


trabalho em Laboratrio, bem como o uso de equipamentos essenciais(

AUTOCLAVE, ESTUFA DE ESTERILIZAO E SECAGEM E DEIONIZADOR),

E procedimentos de lavagem e descontaminao de materiais.

4. DESCARTE DE MATERIAL CONTAMINADO

Deve haver POP para o descarte de material contaminado gerado no laboratrio, que
so aqueles despejos em estado slido, semi-solido, liquido ou pastoso, apresentando
caractersticas de toxidade e/ou atividade biolgica, que podem afetar direta ou
indiretamente os seres vivos ou causar contaminao das aguas, do ar e do solo.

Procedimento para com os materiais.

Agulhas (e capilares de hematcrito): Uma vez terminada a coleta do sangue-


amostra so desprezadas em caixas descarpack
Seringas: Aps o termino da coleta do material, tambm so descartveis em
caixas descarpack.
Algodo, gaze, papeis e material afins: Apos o uso devem ser descartados em
sacos de lixo branco e reforados para posterior coleta pr servio
especializados.
Swabs, especulos, espatulas, abaixadores de lingua, etc.: Proceder daforma
descrita acima.
Urina: Acrescentar uma parte de soluo de hipoclotito de sdio a 1%. Deixar
em contato pr 2 horas descarta no esgoto sanitrio. Os frascos devem ser
descartados em sacos de lixo brancos reforados para posterior coleta pr
servios especializados.
Fezes: descarta em saco de lixo reforados.
Sangue, coagulos e semelhantes: colocar todo o sangue e seus derivados em
um recipiente de plstico resistente. Adicionar soluo de hipoclorito de sdio.
Deixar em contato pr 2 horas. Devido decomposio do hipoclorito em
contato com o sangue, deve-se adicionar mais hipoclorito, at no haver
qualquer formao de espuma.
Meios de cultura e despejos e bacteriolgicos: Dispensa o material o, a
esterilizao em autoclave e descartar em lixo especial.
Lminas e lamnulas: No so descartas. Ao recuper-las so submetidas aum
tratamento hipoclorito de sdio a 1% pr 30 minutos. Apos o processo,
proceder a lavagem e recuperao.
PROCEDIMENTO DE ROTINAHEMATOLOGIA MANUAL

HEMATOLOGIA

A hematologia compreende o estudo das clulas sanguneas e coagulao.


Normalmente, os constituintes do sangue (hemcias, leuccitos e
plaquetas)permanecem em equilbrio sempre constante devido ao sistema
hematopoitico, com funo de formao hemoltica ou de destruio das clulas
sanguneas. (O. LIMA,1992)

OBJETIVOS

O estudo no Laboratrio de hematologia consiste em analisar clulas sanguneas e a


coagulao atravs de exames hematolgicos, podendo assim qualificar e diferenciar
as clulas sanguneas. Esses testes realizados possibilitam um diagnostico mais
conclusivo, auxiliando clnico no tratamento de uma patologia por deficincia
hematologica.

HEMATCRITO

Consiste em determinar em porcentagem a concentrao de eritrcitos emdados


volume de sangue no coagula. a razo entr o voluem deeritrcitos em relaoao
volume do sangue total. (O. LIMA, 1992)

MATERIAIS E MTODOS

Tubo capilar

Bico de bunsen

Centrfuga para microhematcrito

Tabela para microhematcrito

O tubo de microhematcrito preenchido por capilaridade at da capacidade


docapilar. A extremidade vazia vedada pela chama do bico de bunsen. Colocar
oscapilares na centrifuga para microhematcrito, com o cuidado de coloca a parte
abertacontra o apoio de borracha para evitar quebras e extravasamentos. A ponta
selada ficavoltada para fora. recomendvel um centrifugao a 3.000 RPM/5
minutos.Aps a centrifugao, o tubo apresenta uma coluna de sangue, incluindo
oplasma e uma coluna de eritrcitos. Devem ser medidos com o auxlio da tabela.

HEMOGLOBINA (Hb)
o principal componente dos eritrcitos. um conjugado de protenas queserve como
transporte de O2 e CO2. (O. LIMA, 1992)

MATERIAIS E MTODOS

Tubos para centrfuga

Padro (HiCN Cianetohemoglobina)

Reagente de Drabkin

Tomar 3 tubos e proceder da seguinte maneira:BPAPadro - 20uL-Amostra--20


uLReag. de Drabkin5.0uL5.0uL5.0uLHogenizar. Descansar em temperatura ambiente
por 5 minutos. Leitura a 540nm no espectrfotmetro. Zerar com o Branco.

ESFREGAO

O exame de esfregao sangneo uma parte importante da avaliaohematolgica.


Para obter esfregaos satisfatrio, indispensvel que se tome certasprecaues:

lminas devem estar limpas e desengorduradas;

a gota de sangue no deve ser muito grande. Quanto maior a gota, mais espesso
oesfregao. O ideal uma gota de 20uL;

O esfregao deve ser feito rapidamente, antes que ocorre a coagulao. (O.
LIMA,1992)

MATERIAIS E MTODOS

Lminas limpas e desengorduradas


Lminas de extenso (extensora)
Colocar uma gota de sangue no final de uma lmina apoiada em uma
superfcie plana. Com o polegar e o indicador, segura-se o final da lmina de
extenso contra a superfcie da primeira lminas. Empurra-se a lmina de
extenso a uma velocidade moderada para frente at que o sangue tenha sido
espelhado em um esfregao moderadamente delgado. As lminas devem ser
secas a temperatura ambiente e depois corada para anlise ao microscpio.
conveniente confeccionar vrios esfregaos ao mesmo tempo. Marcar sempre
os esfregaos usando agulha ou lpis demogrfico com o nome do paciente ea
data sobre a superfcie do mesmo.

COLORAO

Os corantes de anilina usados em esfregaos sanguneos so de duas classes gerais:

corantes bsicos, como o azul de metileno;


corantes cidos, como a eosina. O ncleo das clulas toma as cores bsicas,
como o azul de metileno, enquanto que os corantes bsicos agem sobre os
elementos citoplasmticos. Pertencem a este grupo os corantes de
Romanowsky. Os derivados mais usados do corante primitivo de Romanowsky
so: Giemsa. Leishman, Wrigth entre outros. Nesse setor foi usado o corante
Leishman. (O. LIMA, 1992)

MATERIAL E MTODOS

Suporte para lminas- Corante de Leishman

Colocar a lamina sobre o suporte. Verter 20 gotas do corante sobre a lamina ouo
suficiente para cobri-la. O lcool metlico (metanol) da soluo corante fixa o
esfregao. Deixar corar durante 15-20 minutos. Lavar em gua corrente e deixar
secar. Observar ao microscpio com objetiva de imerso.

CONTAGEM GLOBAL

A contagem dos elementos morfolgicos do sangue (eritrcitos, leuccitos e plaquetas


deve ser efetuado pala manh. Consiste em trabalhar com material aferido com a
finalidade de determinar o nmero dos elementos morfolgicos. Para isso,
necessrio diluir volume conhecido de sangue com determinada quantidade de lquido
diluidor. Conta-se as clulas na rea reticulada da cmara destinada para cada tipo de
clulas (ver Anexos) (O. LIMA, 1992)

MATERIAL E MTODOS

Cmara de Contagem (Cmara de Neubauer)


Lquidos diluidores (hayem, Turk, Oxalato de Amnia 1%)
Pipetas graduadas e automticas
Lamnula
Contagem Global de Leuccito
Valores de Referencia: 5.000 10.000 mm3
0.38 mL do lquido de Turk
20uL sangue
Diluio = 1/20
Depois de homogeneizar o lquido de Turk com o sangue, umedecer a cmara
de lquido de Turk com o sangue, baixo da lamnula, inserir com auxlio da
pipeta
automtica pequena quantidade da soluo diluda. Cuidado para evitar presena de
bolhas. Esperar 5 minutos a fim de que os glbulos se depositem. Observar ao
microscpio primeiramente com a objetiva de menor aumento e em seguida numa
objetiva de 40X. Fazer a contagem nos quadrantes destinados a leuccitos.

Contagem Global de Plaquetas

Valores de Referncisa:150.000 400.000 mm3


0.38 mL oxalato de amni 1%
20uL sangue
Diluio = 1:20
Depois de homogeneizar o oxalato de amnia 1% com o sangue, umedecer a
cmara de Neubauer e cobri-la com lamnula. Pr baixo da lamnula, inserir
com o auxilio da pipeta automtica pequena quantidade da soluo diluda.
Cuidado para evitar presena de bolhas. Esperar 10 minutos a fim de que as
plaquetas se depositem. Esperar em cmara mida. Observar ao microscpio
primeiramente com a objetiva de menor aumento e em seguida numa objetiva
de 40X. Fazer a contagem nos quadrantes destinados a plaquetas, que so os
mesmo para contagem de eritrcitos.

VELOCIDADE DE HEMOSSEDIMENTAO (VHS)

a velocidade com o qual os glbulos vermelhos vo para o fundo do tubo. Os


glbulos vermelhos que sedimentam porque a sua densidade maior que a do
plasma. A velocidade com que eles sedimentam porque a sua densidade maior
que a do plasma. A velocidade com que eles sedimentam varia, direta ou
indiretamente com vrios fatores. (O. LIMA, 1992)

MATERIAIS E MTODOS

Tubo de Westergren
Estante de westergren
O mtodo de Westergren modificado produz os mesmos resultados que o
mtodo de Westergren original, mas emprega sangues na coagulado com
EDTA ao invs de citrato. Isso permite que o VHS seja realizado com a mesma
amostra de sangue que os outros estudos hematolgicos. 2 mL de sangue com
EDTA bem misturados so diludos em 0.5 mL de cloreto desdio a 0.85% ou
0.5 mL de citrato de sdio a 3.8%. Uma pipeta de Westergren completada at
a marca 0 (zero) e colocada exatamente na vertical na estante temperatura
ambientem, sem vibraes ou exposio direta luz solar. Aps exatamente
60 minutos, a distancia do topo da coluna registrada em milmetros como o
valor da VHS. Se a demarcao entre o plasma e a coluna de clulas
vermelhas distinta, o nvel lido onde a densidade total aparece primeiro.

Valores de Referncia:

Homens: 3-15 mmMulheres: 3-20 mmCrianas: 3-12 mm


CLULAS LE (Lupus Eritematoso)

Um anticorpo presente na frao globulina gama do soro dos pacientes de LES,o


chamado fator LE, reage com a nucleoprotena dos ncleos dos leuccitos. Oncleo
do fagcito acha-se comprimido na periferia da clula. A maior parte da regio proto
plasmtica ocupada pela massa nuclear transformada. O citoplasma reduz-se
estreita faixa na periferia dos leuccitos. Nas clulas LE, a estrutura da cromatina
substituda pr massa arredondada, homognea, de colorao prpura, de tamanho
varivel, mas usualmente maior que a hemcia. O fagcito pode englobar mais de
ncleo. (O. LIMA, 1992)

MATERIAL E MTODOS

Banho Maria a 37C


Toma-se o sangue sem anticoagulante e coloca-se em Banho Maria a
37C/2hs.Depois realiza-se o esfregao e observa-se ao microscpio. Deve-se
sempre realizar o exame FAN junto com o exame de clulas LE.

CONTAGEM DE RETICULCITOS

Os reticulcitos so clulas vermelhas imaturas no nucleadas que contmRNA e


continuam a sintetizar hemoglobina aps a perda do ncleo. O sangue
incubadorapidamente em uma soluo de azul cresil brilhante ou azul metileno. No
RNA precipitado como um complexo corante ribonucleoprotenas. O complexo
aparecemicroscopicamente como uma rede azul escura ou grnulos azuis escuros
quepermitem a identificao e contagem de reticulcitos. (O. LIMA, 1992)

MATERAIS E MTODOS

Esfregao sangneo

Conta-se o nmero de reticulcitos em 10 campos diferentes. O esfregao feito


apartir de 100uL de sangue + 1 gota de azul cresil brilhante.Valores de
Referncias:0.5 - 2.0%10 campos = total / 10 = nmero %

COAGULOGRAMATempo de Sangria (TS)

o tempo necessario para a cessao da hemorragia, ocasionando por pequena


inciso, de dimenso padronizada, praticada artificialmente. (O. LIMA, 1992)

MATERIAL E MTODOS

Equipamento para puno digital

Papel de filtro

Cronmetro

Faz-se a assepsia da polpa digital ou do lbulo da orelha com a lanceta, fazer ainciso
e deixar o sangue fluir espontaneamente. Marcar no cronometro o incio nomomento
do aparecimento da primeira gota. Com o papel de filtro absorver de 30em 30
segundos a gota de sangue formada sem tocar a inciso. Quando cessar o fluxo de
sangue, parar o cronmetro. Quando cessar o fluxo de sangue, parar cronmetro. O
intervalo decorrido entre o aparecimento da primeira e da ultima gotarepresenta do
tempo de sangria.Valores de referncia:1 6 minutos

Tempo de Protrombina Ativada (TAP)

a prova de escolha para investigao do sistema extrnseco da


coagulaosangnea. uma prova de grande valor na demonstrao de deficincia
dos fatores decoagulao I, II, V, VII, X. (O. LIMA, 1992)

MATERIAL E MTODOS

Plasma citratado do paciente

Soluo de tromboplastina

Banho Maria a 37C

Tubos de ensaio

Soluo de cloreto de clcio a 0.025M

Coloca-se 100uL do plasma citratado do paciente + 100uL da suspenso


detromboplastina no tubo de ensaio. Homogeneiza, adicionar rapidamente 100uL
dasoluo de cloreto de clcio. Neste instante, acionar o cronmetro. Retirar o tubo
doBM e agit-lo suavemente, de 2 em 2 segundos, at o aparecimento do
cogulo,parando simultaneamente o cronmetro. O tempo consumido em segundos
constituio TAP.Valores de Referncia:11 13 segundos

Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (TTPA)

a melhor prova para investigar as alteraes do mecanismo da


coagulaosangnea. Fatores que participam do sistema intrnseco esto envolvidos,
comexceo das plaquetas e do fator XIII, bem como do fator VII, do sistema
extrnseco. (O.LIMA, 1992)

MATERIAL E MTODOS

Plasma citratado do paciente

Soluo de tromboplastina parcial

Banho Maria a 37C

Cronmetro

Tubos de ensaio

Soluo de cloreto de clcio a 0.025 M

Coloca-se 100uL de cefalina + 100uL plasma citratado do paciente. Homogeneiza


eencuba em Banho Maria a 37C/3 min. Aps esse tempo, adicionar
rapidamente100uL da soluo de cloreto de clcio. Neste instante, acionar o
cronmetro. Agit-lo suavemente, de 5 em 5 segundos. Ao fim de 30 segundos, retirar
o tubo do BM eagit-lo suavemente, observando o aparecimento do cogulo,
parandosimultaneamente o cronmetro. O tempo consumido em segundos constitui o
TTPA.Valores de Referncia:35 45 segundos

CONTAGEM DIFERENCIAL DE LEUCCITOS

Consiste em determinar a proporo existente entre as distintas variedades


deleuccitos. A contagem diferencial de leuccitos dos mais valiosos mtodos entre
osexames citolgicos do sangue. (O. LIMA, 1992)

MATERIAL E MTODOS

Esfregaos corados

Deve-se observar a lmina prximo cauda o esfegao onde quase no seencontra


roleaux e facilita a contagem. Total de 100 clulas.

FIBRINOGNIO

MATERIAIS E MTODOS

Tubo capilar

Plasma

Microcentrfuga

Tabela de Hct

Banho Maria a 56

Aspira-se o plasma no tubo capilar e encuba-se em Banho Maria a 56C/15


minutos.Leva-se centrfuga para microhematcrito por 5 minutos / 3000 RPM. Faz-se
a leiturana tabela para Hct e multiplica o resultado por 92.Valores de Referncia:200
400 mg/dL

INDCES HEMATIMTRICOS

VCM = Hct / Hem x 100 u3HCM = Hb/ Hem x 100 pgCHCM = Hb / 100%

PROCEDIMENTO DE ROTINA SOROLOGIAMANUAL

-
No trimestre final pode ocorrer HCG negativo em caso de aborto, com a
placentainativa.

Doenas trofoblsticas liberam grande concentrao de HCG.

Pesquisa de HCG em homens: suspeita de CA de testculo.-

Urobilinognio

2,5 mL de urina0,5 mL reativo de ErlichPositivo se forma colorao vermelha. Caso de


positivo, realizar diluiosucessivas, comeando com 1,0 mL de urina + 9,0 mL de
gua destilada. Diluio de1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160.Adiciona 1,0 mL de reativo de
Erlich.

Resultado:Urobilinognio: 1/? EU (Unidade Erlich)-

Pigmentos Biliares

1,0 mL cido ntrico1,0 mL de urina, pelas bordas do tubo, vagarosamente.Positivo se


formar um halo verde.-

Pesquisa de Sangue Oculto

Centrifugar 10 mL de urina a 2000 RPM pr 5 minutos.Desprezar todo o


sobrenadanteAcrescentar 6 gotas do Reativo de BenzidinaPositivo se formar um
colorao de azul a verde.

Reativo de Benzidina:

Uma porode Benzina1,0 mL H2O2

1,0 mL de cida actico 50%Homogeneizar

Preparar o reativo somente na hora do uso.

HCG de 24 horasSucessivas diluio a comear de 1 / 2.

Resultado:Volume de 24 hs x ultima diluio positiva x 2,5 = ? UI/24 horas

LQUIDO CORPORAIS (STRASINGER, 1998)-

ANLISES DO LCRA) Exame fsico


Aspecto:Antes de centrifugar: vermelho / turvoDepois de centrifugar: deve diferenciar o
LCR

Para diferenciar Puno Traumtica de hemorragia Intracraniana.1)Aps


centrifugaoPT: forma sedimento (boto de hemcias e sobrenadante lmpido)HI: no
forma sedimento.2)Distribuio desigual de sangue nos tubosPT: a quantidade de
sangue vai diminuindo nos tubos.HI: Os trs tubos permanecem vermelho por
igual.3)Formao de coguloPT: no forma coguloHI: forma cogulo

B) Exames microscpico

a) Contagem Global- Leuccitos:--- mm- Hemcias: 0-5 / mm; RN.: at 100/mm

Homogeneizar o material e preencher a cmara de Fuchs Rosenthal.Contar todos os


quadrantes e dividir o nmero de clulas contadas por 3.b)Contagem
DiferencialConcentrar o material e fazer esfregao com a cmara de Suta.Corar com
Leishman, Wright ou Giemsa.Contar 100 Clulas:- neutrfilos (Meningite bacteriana)-
linfcitos (Menegite viral)- eosinofilos (Neurocisticercose)- moncitos (Meningite
turbelosa e fngida)

C)Exame qumico

Glicose (60% glicose plasmtica)Protena: 15 - 40 mg/dL

- ESPERMOGRAMAA) Fases

1 fase: Liquefao primria ou virtual2 fase: Coagulao (durao at 30 minutos)3


fase: Liquefao secundaria. Ausncia dessa fase INFERTILIDADE

B) Contagem Global

Homogeneizar a amostra e diluir em 1/40 (3.9 mL solvente fisiolgico + 100uLde


esperma).Preencher a cmara de Neubauer.Contar SPTZ em objetiva de 40 X nos
quadrantes laterais e central, multiplicar onmero o contado por 80.000.Se a
quantidade de SPTZ for muito elevado, contar apenas o quadrante centrale multiplicar
por 400.000.Resultados expressos em mL. V.R.: 60 milhes/mL

C) Viabilidade

Em um tubo, colocar uma gota de esperma e acrescentar 2 gotas de eosina +2gotas


de nigrosina.Confeccionar esfregao e secar rapidamente. Verificar a quantidade de
SPTZ vivos (brancos) e mortos (vermelhos) - Objetivade imerso.Vivos: mais do que
70%Mortos: menos do que 30%.
PROCEDIMENTO DE ROTINAPARASITOLOGIA

TESTE DE COMPATIBILIDADE (

PROVA CRUZADA MAIOR )

TECNICA: ALBUMINA BOVINA 22%

1 FASE

1.Prepare suspenses de hemcias lavadas (5%): do concentrado de hemacais aser


transfundido e do paciente (recepto);2.Identifique 2 tubos: Prova cruzada e AC (Auto
controle);3.Coloque em cada tubo 2 gotas do soro do paciente (receptor);4.Adicione 1
gota da suspenso de hemcias do concentrado a ser transfundidoao tubo de prova
cruzada e 1 gota da suspenso de hemcias do paciente aotubo AC;5.Homogenize e
centrifugue durante 15 seg\3400 RPM;6.Proceda a leitura, ressuspendendo o boto de
hemcias delicadamente sobreaglutinoscpio e anote os resultados.

2 FASE

1.Adicione a cada tubo 2 gotas de albumina bovina 22%;2.Homogenize e centrifugue


15 seg\3400 RPM;3.Proceda leitura e anote os resultados.

3 FASE

1.Incube os tubos: prova cruzada e AC, em banho maria 37C\30 min;2.Aps


incubao, centrifugue os tubos 15 seg.\3400 RPM;3.Proceda leitura e anote os
resultados.

4 FASE

1.Encha os tubos com soluo salina (0,9%) ate 1 cm da borda;2.Centrifuge os tubos


durante 30 seg\3400 RPM;

3.Esvazie os tubos por inverso e repita as operaes dos itens da 4 fase (1 e 2)por
mais 2 vezes, escorrendo o sobrenadante em um pano;4.Adicione a cada tubo 2 gotas
do soro reagente antiglobulina humanapoliespecifica.5.Homogenize e centrifugue 15
seg.\3400 RPM;6.Proceda a leitura e anote os resultados;7.Adicione 1 gota de
suspenso de hemcias controle de COOMBS, centrifugue e proceda leitura.

INTERPRETAO DOS RESULTADOS DO TESTE DE COMPATIBILIDADE

1.A positividade apenas no tubo de prova cruzada em qualquer fase do teste indica
presena de anticorpos (s) irregular (es);2.A positividade no tubo AC (Auto controle)
indica provvel presena de autoanticorpo.3.Sempre que a prova cruzada apresentar
incompatibilidade, ou seja, apresentar positividade, o (s) anticorpo (s) deve (m) ser
identificado (s);4.Suspenso de hemcias controle de COOMBS deve apresentar
aglutinao, caso contrario a prova de compatibilidade deve ser invalidada.

OBS:

No confundir a positividade do teste controle de COOMBS, com a ltima fase da


prova de compatibilidade.

TESTE DE COOMBS DIRETO

O teste de COOMBS direto demonstra hemcias sensibilizadas por anticorpos ou


complemento, utilizado no estudo de:

Anemia hemoltica auto-imune, doenas hemoltica do recm nascido e reao


hemoltica transfusional.

Procedimento tcnico:

1.Prepare uma suspenso de hemcias lavadas (5%), do sangue a ser


testado;2.identifique um tubo de hemlise CD;3.Coloque no tubo 1 gota da suspenso
de hemcias (5%);4.Adicione a este tubo 2 gotas dos soro reagente anti-globulina
humanapoliespecifica;5.Centrifugue o tubo durante 15 seg\3400 RPM;6.Proceda
leitura, ressuspendendo o boto de hemcias do fundo do tubo delicadamente, anote
os resultados.

INTERPRETAO:

A ocorrncia de aglutinao, determina a positividade do teste.